CN101973863A

CN101973863A - 一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法

Info

Publication number: CN101973863A
Application number: CN2010102358060A
Authority: CN
Inventors: 刘东锋; 郭琴; 杨成东
Original assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-07-26
Filing date: 2010-07-26
Publication date: 2011-02-16

Abstract

本发明公开了一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其包括下列内容：a.取适量草豆蔻种子，粉碎至20-60目，以微波、温浸或回流提取法，将草豆蔻种子粉以溶剂提取1-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；b.将浸膏用石油醚萃取至萃取液近无色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；c.将剩余浸膏采用柱层析分离，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流出液，此流出液经浓缩后用有机溶剂结晶即可获得高纯度小豆蔻明。本发明工艺路线操作简单、易于放大、所用柱填料和洗脱液均可回收循环利用，是一种低成本、高纯度、循环型提取工艺。所得小豆蔻明为橘黄色晶体，其纯度不低于93％。

Description

一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法

技术领域：

本发明属于中药提取技术领域，特别涉及一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法。

背景技术：

草豆蔻为姜科山姜属植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata的种子。性味辛，温。归脾、胃经。具有燥湿健脾，温胃止呕的功效。用于寒湿内阻，脘腹胀满冷痛，暖气呕逆，不思饮食。其主要化学成分为挥发油和黄酮类。1U姜素(alpinetin)和小豆蔻明(cardamomin)是草豆蔻种子中的主要黄酮成分，小豆蔻明、山姜素具有抗菌、止呕、健脾等药理活性，是草豆蔻的主要有效成分。

小豆蔻明(Cardamonin)，为黄色针晶，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯，乙醚，稀碱溶液，难溶于水，与醋酸铅反应呈黄色沉淀。分子式：C16H14O4；分子量：270.28；分子结构式为：

小豆蔻明可以明显抑制络氨酸酶的活性，同时可以有效抑制黑色素细胞增殖和黑色素的合成，效果明显超过其他成分。小豆蔻明来源于我国传统的中草药，具有较好的安全性和资源优势，用于皮肤美白和抑制皮肤色素沉着性疾病方面会有很大的市场前景(中国专利申请号200910055818.2)。药理学实验发现二者在抑制血小板聚集、抑制肿瘤形成以及抗炎抑菌方面均有较强活性，并且毒性很低，安全性好。

小豆蔻明的提取方法目前主要有乙醇提取法、乙醚提取法、丙酮提取法、氯仿提取法等，采用硅胶柱层析。这些提取分离方法得到的小豆蔻明含量较低，得率低，提取时间长，一般作为化学成分研究实验室少量制备方法。史道华等采用95％乙醇浸渍3天，以8倍量乙醇回流2次，每次2小时，减压回收乙醇得600ml浓缩液，浓缩液制成水混悬液后用乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，萃取液减压回收溶剂，浓缩后得340g浸膏，浸膏溶于适量丙酮，拌样，用相当于固体5倍量的硅胶湿法装柱，石油醚-乙酸乙酯系统洗脱，收集各洗脱部分，与对照品在同一薄层板上点样，分别以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(15∶4∶1)、三氯甲烷-甲醇(20∶1)展开，紫外灯(波长365nm)下观察，合并于对照品相应位置出现暗斑的馏分，常压浓缩得13g混晶。混晶再过硅胶柱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯-丙酮系统，浓缩后得5g晶体。取100g凝胶用甲醇溶胀过夜，装柱，晶体溶于甲醇后取20ml上柱，按每份3ml进行收集，薄层(TLC)分析并用标准品对照，合并相同馏分后浓缩，得橙黄色针状晶体4.2g，该方法虽然比丙酮提取法有显著提高，提取率为0.084％，但提取率仍然很低，提取时间长，有机溶剂萃取萃取率低、损失较大。

发明内容：

发明目的：本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术的小足，提供一种提取率高、周期短、高纯度的小豆蔻明的提取方法。

技术方案：为了实现上述目的，本发明提供的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，具体包括以下步骤：

a.提取步骤：取适量草豆蔻种子，粉碎至20-60目，以冷渗、温浸或回流提取法，将草豆蔻种子粉以溶剂提取1-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

b.有机溶剂萃取步骤：将浸膏用石油醚萃取至萃取液近无色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；

c.分离纯化步骤：将剩余浸膏采用柱层析分离，用水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷或它们的混合溶液洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流出液，此流出液经浓缩后用有机溶剂结晶即可获得高纯度小豆蔻明。

步骤a.所述的提取溶剂为下述溶剂中的一种：A.40-100％甲醇水溶液；B.20-100％乙醇水溶液；C.10-80％丙酮水溶液。

所述的提取步骤中：A.所述的微波提取法为在功率为500-300W条件下，以5-15倍质量比的溶剂，微波辐照5-30分钟；B.所述的温浸法为在35-55℃温度下，以5-15倍质量比的溶剂搅拌浸泡过夜；C.所述的回流提取法是以2-10倍质量比的溶剂浸泡草豆蔻种子粉，加热回流提取1-3小时。

所述的有机溶剂萃取步骤为1-2倍体积比的石油醚萃取，萃取方式为超声萃取或搅拌萃取，于室温静置分层。

步骤c.所述的柱层析填料为大孔树脂或聚酰胺树脂。

所述的洗脱步骤为下述中的一种：(1)2-3BV水→4-6BV甲醇→4-6BV二氯甲烷；(2)2-3BV水→4-5BV乙酸乙酯-甲醇(10∶1-1∶1)；(3)2-3BV水→4-6BV甲醇→4-6BV丙酮；(4)2-3BV水→4-7BV40-95％乙醇→2-4BV乙酸乙酯；(5)2-3BV10％乙醇→4-7BV80％乙醇→3-4BV二氯甲烷。

所述的重结晶溶剂是乙醇、丙酮、甲醇、二氯甲烷或它们的混合溶剂。

本发明提供的小豆蔻明的提取方法和现有技术相比具有以下优点：

(1)本发明提供的方法路线设计合理，方法简单易操作；

(2)本发明提供的方法周期短、提取率高、产品纯度高；

(3)本发明提供的方法中所用溶剂和柱层析填料均可回收循环利用，可降低成本，是一种低成本、循环型的工艺。

具体实施方式：

下面结合具体实施例，对本发明作进一步说明，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1：

取干燥草豆蔻种子1kg，粉碎至60目，以10倍量的80％乙醇在35-55℃温度条件下浸渍过夜，过滤，减压回收乙醇制得浸膏，将浸膏用石油醚萃取至萃取液近石油醚原色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；将剩余浸膏加入预处理好的装有500g的聚酰胺柱层析，先以3BV去离子水洗脱杂质，乙酸乙酯甲醇梯度洗脱，其中乙酸乙酯甲醇体积比由1∶1、2∶1、3∶1、…，如此依次递增至10∶1，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流分，减压浓缩得小豆蔻明浓缩物，再经二氯甲烷-丙酮重结晶，得5.43g纯度为93.73％的小豆蔻明纯品。

实施例2：

取干燥草豆蔻种子1kg，粉碎至40目，以75％丙酮回流提取3次(6倍量，2小时；4倍量，1小时；4倍量，1小时)，过滤，合并滤液，减压回收丙酮制得浸膏，将浸膏用石油醚萃取至萃取液近石油醚原色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；将剩余浸膏加入预处理好的装有1000g的聚酰胺柱层析，先以2BV去离子水洗脱杂质，再依次用6BV甲醇、5BV二氯甲烷洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流分，减压浓缩得小豆蔻明浓缩物，再经95％乙醇重结晶，得5.18g纯度为94.35％的小豆蔻明纯品。

实施例3：

取干燥草豆蔻种子1kg，粉碎至50目，以95％甲醇在330W功率下微波辐照(15倍量，28分钟；8倍量，10分钟；4倍量，5分钟)，过滤，合并滤液，减压回收甲醇制得浸膏，将浸膏用石油醚萃取至萃取液近石油醚原色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；将剩余浸膏加入预处理好的装有700g的AB-8大孔树脂柱层析，先以3BV10％乙醇洗脱杂质，再依次用7BV80％乙醇、4BV二氯甲烷洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流分，减压浓缩得小豆蔻明浓缩物，再经甲醇-丙酮重结晶，得5.26g纯度为94.22％的小豆蔻明纯品。

实施例4：

取干燥草豆蔻种子2kg，粉碎至40目，以90％乙醇回流提取2次(4倍量，2小时；3倍量，1小时)，过滤，合并滤液，减压回收乙醇制得浸膏，将浸膏用石油醚萃取至萃取液近石油醚原色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；将剩余浸膏加入预处理好的装有1000g的聚酰胺柱层析，先以3BV去离子水洗脱杂质，乙醇水梯度洗脱，其中乙醇比例由40％，间隔10％，梯度递加至90％，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流分，减压浓缩得小豆蔻明浓缩物，再经丙酮重结晶，得11.14g纯度为95.58％的小豆蔻明纯品。

实施例5：

取干燥草豆蔻种子2kg，粉碎至60目，以15倍量的甲醇在35-55℃温度条件下浸渍过夜，过滤，减压回收甲醇制得浸膏，将浸膏用石油醚萃取至萃取液近石油醚原色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；将剩余浸膏加入预处理好的装有2000g的NKA-9大孔树脂柱层析，先以3BV去离子水洗脱杂质，再依次用5BV甲醇和6BV丙酮洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流分，减压浓缩得小豆蔻明浓缩物，再经乙醇-丙酮重结晶，得10.87g纯度为94.62％的小豆蔻明纯品。

实施例6：

取干燥草豆蔻种子5kg，粉碎至50目，以丙酮在280W功率下微波辐照(12倍量，25分钟；6倍量，10分钟；4倍量，5分钟)，过滤，合并滤液，减压回收丙酮制得浸膏，将浸膏用石油醚萃取至萃取液近石油醚原色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；将剩余浸膏加入预处理好的装有5000g的XAD-7大孔树脂柱层析，先以3BV去离子水洗脱杂质，再依次用乙醇水梯度洗脱，由乙醇比例35％，间隔15％，梯度递增至95％，最后用4BV乙酸乙酯洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流分，减压浓缩得小豆蔻明浓缩物，再经乙醇-二氯甲烷重结晶，得21.12g纯度为94.39％的小豆蔻明纯品。

Claims

1.一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其特征在于其工艺步骤为：a.取适量草豆蔻种子，粉碎至20-60目，以冷渗、温浸或回流提取法，将草豆蔻种子粉以溶剂提取1-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；b.将浸膏用石油醚萃取至萃取液近无色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；c.将剩余浸膏采用柱层析分离，用水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷或它们的混合溶液洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流出液，此流出液经浓缩后用有机溶剂结晶即可获得高纯度小豆蔻明。

2.按照权利要求1所述的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其特征在于，所述的提取溶剂为下述溶剂中的一种：A.40-100％甲醇水溶液；B.20-100％乙醇水溶液；C.10-80％丙酮水溶液。

3.按照权利要求1所述的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其特征在于，所述的提取步骤中：A.所述的微波提取法为在功率为500-300W条件下，以5-15倍质量比的溶剂，微波辐照5-30分钟；B.所述的温浸法为在35-55℃温度下，以5-15倍质量比的溶剂搅拌浸泡过夜；C.所述的回流提取法是以2-10倍质量比的溶剂浸泡草豆蔻种子粉，加热回流提取1-3小时。

4.按照权利要求1所述的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其特征在于，所述的萃取步骤为1-2倍体积比的石油醚萃取，萃取方式为超声萃取或搅拌萃取，于室温静置分层。

5.按照权利要求1所述的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其特征在于，所述的柱层析填料为大孔树脂或聚酰胺树脂。

6.按照权利要求1所述的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其特征在于，所述的洗脱步骤为下述中的一种：(1)2-3BV水→4-6BV甲醇→4-6BV二氯甲烷；(2)2-3BV水→4-5BV乙酸乙酯-甲醇(10∶1-1∶1)；(3)2-3BV水→4-6BV甲醇→4-6BV丙酮；(4)2-3BV水→4-7BV40-95％乙醇→2-4BV乙酸乙酯；(5)2-3BV10％乙醇→4-7BV80％乙醇→3-4BV二氯甲烷。

7.按照权利要求1所述的一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法，其特征在于，所述的重结晶溶剂是乙醇、丙酮、甲醇、二氯甲烷或它们的混合溶剂。