CN101856431A - 用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的药物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的药物及其制备方法和应用，包括下列重量份配比的原料药所制成的药剂：白芍：190-290份；地黄：270-370份；墨旱莲：190-290份；女贞子：190-290份；续断：190-290份；阿胶：30-130份；三七：190-290份；黄芪：430-530份；地骨皮：190-290份；海螵蛸：270-370份。按照上述重量份数，取白芍、墨旱莲、女贞子、续断、三七和黄芪加乙醇回流提取，滤过，将醇提液减压回收乙醇后浓缩至无醇味，得醇提浓缩液和药渣备用；将上述药渣和熟地黄、地骨皮和海螵蛸合并后用水煎煮，煎液过滤，滤液减压浓缩后加乙醇，搅匀、放置后滤过，滤液回收乙醇，得水提醇沉浓缩液，与醇提浓缩液合并，加入烊化后的阿胶，浓缩，真空干燥成干浸膏粉。

Description

用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的药物及其制备方法和应用

一、技术领域

本发明属于医药技术领域，具体来讲涉及一种用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的药物及其制备方法。

二、背景技术

功能失调型子宫出血(dysfunctional uterine bleeding，DUB)简称功血，是指因调节生殖的神经内分泌机制失常引起的异常子宫出血。功血可分为两大类：无排卵型和有排卵型。功血是妇科的常见病，其发病率占门诊妇科疾病的10％左右。以无排卵型最为多见，约占80～90％，主要发生在青春期和绝经前期，少数发生在育龄期；排卵型功血为数相对不多。凡因不同年龄、不同原因而发生的无排卵子宫出血均属于无排卵型功血(anovulatory dysfunctionaluterine bleeding)。

功血是一种妇科常见病多发病，每一个妇女一生中或多或少都可患有功血病，功血出血量多，或淋漓日久不净，严重者可导致失血性休克，甚至会导致子宫内膜癌，对妇女身体健康危害极大，属于妇科急症中的一种。机体内部和外界的许多因素诸如精神紧张、情绪变化、营养不良、代谢紊乱及环境、气候骤变等，可通过大脑皮层和中枢神经系统影响下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)的相互调节，使促性腺激素或卵巢激素在释出或平衡方面的暂时变化而发生功血。功血的出血机制包括雌激素撤退性出血，雌激素突破性出血，孕激素突破性出血，子宫内膜局部血管异常，凝血与纤溶异常等等。其病理生理改变可以是中枢神经下丘脑一垂体一卵巢轴的神经内分泌调控异常，或卵巢局部调控机制异常，或子宫内膜或肌层局部调控功能的异常。此外，子宫异常出血也与子宫局部调控失调有关。子宫内膜局部的改变，主要包括子宫内膜细胞凋亡的变化，局部内分泌因子的改变，以及局部血管、血液成分的改变等。

目前，对于功血的治疗方法较多。西医治疗此症主药采用器械刮宫法，性激素或止血剂止血法等方法。这些方法虽然能够快速止血但是不能赖以止血，而且不能调整月经周期预防再次初学。可见，西医治疗无排卵型功血容易复发且有较多副作用。

三、发明内容

发明目的：本发明的目的在于提供了一种治疗无排卵型功血的中药制剂和在制药中的应用，它具有滋阴清热，调经止血的作用；本发明的另一个目的在于提供该中药制剂的制备方法。

技术方案：一种用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的药物，包括下列重量份配比的原料药所制成的药剂：白芍：190-290份；地黄：270-370份；墨旱莲：190-290份；女贞子：190-290份；续断：190-290份；阿胶：30-130份；三七：190-290份；黄芪：430-530份；地骨皮：190-290份；海螵蛸：270-370份。

制备用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血药物的方法，制备步骤如下：a.按照上述重量份数，取白芍、墨旱莲、女贞子、续断、三七和黄芪加乙醇回流提取，滤过，将醇提液减压回收乙醇后浓缩至无醇味，得醇提浓缩液和药渣备用；b.将上述药渣和熟地黄、地骨皮和海螵蛸合并后用水煎煮，煎液过滤，滤液减压浓缩后加乙醇，搅匀、放置后滤过，滤液回收乙醇，得水提醇沉浓缩液，与步骤a的醇提浓缩液合并，加入烊化后的阿胶，浓缩，真空干燥成干浸膏粉即为药物活性成分。

步骤a中所加的乙醇量是饮片总重量的12-18倍，乙醇体积浓度为60-80％，分三次回流提取，三次用量分别为总用量的40％、30％和30％，每次提取1-2小时。

步骤b中所加水的量是饮片总重量的15-25倍，分二次煎煮，二次用量分别为总用量的60％和40％，每次1-2小时，煎液过滤后滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.08，在50℃～60℃时测定，浓缩液中加乙醇至醇含量不超过60％vt，搅匀，放置48小时，滤过，滤液回收乙醇与步骤a醇提浓缩液合并，加入烊化后的阿胶，浓缩至相对密度1.10～1.15，在50℃～60℃时测定，在0.080～0.085Mpa、65～70℃真空干燥成干浸膏粉。

上述中药在制备治疗肝肾阴虚型无排卵型功血药物中的应用。

有益效果：本发明的中药制剂经药理实验结果表明该制剂能够缩短出血时间及凝血时间，抗炎，镇痛，调节激素水平等作用，从而对功血有良好的治疗作用。

四、附图说明

图1功血饮对小鼠断尾出血时间的影响；

图2功血饮对小鼠凝血时间的影响；

图3功血饮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响；

图4功血饮对醋酸刺激致小鼠疼痛的影响；

图5功血饮对HAC致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响；

图6功血饮对药物不完全流产大鼠体重的影响；

图7功血饮对药物不完全流产大鼠阴道出血量的影响；

图8功血饮对药物不完全流产大鼠血清雌二醇含量的影响；

图9功血饮对药物不完全流产大鼠血清孕酮含量的影响；

图10电泳条带图A为β-actin电泳条带、B为ERmRNA电泳条带、C为PRmRNA电泳条带，1.未孕空白组、2.空白对照组、3.模型组、4.宫血宁组、5.功血饮低剂量、6.功血饮中剂量、7.功血饮高剂量；

图11功血饮对功血模型大鼠子宫ER和PR表达的影响；

图12子宫组织学检查A未孕空白、B空白、C模型、D宫血宁、E功血饮低剂量、F功血饮中剂量、G功血饮高剂量。

五、具体实施方式

本专利所用白芍(Radix Paeoniae Alba)为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，熟地黄(Radix Rehmanniae Praeparata)为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根的炮制加工品，墨旱莲(Herba Ecliptae)为菊科植物鳢肠Eclipta prostrata L.的干燥地上部分，女贞子(Fructus Ligustri Lucidi)为木樨科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实，续断(Radix Dipsaci)为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et T.M.Ai的干燥根，阿胶(Colla Corii Asini)为马科动物驴(Equus asinus L.)的皮经煎熬、浓缩而成的固体胶，三七(Radix et Rhizoma Notoginseng)为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎，黄芪(Radix Astragali)为为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。地骨皮(Cortex Lycii)为茄科植物枸杞Lycium chinense Mill.或宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥根皮，海螵蛸(Endoconcha Sepiae)为乌贼科动物无针乌贼Sepiella maindroni de Rochebrune或金乌贼Sepia esculenta Hoyle的干燥内壳。

以下结合实例对本发明作进一步的描述，实施例仅用于对本发明进行说明，并不构成对权利要求范围的限制，本领域技术人员可以想到的其他替代手段，均在本发明权利要求范围内。

实施例1

治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的中药，由下列重量份配比的原料药所制成：

白芍  190份  (熟)地黄270份  墨旱莲190份

女贞子190份  续断    190份  阿胶  30份

三七  190份  黄芪    430份  地骨皮190份

海螵蛸270份

实施例2

治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的中药，由下列重量份配比的原料药所制成：

白芍  290份    (熟)地黄370份  墨旱莲290份

女贞子290份    续断    290份  阿胶  130份

三七  290份    黄芪    530份  地骨皮290份

海螵蛸370份

实施例3

治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的中药，由下列重量份配比的原料药所制成：

白芍238.1g    (熟)地黄317.5g    墨旱莲238.1g

女贞子238.1g      续断238.1g    阿胶  79.4g

三七  238.1g      黄芪476.2g    地骨皮238.1g

海螵蛸317.5g

依据实施例1～3所列举的配方量，取白芍、墨旱莲、女贞子、续断、三七、黄芪六味，加饮片总重量18倍量的70％乙醇分三次回流提取(三次用量分别为总量的40％、30％、30％)，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至无醇味。上述药渣与熟地黄、地骨皮等合并，加饮片总量25倍量的水分二次煎煮(二次用量分别为总量的60％、40％)，每次1.5小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.08(50℃～60℃)，冷却，加乙醇至含醇量达50％，搅匀，放置48小时，滤过，滤液回收乙醇，与上述醇提浓缩液合并，加入烊化后的阿胶，浓缩至相对密度1.10～1.15(50℃～60℃)，在0.080～0.085Mpa、65～70℃真空干燥成干浸膏粉。取浸膏粉，加适量糖粉、糊精、微晶纤维素混匀进行湿法制粒，干燥，即得颗粒1000g。

实施例4

药效学实验

1功血饮对小鼠出血时间的影响

1.1组别与剂量

取健康雄性ICR小鼠60只，体重19～22g，随机均分为5组：(1)空白对照组：NS10mL/kg；(2)宫血宁组：0.26g/kg；(3)功血饮Ⅰ组：11g/kg；(4)功血饮Ⅱ组：22g/kg；(5)功血饮Ⅲ组：44g/kg。各组小鼠每日灌胃给药1次，连续给药5日。给药容积均为20mL/kg。

1.2方法

末次给药15min后，将小鼠固定，以毫米尺测量鼠尾长度并标记，然后分别以利剪在小鼠尾尖3mm处横断，待血液自行溢出，开始计时，每隔30s用滤纸吸去血滴1次，直至血液自然停止(滤纸吸时无血)为止，即为出血时间。

1.3结果

实验结果显示：功血饮11、22、44g/kg三个剂量组出血时间明显性缩短，与空白对照组比较有差异具有显著性意义(p＜0.01)，宫血宁胶囊组与空白对照组比较也有显著性差异(p＜0.01)。见表2和图1。

表1功血饮对小鼠断尾后出血时间的影响

n＝12

*P＜0.05，**P＜0.01与空白对照组比较

2功血饮对小鼠凝血时间的影响

2.1组别与剂量

取健康雄性ICR小鼠60只，体重19～22g，随机均分为5组：(1)空白对照组：NS10mL/kg；(2)宫血宁组：0.26g/kg；(3)功血饮Ⅰ组：11g/kg；(4)功血饮Ⅱ组：22g/kg；(5)功血饮Ⅲ组：44g/kg。各组小鼠每日灌胃给药1次，连续给药5日。给药容积均为20mL/kg。

2.2方法

末次给药30min后，用内径10mm，长10cm毛细玻管自眼内眦插入，用毛细管法和玻片法测定凝血时间(s)。

2.3结果

实验结果显示：功血饮11、22、44g/kg三个剂量组小鼠凝血时间缩短，与空白对照组比较有差异具有显著性意义(p＜0.05，p＜0.01)。见表2和图2。

表2功血饮对小鼠凝血时间的影响

(n＝12)

*P＜0.05，**P＜0.01与空白对照组组比较

3功血饮对小鼠耳肿胀的影响

3.1组别与剂量

取健康雄性ICR小鼠60只，雄性，体重20～24g，随机均分为6组：(1)空白对照组：NS 20mL/kg；(2)模型组NS 20mL/kg；(3)宫血宁组：0.26g/kg；(4)功血饮Ⅰ组：11g/kg；(5)功血饮Ⅱ组：22g/kg；(6)功血饮Ⅲ组：44g/kg。各组小鼠每日灌胃给药1次，连续给药7日。给药容积均为20mL/kg。

3.2方法

末次给药40min后，用二甲苯0.05mL涂于小鼠右耳两侧；在致炎1h后处死小鼠，剪下左右两耳，用打孔器(直径8mm)分别在同一部位取下圆耳片，电子天平称重，计算耳壳重量，并比较各组小鼠耳壳肿胀度(右耳壳重-左耳壳重)。

肿胀百分率(％)＝[肿胀度/右耳壳量]×100％

肿胀抑制百分率(％)＝[给药组小鼠耳壳肿胀度/模型对照组小鼠耳壳肿胀度]×100％

3.3结果

实验结果显示：功血饮11、22、44g/kg三个剂量能明显减轻小鼠耳壳肿胀度及肿胀率，与空白对照组比较差异显著(p＜0.05、0.01)，表明功血饮可对抗二甲苯所致的炎症反应，具有抗炎作用。见表3和图3。

表3功血饮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

n＝10

^△△P＜0.01与空白对照组比较

*P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较

4功血饮对HAC致小鼠醋酸扭体和腹腔毛细血管通透性的影响

4.1组别与剂量

取健康雄性ICR小鼠50只，雌雄各半，体重20～24g，随机均分为5组：(1)空白对照组：NS 20mL/kg；(2)宫血宁组：0.26g/kg；(3)功血饮Ⅰ组：11g/kg；(4)功血饮Ⅱ组：22g/kg；(5)功血饮Ⅲ组：44g/kg。各组小鼠每日灌胃给药1次，连续给药7日。给药容积均为20mL/kg。

4.2方法

末次给药40min后，腹腔注射0.6％冰醋酸0.2mL/只，观察注射冰醋酸后20min内各组小鼠出现的扭体反应动物数和扭体反应次数。于注入HAC后30min尾静脉注射0.5％伊文思蓝0.1mL/10g，再20min后脱颈椎处死小鼠，开腹用5mL生理盐水分次冲洗腹腔，用注射器抽出腹腔洗液约4.5mL。3000rpm离心5min，取上清于590nm处测定紫外吸收度值(A)。

4.3结果

实验结果显示：

4.3.1功血饮11、22、44g/kg三个剂量可明显减少乙酸所致小鼠的扭体反应次数，与空白对照组比较差异显著(p＜0.05、0.01)。表明功血饮能对抗乙酸所致小鼠的疼痛性反应，具有镇痛作用。见表4和图4。

表4功血饮对醋酸刺激致小鼠疼痛的影响(扭体法)

*P＜0.05，**P＜0.01与空白对照组比较

4.3.2功血饮11、22、44g/kg三个剂量组对乙酸致小鼠毛细血管通透性增加有抑制作用，与空白对照组比较具有显著性差异(p＜0.05，0.01)，表明功血饮具有较明显的抗炎作用。见表5和图5。

表5功血饮对HAC致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

*P＜0.05，**P＜0.01与空白对照组比较

注：阳性药和大剂量各有一只小鼠未能打进依文思蓝，故弃去；另空白对照组、小、中、大剂量各有一只小鼠开腹冲洗有出血，影响实验结果，故弃去。

5功血饮对药物不完全流产大鼠子宫出血的影响

5.1药物不完全流产大鼠模型的复制

取健康实验大鼠，将大鼠按雌雄2∶1的比例合笼，次日晨检查雌鼠阴道栓和阴道涂片，发现阴栓或精子为怀孕第1天，共筛选出58只妊娠大鼠。取50只妊娠大鼠于怀孕第7天上午8时灌胃米非司酮溶液1mL/100g，下午8时灌胃米索前列醇溶液1mL/100g，造成早孕大鼠不完全流产模型。

5.2分组

取妊娠大鼠58只，未造成流产的8只为正常对照组，给予等体积的生理盐水，其余50只随进分为5组，每组10只，分别为：(1)模型组：NS 10mL/kg；(2)宫血宁组：0.13g/kg；(3)功血饮Ⅰ组：5.5g/kg；(4)功血饮Ⅱ组：11g/kg；(5)功血饮Ⅲ组：22g/kg。另取10只未孕大鼠，设立未孕空白对照组。各组大鼠每日灌胃给药2次，连续给药7日。给药容积均为10mL/kg。

5.3检测指标及方法

5.3.1体重

大鼠分组后，每天称取1次体重。

5.3.2大鼠阴道出血量

妊娠大鼠给予米索前列醇(18:00)后，于阴道内置入定量消毒棉球1个(棉球重70～80mg)。次日分别于8:00和18:00将棉球取出，放入塑料袋中密闭冷藏保存；同时置换一个新棉球于阴道内，连续至第14天。

取大鼠静脉血0.02mL，加入浓度为50g/L的NaOH溶液4mL中，混匀待用。将收集的每鼠子宫出血棉球置于烧杯内，根据出血量的情况加适量50g/L NaOH浸泡挤压搓洗棉球血渍，浸洗后的溶液倒入另一烧杯内保存。再加适量50g/L NaOH浸泡棉球，挤压搓洗血渍，倒入保存容器。根据棉球血渍洗脱情况，决定是否再浸洗1～2次。将先后所有浸提液混匀，记录所用50g/L NaOH总量，取5mL浸提液过滤，分别将①已过滤的浸提液、②大鼠静脉血的NaOH溶液各4mL，③以50g/L NaOH为空白对照，以546nm的波长记录吸光度(OD)值。

阴道出血量(mL)＝(尾静脉血量0.02mL)×(子宫浸提液OD值×V2)/(尾静脉血OD值×V1)

其中V1＝稀释尾静脉血所用的NaOH溶液的量(4mL)

V2＝浸提子宫血所用NaOH溶液量

5.3.3血清性激素水平

末次给药后，大鼠进行眼眶取血2mL，分离血清，采用放免法测定雌二醇(E2)、孕激素(P)。未孕空白组作大鼠阴道细胞涂片检查，选取处于动情间期的大鼠进行眼眶取血。

5.3.4采用RT-PCR法测定子宫ERmRNA、PRmRNA含量

5.3.4.1提取RNA：动物取血后，迅速取出子宫。采用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提方法提取组织的RNA，使用紫外可见分光仪测定样品中260nm、280nm吸收峰的OD值，鉴定RNA的纯度和含量。将提取的RNA加入20μL DEPC水稀释，放-70℃冰箱。

5.3.4.2逆转录：将0.5mL DEPC水处理过的无菌离心管中依次加入5×buffer，Enzyme mix，oligo dT，Random Primer，RNA，H2O构成整个20μL反应体系，混匀稍离心5S，37℃水浴15min变性，以解开总RNA的二级结构，88℃ 2min灭活逆转录酶，中止反应，迅速冰种冷却2min，以防cDNA结合成双链，反转录后的cDNA于-20℃下保存备用。

5.3.4.3PCR：待检测基因ERmRNA引物由南京大学生科院协助设计，英骏生物技术有限公司提供产品。ERα上游引物序列为：5′＞TCA TGC AGT CTG CCA AGG AG＜3′，下游引物序列为：5′＞TGC CAG GTT GGT CAA TAA GC＜3′，长度为527bp，变性温度为94℃，退火温度61℃，30个循环。PRα上游引物序列为：5′＞CAT GTC AGT GGA CAG ATG CT＜3′，下游引物序列为：5′＞ACT TCA GAC ATC ATT TCC GG＜3′，长度为428bp，变性温度为94℃，退火温度59℃，30个循环。选择在大多数细胞内均为高表达的β-actin作为内对照，其上游引物为：5′＞CCT AAG GCC AAC CGT GAA AAG＜3′，下游引物为：5′＞TCT TCA TGC TGCTAG GAG CCA＜3′。

5.3.4.4PCR产物检测：采用琼脂糖凝胶电泳方法，取mRNA RT-PCR反应产物17μl，以10×TAE为电泳缓冲液，在1％琼脂糖凝胶上电泳约15min(电压120V)，电泳时每条带代表RT-PCR产物的结果，3条带为1组，每个样本重复电泳3次。放入BIO-RAD公司产的GelDoc1000型凝胶图像系统分析仪，紫外灯下显影，数码相机拍照，使用BandScan分析软件测得电泳图谱上每条基因条带的光密度值，分别计算每只大鼠ERmRNA或者PRmRNA与β-actin mRNA产物的光密度比值，再比较各组间ERmRNA/β-actin值和PRmRNA/β-actin值的大小，进行统计学分析。

5.3.5脏器系数

于末次给药后次日断头处死大鼠，迅速摘取子宫、卵巢、肾上腺、脾脏及胸腺并称重，计算其脏器系数(mg/g)。

脏器系数＝脏器重量(mg)/大鼠体重(g)

5.3.6子宫的组织学检查

于末次给药后次日断头处死大鼠，迅速摘取子宫、卵巢，称重后用福尔马林固定、石蜡包埋，切片，HE染色。光学显微镜观察下列指标：

子宫上皮层、固有层、肌层的病理变化。病理观察指标为：①子宫内膜上皮细胞形状、有无变性坏死；②固有层腺体数目有无减少，纤维组织有无增生；③肌层有无炎症，血管有无增生等病变。根据病变由轻到重的程度分别记为0-4分，积分标准为：无病变记为0分；极轻度记为1分，轻度记2分；中度病变记3分；重度病变记4分。肌层血管增生的程度也由轻到重记为0-4分。累加所有分数，计算每组动物的均分值。

5.4结果

5.4.1功血饮对药物不完全流产大鼠体重的影响

由表6和图6可知：各组大鼠体重呈上升趋势，怀孕空白大鼠体重增加较快，与未孕空白比较有显著性差异(p＜0.05)。其他各给药组与模型组比较无显著性差异(p＞0.05)。

表6功血饮对药物不完全流产大鼠体重的影响

*p＜0.05与未孕空白比较

5.4.2功血饮对药物不完全流产大鼠阴道出血量的影响

由表7和图7可知：模型组较空白对照组大鼠阴道出血量明显增多，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)，说明模型复制成功；功血饮各剂量组均能显著性减少模型大鼠子宫的出血量，与模型组比较有非常显著性差异(P＜0.01)。实验结果表明：功血饮能有效抑制不完全流产模型大鼠的阴道出血。

表7功血饮对功血模型大鼠阴道出血量的影响

组别	剂量	动物数	阴道出血量(mL)
				未孕空白	-	10	0.0441±0.0205
空白对照组	-	8	0.0574±0.0174
				模型组	-	10	0.6900±0.1357△△
宫血宁组	0.13	10	0.3044±0.0676**
				功血饮低剂量	5.5	10	0.3468±0.0522**
功血饮中剂量	11	10	0.2979±0.0587**
				功血饮高剂量	22	10	0.1993±0.0369**

^△△P＜0.01与空白对照组比较，**P＜0.01与模型组比较

5.4.3功血饮对功血模型大鼠血清性激素的影响

结果显示：模型组较空白对照组大鼠雌激素和孕激素含量下降，表明模型组大鼠血清中雌激素和孕激素降低；功血颗粒各剂量组均能升高模型大鼠血清中雌二醇的含量，且功血颗粒高剂量与模型组比较有非常显著性差异(P＜0.01)；功血颗粒各剂量组对孕激素的变化是随着剂量的增加而下降，但没有显著性差异。

表8：功血饮对功血模型大鼠血清性激素的影响

组别	剂量(g/kg)	动物数	雌二醇含量(ng/mL)	孕酮含量(ng/mL)
					未孕空白对照组	-	10	306±185.1	1.844±1.101
空白对照组	-	8	435.2±199.1	3.025±1.413
					模型组	-	10	356.2±164.8	3.05±1.771
宫血宁组	0.13	10	502.1±116.8*	2.26±1.184
					功血饮低剂量	5.5	10	312.8±156.9	3.11±1.763
功血饮中剂量	11	10	383.9±95.2	2.92±2.074
					功血饮高剂量	22	10	556.5±172.3**	2.278±2.435

5.4.4功血饮对功血模型大鼠子宫ER和PR表达的影响

结果显示：模型组大鼠子宫ER mRNA和PR mRNA的表达下降，与空白对照组比较有显著性的差异(P＜0.01)；功血颗粒各剂量组均能降低ER mRNA和PR mRNA的表达，功血颗粒11、22g/kg剂量组与模型组比较有显著性的差异(P＜0.01)。

表9：功血饮对功血模型大鼠子宫ER和PR表达的影响

组别	剂量	动物数	雌激素	孕激素
					未孕空白	-	10	0.829±0.013	0.612±0.081
空白对照组	-	8	0.994±0.008※※	0.953±0.092※※
					模型组	-	10	0.891±0.024△△	0.719±0.110△△
宫血宁组	0.13	10	0.766±0.118	0.601±0.115
					功血饮低剂量	5.5	10	0.785±0.100	0.502±0.126
功血饮中剂量	11	10	0.715±0.048**	0.412±0.133*
					功血饮高剂量	22	10	0.580±0.116**	0.325±0.018**

^※※P＜0.01与未孕空白对照组比较，^△△P＜0.01与空白对照组比较，**P＜0.01与模型组比较

5.4.5功血饮对功血模型大鼠脏器系数的影响

由表10可知：空白对照组大鼠较未孕空白组子宫重量明显上升，与未孕空白比较有显著性差异(P＜0.01)；模型组和空白对照组比较，子宫脏器系数下降，说明模型组流产成功，模型复制成功，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；各给药组与模型组比较，脏器系数由上升的趋势，但无显著性差异(P＞0.05)。

表10功血饮对功血模型大鼠脏器系数的影响

组别	剂量(g/kg)	动物数	胸腺	脾脏	肾上腺	子宫	卵巢
								未孕空白	-	10	0.146±0.043	0.523±0.191	0.024±0.008	0.159±0.040	0.045±0.013
空白对照	-	8	0.146±0.036	0.432±0.095	0.028±0.006	0.529±0.151△ △	0.042±0.011
								模型组	-	10	0.156±0.028	0.317±0.167	0.024±0.004	0.132±0.025**	0.045±0.008
宫血宁组	0.13	10	0.138±0.031	0.336±0.156	0.026±0.007	0.135±0.023	0.044±0.007
								功血饮低剂量	5.5	10	0.150±0.055	0.318±0.056	0.025±0.006	0.137±0.024	0.049±0.008
功血饮中剂量	11	10	0.145±0.014	0.336±0.143	0.026±0.005	0.137±0.061	0.047±0.009
								功血饮高剂量	22	10	0.140±0.033	0.304±0.149	0.027±0.004	0.160±0.060	0.050±0.007

^△△P＜0.01与空白对照组比较，**P＜0.01与模型组比较

5.4.6子宫的组织学检查

未孕组：子宫内膜上皮细胞多数为单层立方，固有层腺体上皮无变性、坏死，亦无过度增生，间质无明显血管扩张充血、纤维结缔组织增生和炎细胞浸润，肌层、浆膜无病变。

空白组：子宫内膜上皮细胞多数为单层低柱状，固有层腺体上皮无变性、坏死，但可见数量较未孕组增多，间质无明显血管扩张充血、纤维结缔组织增生和炎细胞浸润，肌层、浆膜无病变。

模型组：子宫内膜上皮细胞多数为单层低柱状、个别内膜上皮细胞轻度变性，固有层腺体上皮无变性、坏死，但可见数量较未孕组增多、与空白组无明显差异，间质血管扩张充血，纤维结缔组织增生明显，并可见大量炎细胞浸润(中性粒细胞和单核细胞为主)，有的已浸润至腺体上皮细胞，肌层、浆膜无病变。

功血颗粒低剂量组：子宫内膜上皮细胞多数为单层低柱状，固有层腺体上皮无变性、坏死，但可见数量较未孕组增多、与空白组相比有所增多，间质血管扩张充血，纤维结缔组织增生和炎细胞浸润程度的均轻于模型组，肌层、浆膜无病变。

功血颗粒中剂量组：组织学改变基本同低剂量组。

功血颗粒高剂量组：组织学改变基本同低剂量组。

阳性药(宫血宁)组：组织学改变基本同低剂量组，但间质纤维结缔组织增生和炎细胞浸润程度略重于用药组。

本法复制的子宫病变主要表现为子宫内膜固有层腺体数目增多、间质血管扩张充血、大量炎细胞浸润(中性粒细胞和单核细胞为主)、纤维结缔组织增生。功血颗粒应用后固有层腺体数目有所增多，间质纤维结缔组织增生和炎细胞浸润程度有所改善，但各剂量之间无明显差异，用药组较宫血宁组略有改善，而以上各组与模型组相比差异显著。

Claims (5)

1.一种用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血的药物，其特征在于包括下列重量份配比的原料药所制成的药剂：白芍：190-290份；地黄：270-370份；墨旱莲：190-290份；女贞子：190-290份；续断：190-290份；阿胶：30-130份；三七：190-290份；黄芪：430-530份；地骨皮：190-290份；海螵蛸：270-370份。

2.一种制备权利要求1所述的用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血药物的方法，其特征在于制备步骤如下：

a.按照上述重量份数，取白芍、墨旱莲、女贞子、续断、三七和黄芪加乙醇回流提取，滤过，将醇提液减压回收乙醇后浓缩至无醇味，得醇提浓缩液和药渣备用；

b.将上述药渣和熟地黄、地骨皮和海螵蛸合并后用水煎煮，煎液过滤，滤液减压浓缩后加乙醇，搅匀、放置后滤过，滤液回收乙醇，得水提醇沉浓缩液，与步骤a的醇提浓缩液合并，加入烊化后的阿胶，浓缩，真空干燥成干浸膏粉即为药物活性成分。

3.根据权利要求2所述的用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血药物的方法，其特征在于步骤a中所加的乙醇量是饮片总重量的12-18倍，乙醇体积浓度为60-80％，分三次回流提取，三次用量分别为总用量的40％、30％和30％，每次提取1-2小时。

4.根据权利要求2所述的用于治疗肝肾阴虚型无排卵型功血药物的方法，其特征在于步骤b中所加水的量是饮片总重量的15-25倍，分二次煎煮，二次用量分别为总用量的60％和40％，每次1-2小时，煎液过滤后滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.08，在50℃～60℃时测定，浓缩液中加乙醇至醇含量不超过60％vt，搅匀，放置48小时，滤过，滤液回收乙醇与步骤a醇提浓缩液合并，加入烊化后的阿胶，浓缩至相对密度1.10～1.15，在50℃～60℃时测定，在0.080～0.085Mpa、65～70℃真空干燥成干浸膏粉。

5.权利要求1所述的中药在制备治疗肝肾阴虚型无排卵型功血药物中的应用。

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