CN111393491B - 一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，主要包括以下步骤：野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，滤液经过减压浓缩，先降温后梯度升温，所得沉淀热水复溶、先降温后梯度升温，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。本发明根皮苷得率为6～9％，所得根皮苷纯度达到99.12％。本发明制备过程不使用任何有机溶剂，绿色环保，不使用任何柱色谱填料，大大节省时间，所得到的根皮苷得率、纯度高，整个工艺操作简单适合大规模生产。

Description

一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法
技术领域
本发明属于植物有效活性成分提取技术领域，尤其是涉及一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法。
背景技术
野金柴，来源于壳斗科栎属植物多穗石柯Lithocarpus polystachyus Rehd的干燥叶，又名多穗石柯、甜茶、多穗柯。多以野生状态分布于长江以南各省区，而以江西、湖南、福建、广西、安徽等省资源最为集中。黄酮为其主要成分，含有量高达9.0％～14.60％。现代医学研究表明，野金柴具有清热利尿、润肺镇咳、滋润肝肾等功效，可用于防治温热痢疾、痈疽恶疮、皮肤瘙痒等症，还有“三抗”、“三降”的作用。现代研究表明，多穗石柯具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗菌、抗炎、抗过敏等药理作用。根皮苷是根皮素经糖基化后得到的衍生物，属于多酚类物质中的一种化合物，即黄酮类化合物中的二氢查尔酮类物质。主要来源于我国使用历史悠久、药食同源的植物—多穗石柯以及苹果属植物的嫩叶、茎、树皮中。
目前，提取根皮苷的方法主要是采用有机溶剂提取，经过柱色谱纯化然后结晶等工艺。提取步骤繁琐，而且使用有机溶剂，不仅造成环境污染，而且会有溶剂残留。例如CN106220693B公开了一种提取多穗石柯根皮苷的方法，包括以下工艺步骤：将多穗石柯新鲜叶片经真空冷冻干燥处理，再粉碎，得到多穗石柯粉末；在粉末中加入乙醇和碳酸二甲酯混合溶剂进行超声提取，提取得到的液体经过离心分离，得到上清液和沉淀物；再将沉淀物经过多次超声提取，分别得到上清液，合并上清液；将上清液经过微孔滤膜过滤，大孔树脂吸附，最后经过减压蒸干，即可得到根皮苷。
CN106336441A公开了一种高纯度根皮苷提取工艺；所述工艺包括如下步骤：(1)原液提取：将含根皮苷的捣烂的原料，加入8倍的纯水，浸泡3小时，加热至沸，保持微沸2小时，得提取液；残渣用6倍的纯水加热至沸，保持微沸2小时，得到二次提取液，合并提取液，冷却，过滤，收集过滤液：(2)初步提取成品：过滤液经大孔树脂D101吸附，过柱流量为80L/H，用20°～50°的乙醇梯度洗脱，将流出液分段收集，真空浓缩，静置，冷却，0～4℃析出结晶，高速离心脱水；(3)成品提取：纯水返溶，真空浓缩，再结晶，高速离心脱水，干燥，得成品。这种方法可以从苹果树的树枝、树皮和树叶中提取得到根皮苷，但是无法用于从野金柴中提取根皮苷。因为，野金柴新鲜的叶子中含有大量的色素和油脂类物质，如果不经过干燥直接捣烂后提取，会造成杂质成分的溶出，影响后续的纯化工艺。
针对于此，本发明针对野金柴这一植物，利用水作为提取溶媒，采用温度梯度变化，制备高纯度根皮苷。
发明内容
鉴于现有技术中从野金柴中取根皮苷的方法只能采用有机溶剂提取，经过柱色谱纯化然后结晶等工艺现状。针对野金柴这一植物，本发明提供一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，野金柴的叶柄与叶子经过干燥粉碎后，利用水作为提取溶媒，采用温度梯度变化，制备高纯度根皮苷。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为；
一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，其特征是：野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，滤液经过减压浓缩，梯度降温，所得沉淀热水复溶、梯度降温，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。
提取时料液比为1:10-1:30(kg/L)，提取时间为2-5h，提取次数为1-3次，提取温度为60-100℃，搅拌速度为：100-500r/min。
更特别的是，提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/5-1/20。
更特别的是，浓缩液经过先降温后梯度升温首先置于-80℃下10-60min，置于-40℃下10min-60min，置于-20℃下10min-60min，最后置于4℃下4h-24h。
更特别的是，所得沉淀经过热水复溶，所使用热水温度为60-100℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。
由于采用如上所述的技术方案，本发明具有如下优越性：
本发明避免了传统的分离纯化中使用有机溶剂、柱色谱的弊端，将野金柴的叶柄与叶子先经过干燥，在保证根皮苷的得率的情况下，以蒸馏水为溶媒，通过改变溶媒的温度达到提取根皮苷的目的，本发明的另外一个优点是通过梯度降温的方式，制备高得率的根皮苷，单一的温度不利于根皮苷的溶出，得率较低，所用时间较长。制备过程不使用任何有机溶剂，绿色环保，不使用任何柱色谱填料，大大节省时间，所得到的根皮苷得率、纯度高，整个工艺操作简单适合大规模生产。
附图说明
图1是本发明根皮苷的制备流程图。
图2是本发明根皮苷的液相色谱图。
具体实施方式
参照以下实施例可以对本发明作进一步详细说明；但是，以下实施例仅仅是例证，本发明并不局限于这些实施例。
一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，包括以下步骤：
野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:10-1:30(kg/L)，提取时间为2-5h，提取次数为1-3次，提取温度为60-100℃，搅拌速度为：100-500r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/5-1/20。浓缩液经过梯度降温，首先置于-80℃下10-60min，置于-40℃下10min-60min，置于-20℃下10min-60min，最后置于4℃下4h-24h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为60-100℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。梯度降温，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。本发明根皮苷得率为6～9％，所得根皮苷纯度达到99.12％。
实施例1
野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:10(kg/L)，提取时间为2h，提取次数为1次，提取温度为60℃，搅拌速度为：100r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/5。浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下10min，置于-40℃下10min，置于-20℃下10min，最后置于4℃下4h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为60℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。置于-80℃下10min，置于-40℃下10min，置于-20℃下10min，最后置于4℃下4h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。根皮苷得率为6.42％，所得根皮苷纯度达到98.54％。
实施例2
野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:30(kg/L)，提取时间为5h，提取次数为3次，提取温度为100℃，搅拌速度为：500r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/20。浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下60min，置于-40℃下60min，置于-20℃下60min，最后置于4℃下24h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为100℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。置于-80℃下60min，置于-40℃下60min，置于-20℃下60min，最后置于4℃下24h,，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。本发明根皮苷得率为7.81％，所得根皮苷纯度达到98.87％。
实施例3
野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:20(kg/L)，提取时间为2h，提取次数为2次，提取温度为70℃，搅拌速度为：100r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/5。浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下15min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下24h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。置于-80℃下15min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下24h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。根皮苷得率为8.96％，所得根皮苷纯度达到99.35％。
实施例4
野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:25(kg/L)，提取时间为4h，提取次数为3次，提取温度为70℃，搅拌速度为：200r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/15。浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下40min，置于-40℃下40min，置于-20℃下40min，最后置于4℃下5h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。置于-80℃下40min，置于-40℃下40min，置于-20℃下40min，最后置于4℃下5h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。根皮苷得率为8.12％，所得根皮苷纯度达到98.76％。
实施例5
野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:20(kg/L)，提取时间为2h，提取次数为3次，提取温度为70℃，搅拌速度为：200r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/10。浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下30min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下4h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。置于-80℃下30min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下4h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。根皮苷得率为8.27％，所得根皮苷纯度达到99.43％。
对比例1
新鲜的野金柴的叶柄与叶子经过捣碎，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:20(kg/L)，提取时间为2h，提取次数为3次，提取温度为70℃，搅拌速度为：200r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/10。浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下30min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下4h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。置于-80℃下30min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下4h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。根皮苷得率为2.35％，所得根皮苷纯度达到85.62％。
对比例2
野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:20(kg/L)，提取时间为4h，提取次数为3次，提取温度为70℃，搅拌速度为：200r/min。提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/10。浓缩液经过降温至4℃，置于4℃下5.5h。所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同。置于4℃下5.5h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。根皮苷得率为1.75％，所得根皮苷纯度达到82.36％。
由实施例5和对比例1对比可知，在同等条件下，经过干燥的野金柴提取工艺的根皮苷得率和纯度明显高于新鲜的野金柴的叶柄与叶子直接提取。
由实施例5和对比例2对比可知，在同等条件下，同等时间条件下，直接降温至4℃提取的根皮苷得率明显低于先降温后梯度升温的根皮苷得率。如果不先降温后梯度升温，根皮苷析出更慢，需要花费更长的时间。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，其特征是：野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:10kg/L，提取时间为2h，提取次数为1次，提取温度为60℃，搅拌速度为：100r/min；提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/5；浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下10min，置于-40℃下10min，置于-20℃下10min，最后置于4℃下4h；所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为60℃，加入热水体积与浓缩液体积相同；置于-80℃下10min，置于-40℃下10min，置于-20℃下10min，最后置于4℃下4h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。
2.一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，其特征是：野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:30kg/L，提取时间为5h，提取次数为3次，提取温度为100℃，搅拌速度为： 500r/min；提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/20；浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下60min，置于-40℃下60min，置于-20℃下60min，最后置于4℃下24h；所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为100℃，加入热水体积与浓缩液体积相同；置于-80℃下60min，置于-40℃下60min，置于-20℃下60min，最后置于4℃下24h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。
3.一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，其特征是：野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:20kg/L，提取时间为2h，提取次数为2次，提取温度为70℃，搅拌速度为：100r/min；提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/5；浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下15min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下24h；所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同；置于-80℃下15min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下24h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。
4.一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，其特征是：野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:25kg/L，提取时间为4h，提取次数为3次，提取温度为70℃，搅拌速度为：200r/min；提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/15；浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下40min，置于-40℃下40min，置于-20℃下40min，最后置于4℃下5h；所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同；置于-80℃下40min，置于-40℃下40min，置于-20℃下40min，最后置于4℃下5h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。
5.一种从野金柴中绿色制备高纯度根皮苷的方法，其特征是：野金柴的叶柄与叶子经过干燥，粉碎过80目筛，以蒸馏水作为溶媒，加热搅拌提取，料液比为1:20kg/L，提取时间为2h，提取次数为3次，提取温度为70℃，搅拌速度为：200r/min；提取后，滤液进行减压浓缩，浓缩为原有体积的1/10；浓缩液经过先降温后梯度升温，首先置于-80℃下30min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下4h；所得沉淀热水复溶，所使用热水温度为70℃，加入热水体积与浓缩液体积相同；置于-80℃下30min，置于-40℃下30min，置于-20℃下30min，最后置于4℃下4h，重复三次，经离心，干燥最后得到高纯度的根皮苷。
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