CN102066369A

CN102066369A - 一种溴苯基-取代的噻唑二氢嘧啶

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Publication number: CN102066369A
Application number: CN2008800208411A
Authority: CN
Inventors: 戈尔德曼·S; 李静; 刘遗松
Original assignee: ZHANG ZHONGNENG
Current assignee: Guangdong HEC Pharmaceutical
Priority date: 2007-06-18
Filing date: 2008-06-18
Publication date: 2011-05-18
Anticipated expiration: 2028-06-18
Also published as: DK2514750T5; USRE44987E1; PT2514750E; JP2010530374A; JP5970421B2; ES2391597T3; RU2443703C2; AU2008265397A1; EP2159224B1; PL2159224T3; BRPI0813237B8; KR101173892B1; BRPI0813237A2; EP2159224A1; JP2013231036A; KR20100038104A; EP2159224A4; CA2691056A1; BRPI0813237B1; PL2514750T3

Abstract

本发明涉及一种适于对抗乙肝病毒(HBV)感染的新型溴苯基-取代噻唑二氢嘧啶，及其与其他抗病毒剂的组合物。

Description

一种溴苯基-取代的噻唑二氢嘧啶技术领域

本发明涉及一种新的溴苯基-取代噻唑二氢嘧啶，其制备方法及其作为药物尤其是作为治疗和预防乙型肝炎病毒感染的药物的用途。本发明还涉及这些二氢嘧啶同其他抗病毒剂和，适当情况下，免疫调节剂的组合物，以及含有这些组合物尤其是治疗和预防 HBV感染诸如乙型肝炎的组合物的药物。背景技术

乙型肝炎病毒属于肝病毒科。它可引起急性的和或持续 /渐进的慢性病。乙型肝炎病毒还引起病理形态中许多其他的临床病征一一尤其是肝脏的慢性炎症、肝硬化和肝细胞的癌变。另外，与丁型肝炎的共同感染在疾病的发展过程中会产生不利影响。

干扰素和拉米夫定（lamivudine )是批准用于治疗慢性肝炎治疗的常规药物。然而，干扰素只具有中等的活性，并具有有害的副反应；虽然拉米夫定（lamivudine ) 具有良好的活性，但其在治疗中抗性发展迅速，并在停止治疗之后常常出现反弹效应，拉米夫定（ lamivudine ) ( 3-TC ) >的 IC₅。值为 300 nM ( Science, 299 ( 2003 )， 893-896 )。

US 7074784公开了 6-胺基烷基二氢嘧啶及其作为药物的应用，尤其是用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染。

专利 US 7074784的实施例 12描述了 R¹ -邻 -氯， R² =对 -氯， R⁶ =3，5-二氟 -吡啶 -2-基， X =-CH₂-，且 Z -吗啉基。该化合物能在细胞培养中抑制乙型肝炎病毒的生长， IC₅₍₎值为 2 nM (自己测定）。

实施例 12中的主要取代为从二-氯变为 R¹ =邻 -溴和 R² =对- 氟，结果导致化合物 9的 IC₅。为 7 nM (专利的实施例 9 )。且将主要取代基变为 R¹ =邻 -氯， R² =对-氟（实施例 5, IC₅。=2-4 nM ) 也表现出近似的 IC₅。值。这表明 IC_5Q值不能随着主要取代基 R¹ 和 R² 的改变而提高（见表 1)。

专利 US 7074784 B2也公开了一个实施例，其中二氟残基被噻唑 -2-基（专利的实施例 45)取代。这个衍生物表现出了相似的 IC₅。值，为 2nM (见表 1)。表 1专利 US7074784B2的实例 1

发明内容

我们现在惊人地发现了用噻唑 -2-基取代，将主要取代基的变为 R¹-邻 -溴和 R²=对-氟，结果得到了 10倍高活性的衍生物，其 IC₅。低于 1ηΜ。这是在阅读 US 7074784时不可能预料到的（见表 2)。

表 2 本专利的实例

因此，本发明涉及通式 (I)所示的化合物及其同分异构体 (la)

其中

R¹是邻 -溴， R²是对 -氟， R³ 是 C_rC₄烷基， R⁶是噻唑 -2-基， X是亚甲基，和 Z是吗啉基。

优选地，在本发明的通式（I )和（la )所示的化合物中：

R¹是邻 -溴， R²是对 -氟， R³是甲基或乙基， R⁶是噻唑 -2-基， X 是亚甲基，以及 Z是吗啉基。

本发明还涉及上述化合物的对映异构体及其各自的混合物。外消旋体能通过已知的手段分离出来，本质上说它是立体异构体中的均一成分。

本发明的化合物包含通式（I ) 和（la ) 的异构体及其混合物。本发明的化合物也可以是盐的形式，在本发明中，优选为生理上可接受的盐。

生理上可接受的盐可以是无机酸盐或者有机酸盐。优选的是无机酸的盐，诸如，例如盐酸、氢溴酸、磷酸或硫酸等，或者有机羧酸或磺酸，例如醋酸、马来酸、反丁烯二酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸或甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸或萘-二硫磺酸等形成的盐。

生理上可接受的盐还可以是本发明化合物的金属盐或者铵盐。尤其优选的实例是钠、钾、镁、或钙盐，以及由氨或有机胺，诸如乙胺, 二 -或三乙胺，二-或三乙醇胺，二环己基胺，二甲基氨基乙醇，精氨酸，赖氨酸，乙二胺，或 2-苯乙胺等生成的铵盐。

本发明的化合物（I ) 可由下述方法制备：

[A]首先将苯甲醛（II )与通式（III )所示的 β-酮酯在加入或不加入碱或酸，适当时在惰性有机溶剂存在下进行反应转化成通式（IV ) 所示的苯亚甲基化合物：

其中 R R² 、 R³、 X和 Z的含义如前所述。

然后，将后者与通式（V)所示的脒或者其盐（诸如，例如盐酸盐或醋酸盐），在加入或不加入碱或酸，适当时在存在惰性有机溶剂的情况下，进行反应：

其中 R⁶含义如前所述，或

[B]将通式（III) 所示化合物同醛（II)和脒（V) 或它们的盐（诸如，盐酸盐或醋酸盐）在加入或不加入碱或酸，适当时在存在惰性有机溶剂的情况下，进行一步反应；

[C]当通式（I) 中的 X是亚甲基，将通式（VI)所示化合物

其中 R R²、 R³ 和 R⁶含义如前所述， Y是亲核取代基团，诸如氯化物，溴化物，碘化物，甲磺酰基或甲苯磺酰基，与吗啉（VII) (VII) 在加入或不加入碱，适当时存在惰性溶剂的条件下进行反应。

化合物（VI) 的制备可以通过，例如，用通式（VIII)所示化合物

其中 R¹, R², R³ 和 R⁶含义如前所述，和溴化剂诸如 N-溴琥珀酰亚胺，优选在惰性溶液中进行反应，得到通式（IX)所示化合物

将具有亲核取代基团的后者直接或者按照文献中所述的常规方法进一步转变之后，与吗啉（VII)反应。

[D] 将通式（II)所示的醛与通式（X)所示的化合物，以及通式（V)所示的脒在加碱或不加碱的条件下进行反应，当适合时在惰性溶剂中进行反应，

0

R³— 0— C― CH=C— X— 2

(X)

其中 R³， X和 Z含义如前所述。

为制备本发明的通式（I)所示化合物，其中 X是亚甲基， Z是吗琳基，可将通式（XI)所示的氯乙酸酯与吗啉（VII)反应来制备相应的 β-酮羧酸酯（III) 其中 R³含义如前所述。

作为起始原料的 2-溴 -4-氟-苯甲醛（II )可通过商业途径获得。用作起始原料的 β-酮羧酸酯（III )是公知的，或者是能够从文献公布的已知方法中类推制得的 [如， D. Borrmann , "Umsetzung von Diketen mit Alkoholen, Phenolen und Mercaptanen"， in "Methoden der organischen Chemie" ( Houben-Weyl ), vol. VII/4, 230 ff ( 1968 )； Y. Oikawa, K. Sugano und O. Yonemitsu, J, Org. Chem. 43， 2087 ( 1978 )]。

化合物（ V ) 是巳知的，并可根据 WO-A-99/54326 和 WO-A-99/54329 的描述来制备。

吗啉（VII ) 可通过商业途径获得。

化合物（VIII )和（X )可根据 WO-A-99/54326中描述的步骤 [A] 或 [B ]制得。

所有的惰性有机溶剂都适用于、 B、 C和 D步骤。其中优选的包括醇如，甲醇、乙醇、异丙醇，醚如二恶垸、二乙醚、四氢呋喃、乙二醇单甲醚，乙二醇二甲醚，羧酸诸如冰醋酸、或二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、吡啶和六甲基磷酰三胺。

反应温度可以在相当宽的范围内变化。通常使用 20到 150°C之间的温度，但优选的是在所选溶剂的沸点温度。

反应可以在大气压下进行，也可以在高压下进行。通常在大气压下进行。

反应可以在加入或者不加入酸或者碱的环境下进行；但是，在弱酸诸如醋酸或者蚁酸等的存在下进行反应是较好的。

本发明的一种实施方案涉及含有 A ) 至少一种上述的二氢嘧啶， B )至少一种与 A )不同的其他抗病毒剂的组合物。

本发明的一个特定实施方案涉及含有 A )上述二氢嘧啶，B )HBV 聚合酶抑制剂和，和合适的情况下，含有 C )免疫调节剂的组合物。

优选的免疫调节剂 C ) 包括，例如，所有的干扰素诸如 α -, β- 和 γ-干扰素，尤其是 a -2a-和 ex -2b-干扰素，白细胞介素诸如白细胞介素 -2, 多肽诸如胸腺素 - α -l 和胸腺托南（thymoctonan ), 咪唑喹啉衍生物（ imidazoquinoline derivatives )诸如⑧左咪唑，免疫球蛋白和治疗疫苗。 .

因此，本发明还涉及用于治疗和预防 HBV感染的这些组合物及其在治疗 HBV诱导的疾病上的用途。

相对于单一化合物的单一治疗，本发明组合物的使用对治疗 HBV 诱导的疾病是有益的，主要是协同的抗病毒活性，以及相对于单个成分的 Tox-50 (有 50 %的细胞存活的毒性范围）来说，本发明的组合物具有良好的耐受性。

用于实现本发明目的的 HBV聚合酶抑制剂 Β为 Ph. A. Furman 等在《抗微生物制剂与化疗方法》（ Antimicrobial Agents and Chemotherapy ) Vol. 36 ( No. 12 ), 2688 ( 1992 ) 中的内生聚合酶实验中揭示的那些物质，以及那些在下文中描述的，抑制 HBV DNA双链的形成，从而导致最大 50%活性值为零的那些物质。

通过来自培养悬浮液的 HBV毒粒在体外将核苷 5'-三磷酸盐整合到 HBV 的 DNA正链中。通过使用琼酯糖凝胶电泳，发现其中存在 [ α -³¾-脱氧核苷 5'-三磷酸盐掺入到病毒 3.2 kb DNA中的产物，不存在具有潜在 HBV聚合酶 -抑制性质的物质。从 HepG2.2.15 细胞的细胞培养悬浮物中，用聚乙二醇沉淀、浓缩得到 HBV毒粒。将 1体积份的澄清细胞培养悬浮物与 1 / 4体积份的含有 50 % (重量）聚乙二醇 8000 和 0.6M氯化钠的水溶液混合。 2500 x g离心沉淀 15分钟，沉淀物用 2ml含有 0.05 M tris-HCl M ( pH 7.5 )的缓冲液再悬浮，用含有 lOOmM氯化钾的该缓冲液透析。样品在 -80°C冷冻。每个反应混合物（100 μΐ ) 含有至少 10⁵ HBV毒粒、 50 mM tris-HCl ( p.sub.H 7.5 )、 300 mM氯化钾、 50 mM氯化镁、 0.1°/。® Nonident P-40 (非离子型洗涤剂， Boehringer Mannheim )、 10 μΜ dATP , 10 μΜ dGTP , 10 μΜ dTTP; 10 μθί [³²P]dCTP ( 3000 Ci/mmol; 最终浓度为 33nM ) 和 Ι μΜ 三磷酸形式的聚合酶潜在抑制剂。样品在 37°C下培养一个小时，然后加入 50 mM EDTA中止反应。加入 10% 重量 /体积 SDS 溶液（每 90 ml水含有 10 g SDS )到终浓度为 1% (体积）（基于溶液总体积），加入蛋白酶 K至最终浓度为 lmg/ml。然后在 37°C 温育 1小时，用等体积的苯酚 /氯仿 /异戊醇（体积比为 25:24.·1 ) 溶液提取， DNA从含有乙醇的水相中沉淀出来。将 DNA小球悬浮在 10 μΐ凝胶缓冲液（1升水中含有 10.8 g tris、 5.5 g硼酸和 0.75g EDTA ( =TBE 缓冲液））中，并用琼脂糖凝胶电泳分离。将其中的凝胶干燥或者采用 Southern转移技术将其中的核酸转到膜上。然后与阴性对照（=与空白或惰性对照物进行 endo-pol反应）比较来检测生成的标记 DN A双链的量。如果存在对照组的最大 50 %浓度则表明存在 HBV 聚合酶抑制剂。

优选的 HBV 聚合酶抑制剂 B ) 包括，例如， 3TCHi米夫定 ( lamivudine ) =4-氨基 -1-[ ( 2R-顺式） -2- (羟甲基） -1.3-氧硫茂 -5- 基-] -嘧啶 _2 ( 1H ) -酮， cf, EP-B 382 526 ( =U.S.Pat.No.5,047,407 ) 和 WO 91/11186 ( =U.S.Pat.No. 5,204,466 )；

阿德福韦酯（Adefovir dipivoxil ) =9-[2- [双（特戊酰羟甲氧基）膦酰甲氧基]乙基]腺嘌呤， cf. EP-B 481 214 ( =U.S. Pat. Nos. 5,663,159 和 5,792,756 ), U.S. Pat. Nos. 4,724,233和 4,808,716;

BMS 200 475=[1S- ( 1.· alpha., 3..alpha., 4..beta. ) ]-2-氨基 -1.9- 二氢 -9-[4-羟基 -3- (羟甲基）-2-亚甲基-环戊基 ]-6H-嘌呤 -6-酮， cf. EP-B 481 754 ( =U.S.Pat.Nos.5,206,244 和 5，340，816 ), WO 98/09964 和 99/41275;

阿巴卡韦（ Abacavir ) = ( - ) - ( 1 S-顺式 ) -4-[2-氨基 -6- (环丙胺) -9H-嘌呤 -9-基〗 -2-基-环戊烯 -1-甲醇， cf. EP-B 349 242 ( =U.S.Pat.No. 5,049,671 ) 和 EP-B 434 450 ( =U.S.Pat.No. 5,034,394 )； FTC=( 2R-顺式） -4-氨基 -5-氟小[2- (羟甲基） -1.3-氧硫茂 -5-基] -p- 嘧啶 -2 ( 1H ) -酮， cf. WO 92/14743 ( =U.S. Pat Nos. 5,204,466; 5,210,085; 5,539,116; 5,700,937; 5,728,575; 5,814,639； 5,827,727; 5,852,027; 5,892,025; 5,914,331； 5,914,400 ) 和 WO 92/18517;

-L-FDDC=5- ( 6-氨基 -2-氟 -9H-嘌呤 -9-基） -四氢 -2-呋喃甲醇， cf. WO 94/27616 ( =U.S. Pat. Nos. 5,627,160; 5,561,120; 5,631,239 和 5， 830, 881 ) ； L-FMAU=1- ( 2-脱氧 -2-氟 - β -L-阿拉伯呋喃糖） -5- 甲基-嘧啶— 2.4 ( 1H, 3H ) -二酮， cf. WO 99/05157, WO 99/05158 和 U.S.Pat.No. 5,753,789»

本发明进一步优选的实施方案涉及含有 Α )上述二氢嘧啶（I ) 和（la )及 B ) 拉米夫定（lamivudine ) 的组合物。

另一个优选的 HBV抗病毒剂 B含有，例如，下述通式所示的苯基丙烯酰胺

其中

R¹ 和 R² , 分别独立地为， C_rC₄ -烷基或者，与其所在位置上的氮原子一起，形成具有 5-6个环原子包括碳和 /或氧原子的环。 R³ 至 R¹², 分别独立地为氢, 卤素, C_rC₄-垸基，任意的取代 C -Cr燒氧基，硝基，氰基或三氟甲基。 R¹³是氢， C_rC₄-嫁基， C_rC_r酰基或芳烷基，且 X是卤素或任意的取代 C_rC₄-烷基。

这些苯基丙烯酰胺及其制备方法巳在 WO 98/33501中公开，这里提及是为了公开的目的。 AT-61 是化合物

优选的免疫调节剂 C)包括例如，所有的干扰如， α-, β-和 γ- 干扰素，尤其还可以是 a -2a-和 a -2b-干扰，白细胞介素如白细胞介素 -2, 多肽如胸腺素和胸腺托南（thymoctonan), 咪唑喹啉衍生物如⑧左咪唑，免疫球蛋白和治疗疫苗。

本发明另一个优选的实施方式涉及含有 A) 上述二氢嘧啶 (I) 和 (la); B) 拉米夫定（lamivudine); 以及合适的情况下 C) 干扰素的组合物。实验描述

基于 M. A. Sells Proc. Natl. Acad. Sci.84, 10051009 ( 1987 ) 以及 B. E. Korba等 , Antiviral Research 19, 5570 ( 1992 ) 等描述的方法研究本发明的化合物对乙型肝炎病毒的抗病毒作用。

抗病毒测试在 96-孔微量滴定板上进行。第一直列只接受培养基和 HepG2.2.15 细胞，作为病毒对照.

将测试化合物的母液（50 mM) 先溶解在 DMSO 中，然后用 HepG2.2.15 培养基稀释。通常每次用移液管移取 100 μΜ测试浓度 (1st测试浓度）的本发明化合物到微量滴定板的第二测试列，然后在加入 2% 重量胎牛血清（体积 25 μΐ) 的培养基中分两步稀释 2^1Q 倍。

向微量滴定板的每个已添加 2% 重量胎牛血清的培养基的孔中加入 225 μΐ HepG2.2.15 细胞悬浮液（ 5 x 10⁴细胞 /ml )。 37°C、 5% C0₂ (v/v) 温育测试混合物 4天。

然后将表面悬浮物吸出丟弃，向孔中加入 225 μΐ新制备的培养基。重新加入 25 μΐ体积的 1/10浓度的本发明化合物的溶液。混合物继续培养 4天。

在收集悬浮物测试抗病毒效果之前，先在光学显微镜下或者通过生物化学检测方法（例如 Alamar Blue stain或 Trypan Blue stain ) 检测 HepG2.2.15细胞细胞毒素的变化。

收集表面悬浮物和 /或细胞并用抽真空的方法在 96-孔斑点室上覆盖一层尼龙膜（根据制造商的信息）细胞毒素的测定

检测 HepG2.2.15 细胞中物质引发的细胞毒素或抑制细胞的变化，例如，在光学显微镜下细胞形态的改变。 HepG2.2.15 细胞的这些物质引发的变化与未处理过的细胞相比起来是明显的，例如，细胞溶解，液泡或者细胞形态的改变。 50% 毒性（Tox.-50 )是指与相应的对照细胞相比 50% 的细胞表现出一种形态学。

通过其他的宿主细胞诸如，例如 HeLa细胞，初级人外周造血细胞或转化细胞系如 H-9 细胞上测试本发明的一些化合物的耐受性。

在本发明的化合物浓度 >10 μΜ 时没有检测到细胞毒素的改变。抗病毒作用的测定

在将表面悬浮物或溶解的细胞转移到点装置（如上述）的尼龙膜上之后，将 HepG2.2.15细胞的胞内或胞外悬浮物变性（ 1.5 M NaCl/0.5 N NaOH )，中和（ 3 M NaCl/0.5 M Tris HC1, pH 7.5 ) , 然后冲洗 ( 2xSSC )。通过在 120°C下温育过滤器 2-4小时，将 DNA烘干至膜上。

DNA杂交

通常通过非放射性，地高辛 -标记的乙型肝炎-特异性 DNA探针检测来自尼龙滤膜上已处理的 HepG2.2.15 细胞的病毒 DNA, DNA 探针用地高辛标记，并且根据制造商的说明书进行纯化和杂交。预杂交和杂交在 5xSSC, lx封闭试剂， 0.1% (重量） N-月桂酰肌氨酸， 0.02% (重量） SDS 和 100 鲱鱼精 DNA中进行。预杂交在 60。C进行 30分钟，然后与 20 至 40 ng/ml地高辛标记的、变性的 HBV -特异性 DNA ( 14小时， 60°C )进行特定杂交。洗涤滤膜。用地高辛抗体检测 HBV-DNA

按照造制造商的说明进行地高辛 -标记 DNA的免疫检测：洗涤滤膜在封闭试剂中杂交（依照制造商的说明）。然后利用与碱性磷酸酶耦合的抗 - DIG抗体杂交 30分钟。在洗涤步骤之后，加入碱性磷酸酶的底物， CSPD，与滤膜一起温育 5 分钟，然后包上塑料膜， 37°C下另外 15分钟. 将滤膜曝光在 X射线层下，可看见乙型肝炎 DNA的发光信号（温育取决于信号强度： 10 分钟至 2小时） . 最大半抑制浓度（ IC₅。， 50%抑制浓度）为与未处理样本相比本发明化合物降低 50 %胞内或胞外乙肝病毒群的浓度。

本发明的化合物表现出 IC₅₀低于 1 nM的有效的抗病毒作用，这是没有预料到的。因此，本发明的化合物适用于病毒引发的疾病尤其是急性和慢性持续的 HBV病毒感染的治疗。 HBV引发的慢性病毒病可能导致病态变得严重，慢性乙型肝炎病毒感染在许多情况下可导致肝硬化和 /或肝细胞癌变。

对本发明的化合物来说，应被提及的指示区域是，例如：可能导致传染性肝炎的急性和慢性病毒感染的治疗，例如，乙肝病毒感染。本发明的化合物尤其适合治疗慢性乙肝感染和急性和慢性乙肝病毒感染。

本发明包括一种药物制剂，其除含有无毒，惰性的制药学上合适的载体之外，还含有一种或多种本发明的化合物（I ) 或（la ) 或组合物或含有一种或多种活性成分（I ) 或（la )或本发明的组合物。

用于上述药物制剂中的活性成分（I )和（Ia )，其浓度相对于整个混合物约为 0.1至 99.5% (重量），优选约为 0.5 至 95% (重量）。上述药物制剂也可以包含化合物 ( I ) 和 ( la ) 以外的其他活性药物成分。

本发明的组合物中组分八、 B和合适的 C的含量比例可以在较宽的限制范围内变化，优选 5-500 mg的 A/10-1000 mg的 B, 尤其是 10-200 mg的 A/20-400 mg的 B。

组分 C，适当的时候也可使用，其用量优选 1至 10百万，更优选 2至 7百万， I.U. (国际单位），在超过一年的时期内每周 3次。

用于上述药物制剂的本发明的化合物或组合物，其浓度相对于整个混合物通常为约 0.1%至 99.5%, 优选约 0.5%至 95%, (重量百分比）。

上述药物制剂可以通过公知的常规方法来制备，例如将活性成分和载体混合。

无论是人用还是兽用，每 24小时服用总剂量为约 0.05至约 500，优选 0.1至 100mg/kg体重的活性成分已经被普遍证明是有益的，合适单剂量的多次服用，可以达到理想的效果。单剂量含有的活性成分优选在总量约 0.1 至约 80，优选 0.1至 30mg/kg体重。无论如何，尤其是根据待治疗受试者的种类和体重，病症的特性和严重程度，制剂的类型，药物服用的方式以及药物服用的时间或间隔来改变上述的剂量是必要的。

因此，本发明还涉及用于控制疾病的上述化合物和组合物。

本发明还涉及至少含有一种上述化合物或组合物且适当情况下，含有一种或几种其他活性药物成分的药物。

本发明还涉及，用于上述化合物和组合物用于制备治疗和预防上述疾病尤其是病毒性疾病特别是乙型肝炎的药物的用途。

除特别指明的外，下述实施例中的百分数均是重量百分数。混合溶液中溶剂的比例均指体积比。实施例 A.中间体

实施例 1

乙基 4- (2-溴 -4-氟苯基) -2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1，4-二氢嘧啶 -5- 羧酸酯

10.0 g ( 49.3 mmol ) 的 2-溴 -4-氟苯甲醛， 6.4 g ( 49.3 mmol ) 乙基乙酰乙酸，8.1 g (49.3 mmol) 2-脒基-噻唑盐酸盐和 4.8 g (58.5 mmol) 醋酸钠溶解或悬浮于 400ml 乙醇中并且沸腾回流 16小时。冷却至室温，抽气过滤，水洗残渣去除无机盐。得 10.8g (51.6%) 的产物。

熔点： 163-165°C。实施例 2

甲基 4- (2-溴 -4-氟苯基) -2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1,4-二氢嘧啶 -5- 羧酸酯

该化合物釆用乙酰乙酸甲酯通过类似实施例 1 的方法合成得到。

产率： 53% (熔点： 155-157°C ) 实施例 3

乙基 6-溴甲基 -4- (2-溴 -4-氟苯基） -2- (噻唑 -2-基） -1,4-二氢嘧啶 -⁵- 羧酸酯

将 5.0g (11.8 mmol) 买施例 1制得的乙基 4-( 2-溴 -4-氟苯基) -2- (噻唑 -2-基） -6-甲基 -1，4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯加入到 100 ml 四氯化碳中，氩气氛围下加热至 50°C, 得到澄清溶液。在此温度下，加入 2.33 g (13.0 mmol) N-溴琥珀酰亚胺，保持在该温度混合 10分钟。立刻冷却，室温下抽气过滤，减压浓缩。根据 HPLC检测产物纯度高于 90%, 并作为下一步的原材料。

R 0.69 (石油醚 /乙酸乙酯 =8 :2 ) 实施例 4

甲基 6-溴甲基 -4- ( 2-溴 -4-氟苯基） -2- (噻唑 -2-基 ) -1,4-二氢嘧啶 -5- 羧酸酯

该化合物釆用实施例 2制得的化合物按照类似实施例 3的方法合成制得。

R^0.69 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2)

B. 制备实施例实施例 5

乙基 4- (2-漠 -4-氟苯基) -2- (噻唑 -2-基) -6- (4-吗啉甲基) -1,4-- 氢嘧啶 -5-羧酸酯

将 2.0 g的实施例 2新制备的乙基 -6-溴甲基 -4- (2-溴 -4-氟苯基） -2- (噻唑 -2-基） -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯加入到 15 ml甲醇中形成溶液，同 5倍量的吗啉混合，室温下搅拌 30 分钟。溶液用水稀释，乙酸乙酯萃取。

产量： L7g

熔点： 161-163°C。

Rf = 0.45 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2) 实施例 6

甲基 4- (2-溴 -4-氟苯基) -2- (噻唑 -2-基） -6- (4-吗啉甲基) -1,4-- 氢嘧啶 -5-羧酸酯

该化合物采用实施例 4 制得的化合物通过类似实施例 5 合成制得。

熔点： 173-175°C。

R^0.43 (石油醚 /乙酸乙酯 =8 :2) 实施例 5 和 6 制得的对映异构体在手性柱（Daicel Chiralpak AS-H, 流动相：正己烷 /乙醇 =99/1 )上分离

两个实施例中的抗 -HBV 活性化合物均是保留时间较长的对映体。

本发明的化合物的活性数据列表如下：实施例 No. IC₅₀ ( nM )

0.2

( - ) -5 0.1

6 0.3

( - ) -6 0.2 使用本发明的化合物治疗乙型肝炎病毒产生的 HepG2.2.15 细胞导致了胞内和 /或胞外病毒 DNA的减少。工业实用性

实验表明本发明化合物表现出 IC₅₀低于 1 nM的有效的抗病毒作用，因而，可以按照本发明所述的方法或本领域技术人员所知的方法，将本发明化合物用于病毒引发的疾病尤其是急性和慢性持续的 HBV 病毒感染的治疗。

Claims

权利要求书

1、通式（I )及其同分异构体（la )所示的化合物以及其对映异构体及它们的盐：

R¹ 是邻 -溴， R²是对 -氟， R³是 C_rC₄垸基， R⁶是噻唑基 -2-基, X是亚甲基，以及 Z是吗啉基。

2、如杈利要求 1所述的化合物及其对映异构体及它们的盐，其中： R¹是邻 -溴， R²是对 -氟， R³是甲基或乙基， R⁶是噻唑基 -2-基, X是亚甲基，以及 Z是吗淋基。

3、具有下述结构的化合物及其对映异构体、其互变异构体（la ) 及其盐

4、制备杈利要求 1所述化合物的方法，包括步骤：

[A] 首先将通式（Π ) 所示苯甲醛与通式（III )所示 β-酮酯反应生成通式（IV)所示的苯亚甲基化合物:

其中： Κλ R²、 R³、 X和 Z具有杈利要求 1中所述的含义，且

然后将通式（IV)所示苯亚甲基化合物与通式（V)所示的脒或其盐，或通式（V)所示的其它化合物反应，

R^e八 NH₂ ( V ) 其中 R⁶具有杈利要求 1中所述的含义；

[B] 将通式（III)所示化合物同醛（Π)和脒（V) 或其盐，或通式（V)所示的其它化合物通过一步法进行反应,

[C] 当通式（I) 中 X是亚甲基时，将通式（VI) 所示化合物和吗啉（VII)或其盐反应：

其中， Ελ R²、 R³ 和 R⁶具有上述的含义， Y是亲核取代基，

[D] 将通式（Π ) 所示醛与通式（X )所示化合物及通式（V ) 所示的脒或其盐反应：

其中， R³、 X和 Z具有权利要求 1中所述的含义。

5、通式（XII )所示的化合物'.

其中 R¹, R², R³ 和 R⁶具有杈利要求 1-3中所述的含义并且所述化合物用作合成化合物 ( I ) 或 ( la ) 的中间体。

6、权利要求 1-3之任一所述的用于控制疾病的化合物。

7、一种含有至少一种权利要求 1至 3所述化合物的药物, 且适当时，其进一步含有其它活性药物组分。

8、权利要求 1至 3所述的化合物在制备治疗和预防病毒性疾病的药物中的用途。

9、杈利要求 1至 3所迷的化合物在制备治疗和预防乙型肝炎感染的药物中的用途。

10、一种治疗乙型肝炎的方法，包括将有效量的杈利要求 1所述的化合物施用于哺乳动物。

11、一种治疗由乙型肝炎感染引起的疾病的方法，包括将有效量的杈利要求 1所述的化合物施用于哺乳动物。

12、如权利要求 11所述的方法，其中所述的疾病是肝炎。 13、如杈利要求 11所述的方法，其中所述的疾病是肝硬化。

14、如权利要求 11所述的方法，其中所述的疾病是肝细胞癌变。

15、一种药物制剂，其包含一种或多种杈利要求 1所述的化合物及一种药学上可接受的载体。

16、一种由下列组分组成的组合物：

A)至少一种如权利要求 1至 3之任一所述的二氢嘧啶，

B)至少一种不同于 A的 HBV抗病毒剂和，适当情况下，

C)至少一种免疫调节剂。

17、如权利要求 16所述的组合物，其中组分 B是 HBV聚合酶抑制剂。

18、如杈利要求 16 所述的组合物，其中组分 B 是拉米夫定 ( lamivudine )。

19、如杈利要求 16所述的组合物，其中组分 B选自下述通式所示的化合物及其盐

其中

R¹ 和 R², 分别独立地为， d-C₄ -烷基或者，与其所在位置上的氮原子一起，形成具有 5-6个环原子包括碳和 /或氧原子的环,

R³ 至 R¹²,分别独立地为氢、卤素、 d- -烷基、任意取代的 C C₄- 烷氧基、确基、氰基或三氟甲基，

R¹³是氢， C 烷基， C_rC₇-酰基或芳垸基，且 X是素或任意取代的^^^烷基。

20、如杈利要求 19所述的组合物，其中化合物具有如下结构：

21、如权利要求 16至 20之任一所述的组合物，其中免疫调节剂 C包括干扰素。

22、一种组合物，其由下述物质组成：

A ) 杈利要求 1至 3所述的二氢嘧啶，

B ) 拉米夫定（ lamivudine )和，适当时，

C ) 干扰素。

23、一种如杈利要求 16至 22之任一所述的组合物的制备方法，其特征在于，以适合方式组合或混合组分 A, B和，适当情况下的组分 C。

24、如权利要求 16至 22之任一所述的用于控制疾病的组合物。

25、一种药物，其包含至少一种如权利要求 16至 22 之任一所述的组合物，且适当情况下，包含其他活性药物成分。

26、如杈利要求 16至 22之任一所述的组合物在制备治疗和预防病毒性疾病的药物中的用途。

27、如权利要求 16至 22之任一所述的组合物在制备治疗和预防乙型肝炎感染的药物中的用途。