CN102080078B - 一种棉花nac转录因子基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物基因工程领域，提供了一种一种棉花NAC转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，构建ghNAC1双元表达载体，用根癌农杆菌转化棉花，获得转ghNAC1基因棉花，采用干旱模拟实验验证转ghNAC1基因棉花，因ghNAC1的过表达而具有耐旱能力。

Description

一种棉花NAC转录因子基因及其应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程领域，尤其涉及一种棉花NAC转录因子基因以及其构建的植物表达载体及其在耐旱转基因植物研制方面的应用。

背景技术

转录因子又称反式作用因子，是一群能与真核基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异性结合，从而保证目的基因以特定的强度、在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。当植物感受外界干旱、高盐、激素、病害时，通过一系列信号传递，激发转录因子，转录因子与相应的顺式作用元件结合后，激活RNA聚合酶II转录复合物，从而启动特定基因的转录表达，最后通过基因产物的作用对内、外界信号做出的调节反应。植物许多基因的表达都是由特定的转录因子与特定的顺式作用元件相互作用调控的。

转录因子在植物防卫反应和逆境胁迫应答过程中扮演着非常重要的角色。近几年来在植物转录因子的基因克隆和功能研究方面取得了很大进展，同时也鉴定出多种与转录因子相结合的顺式作用元件，例如：G盒、W盒、CRT/DRE、MYC-like。转录因子通过与其调控的下游基因启动子区的顺式作用元件结合而直接调控靶基因的表达，或形成同源、异源二聚体，或与其他蛋白互作成为某种活化形式而参与JA、SA、ABA等信号传导途径，形成基因表达的调控网络。根据对MYB类、bZIP类、WRKY类、AP2/EREBP类和NAC类植物转录因子家族成员的研究，结果表明它们调控了相关生理反应基因表达的蛋白在植物防卫反应和逆境信号转导中发挥作用，从而使植物适应外界不良环境。其中，WRKY类和AP2/EREBP类转录因子是植物所特有的转录因子，不过在调控下游基因表达时与其他转录因子是有共性的，都是通过与顺式作用元件结合来诱导抗逆反应应答。

转录因子在提高作物对环境胁迫抗性的分子育种中，与导入或改良个别功能基因来提高某种抗性的方法相比，导入或改良一个转录因子是提高作物抗逆性更为有效的方法和途径。操纵一个转录因子就可通过它促使多个功能基因发挥作用，从而达到使植株性状获得综合改良的效果。

NAC转录因子是近十年来新发现的植物特有的转录调控因子。1997年Aida等首先报道了NAC结构域，发现在矮牵牛NAM基因、拟南芥ATAF1/2和CUC2基因编码蛋白的N端包含一段保守的氨基酸序列，取三基因首字母命名为NAC。第一个NAC转录因子是由Souer等于1996年从矮牵牛中克隆得到的，随后在拟南芥、水稻、小麦、大豆等物种中相继发现，目前在拟南芥中共发现了105个NAC成员，而水稻中则发现了75个。研究表明，NAC转录因子在植物的生长发育、器官建成、激素调节和防御抵抗多种生物和非生物胁迫等方面发挥着重要作用。

NAC转录因子受多种生物胁迫和非生物胁迫的诱导表达，参与植物的胁迫应答。华中农业大学熊立仲教授研究小组克隆了一个水稻抗旱耐盐基因SNAC1，该基因是NAC类型的转录因子，其主要在气孔的保卫细胞中被诱导表达，干旱胁迫时促进气孔关闭，但是并不影响光合速率，因而抗旱性大为提高，在生殖生长期严重干旱的情况下，超量表达SNAC1的转基因植株坐果率较对照提高22％～34％，在营养生长期，转基因植株也表现出很强的抗旱性。中国农业大学王学臣教授研究小组在拟南芥中克隆了一个干旱诱导基因ATAF1，该基因也是NAC类型的转录因子。ATAF1的表达受干旱和ABA处理的诱导，在浇水情况下又受到抑制。敲除ATAF1基因的突变体ataf1，在干旱胁迫后的浇水反应测试中恢复率是正常对照的7倍，而且6个已知干旱诱导基因(RD17、ERD10、KIN1、RD22、COR78和LT178)表达水平提高，说明ATAF1基因作为负调控子，通过调节渗透胁迫反应基因的表达在抗旱反应中起作用。有的NAC转录因子可与MYC-like元件结合，该元件的核心序列(CATGTG)在拟南芥ERD1干旱诱导反应应答过程中起重要作用。Tran等采用酵母单杂交技术从拟南芥中分离到3个不同的NAC基因(ANAC019、ANAC055和ANAC072)，它们的表达受干旱、高盐和ABA的诱导，超量表达能显著增强转基因植株的耐旱能力。而ANAC072(RD26)参与ABA介导的逆境信号传导途径，超量表达RD26能显著增强转基因植株对ABA的敏感性，同时发现ABA和逆境因子诱导的基因在转基因植株中也被上调表达，抑制表达RD26则相反。

Delessert等发现拟南芥转录因子ATAF2在叶片损伤部位高度诱导表达，并对涉及损伤的植物激素甲基茉莉酮酸和水杨酸诱导反应作出响应，但对脱落酸没有反应；超量表达ATAF2抑制了一些病原相关蛋白的表达，植株对土生镰刀霉菌的抵抗力下降，说明ATAF2作为病原相关蛋白的负调控子在防御反应中起作用。Hegedus等构建了油菜叶片受机械损伤、甲虫噬啮和冷害处理的混合cDNA文库，并从该文库中筛选出8个NAC类转录因子，其中5个转录因子与拟南芥的ATAF1或ATAF2相似，将它们异位表达于模式植物拟南芥，造成发育异常，类似于拟南芥nam和cuc突变体；过量表达BnNAC14的株系表现出叶片增大，茎干变粗和侧根繁茂等特征，这与拟南芥的NAC1基因功能相似。Oh等从辣椒中分离到一种NAC类转录因子CaNAC1，该转录因子受病原菌、外源水杨酸和乙烯的诱导。由此可见，NAC转录因子在植物的多种抗逆信号途径之中起重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种棉花NAC转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

本发明的第二个目的在于提供棉花NAC转录因子基因的cDNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明的第三个目的在于提供一种棉花NAC转录因子，由SEQ ID NO：1所示核苷酸序列编码，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明的第四个目的在于提供含有所述棉花NAC转录因子基因的植物表达载体。

本发明的第五个目的在于提供用所述植物表达载体转化的植物细胞、组织或植株。

本发明的第六个目的在于所述棉花NAC转录因子基因在耐旱植物品种中的应用。

本发明的技术路线为：

1)干旱处理棉花幼苗；

2)从经干旱处理的的棉花幼苗上取叶片，并从叶片提取总RNA；

3)用总RNA进行逆转录反应，得到cDNA；

4)依据Genebank上发布的已知NAC基因序列保守区设计简并引物，以棉花逆转录cDNA作为模板进行PCR扩增，获得棉花NAC转录因子基因的EST；

5)以EST为探针，未诱导棉花总RNA为对照，对所获EST进行干旱胁迫下的Northern表达分析，筛选干旱诱导增强表达的EST；

6)根据EST，用RACE方法获得NAC转录因子基因，命名为：ghNAC1；

7)构建ghNAC1双元表达载体，用根癌农杆菌转化棉花，获得转ghNAC1基因棉花，采用干旱模拟实验验证转ghNAC1基因棉花，因ghNAC1的过表达而具有耐旱能力。

本发明克隆了一种棉花NAC转录因子基因ghNAC1，构建ghNAC1双元表达载体，用根癌农杆菌转化棉花，获得转ghNAC1基因棉花，采用干旱模拟实验验证转ghNAC1基因棉花，因ghNAC1的过表达而具有耐旱能力。

附图说明

图1A和1B是干旱诱导条件下ghNAC1基因表达的Northern检测图；

图2是ghNAC1基因的PCR扩增示意图；

图3是植物表达载体pBI121-ghNAC-1构建示意图；

图4是转ghNAC1基因棉花ghNAC1基因PCR检测电泳图；

图5A、5B和5C是未转基因棉花干旱模拟实验图；

图6A、6B和6C是转空载体棉花干旱模拟实验图；

图7A、7B和7C是转ghNAC1基因棉花干旱模拟实验图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的技术路线做进一步详细说明。

实施例1 棉花干旱诱导增强表达ghNAC1基因的克隆

1、棉花材料的处理

鄂杂棉11号F1代种子萌发15天后，进行干旱处理4小时后，冻存于-70℃冰箱保存。

2、棉花总RNA的提取

A.取0.1g棉花叶片液氮研磨后，加0.5ml植物RNA提取液(购自invitrogen)，振荡至彻底混匀。

B.室温放置5分钟。

C.4℃ 12,000rpm离心1分钟，上清转入新的无RNase离心管。

D.加入0.1ml 5M NaCl，温和混匀。

E.加入0.3ml氯仿，上下颠倒混匀。

F.4℃ 12,000rpm离心10分钟，取上层水相转入新的无RNase离心管。

G.加与所得水相等体积的异丙醇，混匀，室温放置10分钟。

H.4℃ 12,000rpm离心10分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加1ml 75％乙醇。

I.4℃ 5,000rpm离心3分钟。倒出液体，剩余的少量液体短暂离心，然后用枪头吸出，室温晾干2-3分钟。

J.加50μl无RNase水，反复吹打、混匀，充分溶解RNA。

3、RNA样品中DNA污染的去除

A.在RNase-free的Eppendorf管中依次加入16μl总RNA、2μl 10×Buffer、1μlRnaseOUT、1μl RNase-free DNaseI(2U/μl)；

B.室温放置15min；

C.加入2μl25mM EDTA，65℃保温15min。

4、逆转录

A.在0.2mltube中，加入下列成分：

总RNA(0.1μg/μl)2.0μl

Oligo(dT12-18)(2μM)2.0μl

B.70℃水浴10分钟。立即放置在冰浴中；

C.加入下列成分：

2.0μl 10×RT buffer；

2.0μl 250μM dNTP mix；

2.0μl 100mM DTT；

9.8μl DEPC H2O；

0.2μl 200Uμ/l SuperScriptIII；

D.进行下列反应：42℃ 90分钟；70℃ 15分钟；-20℃保存。

5、简并引物的设计和棉花ghNAC1 EST的获得

依据Genebank上发布的已知NAC基因序列保守区设计简并引物：

NF80：5’-AYCCSACIGAYGAIGAGCT-3’

NR510：5’-TTGTAIAKYCGRCAYARMACCCA-3’

以棉花逆转录cDNA作为模板进行PCR扩增，PCR条件：94℃ 5min；94℃ 30s，52℃ 30s，72℃ 30s，35个循环；72℃ 5min。

PCR得到的片段克隆至pGEM T-easy载体上，测序获得NAC基因的表达序列标签(EST)，其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

6、棉花ghNAC1片段的3’RACE

3’RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends试剂盒购invitrogen公司，实验步骤按试剂盒说明书操作。引物设计如下：

GSP1：5’-GAAAGTTGCGGGGCATCATT-3’

GSP2：5’-TATCACAACAGAAGGCCGTAAA-3’

将PCR片段克隆至pGEMT-easy上并测序，核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

7、干旱诱导条件下ghNAC1基因表达的Northern检测

将鄂杂棉11F1代棉花苗提前一天进行水饱和，第二天早上，进行干旱诱导1小时，2小时，4小时，6小时，8小时后，并取未诱导的作对照，分别取叶片冻存-70℃，提取RNA，进行Northern检测，结果参见图1A和1B，图中1、2、3、4、5分别为干旱诱导2、4、6、8、10个小时。可见随干旱诱导时间的增加，此NAC家族基因表达水平也逐渐增强。

8、棉花ghNAC1片段的5’RACE

5’RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends试剂盒购invitrogen公司，实验步骤按试剂盒说明书操作。引物设计如下：

GSP1：GTTGTGAAGAACACGTTGATGATG

GSP2：GCTCTCTGCTTGAAACACTTGAC

GSP3：CAGTCCTAGAGACAGAAAATATCCG

将PCR片段克隆至pGEMT-easy上测序并和3’RACE结果进行序列拼接，获得序列如SEQ ID NO：6所示。

9、棉花ghNAC1片段的基因全长的获得和克隆

根据拼接序列重新设计引物，并以cDNA和基因组DNA作为模板，扩增得到cDNA和基因组DNA全长并克隆测序。并将获得的基因命名为ghNAC1。

扩增引物序列如下：

ghNAC5’：5’-GAAGATCTGGGTGAATCATGGGAGTGCC-3’

ghNAC3’：5’-CGGCTAGCCTGAAATTCCTTTCCTGGTCC-3’

PCR条件：94℃ 10min、94℃ 45s、56℃ 45s、72℃ 1min，5个循环；94℃ 45s、60℃ 45s、72℃ 1min，25个循环；72℃ 7min。电泳结果参见图2。

ghNAC1基因cDNA序列如SEQ ID NO：2所示。

ghNAC1基因gDNA序列如SEQ ID NO：1所示，其中192bp-289bp和558bp-638bp为内含子部分。

ghNAC1编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

实施例2ghNAC1双元表达载体的构建

请参阅图3，将PCR扩增得到的ghNAC1基因cDNA(ghNAC-1)用T4连接酶连接至pGEM-TEasy上得到质粒pGEM-ghNAC-1，用BamH1和SacI同时双酶切pGEM-ghNAC-1和pBI121，分别获得ghNAC-1片段和线性pBI121载体，用T4DNA连接酶将ghNAC-1片段和线性pBI121载体连接，得到ghNAC1双元表达载体pBI121-ghNAC-1。

实施例3利用农杆菌介导的转化法获得转ghNAC1基因棉花

1、根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备

1)挑取新鲜的LBA4404单菌落接种于含适量抗生素的LB液体培养基中，28℃培养至对数生长期；

2)4℃，8000rpm离心5分钟，收集菌体于小离心管中；

3)用600μl冰预冷的500mM CaCl2重悬洗涤细胞；

4)4℃，8000rpm离心5分钟，细胞沉淀中加入100μl冰预冷的500mM CaCl2，混匀后备用(24-48小时后使用效果最佳)。

2、根癌农杆菌LBA4404的转化

1)加入1μl植物表达载体质粒DNA至农杆菌感受态细胞中，轻轻混匀，于液氮中速冻5分钟，37℃温浴5分钟；

2)加入600μl LB液体培养基，28℃轻摇4-6小时，室温，6000rpm离心3分钟，富集菌体；

3)保留50-200μl菌液，混匀，均匀涂布于含适量抗生素的LB选择平板上，28℃倒置培养两天。

4)挑取新鲜菌落，进行PCR鉴定，筛选阳性克隆。

3、棉花的遗传转化及植株再生

采用农杆菌介导法转化冀棉14，获得转ghNAC1基因棉花。

1)接种农杆菌单菌落于含有适量抗生素的液体LB培养基中，28℃摇床暗培养至生长对数期。以菌液∶培养基1∶50～1∶100的比例用LB液体培养基稀释菌液，28℃摇床暗培养至OD600值0.8～1.0；

2)取暗培养3～4天的冀棉14无菌苗下胚轴，用解剖刀切成0.6～0.8cm的切段，用培养好的菌液浸泡10～15min，其间轻摇几次；

3)用无菌滤纸吸去多余菌液，于MS培养基上22～25℃共培养2天；

4)把材料转入棉花诱愈筛选培养基(MSB附加KT0.1、2，4-D0.1、Km100、Cef500，单位为mg/L)上，于25～30℃培养2～3个月，每20～30天继代一次；

5)待愈伤长至直径约2cm时，转入胚性愈伤诱导培养基(KNO3加倍、NH4NO3减半的MSB附加Km100、Cef 500，单位为mg/L)上，于25～30℃培养，直至长出大量胚性愈伤；

6)将诱导出的胚性愈伤转入液体培养基(KNO3加倍、NH4NO3减半的MSB附加Km 100mg/L)中，培养15～25天，至细小体胚出现；

7)悬浮培养物依次过30目、10目筛，留30目以下10目以上悬浮物，转接至体胚萌发培养基(KNO3加倍、NH4NO3减半的MSB附加KT0.1、Km100，单位为mg/L)上，培养至体胚萌发成苗。

8)待苗长至3～5片真叶，用劈接法嫁接至抗性强、生长旺的砧木上，确认成活后移栽大田。

4、转基因棉花植株的鉴定及检测

试剂盒法提取棉花总DNA

(1)取新鲜叶片0.1g。装入2ml离心管，液氮冷冻后研磨仪充分研磨；

(2)加入404μl PG1，65℃水浴后加入100μl PG2，冰浴5min；

(3)12000rpm离心4min，取上清，加入上清1.5倍体积的PG2，上柱；

(4)12000rpm离心1min，弃废液，加入500μl PG4(PG4与无水乙醇按1∶1.4配制，现配现用)；

(5)12000rpm离心1min，弃废液，加入500μl PG5(PG5与无水乙醇按1∶4配制，现配现用)；

(6)12000rpm离心30Sec，弃废液，加入500μl PG5(PG5与无水乙醇按1∶4配制，现配现用)；

(7)12000rpm离心30Sec，弃废液；

(8)12000rpm离心2min，加入50～100μl TE洗脱液(65℃水浴预热)，静置1min；

(9)12000rpm离心1min，-20℃冰箱中保存备用。转基因棉花的PCR鉴定

得到抗生素筛选阳性的转基因植株后，在生长初期，取转基因植株叶片，用试剂盒法提取植株总DNA进行PCR鉴定，以合成的ghNAC1基因特异性引物进行扩增；

扩增引物序列如下：

ghNAC5’：5’-GGGTGAATCATGGGAGTGCC-3’

ghNAC3’：5’-CCTGAAATTCCTTTCCTGGTCC-3’

PCR条件：94℃ 10min；94℃ 45s，56℃ 45s，72℃ 1min，5个循环；94℃ 45s，60℃ 45s，72℃ 1min，25个循环；72℃ 7min。

经PCR扩增，可以得到约1Kb的条带，说明ghNAC1基因已整合至棉花基因组，电泳结果如图4所示。

5、过表达ghNAC1转基因棉花的耐旱模拟实验及功能鉴定

未转基因棉花干旱模拟实验结果参见图5A-5C，其中图5A为水饱和后第二天结果，图5B为水饱和后干旱一周结果，图5C为水饱和后干旱两周结果。

转空载体棉花干旱模拟实验结果参见图6A-6C，其中图6A为水饱和后第二天结果，图6B为水饱和后干旱一周结果，图6C为水饱和后干旱两周结果。

转ghNAC1基因基因棉花干旱模拟实验结果参见图7A-7C，其中图7A为水饱和后第二天结果，图7B为水饱和后干旱一周结果，图7C为水饱和后干旱两周结果。

通过转ghNAC1基因和对照组的干旱耐受实验证明，干旱胁迫两周后，转空载体和未转基因棉花萎蔫程度明显高于转ghNAC1基因组，并且转基因组棉花生长状况依然良好，这说明我们克隆的棉花ghNAC1基因作为植物逆境胁迫下的转录因子，通过调节渗透反应基因的表达在干旱反应中起作用。

SEQUENCE LISTING

<110>创世纪转基因技术有限公司

<120>一种棉花NAC转录因子基因及其应用

<160>6

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>1284

<212>DNA

<213>棉花

<400>1

gggtgaatca tgggagtgcc ggaaactgat ccattggctc aattgagctt gccgccgggg    60

tttcggtttt atccaactga tgaagagctt ttagtgcaat atttatgcag gaaagttgca    120

gggcatcatt tttctctgca aatcattggc gaaatcgatt tatacaaatt taatccatgg    180

gatttaccga gtaagtttca ccgagtccaa agcaaagaat taactttgtt tttctttttt    240

tgttcatttc tttactaata ataaaaattt taaattgttt tttgacaggt aaagctttgt    300

ttggtgaaaa agaatggtat tttttcagtc ctagagacag aaaatatccg aacgggtcac    360

gacctaatag agttgccggg tccgggtact ggaaagctac cggaactgat aaaattatca    420

caacagaagg ccgtaaagtt ggtataaaaa aagctctggt tttttacgtc ggaaaagctc    480

ctaaaggaac taaaactaat tggattatgc atgaatatcg actcattgaa tcttctcgta    540

aaagtggtag ctccaaggta atctattttt tttaaaatta attattgaat aataattgtt    600

tgaactttga ataataatta cttttttttt tgttgtagtt ggatgattgg gttttatgtc    660

gaatatacaa gaagaattca agtggtcaaa aaccattgtc aagtgtttca agcagagagc    720

aaagcacgaa tgggtcatca tcatcgtgtt cttcacaact ggataacatg cttgactcat    780

tgcccgagtt ggacgatcgt ttctttgctt tgccgcgcat taactcgttc aaaacgcttc    840

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ttggtgggct tagctcggtg cctgagctgg taccgagtgg acaaactcaa acacaaactc    960

aaactcagag tcaggggatt actagttatg gaaatagtaa cgtatatgtc agcacaatgc    1020

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aagtacagag tggactcaga actcagcgag ctgataactc ggggatagtt caacaaaatt    1140

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cgactcaatc gggtggattt gggtttagac aataaaaaga aaaaattata tgtagaagga    1260

ccaggaaagg aatttcaggc tagc                                           1284

<210>2

<211>1099

<212>DNA

<213>棉花

<400>2

gggtgaatca tgggagtgcc ggaaactgat ccattggctc aattgagctt gccgccgggg    60

tttcggtttt atccaactga tgaagagctt ttagtgcaat atttatgcag gaaagttgca    120

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cgactcattg aatcttctcg taaaagtggt agctccaagt tggatgattg ggttttatgt    480

cgaatataca agaagaattc aagtggtcaa aaaccattgt caagtgtttc aagcagagag    540

caaagcacga atgggtcatc atcatcgtgt tcttcacaac tggataacat gcttgactca    600

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cttggtgggc ttagctcggt gcctgagctg gtaccgagtg gacaaactca aacacaaact    780

caaactcaga gtcaggggat tactagttat ggaaatagta acgtatatgt cagcacaatg    840

ccgcctacac tttgtcagat ggacgtgtcg acaaataaga ttggtaactc ggtggaagag    900

gaagtacaga gtggactcag aactcagcga gctgataact cggggatagt tcaacaaaat    960

tcgaatgtgt tgaacagtca taacttctct aactcgattg acccgtatgg gtttcggtgc    1020

ccgactcaat cgggtggatt tgggtttaga caataaaaag aaaaaattat atgtagaagg    1080

accaggaaag gaatttcag                                                 1099

<210>3

<211>348

<212>PRT

<213>棉花

<400>3

Met Gly Val Pro Glu Thr Asp Pro Leu Ala Gln Leu Ser Leu Pro Pro

1                 5                      10                     15

Gly Phe Arg Phe Tyr Pro Thr Asp Glu Glu Leu Leu Val Gln Tyr Leu

             20                      25                     30

Cys Arg Lys Val Ala Gly His His Phe Ser Leu Gln Ile Ile Gly Glu

         35                      40                       45

Ile Asp Leu Tyr Lys Phe Asn Pro Trp Asp Leu Pro Ser Lys Ala Leu

     50                      55                     60

Phe Gly Glu Lys Glu Trp Tyr Phe Phe Ser Pro Arg Asp Arg Lys Tyr

65                     70                     75                    80

Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Val Ala Gly Ser Gly Tyr Trp Lys

                  85                      90                      95

Ala Thr Gly Thr Asp Lys Ile Ile Thr Thr Glu Gly Arg Lys Val Gly

              100                      105                    110

Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Val Gly Lys Ala Pro Lys Gly Thr

          115                     120                     125

Lys Thr Asn Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ile Glu Ser Ser Arg

    130                     135                      140

Lys Ser Gly Ser Ser Lys Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Ile Tyr

145                     150                   155                    160

Lys Lys Asn Ser Ser Gly Gln Lys Pro Leu Ser Ser Val Ser Ser Arg

                  165                     170                     175

Glu Gln Ser Thr Asn Gly Ser Ser Ser Ser Cys Ser Ser Gln Leu Asp

              180                     185                     190

Asn Met Leu Asp Ser Leu Pro Glu Leu Asp Asp Arg Phe Phe Ala Leu

        195                    200                    205

Pro Arg Ile Asn Ser Phe Lys Thr Leu Gln Asn Asp Val Lys Leu Gly

    210                     215                     220

Phe Gln Asn Leu Gly Ile Gly Asn Leu Asp Trp Gly Ser Leu Gly Gly

225                    230                    235                    240

Leu Ser Ser Val Pro Glu Leu Val Pro Ser Gly Gln Thr Gln Thr Gln

                   245                     250                     255

Thr Gln Thr Gln Ser Gln Gly Ile Thr Ser Tyr Gly Asn Ser Asn Val

             260                      265                     270

Tyr Val Ser Thr Met Pro Pro Thr Leu Cys Gln Met Asp Val Ser Thr

         275                     280                    285

Asn Lys Ile Gly Asn Ser Val Glu Glu Glu Val Gln Ser Gly Leu Arg

    290                     295                     300

Thr Gln Arg Ala Asp Asn Ser Gly Ile Val Gln Gln Asn Ser Asn Val

305                   310                     315                     320

Leu Asn Ser His Asn Phe Ser Asn Ser Ile Asp Pro Tyr Gly Phe Arg

                  325                     330                     335

Cys Pro Thr Gln Ser Gly Gly Phe Gly Phe Arg Gln

             340                     345

<210>4

<211>429

<212>DNA

<213>棉花

<400>4

gattttgtag agtcggcaca acacccaatc atccaacttg gagctaccac ttttacgaga    60

agattcaatg agtcgatatt catgcataat ccaattagtt ttagttcctt taggagcttt    120

tccgacgtaa aaaaccagag ctttttttat accaacttta cggccttctg ttgtgataat    180

tttatcagtt ccggtagctt tccagtaccc ggacccggca actctattag gtcgtgaccc    240

gttcggatat tttctgtctc taggactgaa aaaataccat tctttttcac caaacaaagc    300

tttacttggt aaatcccatg gattaaattt gtataaatcg atttcgccaa tgatttgcag    360

agaaaaatga tgccccgcaa ctttcctgca taaatattgc actaaaagct cctcatccgt    420

cgggtaatc                                                            429

<210>5

<211>1216

<212>DNA

<213>棉花

<400>5

aaaatgactg attacgattc gagctcggta cccggggatc ctctagagat tgaaagttgc    60

ggggcatcat ttttctctgc aaatcattgg cgaaatcgat ttatacaaat ttaatccatg    120

ggatttacca agtaaagctt tgtttggtga aaaagaatgg tattttttca gtcctagaga    180

cagaaaatat ccgaacgggt cacgacctaa tagagttgcc gggtccgggt actggaaagc    240

taccggaact gataaaatta tcacaacaga aggccgtaaa gttggtataa aaaaagctct    300

ggtttttacg tcggaaaagc tcctaaagga actaaaacta attggattat gcatgaatat    360

cgactcattg aatcttctcg taaaagtggt agctccaagt tggatgattg ggttttatgt    420

cgaatataca agaagaattc aagtggtcaa aaaccattgt caagtgtttc aagcagagag    480

caaagcacga atgggtcatc atcaacgtgt tcttcacaac tggataacat gcttgactca    540

ttgcccgagt tggacgatcg tttctttgct ttgccgcgca ttaactcgtt caaaacgctt    600

caaaacgatg tgaaactggg gtttcaaaat ctgggtatag ggaatttgga ttgggggagt    660

cttggtgggc ttagctcggt gcctgagctg gtaccgagtg gacaaactca aacacaaact    720

caaactcaga gtcaggggat tactagttat ggaaatagta acgtatatgt cagcacaatg    780

ccgcctacac tttgtcagat ggacgtgtcg acaaataaga ttggtaactc ggtggaagag    840

gaagtacaga gtggactcag aactcagcga gctgataact cggggatagt tcaacaaaat    900

tcgaatgtgt tgaacagtca taacttctct aactcgattg acccgtatgg gtttcggtgc    960

ccgactcaat cgggtggatt tgggtttaga caataaaaag aaaaaattat atgtagaagg    1020

accaggaaag gaatttcaga aattgtgtaa atattttgaa ttcttttggg ctaacctttt    1080

ggaattatag aaaccaaaag agtttaaaaa gatagccaaa attcgaaatt ttgctctgtt    1140

ttttagcata attaaaatta taagatttag tttcagttta aaaaaaaaaa aaaaaagtac    1200

tagtcgacgc gtggcc                                                    1216

<210>6

<211>1277

<212>DNA

<213>棉花

<400>6

ggggtgaatc atgggagtgc cggaaactga tccattggct caattgagct tgccgccggg    60

gtttcggttt tatccaactg atgaagagct tttagtgcaa tatttatgca ggaaagttgc    120

ggggcatcat ttttctctgc aaatcattgg cgaaatcgat ttatacaaat ttaatccatg    180

ggatttacca agtaaagctt tgtttggtga aaaagaatgg tattttttca gtcctagaga    240

cagaaaatat ccgaacgggt cacgacctaa tagagttgcc gggtccgggt actggaaagc    300

taccggaact gataaaatta tcacaacaga aggccgtaaa gttggtataa aaaaagctct    360

ggttttttac gtcggaaaag ctcctaaagg aactaaaact aattggatta tgcatgaata    420

tcgactcatt gaatcttctc gtaaaagtgg tagctccaag ttggatgatt gggttttatg    480

tcgaatatac aagaagaatt caagtggtca aaaaccattg tcaagtgttt caagcagaga    540

gcaaagcacg aatgggtcat catcaacgtg ttcttcacaa ctggataaca tgcttgactc    600

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tcttggtggg cttagctcgg tgcctgagct ggtaccgagt ggacaaactc aaacacaaac    780

tcaaactcag agtcagggga ttactagtta tggaaatagt aacgtatatg tcagcacaat    840

gccgcctaca ctttgtcaga tggacgtgtc gacaaataag attggtaact cggtggaaga    900

ggaagtacag agtggactca gaactcagcg agctgataac tcggggatag ttcaacaaaa    960

ttcgaatgtg ttgaacagtc ataacttctc taactcgatt gacccgtatg ggtttcggtg    1020

cccgactcaa tcgggtggat ttgggtttag acaataaaaa gaaaaaatta tatgtagaag    1080

gaccaggaaa ggaatttcag aaattgtgta aatattttga attcttttgg gctaaccttt    1140

tggaattata gaaaccaaaa gagtttaaaa agatagccaa aattcgaaat tttgctctgt    1200

tttttagcat aattaaaatt ataagattta gtttcagttt aaaaaaaaaa aaaaaaagta    1260

ctagtcgacg cgtggcc                                                   1277

Claims (5)

1.一种棉花NAC转录因子基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的一种棉花NAC转录因子基因，其特征在于：所述棉花转录因子基因的cDNA序列如SEQ IDNO：2所示。

3.权利要求2所述的棉花NAC转录因子基因编码的蛋白质，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.含有权利要求1或2所述棉花NAC转录因子基因的植物表达载体。

5.权利要求1或2所述棉花NAC转录因子基因在耐旱植物品种中的应用。

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