JP4931035B2 - 細胞・組織の凍結障害防止液及び凍結保存法 - Google Patents
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Description
ブタの膵臓から膵島を分離し、分離された膵島細胞を以下の4群に分けた。EGCgとしては、純度約98重量%のもの(Roche社)を用いた。
グループ1:EGCg無添加培地で培養(従来法)
グループ2:EGCg 30μg/ml添加培地で培養
グループ3:EGCg 60μg/ml添加培地で培養
グループ4:EGCg 120μg/ml添加培地で培養
各群とも培地は、10%ウシ胎児血清含有CMRL細胞培養用培地に、凍結防御剤としてDMSOを10%となるように添加したものを使用し、その後プログラムフリーザーを用いて凍結した。最終的に液体窒素中(-196℃)に保存し、4週間後に急速解凍した。そして、解凍直後、及び、解凍後に48時間培養した後の膵島細胞の生存率(生存率=凍結解凍後の膵島数 / 凍結前の膵島数)を比較検討した。また、解凍直後のバイアビリティー及び膵島機能を比較検討した。
解凍直後の膵島細胞の生存率は、従来法(グループ1)では約50%と低かったが、EGCg添加群(グループ2〜4)では60〜80%と著明な改善が認められた(図1)。また48時間培養後でも生存率は従来法(グループ1)では約25%と低いのに対し、EGCg添加群(グループ2〜4)では45〜70%と有意に高かった(図1)。バイアビリティーにおいても従来法(グループ1)では約70%だったのに対し、EGCg添加群(グループ2〜4)では80〜85%と高かった(図2)。解凍直後の膵島機能をグルコース負荷試験によるインスリン分泌反応(Static Incubation)で検討したところ、EGCg添加群では無添加群に比べ良好な傾向にあった(図3)。
Claims (3)
- 移植用の膵島を凍結保存前に浸漬して培養を行うとともに、該膵島が凍結保存時または解凍時に障害されるのを防止するための凍結障害防止液であって、細胞・組織培養用培地に、純度90重量%以上のエピガロカテキンガレートを添加し、30〜120ppmのエピガロカテキンガレート溶液としたものであることを特徴とする移植用膵島の凍結障害防止液。
- 純度98重量%以上のエピガロカテキンガレートを添加したものである請求項1記載の凍結障害防止液。
- 請求項1〜2のいずれかに記載の凍結障害防止液中に、凍結保存前に浸漬して培養を行ったことを特徴とする凍結保存中または解凍後の移植用の膵島。
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