CN101328170B

CN101328170B - 一种氟苯基-取代噻唑二氢嘧啶

Info

Publication number: CN101328170B
Application number: CN2008101257243A
Authority: CN
Inventors: S·戈尔德曼; 李静; 刘遗松
Original assignee: ZHANG ZHONGNENG
Current assignee: Guangdong HEC Pharmaceutical
Priority date: 2007-06-18
Filing date: 2008-06-18
Publication date: 2011-09-14
Anticipated expiration: 2028-06-18
Also published as: WO2008154818A1; CN101328170A

Abstract

本发明涉及一种适用于对抗B型肝炎病毒(HBV)感染的新型氟苯基-取代噻唑二氢嘧啶，及其与其他抗病毒剂的组合物。

Description

一种氟苯基-取代噻唑二氢嘧啶

技术领域

本发明涉及一种新的氟苯基-取代噻唑二氢嘧啶，其制备方法及其作为药物的用途，尤其是在治疗和预防乙型肝炎病毒感染上的应用。本发明还涉及这些二氢嘧啶同其他抗病毒剂、和适当情况下，免疫调节剂的组合物，以及含有这些组合物的药物，尤其是用于治疗和预防HBV感染，如乙型肝炎。

背景技术

乙型肝炎病毒属于肝病毒科。它可引起急性的和或持续/渐进的慢性病。B型肝炎病毒还引起病理形态中的许多其他的临床表征——尤其是肝脏的慢性炎症、肝硬化和肝细胞的癌变。另外，与丁型肝炎的共同感染在疾病的发展过程中会产生不利影响。

被许可用于治疗慢性肝炎治疗的常规药剂是干扰素和拉米夫定(lamivudine)。然而，干扰素只具有中等的活性，并具有有害的副反应；虽然拉米夫定(lamivudine)具有良好的活性，但其在治疗中抗性发展迅速，并在停止治疗之后常常出现反弹效应，拉米夫定(3-TC)＞的IC₅₀值为300nM(Science，299(2003)，893-896)。。

US 7074784公开了6-胺基烷基二氢嘧啶及其作为药物的应用，尤其是用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染。

专利US 7074784的实施例12描述了R¹＝邻-氯，R²＝对-氯，R⁶＝3，5-二氟-吡啶-2-基，X＝-CH₂-，和Z＝吗啉基。该化合物能在细胞培养中抑制乙型肝炎病毒的生长，IC₅₀值为2nM(自己测定)。

实施例12中的主要取代基从二-氯变为R¹＝邻-溴和R²＝对-氟，结果导致化合物9的IC₅₀为7nM(专利的实施例9)。并且将主要取代基变为R¹＝邻-氯，R²＝对-氟(实施例5，IC₅₀＝2-4nM)也表现出近似的IC₅₀值。

这表明IC₅₀值不能随着主要取代基R¹和R²的改变而提高(见表1)。

专利US 7074784B2也公开了一个实施例，其中二氟残基被噻唑-2-基(专利的实施例45)取代。这个衍生物表现出了相似的IC₅₀值，为2nM(见表1)。

表1专利US7074784B2的实施例

发明内容

我们现在惊人地发现用噻唑-2-基取代基，将主要取代基的变为R¹＝邻-氯和R²＝对-氟，结果得到了6倍高活性的衍生物，IC₅₀低1nM。这在阅读US 7074784是不可能预料到的。(见表2)

表2本专利实例

因此，本发明涉及分子式(I)所示的化合物

及其同分异构体

其中，R¹是邻-氯，R²是对-氟，R³是C₁-C₄烷基，R⁶是噻唑-2-基，X是亚甲基，且Z是吗啉基.

优选的是，本发明的分子式(I)和(Ia)给出的化合物，其中R¹是邻-氯，R²是对-氟，R³是甲基或乙基，R⁶是噻唑-2-基，X是亚甲基，且Z是吗啉基.。

本发明还涉及上述化合物的对映异构体及其各自的混合物。外消旋体能通过已知的手段分离出来，本质上说它是立体异构体中的均一成分。

本发明的化合物包含分子式(I)和(Ia)的异构体及其混合物。本发明的化合物也可以以盐的形式存在。根据本发明的框架，生理上可接受的盐是优选的。

生理上可接受的盐可以是无机酸盐或者有机酸盐。优选的是无机酸，诸如酸盐、氢溴酸、磷酸或硫酸等，或者有机羧酸或磺酸，例如醋酸、马来酸、反丁烯二酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸或甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸或萘-二硫磺酸等形成的盐。生理上可接受的盐还可以是本发明的化合物的金属盐或者铵盐。尤其优选的例子是钠、钾、镁、或钙盐，以及由氨或有机胺，诸如乙胺，二-或三乙胺，二-或三乙醇胺，二环己基胺，二甲基氨基乙醇，精氨酸，赖氨酸，乙二胺，或2-苯乙胺等生成的铵盐。

本发明的化合物(I)可由下述方法制备：

[A]首先将苯甲醛，(其中R¹和R²的含义如前所述)

与分子式(III)所示的β-酮酯

(其中R³、X和Z的含义如前所述，加入或不加入碱或酸，以适于存在于惰性有机溶剂中)反应，得到如分子式(IV)所示的苯亚甲基化合物

然后，将后者与分子式(V)所示的脒

其中R⁶含义如前所述，或者其盐(例如，盐酸盐或醋酸盐)加入或不加入碱或酸，以适于存在于惰性有机溶剂中，进行反应或[B]将分子式(III)所示化合物同醛(II)和脒(V)或它们的盐(诸如，盐酸盐或醋酸盐s)加入或不加入碱或酸，以适于存在于惰性有机溶剂中，进行一步反应；或

[C]分子式(I)中的X是亚甲基，分子式(VI)所示化合物

其中R¹、R²、R³和R⁶含义如前所述，Y是亲核取代基团，诸如氯化物，溴化物，碘化物，甲磺酰基或甲苯磺酰基，与吗啉(VII)，

加入或不加入碱，以适于存在与惰性溶剂中进行反应。

制备化合物(VI)可以通过，例如，用分子式(VIII)所示化合物

其中R¹、R²、R³和R⁶含义如前所述，和溴化剂诸如，N-溴琥珀酰亚胺，优选在惰性溶液中进行反应，得到分子式(IX)所示化合物

将具有亲核取代基团的后者直接或者如文献中的常规方法进一步转变之后，与吗啉(VII)反应。

[D]分子式(II)所示的醛与分子式(X)所示的化合物反应，

其中R³、X和Z含义如前所述，分子式(V)所示的脒，加入或不加入碱，为适合存在于惰性溶剂中。.，进行反应。

为制备本发明的分子式(I)所示化合物，其中X是亚甲基，Z是吗啉基，相应的β-酮羧酸酯(III)可由分子式(XI)所示的氯乙酸酯

其中R³含义如前所述，与吗啉(VII)反应制得。

作为起始原料的2-氯4-氟-苯甲醛(II)可通过商业途径获得。

用作起始原料的β-酮羧酸酯(III)是公知的，或者是能够从文献公布的已知方法中类推制得的[如，D.Borrmann，″Umsetzung vonDiketen mit Alkoholen，Phenolen und Mercaptanen″，in″Methoden derorganischen Chemie″(Houben-Weyl)，vol.VII/4，230ff(1968)；Y.Oikawa，K.Sugano und O.Yonemitsu，J.Org.Chem.43，2087(1978)]。

化合物(V)是已知的，并可根据WO-A-99/54326和WO-A-99/54329的描述制备。

吗啉(VII)可通过商业途径获得。

化合物(VIII)和(X)可根据WO-A-99/54326中的描述按照步骤[A]或[B]制得。

A、B、C和D所有步骤都适合的溶剂是所有的惰性有机溶剂。

其中优选的包括醇如，甲醇、乙醇、异丙醇，醚如二恶烷、二乙醚、四氢呋喃、乙二醇单甲醚，乙二醇二甲醚，羧酸诸如冰醋酸、或二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、吡啶和六甲基磷酰三胺。

反应温度可以在相当宽的范围内变化。通常使用20到150℃之间的温度，但优选的是在所选溶剂的沸点温度。

反应可以在大气压下进行，也可以在高压下进行。通常在大气压下进行。

反应可以在加入或者不加入酸或者碱的环境下进行；但是，在弱酸诸如醋酸或者蚁酸等的存在下进行反应是较好的。

本发明的一种实施方案涉及含有：A)至少一种上述的二氢嘧啶，B)至少一种与A)不同的其他抗病毒剂的组合物。

本发明的一个详细的实施方案涉及含有：A)上述二氢嘧啶，B)HBV聚合酶抑制剂和，和合适的情况下，C)免疫调节剂的组合物。

优选的免疫调节剂C)包括，例如，所有的干扰素诸如α-，β-和γ-干扰素，尤其是α-2a-和α-2b-干扰素，白细胞介素诸如白细胞介素-2，多肽诸如胸腺素-α-1和胸腺托南(thymoctonan)，咪唑喹啉衍生物诸如

左咪唑，免疫球蛋白和治疗疫苗。.

因此，本发明还涉及用于治疗和预防HBV感染的这些组合物及其在治疗HBV引发的疾病上的用途。.

相对于单一化合物的单一治疗，本发明的组合物的使用对治疗HBV引发的疾病是有益的，主要是增进的抗病毒活性，以及相对于单个成分的Tox-50(有50％的细胞存活的毒性范围)来说，本发明的组合物具有良好的耐受性。

用于实现本发明目的的HBV聚合酶抑制剂B为Ph.A.Furman等在《抗微生物制剂与化疗方法》(Antimicrobial Agents andChemotherapy)Vol.36(No.12)，2688(1992)中的内生聚合酶实验中揭示的那些物质，以及那些在下文中描述的，抑制HBV DNA双链的形成，从而导致最大50％活性值为零的那些物质。

在试管中，将HBV毒粒与核苷5′-三磷酸盐一起从培养悬浮物中移至HBV DNA正链上。通过使用琼酯糖凝胶电泳，发现其中存在有[α-³²P]-脱氧核苷5′-三磷酸盐和病毒的3.2kb DNA的结合产品，不存在具有潜在HBV聚合酶-抑制性质的物质。从HepG2.2.15细胞的细胞培养悬浮物中，用聚乙二醇沉淀、浓缩得到HBV毒粒。将1体积份的澄清细胞培养悬浮物与1/4体积份的含有50％(重量)聚乙二醇8000和0.6M氯化钠的水溶液混合。2500×g离心沉淀15分钟，沉淀物用2ml含有0.05M tris-HCl M(pH 7.5)的缓冲液再悬浮，用含有100mM氯化钾的该缓冲液透析。样品在-80℃时冷冻。每个反应混合物(100μl)含有至少10⁵HBV毒粒、50mM tris-HCl(p.sub.H 7.5)、300mM氯化钾、50mM氯化镁、0.1％

Nonident P-40(非离子型洗涤剂，Boehringer Mannheim)、10μM dATP，10μMdGTP，10μM dTTP；10μCi[³²P]dCTP(3000Ci/mmol；最终浓度为33nM)and 1μM三磷酸形式的聚合酶潜在抑制剂。样品在37℃下培养一个小时，然后加入50mM EDTA中止反应。加入10％重量/体积SDS溶液(每90ml水含有10g SDS)到最终浓度为1％(体积)(基于溶液总体积)，加入蛋白酶K至最终浓度为1mg/ml。然后在37℃培育1小时，用等体积的苯酚/氯仿/异戊醇(体积比为25∶24∶1)溶液提取，DNA从含有乙醇的水相中沉淀出来。DNA小球在10μl凝胶缓冲液(1升水中含有10.8g tris、5.5g硼酸和0.75gEDTA(＝TBE buffer))中在悬浮，并用琼脂糖凝胶电泳分离。将其中的凝胶干燥或者采用Southern转移技术将其中的核酸转到膜上。形成一定数量的标记DNA双链进行对照检测(＝空白或有惰性对照物进行ndo-pol反应)。如果存在对照组的最大50％浓度则存在HBV聚合酶抑制剂。

优选的HBV聚合酶抑制剂B)包括，例如，3TC＝拉米夫定(lamivudine)＝4-氨基-1-[(2R-顺式)-2-(羟甲基)-1.3-氧硫茂-5-基-]-嘧啶-2(1H)-酮cf.EP-B 382 526(＝U.S.Pat.No.5,047,407)和WO91/11186(＝U.S.Pat.No.5,204,466)；

阿德福韦酯(Adefovir dipivoxil)＝9-[2-[双(特戊酰羟甲氧基)膦酰甲氧基]乙基]腺嘌呤，cf.EP-B 481 214(＝U.S.Pat.Nos.5,663,159和5,792,756)，U.S.Pat.Nos.4,724,233和4,808,716；

BMS 200 475＝[1S-(1..alpha.，3..alpha.，4..beta.)]-2-氨基-1.9-二氢-9-[4-羟基--3-(羟甲基)-2-亚甲基-环戊基]-6H-嘌呤-6-酮，cf.EP-B 481754(＝U.S.Pat.Nos.5,206,244和5,340,816)，WO 98/09964和99/41275；

阿巴卡韦(Abacavir)＝(-)-(1S-顺式)-4-[2-氨基-6-(环丙胺)-9H-嘌呤-9-基]-2-基-环戊烯-1-甲醇，cf.EP-B 349 242(＝U.S.Pat.No.5,049,671)和EP-B 434 450(＝U.S.Pat.No.5,034,394)；

FTC＝(2R-顺式)-4-氨基-5-氟-1-[2-(羟甲基)-1.3-氧硫茂-5-基]-嘧啶-2(1H)-酮，cf.WO 92/14743(＝U.S.Pat.Nos.5,204,466；5,210,085；5,539,116；5,700,937；5,728,575；5,814,639；5,827,727；5,852,027；5,892,025；5,914,331；5,914,400)和WO 92/18517；.

β-L-FDDC＝5-(6-氨基-2-氟-9H-嘌呤-9-基)-四氢-2-呋喃甲醇，cf.WO 94/27616(＝U.S.Pat.Nos.5,627,160；5,561,120；5,631,239和5,830,881)；L-FMAU＝1-(2-脱氧-2-氟-.beta.-L-阿拉伯呋喃糖)-5-甲基-嘧啶e--2.4(1H，3H)-二酮，cf.WO 99/05157，WO 99/05158和U.S.Pat.No.5,753,789

本发明进一步优选的实施方案涉及含有A)上述二氢嘧啶(I)和(Ia)及B)拉米夫定(lamivudine)的组合物。

另一个优选的HBV抗病毒剂B含有，例如，下述分子式所示的苯基丙烯酰胺

其中，R¹和R²，分别独立为，C₁-C₄-烷基或者，在他们所在的位置上带有一个氮原子，形成具有5到6个原子含有碳和/或氧的环。R³到R¹²，分别独立为，氢、卤素、C₁-C₄-烷基、任意的取代C₁-C₄-烷氧基、硝基，氰基或三氟甲基。R¹³是氢，C₁-C₄-烷基，C₁-C₇-酰基或芳烷基，以及X是卤素或任意取代的C₁-C₄-烷基，及其盐。

这些苯基丙烯酰胺及其制备方法已在WO 98/33501中公开，这里提及是为了公开的目的。AT-61是化合物

优选的免疫调节剂C)包括例如，所有的干扰如，α-，β-和γ-干扰素，尤其还可以是α-2a-和α-2b-干扰，白细胞介素如白细胞介素-2，多肽如胸腺素-α-1和胸腺托南(thymoctonan)，咪唑喹啉衍生物如

左咪唑，免疫球蛋白和治疗疫苗。

本发明的另一个优选的实施方式涉及含有A)上述二氢嘧啶(I)和(Ia)；B)拉米夫定(lamivudine)；以及合适的情况下C)干扰素的组合物。

测试说明

本发明的化合物对乙型肝炎病毒的抗病毒作用通过M.A.Sells等描述的方法基础上进行研究，Proc.Natl.Acad.Sci.84，10051009(1987)and B.E.Korba et al.，Antiviral Research 19，5570(1992).

抗病毒测试在96-孔微量滴定板上进行。第一直列只接受培养基和HepG2.2.15细胞，作为病毒对照.

测试化合物的储备液(50mM)是先溶解在DMSO中，然后在HepG2.2.15培养基中稀释制得。根据本发明的化合物通常每次用移液管移取100μM测试浓度(lst测试浓度)到微量滴定板的第二测试列，然后在加入2％重量胎牛血清(体积25μl)的培养基中分两步稀释2¹⁰倍。

微量滴定板的每个加入了2％重量胎牛血清的培养基的孔中都含有225μl HepG2.2.15细胞悬浮液(5×10⁴cells/ml)。37℃、5％CO₂(v/v)培养测试混合物4天。

然后将表面悬浮物吸出丢弃，向孔中加入225μl新制备的培养基。根据本发明的化合物是每个都在25μl体积中重新加入了10-fold浓缩溶液。混合物继续培养4天。

在收集悬浮物测试抗病毒效果之前，先在光学显微镜下或者通过生物化学检测方法(例如Alamar Blue stain or Trypan Blue stain)检测HepG2.2.15细胞细胞毒素的改变。

收集表面悬浮物和/或细胞并用抽真空的方法在96-孔斑点室上覆盖一层尼龙膜(根据制造商的信息)。

细胞毒素的测定

检测HepG2.2.15细胞中物质引发的细胞毒素或抑制细胞的改变，例如，在光学显微镜下细胞形态的改变。HepG2.2.15细胞的这些物质引发的改变与未处理过的细胞相比起来是明显的，例如，细胞溶解，液泡或者细胞形态的改变。50％毒性(Tox.-50)指的是相较于对应的对照细胞50％的细胞表现出一种形态。

根据本发明一些化合物的耐受性在其他的宿主细胞如，HeLa细胞，primary人外周造血细胞或转化细胞系如H-9细胞上进行测试。

在本发明的化合物浓度＞10μM是没有检测到细胞毒素的改变。

抗病毒作用的检测

在将表面悬浮物或溶解的细胞转移到点装置(如上述)的尼龙膜上之后，将HepG2.2.15细胞的胞内或胞外悬浮物变性(1.5M NaCl/0.5N NaOH)，中和(3M NaCl/0.5M Tris HCl，pH 7.5)，然后水洗(2×SSC)。通过在120℃下培养过滤器2-4小时，使DNA回到膜上。

DNA杂化

从尼龙过滤器上处理过的HepG2.2.15细胞中得到的病毒DNA的检测在非放射性，地高辛标记的乙型肝炎DNA探针，每个均用地高辛标记条件下进行，纯化并且根据操作信心进行杂化。

预杂化和杂化在5×SSC，1×封闭试剂，0.1％(重量)N-月桂酰肌氨酸，0.02％(重量)SDS和100μg青鱼精子DNA中进行。预杂化在60℃进行30分钟，然后与20至40ng/ml地高辛标记过的，变性的HBV-DNA(14小时，60℃)进行特定杂化。洗涤过滤器。

用地高辛抗体检测HBV-DNA

按照造制造商的信息进行地高辛-标记DNA的免疫检测：

洗涤过滤器在封闭试中杂化(依照制造商的信息)。杂化使用抗-DIG抗体和碱性磷酸酶，进行30分钟。在洗涤步骤之后，加入碱性磷酸酶的底物，CSPD，带着过滤器培养5分钟，然后包上塑料膜，37℃再培养15分钟.将过滤器曝光在X射线层下，可看见乙型肝炎DNA的发光信号(培养取决于信号强度：10分钟至2小时).

胞内或胞外乙型肝炎群被根据本发明的化合物降低相当于未处理的样本50％的浓度下测试最大半抑制浓度(IC₅₀，50％抑制浓度)。

本发明的化合物表现出的抗病毒作用值为IC₅₀低于1nM，这是没有预料到的。因此，本发明的化合物适用于病毒引发的疾病的治，尤其是急性和慢性持续的HBV病毒感染。HBV引发的慢性病毒病可能导致病态变得严重，慢性乙型肝炎病毒感染在许多情况下可导致肝硬化和/或肝细胞癌变。

对本发明的化合物来说，可能被提及的指示区域是，例如：可能导致传染性肝炎的急性和慢性病毒感染的治疗，例如乙肝病毒感染。本发明的化合物尤其适合治疗慢性乙肝感染和急性和慢性乙肝病毒感染。

本发明包括药物的制备，除了无毒，惰性的制药学上合适的载体之外，还含有一种或多种本发明的化合物(I)或(Ia)或组合物或由一种或多种活性成分(I)或(Ia)组成的组合物或由者本发明的组合物组成的组合物。

上述药物制备中所指的活性成分(I)和(Ia)，浓度约为0.1至99.5％(重量)，优选约为0.5至95％(重量)，相对于整个混合物。

上述药物制备也可以包含化合物(I)和(Ia)以外的其他活性药物成分。

本发明的组合物中组分A、B和合适的C的含量比例可以在较宽的限制范围内变化，优选5至500mg A/10至1000mg B，尤其是10至200mg A/20至400mg B.

组分C，适当的时候也可使用，其总使用量，优选，1至10百万，更优选2至7百万，I.U.(国际单位)，在超过一年的时期内每周3次。

上述药物制备所指的本发明的化合物或组合物浓度通常为约0.1％至99.5％，优选约0.5％至95％，(重量百分比)，相对于整个混合物。

上述药物制备可以通过公知的常规方法实现，例如将活性成分和载体混合。

无论是在人体还是在兽医学上每24小时服用总剂量为约0.05至约500，优选0.1至100mg/kg体重的活性成分已经被普遍证明是有益的，合适的单剂的多次服用，可以达到理想的效果。单剂含有的活性成分优选在总量约0.1至约80，优选0.1至30mg/kg体重。无论如何，根据上述剂量尤其是根据个人和治疗对象的体重，药物制作的类型，药物服用的方式以及药物服用的时间或间隔有所偏移是必要的。

因此，本发明还涉及用于控制疾病的上述化合物和组合物。

本发明还涉及至少含有一种上述化合物或组合物和适当的情况下，一种或几种其他活性药物成分的药物。

本发明还涉及，用于制备治疗和预防上述疾病尤其是病毒性疾病特别是乙型肝炎的药物的上述化合物和组合物的用途。

下述实施例中的百分数均是重量百分数，特别指明的除外。混合溶液中溶剂的比例均指体积比。

实施例

A.中间体

实施例1

乙基4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯

10.0g(49.3mmol)of2-氯-4-氟苯甲醛，8.2g(63.1mmol)乙基乙酰乙酸，10.3g(63.1mmol)2-脒基-噻唑盐酸盐和6.2g(75.7mmol)醋酸钠溶解或悬浮于500ml乙醇中回流下沸腾16小时。冷却至室温，抽气过滤，水洗残渣去除无机盐。得产品12.8g(53.4％)

熔点：162-164℃.

实施例2

甲基4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯

该化合物采用甲基乙酰乙酸通过类似实施例1的方法合成得到产率：55％(熔点：152-154℃)

实施例3

乙基6-氯甲基-4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯

将4.0g(8.72mmol)实施例1制得的乙基4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯加入到80ml四氯化碳中，氩气氛围下加热至50℃，得到澄清溶液。在此温度，加入1.73g(9.61mmol)N-溴琥珀酰亚胺，保持在该温度混合10分钟。立刻冷却，室温下抽气过滤，减压浓缩。根据HPLC检验产品纯度高于90％，并作为下一步的原材料。

Rf＝0.70(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)

实施例4

甲基6-溴甲基-4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯

该化合物采用实施例2制得的化合物按照类似实施例3的方法合成制得。

Rf＝0.70(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)

B.制备实施例

实施例5

乙基4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-(4-吗啉甲基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯

将3.0g实施例3新制备的乙基-6-溴甲基-4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯加入到40ml甲醇中形成溶液，同5倍量的吗啉混合，室温下搅拌30分钟。溶液用水稀释，乙酸乙酯萃取。

产率：2.3g

熔点：155-157℃.

R_f＝0.46(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)

实施例6

甲基4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-(4-吗啉甲基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯

该化合物采用实施例4制得的化合物通过类似实施例5的方法合成制得。

熔点：167-169℃.

R_f＝0.44(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)

实施例5和6制得的对映异构体在手性柱(Daicel ChiralpakAS-H，流动相：正己烷/乙醇＝99/1)上分离

两个实施例中的抗-HBV活性化合物均是保留时间较长的对映体。

本发明的化合物的活性数据列表如下：

使用本发明的化合物治疗乙型肝炎病毒产生的HepG2.2.15细胞会导致胞内和/或胞外病毒DNA的减少。

Claims

1.通式(I)及其同分异构体(Ia)所示的化合物以及它们的盐：

其中：

R¹是邻-氯，R²是对-氟，R³是乙基，R⁶是噻唑基-2-基，X是亚甲基，以及Z是4-吗啉基。

2.制备权利要求1所述化合物的方法，包括步骤：

[A]首先将通式(II)所示苯甲醛与通式(III)所示β-酮酯反应生成通式(IV)所示的苯亚甲基化合物：

其中：R¹、R²、R³、X和Z具有权利要求1中所述的含义，且

然后将通式(IV)所示苯亚甲基化合物与通式(V)所示的脒或其盐反应，

其中R⁶具有权利要求1中所述的含义；或

[B]将通式(III)所示化合物同醛(II)和脒(V)或其盐通过一步法进行反应，或

[C]将通式(VI)所示化合物和吗啉(VII)或其盐反应：

其中，R¹，R²，R³和R⁶具有上述的含义，Y是亲核取代基，或

[D]将通式(II)所示醛与通式(X)所示化合物及通式(V)所示的脒或其盐反应：

其中，R³、X和Z具有权利要求1中所述的含义。

3.通式(XII)所示的化合物：

其中R¹，R²，R³和R⁶具有权利要求1所述的含义并且所述化合物用作合成权利要求1所述的化合物(I)或(Ia)的中间体。

4.一种药物，该药物含有至少一种权利要求1所述的化合物，适当时，进一步含有其它活性药物组分。

5.权利要求1所述的化合物在制备治疗和预防乙型肝炎感染引起的疾病的药物中的用途，所述疾病为肝硬化或肝细胞癌变。

6.权利要求1所述的化合物在制备治疗和预防乙型肝炎感染的药物中的用途。

7.一种药物制剂，其包含一种或多种权利要求1所述的化合物及一种药学上可接受的载体。

8.一种组合物，由下列组分组成：

A)至少一种如权利要求1所述的化合物，

B)至少一种不同于A的HBV抗病毒剂和，适当情况下，

C)至少一种免疫调节剂。

9.如权利要求8所述的组合物，其中组分B是HBV聚合酶抑制剂。

10.如权利要求8所述的组合物，其中组分B是拉米夫定。

11.如权利要求9所述的组合物，其中组分B选自下述通式所示的化合物及其盐

其中

R¹和R²，分别独立地为，C₁-C₄-烷基或者，与其所在位置上的氮原子一起，形成具有5-6个环原子包括碳和/或氧原子的环，

R³至R¹²，分别独立地为氢，卤素，C₁-C₄-烷基，C₁-C₄-烷氧基，硝基，氰基或三氟甲基，X是卤素或C₁-C₄-烷基。

12.如权利要求11所述的组合物，其中组分B具有如下结构：

13.如权利要求8至12之任一项所述的组合物，其中免疫调节剂C为干扰素。

14.一种组合物，其由下述物质组成：

A)权利要求1所述的化合物，

B)拉米夫定和，适当时，

C)干扰素。

15.一种如权利要求8至14之任一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，以适合方式组合或混合组分A，B和，适当情况下的组分C。

16.一种药物，其包含至少一种如权利要求8至14之任一项所述的组合物，且适当情况下，其他活性药物成分。

17.如权利要求8至14之任一项所述的组合物在制备治疗和预防乙型肝炎感染引起的疾病的药物中的用途，所述疾病为肝硬化或肝细胞癌变。

18.如权利要求8至14之任一项所述的组合物在制备治疗和预防乙型肝炎感染的药物中的用途。