WO2008154820A1 - Thiazolyl-dihydropyrimidines à substitution carbéthoxy - Google Patents

Thiazolyl-dihydropyrimidines à substitution carbéthoxy Download PDF

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WO2008154820A1
WO2008154820A1 PCT/CN2008/001190 CN2008001190W WO2008154820A1 WO 2008154820 A1 WO2008154820 A1 WO 2008154820A1 CN 2008001190 W CN2008001190 W CN 2008001190W WO 2008154820 A1 WO2008154820 A1 WO 2008154820A1
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thiomorpholine
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Goldmann Siegfried
Jing Li
Yisong Liu
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Zhang, Zhongneng
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Definitions

  • the present invention relates to a novel ethoxycarbonyl-substituted thiazolyl dihydropyrimidine, a process for its preparation and its use as a medicament, especially for the treatment and prevention of hepatitis B virus infection.
  • the invention also relates to compositions of these dihydropyrimidines with other antiviral agents, and, where appropriate, immunomodulators, and medicaments containing such compositions, especially for the treatment and prevention of HBV infections, such as hepatitis B. Background technique
  • Hepatitis B virus belongs to the family of hepatic viruses. It can cause acute and/or persistent/progressive chronic conditions. Hepatitis B virus also causes many other clinical characterizations in pathological morphology - especially chronic inflammation of the liver, cirrhosis of the liver and carcinogenesis of hepatocytes. In addition, co-infection with hepatitis D can have an adverse effect in the development of the disease.
  • interferon and lamivudine (lamivudine X.
  • interferon is only moderately active and has harmful side effects; although lamivudine has good Active, but its resistance develops rapidly during treatment and often has a rebound effect after stopping treatment.
  • No. 7,074,784 discloses 6-aminoalkyldihydropyrimidines and their use as medicaments, especially for the treatment and prevention of hepatitis B virus infection.
  • Example 45 of US 7074784B2 was set to one.
  • the present invention relates to a compound of the formula (I)
  • R 1 and R 2 are each independently hydrogen, fluorine, chlorine or bromine
  • R 3 is ( ⁇ -( 4 alkyl
  • R 6 is thiazol-2-yl
  • X is methylene
  • Z is thio? Porphyrin-S-oxide or thio-lin-S-dioxide.
  • the compounds of the formula (I) and (la) of the present invention wherein R 1 is o-chloro or o-bromo, R 2 is p-hydrogen, p-fluoro or p-chloro, R 3 is C r C 2 -alkyl, R 6 is thiazol-2-yl, X is methylene, and Z is thiomorpholine-S-oxide or thiomorpholine-S-dioxide.
  • the invention also relates to enantiomers of the above compounds and to their respective mixtures.
  • the racemic form can be separated by known means, which is essentially a homogeneous component of the stereoisomer.
  • the compounds of the invention comprise isomers of formula (I) and (la) and mixtures thereof.
  • the compounds of the invention may also exist in the form of a salt. a frame according to the invention, physiologically Accepted salts are preferred.
  • the physiologically acceptable salt may be a mineral acid salt or an organic acid salt.
  • the physiologically acceptable salt can also be a metal or ammonium salt of a compound of the invention.
  • Particularly preferred examples are sodium, potassium, magnesium, or calcium salts, and from ammonia or organic amines such as ethylamine, di- or triethylamine, di- or triethanolamine, dicyclohexylamine, dimercaptoaminoethanol, An ammonium salt formed by arginine, lysine, ethylenediamine, or 2-phenylethylamine.
  • the compound (I) of the present invention can be produced by the following method:
  • R 6 has the meaning as defined above, or a salt thereof (for example, a hydrochloride or an acetate) is added or not added with a base or an acid, is suitable for being present in an inert organic solvent, or is reacted or
  • a compound of the formula (III) is added to the aldehyde (II) and hydrazine (V) or a salt thereof (such as a hydrochloride or an acetate) with or without a base or an acid, so as to be suitable for being inert.
  • a salt thereof such as a hydrochloride or an acetate
  • R 1 R 2 , R 3 and R 6 have the same meanings as defined above, and Y is a nucleophilic substituent such as chloride, bromide, iodide, methanesulfonyl or tosyl, and thiomorpholine-S - oxide or thiomorpholine-S-dioxide (VII), With or without the addition of a base, it is suitable to carry out the reaction with an inert solvent.
  • Y is a nucleophilic substituent such as chloride, bromide, iodide, methanesulfonyl or tosyl, and thiomorpholine-S - oxide or thiomorpholine-S-dioxide (VII)
  • the compound (VI) can be produced, for example, by using the compound of the formula (VIII)
  • R ⁇ R 2 , R 3 and R 6 have the same meanings as previously described, and a brominating agent such as N-bromode
  • the reaction is carried out in an inert solution to obtain a compound of the formula (DC).
  • R 3 , X and Z have the same meanings as defined above, and the oxime represented by the formula (V), with or without the addition of a base, is suitably present in an inert solvent to carry out the reaction.
  • R 3 has the same meaning as previously described, and is obtained by reacting with thiomorpholine-S-oxide or thiomorpholine-S-dioxide (VII).
  • Chlorobenzaldehyde (oxime) is commercially available as a starting material.
  • Compound (V) is known and can be prepared as described in WO-A-99/54326 and WO-A-99/54329.
  • Thiomorpholine-S-oxide or thiomorpholine-S-dioxide can be synthesized according to the method disclosed in J. Med. Chem. 1994, Vol. 37, Nr. 7, p 922.
  • Suitable solvents for all steps A, B, C and D are all inert organic solvents. Preferred among them are alcohols such as methanol, ethanol, isopropanol, ethers such as dioxane, diethyl ether, tetrahydrofuran, ethylene glycol monomethyl ether, ethylene glycol dimethyl ether, carboxylic acids such as glacial acetic acid, or dimethyl. Formamide, dimethyl sulfoxide, acetonitrile, pyridine and hexamethylphosphoric triamide.
  • the reaction temperature can be varied within a relatively wide range. Usually used from 20 to 150. The temperature between C, but preferably the boiling temperature of the selected solvent.
  • the reaction can be carried out under atmospheric pressure or under high pressure. It is usually carried out under atmospheric pressure.
  • the reaction can be carried out in the presence or absence of an acid or a base; however, it is preferred to carry out the reaction in the presence of a weak acid such as acetic acid or formic acid.
  • a weak acid such as acetic acid or formic acid.
  • One embodiment of the invention relates to a composition
  • a composition comprising: A) at least one of the above-described dihydropyrimidines, B) at least one other antiviral agent different from A).
  • a particular embodiment of the invention relates to a composition
  • a composition comprising: A) the above-described dihydropyrimidine, B) HBV polymerase inhibitor and, and, where appropriate, C) an immunomodulatory agent.
  • Preferred immunomodulators C) include, for example, all interferons such as alpha-, beta- and gamma-interferons, especially e-2a- and a-2b-interferon, interleukins such as interleukin-2 , peptides such as thymosin- ⁇ -l and thymoctonan, imidazoquine Porphyrin derivatives such as 8 levamisole, immunoglobulins and therapeutic vaccines. .
  • the present invention also relates to such compositions for the treatment and prevention of HBV infection and their use in the treatment of diseases caused by HBV. .
  • compositions of the present invention are beneficial for the treatment of HBV-induced diseases, primarily synergistic antiviral activity, and Tox-50 relative to a single component (50% of cell survival, relative to a single treatment of a single compound)
  • the composition of the present invention is well tolerated in terms of toxicity range.
  • HBV polymerase inhibitors are used in endogenous polymerase assays by Ph. A. Furman et al., "Antimicrobial Agents and Chemotherapy” Vol. 36 (No. 12). ), those disclosed in 2688 (1992), and those described below, inhibit the formation of HBV DNA duplexes, resulting in a value of zero for maximum 50% activity.
  • HBV virions were transferred from the culture suspension to the positive strand of HBV DNA together with the nucleoside 5'-triphosphate.
  • agarose gel electrophoresis it was found that there is a binding product of [ ⁇ - 32 ⁇ ]-deoxynucleoside 5'-triphosphate and 3.2 kb DNA of the virus, and there is no substance having potential HBV polymerase inhibitory properties. . From the cell culture suspension of HepG2.2.15 cells, it was precipitated with polyethylene glycol and concentrated to obtain HBV virions.
  • One part by volume of the clarified cell culture suspension was mixed with 1/4 part by volume of an aqueous solution containing 50% by weight of polyethylene glycol 8000 and 0.6 M of sodium chloride.
  • the pellet was centrifuged at 2500 xg for 15 minutes, and the precipitate was resuspended in 2 ml of a buffer containing 0.05 M tris-HCl M (pH 7.5), and dialyzed against the buffer containing 100 mM potassium chloride.
  • the sample was frozen at -80 °C.
  • Each reaction mixture (100 ⁇ ) contains at least 10 5 HBV virions, 50 mM tris-HCl (p.sub.H 7.5), 300 mM potassium chloride, 50 mM magnesium chloride, 0.1%® Nonident P-40 (non- Ionic detergent, Boehringer Maim eim), 10 /M dATP, 10 ⁇ dGTP , 10 ⁇ dTTP; 10 ⁇ [ 32 P]dCTP (3000 Ci/mmol; final concentration 33 nM) and 1 polymerase in the form of triphosphate Potential inhibitors.
  • the sample is at 37. Incubate for one hour at C, then stop the reaction by adding 50 mM EDTA.
  • the gel therein is dried or the nucleic acid therein is converted into a membrane using Southern transformation techniques.
  • An HBV polymerase inhibitor is present if there is a maximum 50% concentration of the control group.
  • Abacavir (-)-(lS-cis)-4-[2-amino-6-(cyclopropylamine)-9H-indol-9-yl]-2-yl-cyclopentene-1 -methanol, cf.
  • L-FMAU l-(2-deoxy-2-fluoro-.beta.-L-arabinofuranosyl)-5-methyl-pyrimidine e--2.4(1H, 3H)-dione, cf. WO 99/ 05157, WO 99/05158 and US Pat. No. 5,753,789.
  • a more preferred embodiment of the invention relates to a composition
  • a composition comprising A) the above-described dihydropyrimidines (I) and (la) and B) lamivudine.
  • HBV antiviral agent B includes, for example, phenylacrylamide and a salt thereof represented by the following formula
  • R 1 and R 2 are each independently, C r C 4 -alkyl or, with a nitrogen atom at their position, forming a ring having 5 to 6 atoms containing carbon and/or oxygen;
  • R 3 to R 12 are each independently hydrogen, halogen, -C 4 -alkyl, optionally substituted C r C 4 -alkoxy, nitro, cyano or trifluoromethyl;
  • R 13 is hydrogen, Cr alkyl, -Cr ac or aralkyl
  • X is halogen or an optionally substituted C r C 4 -alkyl group.
  • AT-61 is a compound
  • Preferred immunomodulators C) include, for example, all interferons, alpha-, beta- and gamma-interferons, especially ct-2a- and a-2b-interfering, interleukins such as interleukin-2 , polypeptides such as thymosin- ⁇ -1 and thymoctonan, imidazoquinoline derivatives such as 8 levamisole, immunoglobulins and therapeutic vaccines.
  • Another preferred embodiment of the invention relates to a composition
  • a composition comprising A) the above-mentioned dihydropyrimidines (I) and (la); B) lamivudine; and, if appropriate, C) interferon.
  • the antiviral effect of the compounds of the invention on hepatitis B virus is based on the methods described by MA Sells et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 84, 1005 1009 (1987) and BE Korba et al., Antiviral Research 19 , 55 70 (1992). Antiviral testing was performed on 96-well microtiter plates. The first column only received medium and HepG2.2.15 cells as a virus control.
  • the stock solution of the test compound (50 mM) was first dissolved in DMSO and then diluted in HepG2.2.15 medium.
  • the compound according to the invention is usually pipetted with a test concentration of 100 ⁇ (1st test concentration) to the second test column of the microtiter plate, and then cultured with 2% by weight fetal calf serum (volume 25 ⁇ 1 ).
  • the base is diluted 2 1 () times in two steps.
  • Each well of the microtiter plate containing 2% by weight of fetal bovine serum contained 225 d of HepG2.2.15 cell suspension (5 x 10 4 cells/ml). 37. C, 5% C0 2 (v/v) The test mixture was incubated for 4 days.
  • the surface suspension was then aspirated and discarded, and 225 ⁇ l of freshly prepared medium was added to the wells.
  • the compounds according to the invention were each refilled with a 10-fold concentrated solution in a volume of 25/1. The mixture was further cultured for 4 days.
  • cytotoxin of HepG2.2.15 cells Changes in cytotoxin of HepG2.2.15 cells were detected under a light microscope or by biochemical detection methods (eg, Alamar Blue stain or Trypan Blue stain) prior to collecting the antiviral effects of the suspension. Surface suspensions and/or cells were collected and a 96-well spot chamber was covered with a nylon membrane (according to the manufacturer's information) by vacuuming. Determination of cytotoxin
  • cytotoxic or cytotoxic changes induced by substances in HepG2.2.15 cells for example, changes in cell morphology under a light microscope. Changes induced by these substances in HepG2.2.15 cells are evident compared to untreated cells, such as cytolysis, vacuoles, or changes in cell morphology.
  • 50% toxicity (TOX.-50) means that 50% of the cells exhibit a morphology compared to the corresponding control cells.
  • Tolerance of some compounds according to the invention is tested on other host cells, such as HeLa cells, primary human peripheral hematopoietic cells or transformed cell lines such as H-9 cells.
  • the intracellular or extracellular suspension of HepG2.2.15 cells was denatured (1.5 M NaCl/0.5 N NaOH), neutralized ( 3 M NaCl/0.5 M Tris HC1, pH 7.5), then washed with water (2xSSC). The DNA was returned to the membrane by incubating the filter at 120 ° C for 2-4 hours.
  • Detection of viral DNA obtained from HepG2.2.15 cells treated on a nylon filter was performed on non-radioactive, digoxin-labeled hepatitis B DNA probes, each under digoxin labeling conditions, purified and manufactured The information of the business is hybridized.
  • Pre-hybridization and hybridization were carried out in 5xSSC, lx blocking reagent, 0.1% by weight of N-lauroyl sarcosine, 0.02% by weight of SDS and 100 ⁇ of herring sperm DNA.
  • the pre-hybridization was carried out at 60 ° C for 30 minutes and then specifically hybridized with 20 to 40 ng/ml of digoxin-labeled, denatured HBV-DNA (14 hours, 60 ° C). Wash the filter. Detection of HBV-DNA with digoxin antibody
  • DIG antibody and alkaline phosphatase were carried out for 30 minutes. After the washing step, the substrate of alkaline phosphatase was added, CSPD, and incubated with a filter for 5 minutes, then coated with a plastic film, and incubated at 37 ° C for another 15 minutes. The filter was exposed to the X-ray layer and visible. Luminescent signal of hepatitis B DNA (culture depends on signal intensity: 10 minutes to 2 hours).
  • the intracellular or extracellular hepatitis B population is reduced by the compound according to the invention by a maximum half-inhibitory concentration (IC 5 , 50% inhibitory concentration) corresponding to a concentration of 50% of the untreated sample.
  • IC 5 50% inhibitory concentration
  • Compounds of the invention exhibit antiviral activity is IC 5. Below I nM, this was unexpected. Thus, the compounds of the invention are useful in the treatment of viral-induced diseases, particularly acute and chronic persistent HBV viral infections. Chronic viral diseases caused by HBV may cause morbidity to become severe, and chronic hepatitis B virus infection can lead to cirrhosis and/or hepatocellular carcinogenesis in many cases.
  • the indicated regions that may be mentioned are, for example, treatments for acute and chronic viral infections that may result in infectious hepatitis, such as hepatitis B virus infection.
  • the compounds of the invention are especially suitable for the treatment of chronic hepatitis B infection and acute and chronic hepatitis B virus infection.
  • the invention includes the preparation of a medicament comprising, in addition to a non-toxic, inert, pharmaceutically suitable carrier, one or more compounds (I) or (la) or compositions of the invention or one or more A composition consisting of the active ingredient (I) or (la) or a composition consisting of the composition of the invention.
  • the active ingredients (I) and (la) referred to in the above pharmaceutical preparations have a concentration of about 0.1 to 99.5% by weight, preferably about 0.5 to 95% by weight, based on the entire mixture.
  • the above pharmaceutical preparation may also contain other active pharmaceutical ingredients other than the compounds (I) and (la).
  • the content ratio of the components VIII, B and the appropriate C in the composition of the present invention may vary within a wide range of limitations, preferably from 5 to 500 mg A/10 to 1000 mg B, especially 10 to 200 mg A/20 to 400 mg B.
  • Component C may also be used, preferably in a total amount of from 1 to 10 million, more preferably from 2 to 7 million, I.U. (international unit), three times a week for a period of more than one year.
  • the concentration of the compound or composition of the present invention as referred to in the above pharmaceutical preparation is usually from about 0.1% to 99.5%, preferably from about 0.5% to 95% by weight, based on the entire mixture.
  • the above pharmaceutical preparation can be carried out by a known conventional method such as mixing the active ingredient with a carrier.
  • a total dose of from about 0.05 to about 500, preferably from 0.1 to 100 mg/kg body weight per 24 hours in human or veterinary medicine a suitable single dose of multiple administrations, Achieve the desired results.
  • the single component contains the active ingredient preferably in a total amount of from about 0.1 to about 80, preferably from 0.1 to 30 mg/kg of body weight.
  • it is necessary to shift the time or interval depending on the above dosage especially depending on the weight of the individual and the subject, the type of preparation, the manner in which the medicine is administered, and the time taken for administration.
  • the present invention also relates to the above compounds and compositions for use in the control of diseases.
  • the invention further relates to a medicament comprising at least one of the above compounds or compositions and, where appropriate, one or more other active pharmaceutical ingredients.
  • the invention further relates to the use of the above compounds and compositions for the preparation of a medicament for the treatment and prevention of the above mentioned diseases, in particular viral diseases, in particular hepatitis B.
  • the compounds of the invention exhibit potent antiviral effects with an IC 5Q of less than 1 nM and, thus, can be carried out according to the methods of the invention or by methods known to those skilled in the art.
  • the compounds of the invention are useful in the treatment of viral-induced diseases, particularly acute and chronic persistent HBV viral infections.

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Description

一种乙氧碳酰基-取代噻 n坐二氢嘧啶 技术领域
本发明涉及一种新的乙氧碳酰基-取代噻唑二氢嘧啶， 其制备方 法及其作为药物的用途，尤其是在治疗和预防乙型肝炎病毒感染上的 应用。 本发明还涉及这些二氢嘧啶同其他抗病毒剂、 和适当情况下， 免疫调节剂的组合物， 以及含有这些组合物的药物， 尤其是用于治疗 和预防 HBV感染， 如乙型肝炎。 背景技术
乙型肝炎病毒属于肝病毒科。它可引起急性的和或持续 /渐进的 慢性病。 B型肝炎病毒还引起病理形态中的许多其他的临床表征一一 尤其是肝脏的慢性炎症、 肝硬化和肝细胞的癌变。 另外， 与丁型肝炎 的共同感染在疾病的发展过程中会产生不利影响。
被许可用于治疗慢性肝炎治疗的常规药剂是干扰素和拉米夫定 ( lamivudine X 然而， 干扰素只具有中等的活性， 并具有有害的副反 应； 虽然拉米夫定（lamivudine )具有良好的活性， 但其在治疗中抗 性发展迅速， 并在停止治疗之后常常出现反弹效应。
US 7074784公开了 6-胺基烷基二氢嘧啶及其作为药物的应用， 尤其是用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染。
该专利 EP01/02442DE 德文版公开了两个含有 R^Cl, R2=F, R3=Me和 R6= 3,5-二氟-吡啶 -2-基的实施例。
Figure imgf000002_0001
发明内容 该专利中没有公开上述结构以及 R0=噻唑 -2-基。 我们现在发现具 有 2-噻唑 -2-基的衍生物相对于这两个专利中公开的近似化合物惊人 地表现出增强的代谢和化学稳定性。
1、 其化学稳定性测定如下：
在 10 ml乙醇中加入约 5mg ( ΙΟ ηΜ ) 的化合物与 45mg的吗啉。 通过 HPLC测定 6小时与 12小时后的化合物浓度， 从表 1可知 12 小时后， 可检测的 R6 =3,5-二氟 -2-吡啶基结构少于 50%。 表 2的结 构几乎没有被吗啉破坏。 因此， 可以断定具有 R6 =噻唑 -2-基的衍生 物与具有 R6 =3，5-二氟 -2-吡啶基的稳定。 来自 WO 01/68641A1的实例
Figure imgf000003_0002
表 2 新的专利实例
Figure imgf000003_0001
Figure imgf000004_0001
我们也测定了本发明的其他化合物的，结果与表 2所示基本相同， 几乎没有被破坏。
2、 肝微体的体外清除测定
在 37°C， 利用改良的 Multiprobe II ® II机器人系统 (Canberra Packard)对总量 1.5ml的微粒体进行培养，培养混合物含有 0.5 mg/mL 的微粒体蛋白， ~ 1 μ Μ底物， 0.05 Μ磷酸氢二钾缓冲液 (ρΗ = 7.4), ImM EDTA, 5 mM 葡萄糖 -6-磷酸盐和来自肠膜样明串珠菌 ( Leuconostoc Mesenteroides. ) 的 1.5 U/ml葡萄糖 -6-碑酸盐脱氢酶。
尽管通过加入 NADP+ (终浓度 ImM )启动反应， 但 FMO -活性得 以维持（数据未显示）， CAN的最终浓度小于 1%。
温育 2, 10， 20， 30, 50, 70和 90后， 由温育混合物取 125μ1的样品 并悬浮于含有用于终止反应的 250μ1 ΑΟΝ 的 96孔板中。通过 MSMS (API 2000)分析离心的上清液后， 检测其半衰期。 US 7074784B2的 实例 45的半衰期被设置为 1。
代谢的结果显示于表 3中。 半衰期 实例 R1 R2 R3 R6 z
(相对于实例 45)
45
(专利 US
C1 C1 CH3 ― O 1 7074784B2的
卜
实例）
6 C1 C1 CH3 6
Figure imgf000004_0002
Figure imgf000005_0001
因此， 本发明涉及分子式 （I )所示的化合物
Figure imgf000005_0002
及其同分异构体 ( la ) 与对应异构体及其盐
Figure imgf000005_0003
其中， R1 和 R2分别独立是氢、 氟、 氯或溴， R3是(^-( 4烷基， R6是噻唑 -2-基， X是亚甲基， 以及 Z是硫代吗啉 -S-氧化物或硫代 吗琳 -S-二氧化物。
优选的是， 本发明的分子式 (I) 和 （la)给出的化合物， 其中 R1是 邻-氯或邻 -溴, R2是对 -氢、 对-氟或对 -氯， R3 是 CrC2-烷基, R6是噻 唑 -2-基， X是亚甲基， 和 Z是硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 -S-二氧 化物。
本发明还涉及上述化合物的对映异构体及其各自的混合物。 外消 旋体能通过已知的手段分离出来，本质上说它是立体异构体中的均一 成分。
本发明的化合物包含分子式 （I)和 （la) 的异构体及其混合物。本 发明的化合物也可以以盐的形式存在。根据本发明的框架， 生理上可 接受的盐是优选的。
生理上可接受的盐可以是无机酸盐或者有机酸盐。 优选的是无机 酸， 诸如酸盐、 氢溴酸、 磷酸或硫酸等， 或者有机羧酸或磺酸， 例如 醋酸、 马来酸、 反丁烯二酸、 苹果酸、 柠檬酸、 酒石酸、 乳酸、 苯甲 酸或甲磺酸、 乙磺酸、 苯磺酸、 甲苯磺酸或萘-二硫磺酸等形成的盐。
生理上可接受的盐还可以是本发明的化合物的金属盐或者铵盐。 尤其优选的例子是钠、 钾、 镁、 或钙盐， 以及由氨或有机胺， 诸如乙 胺， 二 -或三乙胺， 二-或三乙醇胺， 二环己基胺， 二曱基氨基乙醇， 精氨酸， 赖氨酸， 乙二胺， 或 2-苯乙胺等生成的铵盐。
本发明的化合物 (I)可由下述方法制备：
[A] 首先将苯甲醛（II ), 其中 R1 和 R2 的含义如前所述
Figure imgf000006_0001
与分子式 (III)所示的 β-酮酯
Figure imgf000006_0002
(其中 R3、 X和 Z的含义如前所述， 加入或不加入碱或酸， 以 适于存在于惰性有机溶剂中）反应， 得到如分子式（IV )所示的苯亚 甲基化合物
Figure imgf000006_0003
然后， 将后者与分子式 （V )所示的脒
Figure imgf000007_0001
其中 R6含义如前所述， 或者其盐 （例如， 盐酸盐或醋酸盐）加 入或不加入碱或酸， 以适于存在于惰性有机溶剂中， 进行反应或
[B]将分子式 （III)所示化合物同醛 ( II )和脒（V)或它们的盐 （诸 如， 盐酸盐或醋酸盐） 加入或不加入碱或酸， 以适于存在于惰性有 机溶剂中进行一步反应； 或
[C] 分子式 （I) 中的 X是亚甲基， 分子式 （VI )所示化合物
Figure imgf000007_0002
其中 R1 R2、 R3 和 R6含义如前所述， Y是亲核取代基团， 诸如氯化物， 溴化物， 碘化物， 甲磺酰基或甲苯磺酰基， 与硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 -S-二氧化物 ( VII )，
Figure imgf000007_0003
加入或不加入碱， 以适于存在与惰性溶剂中进行反应。
制备化合物 (VI)可以通过， 例如， 用分子式 （VIII )所示化合物
Figure imgf000007_0004
其中 R\ R2、 R3 和 R6含义如前所述， 和溴化剂诸如， N-溴琥 优选在惰性溶液中进行反应， 得到分子式（DC )所示化合
Figure imgf000008_0001
将具有亲核取代基团的后者直接或者如文献中的常规方法进一 步转变之后，与硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 二氧化物 (VII)反应。
[D] 分子式 （II )所示的醛与分子式 （X )所示的化合物，
0
3 II
3— 0— C— CH=C— X— Z
ΝΗ2 (χ)
其中 R3、 X和 Z含义如前所述， 以及分子式 （V)所示的脒， 加 入或不加入碱， 为适合存在于惰性溶剂中， 进行反应。
[ E ]本发明的化合物 （I ), 其中 R1 R2、 R3、 R6和 X含义如 前所述， 也可以使用具有结构 （I )其中 R R2、 R3、 R6 和 X具有 上述含义且 Z是硫代吗啉按照文献公开的方法使用如 H202, NaI04， Mn04或间-过苯甲酸在最后一步氧化硫制备，
为制备本发明的分子式 （I)所示化合物， 其中 X是亚甲基， Z是 硫代吗淋 氧化物或硫代吗琳 -S-二氧化物，相应的 β-酮羧酸酯（III ) 可由分子式 （XI )所
Figure imgf000008_0002
其中 R3含义如前所述， 与硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 -S-二氧 化物 (VII)反应制得。
氯代苯甲醛 （Π)作为起始原料可通过商业途径获得。
用作起始原料的 β-酮羧酸酯（III )是公知的， 或者是能够从文献 公布的已知方法中类推制得的 [如， D. Borrmann， "Umsetzung von Diketen mit Alkoholen, Phenolen und Mercaptanen"， in "Methoden der organischen Chemie" (Houben- Weyl) , vol. VII/4, 230 ff (1968); Y. Oikawa, K. Sugano und O. Yonemitsu, J. Org. Chem. 43, 2087 (1978)]。
化合物 （V)是 已知 的 ， 并可根据 WO-A-99/54326 和 WO-A-99/54329 的描述来制备。
硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 -S-二氧化物（VII) 可根据 J.Med.Chem. 1994,Vol. 37, Nr. 7, p 922公开的方法合成制得。
(在室温下氧化制得一氧化物）。
化合物 (VIII) 和 (X)可根据 WO-A-99/54326中的描述按照步骤 [A] 或 [B ]制得。
A、 B、 C和 D所有步骤都适合的溶剂是所有的惰性有机溶剂。 其中优选的包括醇如， 甲醇、 乙醇、 异丙醇， 醚如二恶烷、 二乙醚、 四氢呋喃、 乙二醇单甲醚， 乙二醇二甲醚， 羧酸诸如冰醋酸、 或二甲 基甲酰胺、 二甲基亚砜、 乙腈、 吡啶和六甲基磷酰三胺。
反应温度可以在相当宽的范围内变化。 通常使用 20 到 150 。 C 之间的温度， 但优选的是所选的溶剂的沸点温度。
反应可以在大气压下进行， 也可以在高压下进行。 通常在大气压 下进行。
反应可以在加入或者不加入酸或者碱的环境下进行； 但是， 在弱 酸诸如醋酸或者蚁酸等的存在下进行反应是较好的。
本发明的一种实施方案涉及含有： A )至少一种上述的二氢嘧啶， B)至少一种与 A )不同的其他抗病毒剂的组合物。
本发明的一个具体实施方案涉及含有： A ) 上述二氢嘧啶， B ) HBV聚合酶抑制剂和， 和合适的情况下， C ) 免疫调节剂的组合物。
优选的免疫调节剂 C)包括，例如，所有的干扰素诸如 α -, β- 和 γ-干扰素， 尤其是 e -2a-和 a -2b-干扰素， 白细胞介素诸如白细胞 介素 -2， 多肽诸如胸腺素 - α -l 和胸腺托南 （thymoctonan ), 咪唑喹 啉衍生物诸如 ⑧左咪唑， 免疫球蛋白和治疗疫苗。 .
因此， 本发明还涉及用于治疗和预防 HBV感染的这些组合物及 其在治疗 HBV引发的疾病上的用途。 .
相对于单一化合物的单一治疗， 本发明的组合物的使用对治疗 HBV 引发的疾病是有益的， 主要是协同的抗病毒活性， 以及相对于 单个成分的 Tox-50 (有 50 %的细胞存活的毒性范围）来说， 本发明 的组合物具有良好的耐受性。
为了实现本发明的目的， HBV聚合酶抑制剂 Β那些在内生聚合 酶化验中被 Ph. A. Furman 等在 《抗微生物制剂与化疗方法》 ( Antimicrobial Agents and Chemotherapy ) Vol. 36 (No. 12)， 2688 (1992)中揭示的那些物质，以及那些在下文中描述的，抑制 HBV DNA 双链的形成， 从而导致最大 50%活性的值为零。
在试管中，将 HBV毒粒与核苷 5'-三磷酸盐一起从培养悬浮物中 移至 HBV DNA正链中。 通过使用琼酯糖凝胶电泳， 发现其中存在有 [ α -32Ρ]-脱氧核苷 5'-三磷酸盐和病毒的 3.2 kb DNA的结合产物， 不 存在具有潜在 HBV聚合酶抑制性质的物质。 从 HepG2.2.15 细胞的 细胞培养悬浮物中， 用聚乙二醇沉淀、 浓缩得到 HBV毒粒。 1体积 份的澄清细胞培养悬浮物与 1 / 4体积份的含有 50 % (重量）聚乙二 醇 8000 和 0.6M氯化钠的水溶液混合。 2500 x g离心沉淀 15分钟， 沉淀物用 2ml含有 0.05 M tris-HCl M (pH 7.5)的缓冲液再悬浮， 用含 有 lOOmM氯化钾的该缓冲液透析。 样品在 -80 °C时冷冻。 每个反应 混合物 (100 μ\)含有至少 105 HBV毒粒、 50 mM tris-HCl (p.sub.H 7.5)、 300 mM氯化钾、 50 mM氯化镁、 0.1%® Nonident P-40 (非离 子型洗涤剂， Boehringer Maim eim)、 10 /M dATP, 10 μΜ dGTP , 10 μΜ dTTP; 10 μθί [32P]dCTP (3000 Ci/mmol; 最终浓度为 33 nM) and 1 三磷酸形式的聚合酶潜在抑制剂。样品在 37。C下培养一个 小时，然后加入 50 mM EDTA中止反应。 加入 10% 重量 /体积 SDS 溶液 （每 90 ml水含有 10 g SDS )到最终浓度为 1% (体积 )(基于溶液总 体积)， 加入蛋白酶 K至最终浓度为 lmg/ml。 然后在 37。C培育 1小 时， 用等体积的苯酚 /氯仿 /异戊醇（体积比为 25:24:1 )溶液提取, DNA从含有乙醇的水相中沉淀出来。 DNA小球在 10 //1凝胶缓冲液 (1升水中含有 10.8 g tris、 5.5 g硼酸和 0.75g EDTA(=TBE buffer)) 中 在悬浮， 并用琼脂糖凝胶电泳分离。 将其中的凝胶干燥或者采用 Southern转化技术将其中的核酸转变成膜。形成一定数量的标记 DNA 双链进行对照检测 (=空白或有惰性对照物进行 ndo-pol反应）。 如果 存在对照组的最大 50 %浓度则存在 HBV聚合酶抑制剂。
优选的 HBV 聚合酶抑制剂 B) 包括， 例如， 3TO拉米夫定 ( lamivudine ) =4-氨基 -1-[(2R-顺式) -2- (羟甲基) -1.3-氧硫茂 -5-基- ]-嘧 啶 -2(1H)-酮 cf. EP-B 382 526 (=U.S. Pat. No. 5,047,407) 和 WO 91/11186 (=U.S. Pat. No. 5,204,466);
阿德福韦酯（ Adefovir dipivoxil ) =9-[2- [双 (特戊酰羟甲氧基)膦酰 甲氧基]乙基]腺嘌呤， cf. EP-B 481 214 (=U.S. Pat. Nos. 5,663, 159 和 5,792, 756), U.S. Pat. Nos. 4, 724， 233 和 4, 808, 716;
BMS 200 475=[lS-(l..alpha., 3..alpha., 4,.beta,)]-2-氨基 -1.9-二氢 -9-[4-羟基 3- (羟甲基) -2-亚甲基-环戊基] -6H-嘌呤 -6-酮， cf. EP-B 481 754 (=U.S. Pat. Nos. 5,206,244 和 5,340,816)， WO 98/09964 和 99/41275;
阿巴卡韦 （Abacavir ) =(-)-(lS-cis)-4-[2-氨基 -6- (环丙胺) -9H-嘌呤 -9-基] -2-基-环戊烯 -1-甲醇， cf. EP-B 349 242 (=U.S. Pat. No. 5,049, 671) 和 EP-B 434 450 (=U.S. Pat. No. 5,034, 394);
FTO=(2R-顺式)斗氨基 -5-氟小 [2- (羟甲基) -1.3-氧硫茂 -5-基] -嘧啶 -2(1H)-酮， cf. WO 92/14743 (=U,S. Pat. Nos. 5,204， 466; 5,210,085; 5,539,116; 5,700, 937; 5,728,575; 5,814,639; 5,827,727; 5,852,027; 5,892,025； 5,914,331; 5,914，400) 和 WO 92/18517; . P-L-FDDC=5-(6-氨基 -2-氟 -9H-嘌呤- 9-基) -四氢 -2-呋喃甲醇， cf. WO 94/27616 (=U.S. Pat. Nos. 5,627, 160; 5,561 , 120; 5,631， 239 和 5,830, 881);
L-FMAU=l-(2-脱氧 -2-氟 -.beta.-L-阿拉伯呋喃糖 )-5-甲基 -嘧啶 e- -2.4(1H, 3H)-二酮， cf. WO 99/05157， WO 99/05158 和 U.S. Pat. No. 5,753, 789。
本发明的一个更优选的实施方案涉及含有 A )上述二氢嘧啶 （I) 和 (la)及 B)拉米夫定（lamivudine ) 的组合物。
另一个优选的 HBV抗病毒剂 B包括， 例如， 下述分子式所示的苯 基丙烯酰胺及其盐
Figure imgf000012_0001
其中 R1 和 R2 ， 分别独立为， CrC4 -烷基或者， 在他们所在的 位置上带有一个氮原子,形成具有 5到 6个原子含有碳和 /或氧的环;
R3 到 R12 , 分别独立为， 氢、 卤素、 - C4-烷基、 任意的取代 Cr C4-烷氧基、 硝基、 氰基或三氟甲基；
R13是氢、 Cr烷基、 -Cr酰基或芳烷基， 以及
X是卤素或任意取代的 CrC4-烷基。
这些苯基丙烯酰胺及其制备方法巳在 WO 98/33501中公开，这里 提及是为了公开的目的。 AT-61 是化合物
Figure imgf000012_0002
优选的免疫调节剂 C)包括例如， 所有的干扰素， α -， β-和 γ- 干扰素， 尤其还可以是 ct -2a- 和 a -2b-干扰， 白细胞介素如白细胞介 素 -2， 多肽如胸腺素 - α -l 和胸腺托南 （ thymoctonan )， 咪唑喹啉衍 生物如⑧左咪唑， 免疫球蛋白和治疗疫苗。
本发明的另一个优选的实施方案涉及含有 A) 上述二氢嘧啶 （I) 和 （la); B)拉米夫定（ lamivudine ); 以及合适的情况下含有 C) 干 扰素的组合物。 测试说明
本发明的化合物对乙型肝炎病毒的抗病毒作用通过 M. A. Sells 等描述的方法基础上进行研究， Proc. Natl. Acad. Sci. 84, 1005 1009 (1987) and B. E. Korba et al. , Antiviral Research 19, 55 70 (1992). 抗病毒测试在 96-孔微量滴定板上进行。 第一直列只接受培养基 和 HepG2.2.15 细胞， 作为病毒对照.
测试化合物的储备液 (50 mM)是先溶解在 DMSO 中， 然后在 HepG2.2.15 培养基中稀释制得。 根据本发明的化合物通常每次用移 液管移取 100 μΜ测试浓度 (1st测试浓度） 到微量滴定板的第二测 试列， 然后在加入 2% 重量胎牛血清（体积 25 ^1 ) 的培养基中分两 步稀释 21()倍。
微量滴定板的每个加入了 2% 重量胎牛血清的培养基的孔中都 含有 225 d HepG2.2.15 细胞悬浮液 (5 x 104 cells/ml)。 37。C、 5% C02 (v/v)培养测试混合物 4天。
然后将表面悬浮物吸出丟弃， 向孔中加入 225 μ\新制备的培养 基。 根据本发明的化合物是每个都在 25 /1体积中重新加入了 10-fold 浓缩溶液。 混合物继续培养 4天。
在收集悬浮物测试抗病毒效果之前，先在光学显微镜下或者通过 生物化学检测方法 (例如 Alamar Blue stain or Trypan Blue stain)检测 HepG2.2.15细胞细胞毒素的改变。 收集表面悬浮物和 /或细胞并用抽真空的方法在 96-孔斑点室上 覆盖一层尼龙膜（根据制造商的信息）。 细胞毒素的测定
检测 HepG2.2.15 细胞中物质引发的细胞毒素或抑制细胞的改 变， 例如， 在光学显微镜下细胞形态的改变。 HepG2.2.15 细胞的这 些物质引发的改变与未处理过的细胞相比起来是明显的， 例如， 细胞 溶解， 液泡或者细胞形态的改变。 50%毒性 (TOX.-50)是指与相应的 对照细胞相比 50% 的细胞表现出一种形态学。
根据本发明一些化合物的耐受性在其他的宿主细胞如， HeLa细 胞， primary人外周造血细胞或转化细胞系如 H-9 细胞上进行测试。
在本发明的化合物浓度 >10 μΜ是没有检测到细胞毒素的改变。 抗病毒作用的检测
在将表面悬浮物或溶解的细胞转移到点装置（如上述）的尼龙膜 上之后，将 HepG2.2.15细胞的胞内或胞外悬浮物变性 (1.5 M NaCl/0.5 N NaOH), 中和 (3 M NaCl/0.5 M Tris HC1, pH 7.5) , 然后水洗 (2xSSC)。 通过在 120°C下培养过滤器 2-4小时， 使 DNA回到膜上。
DNA杂化
从尼龙过滤器上处理过的 HepG2.2.15 细胞中得到的病毒 DNA 的检测在非放射性， 地高辛标记的乙型肝炎 DNA探针， 每个均用地 高辛标记条件下进行， 纯化并且根据制造商的信息进行杂化。
预杂化和杂化在 5xSSC, lx 封闭试剂， 0.1% (重量） N-月 桂酰肌氨酸， 0.02% (重量） SDS 和 100 μ 青鱼精子 DNA中进行。 预杂化在 60°C进行 30 分钟，然后与 20 至 40 ng/ml地高辛标记过的， 变性的 HBV - DNA (14小时， 60°C)进行特定杂化。 洗涤过滤器。 用地高辛抗体检测 HBV-DNA
按照造制造商的信息进行地高辛 -标记 DNA的免疫检测： 洗涤过滤器在封闭试中杂化 （依照制造商的信息)。杂化使用抗-
DIG抗体和碱性磷酸酶， 进行 30分钟。 在洗涤步骤之后， 加入碱性 磷酸酶的底物， CSPD， 带着过滤器培养 5 分钟， 然后包上塑料膜, 37° C再培养 15 分钟. 将过滤器曝光在 X射线层下， 可看见乙型肝 炎 DNA的发光信号 (培养取决于信号强度：10 分钟至 2小时)。
胞内或胞外乙型肝炎群被根据本发明的化合物降低相当于未处 理的样本 50 %的浓度下测试最大半抑制浓度 （IC5。， 50% 抑制浓 度） 。
本发明的化合物表现出的抗病毒作用值为 IC5。低于 I nM, 这是 没有预料到的。 因此， 本发明的化合物适用于病毒引发的疾病的治， 尤其是急性和慢性持续的 HBV病毒感染。 HBV引发的慢性病毒病可 能导致病态变得严重，慢性乙型肝炎病毒感染在许多情况下可导致肝 硬化和 /或肝细胞癌变。
对本发明的化合物来说， 可能被提及的指示区域是， 例如：可能 导致传染性肝炎的急性和慢性病毒感染的治疗， 例如乙肝病毒感染。 本发明的化合物尤其适合治疗慢性乙肝感染和急性和慢性乙肝病毒 感染。
本发明包括药物的制备， 除了无毒， 惰性的制药学上合适的载 体之外，还含有一种或多种本发明的化合物 （I)或 (la)或组合物或由 一种或多种活性成分 (I)或 （la)组成的组合物或由者本发明的组合物 组成的组合物。
上述药物制备中所指的活性成分 (I) 和 （la) , 浓度约为 0.1 至 99.5% (重量）， 优选约为 0.5 至 95% (重量），相对于整个混合物。
上述药物制备也可以包含化合物 （I) 和 （la)以外的其他活性药 物成分。
本发明的组合物中组分八、 B和合适的 C的含量比例可以在较宽 的限制范围内变化， 优选 5至 500 mg A/10 至 1000 mg B, 尤其是 10至 200 mg A/20至 400 mg B.
组分 C， 适当的时候也可使用， 其总使用量， 优选， 1至 10百 万， 更优选 2至 7百万， I.U. (国际单位)， 在超过一年的时期内每周 3次。
上述药物制备所指的本发明的化合物或组合物浓度通常为约 0.1% 至 99.5%, 优选约 0.5% 至 95% , (重量百分比）， 相对于整 个混合物。
上述药物制备可以通过公知的常规方法实现，例如将活性成分和 载体混合。
无论是在人体还是在兽医学上每 24小时服用总剂量为约 0.05至 约 500, 优选 0.1至 100mg/kg体重的活性成分已经被普遍证明是有 益的， 合适的单剂的多次服用， 可以达到理想的效果。 单剂含有的活 性成分优选在总量约 0.1 至约 80, 优选 0.1至 30mg/kg体重。 无论 如何，根据上述剂量尤其是根据个人和治疗对象的体重， 药物制作的 类型， 药物服用方式以及药物服用的时间或间隔有所偏移是必要的。
因此, 本发明还涉及用于控制疾病的上述化合物和组合物。
本发明还涉及至少含有一种上述化合物或组合物和适当的情况 下， 一种或几种其他活性药物成分的药物。
本发明还涉及，用于制备治疗和预防上述疾病尤其是病毒性疾病 特别是乙型肝炎的药物的上述化合物和组合物的用途。
下述实施例中的百分数均是重量百分数， 特别指明的除外。 混合 溶液中溶剂的比例均指体积比。 实施例
A.中间体
实施例 1
乙基 4_(2_氯 4-氟苯基）-2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯
Figure imgf000017_0001
将 10.0 g (63.1 mmol) of 2-氯 4-氟苯甲醛， 8.2 g (63.1 mmol) 乙基 乙酰乙酸， 10.3 g (63.1 mmol) 2-脒基-噻唑盐酸盐和 6.2 g (75.7 mmol) 醋酸钠溶解或悬浮于 500 ml乙醇中， 回流下沸腾 16小时。冷却至室 温， 抽气过滤， 水洗残渣去除无机盐。 得产品 12.8 g (53.4%), 熔点: 162-164。 C。 实施例 2
甲基 4-(2-氯 -4氟苯基 ）-2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用甲基乙酰乙酸按照类似实施例 1的方法合成制得。 产率： 55 % (熔点： 152-154。C ) 实施例 3
乙基 4-(2-溴 -4氟苯基）-2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用乙基乙酰乙酸按照类似实施例 1的方法合成制得。 产率： 51.6% (熔点： 163-165° C ) 实施例 4
甲基 4-(2-溴 -4氟苯基 ）-2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用甲基乙酰乙酸按照类似实施例 1的方法合成制得。 产率： 53 % (熔点'. 155-157 °C ) 实施例 5
乙基 4-(2,4-二氯苯基 ）-2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用乙基乙酰乙酸按照类似实施例 1的方法合成制得。 产率： 52.5 % (熔点： 164-166 °C ) 实施例 6
甲基 4-(2,4-二氯苯基）-2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1，4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用甲基乙酰乙酸按照类似实施例 1的方法合成制得。 产率： 51.1 % (熔点: 142-144 0 C ) 实施例 7
乙基 6-溴甲基 4-(2氯 -4-氟苯基）-2- (噻唑 -2-基 )-1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯
Figure imgf000018_0001
将实施例 1 制得的 4.0 g (8.72 mmol) 乙基 4 -(2 氯 -4 氟苯 基）-2- (噻唑 -2-基) -6-甲基 -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯加入到 80ml四氯化 碳中，氩气氛围下加热至 50。 C,得到澄清溶液。在此温度，加入 1.73 g (9.61 mmol) N-溴琥珀酰亚胺， 保持在该温度混合 10分钟。 立刻冷 却， 室温下抽气过滤， 减压浓缩。 根据 HPLC产品纯度高于 90%， 并作为下一步的原料。
R^0.70 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2) 实施例 8
甲基 6-溴甲基 4-(2氯 -4-氟苯基）-2- (噻唑 -2-基) -1，4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用实施例 2制得的化合物按照类似实施例 7的方法合 成制得。
Rf=0.70 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2) 实施例 9
乙基 6-溴甲基 4-(2氯 -4-氟苯基）-2- (噻唑 -2-基) -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用实施例 3制得的化合物按照类似实施例 7的方法合 成制得。
R ).69 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2) 实施例 10
甲基 6-溴甲基 4-(2-溴 -4-氟苯基）-2- (噻唑 -2-基) -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用实施例 4制得的化合物按照类似实施例 7的方法合 成制得。
RfN).69 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2) 实施例 11
乙基 6-溴甲基 4-(2,4-二氯苯基）-2- (噻唑 -2-基) -1，4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用实施例 5制得的化合物按照类似实施例 7的方法合 成制得。
Rf ).68 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2) 实施例 12
甲基 6-溴甲基 4-(2,4-二氯苯基）-2- (噻唑 -2-基) -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯 该化合物使用实施例 6制得的化合物按照类似实施例 7的方法合 成制得。
Rf^0.68 (石油醚 /乙酸乙酯 =8:2)
B. 制备实施例 实施例 13
乙基 4-(2-氯 -4 氟苯基）-2- (噻唑 -2-基) -6-(S-—氧 -吗啉 -4-基-甲基) -1,4- 二氢嘧啶 -5-羧酸酯
Figure imgf000020_0001
将 6.0 g 实施例 3 新制备的乙基 -6-溴甲基- 4-(2-氯 4-氯苯 基）-2- (噻唑 -2-基) -1，4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯加入到 100 ml甲醇中形成 溶液， 同 5倍量的溶解在甲醇和三乙胺的硫代吗啉 -S-—氧化物盐酸 盐， 60。C下搅拌 40分钟。 溶液用水稀释， 乙酸乙酯萃取。
产量: 5.6g
熔点： 217-218。 C.
按照类似实施例 13的方法制备的化合物如表 1所示。
Figure imgf000020_0002
Figure imgf000021_0001
P
2008/154820
Figure imgf000022_0001
Rf 流动相 ：乙酯 实施例 22
乙基 4-(2-氯 -4氟苯基）-2- ½-2_基) _6-(S-二氧 -硫代吗啉 基) - 氢嘧啶 -5-羧酸酯
Figure imgf000023_0001
将 5.0 g 实施例 3 新制备的乙基 -6-溴甲基- 4-(2-氯 4-氯苯 基）-2- (噻唑 -2-基) -1,4-二氢嘧啶 -5-羧酸酯加入到 70 ml甲醇中形成溶 液， 同 5倍量的溶解在甲醇和三乙胺的硫代吗啉 二氧化物盐酸盐, 60。C下搅拌 40分钟。 溶液用水稀释， 乙酸乙酯萃取。
产量: 4.6g
熔点： 202-203° C.
按照实施例 U类似的方法制得的化合物如表 2所示：
表 2
Figure imgf000023_0002
Figure imgf000024_0001
1-
Figure imgf000025_0001
Rf流动相： 乙酯 /石油醚 =1/1
实施例 19、 20、 21、 28、 29、 30在手性柱 （Daicel Chiralpak AS-H, 流动相： 正己烷 /2-丙醇 =70/ 30)从外消旋体上分离。
使用本发明的化合物治疗乙型肝炎病毒产生的 HepG2.2.15 细胞 会导致胞内和 /或胞外病毒 DNA的减少。 工业实用性
实验表明本发明化合物表现出 IC5Q低于 1 nM的有效的抗病毒作 用，因而，可以按照本发明所述的方法或本领域技术人员所知的方法, 将本发明化合物用于病毒引发的疾病尤其是急性和慢性持续的 HBV 病毒感染的治疗。

Claims

权利要求书
1.通式（I )及其同分异构体 (la)所示的化合物以及其对映异构体 及它们的盐：
Figure imgf000027_0001
其中：
R1和 R2独立地为氢、 氟、 氯、 溴或碘， R3是 CrC4烷基， R6 是噻唾 -2-基， X是亚甲基， Z是硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 -S-二 氧化物。
2、 如杈利要求 1所述的化合物以及其对映异构体及它们的盐， 其中 R1和 R2分别独立是氢、 氟、 氯或溴， R3 是 CrCr烷基， R6是 噻唑 -2-基， X是亚甲基， Z是硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 -S-二氧 化物。
3、 如权利要求 1所述的化合物以及其对映异构体及它们的盐， 其中 R1是邻-氯或邻 -溴， R2是对-氢或对 -氟， R3是 CrC2-烷基， R6 是噻唑 -2-基， X是亚甲基， Z是硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 -S-二 氧化物。
4、 如权利要求 1所述的化合物的制备方法：
[A] 首先将通式 (Π)所示苯甲醛与通式（III )所示 β-酮酯反应生 成通式 (IV)所示的苯亚甲基化合物：
Figure imgf000028_0001
其中： R1 、 R2 、 R3、 X和 Z具有杈利要求 1中所述的含义， 且 然后将通式 (IV)所示苯亚甲基化合物与通式 (V)所示的脒或其盐, 或其它化合物反应，
Figure imgf000028_0002
其中 R6 具有杈利要求 1中所述的含义；
[B] 将分子式 (III)所示化合物在一步反应中同醛 (II)和脒 (V)所示 的脒或其盐， 或其它化合物反应，
[C] 当通式 （I) 中 X是亚甲基时， 将通式 （VI)所示化合物和, 和硫代吗啉 -S-氧化物或硫代吗啉 二氧化物：
Figure imgf000028_0003
其中 R2、 R3 和 R6含义如前所述， Y是亲核取代基团， 和硫代 吗啉 氧化物或硫代吗啉 -S-二氧化物 （VII )或其盐反应，
Figure imgf000029_0001
(VII)
[D]将式 （Π)所示醛与分子式 (X)所示化合物及分子式 （V) 所示 的脒或其盐反应，
ΝΗ2 (X)
其中 R3、 X和 Z具有权利要求 1中所述的含义，
[E]将式（I )所示的化合物与氧化剂进行反应， 其中 R R2、 R3、 R6和 X含义如前所述， Z是硫代吗啉
Figure imgf000029_0002
5、 式 (XII)所示化合物及其作为合成化合物 （I)或 （la)的中间体 的用途，
Figure imgf000029_0003
其中 Κλ R2、 R3 和 R6含义如权利要求 1至 3所述。
6、 如权利要求 1至 3之任一所述的用于控制疾病的化合物。
7、 一种药物含有至少一种如权利要求 1至 3之任一所述的化合 物， 适当时， 含有其他活性药物成分。
8、 如杈利要求 1至 3之任一所述的化合物用于制备治疗和预防 病毒性疾病的用途。
9、 如权利要求 1至 3之任一所述的化合物用于制备治疗和预防 乙型肝炎感染的用途。
10、 一种治疗乙型肝炎的方法， 包括给予哺乳动物有效量的杈利 要求 1所述的化合物。
11、 一种治疗由乙型肝炎感染引起的疾病的方法， 包括给予哺乳 动物有效量的权利要求 1所述的化合物。
12、 如权利要求 11所述的方法， 其中所述的疾病是肝炎。
13、 如权利要求 11所述的方法， 其中所述的疾病是肝硬化。
14、 如杈利要求 11所述的方法， 其中所述的疾病是肝细胞癌变。
15、一种药物的制备包含一种或多种权利要求 1所述的化合物及 一种制药学上可接受的载体的。
16、 一种由下列组分组成的组合物：
A)至少一种如杈利要求 1至 3之任一所述的二氢嘧啶，
B)至少一种不同于 A的 HBV抗病毒剂和， 适当情况下，
C)至少一种免疫调节剂。
17、 如杈利要求 16所述的组合物， 其中组分 B是 HBV聚合酶 抑制剂。
18、 如权利要求 16 所述的组合物， 其中组分 B 是拉米夫定 ( lamivudine )。
19、 如杈利要求 16所述的组合物， 其中组分 B选自下述分子式 所示的化合物
Figure imgf000030_0001
其中， R1 和 R2 ， 分别独立是， CrC4 -垸基或者， 分别独立地 为， CrC4 -烷基或者， 与其所在位置上的氮原子一起，形成具有 5-6 个环原子包括碳和 /或氧原子的环，
R3 至 R12,分别独立是，氢、卤素、 Cr -烷基、任意的取代 C C4- 烷氧基、 基、 氰基或三氟甲基，
R13是氢、 CrC4-嫁基， 酰基或芳烷基， X是卤素或任意取 代的 crc4-烷基， 及其盐。
20、 如权利要求 19所述的组合物， 其中化合物具有如下结构。
Figure imgf000031_0001
21、 如杈利要求 16至 20之任一所述的组合物， 其中免疫调节剂 C包括干扰素。
22、 一种组合物， 其由下述物质组成：
A)杈利要求 1至 3所述的二氢嘧啶，
B)拉米夫定（lamivudine )和， 适当时，
C)干扰素。
23、 一种如权利要求 16至 22之任一所述的组合物的制备方法， 其特征在于， 以适合方式组合或混合组分 A, B和， 适当情况下的组 分(3。
24、 如杈利要求 16至 22之任一所述的用于控制疾病的组合物。
25、 一种药物， 其包含至少一种如杈利要求 16至 22 之任一所 述的组合物， 且适当情况下， 其他活性药物成分。
26、如权利要求 16至 22之任一所述的组合物在制备治疗和预防 病毒性疾病的药物中的用途。
27、如权利要求 16至 22之任一所述的组合物在制备治疗和预防 乙型肝炎感染的药物中的用途。
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