CN101328168B - 一种乙氧碳酰基-取代噻唑二氢嘧啶 - Google Patents

一种乙氧碳酰基-取代噻唑二氢嘧啶 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种适于对抗乙肝病毒(HBV)感染含有亚砜和砜的新型噻唑基二氢嘧啶，及其与其他抗病毒剂的组合物。

Description

一种乙氧碳酰基-取代噻唑二氢嘧啶
技术领域
本发明涉及一种新的乙氧碳酰基-取代噻唑二氢嘧啶，其制备方法及其作为药物的用途，尤其是在治疗和预防乙型肝炎病毒感染上的应用。本发明还涉及这些二氢嘧啶同其他抗病毒剂、和适当情况下，免疫调节剂的组合物，以及含有这些组合物的药物，尤其是用于治疗和预防HBV感染，如乙型肝炎。
背景技术
乙型肝炎病毒属于肝病毒科。它可引起急性的和或持续/渐进的慢性病。B型肝炎病毒还引起病理形态中的许多其他的临床表征——尤其是肝脏的慢性炎症、肝硬化和肝细胞的癌变。另外，与丁型肝炎的共同感染在疾病的发展过程中会产生不利影响。
被许可用于治疗慢性肝炎治疗的常规药剂是干扰素和拉米夫定(lamivudine)。然而，干扰素只具有中等的活性，并具有有害的副反应；虽然拉米夫定(lamivudine)具有良好的活性，但其在治疗中抗性发展迅速，并在停止治疗之后常常出现反弹效应。
US 7074784公开了6-胺基烷基二氢嘧啶及其作为药物的应用，尤其是用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染。
该专利EP01/02442DE德文版公开了两个含有R1＝Cl，R2＝F，R3＝Me和R6＝3，5-二氟-吡啶-2-基的实施例。
Figure S2008101257224D00021
发明内容
该专利中没有公开上述结构以及R6＝噻唑-2-基。我们现在发现具有2-噻唑-2-基的衍生物相对于这两个专利中公开的近似化合物惊人地表现出增强的代谢和化学稳定性。
1、其化学稳定性测定如下：
在10ml乙醇中加入约5mg(10nM的化合物与45mg的吗啉。通过HPLC测定6小时与12小时后的化合物浓度，从表1可知12小时后，可检测的R6＝3，5-二氟-2-吡啶基结构少于50％。表2的结构几乎没有被吗啉破坏。因此，可以断定具有R6＝噻唑-2-基的衍生物与具有R6＝3，5-二氟-2-吡啶基的稳定。
表1来自WO 01/68641A1的实例
Figure S2008101257224D00022
表2新的专利实例
Figure S2008101257224D00023
Figure S2008101257224D00031
我们也测定了本发明的其他化合物的，结果与表2所示基本相同，几乎没有被破坏。
2、肝微体的体外清除测定
在37℃，利用改良的Multiprobe II
Figure S2008101257224D00032
II机器人系统(CanberraPackard)对总量1.5ml的微粒体进行培养，培养混合物含有0.5mg/mL的微粒体蛋白，～1μM底物，0.05M磷酸氢二钾缓冲液(pH＝7.4)，1mM EDTA，5mM葡萄糖-6-磷酸盐和来自肠膜样明串珠菌(Leuconostoc Mesenteroides.)的1.5U/ml葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶。尽管通过加入NADP+(终浓度1mM)启动反应，但FMO-活性得以维持(数据未显示)，CAN的最终浓度小于1％。
温育2，10，20，30，50，70和90后，由温育混合物取125μl的样品并悬浮于含有用于终止反应的250μl ACN的96孔板中。通过MSMS(API 2000)分析离心的上清液后，检测其半衰期。US 7074784B2的实例45的半衰期被设置为1。
代谢的结果显示于表3中。
Figure S2008101257224D00033
Figure S2008101257224D00041
因此，本发明涉及分子式(I)所示的化合物
Figure S2008101257224D00042
及其同分异构体(Ia)与对应异构体及其盐
Figure S2008101257224D00043
其中，R1和R2分别独立是氢、氟、氯或溴，R3是C1-C4烷基，R6是噻唑-2-基，X是亚甲基，以及Z是硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物。
优选的是，本发明的分子式(I)和(Ia)给出的化合物，其中R1是邻-氯或邻-溴，R2是对-氢、对-氟或对-氯，R3是C1-C2-烷基，R6是噻唑-2-基，X是亚甲基，和Z是硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物。
本发明还涉及上述化合物的对映异构体及其各自的混合物。外消旋体能通过已知的手段分离出来，本质上说它是立体异构体中的均一成分。
本发明的化合物包含分子式(I)和(Ia)的异构体及其混合物。本发明的化合物也可以以盐的形式存在。根据本发明的框架，生理上可接受的盐是优选的。
生理上可接受的盐可以是无机酸盐或者有机酸盐。优选的是无机酸，诸如酸盐、氢溴酸、磷酸或硫酸等，或者有机羧酸或磺酸，例如醋酸、马来酸、反丁烯二酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸或甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸或萘-二硫磺酸等形成的盐。
生理上可接受的盐还可以是本发明的化合物的金属盐或者铵盐。尤其优选的例子是钠、钾、镁、或钙盐，以及由氨或有机胺，诸如乙胺，二-或三乙胺，二-或三乙醇胺，二环己基胺，二甲基氨基乙醇，精氨酸，赖氨酸，乙二胺，或2-苯乙胺等生成的铵盐。
本发明的化合物(I)可由下述方法制备：
[A]首先将苯甲醛(II)，其中R1和R2的含义如前所述
Figure S2008101257224D00051
与分子式(III)所示的β-酮酯
(其中R3、X和Z的含义如前所述，加入或不加入碱或酸，以适于存在于惰性有机溶剂中)反应，得到如分子式(IV)所示的苯亚甲基化合物
Figure S2008101257224D00061
然后，将后者与分子式(V)所示的脒
其中R6含义如前所述，或者其盐(例如，盐酸盐或醋酸盐)加入或不加入碱或酸，以适于存在于惰性有机溶剂中，进行反应或
[B]将分子式(III)所示化合物同醛(II)和脒(V)或它们的盐(诸如，盐酸盐或醋酸盐)加入或不加入碱或酸，以适于存在于惰性有机溶剂中进行一步反应；或
[C]分子式(I)中的X是亚甲基，分子式(VI)所示化合物
Figure S2008101257224D00063
其中R1、R2、R3和R6含义如前所述，Y是亲核取代基团，诸如氯化物，溴化物，碘化物，甲磺酰基或甲苯磺酰基，与硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物(VII)，
Figure S2008101257224D00064
加入或不加入碱，以适于存在与惰性溶剂中进行反应。
制备化合物(VI)可以通过，例如，用分子式(VIII)所示化合物
Figure S2008101257224D00071
其中R1、R2、R3和R6含义如前所述，和溴化剂诸如，N-溴琥珀酰亚胺，优选在惰性溶液中进行反应，得到分子式(IX)所示化合物，
Figure S2008101257224D00072
将具有亲核取代基团的后者直接或者如文献中的常规方法进一步转变之后，与硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物(VII)反应。
[D]分子式(II)所示的醛与分子式(X)所示的化合物，
Figure S2008101257224D00073
其中R3、X和Z含义如前所述，以及分子式(V)所示的脒，加入或不加入碱，为适合存在于惰性溶剂中，进行反应。
[E]本发明的化合物(I)，其中R1、R2、R3、R6和X含义如前所述，也可以使用具有结构(I)其中R1、R2、R3、R6和X具有上述含义且Z是硫代吗啉按照文献公开的方法使用如H2O2，NaIO4，KMnO4或间-过苯甲酸在最后一步氧化硫制备，
为制备本发明的分子式(I)所示化合物，其中X是亚甲基，Z是硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物，相应的β-酮羧酸酯(III)可由分子式(XI)所示的氯乙酸酯
Figure S2008101257224D00081
其中R3含义如前所述，与硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物(VII)反应制得。
氯代苯甲醛(II)作为起始原料可通过商业途径获得。
用作起始原料的β-酮羧酸酯(III)是公知的，或者是能够从文献公布的已知方法中类推制得的[如，D.Borrmann，″Umsetzung vonDiketen mit Alkoholen，Phenolen und Mercaptanen″，in″Methoden derorganischen Chemie″(Houben-Weyl)，vol.VII/4，230ff(1968)；Y.Oikawa，K.Sugano und O.Yonemitsu，J.Org.Chem.43，2087(1978)]。
化合物(V)是已知的，并可根据WO-A-99/54326和WO-A-99/54329的描述来制备。
硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物(VII)可根据J.Med.Chem.1994，Vol.37，Nr.7，p922公开的方法合成制得。
(在室温下氧化制得一氧化物)。
化合物(VIII)和(X)可根据WO-A-99/54326中的描述按照步骤[A]或[B]制得。
A、B、C和D所有步骤都适合的溶剂是所有的惰性有机溶剂。其中优选的包括醇如，甲醇、乙醇、异丙醇，醚如二恶烷、二乙醚、四氢呋喃、乙二醇单甲醚，乙二醇二甲醚，羧酸诸如冰醋酸、或二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈、吡啶和六甲基磷酰三胺。
反应温度可以在相当宽的范围内变化。通常使用20到150℃之间的温度，但优选的是所选的溶剂的沸点温度。
反应可以在大气压下进行，也可以在高压下进行。通常在大气压下进行。
反应可以在加入或者不加入酸或者碱的环境下进行；但是，在弱酸诸如醋酸或者蚁酸等的存在下进行反应是较好的。
本发明的一种实施方案涉及含有：A)至少一种上述的二氢嘧啶，B)至少一种与A)不同的其他抗病毒剂的组合物。
本发明的一个具体实施方案涉及含有：A)上述二氢嘧啶，B)HBV聚合酶抑制剂和，和合适的情况下，C)免疫调节剂的组合物。
优选的免疫调节剂C)包括，例如，所有的干扰素诸如α-，β-和γ-干扰素，尤其是α-2a-和α-2b-干扰素，白细胞介素诸如白细胞介素-2，多肽诸如胸腺素-α-1和胸腺托南(thymoctonan)，咪唑喹啉衍生物诸如
Figure S2008101257224D00091
左咪唑，免疫球蛋白和治疗疫苗。.
因此，本发明还涉及用于治疗和预防HBV感染的这些组合物及其在治疗HBV引发的疾病上的用途。.
相对于单一化合物的单一治疗，本发明的组合物的使用对治疗HBV引发的疾病是有益的，主要是协同的抗病毒活性，以及相对于单个成分的Tox-50(有50％的细胞存活的毒性范围)来说，本发明的组合物具有良好的耐受性。
为了实现本发明的目的，HBV聚合酶抑制剂B那些在内生聚合酶化验中被Ph.A.Furman等在《(抗微生物制剂与化疗方法》(Antimicrobial Agents and Chemotherapy)Vol.36(No.12)，2688(1992)中揭示的那些物质，以及那些在下文中描述的，抑制HBV DNA双链的形成，从而导致最大50％活性的值为零。
在试管中，将HBV毒粒与核苷5′-三磷酸盐一起从培养悬浮物中移至HBV DNA正链中。通过使用琼酯糖凝胶电泳，发现其中存在有[α-32P]-脱氧核苷5′-三磷酸盐和病毒的3.2kb DNA的结合产物，不存在具有潜在HBV聚合酶抑制性质的物质。从HepG2.2.15细胞的细胞培养悬浮物中，用聚乙二醇沉淀、浓缩得到HBV毒粒。1体积份的澄清细胞培养悬浮物与1/4体积份的含有50％(重量)聚乙二醇8000和0.6M氯化钠的水溶液混合。2500×g离心沉淀15分钟，沉淀物用2ml含有0.05M tris-HCl M(pH 7.5)的缓冲液再悬浮，用含有100mM氯化钾的该缓冲液透析。样品在-80℃时冷冻。每个反应混合物(100μl)含有至少105HBV毒粒、50mM tris-HCl(p.sub.H7.5)、300mM氯化钾、50mM氯化镁、0.1％
Figure S2008101257224D00101
Nonident P-40(非离子型洗涤剂，Boehringer Mannheim)、10μM dATP，10μM dGTP，10μM dTTP；10μCi[32P]dCTP(3000Ci/mmol；最终浓度为33nM)and 1μM三磷酸形式的聚合酶潜在抑制剂。样品在37℃下培养一个小时，然后加入50mM EDTA中止反应。加入10％重量/体积SDS溶液(每90ml水含有10g SDS)到最终浓度为1％(体积)(基于溶液总体积)，加入蛋白酶K至最终浓度为1mg/ml。然后在37℃培育1小时，用等体积的苯酚/氯仿/异戊醇(体积比为25∶24∶1)溶液提取，DNA从含有乙醇的水相中沉淀出来。DNA小球在10μl凝胶缓冲液(1升水中含有10.8g tris、5.5g硼酸和0.75g EDTA(＝TBE buffer))中在悬浮，并用琼脂糖凝胶电泳分离。将其中的凝胶干燥或者采用Southern转化技术将其中的核酸转变成膜。形成一定数量的标记DNA双链进行对照检测(＝空白或有惰性对照物进行ndo-pol反应)。如果存在对照组的最大50％浓度则存在HBV聚合酶抑制剂。
优选的HBV聚合酶抑制剂B)包括，例如，3TC＝拉米夫定(lamivudine)＝4-氨基-1-[(2R-顺式)-2-(羟甲基)-1.3-氧硫茂-5-基-]-嘧啶-2(1H)-酮cf.EP-B 382 526(＝U.S.Pat.No.5,047,407)和WO91/11186(＝U.S.Pat.No.5,204,466)；
阿德福韦酯(Adefovir dipivoxil)＝9-[2-[双(特戊酰羟甲氧基)膦酰甲氧基]乙基]腺嘌呤，cf.EP-B 481 214(＝U.S.Pat.Nos.5,663,159和5,792,756)，U.S.Pat.Nos.4,724,233和4,808,716；
BMS 200475＝[1S-(1..alpha.，3..alpha.，4..beta.)]-2-氨基-1.9-二氢-9-[4-羟基--3-(羟甲基)-2-亚甲基-环戊基]-6H-嘌呤-6-酮，cf.EP-B481754(＝U.S.Pat.Nos.5,206,244和5,340,816)，WO 98/09964和99/41275；
阿巴卡韦(Abacavir)＝(-)-(1S-cis)-4-[2-氨基-6-(环丙胺)-9H-嘌呤-9-基]-2-基-环戊烯-1-甲醇，cf.EP-B 349 242(＝U.S.Pat.No.5,049,671)和EP-B 434 450(＝U.S.Pat.No.5,034,394)；
FTC＝(2R-顺式)-4-氨基-5-氟-1-[2-(羟甲基)-1.3-氧硫茂-5-基]-嘧啶-2(1H)-酮，cf.WO 92/14743(＝U.S.Pat.Nos.5,204,466；5,210,085；5,539,116；5,700,937；5,728,575；5,814,639；5,827,727；5,852,027；5,892,025；5,914,331；5,914,400)和WO 92/18517；.
β-L-FDDC＝5-(6-氨基-2-氟-9H-嘌呤-9-基)-四氢-2-呋喃甲醇，cf.WO 94/27616(＝U.S.Pat.Nos.5,627,160；5,561,120；5,631,239和5,830,881)；
L-FMAU＝1-(2-脱氧-2-氟-.beta.-L-阿拉伯呋喃糖)-5-甲基-嘧啶e--2.4(1H，3H)-二酮，cf.WO 99/05157，WO 99/05158和U.S.Pat.No.5,753,789。
本发明的一个更优选的实施方案涉及含有A)上述二氢嘧啶(I)和(Ia)及B)拉米夫定(lamivudine)的组合物。
另一个优选的HBV抗病毒剂B包括，例如，下述分子式所示的苯基丙烯酰胺及其盐
Figure S2008101257224D00111
其中R1和R2，分别独立为，C1-C4-烷基或者，在他们所在的位置上带有一个氮原子，形成具有5到6个原子含有碳和/或氧的环；
R3到R12，分别独立为，氢、卤素、C1-C4-烷基、任意的取代C1-C4-烷氧基、硝基、氰基或三氟甲基；
R13是氢、C1-C4-烷基、C1-C7-酰基或芳烷基，以及
X是卤素或任意取代的C1-C4-烷基。
这些苯基丙烯酰胺及其制备方法已在WO 98/33501中公开，这里提及是为了公开的目的。AT-61是化合物
Figure S2008101257224D00121
优选的免疫调节剂C)包括例如，所有的干扰素，α-，β-和γ-干扰素，尤其还可以是α-2a-和α-2b-干扰，白细胞介素如白细胞介素-2，多肽如胸腺素-α-1和胸腺托南(thymoctonan)，咪唑喹啉衍生物如左咪唑，免疫球蛋白和治疗疫苗。
本发明的另一个优选的实施方案涉及含有A)上述二氢嘧啶(I)和(Ia)；B)拉米夫定(lamivudine)；以及合适的情况下含有C)干扰素的组合物。
测试说明
本发明的化合物对乙型肝炎病毒的抗病毒作用通过M.A.Sells等描述的方法基础上进行研究，Proc.Natl.Acad.Sci.84，10051009(1987)and B.E.Korba et al.，Antiviral Research 19，5570(1992).
抗病毒测试在96-孔微量滴定板上进行。第一直列只接受培养基和HepG2.2.15细胞，作为病毒对照.
测试化合物的储备液(50mM)是先溶解在DMSO中，然后在HepG2.2.15培养基中稀释制得。根据本发明的化合物通常每次用移液管移取100μM测试浓度(lst测试浓度)到微量滴定板的第二测试列，然后在加入2％重量胎牛血清(体积25μl)的培养基中分两步稀释210倍。
微量滴定板的每个加入了2％重量胎牛血清的培养基的孔中都含有225μl HepG2.2.15细胞悬浮液(5×104cells/ml)。37℃、5％CO2(v/v)培养测试混合物4天。
然后将表面悬浮物吸出丢弃，向孔中加入225μl新制备的培养基。根据本发明的化合物是每个都在25μl体积中重新加入了10-fold浓缩溶液。混合物继续培养4天。
在收集悬浮物测试抗病毒效果之前，先在光学显微镜下或者通过生物化学检测方法(例如Alamar Blue stain or Trypan Blue stain)检测HepG2.2.15细胞细胞毒素的改变。
收集表面悬浮物和/或细胞并用抽真空的方法在96-孔斑点室上覆盖一层尼龙膜(根据制造商的信息)。
细胞毒素的测定
检测HepG2.2.15细胞中物质引发的细胞毒素或抑制细胞的改变，例如，在光学显微镜下细胞形态的改变。HepG2.2.15细胞的这些物质引发的改变与未处理过的细胞相比起来是明显的，例如，细胞溶解，液泡或者细胞形态的改变。50％毒性(Tox.-50)是指与相应的对照细胞相比50％的细胞表现出一种形态学。
根据本发明一些化合物的耐受性在其他的宿主细胞如，HeLa细胞，primary人外周造血细胞或转化细胞系如H-9细胞上进行测试。
在本发明的化合物浓度＞10μM是没有检测到细胞毒素的改变。
抗病毒作用的检测
在将表面悬浮物或溶解的细胞转移到点装置(如上述)的尼龙膜上之后，将HepG2.2.15细胞的胞内或胞外悬浮物变性(1.5M NaCl/0.5N NaOH)，中和(3M NaCl/0.5M Tris HCl，pH 7.5)，然后水洗(2×SSC)。通过在120℃下培养过滤器2-4小时，使DNA回到膜上。
DNA杂化
从尼龙过滤器上处理过的HepG2.2.15细胞中得到的病毒DNA的检测在非放射性，地高辛标记的乙型肝炎DNA探针，每个均用地高辛标记条件下进行，纯化并且根据制造商的信息进行杂化。
预杂化和杂化在5×SSC，1×封闭试剂，0.1％(重量)N-月桂酰肌氨酸，0.02％(重量)SDS和100ug青鱼精子DNA中进行。预杂化在60℃进行30分钟，然后与20至40ng/ml地高辛标记过的，变性的HBV-DNA(14小时，60℃)进行特定杂化。洗涤过滤器。
用地高辛抗体检测HBV-DNA
按照造制造商的信息进行地高辛-标记DNA的免疫检测：
洗涤过滤器在封闭试中杂化(依照制造商的信息)。杂化使用抗-DIG抗体和碱性磷酸酶，进行30分钟。在洗涤步骤之后，加入碱性磷酸酶的底物，CSPD，带着过滤器培养5分钟，然后包上塑料膜，37℃再培养15分钟.将过滤器曝光在X射线层下，可看见乙型肝炎DNA的发光信号(培养取决于信号强度：10分钟至2小时)。
胞内或胞外乙型肝炎群被根据本发明的化合物降低相当于未处理的样本50％的浓度下测试最大半抑制浓度(IC50，50％抑制浓度)。
本发明的化合物表现出的抗病毒作用值为IC50低于1nM，这是没有预料到的。因此，本发明的化合物适用于病毒引发的疾病的治，尤其是急性和慢性持续的HBV病毒感染。HBV引发的慢性病毒病可能导致病态变得严重，慢性乙型肝炎病毒感染在许多情况下可导致肝硬化和/或肝细胞癌变。
对本发明的化合物来说，可能被提及的指示区域是，例如：可能导致传染性肝炎的急性和慢性病毒感染的治疗，例如乙肝病毒感染。本发明的化合物尤其适合治疗慢性乙肝感染和急性和慢性乙肝病毒感染。
本发明包括药物的制备，除了无毒，惰性的制药学上合适的载体之外，还含有一种或多种本发明的化合物(I)或(Ia)或组合物或由一种或多种活性成分(I)或(Ia)组成的组合物或由者本发明的组合物组成的组合物。
上述药物制备中所指的活性成分(I)和(Ia)，浓度约为0.1至99.5％(重量)，优选约为0.5至95％(重量)，相对于整个混合物。
上述药物制备也可以包含化合物(I)和(Ia)以外的其他活性药物成分。
本发明的组合物中组分A、B和合适的C的含量比例可以在较宽的限制范围内变化，优选5至500mg A/10至1000mg B，尤其是10至200mg A/20至400mg B.
组分C，适当的时候也可使用，其总使用量，优选，1至10百万，更优选2至7百万，I.U.(国际单位)，在超过一年的时期内每周3次。
上述药物制备所指的本发明的化合物或组合物浓度通常为约0.1％至99.5％，优选约0.5％至95％，(重量百分比)，相对于整个混合物。
上述药物制备可以通过公知的常规方法实现，例如将活性成分和载体混合。
无论是在人体还是在兽医学上每24小时服用总剂量为约0.05至约500，优选0.1至100mg/kg体重的活性成分已经被普遍证明是有益的，合适的单剂的多次服用，可以达到理想的效果。单剂含有的活性成分优选在总量约0.1至约80，优选0.1至30mg/kg体重。无论如何，根据上述剂量尤其是根据个人和治疗对象的体重，药物制作的类型，药物服用方式以及药物服用的时间或间隔有所偏移是必要的。
因此，本发明还涉及用于控制疾病的上述化合物和组合物。
本发明还涉及至少含有一种上述化合物或组合物和适当的情况下，一种或几种其他活性药物成分的药物。
本发明还涉及，用于制备治疗和预防上述疾病尤其是病毒性疾病特别是乙型肝炎的药物的上述化合物和组合物的用途。
下述实施例中的百分数均是重量百分数，特别指明的除外。混合溶液中溶剂的比例均指体积比。
实施例
A.中间体
实施例1
乙基4-(2-氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
Figure S2008101257224D00161
将10.0g(63.1mmol)of2-氯4-氟苯甲醛，8.2g(63.1mmol)乙基乙酰乙酸，10.3g(63.1mmol)2-脒基-噻唑盐酸盐和6.2g(75.7mmol)醋酸钠溶解或悬浮于500ml乙醇中，回流下沸腾16小时。冷却至室温，抽气过滤，水洗残渣去除无机盐。得产品12.8g(53.4％)，熔点：162-164℃。
实施例2
甲基4-(2-氯-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用甲基乙酰乙酸按照类似实施例1的方法合成制得。
产率：55％(熔点：152-154℃)
实施例3
乙基4-(2-溴-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用乙基乙酰乙酸按照类似实施例1的方法合成制得。
产率：51.6％(熔点：163-165℃)
实施例4
甲基4-(2-溴-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用甲基乙酰乙酸按照类似实施例1的方法合成制得。
产率：53％(熔点：155-157℃)
实施例5
乙基4-(2，4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用乙基乙酰乙酸按照类似实施例1的方法合成制得。
产率：52.5％(熔点：164-166℃)
实施例6
甲基4-(2，4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用甲基乙酰乙酸按照类似实施例1的方法合成制得。
产率：51.1％(熔点：142-144℃)
实施例7
乙基6-溴甲基4-(2氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
将实施例1制得的4.0g(8.72mmol)乙基4-(2氯-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯加入到80ml四氯化碳中，氩气氛围下加热至50℃，得到澄清溶液。在此温度，加入1.73g(9.61mmol)N-溴琥珀酰亚胺，保持在该温度混合10分钟。立刻冷却，室温下抽气过滤，减压浓缩。根据HPLC产品纯度高于90％，并作为下一步的原料。
Rf＝0.70(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)
实施例8
甲基6-溴甲基4-(2氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用实施例2制得的化合物按照类似实施例7的方法合成制得。
Rf＝0.70(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)
实施例9
乙基6-溴甲基4-(2氯-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用实施例3制得的化合物按照类似实施例7的方法合成制得。
Rf＝0.69(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)
实施例10
甲基6-溴甲基4-(2-溴-4-氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用实施例4制得的化合物按照类似实施例7的方法合成制得。
Rf＝0.69(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)
实施例11
乙基6-溴甲基4-(2，4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用实施例5制得的化合物按照类似实施例7的方法合成制得。
Rf＝0.68(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)
实施例12
甲基6-溴甲基4-(2，4-二氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
该化合物使用实施例6制得的化合物按照类似实施例7的方法合成制得。
Rf＝0.68(石油醚/乙酸乙酯＝8∶2)
B.制备实施例
实施例13
乙基4-(2-氯-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-(S-一氧-吗啉-4-基-甲基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
Figure S2008101257224D00191
将6.0g实施例3新制备的乙基-6-溴甲基-4-(2-氯4-氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯加入到100ml甲醇中形成溶液，同5倍量的溶解在甲醇和三乙胺的硫代吗啉-S-一氧化物盐酸盐，60℃下搅拌40分钟。溶液用水稀释，乙酸乙酯萃取。
产量：5.6g
熔点：217-218℃.
按照类似实施例13的方法制备的化合物如表1所示。
表1
Figure S2008101257224D00192
Figure S2008101257224D00201
Figure S2008101257224D00211
Rf流动相：乙酯
实施例22
乙基4-(2-氯-4氟苯基)-2-(噻唑-2-基)-6-(S-二氧-硫代吗啉-4-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯
Figure S2008101257224D00221
将5.0g实施例3新制备的乙基-6-溴甲基-4-(2-氯4-氯苯基)-2-(噻唑-2-基)-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸酯加入到70ml甲醇中形成溶液，同5倍量的溶解在甲醇和三乙胺的硫代吗啉-S-二氧化物盐酸盐，60℃下搅拌40分钟。溶液用水稀释，乙酸乙酯萃取。
产量：4.6g
熔点：202-203℃.
按照实施例11类似的方法制得的化合物如表2所示：
表2
Figure S2008101257224D00222
Figure S2008101257224D00231
Figure S2008101257224D00241
Rf流动相：乙酯/石油醚＝1/1
实施例19、20、21、28、29、30在手性柱(Daicel ChiralpakAS-H，流动相：正己烷/2-丙醇＝70/30)从外消旋体上分离。
使用本发明的化合物治疗乙型肝炎病毒产生的HepG2.2.15细胞会导致胞内和/或胞外病毒DNA的减少。

Claims (22)

1.通式(I)及其同分异构体(Ia)所示的化合物及它们的盐：
Figure RE-FSB00000364131100011
其中：
R1和R2独立地为氢、氟、氯、溴或碘，R3是C1-C4烷基，R6是噻唑-2-基，X是亚甲基，Z是S-氧代-硫代吗啉-1-基或S-二氧代-硫代吗啉-1基。
2.如权利要求1所述的化合物及它们的盐，其中R1和R2分别独立是氢、氟、氯或溴，R3是C1-C3-烷基，R6是噻唑-2-基，X是亚甲基，Z是S-氧代-硫代吗啉-1-基或S-二氧代-硫代吗啉-1基。
3.如权利要求1所述的化合物及它们的盐，其中R1是邻-氯或邻-溴，R2是对-氢或对-氟，R3是C1-C2-烷基，R6是噻唑-2-基，X是亚甲基，Z是S-氧代-硫代吗啉-1-基或S-二氧代-硫代吗啉-1基。
4.如权利要求1所述的化合物的制备方法：
[A]首先将通式(II)所示取代苯甲醛与通式(III)所示β-酮酯反应生成通式(IV)所示的苯亚甲基化合物：
Figure RE-FSB00000364131100012
Figure RE-FSB00000364131100021
其中：R1、R2、R3、X和Z具有权利要求1中所述的含义，且
然后将通式(IV)所示苯亚甲基化合物与通式(V)所示的脒或其盐反应，
其中R6具有权利要求1中所述的含义；
或[B]将分子式(III)所示化合物在一步反应中同醛(II)和式(V)所示的脒或其盐反应，
或[C]将通式(VI)所示化合物，
Figure RE-FSB00000364131100023
其中R1、R2、R3和R6含义如权利要求1所述，Y是亲核取代基团，和硫代吗啉-S-氧化物或硫代吗啉-S-二氧化物(VII)或其盐反应，
Figure RE-FSB00000364131100024
或[D]将式(II)所示醛与分子式(X)所示化合物及分子式(V)所 示的脒或其盐反应，
Figure RE-FSB00000364131100031
其中R3、X和Z具有权利要求1中所述的含义，
或[E]将式(A)所示的化合物与氧化剂进行反应，其中R1、R2、R3、R6和X含义如权利要求1所述，Z是硫代吗啉
Figure DEST_PATH_FSB00000467946600012
5.通式(XII)所示化合物：
Figure RE-FSB00000467946600013
其中R1、R2、R3和R6含义如权利要求1至3任一所述。
6.一种药物，含有至少一种如权利要求1至3之任一所述的化合物。
7.如权利要求1至3之任一所述的化合物用于制备治疗和预防乙型肝炎感染药物中的用途。
8.如权利要求1所述的化合物用于制备治疗乙型肝炎感染引起的疾病的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其中所述的疾病是肝硬化。
10.如权利要求8所述的用途，其中所述的疾病是肝细胞癌变。
11.一种药物制剂，其包含一种或多种权利要求1所述的化合物及一种制药学上可接受的载体。
12.一种由下列组分组成的组合物： 
A)至少一种如权利要求1至3之任一所述的化合物，
B)至少一种不同于A的HBV抗病毒剂。
13.一种由下列组分组成的组合物：
A)至少一种如权利要求1至3之任一所述的化合物，
B)至少一种不同于A的HBV抗病毒剂，
C)至少一种免疫调节剂。
14.如权利要求12所述的组合物，其中组分B是HBV聚合酶抑制剂。
15.如权利要求12所述的组合物，其中组分B是拉米夫定(lamivudine)。
16.如权利要求12所述的组合物，其中组分B选自下述分子式所示的化合物
Figure RE-FSB00000364131100041
其中，R1和R2分别独立地为C1-C4-烷基或者，与其所在位置上的氮原子一起，形成具有5-6个环原子包括碳和/或氧原子的环，
R3至R12，分别独立是，氢、卤素、C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、硝基、氰基或三氟甲基，
X是卤素或C1-C4-烷基，及其盐。
17.如权利要求16所述的组合物，其中组分B具有如下结构
Figure RE-FSB00000364131100042
18.如权利要求13所述的组合物，其中免疫调节剂选自干扰素。
19.一种组合物，其由下述物质组成：
A)权利要求1至3任一项所述的化合物，
B)拉米夫定(lamivudine)和
C)干扰素。
20.一种如权利要求19所述的组合物的制备方法，其特征在于，以适合方式组合或混合组分A，B和组分C。
21.一种药物，其包含至少一种如权利要求12至19之任一所述的组合物。
22.如权利要求12至19之任一所述的组合物在制备治疗和预防乙型肝炎感染的药物中的用途。 
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Pledgor: SUNSHINE LAKE PHARMA Co.,Ltd.

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