CN101971798A - 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 - Google Patents
人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101971798A CN101971798A CN2010105287211A CN201010528721A CN101971798A CN 101971798 A CN101971798 A CN 101971798A CN 2010105287211 A CN2010105287211 A CN 2010105287211A CN 201010528721 A CN201010528721 A CN 201010528721A CN 101971798 A CN101971798 A CN 101971798A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protection liquid
- freezing protection
- umbilical cord
- liquid
- frozen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了人脐带华通氏胶组织块冻存保护液,1L冻存保护液包括渗透性冷冻保护剂1-1.4mol、非渗透性冷冻保护剂0.1-0.5mol,余量为基础液。本发明的冻存保护液同时含有渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂,且渗透性冷冻保护剂的浓度较低,既能达到良好的冻存效果,又对细胞的毒性比较小,同时冻存保护液中含有基础液,既可以为脐带华通氏胶组织块提供营养,又降低了冷冻保护剂对华通氏胶组织块内细胞的毒性,通过本冻存保护液冻存的脐带华通氏胶组织块可以制备出高质量的脐带间充质干细胞,细胞损伤少,冻存保护液残留低,毒副作用小,对人体无伤害。
Description
技术领域
本发明涉及人脐带华通氏胶组织块的冻存保护液。
背景技术
人脐带华通氏胶(Wharton’s Jelly)内的细胞具有能自我更新和多向分化、增殖能力强等干细胞的特征,我们称之为脐带间充质干细胞(huMSCs)。间充质干细胞是干细胞家族的重要成员,是一种低免疫原性的干细胞,具有支持造血和促进干细胞植入、调控免疫等特点,是用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复的理想种子细胞。脐带间充质干细胞因其来源广泛,易获得,并具有间充质干细胞的所有特性,日益受到人们的关注,越来越多的人开始储存脐带间充质干细胞以为将来不时之需。冻存保护液的配方及冻存的操作方案直接影响储存的脐带间充质干细胞的质量,对将来的细胞移植效果至关重要。细胞或者组织的冷冻保存有几个关键性的环节:冷冻保护剂的选择和组合,各种冷冻保护剂的配比,冻存的步骤,冻存温度及复苏温度。
目前,脐带间充质干细胞的冻存方法多采用传统的细胞冷冻方法,细胞冷冻主要采用含有渗透性冷冻保护剂的冻存保护液,作用是降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻冷冻过程中细胞的损伤。通常情况下,人们选择单一的渗透性冷冻保护剂二甲基亚砜冻存干细胞,冻存后复苏会有冻存保护液的残留,临床用含二甲基亚砜的冻存保护液残留的干细胞,有较高的毒副作用,易造成恶心、呕吐、腹痛等症状。
发明内容
本发明的目的是采用由基础液、渗透性冷冻保护剂、非渗透性冷冻保护剂组成的直接对人脐带华通氏胶组织块进行冷冻的冻存保护液,冻存效果好,细胞损伤少,冻存保护液残留低,毒副作用小,对人体无伤害。
为了达到上述目的,本发明的脐带华通氏胶组织块冻存保护液,1L冻存保护液包括渗透性冷冻保护剂1-1.4mol、非渗透性冷冻保护剂0.1-0.5mol,余量为基础液,其中
所述基础液包括培养液DMEM/F12、磷酸盐缓冲液PBS、生理盐水、含10%胎牛血清的培养液DMEM/F12、自体脐血血清、Invitrogen公司MSC SFM培养液、Stem Cell公司-XF Medium培养液中的一种或几种的组合;
所述渗透性冷冻保护剂包括二甲基亚砜、乙二醇、丙二醇、甘油中的一种或几种的组合;
所述非渗透性冷冻保护剂包括蔗糖、甘露醇、海藻糖中的一种或几种的组合。
与现有技术相比,本发明的冻存保护液冻存的是包含间充质干细胞的脐带华通氏胶组织块,冻存保护液配方既不是冻存干细胞的含单一冷冻保护剂的冻存保护液,也不是冻存组织块含高浓度冷冻保护剂的玻璃化冻存保护液,而是采用由较低浓度的渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂、基础液组成的冻存保护液。该冻存保护液中采用了包含培养液DMEM/F12、含10%胎牛血清的培养液DMEM/F12、自体脐血血清、磷酸盐缓冲液PBS等的基础液,能够保证细胞内外的渗透平衡,尤其是采用了源于同一个体的自体脐血血清作为基础液为组织块提供养分,自体脐血血清简单易得,临床容易实现,没有外源成分的加入,最大限度保证了冻存过程中组织块内细胞的环境与体内环境一致,冻存效果好;采用了包含二甲基亚砜、乙二醇、丙二醇、甘油等的渗透性冷冻保护剂,可以透过细胞膜渗透到细胞内,减少冷冻时细胞内冰晶的形成,且浓度都处在较低的水平上,最大限度的降低了对细胞的毒性;采用了包含蔗糖、甘露醇、海藻糖等的非渗透性冷冻保护剂,分子量大,很少的一部分就能大大增加溶液的粘度,缓解细胞冻存时细胞膜内外的渗透压,使细胞脱水,减少冷冻时细胞的冰晶形成,且对组织块内的干细胞无毒性。
本发明采用对人脐带华通氏胶组织块直接冻存的保护液,同时考虑了在组织块复苏后降低冻存保护液残留对细胞的毒性,保证组织块冻存复苏后培养出的细胞的质量,能为临床上提供较高质量的脐带间充质干细胞。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明详细说明,但本发明的保护范围不局限于实施例列出的范围。
实例一:
取400ml的磷酸盐缓冲液PBS,加入海藻糖0.5mol充分混匀后以0.22um滤膜的滤器过滤后4℃预冷,冰浴上依次加入4℃预冷的自体脐血血清100ml、4℃预冷的乙二醇1mol、4℃预冷的二甲基亚砜0.4mol,补加磷酸盐缓冲液PBS至1L即为人脐带华通氏胶组织块冻存保护液。
实例二:
取400ml的培养液DMEM/F12,加入海藻糖0.1mol充分混匀后以0.22um滤膜的滤器过滤后4℃预冷,冰浴上依次加入4℃预冷的自体脐血血清200ml、4℃预冷的二甲基亚砜0.1mol、4℃预冷的乙二醇1mol,补加培养液DMEM/F12至1L即为人脐带华通氏胶组织块冻存保护液。
实例三:
取500ml的磷酸盐缓冲液PBS,加入甘露醇0.2mol充分混匀后以0.22um滤膜的滤器过滤后4℃预冷,冰浴上加入4℃预冷的二甲基亚砜1mol,补加磷酸盐缓冲液PBS至1L即为人脐带华通氏胶组织块冻存保护液。
实例四:
取500ml的含10%胎牛血清的培养液DMEM/F12,加入蔗糖0.2mol充分混匀后以0.22um滤膜的滤器过滤后4℃预冷,冰浴上依次加入4℃预冷的乙二醇1.1mol、4℃预冷的丙二醇0.2mol,补加含10%胎牛血清的培养液DMEM/F12至1L即为人脐带华通氏胶组织块冻存保护液。
实例五:
取400ml的份培养液DMEM/F12,加入海藻糖0.2mol充分混匀后以0.22um滤膜的滤器过滤后4℃预冷,冰浴上依次加入4℃预冷的自体脐血血清100ml、4℃预冷的二甲基亚砜1.1mol、4℃预冷的甘油O.2mol,补加培养液DMEM/F12至1L即为人脐带华通氏胶组织块冻存保护液。
实例六:
取400ml的Invitrogen公司的MSC SFM培养液,加入甘露醇0.3mol充分混匀后以0.22um滤膜的滤器过滤后4℃预冷,冰浴上依次加入4℃预冷的生理盐水100ml、4℃预冷的乙二醇0.8mol、4℃预冷的二甲基亚砜0.3mol,补加Invitrogen公司的MSC SFM培养液至1L即为人脐带华通氏胶组织块冻存保护液。
实例七:
取200ml的Invitrogen公司MSC SFM培养液,加入400mlStem Cell公司-XF Medium培养液,加入海藻糖0.3mol充分混匀后以0.22um滤膜的滤器过滤后4℃预冷,冰浴上依次加入4℃预冷的乙二醇1mol、4℃预冷的丙二醇0.4mol,补加Invitrogen公司MSC SFM培养液至1L即为人脐带华通氏胶组织块冻存保护液。
经上述方案配制的冻存保护液冻存的人脐带华通氏胶组织块复苏后,细胞生长状况良好,细胞生长曲线无异常,成脂、成骨的诱导分化能力未丧失,表面标记与新鲜的组织块培养出的细胞表面标记无差异。
Claims (1)
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2010105287211A CN101971798A (zh) | 2010-11-03 | 2010-11-03 | 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 |
CN2011103434259A CN102428911A (zh) | 2010-11-03 | 2011-11-03 | 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2010105287211A CN101971798A (zh) | 2010-11-03 | 2010-11-03 | 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101971798A true CN101971798A (zh) | 2011-02-16 |
Family
ID=43571734
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2010105287211A Pending CN101971798A (zh) | 2010-11-03 | 2010-11-03 | 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 |
CN2011103434259A Pending CN102428911A (zh) | 2010-11-03 | 2011-11-03 | 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2011103434259A Pending CN102428911A (zh) | 2010-11-03 | 2011-11-03 | 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (2) | CN101971798A (zh) |
Cited By (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102511471A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-06-27 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种间充质干细胞冻存液及其制备方法 |
CN102763639A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-11-07 | 童亚林 | 一种复合抗冻液及其应用和使用该抗冻液保存人羊膜的方法 |
CN104145943A (zh) * | 2014-07-21 | 2014-11-19 | 重庆市红汇脐血干细胞中心有限公司 | 一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液及其制备与应用 |
CN104396940A (zh) * | 2014-10-11 | 2015-03-11 | 张炳强 | 一种组织样本保存液及其制备方法 |
CN104472473A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-04-01 | 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 | 脐带组织块冻存方法 |
CN106417260A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-02-22 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种脐带组织冻存液 |
CN106508892A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-03-22 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种脐带组织冻存液及冻存方法 |
CN107996558A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-05-08 | 湖南丰晖生物科技有限公司 | 细胞冻存液及其应用 |
CN108782544A (zh) * | 2018-06-28 | 2018-11-13 | 吉林省拓华生物科技有限公司 | 一种大量冻存间充质干细胞的冻存液及方法 |
CN109122665A (zh) * | 2018-09-12 | 2019-01-04 | 银丰生物工程集团有限公司 | 以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用 |
WO2020033959A1 (en) * | 2018-08-10 | 2020-02-13 | Predictive Technology Group, Inc. | Cryopreservation medium for umbilical cord mscs derived from wharton's jelly |
CN111011363A (zh) * | 2019-12-16 | 2020-04-17 | 广东唯泰生物科技有限公司 | 间充质干细胞冻存液、冻存方法、保存试剂盒和复苏方法 |
CN112438252A (zh) * | 2020-11-20 | 2021-03-05 | 上海欧易生物医学科技有限公司 | 一种适用于小鼠心脏组织单细胞测序的组织冷冻及解冻方法 |
CN114467913A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-05-13 | 武汉赛尔朗灵科技有限公司 | 动物组织、临床组织及活检样本的长期冻存及复苏方法 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105961374A (zh) * | 2016-07-04 | 2016-09-28 | 深圳市合康生物科技股份有限公司 | 细胞冻存液 |
CN106857498B (zh) * | 2016-12-27 | 2021-05-14 | 科兴(大连)疫苗技术有限公司 | 一种不含二甲基亚砜的细胞冻存保护液及其应用 |
WO2023164799A1 (zh) * | 2022-03-01 | 2023-09-07 | 傅毓秀 | 可促进骨质新生的瓦顿氏凝胶制品 |
CN114982744B (zh) * | 2022-07-07 | 2023-03-24 | 广州沙艾生物科技有限公司 | 一种脐带干细胞储存液及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101210232B (zh) * | 2006-12-28 | 2012-07-18 | 天津昂赛细胞基因工程有限公司 | 一种间充质干细胞保存液 |
-
2010
- 2010-11-03 CN CN2010105287211A patent/CN101971798A/zh active Pending
-
2011
- 2011-11-03 CN CN2011103434259A patent/CN102428911A/zh active Pending
Cited By (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102511471A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-06-27 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种间充质干细胞冻存液及其制备方法 |
CN102511471B (zh) * | 2011-12-15 | 2013-08-28 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种间充质干细胞冻存液及其制备方法 |
CN102763639A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-11-07 | 童亚林 | 一种复合抗冻液及其应用和使用该抗冻液保存人羊膜的方法 |
CN104145943A (zh) * | 2014-07-21 | 2014-11-19 | 重庆市红汇脐血干细胞中心有限公司 | 一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液及其制备与应用 |
CN104145943B (zh) * | 2014-07-21 | 2016-02-17 | 重庆市红汇脐血干细胞中心有限公司 | 一种人脐带华通氏胶组织的冻存保护液及其制备与应用 |
CN104396940A (zh) * | 2014-10-11 | 2015-03-11 | 张炳强 | 一种组织样本保存液及其制备方法 |
CN104396940B (zh) * | 2014-10-11 | 2016-07-13 | 张炳强 | 一种组织样本保存液及其制备方法 |
CN104472473A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-04-01 | 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 | 脐带组织块冻存方法 |
CN104472473B (zh) * | 2014-11-20 | 2016-03-16 | 黑龙江天晴干细胞股份有限公司 | 脐带组织块冻存方法 |
CN106508892A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-03-22 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种脐带组织冻存液及冻存方法 |
CN106417260A (zh) * | 2016-11-30 | 2017-02-22 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种脐带组织冻存液 |
CN107996558A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-05-08 | 湖南丰晖生物科技有限公司 | 细胞冻存液及其应用 |
CN108782544A (zh) * | 2018-06-28 | 2018-11-13 | 吉林省拓华生物科技有限公司 | 一种大量冻存间充质干细胞的冻存液及方法 |
CN108782544B (zh) * | 2018-06-28 | 2021-01-01 | 吉林省拓华生物科技有限公司 | 一种大量冻存间充质干细胞的冻存液及方法 |
WO2020033959A1 (en) * | 2018-08-10 | 2020-02-13 | Predictive Technology Group, Inc. | Cryopreservation medium for umbilical cord mscs derived from wharton's jelly |
CN109122665A (zh) * | 2018-09-12 | 2019-01-04 | 银丰生物工程集团有限公司 | 以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用 |
CN111011363A (zh) * | 2019-12-16 | 2020-04-17 | 广东唯泰生物科技有限公司 | 间充质干细胞冻存液、冻存方法、保存试剂盒和复苏方法 |
CN111011363B (zh) * | 2019-12-16 | 2021-12-17 | 广东唯泰生物科技有限公司 | 间充质干细胞冻存液、冻存方法、保存试剂盒和复苏方法 |
CN112438252A (zh) * | 2020-11-20 | 2021-03-05 | 上海欧易生物医学科技有限公司 | 一种适用于小鼠心脏组织单细胞测序的组织冷冻及解冻方法 |
CN112438252B (zh) * | 2020-11-20 | 2021-06-08 | 上海欧易生物医学科技有限公司 | 一种适用于小鼠心脏组织单细胞测序的组织冷冻及解冻方法 |
CN114467913A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-05-13 | 武汉赛尔朗灵科技有限公司 | 动物组织、临床组织及活检样本的长期冻存及复苏方法 |
CN114467913B (zh) * | 2021-11-22 | 2022-11-11 | 武汉赛尔朗灵科技有限公司 | 动物肿瘤组织、临床肿瘤组织及活检肿瘤组织样本的长期冻存及复苏方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102428911A (zh) | 2012-05-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101971798A (zh) | 人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 | |
CN107027743B (zh) | 细胞冻存液及细胞冻存方法 | |
CN108207930B (zh) | 一种鸡尾酒式冷冻保护剂及其应用 | |
CN101971799A (zh) | 一种人脐带华通氏胶组织块冻存保护液 | |
Weng et al. | Dimethyl sulfoxide-free cryopreservation for cell therapy: A review | |
CN101720753B (zh) | 组织工程产品的低温保存液及其使用方法 | |
CN108094404B (zh) | 一种改进的间充质干细胞保护液及其用途 | |
CN102648708B (zh) | 一种用于胚胎或细胞的冷冻液及其用途 | |
CN107156108A (zh) | 一种外周血干细胞保存液及制备方法 | |
CN109329271A (zh) | 一种临床用间充质干细胞冷冻保存液及其制备方法 | |
CN102640745B (zh) | 一种胚性材料的超低温冷冻保存复苏方法 | |
CN104663649A (zh) | 人类卵母细胞冷冻保护剂 | |
CN108184817A (zh) | 一种脐带血造血干细胞冻存液及冻存方法 | |
CN110432259A (zh) | 一种冷冻保护液和含有其的细胞冻存液及其在细胞冻存中的应用 | |
JP4931035B2 (ja) | 細胞・組織の凍結障害防止液及び凍結保存法 | |
CN104222071B (zh) | 卵巢组织深低温保存方法 | |
CN109864064A (zh) | 一种免疫细胞冻存液及免疫细胞冻存方法 | |
CN110622956A (zh) | 一种脐带间充质干细胞保存液 | |
CN106942200A (zh) | 一种冻存保护液及其应用 | |
CN110495447A (zh) | 一种免疫细胞玻璃化冻存保护液及冻存免疫细胞的方法 | |
CN111789108A (zh) | 一种冷冻保存液及其制备方法 | |
CN107156111A (zh) | 一种造血干细胞细胞冻存剂 | |
CN111418580A (zh) | 干细胞冻存液及冻存方法 | |
CN105284788B (zh) | 一种角膜中期保存液及其制备方法 | |
CN105211052B (zh) | 一种培养后的nkt细胞的冻存液及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20110216 |