CN101172131A - 委陵菜属植物总三萜提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种委陵菜属植物总三萜提取物的制备方法，该方法是将委陵菜属植物的提取物的水溶液用大孔树脂吸附处理，用水洗脱后，用水溶性有机溶剂低浓度水溶液洗脱糖和其它杂质，再用水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液进行洗脱，洗脱液浓缩成小体积，加乙醇产生沉淀后，分取上清液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物。委陵菜属植物总三萜提取物主要有效成分是委陵菜酸及其苷类化合物。
Description
技术领域
本发明涉及从蔷薇科委陵菜属植物提取、分离、制备具有生物活性的总三萜提取物的方法，属于中药加工领域。
背景技术
蔷薇科委陵菜属(Potentilla)植物均具有清热利湿，止血，杀虫等功效，可用于治疗肝炎、蛲虫病、功能性子宫出血、外伤出血等。近年来民间用该属多种植物治疗糖尿病。例如委陵菜(Potentilla Chinensis ser.)，多裂委陵菜(P.multifida L.)，翻白草(P.discolor Bunge)等，均代茶饮用治疗糖尿病。研究表明，它们治疗糖尿病的有效成分是其三萜酸及其糖苷的有效部位，包括委陵菜酸(termentic acid)及其葡萄糖苷野蔷薇苷(rosamultin)、euscaphic acid及其苷kaji-ichigoside F-1等。
| R1 | R2 | R3 | 化合物名称 |
| H | OH | H | termentic acid |
| H | OH | Glc | rosamultin |
| OH | H | H | euscaphic acid |
| OH | H | Glc | kaji-ichigoside F-1 |
目前为止，还没有文献报道从委陵菜属植物制备总三萜提取物的方法，特别是从委陵菜属植物制备总三萜含量在50％以上的提取物的制备工艺。本发明提供了从委陵菜属植物中提取总三萜提取物的方法。
发明内容
本发明提供了从委陵菜属植物中提取总三萜提取物的方法，本方法适用工业化生产。
本发明的技术方案包括如下步骤：
1、取委陵菜属植物全草药材，制成常规饮片，用5-10倍30％-70％乙醇提取三次，提取液减压浓缩至小体积并无乙醇气味(不含乙醇)。
2、上述浓缩后的提取液加水稀释后，并且必要时滤去沉淀，上常规处理后的大孔树脂柱，常规水洗脱至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)。大孔树脂为非极性大孔树脂，包括苯乙烯树脂，乙烯基苯乙烯树脂，甲基苯乙烯树脂。例如D101型大孔树脂，AB-8型大孔树。
3、为了提高委陵菜属总三萜的含量，可以再用水溶性有机溶剂低浓度的水溶液洗脱多糖和其它杂质。水溶性有机溶剂低浓度水溶液是20％以下的稀乙醇，或是25％以下的稀甲醇，或是20％以下的稀丙酮，或是15％以下的稀丙醇。
4、用水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至小体积。水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液是20％以上的乙醇水溶液，或是25％以上的甲醇水溶液，或是20％以上的丙酮水溶液，或是15％以上的丙醇溶液。
5、浓缩至小体积的提取液，加水溶性有机溶剂至有机溶剂含量45％-85％进行沉淀，分取上层部分，减压浓缩至干，即得委陵菜属三萜提取物。
水溶性有机溶剂是乙醇，或是丙酮，或是异丙醇，沉淀时，乙醇浓度为60％-85％，或者丙酮浓度为50％-80％，或者异丙醇浓度为45％-75％。
用本工艺所制得的总三萜提取物含有委陵菜酸(termentic acid)及其葡萄糖苷野蔷薇苷(rosamultin)、euscaphic acid及其苷kaji-ichigoside F-1等。其总三萜含量以野蔷薇苷计可以在50％以上。
委陵菜属植物包括委陵菜(P.Chinensis Ser.)，多裂委陵菜(P.multifida L.)，翻白草(P.discolor Bunge)，云南翻白草(P.griffithii Hook.f.var.velutina Card.)，三叶委陵菜(P.freyniana Bornm)，莓叶委陵菜(P.fragarioides L)，叉叶委陵菜(P.bifurca L)，蛇含委陵菜(P.kleiniana Wight et Arn.)，绢毛细蔓委陵菜(P.reptans L var.sericophylla Franch.)，银叶委陵菜(P.leuconota D.Don)，金老梅(P.arbuscula D.Don)，长柔毛委陵菜(P.griffithii Hook.f.var.relulinaCard.)，小叶金老梅(P.parvifolia Fisch.)，亮叶委陵菜(P.fulgens Wall.)等。
委陵菜属植物总三萜提取物总三萜的含量测定方法。
对照品溶液的制备 精密称取野蔷薇苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含野蔷薇苷2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取委陵菜属植物总三萜提取物，加甲醇分别制成每1ml含委陵菜属植物总三萜提取物约4mg的溶液，即得。
分别吸取野蔷薇苷对照品溶液(2mg/ml)40μl和60μl、供试液50μl于具塞刻度试管中，分别加8％香草醛乙醇试液0.5ml、72％硫酸试液5ml，充分摇匀后于60℃水浴中加热30分钟，立即用冰水浴冷却10分钟，取出，摇匀，平行操作两份，以试剂做空白，照分光光度法于560nm波长处分别测定吸收度，通过吸收度可计算出各供试液中所含的委陵菜属植物总三萜提取物总三萜。
具体实施方式
用以下的实施例对本发明作具体说明，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。
[实施例一]取委陵菜属植物委陵菜(P.Chinensis Ser.)500g，用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用5％的稀甲醇洗脱至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用70％的甲醇5000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加酒精750ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物10克以上。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计50％以上。
[实施例二]取委陵菜属植物多裂委陵菜(P.multifida L.)1kg，用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的D2型大孔树脂(3kg，D2型大孔树脂为乙基苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用10％的稀甲醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的甲醇3000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至500ml，在搅拌下加酒精1000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物20克以上。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计50％以上。
[实施例三]取委陵菜属植物翻白草(P.discolor Bunge)2kg，用30％的甲醇16升加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的甲醇16升加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的甲醇16升ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的DM2型大孔树脂(3kg，DM2型大孔树脂为2-甲基苯乙烯型)分离柱，用水洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用13％的稀甲醇洗至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用60％的甲醇10000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至1000ml，在搅拌下加酒精4000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物42.5克。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计52.7％。
[实施例四]取委陵菜属植物云南翻白草(P.griffithii Hook.f.var.velutinaCard.)500g，用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的MD型大孔树脂(3kg，MD型大孔树脂为α-甲基苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用4％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用30％的丙酮25000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加丙酮500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物13克以上。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计50％以上。
[实施例五]取委陵菜属植物三叶委陵菜(P.freyniana Bornm)1kg，用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用7％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，用50％的丙酮50000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至500ml，在搅拌下加丙酮1500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物25.4克。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计52.8％。
[实施例六]取委陵菜属植物莓叶委陵菜(P.fragarioides L)500g，用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用10％的稀丙酮洗脱至洗脱液接近无色，用70％的丙酮3000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加丙酮1000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物11.6克。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计50％以上。
[实施例七]取委陵菜属植物叉叶委陵菜(P.bifurca L)500g，用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用4％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用20％的乙醇15000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇750ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物7.4克。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计50.0％。
[实施例八]取委陵菜属植物蛇含委陵菜(P.kleiniana Wight et Arn.)500g，用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上上已常规处理好的D101型大孔树脂(2kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用7％的异丙醇洗至洗脱液近无色，用40％的异丙醇30000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物12克以上。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计50％以上。
[实施例九]取委陵菜属植物绢毛细蔓委陵菜(P.reptans L var.sericophyllaFranch.)500g，用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已常规处理好的D101型大孔树脂(1.5kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇40000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇1000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物12.5克。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计52.7％。
[实施例十]取委陵菜属植物银叶委陵菜(P.leuconota D.Don)500g，用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常规处理好的D101型大孔树脂(1.5kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用4％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇5000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至250ml，在搅拌下加异丙醇250ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物13.3克。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计51.1％。
[实施例十一]取委陵菜属植物金老梅(P.arbuscula D.Don)1kg，用水6000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用7％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇4000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至500ml，在搅拌下加丙酮500ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物20克以上。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷，含量以野蔷薇苷计50％以上。
[实施例十二]取委陵菜属植物长柔毛委陵菜(P.griffithii Hook.f.var.relulina Card.)2kg，用水12升加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水8升加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水8升加热煎煮小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇4000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物50克以上。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷。
[实施例十三]取委陵菜属植物小叶金老梅(P.parvifolia Fisch.)500g，用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用40％的乙醇4000ml洗脱。40％的乙醇洗脱液真空浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物10克。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷。
[实施例十四]取委陵菜属植物亮叶委陵菜(P.fulgens Wall.)10kg，用水60升加热煎煮30小时，倾取提取液，药渣再用水50升加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水50升加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀，上已常规处理好的D101型大孔树脂(3kg，D101型大孔树脂为苯乙烯型)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用5％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇50000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至5000ml，在搅拌下加酒精15000ml，静置，分取上层液，减压浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物350克以上。化学成分主要含有委陵菜酸及其葡萄糖苷野蔷薇苷。
Claims (10)
1.一种委陵菜属植物总三萜提取物的制备方法，其特征是委陵菜属植物提取液通过大孔树脂吸附分离，制备委陵菜属植物总三萜提取物。
2.按照权利要求1中所述的方法，其特征是委陵菜属植物提取液水溶液通过大孔树脂吸附后，再用水洗脱，用含有机溶剂的水溶液洗脱，洗脱液浓缩得委陵菜属植物总三萜提取物。
3.按照权利要求2中所述的方法，其特征是委陵菜属植物提取水溶液通过大孔树脂吸附后，用水洗脱，用含有机溶剂浓度较低的水溶液洗脱，再用有机溶剂浓度较高的水溶液洗脱，洗脱液浓缩后得委陵菜属植物总三萜提取物。
4.按照权利要求3中所述的方法，其特征是委陵菜属植物提取水溶液通过大孔树脂吸附后，用水洗脱，用含有机溶剂浓度较低的水溶液洗脱，再用有机溶剂浓度较高的水溶液洗脱，收集有机溶剂浓度较高的洗脱液，浓缩成小体积后，加入有机溶剂进行沉淀，分取上层清液，浓缩至干，即得委陵菜属植物总三萜提取物。
5.按照权利要求3，或4中所述的方法，其中含有机溶剂浓度较低的水溶液是低于10％的乙醇水溶液，或者低于15％的甲醇水溶液，或者低于10％的丙酮，或者低于8％的丙醇水溶液；含有机溶剂浓度较高的水溶液是高于10％的乙醇水溶液，或者高于15％的甲醇水溶液，或者高于10％的丙酮水溶液，或者高于8％的丙醇溶液。
6.按照权利要求4中所述的方法，其特征是的用于沉淀的有机溶剂的浓度是乙醇浓度为60％-85％，或者是丙酮浓度为50％-80％，或者是异丙醇浓度为45％-75％。
7.按照权利要求1，或2，或3，或4中所述的方法，其中委陵菜属植物是委陵菜，或者是多裂委陵菜，或者是翻白草，或者是云南翻白草，或者是三叶委陵菜，或者是莓叶委陵菜，或者是莓叶委陵菜，或者是叉叶委陵菜，或者是蛇含委陵菜，或者是绢毛细蔓委陵菜，或者是银叶委陵菜，或者是金老梅，或者是长柔毛委陵菜，或者是小叶金老梅，或者是亮叶委陵菜。
8.按照权利要求1，或2，或3，或4中所述的方法，其中大孔树脂是非极性大孔树脂。
9.按照权利要求1，或2，或3，或4中所述的方法，其中大孔树脂是苯乙烯树脂，或者是乙烯苯乙烯树脂，或者是甲基苯乙烯树脂。
10.按照权利要求1，或2，或3，或4中所述的方法，其中委陵菜属植物总三萜提取物含有委陵菜酸和/或野蔷薇苷。
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