CN101947204A - 新藤黄酸固体脂质纳米粒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及新藤黄酸固体脂质纳米粒及其制备方法，所述新藤黄酸固体脂质纳米粒，包括治疗有效量的新藤黄酸，可药用的磷脂，表面活性剂和脂质材料。本发明将新藤黄酸制成固体脂质纳米粒，提高了新藤黄酸的溶解度、降低了刺激性、提高了生物利用度、延长药物在体内的作用时间以及在机体局部聚集发挥靶向作用，更好地发挥抗癌治疗作用。

Description

新藤黄酸固体脂质纳米粒及其制备方法

技术领域：

本发明属于药品制剂领域，具体涉及一种中药活性成分的固体脂质纳米粒及其制备方法。

背景技术：

新藤黄酸(Neo-gambogic)是从中药藤黄中分离出的一个具有较高抗肿瘤活性的化合物，对白血病L₁₂₁₀、S180腹水癌、Lewis肺癌、La795肺腺癌等实体肿瘤均有较好的抑制作用。其中对肺癌的效果最为显著，4-16mg/kg新藤黄酸静脉注射给药后，可显著抑制裸鼠移植肺癌A549细胞的增殖。但由于新藤黄酸在水溶液中溶解度低，注射后对血管的刺激性大，体内半衰期短，限制了它在临床上的应用。因此，需要用到现代制剂技术有效地提高新藤黄酸的溶解度、降低刺激性、延长药物在体内的作用时间以及局部的聚集量，更好的发挥抗癌作用。

新藤黄酸分子式：C₃₈H₄₆O₉，分子量为648.31，结构式为：

固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)是一种新型的药物载体，通过将药物包裹或内嵌于类脂核中，制成粒径为0-1000nm的固体胶粒给药系统。它具有良好的生物相容性以及广泛的药物适应性，具有靶向、控释、提高药物溶解度、减少药物刺激性、毒性小等优点，是一种极有发展前景的新型给药系统。

发明内容：

本发明的目的在于研制和提供一种性质稳定并且可以采用工业化生产的新藤黄酸固体脂质纳米粒及其固体制剂，本发明将新藤黄酸包裹于类脂核中，增加了新藤黄酸的溶解度，减小了它的刺激性，可达到靶向、控释等效果，并且物理化学性质稳定。

本发明的目的是提供新藤黄酸固体脂质纳米粒及其固体制剂的制备方法。本发明的制备方法灵活多样，均可以采用常规的和工艺设备，可进行工业化大生产，并且可以二次加工成注射剂或口服制剂。

本发明所述的固体脂质纳米粒，含有下列单位为重量份的成分：

新藤黄酸    1～20份

磷脂        3～100份

脂质材料    5～100份

表面活性剂  10～200份。

优选的，本发明所述的固体脂质纳米粒，含有下列单位为重量份的成分：

新藤黄酸    1～10份

磷脂        10～70份

脂质材料    10～80份

表面活性剂  20～120份

进一步优选的，本发明所述的固体脂质纳米粒，含有下列单位为重量份的成分：

新藤黄酸    1～5份

磷脂        30～50份

脂质材料    40～50份

表面活性剂  30～80份

这里所说的磷脂选自：大豆卵磷脂、大豆脑磷脂、大豆肌醇磷脂、二月桂酰磷脂酰胆碱、二亚酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱或二棕榈酰磷脂酰乙醇胺。

本发明所说的脂质材料选自：甘油脂类、脂肪酸类、类固醇类、蜡脂类。其中甘油脂类，包含单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯、双棕榈酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、单二十一酸甘油酯、双二十一酸甘油酯、三二十一酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯及其混合物；脂肪酸类，包括硬脂酸、棕榈酸、二十二碳烷酸、癸酸及其混合物；类固醇类，包括胆固醇；蜡脂类，包括鲸蜡醇棕榈酸酯、鲸蜡醇十六酸酯、微晶石蜡及其混合物。

本发明所说的表明活性剂选自：磷脂类、胆酸盐类、脱氧胆酸盐类、短链醇类、泊洛沙姆、聚山梨酯类。其中磷脂类包括卵磷脂、卵黄磷脂及其混合物；胆酸盐类包括胆酸盐、甘胆酸钠、牛黄胆酸钠及其混合物；脱氧胆酸盐类包括自脱氧胆酸钠、去氧牛黄胆酸钠及其混合物；短链醇类包括丁醇、丁酸、甘油、异丙醇；泊洛沙姆包括泊洛沙姆108、182、188、407、908；聚山梨醇酯优选吐温-80、85、65、60、40。

优选的如10mg新藤黄酸和100mg单硬脂酸，200mg卵磷脂，300mg泊洛沙姆-188得到脂质纳米粒。

本发明所述的新藤黄酸固体脂质纳米粒，可以通过以下方法进行制备：

方法一：乳化-沉淀法制备，称取一定量新藤黄酸、载体材料溶于一定量与水不混溶的有机溶剂(如正己烷、氯仿等)中，加入到含有表面活性剂的水相中进行乳化，然后蒸去有机溶剂，即可得到固体脂质纳米粒分散体系；

方法二：微乳法制备，将载体熔融，加入新藤黄酸、表面活性剂和温水制成外观透明、热力学稳定的O/W型微乳，然后在搅拌条件下将微乳分散于冷水中即可制成固体脂质纳米粒分散体系；

方法三：热高压乳匀法制备，即将载体材料熔化，将新藤黄酸溶解于或均匀分散于熔融液中，然后将该熔融液在高速搅拌的条件下分散于温度相近的表面活性剂溶液形成粗分散体，粗分散体在100-2000Pa下经高压乳匀2次冷却结晶后，即得；

方法四：冷高压乳匀法制备，即将载体材料与新藤黄酸共融并充分混合后，在液氮等介质中迅速冷却，经机械搅拌研磨，得到的固体脂质纳米粒微粒在高速搅拌下混入冷的表面活性剂溶液中得到初乳，再于室温下以更高压力通过高压乳匀机5个循环以上就得到固体脂质纳米粒分散体系；

方法五：超声法制备，称取一定量的新藤黄酸，载体材料于一定量的有机溶剂中，在旋转蒸发仪上减压蒸干成膜，加入一定量含表面活性剂的水溶液，超声即得固体脂质纳米粒分散体系。

上述制备方法中所提到的有机溶剂可以选自氯仿、乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷。

为延长新藤黄酸固体脂质纳米粒的血液循环时间，提高它的生物利用度，降低毒副作用，可以将新藤黄酸固体脂质纳米粒修饰成隐形固体脂质纳米粒A，隐形材料可以选用非离子表面活性剂聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆(Poloxamer)、聚山梨酯80(Tween80)。

为延长新藤黄酸固体脂质纳米粒的存放时间，运输便捷，可将新藤黄酸固体脂质纳米粒通过喷雾干燥或冷冻干燥制成固体成品，其中需要加入赋形剂，赋形剂的选择可是乳糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、甘露糖。

本发明的新藤黄酸固体脂质纳米粒能够以口服或注射方式给药，其中注射方式可以是静脉注射、静脉滴注、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射。

本发明制得的新藤黄酸固体脂质纳米粒及其固体产品具有以下优点：

1、该固体脂质纳米粒毒性低，保证了用药安全，提高了肌体的耐受性；

2、该固体脂质纳米粒将新藤黄酸包裹在类脂核中，增加了药物的水溶性和稳定性，可实现靶向、控释效果，提高了药物的生物利用度。

3、该固体脂质纳米粒可经表面修饰，提高药物的治疗效果。

4、该固体脂质纳米粒可喷雾干燥或冷冻干燥制成固体成品，延长存放时间、运输便捷，延长了产品的有效期，提高了产品的质量。

5、该固体脂质纳米粒制备工艺成熟。产品质量稳定，偏于工业化生产。

对本发明的新藤黄酸固体脂质纳米粒的粒径和包封率等指标的评价实验如下：

1、摄新藤黄酸固体脂质纳米粒的透射电镜(TEM)照片

将本发明新藤黄酸纳米粒混悬液适当稀释，滴加在覆盖碳膜的铜网上，用2.0％磷钨酸钠负染色液染色，用JEM-2010透射电子显微镜拍摄透射电镜照片。

2、测定新藤黄酸固体脂质纳米粒的粒径大小及分布

将纳米粒混悬液适当稀释，用Zetasizer 3000HS激光粒度分析测定仪测定纳米粒的大小及其分布范围。

3、测定新藤黄酸固体脂质纳米粒的包封率

以Sephadex葡萄糖凝胶柱层析方法分离新藤黄酸固体脂质纳米粒和游离药物，测定其包封率。吸取1ml纳米粒混悬液上柱，以蒸馏水为洗脱介质进行洗脱。收集带有乳光部分的洗脱液，定量吸取该部分洗脱液，加无水乙醇溶解纳米粒；另取1ml纳米粒混悬液，加无水乙醇溶解。用HPLC分别测定两样品中的新藤黄酸的含量，根据包封率公式计算包封率：

EN(％)＝(C₀-C)/C₀×100％

其中：EN代表包封率；C₀和C分别代表上清液中纳米粒混悬液中的总药量和未被包裹的游离药物含量。

所测的新藤黄酸固体脂质纳米粒的粒径小于1000nm，优选粒径小500nm，包封率大于80％。

新藤黄酸在水中溶解度小，本发明将其制成独体脂质纳米粒。不仅增加的药物的溶解度，提高了药物的生物利用度，而且可以减少新藤黄酸的血管刺激性，增加患者的耐受性，并且其到了控释、靶向的效果，提高药物的治疗指数，减少用药剂量和毒副作用。

本发明制得的固体脂质纳米粒对药物有保护作用，较好地解决了脂质体、微乳中药物泄漏的问题。

本发明制得的固体脂质纳米粒可以进一步制成片剂、胶囊或注射给药，适应不同的治疗要求。

具体实施方式：

下面以实例来说明本发明的新藤黄酸固体脂质纳米粒的制备方法，但不以此作为对本发明的限制。

实施例1

将10mg新藤黄酸和100mg单硬脂酸溶于氯仿中，200mg卵磷脂以少量乙醇溶解，两部分再混合，构成有机相。将300mg泊洛沙姆-188和2ml丙三醇溶于注射用水中，构成水相。将70-80℃有机相缓慢滴入同温度(70-80℃)的水相中，恒温搅拌至形成透明体系。用旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂。浓缩后的体系快速混于0-2℃的水相中搅拌降温2小时，即得固体脂质纳米粒混悬液。用微孔滤膜过滤除去大粒子，4℃密封保存。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为221.8nm，包封率为87.31％。

实施例2

将15mg新藤黄酸和120mg单硬脂酸溶于正己烷中，300mg卵磷脂以少量乙醇溶解，两部分再混合，构成有机相。将400mg泊洛沙姆-188和2ml丙三醇溶于注射用水中，构成水相。将70-80℃有机相缓慢滴入同温度(70-80℃)的水相中，恒温搅拌至形成透明体系。用旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂。浓缩后的体系快速混于0-2℃的水相中搅拌降温2小时，即得固体脂质纳米粒混悬液。用微孔滤膜过滤除去大粒子，4℃密封保存。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为184.5nm，包封率为83.47％。

实施例3

将10mg新藤黄酸和100mg单硬脂酸溶于氯仿中，200mg卵磷脂以少量乙醇溶解，两部分再混合，构成有机相。将300mg吐温-80和2g甘油醇溶于注射用水中，构成水相。将70-80℃有机相缓慢滴入同温度(70-80℃)的水相中，恒温搅拌至形成透明体系。用旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂。浓缩后的体系快速混于0-2℃的水相中搅拌降温2小时，即得固体脂质纳米粒混悬液。用微孔滤膜过滤除去大粒子，4℃密封保存。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为193.6nm，包封率为85.34％。

实施例4

取10mg新藤黄酸、120mg山嵛酸、15mg胆固醇、100mg二硬脂酰磷脂酰甘油置于25ml三角烧瓶中，于(75+2)℃的恒温水浴上加热使其充分熔融，构成油相。另取15mg胆酸钠溶于5ml水中，水浴加热至与油相相同的温度，构成水相。将油相在1000r/min搅拌下注入水相中，搅拌4h，温度保持在(75+2)℃，形成O/W型初乳。将所得乳剂在搅拌1000r/min下快速混于0-2℃10ml水中，继续搅拌2h，然后于800W功率下超声处理20min，即得固体脂质纳米粒混悬液。。用微孔滤膜过滤除去大粒子，4℃密封保存。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为176.2nm，包封率为87.37％。

实施例5

取15mg新藤黄酸、120mg山嵛酸、15mg胆固醇、120mg二硬脂酰磷脂酰甘油置于25ml三角烧瓶中，于(75+2)℃的恒温水浴上加热使其充分熔融，构成油相；另取15mg胆酸钠溶于5ml水中，水浴加热至与油相相同的温度，构成水相。将油相在1000r/min搅拌下注入水相中，搅拌4h，温度保持在(75+2)℃，形成O/W型初乳。将所得乳剂在搅拌1000r/min下快速混于0-2℃10ml水中，继续搅拌2h，然后于600W功率下超声处理30min，即得固体脂质纳米粒混悬液。。用微孔滤膜过滤除去大粒子，4℃密封保存。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为166.8nm，包封率为84.67％。

实施例6

取10mg新藤黄酸、双硬脂酸甘油酯500mg和二棕榈酰磷脂酰甘油50mg加热熔融作为油相；另取泊洛沙姆-18860mg、甘油25mg，在高速磁力搅拌条件下，加入一到已加热至(60+5)℃的的5ml注射用水中，待完全溶解作为水相；将油相缓慢滴入水相中，高速搅拌(12000r/min)5min，制成O/W型乳剂，将所得乳剂在将所得乳剂在搅拌1000r/min下快速混于0-2℃10ml水中，继续搅拌2h，然后于600W功率下超声处理30min，即得固体脂质纳米粒混悬液。。用微孔滤膜过滤除去大粒子，4℃密封保存。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为186.7nm，包封率为82.37％。

实施例7.

称取15mg新藤黄酸、200mg硬脂酸、600mg注射用豆磷脂混合均匀，(80+5)℃加热使溶解，作为油相。将300mg Tween 80加重蒸水45ml，搅拌溶解，迅速加热到(80+5)℃作为水相。在搅拌下将水相趁热滴加到同温度油相中，经高压匀质5-6个循环，0-4℃冷却结晶，即得固体脂质纳米粒。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为201.17nm，包封率为85.76％。

实施例8

称取20mg新藤黄酸、200mg硬脂酸、600mg注射用豆磷脂混合均匀，(80+5)℃加热使溶解，作为油相。将400mg Pluronic F-68加重蒸水50ml，搅拌溶解，迅速加热到(80+5)℃作为水相。在搅拌下将水相趁热滴加到同温度油相中，经高压匀质5-6个循环，0-4℃冷却结晶，即得固体脂质纳米粒。

实施例9

称取15mg新藤黄酸、100mg硬脂酸和200mg注射用豆磷脂混合均匀，(80+5)℃加热使溶解，作为油相。然后在搅拌条件下加入相同温度含0.5％甘油和0.5％Poloxamer 188的水溶液40ml，制成粗乳，经高压匀质5-6个循环，0-4℃冷却结晶，即得固体脂质纳米粒。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为177.30nm，包封率为81.26％。

实施例10

将20mg新藤黄酸加入到80℃100mg单硬脂酸甘油酯、200mg卵磷脂和200μl辛酸甘油酯的混合脂质液中；再把热脂相分散到100mg泊洛沙姆同温度的水溶液中得到初分散体，高压匀质5-6个循环，0-4℃冷却结晶，即得固体脂质纳米粒。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为181.1nm，包封率为83.68％。

实施例11

将10mg新藤黄酸、50mg硬脂酸和50mg卵磷脂溶于10ml的二氯甲烷中，旋转蒸发除去二氯甲烷，在烧瓶壁上形成一层脂质膜，加入15ml的吐温-80(2.5％)，600W功率下水浴超声30min，即得固体脂质纳米粒。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为173.2nm，包封率为84.16％。

实施例12

将10mg新藤黄酸、卵磷脂90mg于500ml圆底烧瓶中，加入15ml氯仿溶解，旋转蒸发除去氯仿，在烧瓶壁上形成一层脂质膜，加入10ml的吐温-80，600W功率下水浴超声30min，即得固体脂质纳米粒。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为187.3nm，包封率为82.19％。

实施例13

将10mg新藤黄酸、60mg硬脂酸和50mg卵磷脂溶于10ml的二氯甲烷中，在40℃下旋转蒸发，除去有机溶剂，形成脂质膜，加入10ml的吐温-80，600W功率下水浴超声30min，即得固体脂质纳米粒。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为210.3nm，包封率为84.23％。

实施例14

将10mg新藤黄酸、双山嵛酸甘油酯100mg、氢化卵磷脂80mg，15mg二月桂酰磷脂酰胆碱于500ml圆底烧瓶中，加入20ml氯仿溶解，40℃下旋转蒸发除去氯仿，在烧瓶壁上形成一层薄膜，加入5％甘胆酸钠溶液10ml，600W功率下水浴超声30min，即得固体脂质纳米粒。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为81.5nm，包封率为82.54％。

实施例15

10mg新藤黄酸、50mg硬脂酸、50mg卵磷脂溶入无水乙醇中；旋转蒸发仪中减压蒸发除去有机溶剂，形成一层脂质薄膜，减压干燥。将10mg泊洛沙姆溶于少量重蒸馏水中，缓缓注入上述脂质薄膜中，超声1h，用微孔滤膜过滤除去大粒子，4℃密封保存。

检测：新藤酸固体脂质纳米粒的平均粒径为74.5nm，包封率为83.47％。

Claims (10)

1.新藤黄酸固体脂质纳米粒，包括治疗有效量的新藤黄酸，可药用的磷脂，表面活性剂和脂质材料，各成分重量比如下：

新藤黄酸    1～20份

磷脂        3～100份

脂质材料    5～100份

表面活性剂  10～200份。

2.根据权利要求1所述的固体脂质纳米粒，其特征在于，含有下列单位为重量份的组分：

新藤黄酸    1～10份

磷脂        10～70份

脂质材料    10～80份

表面活性剂  20～120份。

3.根据权利要求1所述的固体脂质纳米粒，其特征在于，含有下列单位为重量份的组分：

新藤黄酸    1～5份

磷脂        30～50份

脂质材料    40～50份

表面活性剂  30～80份。

4.根据权利要求1所述的脂质纳米粒，其特征在于，

磷脂选自：大豆卵磷脂、大豆脑磷脂、大豆肌醇磷脂、二月桂酰磷脂酰胆碱、二亚酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱或二棕榈酰磷脂酰乙醇胺，

脂质材料选自：甘油脂类，其包括单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯、双棕榈酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、单二十一酸甘油酯、双二十一酸甘油酯、三二十一酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯及其混合物；脂肪酸类，其包括硬脂酸、棕榈酸、二十二碳烷酸、癸酸及其混合物；类固醇类，其包括胆固醇；蜡脂类，其包括鲸蜡醇棕榈酸酯、鲸蜡醇十六酸酯、微晶石蜡及其混合物，

表面活性剂选自：磷脂类，其包括卵磷脂、卵黄磷脂及其混合物；胆酸盐类，其包括胆酸盐、甘胆酸钠、牛黄胆酸钠及其混合物；脱氧胆酸盐类，其包括自脱氧胆酸钠、去氧牛黄胆酸钠及其混合物；短链醇类，其包括丁醇、丁酸、甘油、异丙醇；泊洛沙姆类，其包括泊洛沙姆108、182、188、407、908；聚山梨醇酯， 其包括吐温-80、85、65、60、40。

5.根据权利要求1所述的脂质纳米粒，其特征在于，粒径在0～1000nm之间。

6.权利要求1所述的脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下5种制备方法：

1)乳化-沉淀法制备，称取一定量新藤黄酸、载体材料溶于一定量与水不混溶的有机溶剂中，加入到含有表面活性剂的水相中进行乳化，然后蒸去有机溶剂，即可得到固体脂质纳米粒分散体系；

2)微乳法制备，将载体熔融，加入新藤黄酸、表面活性剂和温水制成外观透明、热力学稳定的O/W型微乳，然后在搅拌条件下将微乳分散于冷水中即可制成固体脂质纳米粒分散体系；

3)热高压乳匀法制备，即将载体材料熔化，将新藤黄酸溶解于或均匀分散于熔融液中，然后将该熔融液在高速搅拌的条件下分散于温度相近的表面活性剂溶液形成粗分散体，粗分散体经高压乳匀冷却结晶后，即得；

4)冷高压乳匀法制备，即将载体材料与新藤黄酸共融并充分混合后，在液氮等介质中迅速冷却，经机械搅拌研磨，得到的固体脂质纳米粒微粒在高速搅拌下混入冷的表面活性剂溶液中得到初乳，再于室温下以更高压力通过高压乳匀机5个循环以上就得到固体脂质纳米粒分散体系；

5)超声法制备，称取一定量的新藤黄酸，载体材料于一定量的有机溶剂中，在旋转蒸发仪上减压蒸干成膜，加入一定量含表面活性剂的水溶液，超声即得固体脂质纳米粒分散体系；

其中，所述有机溶剂选自：氯仿、乙醇、乙醚、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷。

7.根据权利要求6所述的脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，制法4)或5)中高压乳匀压力为100～2000Pa，高压乳匀次数在2次以上，其步骤是，将10mg新藤黄酸和100mg单硬脂酸溶于氯仿中，200mg卵磷脂以少量乙醇溶解，两部分再混合，构成有机相，将300mg泊洛沙姆-188和2ml丙三醇溶于注射用水中，构成水相。将70-80℃有机相缓慢滴入同温度的水相中，恒温搅拌至形成透明体系，用旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂，浓缩后的体系快速混于0-2℃的水相中搅拌降温2小时，即得固体脂质纳米粒混悬液，用微孔滤膜过滤除去大粒子， 4℃密封保存。

8.根据权利要求6所述的脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，将新藤黄酸固体脂质纳米粒通过喷雾干燥或冷冻干燥制成固体成品，其中需要加入赋形剂，赋形剂选自：乳糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、甘露糖。

9.一种隐形固体脂质纳米粒A的制备方法，其特征在于，将新藤黄酸固体脂质纳米粒修饰成隐形固体脂质纳米粒A，隐形材料选自：非离子表面活性剂聚乙二醇、泊洛沙姆、聚山梨酯80。

10.根据权利要求1所述的脂质纳米粒，其特征在于，可进一步制成医用注射剂和口服制剂。