CN101776654B - 一种快速检测醇沉液糖含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种快速检测丹参注射液醇沉工艺过程中醇沉液葡萄糖、果糖和蔗糖含量的方法。该方法先收集实际醇沉过程中醇沉液作为校正集样本，再使用液相色谱法检测得到校正集样本中葡萄糖、果糖和蔗糖的含量，然后扫描得到校正集样本的紫外-可见光谱图作为标准光谱图，最后建立紫外-可见光光谱和糖含量之间的定量模型。在分析待测样品时，先用水稀释样品，并且扫描样品的紫外-可见光光谱，然后将待测样品的光谱数据输入定量模型中，即可得到葡萄糖、果糖和蔗糖含量的计算值。本发明的测量方法简单、快速、无污染，可用于丹参注射液醇沉工艺中的糖含量的快速测定，有助于监控醇沉工艺过程，提高过程质量控制水平。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，特别涉及一种快速检测丹参注射液醇沉工艺过程中醇沉液糖含量的方法。
背景技术
丹参注射液主要用于治疗心绞痛、急性心肌梗塞和脑缺氧，还可以用于血栓闭塞性脉管炎、硬皮病、视网膜中央动脉栓塞、神经性耳聋、白噻氏综合征、结节性红斑脑血栓形成的后遗症等。丹参注射液的主要有效成分是丹参中水溶性酚酸类成分，如丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、咖啡酸、丹酚酸A和丹酚酸B等。
丹参注射液主要生产步骤由提取、醇沉、水沉、脱炭和配制等数个工艺组成。乙醇沉淀是中药注射剂生产过程中应用十分广泛的除杂步骤，具有很强的除杂能力。主要可去除蛋白质、多糖等大分子化合物，部分去除小分子糖类、鞣质和色素，而去除量最大的是糖类。对于丹参注射液而言醇沉是丹参注射液提取工段之后的第一个除杂步骤，是除杂最关键的步骤。另外，丹参注射液的醇沉工艺也占整个注射剂生产流程40％以上的时间。所以对丹参注射液醇沉工艺过程中糖含量进行快速监测和优化控制，可提高丹参注射液质量、提高生产效率。
目前常用的糖类检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法或毛细管电泳电化学检测法。所用设备昂贵，分析时间也较长。部分方法需对待测样品衍生化，样品前处理复杂。无法适用于工业生产中糖类的快速检测。
发明内容
本发明针对上述技术存在的不足，提供一种快速检测丹参注射液醇沉工艺过程中糖含量的方法，通过先收集实际醇沉过程中醇沉液作为校正集样本，再使用液相色谱法检测得到校正集样本中葡萄糖、果糖和蔗糖的含量，然后扫描得到校正集样本的紫外-可见光谱图作为标准光谱图，最后建立紫外-可见光光谱和糖含量之间的定量模型。具体通过以下步骤实现：
(1)醇沉液校正集样本的获取
将丹参药材水煎得到的提取液浓缩至密度大于1.1g/mL，然后边搅拌边加入95％乙醇(v/v)至酒精计测得上清液中乙醇表观含量为70％(v/v)，期间不定时吸取不同乙醇表观含量的醇沉液，冷藏后得到的上清液为丹参注射液的一次醇沉液校正集样本。将一次醇沉液回收乙醇并浓缩到密度大于1.0g/mL，然后再次加入95％乙醇(v/v)至酒精计测得上清液中乙醇表观含量为85％(v/v)，期间不定时吸取不同乙醇表观含量的醇沉液，冷藏后得到的上清液为丹参注射液的二次醇沉液校正集样本；
(2)高效液相色谱法测定醇沉液校正集样本的果糖、葡萄糖和蔗糖含量
色谱条件：色谱柱为Waters carbohydrate高效糖柱(250mm×4.6mm i.d.，4μm)，流动相为乙腈-水(86∶14)，流速为0.8mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL；检测器：蒸发光散射检测器(ELSD)，漂移管温度为90℃，雾化气为高纯氮气，雾化气流速为2L/min，增益为1；
对照品溶液的制备：取D-果糖、D-葡萄糖(C6H12O6·H2O)和蔗糖对照品适量，精密称定，分别加水制成每1mL含D-果糖60mg、D-葡萄糖50mg和蔗糖100mg的溶液，作为对照品储备液。分别精密量取各对照品溶液适量，加水稀释制成每1mL含D-果糖6mg、D-葡萄糖5mg和蔗糖10mg的混合对照品储备液1及每1mL含D-果糖0.6mg、D-葡萄糖0.5mg和蔗糖0.5mg的混合对照品储备液2。取混合对照品储备液1、2适量，分别加流动相稀释20倍，摇匀，滤过，取续滤液，即得混合对照品溶液1、2；
供试品溶液的制备：取醇沉液校正集样本，过滤，精密量取续滤液适量加75％乙腈(v/v)稀释4倍，混匀，10000rpm离心10min，取上清液，即为供试品溶液；
含量测定：分别精密吸取混合对照品溶液1、2和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按二点法计算丹参注射液醇沉液中果糖、葡萄糖和蔗糖含量，作为参比数据。
(3)紫外扫描得到醇沉液校正集样本的紫外-可见光谱图
取丹参醇沉液校正集样本，过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释1000～25000倍，混匀，10000rpm离心10min，取上清液。紫外扫描的光谱区间是190nm～400nm，分辨率为0.1nm-1nm。光谱扫描三次之后，取平均值作为校正集样本数据集；
(4)采用偏最小二乘法或者主成分回归法构建定量模型
使用Unscramb或者Minitab软件处理数据。在构建光谱图和糖含量定量模型时使用的方法是偏最小二乘法或者主成分回归法。使用交叉验证法确定最佳主成分数。当定量模型的相关系数到0.9以上时，认为模型已经建立完成；
(5)未知样品中糖含量的快速测定
取未知糖含量的丹参注射液第一次醇沉或第二次醇沉工艺过程中获取的醇沉上清液，加水稀释。此时的稀释倍数要求和建立标准集样本时相同。混匀后10000rpm离心10min，取上清液进行紫外扫描。紫外扫描的光谱范围和分辨率要求和建立标准集样本时相同。将光谱数据代入构建的定量模型中，作为预测集，就可得到未知样品中果糖、蔗糖或者葡萄糖的含量。
本发明的另一个目的是提供该方法在丹参注射液醇沉工艺过程中测定醇沉液糖含量中的应用，所述糖为果糖、蔗糖或葡萄糖。
本发明的方法设计合理，操作过程简单、快速，所需设备为价格低廉的紫外-可见分光光度计，定量模型构建完毕后，无需专业背景的人员也可完成定量分析过程，因此，可以很好地在丹参注射液生产企业进行推广，作为醇沉工艺过程质量控制的一种手段。
附图说明
图1为一次醇沉中葡萄糖浓度的关联和预测效果图。
图2为一次醇沉中果糖浓度的关联和预测效果图。
图3为一次醇沉中蔗糖浓度的关联和预测效果图。
图4为二次醇沉中果糖浓度的关联和预测效果图。
图5为二次醇沉中葡萄糖浓度的关联和预测效果图。
图6为二次醇沉中蔗糖浓度的关联和预测效果图。
具体实施方式
本发明结合实施例作进一步的说明。
实施例1
取2L丹参的水提浓缩液置于醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇，直到用酒精计测量乙醇浓度达到70％(v/v)。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释5000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到图谱数据，仪器分辨率设置为0.1nm。样品的葡萄糖的浓度采用高效液相色谱法测定。用偏最小二乘法构建光谱数据和葡萄糖浓度关联模型，采用交叉验证确定主成分数为3，关联效果图1所示。由于相关系数大于0.9，所以认为模型建立完成。
取5L丹参的水提浓缩液，加入醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释5000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到光谱图，仪器分辨率设置为0.1nm。将光谱数据代入已构建的模型中，预测得到未知样品的葡萄糖浓度。采用高效液相色谱法测定了未知样品的实际浓度，预测值和实际值的对比参见表1、图1。预测结果和实际浓度符合良好。
表1 葡萄糖浓度的实测值和预测值
| 编号 | 实测值(mg/L) | 预测值(mg/L) |
| 1 | 6153 | 6195 |
| 2 | 6020 | 6026 |
| 3 | 5887 | 5857 |
| 4 | 5313 | 5244 |
| 5 | 3122 | 3130 |
| 6 | 2896 | 2881 |
| 7 | 1759 | 1745 |
| 8 | 1602 | 1458 |
| 9 | 1501 | 1317 |
| 10 | 1045 | 1160 |
| 11 | 366.4 | 626.3 |
实施例2
取2L丹参的水提浓缩液置于醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇，直到用酒精计测量乙醇浓度达到70％(v/v)。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释1000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到图谱数据，仪器分辨率设置为0.2nm。样品的果糖浓度采用高效液相色谱法测定。用主成分回归法构建光谱数据和果糖浓度关联模型，采用交叉验证确定主成分数为3，关联效果参图2。由于相关系数大于0.9，所以认为模型建立完成。
取5L丹参的水提浓缩液，加入醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释1000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到光谱图，仪器分辨率设置为0.2nm。将光谱数据代入已构建的模型中，预测得到未知样品的果糖浓度。采用高效液相色谱法测定未知样品的实际浓度，预测值和实际值的对比参见表2、图2。预测结果和实际浓度符合良好。
表2 果糖浓度的实测值和预测值
| 编号 | 实测值(mg/L) | 预测值(mg/L) |
| 1 | 9452 | 9313 |
| 2 | 8765 | 8646 |
| 3 | 6806 | 6840 |
| 4 | 6168 | 6238 |
| 5 | 5463 | 5605 |
| 6 | 4410 | 4671 |
| 7 | 3950 | 4290 |
| 8 | 2890 | 2720 |
| 9 | 2172 | 2050 |
| 10 | 1918 | 2358 |
| 11 | 1445 | 1355 |
| 12 | 1052 | 1028 |
| 13 | 784.9 | 580.8 |
实施例3
取2L丹参的水提浓缩液置于醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇，直到用酒精计测量乙醇浓度达到70％(v/v)。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释1000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到图谱数据，仪器分辨率设置为1nm。样品中蔗糖的浓度采用高效液相色谱法测定。用主成分回归法构建光谱数据和蔗糖浓度关联模型，采用交叉验证确定主成分数为5，关联效果参见图3。由于相关系数大于0.9，所以认为模型建立完成。
取5L丹参的水提浓缩液，加入醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液过滤，加水稀释1000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到光谱图，仪器分辨率设置为1nm。将光谱数据代入已构建的模型中，可以预测得到未知样品的蔗糖浓度。采用高效液相色谱法测定了未知样品的实际浓度，预测值和实际值的对比参见表3、图3。预测结果和实际浓度符合良好。
表3 蔗糖浓度的实测值和预测值
| 编号 | 实测值(mg/L) | 预测值(mg/L) |
| 1 | 19090 | 19310 |
| 2 | 17180 | 16620 |
| 3 | 17030 | 15940 |
| 4 | 15380 | 14590 |
| 5 | 13750 | 13700 |
| 6 | 8072 | 8249 |
| 7 | 5431 | 4808 |
| 8 | 5130 | 4938 |
| 9 | 4919 | 4483 |
| 10 | 4821 | 6722 |
| 11 | 3810 | 3579 |
| 12 | 3400 | 4179 |
| 13 | 1205 | 1545 |
| 14 | 1173 | 881.0 |
实施例4
将2L丹参提取液一次醇沉上清液过滤后回收乙醇，将浓缩得到的回收液置于醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇，直到用酒精计测量乙醇浓度达到85％(v/v)。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释25000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到图谱数据，仪器分辨率设置为0.4nm。样品中果糖的浓度采用高效液相色谱法测定。用偏最小二乘法构建光谱数据和果糖浓度关联模型，采用交叉验证确定主成分数为3，关联效果参见图4。由于相关系数大于0.9，所以认为模型建立完成。
取5L丹参提取液一次醇沉后的回收液，加入醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释25000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到光谱图，仪器分辨率设置为0.4nm。将光谱数据代入已构建的模型中，预测得到未知样品的果糖浓度。采用高效液相色谱法测定未知样品的实际浓度，预测值和实际值的对比参见表4、图4。预测结果和实际浓度符合良好。
表4 果糖浓度的实测值和预测值
| 编号 | 实测值(mg/L) | 预测值(mg/L) |
| 1 | 2558 | 2544 |
| 2 | 2232 | 2124 |
| 3 | 2087 | 2098 |
| 4 | 1738 | 1682 |
| 5 | 1540 | 1549 |
| 6 | 1333 | 1165 |
| 7 | 1313 | 1333 |
| 8 | 1223 | 1183 |
| 9 | 1065 | 1059 |
| 10 | 687.8 | 722.8 |
| 11 | 436.7 | 350.5 |
实施例5
将2L丹参提取液一次醇沉上清液过滤后回收乙醇，浓缩后回收液置于醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇，直到用酒精计测量乙醇浓度达到85％(v/v)。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释25000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到图谱数据，仪器分辨率设置为0.1nm。样品的葡萄糖浓度采用高效液相色谱法测定。用偏最小二乘法构建光谱数据和果糖浓度关联模型，采用交叉验证确定主成分数为3，关联效果参见图5。由于相关系数大于0.9，所以认为模型建立完成。
取5L丹参提取液一次醇沉后的回收液，加入醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释25000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到光谱图，仪器分辨率设置为0.5nm。将光谱数据代入已构建的模型中，预测得到未知样品的葡萄糖浓度。采用高效液相色谱法测定了未知样品的实际浓度，预测值和实际值的对比参见表5、图5。预测结果和实际浓度符合良好。
表5 葡萄糖浓度的实测值和预测值
| 编号 | 实测值(mg/L) | 预测值(mg/L) |
| 1 | 1940 | 1927 |
| 2 | 1661 | 1631 |
| 3 | 1538 | 1564 |
| 4 | 1472 | 1493 |
| 5 | 1346 | 1355 |
| 6 | 1328 | 1314 |
| 7 | 915.9 | 956.4 |
| 8 | 768.3 | 743.2 |
| 9 | 750.9 | 739.4 |
| 10 | 457.9 | 507.4 |
实施例6
将丹参一次醇沉上清液过滤，回收乙醇，回收液置于醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇，直到用酒精计测量乙醇浓度达到85％(v/v)。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释20000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到图谱数据，仪器分辨率设置为1nm。样品中蔗糖的浓度采用高效液相色谱法测定。用偏最小二乘法构建光谱数据和果糖浓度关联模型，采用交叉验证确定主成分数为3，关联效果参见图6。由于相关系数大于0.9，所以认为模型建立完成。
取5L丹参提取液一次醇沉后的回收液，加入醇沉罐中，在机械搅拌下缓慢加入95％(v/v)乙醇。一边加入乙醇的同时，一边不定时取样，冷藏后的上清液作为醇沉液校正集样本。将该样本过滤，精密量取续滤液适量，加水稀释20000倍后用紫外-可见分光光度计在190nm至400nm波长范围内扫描得到光谱图，仪器分辨率设置为1nm。将光谱数据代入已构建的模型中，预测得到未知样品的蔗糖浓度。采用高效液相色谱法测定了未知样品的实际浓度，预测值和实际值的对比参见表6、图6。预测结果和实际浓度符合良好。
表6 蔗糖浓度的实测值和预测值
| 编号 | 实测值(mg/L) | 预测值(mg/L) |
| 1 | 4489 | 4489 |
| 2 | 4258 | 4030 |
| 3 | 4014 | 3901 |
| 4 | 3536 | 3549 |
| 5 | 3289 | 3320 |
| 6 | 2653 | 2636 |
| 7 | 2212 | 2191 |
| 8 | 1706 | 1770 |
| 9 | 1324 | 1363 |
| 10 | 882.7 | 917.3 |
Claims (5)
1.一种快速检测醇沉液糖含量的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
(1)醇沉液校正集样本的获取
将丹参药材水煎得到的提取液浓缩至密度大于1.1g/mL，然后边搅拌边加入v/v为95％的乙醇至酒精计测得上清液中乙醇表观含量v/v为70％，期间不定时吸取不同乙醇表观含量的醇沉液，冷藏后得到的上清液为丹参注射液的一次醇沉液校正集样本，将一次醇沉液回收乙醇并浓缩到密度大于1.0g/mL，然后再次加入v/v为95％的乙醇至酒精计测得上清液中乙醇表观含量v/v为85％，期间不定时吸取不同乙醇表观含量的醇沉液，冷藏后得到的上清液为丹参注射液的二次醇沉液校正集样本；
(2)高效液相色谱法测定醇沉液校正集样本的果糖、葡萄糖和蔗糖含量
色谱条件：色谱柱为Waters carbohydrate高效糖柱，250mm×4.6mm i.d.，4μm，流动相为乙腈∶水为86∶14，流速为0.8mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL，检测器：蒸发光散射检测器，漂移管温度为90℃，雾化气为高纯氮气，雾化气流速为2L/min，增益为1；
对照品溶液的制备：取D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖对照品，精密称定，分别加水制成每1mL含D-果糖60mg、D-葡萄糖50mg和蔗糖100mg的溶液，作为对照品储备液，分别量取各对照品溶液，加水稀释制成每1mL含D-果糖6mg、D-葡萄糖5mg和蔗糖10mg的混合对照品储备液1及每1mL含D-果糖0.6mg、D-葡萄糖0.5mg和蔗糖0.5mg的混合对照品储备液2，取混合对照品储备液1和2，分别加流动相稀释20倍，摇匀，滤过，取续滤液，即得混合对照品溶液1和2；
供试品溶液的制备：取醇沉液校正集样本，过滤，量取续滤液加v/v为75％的乙腈稀释4倍，混匀，10000rpm离心10min，取上清液，即为供试品溶液；
含量测定：分别精密吸取混合对照品溶液1、2和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按二点法计算丹参注射液醇沉液中果糖、葡萄糖和蔗糖含量，作为参比数据；
(3)紫外扫描得到醇沉液校正集样本的紫外-可见光谱图
取丹参醇沉液校正集样本，过滤，量取续滤液，加水稀释，混匀，10000rpm离心10min，取上清液，紫外扫描的光谱区间是190nm～400nm，分辨率为0.1nm-1nm，获得校正集样本数据集；
(4)采用偏最小二乘法或者主成分回归法构建定量模型
使用Unscramb或者Minitab软件处理数据，在构建光谱图和糖含量定量模型时使用的方法是偏最小二乘法或者主成分回归法，使用交叉验证法确定最佳主成分数，当定量模型的相关系数到0.9以上时，认为模型已经建立完成；
(5)未知样品中糖含量的快速测定
取未知糖含量的丹参注射液第一次醇沉或第二次醇沉工艺过程中获取的醇沉上清液，加水稀释，混匀后10000rpm离心10min，取上清液进行紫外扫描，将光谱数据代入构建的定量模型中，作为预测集，就可得到未知样品中果糖、蔗糖或者葡萄糖的含量。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测醇沉液糖含量的方法，其特征在于，步骤(3)所述的校正集样本过滤，续滤液加水稀释的倍数为1000-25000。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测醇沉液糖含量的方法，其特征在于，步骤(3)所述的校正集样本数据集为紫外光谱扫描三次之后的平均值。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测醇沉液糖含量的方法，其特征在于，步骤(5)测定未知样品中糖含量时样品的稀释倍数、紫外光谱扫描的光谱范围、分辨率参数设置均与校正集样品时相同。
5.根据权利要求1所述的一种快速检测醇沉液糖含量的方法在丹参注射液醇沉工艺过程中测定醇沉液糖含量中的应用，所述糖为果糖、蔗糖或葡萄糖。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7071227B2 (en) * | 2000-09-26 | 2006-07-04 | The Johns Hopkins University | Antiviral compositions and methods of use |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7071227B2 (en) * | 2000-09-26 | 2006-07-04 | The Johns Hopkins University | Antiviral compositions and methods of use |
| CN1839936A (zh) * | 2006-01-24 | 2006-10-04 | 山东省医学科学院药物研究所 | 具抗血栓活性的丹参提取物和制备方法 |
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