CN111514222A - 无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用，其无比山药丸由山药、肉苁蓉、五味子、菟丝子、杜仲、牛膝、泽泻、熟地黄、山茱萸、茯苓、巴戟天和赤石脂组成。本发明采用雷公藤多苷灌胃雌性ICR小鼠10周诱发早发性卵巢功能不全(POI)，造模，然后连续对模型小鼠灌胃给药无比山药丸12周，发现与模型对照组相比，无比山药丸给药组可明显增加模型小鼠抓力，缩短平均动情周期天数，增加颗粒细胞层数、窦前卵泡和窦状卵泡数量，降低血清LH水平，表明无比山药丸对POI小鼠有显著的改善作用，从而实现于治疗或改善早发性卵巢功能不全病症的效果，给POI患者带来福音。

Description

无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用

技术领域

本发明中药制剂的技术领域，具体涉及一种无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用，系老药新用途的开发。

背景技术

无比山药丸，原名“无比薯蓣丸”，首见于唐《备急干金要方》，“治诸虚百损”,后因“薯蓣”二字讳名改为“山药”，故《太平惠民和剂局方》收录时改为“无比山药丸”，延续至今。

作为经典方，无比山药丸由12味中药组成，其组分及含量如下：山药300g(30份)、熟地黄100g(10份)、杜仲300g(30份)、肉苁蓉400g(40份)、山茱萸100g(10份)、茯苓100g(10份)、菟丝子300g(30份)、巴戟天100g(10份)、泽泻100g(10份)、牛膝100g(10份)、五味子150g(15份)、赤石脂100g(10份)。该方用山药益肾健脾，配以地黄、山茱萸、五味子培补真阴，肉苁蓉、菟丝子、杜仲、巴戟天温补肾阳，更以赤石脂涩精止遗，泽泻、茯苓泄肾浊，利水湿，阴阳并补、补中有运，补而不滞。临床常用于肾虚阳衰之证，以头目眩晕、耳鸣腰酸、冷痹骨疼、舌质淡、脉虚软为辨证要点。

亦因此，无比山药丸的功能主治为健脾补肾，用于脾肾两虚，食少肌瘦，腰膝酸软，目眩耳鸣。目前临床上的用药，主要体现在治疗尿道综合征(刘旭东.无比山药丸合五苓散加减治疗尿道综合征46例观察[J].实用中医药杂志,2011,27(1):15)、肾病综合征病症(杨尚凌,桂海燕.无比山药丸加减治疗肾病综合征36例[J].湖南中医杂志,2004(1):41)，尚未有文献报道可用于治疗早发性卵巢功能不全病症。

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency，POI)，是指女性在40岁之前由于卵巢活动衰退导致引起的一系列异常表现的临床综合征，其主要特征为月经紊乱(月经稀发或闭经)，同时伴有促性腺激素的升高及雌激素的降低。根据欧洲人类生殖与胚胎学会(TheEuropean Society of Human Reproduction and Embryology，简称ESHRE)的指南规定，早发性卵巢功能不全(POI)的诊断标准为：女性在40岁之前出现月经稀发或闭经大于4个月，间隔4周以上检测两次FSH水平大于25U/L。

早发性卵巢功能不全(POI)是妇科疾病中的疑难病症之一，POI的常见病因包括遗传因素、医源性因素、免疫因素、环境因素等，临床发现目前半数以上的POI患者病因不明确。由于POI的具体发病机制尚不明确，因此也无有效的方法可以恢复卵巢功能(谢幸,孔北华,段涛.妇产科学(第9版)[M].人民卫生出版社,2018)。此外，由于卵巢功能衰退是一个渐进发展的过程，而且临床研究也已证实卵巢功能衰退程度并非一成不变，是一个逐渐变化和波动变化的过程，因此也为早发性卵巢功能不全(POI)的干预和治疗带来诸多不确定性。

综上所述，无比山药丸能否用于治疗或改善早发性卵巢功能不全病症，给POI患者带来福音，是本领域技术人员尚未研究、解决的技术难题。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，提供了一种无比山药丸的制药新用途，即无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用。

为实现上述发明目的，本发明采取了以下技术方案：

无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用，其中无比山药丸由山药、肉苁蓉、五味子、菟丝子、杜仲、牛膝、泽泻、熟地黄、山茱萸、茯苓、巴戟天和赤石脂组成。

优选的，无比山药丸由按如下质量份计的中药成分组成：山药15～45份、熟地黄5～15份、杜仲15～45份、肉苁蓉20～60份、山茱萸5～15份、茯苓5～15份、菟丝子15～45份、巴戟天5～15份、泽泻5～15份、牛膝5～15份、五味子10～20份、赤石脂5～15份。

更优选的，无比山药丸由按如下质量份计的中药成分组成：山药30份、熟地黄10份、杜仲30份、肉苁蓉40份、山茱萸10份、茯苓10份、菟丝子30份、巴戟天10份、泽泻10份、牛膝10份、五味子15份、赤石脂10份。

本发明还提供了一种无比山药丸的剂型应用，所述的剂型可以开发为丸剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂等剂型。

优选的，当无比山药丸的剂型为丸剂时，制备方法如下：

1)取与处方量等比例量的中药材山药、熟地黄、杜仲、肉苁蓉、山茱萸、茯苓、菟丝子、巴戟天、泽泻、牛膝、五味子和赤石脂，分别粉碎成细粉；

2)未细粉化的残留药材用溶剂溶解，加热提取，滤过，滤液浓缩至膏状；

3)将步骤1)和2)制得的细粉和浸膏混合均匀，加入炼蜜或淀粉，以及药学上可接受的辅料，制成软材，再制成大小均匀的丸子，抛光，烘干，即得。

优选的，当无比山药丸的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂等剂型时，制备方法如下：

1)取与处方量等比例量的中药材山药、熟地黄、杜仲、肉苁蓉、山茱萸、茯苓、菟丝子、巴戟天、泽泻、牛膝、五味子和赤石脂，分别粉碎成细粉；

2)未细粉化的残留药材用溶剂溶解，加热提取，滤过，滤液浓缩至膏状；

3)将步骤1)和2)制得的细粉和浸膏混合均匀，加入炼蜜或淀粉，以及药学上可接受的辅料，制成颗粒，进一步制得颗粒剂、胶囊剂、片剂等其他剂型。

优选的，本发明提供的无比山药丸制备方法中，杜仲投料前，用姜汁拌匀，闷透，用文火炒至断丝，表面焦黄色，取出，摊凉，筛去灰屑。

优选的，本发明提供的无比山药丸制备方法中，山茱萸投料前，置适量容器内，蒸8～10小时，焖10～12小时，至表面黑色时，取出，干燥。

优选的，本发明提供的无比山药丸制备方法中，五味子投料前，除去果梗等杂质，洗净，稍晾，置适宜容器内，蒸2～4小时，焖过夜至表面黑色油润时，取出，干燥。

优选的，本发明提供的无比山药丸制备方法中，赤石脂投料前，粉碎成细粉，用醋调匀，搓条，切段，干燥，置适宜的容器内，锻至煅至红透，取出，放凉，捣碎。

综上，与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明采用雷公藤多苷灌胃雌性ICR小鼠10周诱发早发性卵巢功能不全(POI)，造模，然后连续对模型小鼠灌胃给药无比山药丸12周，发现与模型对照组相比，无比山药丸给药组可明显增加模型小鼠抓力，缩短平均动情周期天数，增加颗粒细胞层数、窦前卵泡和窦状卵泡数量，降低血清LH水平，表明无比山药丸对POI小鼠有显著的改善作用，从而实现用于治疗或改善早发性卵巢功能不全病症，给POI患者带来福音。

附图说明

图1为本发明实施例2无比山药丸对雷公藤多苷致POI小鼠卵巢组织形态的影响。

图中，A正常对照组；B模型对照组；C阳性对照组；D无比山药丸高剂量组(3g/kg)；E无比山药丸中剂量组(1.5g/kg)；F无比山药丸低剂量组(0.75g/kg)。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1无比山药丸的处方与制备

本发明涉及的中药组合物无比山药丸，处方组成如下(以质量份计)：山药15～45份、熟地黄5～15份、杜仲15～45份、肉苁蓉20～60份、山茱萸5～15份、茯苓5～15份、菟丝子15～45份、巴戟天5～15份、泽泻5～15份、牛膝5～15份、五味子10～20份、赤石脂5～15份。

具体而言，无比山药丸的最佳处方与含量如下(以质量份计)：山药300g(30份)、熟地黄100g(10份)、杜仲300g(30份)、肉苁蓉400g(40份)、山茱萸100g(10份)、茯苓100g(10份)、菟丝子300g(30份)、巴戟天100g(10份)、泽泻100g(10份)、牛膝100g(10份)、五味子150g(15份)、赤石脂100g(10份)。

本发明所述的无比山药丸，剂型可以为丸剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂等剂型。

丸剂的制备方法如下：

1)取与处方量等比例量的中药材山药、肉苁蓉、五味子、菟丝子、杜仲、牛膝、泽泻、熟地黄、山茱萸、茯苓、巴戟天和赤石脂，分别粉碎成细粉；

其中，杜仲投料前，用姜汁拌匀，闷透，用文火炒至断丝，表面焦黄色，取出，摊凉，筛去灰屑；

山茱萸投料前，置适量容器内，蒸8～10小时，焖10～12小时，至表面黑色时，取出，干燥；

五味子投料前，除去果梗等杂质，洗净，稍晾，置适宜容器内，蒸2～4小时，焖过夜至表面黑色油润时，取出，干燥；

赤石脂投料前，粉碎成细粉，用醋调匀，搓条，切段，干燥，置适宜的容器内，锻至煅至红透，取出，放凉，捣碎。

2)未细粉化的残留药材用溶剂溶解，加热提取，滤过，滤液浓缩至膏状；

3)将步骤1)和2)制得的细粉和浸膏混合均匀，加入炼蜜或淀粉，以及药学上可接受的辅料，制成软材，再制成大小均匀的丸子，抛光，烘干，即得。

颗粒剂、胶囊剂、片剂等剂型的制备方法如下：

1)取与处方量等比例量的中药材山药、肉苁蓉、五味子、菟丝子、杜仲、牛膝、泽泻、熟地黄、山茱萸、茯苓、巴戟天和赤石脂，分别粉碎成细粉；

其中，杜仲投料前，用姜汁拌匀，闷透，用文火炒至断丝，表面焦黄色，取出，摊凉，筛去灰屑；

山茱萸投料前，置适量容器内，蒸8～10小时，焖10～12小时，至表面黑色时，取出，干燥；

五味子投料前，除去果梗等杂质，洗净，稍晾，置适宜容器内，蒸2～4小时，焖过夜至表面黑色油润时，取出，干燥；

赤石脂投料前，粉碎成细粉，用醋调匀，搓条，切段，干燥，置适宜的容器内，锻至煅至红透，取出，放凉，捣碎。

2)未细粉化的残留药材用溶剂溶解，加热提取，滤过，滤液浓缩至膏状；

3)将步骤1)和2)制得的细粉和浸膏混合均匀，加入炼蜜或淀粉，以及药学上可接受的辅料，制成颗粒，进一步制得颗粒剂、胶囊剂、片剂等其他剂型。

实施例2无比山药丸对POI模型小鼠的影响

1、实验背景

雷公藤多苷(GTW)是雷公藤根芯部分的水氯仿提取物，具有免疫抑制、抗肿瘤、抗炎等作用，但其副作用也非常明显，特别是使用药物过量引起的早发性卵巢功能不全，已有多起不良反应报告。

临床研究表明，雷公藤多苷可导致POI，患者表现为月经不调或闭经，E₂水平下降，以及FSH、LH水平升高(杨涓,董江川,韩冰.雷公藤多苷对女性生殖内分泌系统的影响[J].中国药理学与毒理学杂志,2006,20(5):437-440)。

现代药理结果也表明，雷公藤多苷可造成POI动物模型，模型动物出现动情周期延长或无动情周期，各级卵泡数量减少，E₂、P等性激素水平紊乱，还能促使卵巢颗粒细胞凋亡(刘杰,张茜,陈瑛.雷公藤对雌性大鼠性激素水平、卵巢内细胞凋亡以及骨代谢状况影响的联合观察与分析[J].海南医学院学报,2018,24(14):1303-1306)。

因此，本实验拟采用雷公藤多苷造模POI小鼠，研究无比山药丸与POI的治疗效果。

2、实验材料

1)实验动物

SPF级ICR小鼠100只，雌性，20±2g，购自浙江省实验动物中心，合格证号：No1904110005，动物生产许可证号：SCXK(浙)2014-0001。

2)实验药品

①受试药

无比山药丸(按实施例1的最佳处方制得)，打成粉末状，用蒸馏水配置成(0.3g/mL、0.15g/mL、0.075g/mL)，备用。

②阳性对照药：

醋酸甲羟孕酮片(购自浙江仙琚制药股份有限公司，国药准字H33020715，批号160922)，打成粉末状，用蒸馏水制成0.15mg/mL的溶液；

戊酸雌二醇片(DELPHARM Lolle S.A.S.，国药准字J20171038，批号411A)，打成粉末状，用蒸馏水制成0.015mg/mL的溶液，备用。

3)实验试剂

促黄体生成素(LH)，购自上海钰博生物科技有限公司有限公司，生产批号：202004；

促卵泡生成素(FSH)，购自江苏酶免实业有限公司，生产批号：MM-0555M1；

雌二醇(E₂)，购自江苏酶免实业有限公司，生产批号：MM-0566M1；

孕酮(P)，购自江苏酶免实业有限公司，生产批号：MM-0568M1。

4)实验仪器

LEICARM2245型半自动切片机(购自德国Leica公司)；Tissue-TekVIP5Jr自动脱水机(购自日本樱花检验仪器株式会社)；MEIKOEC360包埋机(购自德国MEIKO公司)；BA410生物显微镜(购自Motic公司)；Powerwave340酶标仪(购自美国BIO-TEK公司)；Microcl17微量离心机(购自美国Thermo公司)。

3、实验方法

1)造模与给药

ICR小鼠，雌性，筛选60只正常动情周期小鼠，按体重随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(戊酸雌二醇0.15mg·kg^-1·d^-1连续四天后，用醋酸甲羟孕酮片1.5mg·kg^-1·d^-1仅一天，停药一天后，继续按以上方法用药)、无比山药丸高剂量组(3g/kg)、无比山药丸中剂量组(1.5g/kg)、无比山药丸低剂量组(0.75g/kg)，每组10只。

剂量设计依据：无比山药丸临床剂量为18g/人/天，则临床拟用剂量根据60kg人体重计算得0.3g/kg。按人剂量的约10倍换算成小鼠药效实验高剂量为3g/kg，根据高剂量：中剂量：低剂量＝4:2:1。设计得到大鼠药效剂量为3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg，分别为临床拟用剂量的10倍、5倍、2.5倍。除正常对照组外，其余各组灌胃给予40mg·kg^-1雷公藤多苷溶液，正常对照组灌胃给予等量生理盐水，每日一次。造模后，除正常对照组及模型对照组按体重灌胃给予容积为1mL/100g蒸馏水，各给药组分别灌胃给予相应药物，灌胃容积为1mL/100g体重，每日一次，连续12周。

2)指标测定

①一般行为学指标动情周期观察：于末次给药后，分别测定小鼠背温、抓力和自主活动等行为学指标：

a.背温：安静环境下，用红外测温仪对准小鼠背部，当红外测温仪稳定后记录所测数据，测定3次，取平均值；

b.抓力：抓持小鼠尾根处，待小鼠用力抓住抓力板时及时加力后拉，记录所测数据，测定3次，取平均值；

c.自主活动：安静环境下，先将小鼠置于自主活动仪中适应2min后，再开始时记录5min内总活动次数。

②动情周期观察

本实验观察小鼠在不同给药时间段的动情周期变化，并以此来判断是否有药效。故将整个给药过程分四个阶段，给药第一阶段为给药第零周，即造模成功后，给药第二阶段为第三到四周，给药第三阶段为第七到八周，给药第四阶段为第十一到十二周。每天早晨9点对所有小鼠进行阴道脱落细胞涂片检查，显微镜观察脱落细胞形态。

具体操作：用移液枪吸取150uL生理盐水，滴入小鼠阴道，反复抽吸三次后，将液体滴在载玻片上，盖上盖玻片后置于光学显微镜下观察。

判定标准为：

a.动情前期。大量椭圆形有核上皮细胞，伴少量角化上皮细胞。

b.动情期。大量角化上皮细胞，呈落叶堆叠状。

c.动情后期。数量相近的角化上皮细胞、白细胞及有核上皮细胞。

d.动情间期。以白细胞为主，少量上皮细胞和粘液。

③血清性激素水平

末次给药后眼眶取血，测定血清促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E₂)、孕酮(P)水平。

④脏器指数

处死小鼠后，剖开腹腔，取子宫和卵巢，称量湿重，计算子宫和卵巢指数。

⑤卵巢组织形态观察

将4％甲醛固定的子宫和卵巢组织进行脱水、包埋、切制4μm厚的石蜡切片后，进行常规HE染色，于光学显微镜下观察组织形态，并每组选取6个切片，观察卵巢中窦前卵泡、窦状卵泡、排卵前卵泡、黄体和闭锁卵泡数目。

⑥统计分析

所有数据结果均采用均数±标准差表示，组间做两样本均数比较的t检验，以P<0.05，P<0.01为差异有统计学意义。

4、实验结果

1)对雷公藤多苷致POI小鼠一般行为的影响

与模型对照组比较，无比山药丸中剂量组小鼠抓力明显升高(P<0.05)，见表1。

表1.对雷公藤多苷致POI小鼠自主活动、抓力、背温的影响(n＝10)

注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2)对雷公藤多苷致POI小鼠动情周期的影响

给药第一阶段，即造模成功后，与正常对照组比较，各组小鼠平均动情周期均明显延长(P<0.05，P<0.01)；同时在整个给药过程中，与正常对照组比较，模型对照组平均动情周期均明显延长(P<0.01)。给药第二和第三阶段，与模型对照组比较，无比山药丸给药组平均动情周期天数有缩短趋势，但无统计学意义。给药第四阶段，与模型对照组比较，无比山药丸中、低剂量组平均动情周期天数明显缩短(P<0.05，P<0.01)，见表2。

表2.对雷公藤多苷致POI小鼠动情周期的影响(n＝10)

注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3)对雷公藤多苷致POI小鼠脏器指数的影响

与模型对照组比较，无比山药丸给药组的子宫指数和卵巢指数均有升高趋势，但无统计学意义，见表3。

表3.对雷公藤多苷致POI小鼠体重、子宫指数和卵巢指数的影响(n＝10)

注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4)对雷公藤多苷致POI小鼠血清性激素的影响

与正常对照组比较，模型对照组血清E2、P明显降低(P<0.05)，模型对照组血清LH明显升高(P<0.05)；与模型对照组比较，无比山药丸低剂量组E2明显降低(P<0.01)，无比山药丸三个剂量组LH明显降低(P<0.01)，见表4。

表4.对雷公藤多苷致POI小鼠血清性激素的影响(n＝10)

注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

5)对雷公藤多苷致POI小鼠卵巢组织形态和各级卵泡数量的影响

与正常对照组比较，模型对照组小鼠颗粒细胞层数明显减少，窦前、窦状卵泡数量明显减少(P<0.05，P<0.01)，闭锁卵泡数模型增加(P<0.05)。与模型对照组比较，无比山药丸各剂量组颗粒细胞层数明显增加，无比山药丸三个剂量组小鼠窦前卵泡数明显增加(P<0.05，P<0.01)，无比山药丸中、低剂量组小鼠窦状卵泡数明显增加(P<0.01)，见图1和表5。

表5.对雷公藤多苷致POI小鼠卵巢各级卵泡数的影响(n＝6)

注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

综上实验结果可知，与正常对照组比较，模型对照组小鼠平均动情周期天数明显延长，颗粒细胞层数明显减少，窦前和窦状卵泡数明显减少，闭锁卵泡数明显增加，血清E₂、P水平明显降低，LH水平明显升高，表明造模成功。与模型对照组比较，无比山药丸可明显增加模型小鼠抓力，缩短平均动情周期天数，增加颗粒细胞层数、窦前卵泡和窦状卵泡数量，降低血清LH水平。这意味着，无比山药丸对雷公藤多苷致早发性卵巢功能不全模型小鼠具有一定的改善作用，可用于开发治疗早发性卵巢功能不全的新适应症。

Claims (9)

1.无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用，其特征在于，所述的无比山药丸由山药、肉苁蓉、五味子、菟丝子、杜仲、牛膝、泽泻、熟地黄、山茱萸、茯苓、巴戟天和赤石脂组成。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸由按如下质量份计的中药成分组成：山药15～45份、熟地黄5～15份、杜仲15～45份、肉苁蓉20～60份、山茱萸5～15份、茯苓5～15份、菟丝子15～45份、巴戟天5～15份、泽泻5～15份、牛膝5～15份、五味子10～20份、赤石脂5～15份。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸由按如下质量份计的中药成分组成：山药30份、熟地黄10份、杜仲30份、肉苁蓉40份、山茱萸10份、茯苓10份、菟丝子30份、巴戟天10份、泽泻10份、牛膝10份、五味子15份、赤石脂10份。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸的剂型为丸剂，制备方法如下：

1)取与处方量等比例量的中药材山药、熟地黄、杜仲、肉苁蓉、山茱萸、茯苓、菟丝子、巴戟天、泽泻、牛膝、五味子和赤石脂，分别粉碎成细粉；

2)未细粉化的残留药材用溶剂溶解，加热提取，滤过，滤液浓缩至膏状；

3)将步骤1)和2)制得的细粉和浸膏混合均匀，加入炼蜜或淀粉，以及药学上可接受的辅料，制成软材，再制成大小均匀的丸子，抛光，烘干，即得。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂等剂型，制备方法如下：

1)取与处方量等比例量的中药材山药、熟地黄、杜仲、肉苁蓉、山茱萸、茯苓、菟丝子、巴戟天、泽泻、牛膝、五味子和赤石脂，分别粉碎成细粉；

2)未细粉化的残留药材用溶剂溶解，加热提取，滤过，滤液浓缩至膏状；

3)将步骤1)和2)制得的细粉和浸膏混合均匀，加入炼蜜或淀粉，以及药学上可接受的辅料，制成颗粒，进一步制得颗粒剂、胶囊剂、片剂等剂型。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸制备方法中，杜仲投料前，用姜汁拌匀，闷透，用文火炒至断丝，表面焦黄色，取出，摊凉，筛去灰屑。

7.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸制备方法中，山茱萸投料前，置适量容器内，蒸8～10小时，焖10～12小时，至表面黑色时，取出，干燥。

8.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸制备方法中，五味子投料前，除去果梗等杂质，洗净，稍晾，置适宜容器内，蒸2～4小时，焖过夜至表面黑色油润时，取出，干燥。

9.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述的无比山药丸制备方法中，赤石脂投料前，粉碎成细粉，用醋调匀，搓条，切段，干燥，置适宜的容器内，锻至煅至红透，取出，放凉，捣碎。

Images