CN107802733B - 一种补肾育胎中药组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种补肾育胎的中药组合物,属于中药技术领域,所述的中药组合物由以下原料药制成:熟地黄、黄芪、女贞子、麦冬、白芍、党参、香附、菟丝子、当归、补骨脂、丹参、甘草。本发明还提供该中药组合物的应用。其优点表现在:本发明的中药组合物显著提高了肾气虚型患者促排阶段的雌激素水平,获取较高的取卵数、受精数、发育胚胎数和优质胚胎数。显著增加子宫内膜血管内皮生长因子的表达,降低了肾气虚型患者子宫内膜下血流参数PI、RI,增加血流灌注,进而改善患者的子宫内膜容受性。可以显著增加鲜胚移植率,有增加临床妊娠率、种植率和持续妊娠率趋势。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域,具体地说,是一种补肾育胎中药组合物及其应用。
背景技术
受婚育年龄的延后、环境污染、生活压力等多种因素的影响,我国10-15%的育龄妇女遭受不孕的痛苦,不孕症已成为影响家庭健康的严重卫生问题。现如今当传统的治疗手段(促排卵、宫腹腔镜手术、人工授精等)失败后,体外受精-胚胎移植(IVF-ET)成为其治疗的最有效手段。自2012年以来,我国每年有超过60万例的人接受IVF-ET治疗,现在仍呈上升趋势。
年轻或者卵巢功能正常的妇女常用长方案,短方案用于年纪较大或者卵巢功能较低的妇女,随着应用的广泛化,两种方案的弊端也渐渐显露出来,卵巢过度刺激综合征(OHSS)就是常见的并发症,中、重度卵巢过度刺激综合征的发生率为10-30%,多表现为全身血管通透性改变而引起的胸水、腹水、有效血液循环不足、肝肾损伤及呼吸功能障碍等的全身性病变,重者危及生命安全。这些方案取卵时因卵子数目多要多次穿刺,这增加患者的出血、感染的机会,另外由于高雌激素的作用,子宫内膜与胚胎不同步,容受性下降,与此同时还增加了患者乳腺、子宫、卵巢疾患的发病风险,也延长了治疗周期并增加了就诊次数,加剧了病人的身心困扰和经济负担。
此时新方案——温和促排卵方案逐渐流行,逐渐受到生殖医学界的关注和应用,也越来越受到患者的广泛认可和接受。温和刺激方案不需要GnRHa降调,对卵巢深度抑制得到了解除,Gn应用剂量明显减少。在温和刺激方案促排卵中Gn的总应用剂量为经典方案的1/3以下,因此显著降低了卵巢过度刺激和术后出血以及雌激素依赖性疾病风险,也大大增加了治疗过程中和取卵手术后的身体舒适度。温和刺激方案治疗中,应用枸橼酸氯米芬(CC)因为能够有效抑制LH峰、抑制早发排卵而被常规应用。不足之处CC的抗雌激素作用,使得子宫内膜容受性下降,因此往往不能够在取卵当月做新鲜胚胎移植,需要做冻融胚胎移植。冻融胚胎移植增加了治疗环节,也在一定程度上增加了治疗费用。同时在胚胎冷冻移植过程中,我们发现部分患者用雌激素药物后孕酮值升高,取消移植率增加,因此采用温和刺激方案提高鲜胚移植率,增加妊娠率减少病人的就诊次数与时间值得进一步探索。
中国专利申请200510200076.X公开了一种治疗妇科疾病的妇科再造胶囊,由当归、香附、白芍、熟地黄、阿胶、茯苓、党参、黄芪、山药、白术、女贞子、龟甲、山茱萸、续断、杜仲、肉苁蓉、覆盆子、鹿角霜、川芎、丹参、牛膝、益母草、延胡索、三七、艾叶、小茴香、蒿本、海螵蛸、地榆、益智、泽泻、荷叶、秦艽、地骨皮、白薇、椿皮、琥珀、黄芩、酸枣仁、远志、陈皮、甘草42味中草药制成。中国专利申请201110431749.8公开了一种孕康胶囊,由下列中药制成:阿胶、山药、续断、黄芪、当归、狗脊、菟丝子、桑寄生、杜仲、补骨脂、党参、茯苓、白术、地黄、山茱萸、枸杞子、乌梅、白芍、砂仁、益智、苎麻根、艾叶、黄芩。但是本发明的补肾育胎中药组合物目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足,提供一种补肾育胎中药组合物。
本发明的第二个目的是,提供一种补肾育胎中药组合物的应用。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案是:一种补肾育胎的中药组合物,所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成:熟地黄10~20份、黄芪10~20份、女贞子3~9份、麦冬3~9份、白芍3~9份、党参5~13份、香附5~13份、菟丝子3~9份、当归5~13份、补骨脂5~13份、丹参5~13份、甘草2~4份。
优选的,所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成:熟地黄13~17份、黄芪13~17份、女贞子5~7份、麦冬5~7份、白芍5~7份、党参8~10份、香附8~10份、菟丝子5~7份、当归8~10份、补骨脂8~10份、丹参8~10份、甘草2.5~3.5份。
优选的,所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成:熟地黄15份、黄芪15份、女贞子6份、麦冬6份、白芍6份、党参9份、香附9份、菟丝子6份、当归9份、补骨脂9份、丹参9份、甘草3份。
为实现上述第二个目的,本发明采取的技术方案是:所述的中药组合物在制备辅助生殖医学药物中的应用。
进一步地,所述的中药组合物在制备治疗输卵管性不孕的药物中的应用。
进一步地,所述的中药组合物在制备体外受精-胚胎移植治疗药物中的应用。
进一步地,所述的中药组合物在制备肾气虚型患者行体外受精-胚胎移植治疗的药物中的应用。
进一步地,所述的药物剂型为口服制剂。
进一步地,所述的口服制剂为丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂或口服液。
本发明优点在于:
1、本发明的中药组合物显著提高了肾气虚型患者促排阶段的雌激素水平,获取较高的取卵数、受精数、发育胚胎数和优质胚胎数。
2、本发明的中药组合物显著增加子宫内膜血管内皮生长因子的表达,降低了肾气虚型患者子宫内膜下血流参数PI、RI,增加血流灌注,进而改善患者的子宫内膜容受性。
3、本发明的中药组合物可以显著增加鲜胚移植率,有增加临床妊娠率、种植率和持续妊娠率趋势。
4、方解:熟地黄性甘、微温,黄芪补脾益气固表;两者配伍为君药是补肾益气之正药;党参、补骨脂、女贞子、菟丝子四药配伍为臣药,加强补益肝肾之作用;白芍、麦冬、香附、丹参、当归、共为佐药,补血活血使整个方中补而不腻;甘草为使药,补脾益气,调和诸药之功。
君药:熟地黄性甘、微温,可以补血滋阴、填精益髓。《药品化义》言:“熟地,藉酒蒸熟,味苦化甘,性凉变温,专人肝脏补血……安五脏,和血脉,润肌肤,滋补真阴,封填骨髓,为圣药也。”导师认为月经周期中卵泡期以滋补肾阴为主,此时用熟地黄最恰到好处。黄芪:味甘性温,益气固表、敛汗固脱、补肾之功效。《本草纲目》中解释“耆者,长也,黄耆色黄,补药之长,故名。《汤液本草》王好古:“治气虚盗汗并自汗……又治伤寒尺脉不至,又补肾脏元气,为里药,是上中下内外三焦之药”。导师强调用药的关键在于推动人体的正气,不产生内邪,气虚甚者可以加大黄芪的剂量。熟地黄和黄芪两者配伍为君药是补肾益气之正药。
臣药:党参味甘性平,可以补中益气、生精养血、调理脾胃。《本经逢派》一书谓上党人参,是一味补气的常用药,《本草从新》中记载:“补中益气,和脾胃除烦渴。”党参与黄芪配伍加强益气补虚的作用。补骨脂:其性温,味辛、苦,具有补肾助阳的功效,《本草纲目》中记载:“补骨脂主治妇人血气堕胎,男子腰疼……治肾泄,通命门,暖丹田,敛精神。”女贞子性味甘、苦、凉,有补益肝肾,强腰膝,明耳目,乌须发之效。《本草经疏》载:“女贞子,气味俱阴,正入肾除热补精之要品,肾得补,则五脏自安,精神自足,百病去而身肥健矣。”李时珍谓其“果实强阴健腰膝,变白发,明目”。可以治疗腰膝酸软、阴虚内热等疾病。菟丝子药性中和,甘辛微温,补阴益阳,是一味平补肝肾的良药,具有补阳而不燥,补阴而不腻的特点。正如张景岳所说:“善补阴者,必于阳中求阴,则阴得阳助而泉源不竭;善补阳者,必于阴中求阳,则阳得阴助而生化无穷”。四药配伍为臣药,既能润养肝肾之阴,又能温补肾阳,使补阳而不燥,补阴而不腻加强补益肝肾之作用。
佐药:白芍酸、苦、凉,可以养血柔肝,缓中止痛。陶弘景在《本草经集注》中记载:“主治邪气腹痛,除血痹,破坚积,寒热,疝瘕,止痛,利小便,益气。通顺血脉……腹痛,腰痛。”麦冬味甘、微苦,性微寒,有养阴生津、润肺清心之功效,《本草正义》:“麦冬,其味大甘,膏脂浓郁,故专补胃阴,滋津液,本是甘药补益之上品。”对于治疗热病伤阴,津液未复,肺胃液耗等证效果甚佳。香附性辛,味微苦、微甘、平,是疏肝解郁、调经止痛要药,《汤液本草》中记载:“香附子,益血中之气药也。方中用治崩漏,是益气而止血也。又能化去凝血,是推陈也。”善通三焦,行血中之气而理气活血。丹参性味苦,微寒,是典型的活血化瘀药,可以祛瘀止痛、通经、清心除烦。《云南中草药选》中这样记载它的功效“活血散瘀,镇静止痛。治月经不调,痛经,风湿痹痛,子宫出血,吐血,乳腺炎,痈肿。”
使药:甘草味甘、性平,可以补脾益气,缓急止痛,调和诸药。李时珍在《本草纲目》中释:“诸药中甘草为君,治七十二种乳礴,解一千二百草木毒,调和众药有功,故有‘国老’之号”。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1中药组合物
熟地黄15份、黄芪15份、女贞子6份、麦冬6份、白芍6份、党参9份、香附9份、菟丝子6份、当归9份、补骨脂9份、丹参9份、甘草3份。
实施例2中药组合物
熟地黄10份、黄芪10份、女贞子3份、麦冬7份、白芍6份、党参5份、香附10份、菟丝子5份、当归13份、补骨脂8份、丹参10份、甘草2份。
实施例3中药组合物
熟地黄11份、黄芪12份、女贞子4份、麦冬6份、白芍7份、党参6份、香附8份、菟丝子7份、当归5份、补骨脂10份、丹参8份、甘草3份。
实施例4中药组合物
熟地黄12份、黄芪14份、女贞子5份、麦冬5份、白芍6份、党参7份、香附11份、菟丝子4份、当归12份、补骨脂13份、丹参13份、甘草4份。
实施例5中药组合物
熟地黄13份、黄芪16份、女贞子6份、麦冬9份、白芍5份、党参8份、香附7份、菟丝子8份、当归6份、补骨脂5份、丹参12份、甘草2.5份。
实施例6中药组合物
熟地黄14份、黄芪18份、女贞子7份、麦冬8份、白芍9份、党参9份、香附12份、菟丝子3份、当归11份、补骨脂6份、丹参11份、甘草3份。
实施例7中药组合物
熟地黄15份、黄芪20份、女贞子8份、麦冬7份、白芍8份、党参10份、香附6份、菟丝子9份、当归7份、补骨脂7份、丹参10份、甘草3.5份。
实施例8中药组合物
熟地黄16份、黄芪11份、女贞子9份、麦冬6份、白芍7份、党参11份、香附13份、菟丝子5份、当归10份、补骨脂8份、丹参9份、甘草2份。
实施例9中药组合物
熟地黄17份、黄芪13份、女贞子5份、麦冬5份、白芍6份、党参12份、香附5份、菟丝子6份、当归8份、补骨脂9份、丹参8份、甘草3份。
实施例10中药组合物
熟地黄18份、黄芪15份、女贞子6份、麦冬4份、白芍5份、党参13份、香附8份、菟丝子7份、当归10份、补骨脂10份、丹参7份、甘草4份。
实施例11中药组合物
熟地黄19份、黄芪17份、女贞子7份、麦冬3份、白芍4份、党参10份、香附9份、菟丝子5份、当归9份、补骨脂11份、丹参6份、甘草2.5份。
实施例12中药组合物
熟地黄20份、黄芪19份、女贞子6份、麦冬6份、白芍3份、党参8份、香附10份、菟丝子7份、当归8份、补骨脂12份、丹参5份、甘草3.5份。
实施例13煎剂
实施例1-12的中药组合物,煎煮方法如下:将饮片放入清水中浸泡半个小时,水面高于中药2-3cm,将浸泡过的中药放入煎锅中大火煮开,小火煎煮30分钟,将药汁倒出,再加水大火煮开,小火煎煮25分钟,再将药汁倒出,两次药汁混合。
实施例14颗粒剂
实施例1-5的中药组合物,加水煎煮3次,合并滤液,浓缩至相对密度为1.1的清膏。清膏加入乙醇,静置24小时,滤过,回收乙醇,浓缩至相对密度为1.2的稠膏。稠膏进行喷雾干燥,得干膏细粉。将干膏细粉加入糊精,混合均匀,按常规方法制粒,干燥,制成颗粒剂。
实施例15分散片
实施例1-12的中药组合物,加水煎煮3次,合并滤液,浓缩至相对密度为1.1的清膏。清膏进行喷雾干燥,得到干膏细粉。将干膏细粉与羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀,按常规方法制粒,干燥,加入硬脂酸镁、二氧化硅,混匀,按常规方法压片,制成分散片。
实施例16胶囊剂
实施例1-12的中药组合物,加水煎煮3次,合并滤液,浓缩至相对密度为1.15的清膏。清膏进行喷雾干燥,得到干膏细粉。加入硬脂酸镁、滑石粉,混匀,按常规方法加入空心胶囊,制成胶囊剂。
实施例17丸剂
实施例1-12的中药组合物,加水煎煮3次,合并滤液,浓缩至相对密度为1.18的清膏。清膏进行喷雾干燥,得到细粉。加入适量水或/和黄酒,制成水丸剂。或加入适量乙醇和大豆油制成软材,软材用微丸制丸机制丸,干燥,过筛,制成微丸。或以聚乙二醇为基质、二甲基硅油为冷凝液,滴制成丸,制成滴丸剂。
实施例18口服液
实施例1-12的中药组合物,加水煎煮3次,合并滤液,浓缩至相对密度为1.1的清膏。清膏加入乙醇,静置24小时,滤过,回收乙醇,浓缩至相对密度为1.2的稠膏。按常规方法取甜菊糖溶解于纯水中,加入苯甲酸钠、纯化水,与稠膏混合均匀,制成口服液。
实施例19散剂
实施例1-12的中药组合物,用粉碎机粉碎成细末。过筛,然后将过筛后的细粉投入混合搅拌机充分混匀,获得散剂。
实施例20临床试验
资料与方法
1研究对象
1.1病例来源
病例来源于2015年3月-2016年9月曙光医院生殖中心就诊的为肾气虚型的不孕患者,每位患者均签署知情同意书。
1.2研究对象诊断标准
1.2.1西医的诊断标准
(1)夫妻双方有正常性生活,且未避孕1年未妊娠者。
(2)单纯的输卵管性不孕的患者。
①子宫输卵管造影:证实输卵管不通畅、阻塞或积水等。
②腹腔镜检查后证实输卵管不通或不通畅,并且盆腔内粘连。以上两项有一项符合即可诊断。
(3)男方精液正常:密度≥15×106mol/L,PR≥40%。
1.2.2中医肾气虚的诊断标准
主证:
(1)不孕;
(2)经色淡黯或经质稀;
(3)腰骶酸痛;
(4)阴中干涩;
(5)舌质淡红,苔薄白或少苔;
(6)两尺脉沉细或沉细数。
兼证:
(1)头晕耳鸣;
(2)性欲减退;
(3)胫酸膝软或足跟痛;
(4)耳鸣耳聋。
以上主证必备,兼证具备1~2项即可诊断(详见中医体质量表的研究)。
1.3研究对象纳入标准
(1)符合不孕症诊断标准的患者;
(2)单纯的输卵管性不孕的患者;
(3)卵巢储备功能促卵泡刺激素<10的患者;
(4)中医辨证为肾气虚型的患者;
(5)年龄在25-45岁的患者;
(6)女方体重指数(BMI)在18-25之间;
(7)男方精液检查正常;
(8)无吸烟、酗酒等不良嗜好;
(9)签署相关知情同意书的患者。
2研究方法
根据随机对照的原则将符合纳入标准的患者分为对照组和治疗组,对照采用常规的温和刺激方案,即月经期第三天服用克罗米芬(CC)25mg,qd,直到取卵的前一天,同时启动促性腺激素(FSH/Gn)丽申宝或尿促性腺激素150U qod,根据卵泡大小和激素情况调整剂量,待卵泡成熟时用达菲林0.1mg扳机取卵,治疗组则在温和刺激的基础上服用实施例1的中药组合物(服用时间月经第三天到取卵日)——熟地黄15g、黄芪15g、女贞子6g、麦冬6g、白芍6g、党参9g、香附9g、菟丝子6g、当归9g、补骨脂9g、丹参9g、甘草3g。煎煮方法如下:将饮片放入清水中浸泡半个小时,水面高于中药2-3cm,将浸泡过的中药放入煎锅中大火煮开,小火煎煮30分钟,将药汁倒出,再加水大火煮开,小火煎煮25分钟,再将药汁倒出,两次药汁混合大约300-500ml,分早晚两次于饭后半个小时左右内服用。忌口:辛辣、生冷、腥膻、油腻、萝卜、浓茶、咖啡、虾蟹等食物。
若病人在扳机日满足以下条件:①内膜厚度≥8mm;②形态为A或B,血流+或者±以上;③HCG日孕酮<1.5pg/ml,考虑用雪诺酮90mg,阴塞,1支/天转化内膜。待看胚胎结果日若满足以下条件:①内膜厚度≥8mm;②形态为A或B,血流+或者±以上;③优质胚胎数≥2枚;④病人一般情况可,无OHSS风险以及其他不适症状,方可鲜胚移植。移植胚胎后冲洗胚胎移植管,获取内膜组织细胞,组织在PBS液体中冲洗后,在50ul RNA later中于-60℃保存。Picopure微量RNA提取盒提取RNA,转换成cDNA,在Taqman7500平台做定量测定和分析。
3.统计学方法
所有数据均采用SPSS21.0软件包进行统计学处理,所有计量资料均用s(均数±标准差)表示,两样本比较采用t检验;计量资料用百分率n(%)表示,采用X2检验;相关性检验采用相关分析。p<0.05为有统计学差异,p<0.01为有显著性统计学差异。
结果
1.两组患者基本资料的比较
本研究共收集219例肾气虚型患者,脱落8例,有效病例数211例,其中106名为对照组,105名为治疗组。治疗组与对照组两组患者的一般资料(平均年龄、不孕年限、体重指数、原发与继发)比较均无统计学差异(p>0.05)。详见如下表所示:
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
表2两组患者一般资料的比较百分比(%)
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
治疗组与对照组两组患者的基础性激素,包括:基础FSH、LH、E2水平比较差异均无统计学意义(p>0.05);治疗组与对照组的卵巢储备窦卵泡数(AFC)比较差异亦无统计学意义(p>0.05)。两组患者的基础性激素和窦卵泡数(AFC)比较结果如下表所示:
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
2.两组患者肾气虚证候评分的比较
入组时两组患者肾气虚证候评分比较,差异无统计学意义(p>0.05);取卵日两组患者证候评分再次比较,差异无统计学意义(p>0.05);对照组前后证候评分比较,差异无统计学意义(p>0.05);治疗组前后证候评分比较,差异无统计学意义(p>0.05)。详见如下表所示:
表4两组患者前后肾气虚证候评分的比较
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01;与本组治疗前后的比较。#p<0.05,##p<0.01。
3.两组患者促排卵第七日各个指标的比较
两组促排卵治疗第七日,子宫内膜的厚度治疗组(6.86±2.22mm)高于对照组(6.72±2.12mm),差异无统计学意义(p>0.05);LH水平治疗组(6.81±3.37mIU/mL)高于对照组(7.20±5.07mIU/mL),P水平治疗组(1.01±0.49ng/mL)高于对照组(0.90±0.44ng/mL),差异无统计学意义(p>0.05);E2水平治疗组(1645.7±993.8pg/mL)显著高于对照组(1266.8±972.2pg/mL),差异有统计学意义(p<0.01),详见如下表所示:
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
4.两组患者扳机日各个指标的比较
4.1子宫内膜厚度与性激素的比较
扳机日两组子宫内膜的厚度治疗组(8.71±2.62mm)高于对照组(8.34±2.70mm),差异无统计学意义(p>0.05);LH水平治疗组(7.86±3.76mIU/mL)低于对照组(8.69±6.32mIU/mL),差异无统计学意义(p>0.05);P水平治疗组(1.26±0.80ng/mL)高于对照组(1.21±0.88ng/mL)比较,差异均无统计学意义(p>0.05);E2水平治疗组(2510.8±1135.5pg/mL)高于对照组(2098.6±1215.5pg/mL),差异有统计学意义(p<0.05)。详见如下表所示:
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
4.2两组患者扳机日内膜形态的比较人数(%)
扳机日对照组A型内膜人数42例(39.6%)、B型内膜人数35例(33.0%)、C型内膜人数29例(27.4%)与治疗组A型内膜人数50例(47.6%)、B型内膜人数34例(32.4%)、C型内膜人数21例(20%)比较,差异无统计学意义(p>0.05)。详见如下表所示:
表7两组患者扳机日内膜形态的比较(%)
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
4.3两组患者扳机日内膜下血流分布的比较(%)
扳机日对照组内膜血流“+”人数41例(38.7%)、内膜血流“±”型人数30例(30.2%)、内膜血流“-”型内膜人数35(31.1%)与治疗组内膜血流“+”人数52例(49.5%)、内膜血流“±”型人数35例(33.3%)、内膜血流“-”型内膜人数18例(17.2%)比较,差异有统计学意义(p<0.05)。详见如下表所示:
表8两组患者扳机日内膜下三种血流分布的比较(%)
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
4.4两组患者扳机日内膜下血流参数PI、RI的比较
扳机日治疗组子宫内膜下血流参数搏动指数(PI)的值(1.05±0.75)显著低于对照组(1.43±0.72);治疗组阻力指数(RI)的值(0.59±0.49)显著低于对照组(0.74±0.22),差异均有显著的统计学意义(p<0.01)。详见如下表所示:
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
5.两组患者鲜胚移植日子宫内膜厚度与超声学指标的比较
5.1组患者鲜胚移植日子宫内膜厚度比较
鲜胚移植日对照组34人,治疗组45人,内膜厚度治疗组(9.98±1.81mm)高于对照组(9.14±1.24mm),差异无统计学意义(p>0.05)。
5.2两组患者鲜胚移植日内膜下血流的比较人数(%)
鲜胚移植日对照组内膜血流“+”人数11例(32.4%)、内膜血流“±”型人数10例(29.4%)、内膜血流“-”型内膜人数13(38.2%)与治疗组内膜血流“+”人数24例(53.3%)、内膜血流“±”型人数15例(33.3%)、内膜血流“-”型内膜人数6例(13.4%)比较,差异有统计学意义(p<0.05)。详见如下表所示:
表10两组患者鲜胚移植日内膜下血流分布的比较(%)
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
6.两组患者Gn用药量以及平均用药天数的比较
两组患者自入组开始用药到鲜胚移植日,治疗组Gn用药量(1278±387u)略高于对照组Gn用药量(1296±372u),差异无统计学意义(p>0.05);治疗组平均用药天数(11.83±1.58d)与对照组平均用药天数为(11.45±1.39d)相比,差异无统计学意义(p>0.05);详见如下表所示:
表11两组患者Gn用药量和平均用药天数的比较(x±S)
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
7.两组患者卵子以及胚胎质量的比较。
治疗组取卵数(6.22±3.13)高于对照组(5.41±3.37),差异没有统计学意义(p>0.05);治疗组受精数(5.30±2.87)高于对照组(4.24±3.10),发育胚胎数(5.10±2.80)高于对照组(3.78±2.56),优质胚胎数(4.22±2.22)高于对照组(3.01±1.96),有显著的统计学差异(p<0.01)。详见如下表所示:
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
8.两组患者子宫内膜容受性相关基因表达的比较
通过PCR技术得到不同基因的CT值,CT值是指每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数,CT值与相应mRNA的表达水平呈负相关,即CT值增加,表示相应基因mRNA水平下降。实时荧光定量PCR的定量分析使用2-ΔΔCt方法。根据2-ΔΔCt水平反映LIF、IL-6、IL-8、VGEF、HOXAlO mRNA表达水平。相对表达量公式:(理论前提:目标基因和内参看家基因引物的扩增效率一致)。以β-actin为内参,进行一系列荧光定量PCR反应,反应体系及反应条件同下。目的基因与内参的扩增斜线差值小于0.1,可以应用△△Ct法进行定量分析,而不必制作标准品或行相对标准曲线法。计算方法如下:△CT(目的基因)=目的基因CT-内对照基因CT;△△CT=△CT(目的基因)一△CT(标准值);最终目的基因的相对总量为2-ΔΔCt。
结果所示对照组IL-8相对表达量为(1.54±1.71)高于治疗组IL-8相对表达量(1.05±1.17),对照组IL-6相对表达量为(1.93±2.41)高于治疗组IL-6相对表达量(1.89±2.20),对照组LIF相对表达量为(1.25±0.97)低于治疗组LIF相对表达量(1.41±1.12),对照组H0XA10相对表达量(1.51±1.45)低于治疗组H0XA10相对表达量(2.00±2.50),差异没有统计学意义(p>0.05);对照组VEGF相对表达量为(0.79±0.83)显著低于治疗组VEGF相对表达量(2.10±1.86),差异有统计学意义(p<0.05)。
表13两组子宫内膜相关基因相对表达量的比较
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
9.两组患者妊娠结局的比较
对照组35人(33.02%)以及治疗组48人(45.71%)达到鲜胚移植标准,适宜鲜胚移植,差异有统计学意义(p<0.05),其中对照组一人、治疗组三人因感冒发烧取消鲜胚移植。详见如下表所示:
表14两组患者鲜胚移植情况的比较(%)
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
对照组12例(35.30%)HCG呈现阳性,治疗组18例(40.00%)HCG呈现阳性;对照组种植率14(20.59%)低于治疗组22(24.44);对照组持续妊娠10例(84.6%)低于治疗组18例(100%),但差异均无统计学意义(p>0.05),详见如下表所示:
表15两组患者妊娠结局的比较(%)
注:与对照组相比*p<0.05,**p<0.01。
实施例21动物试验
1资料与方法
1.1动物及造模
雌性SD大鼠100只,体重180~220g。
制作无排卵大鼠模型:取第9日龄雌性SD大鼠90只(实验组)于颈背部皮下注射丙酸睾丸酮1.25mg/只,于第22日龄断奶,利用自然光照,室温维持在20℃左右,专人饲养。第79日龄大鼠阴道开口,连续阴道涂片2个周期(1个周期5天),阴道上皮无性周期变化提示无排卵大鼠模型制作成功。
正常组:同样取第9日龄雌性SD大鼠10只于颈背部皮下注射等量中性茶油,至第70日龄阴道开口,连续阴道涂片2个性周期观察其阴道上皮细胞有无性周期变化。
经涂片观察实验组90只参与造模大鼠,其中有72只无性周期变化,保留备用,其余有性周期变化,剔除。正常组10只大鼠,全部具有规律的性周期变化,保留备用。
1.2分组及给药
从第80天开始给药。
正常组:给予12ml/kg/日蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
模型组:给予12ml/kg/日蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组一:实施例1的中药组合物,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组二:实施例4的中药组合物,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组三:实施例9的中药组合物,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组四:熟地黄15份、黄芪15份,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组五:女贞子6份、麦冬6份、白芍6份、党参9份、香附9份、菟丝子6份、当归9份、补骨脂9份、丹参9份、甘草3份,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组六:熟地黄10份、黄芪10份、女贞子10份、麦冬10份、白芍10份、党参10份、香附10份、菟丝子10份、当归10份、补骨脂10份、丹参10份、甘草10份,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组七:仙茅、仙灵脾、巴戟天、葫芦巴、补骨脂、覆盆子、女贞子各10份,黄芪、熟地黄、山药、党参各15份,白术、当归各12份,灸甘草、牡丹皮、泽泻各6份,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
治疗组八:阿胶96份、山药180份、续断108份、黄芪144份、当归108份、狗脊144份、菟丝子108份、桑寄生72份、杜仲108份、补骨脂108份、党参108份、茯苓144份、白术108份、地黄144份、山茱萸108份、枸杞子144份、乌梅72份、白芍108份、砂仁72份、益智72份、苎麻根108份、艾叶12份、黄芩72份,实施例13的方法制得煎剂。给予12ml/kg/日(相当于生药量1.836g)蒸馏水灌胃,连续灌胃28天。
1.3标本采集及石蜡切片的制作
各组连续灌胃28天后断头处死大鼠,剖腹取出双侧卵巢、子宫,观察卵巢、子宫形态,称重,记录卵巢、子宫重等指标。取出双侧卵巢、子宫,剥离干净后放入10%甲醛中固定,各级乙醇脱水、石蜡包埋、切片,采用常规苏木素-伊红染色,显微镜下观察卵巢发育等形态学变化。
2结果
2.1各组大鼠卵巢、子宫湿重的比较结果如下表所示。
表16各组大鼠卵巢、子宫湿重的比较
2.2各组大鼠卵巢指数、子宫指数的比较结果如下表所示。
表17各组大鼠卵巢指数、子宫指数的比较
2.3各组大鼠卵泡数、子宫内膜面积的比较结果如下表所示。
表18各组大鼠卵泡数、子宫内膜面积的比较
由表16、17、18可知,与模型组比较,各治疗组均取得了一定的疗效,其中,治疗组一的效果最佳。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明方法的前提下,还可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种补肾育胎的中药组合物,其特征在于,所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成:熟地黄10~20份、黄芪10~20份、女贞子3~9份、麦冬3~9份、白芍3~9份、党参5~13份、香附5~13份、菟丝子3~9份、当归5~13份、补骨脂5~13份、丹参5~13份、甘草2~4份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成:熟地黄13~17份、黄芪13~17份、女贞子5~7份、麦冬5~7份、白芍5~7份、党参8~10份、香附8~10份、菟丝子5~7份、当归8~10份、补骨脂8~10份、丹参8~10份、甘草2.5~3.5份。
3.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成:熟地黄15份、黄芪15份、女贞子6份、麦冬6份、白芍6份、党参9份、香附9份、菟丝子6份、当归9份、补骨脂9份、丹参9份、甘草3份。
4.根据权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备辅助生殖医学药物中的应用。
5.根据权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备治疗输卵管性不孕的药物中的应用。
6.根据权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备体外受精-胚胎移植治疗药物中的应用。
7.根据权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备肾气虚型患者行体外受精-胚胎移植治疗的药物中的应用。
8.根据权利要求4-7任一所述的应用,其特征在于,所述的药物剂型为口服制剂。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述的口服制剂为丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂或口服液。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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