CN114573430B - 一种甘草抗炎物质及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甘草抗炎物质及其制备方法。本发明从甘草中制备分离得到一种酚类抗炎物质，该化合物的产率为0.1～9.4mg/kg(纯度为85～95％)。本发明对于推动甘草的深加工利用，提升甘草产品附加值，促进该行业的可持续发展具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明涉及农产品加工领域，涉及一种生物活性物质及其制备方法，具体涉及3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯及其制备方法。
背景技术
甘草属于豆科甘草属植物，广泛种植于世界各地，我国北部、西部地区为主要甘草种植地区。甘草属于药食同源植物，香甜可口，营养价值和保健功能较高，具有预防炎症、抗氧化等功效。有研究表明，甘草富含酚类物质，具有抗癌、调节免疫等生物活性。然而，目前仍有大量的甘草活性成分未被鉴定，相关活性物质组成仍有待研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种甘草抗炎物质及其制备方法，具体为3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯及其制备方法。
本发明的第一个目的是提供3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯，该化合物是从甘草中提取分离得到，其结构式如下式(I)所示：
本发明的第二个目的是提供3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的制备方法，其是从甘草中制备分离得到的，具体包括以下步骤：用体积分数30～95％乙醇水溶液或热水浸提甘草，将浸提液浓缩去除乙醇后用水溶解，然后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩得浸膏，浸膏经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂，从体积比100/0～60/40梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比为80/20洗脱的馏分，该馏分再经反相柱层析，以乙腈/水为洗脱剂，从体积比5/95～100/0梯度洗脱，收集乙腈/水体积比为75/25洗脱的馏分，蒸发干燥即得到3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯。
优选，所述的甘草为新鲜的或干燥的甘草根茎。
优选，所述的用体积分数30～95％乙醇水溶液或热水浸提甘草，乙醇水溶液或水的用量是5～30mL/g甘草，浸提的温度为25～100℃，浸提时间为1～72小时。
优选，所述的将浸提液浓缩去除乙醇后用水溶解，是将浸提液在40～80℃下浓缩除去乙醇，再加入1～5倍体积的水溶解。
优选，所述的依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，是先用石油醚萃取3～12次，再用乙酸乙酯萃取3～12次。
本发明的第三个目的是提供3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯或其盐在制备抗炎护肤品、药品或食品中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种抗炎护肤品、药品或食品，其含有上述3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯或其盐作为活性成分。
本发明的第五个目的是提供甘草在制备3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯中的应用。
本发明证实，所述的化合物3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯具有良好的抑制炎症能力，该化合物对巨噬细胞NO合成的抑制活性IC50值为19.4μM，明显优于阳性对照白藜芦醇(IC50值32.7μM)。表明本发明提供的化合物3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯具有优异的炎症抑制活性，可用于制备抗炎护肤品、药品或食品。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
本发明从甘草中制备分离得到3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯，该化合物的产率为0.1～9.4mg/kg(纯度为85～95％)。本发明对于推动甘草的深加工利用，提升甘草产品附加值，促进该行业的可持续发展具有重要的意义。同时也为3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的制备提供了一种新的方法。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
一、3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的制备分离
1)选料：选择新鲜甘草根茎，清水洗涤；
2)干燥粉碎：将甘草晒干或烘干，采用粉碎机粉碎；
3)浸提：按5mL/g甘草的投料量(即每克甘草加5mL乙醇水溶液)，往甘草中加入体积分数30％的乙醇水溶液，在25℃浸提1小时，过滤，收集过滤液；
4)有机溶剂分级：将上述过滤液在40℃下浓缩除去乙醇，得浓缩液，加入浓缩液1倍体积的水，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次；选择乙酸乙酯相萃取液进行浓缩，将得到的浸膏用于后续纯化；
5)取乙酸乙酯相萃取液浓缩后得到的浸膏，采用硅胶柱(100～200目)层析，以石油醚/乙酸乙酯为洗脱溶剂，从体积比100/0～60/40梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比为80/20洗脱的组分，再经C18反相柱层析，以乙腈/水为洗脱剂，从体积比5/95～100/0梯度洗脱，收集乙腈/水体积比为75/25洗脱的组分，在60℃蒸发浓缩干燥，即得到化合物1(3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯)。
采用该方法获得的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的产率为0.1～2.6mg/kg，纯度为85～95％。
二、化合物1(3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯)的结构鉴定
化合物1(3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯)可溶解于甲醇，质谱结果表明：该化合物分子量为364。该化合物的1HNMR(500MHz，CD3OD)和13C NMR(125MHz，CD3OD)见表1。
表1化合物1的13C与1H谱化学位移
综上所述，鉴定该化合物1的结构式如式(I)所示，名称为：3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯。
实施例2
1)选料：选择新鲜甘草根茎，清水洗涤；
2)干燥粉碎：将甘草晒干或烘干，采用粉碎机粉碎；
3)浸提：按30mL/g甘草的投料量(即每克甘草加30mL乙醇水溶液)，往甘草中加入体积分数95％的乙醇水溶液，在60℃浸提72小时，过滤，收集过滤液；
4)有机溶剂分级：将上述过滤液在60℃浓缩除去乙醇，得浓缩液，加入浓缩液5倍体积的水，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取12次；选择乙酸乙酯相萃取液进行浓缩，将得到的浸膏用于后续纯化；
后续纯化步骤与实施例1相同，由此得到化合物1并鉴定为3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯。
采用该方法获得的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的产率为5.2～9.4mg/kg，纯度为85～95％。
实施例3
1)选料：选择新鲜甘草根茎，清水洗涤；
2)干燥粉碎：将甘草晒干或烘干，采用粉碎机粉碎；
3)浸提：按20mL/g甘草的投料量(即每克甘草加20mL乙醇水溶液)，往桑叶粉末中加入体积分数40％的乙醇水溶液，在55℃浸提24小时，过滤，收集过滤液；
4)有机溶剂分级：将上述过滤液在60℃浓缩除去乙醇，得浓缩液，加入浓缩液3倍体积的水，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取6次；选择乙酸乙酯相萃取液进行浓缩，将得到的浸膏用于后续纯化；
后续纯化步骤与实施例1相同，得到化合物1并鉴定为3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯。
采用该方法获得的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的产率为2.2～6.4mg/kg，纯度为85～95％。
实施例4
1)选料：选择新鲜甘草根茎，清水洗涤；
2)干燥粉碎：将甘草晒干或烘干，采用粉碎机粉碎；
3)浸提：按5mL/g甘草的投料量(即每克甘草加5mL乙醇水溶液)，往甘草中加入体积分数95％的乙醇水溶液，在70℃浸提48小时，过滤，收集过滤液；
4)有机溶剂分级：将上述过滤液在80℃浓缩除去乙醇，得浓缩液，加入浓缩液1倍体积的水，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取6次；选择乙酸乙酯相萃取液进行浓缩，将得到的浸膏用于后续纯化；
后续纯化步骤与实施例1相同，得到化合物1并鉴定为3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯。
采用该方法获得的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的产率为1.6～4.3mg/kg，纯度为85～95％。
实施例5
1)选料：选择新鲜甘草根茎，清水洗涤；
2)干燥粉碎：将甘草晒干或烘干，采用粉碎机粉碎；
3)浸提：按20mL/g甘草的投料量(即每克甘草加20mL水)，往甘草中加入水，在100℃浸提3小时，过滤，收集过滤液；
4)有机溶剂分级：将上述过滤液在80℃浓缩得浓缩液，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取6次；选择乙酸乙酯相萃取液进行浓缩，将得到的浸膏用于后续纯化；
后续纯化步骤与实施例1相同，得到化合物1并鉴定为3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯。
采用该方法获得的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的产率为0.7～2.5mg/kg，纯度为85～95％。
实施例6
巨噬细胞RAW264.7为免疫细胞，常用于抗炎活性评价。巨噬细胞经脂多糖处理后，会诱发系列炎症反应，促进NO合成，提升细胞NO水平。通过添加抗炎物质，可降低NO合成水平。本发明通过巨噬细胞NO合成水平分析试验，检测化合物对巨噬细胞RAW264.7作为评价细胞模型的抗炎活性，所述的测试方法具体包括以下步骤：
RAW264.7的生长培养基为DMEM培养基+10％FBS+50μg/mL链霉素和50U/mL的青霉素，培养于5％CO2、37℃培养箱中。将细胞以1.7×104个/孔的细胞浓度，每孔100μL铺于96孔板中，培养12h后，吸除培养基。加入含200ng/mL脂多糖、0～50μM抗炎物质3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的培养基100μL。培养24h后，收集上清液，试剂盒测定NO水平，计算抗炎活性IC50值。不含脂多糖的培养基为空白对照；仅含脂多糖的培养基作为模型对照；白藜芦醇作为阳性对照。每个处理3个重复。
结果表明，3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的抗炎活性IC50值为19.4μM，阳性对照白藜芦醇的IC50值32.7μM。表明本发明提供的化合物3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯具有良好的抗炎活性，明显优于阳性对照，可用于制备抗炎护肤品、药品或食品。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的核心技术和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种甘草抗炎物质3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯，其结构式如下式(I)所示：
2.一种制备权利要求1所述的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯的方法，其特征在于，用体积分数30～95％乙醇水溶液或热水浸提甘草，将浸提液浓缩去除乙醇后用水溶解，然后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩得浸膏，浸膏经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂，从体积比100/0～60/40梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比为80/20洗脱的馏分，该馏分再经反相柱层析，以乙腈/水为洗脱剂，从体积比5/95～100/0梯度洗脱，收集乙腈/水体积比为75/25洗脱的馏分，蒸发干燥即得到3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的甘草为新鲜的或干燥的甘草根茎。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的用体积分数30～95％乙醇水溶液或热水浸提甘草，乙醇水溶液或水的用量是5～30mL/g甘草，浸提的温度为25～100℃，浸提时间为1～72小时。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的将浸提液浓缩去除乙醇后用水溶解，是将浸提液在40～80℃下浓缩除去乙醇，再加入1～5倍体积的水溶解。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，是先用石油醚萃取3～12次，再用乙酸乙酯萃取3～12次。
7.权利要求1所述的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯或其盐在制备抗炎护肤品、药品或食品中的应用。
8.一种抗炎护肤品、药品或食品，其特征在于，其含有权利要求1所述的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯或其盐作为活性成分。
9.甘草在制备权利要求1所述的3,4’-二羟基-5-O-香叶基二苯乙烯中的应用。
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