CN101688220B - 包含突变酰基‑acp硫酯酶等位基因的芸苔属植物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含新型种子脂类组成的作物植物。提供了编码芸苔属脂酰‑酰基载体蛋白(ACP)硫酯酶B蛋白(FATB)和类似蛋白的野生型和突变核酸分子。还提供了在其基因组中包含至少三种突变fatB等位基因的芸苔属植物、组织和种子，其中显著改变了种子油脂肪酸组合物或模式。

Description

包含突变酰基-ACP硫酯酶等位基因的芸苔属植物
发明领域
本发明涉及农业产物的领域，特别是包含新型种子脂类组合物的作物植物。还提供了编码芸苔属脂肪酰-酰基载体蛋白(ACP)硫酯酶B蛋白(FATB)的野生型和突变核酸分子，及其蛋白质。还提供了在其基因组中包含至少三种突变fatB等位基因(在至少三个编码不同的FATB蛋白的芸苔属基因中)的芸苔属植物、组织和种子，从而显著的改变了种子油脂肪酸组成和谱。此外，本文还提供了用于产生芸苔属植物的方法，所述植物产生的种子包含具有降低水平的饱和脂肪酸的种子油，当可以从此类种子中获得种子油时。此类种子油不需要进一步混合或修饰，就可以根据美国健康和人类服务部(HHS)的食品和药品监管局(FDA)标注“低饱和”或含有“无饱和”。还提供了用于在芸苔属植物、组织或种子中，检测一种或多种突变fatB和/或野生型FATB等位基因存在的检测工具(试剂盒)和方法，以及用于将一种或多种突变fatB和/或野生型FATB等位基因转移至其它芸苔属植物中的方法，和用于组合植物中不同的fatB和/或FATB等位基因的方法。特别地，用于组合适合数量的突变fatB等位基因的方法，所述基因编码非功能性FATB蛋白和/或具有显著降低的体内活性的FATB蛋白，所述组合的方法以显著降低了芸苔属种子油中积累的总饱和脂肪酸和/或特定饱和脂肪酸的相对量的方式。此外还提供了植物、或其部分、和/或其后代、种子和种子油以及本发明的方法和/或试剂盒的用途。
发明背景
由于在人类和动物饮食中，以及多种工业用途中广泛使用，植物油具有日益重要的经济价值。然而，这类油的脂肪酸组成通常对于多种上述用途都不是优化的。因为出于营养和工业目的，都需要具有特定脂肪酸组成的特种油，因此，对于通过植物育种和/或通过植物生物技术的新分子工具来修饰油组成存在极大的兴趣(参见例如，Scarth和Tang，2006，CropScience 46：1225-1236，关于芸苔属油的修饰作用)。
食用油的特性和健康属性大部分取决于它们的脂肪酸组成。大多数源自经济植物变种的植物油主要由棕榈酸(16:0)、硬脂酸(18:0)、油酸(18:1)、亚油酸(18:2)和亚麻酸(18:3)组成。棕榈酸和硬脂酸分别是16和18碳长的饱和脂肪酸。油酸、亚油酸和亚麻酸是18碳长的不饱和脂肪酸，分别含有1、2和3个双键。油酸称为单不饱和脂肪酸，而亚油酸和亚麻酸称为多不饱和脂肪酸。
芸苔属油料种，如欧洲油菜(Brassica.Napus，B.napus)和芥菜(Brassica.Juncea，Brassica.juncea)，通常称为油菜籽油菜(rapeseed)和芥子(mustard)，是目前除大豆以外的第二大油料种子作物(FAO，2005；Raymer(2002)InJ.Janick和A.Whipkey(编著)Trends in new crops andnew uses.ASHS Press，Alexandria，VA Raymer，第122-126页)。油菜籽油通过传统的芸苔属油料种子栽培品种(欧洲油菜、芜菁(B.rapa)和芥菜)产生(Shahidi(1990)In Shahidi(编著)卡诺拉油菜andrapeseed：Production，chemistry，nutrition，and processing technology.VanNostrandReinhold，New York，第3-13页；Sovero(1993)In J.Janick和J.E.Simon(编著)New crops.John Wiley & Sons，New York，第302-307页)，通常具有脂肪酸组成为5％棕榈酸(C16:0)、1％硬脂酸(C18:0)、15％油酸(C18:1)、14％亚油酸(C18:2)、9％亚麻酸(C18:3)和45％芥酸(C22:1)，以基于总脂肪酸含量的重量计(本文的后文中称为wt％)(Ackman(1990)In Shahidi(编著)卡诺拉油菜and rapeseed：Production，chemistry，nutrition，and processing technology.Van Nostrand Reinhold，New York，第81-98页)。芥酸是营养上不理想的脂肪酸，出于食用用途已经在芸苔属油中降低至非常低的水平。在种子油中，基于总脂肪酸的饱和脂肪酸的典型相对量是在约6.5％和7.5％之间，其中大部分是棕榈酸和硬脂酸。
在加拿大，植物科学家的工作集中在创造所谓的“双低”变种上，所述变种的种子油中的芥酸低，以及油提取后剩余的固体粗粉中的芥子油苷低(即，低于2wt％的芥酸含量，和每克无油粗粉中低于30微摩尔的芥子油苷含量)。这些在加拿大开发的较高质量形态的油菜被称为卡诺拉油菜(canola)。卡诺拉油菜油的特征是相对低水平的饱和脂肪酸(平均约7wt％)，相对高水平的单不饱和脂肪酸(约61wt％)和中间水平的多不饱和脂肪酸(约32wt％)，在亚油酸(即，ω-6脂肪酸)(约21wt％)和α-亚麻酸(即，ω-3脂肪酸)(约11wt％)之间具有良好的平衡。
目前对膳食脂肪的兴趣的主要原因涉及这样的证据，所述证据将高脂肪摄入(特别是饱和脂肪)与冠心病之间相联系。高水平的血胆固醇，特别是“坏”(低密度脂蛋白或LDL)胆固醇，构成了冠心病的主要风险因子。一些研究提示，高单不饱和脂肪和低饱和脂肪的饮食可以降低“坏”(低密度脂蛋白或LDL)胆固醇，同时维持“好”(高密度脂蛋白或HDL)胆固醇(Nicolosi和Rogers，1997，Med.Sci.Sports Exerc.29：1422-1428)。
北美和欧洲的营养推荐需要总脂肪摄入降低至30％或更少，以及饱和脂肪摄入降低至少于10％的总能量(21 C.F.R.101.75(b)(3))(相比大多数工业国家，饱和脂肪摄入占总卡路里消耗的约15％至20％)。为了促进消费者觉悟，由美国健康和人类服务部(HHS)的食品和药品监管局(FDA)出版的现行标签指导条例目前要求，在每习惯消费的基准量中总饱和脂肪酸水平占1g或更少，并且不超过15％的卡路里来自饱和脂肪酸，可以获得“低饱和脂肪”或“低饱和”标签(21 C.F.R.101.62(c)(2))；在每习惯消费的基准量和每标记的服务中少于0.5g饱和脂肪和少于0.5g反式脂肪酸(由植物油的(部分)氢化作用产生的一类不饱和脂肪酸，由于其增加冠心病的风险而认为是不健康的，尽管是不饱和的)，可以获得“无(或零)饱和脂肪”或“无(或零)饱和(sat)”的标签(21 C.F.R.101.62(c)(1))。这意味着植物油的总饱和脂肪酸含量(基于油中的脂肪酸总量的饱和脂肪酸重量百分比)，即月桂酸(C12:0；十二碳酸)、肉豆蔻酸(C14:0；十四烷酸)、棕榈酸(C16:0；十六烷酸)、硬脂酸(C18:0；十八烷酸)、花生酸(C20:0；二十烷酸)、山萮酸(C22:0；二十二烷酸)和木蜡酸(C24:0；二十四烷酸)的含量的总量，需要低于7wt％，来获得“低饱和”标签和低于“3.5wt％”来获得“无饱和”标签(基于15ml或14g油的基准量-21C.F.R.101.12)。
与其它普遍使用的可食用植物油(例如，向日葵油(8wt％)、亚麻籽油(9wt％)、红花油(12wt％)、玉米油(13wt％)、橄榄油(15wt％)、大豆油(15wt％)、花生油(19wt％)、棉籽油(27wt％)、棕榈油(51wt％)和椰子油(91wt％))中的饱和脂肪酸的水平相比(来源：POSPilotPlant Corporation)，卡诺拉油菜油仅含有约7wt％饱和脂肪酸。尝试使用不同的方法进一步降低该饱和脂肪酸的水平。
可以化学的影响植物油的修饰作用：美国专利号4,948,811描述了通过化学反应或通过物理分离饱和脂肪酸获得的甘油三酯沙拉/烹饪油组合物，其中油的甘油三酯的脂肪酸含量包括低于约3wt％饱和脂肪酸。然而，植物油的化学修饰来降低饱和脂肪酸水平不仅比从目前公开的修饰的芸苔属油料种子植物(或任何其它油料种子植物)(所述植物被修饰用于提高改善的可食用内源性植物油)中提取植物油更昂贵，而且由于潜在非故意的存在来自所使用的化学产品和假定的副产物的残余物，还不是改善用于人类消费的油的健康性的理想方式。
另一种修饰脂肪酸组合物的可能性是通过使用遗传改造。例如，美国专利申请号2004/0132189描述了与非转化的对照品系中约6.0wt％的饱和脂肪酸水平相比，在共表达披针叶萼距花(Cuphea pullcherima)β-酮脂酰-酰基载体蛋白合成酶I和IV序列以及红花δ-9去饱和酶的芸苔属品系中，饱和脂肪酸水平的降低至约3wt％和低于3.4wt％。WO06/042049描述了在表达δ-9去饱和酶基因的种子中，具有“无饱和脂肪酸”或降低饱和水平的脂肪酸的芸苔属植物。然而，商业化的转基因方法的缺点是需要法规批准，和在世界不同区域不同的接受程度。
植物油的脂肪酸组成还可以通过传统的育种技术来修饰。这些技术利用现有的种质作为影响脂肪酸组成的天然发生突变的来源。例如，Raney等人(1999，In Proc.10thInt.Rapeseed Cong.：New horizons for an oldcrop，Canberra，Australia)描述了从欧洲油菜、芫菁和芥菜的种间杂交来源的育种群体，其中表达为肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸和木蜡酸的总量的饱和脂肪酸的水平降低至低于6wt％，且其中表达为肉豆蔻酸、棕榈酸和硬脂酸的总量的饱和脂肪酸的水平降低至低于5wt％。
已经尝试增加可利用的突变库，从所述库中通过使用诱变剂来选择理想的特征。例如，WO 91/15578描述了基于自花授粉的油菜植物能够形成产油的油菜籽油菜，所述油菜籽油菜油具有以棕榈酸和硬脂酸的形式，不超过4wt％的饱和脂肪酸含量，所述油菜籽油菜通过化学诱变然后通过选择形成。
在植物中，脂肪酸从头合成专一的分布于质体的基质中，其中在延伸循环的过程中，酰基链与可溶性的酰基载体蛋白(ACP)共价结合。可以通过将酰基转移至甘油-3-磷酸上终止碳链延长，从而将其保留在质体的、“原核的”脂类生物合成通路中。可选的，通过水解新形成的酰基-ACP成为游离脂肪酸和ACP，特定的硫酯酶可以拦击原核的(质体的)通路。然后，游离的脂肪酸存在于质体中，供应细胞质的“真核”脂类生物合成通路。后者位于内质网中，负责磷脂、甘油三酯和其它中性脂类的形成。因此，通过水解酰基-ACP和释放脂肪酸，酰基-ACP硫酯酶催化了植物细胞中真核脂类生物合成通路中的第一个限速步骤，在两条通路之间从头合成脂酰基的分布中发挥关键作用(和Frentzen，1988，Planta176：506-512；Browse和Somerville，1991，Annu Rev Plant Physiol PlantMol Biol 42：467-506；Gibson等人，1994，Plant Cell Environ 17：627-637)。
Jones等人(1995，Plant cell 7：359-371)和Voelker等人(1997，PlantPhysiology 114，669-677)描述了高等植物中的两种不同但相关的硫酯酶基因族，名为FATA和FATB。可以通过序列比较和/或通过其底物特异性/偏爱来区分这两类硫酯酶族。FATA硫酯酶(也称为I类硫酯酶)表现出对C18:1酰基-或油酰基-ACP明确的偏爱，对C18:0酰基-或C16:0酰基-ACP只有极小活性(即，酰基偏爱性是18:1＞＞18:0＞＞16:0)。相反，FATB成员(也称为II类硫酯酶)偏爱饱和的酰基-ACP基作为底物，底物链长度从C8至C18酰基-ACP之间急剧的变化(Mayer和Shanklin，2005，J.Biol.Chem.280(5)：3621-3627)。此外，FATB成员还可以进一步分为两种功能群。一些FATB酶对在C8至C14范围内的饱和酰基-ACP特异(中等-链酰基-ACP偏爱的硫酯酶)，发现存在于生产中等链的物种中，表达限于生产中等链的组织中。第二种FATB群的酶偏爱C14至C18酰基-ACP(主要是棕榈酰-ACP，例如具有偏爱性为C16:0＞C18:1＞C18:0的酶；长链酰基-ACP偏爱性的硫酯酶)，可能存在于所有主要的植物部分中，不限于生产中等链的物种(Jones等人，1995，Plant cell 7：359-371)。为何植物具有这些不同类型的硫酯酶，及其各自的作用，仍然大部分不清楚。
FATA基因分离自多种植物物种中，包括芸苔属物种。例如，美国专利号5,530,186、5,530,186和5,945,585描述了来自大豆的FATA基因；Hellyer等人，(1992，PlantMol.Biol.20：763-780)描述了来自欧洲油菜的FATA酶；Loader等人，(1993，PlantMol.Biol.23(4)：769-778)描述了利用源自欧洲油菜油酰基-ACP硫酯酶蛋白质序列数据的寡核苷酸，从欧洲油菜的胚cDNA文库中，对两种酰基-ACP硫酯酶克隆的分离和表征；以及Mandal等人，(2000，Bioch.Soc.Transactions 28(6)：967-968)描述了从芥菜中克隆酰基-ACP硫酯酶基因序列，所述序列显示出与来自不同物种的FATA基因具有同源性。
如以下参考文献所述，从多种生产中等链的植物物种中分离FATB基因，所述基因编码对C8至C14范围的饱和酰基-ACP特异性的FATB酶(中等链酰基-ACP偏爱性硫酯酶)：
WO91/16421描述了从加州月桂(Umbellularia californica)中分离月桂酰(C12:0)-ACP-偏爱的硫酯酶，从樟脑(萼距花(Cuphea hookeriana))中分离C10:0酰基-ACP-偏爱的硫酯酶，和从红花(Carthamus tinctorius)中分离硬脂酰(C18:0)-ACP-偏爱的硫酯酶，以及在芸苔属种子中表达加州月桂硫酯酶，这导致与非转基因芸苔属种子中的水平相比，获得升高水平的月桂酸(laurate)。
WO92/20236描述了C8:0至C14:0酰基-ACP-偏爱的硫酯酶的分离，以及在拟南芥属(Arabidopsis)和芸苔(Brassica campestris)中表达来自加州月桂的月桂酰(C12:0)-ACP-偏爱的硫酯酶，获得升高水平的月桂酸。
Voelker等人(1992，Science 257：72-74)描述了在通常不积累月桂酸的拟南芥的种子中表达编码来自加州月桂的月桂酰(C12:0)-ACP硫酯酶的FATB cDNA(Uc FATB1)，所述加州月桂是在种子油中积累癸酸(C10:0)和月桂酸(C12:0)的物种，所述表达导致在所述拟南芥的成熟种子中积累月桂酸。Voelker等人(1996，Plant J.9：229-241)描述了将相同的FATB转基因转化到欧洲油菜中，获得月桂酸的积累至接近60mol％的甘油三酯酰基。
Eccleston和Ohlrogge(1998，Plant cell 10：613-621)描述了在欧洲油菜种子中表达来自加州月桂的C12:0酰基-ACP硫酯酶，获得含有1.8mol％至59.6mol％月桂酸(C12:0)的种子油。
WO94/10288描述了分离C8:0至C10:0酰基-ACP-偏爱的硫酯酶。
Martini等人(1995，In Proc.9th Int.Rapeseed Cong，Cambridge，UK，第461-463页)描述了将来自披针叶萼距花的两种FATB基因，分别转化欧洲油菜，获得了在芸苔属种子油中低水平积累辛酸(C8:0)和癸酸(C10:0)。
Dehesh等人(1996，Plant J.9(2)：167-172)描述了在转基因卡诺拉油菜的种子中表达来自墨西哥灌木萼距花(Cuphea hookeriana)的FATB cDNA(Ch FATB2)，所述墨西哥灌木萼距花在其种子油中积累达75mol％辛酸(C8:0)和癸酸(C10:0)，所述卡诺拉油菜通常不积累这些脂肪酸，所述表达获得了辛酸(C8:0)、癸酸(C10:0)和月桂酸(C12:0)分别积累至11、27和2mol％。
从多种植物物种中分离了FATB基因，所述基因编码特异性针对/偏爱在C14至C18范围内的饱和酰基-ACP(长链酰基-ACP偏爱性的硫酯酶)的FATB酶：
WO95/13390描述了从韭葱、芒果、榆树和樟脑中分离棕榈酰(C16:0)-ACP硫酯酶序列，及其通过遗传转化在大豆和卡诺拉油菜中增加和降低饱和脂肪酸的水平的用途。
Jones等人(1995，Plant cell 7：259-371)描述了在转基因欧洲油菜植物中表达来自樟脑的棕榈酰(C16:0)-ACP硫酯酶cDNA(Ch FATB1)，导致棕榈酸(C16:0)水平从6mol％增加至35mol％。
Voelker等人(1997，Plant Physiol.114：669-677)描述了在欧洲油菜种子中表达来自肉豆蔻(Myristica fragrans)的C14:0至C18:0酰基-ACP硫酯酶，导致种子油富集C14至C18饱和脂肪酸，所述肉豆蔻主要积累含有肉豆蔻酸(14:0)的油。
Voelker等人(1997，Plant Physiol.114：669-677)还描述了在欧洲油菜种子中表达来自榆树(美洲榆(Ulmus americana))的C10:0至C16:0酰基-ACP硫酯酶，导致种子油富集C10至C18饱和物，主要是棕榈酸酯(C16:0)、肉豆蔻酸酯(C14:0)和癸酸酯(C10:0)，所述榆树主要积累含有癸酸酯(10:0)的油。
WO96/23892描述了来自Cuphea palustris、樟脑和肉豆蔻的肉豆蔻酰(C14:0)-ACP硫酯酶序列，及其在植物细胞中生产肉豆蔻酸的用途。
WO96/06936描述了大豆和卡诺拉油菜棕榈酰(C16:0)-ACP硫酯酶cDNA及其通过遗传转化在增加和降低大豆和卡诺拉油菜的饱和脂肪酸水平中的用途。
等人(2000，Plant Physiol 123：637-643)描述了拟南芥的长链酰基-ACP硫酯酶cDNA(AtFATB1)在种子特异性启动子控制下，在拟南芥中的过表达，导致在种子中大量棕榈酸(C16:0)的积累(从野生型对照中10mol％至38.6mol％)。拟南芥FATB1 cDNA在花椰菜花叶病毒35S启动子控制下的反义表达导致种子棕榈酸含量(从野生型对照的11mol％至6mol％)和花棕榈酸含量的强烈降低，在叶和根脂肪酸中仅有细微的改变。
Bonaventure等人(2003，Plant Cell 15：1020-1033)描述了在FATB基因中具有T-DNA插入的拟南芥突变体的甘油脂的棕榈酸酯(C16:0)含量(在拟南芥中存在两种FATA基因，但是仅有一个FATB基因；参见Mekhedov等人2000，Plant Physiol.122：389-402；和Beisson等人2003，Plant Physiol.132：681-697)在叶中降低了42％，在花中降低了56％，在根中降低了48％，在种子中降低了56％。此外，硬脂酸(C18:0)在叶中降低了50％，在种子中降低了30％。在突变体中，生长速率显著降低，突变植物产生具有低活力、降低的发芽和改变的种子形态的种子，表示FATB对植物生长和种子发育是关键的。
Bonaventure等人(2004，Plant Physiol 135：1269-1279)描述了在转基因FATB敲除的突变拟南芥植物的叶中，脂肪酸合成的速率增加了40％，导致从质体中输出与野生型几乎相同量的棕榈酸，但是油酸输出增加约55％。
Pandian等人(2004，poster abstract，4th Int.Crop Sci.Cong.)报道了从欧洲油菜(GenBank登录号DQ847275)和芥菜(GenBank登录号DQ856315)中分离全长FATB基因序列，构建逆向重复基因沉默构建体(在种子特异性启动子的控制下)(所述构建体具有部分欧洲油菜序列的740bp保守片段，所述片段与芥菜和拟南芥的FATB序列享有超过90％序列同源性，而与这三个物种的FATA基因的同源性少于40％)，以及转化拟南芥、欧洲油菜和芥菜。目标是创造在种子油中具有降低的棕榈酸含量的转基因植物。关于该基因沉默构建体对最终的种子油组成的影响(未公开任何结果)，或关于产生具有低饱和种子油的芸苔属植物的替代方法，公开文本未作任何教导。
Mayer和Shanklin(2005，J.Biol.Chem.280(5)：3621-3627)描述了拟南芥FATB蛋白的结构模型，其中N-末端结构域含有影响特异性的残基(还参见Mayer和Shanklin，2007，BMC Plant Biology 7(1)：1-11)，C-末端结构域含有催化残基。
尽管事实是本领域可获得一些FATB基因的序列，但是仍然需要全面的理解在种子油中饱和脂肪酸生产和积累中以及在开发的方法(特别是非转基因方法)中所涉及的基因和酶，所述方法在对植物生长和发育不具有负面影响的条件下，用于降低种子中总饱和脂肪酸和/或特定饱和脂肪酸的相对量。到目前为止，本领域没有获得(非转基因的)芸苔属作物植物，所述植物产生的种子油含有显著低于7％饱和脂肪酸。因此，仍然需要用于开发此类植物和油的工具和方法，如后文中在详细描述、附图、实施例和权利要求中所述。
发明概述
发明人发现，欧洲油菜植物包含6种不同的FATB基因，通过控制在种子中“功能性表达的”FATB基因/等位基因(即，获得功能性(生物学活性)FATB蛋白)的数量和/或类型，可以控制芸苔属植物，特别是在所述芸苔属植物的种子油中的饱和脂肪酸水平。通过组合6个FATB基因(“fatB等位基因”)的突变等位基因中的最少数量，同时维持最低数量的野生型FATB等位基因，获得最低水平的功能性FATB蛋白，可以修饰种子油中的饱和脂肪酸的水平，特别是显著降低饱和脂肪酸(特别是棕榈酸的量)的相对量。认为需要最低数量的野生型FATB等位基因，来维持特定组织中最低量的饱和脂肪酸和/或特定饱和脂肪酸的生产，从而确保正常的植物生长和种子发育。
因此，在第一个方面，本发明在一个实施方案中提供了在其基因组中包含至少三个突变FATB等位基因的芸苔属植物(及其部分，例如种子)，其中突变FATB等位基因是至少三个不同的FATB基因的等位基因，所述FATB基因选自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3，且其中所述植物的种子产生这样的种子油，所述种子油具有等于或少于6wt％、5wt％、4wt％或3.5wt％(例如少于或等于3wt％、2wt％或1wt％)饱和脂肪酸，这是基于种子油中脂肪酸的总量。
在另一个方面，发明提供了编码野生型和/或突变FATB蛋白质，及其片段的(分离的)核酸序列，以及利用这些核酸序列来改善芸苔属种子油组成的方法。还提供了蛋白质本身及其用途。
本发明还涉及复数形式的芸苔属种子，涉及芸苔属植物和植物部分，其包含至少三个(突变)fatB等位基因，从而与包含编码相应的功能蛋白的FATB等位基因的种子、植物和组织相比，具有显著降低量的功能性FATB蛋白。多种种子包含种子油，所述种子油具有修饰的相对量和/或组成的饱和脂肪酸。在一个方面，与源自缺少(至少3个)突变fatB等位基因(即，相反包含野生型FATB等位基因)的种子的种子油相比，特别是棕榈酸(C16:0)的量是显著降低的。
在其它方面，发明涉及这样的种子油，以及种子油的用途，所述种子油具有修饰的相对量和/或组成的饱和脂肪酸，所述种子油可以通过从根据本发明的芸苔属植物收获种子，并从种子提取油来获得，或者通过从复数形式的根据本发明的芸苔属种子中提取来获得。
在发明的其它方面，提供了用于产生和选择植物、植物部分和种子的方法，所述植物、植物部分和种子含有至少三个此类突变fatB等位基因，所述等位基因存在于基因组的至少3个不同的基因座上(即，在来自至少3个不同FATB基因的至少3个不同基因座上，所述基因选自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)，并且所述方法用于在植物或植物部分中区分突变fatB等位基因和野生型FA TB等位基因的存在。因此，提供的方法(例如，诱变和/或标记物辅助选择)用于产生和/或鉴别fatB等位基因，或包含此类等位基因的植物或植物部分，并且用于在单株植物中组合合适数量的fatB等位基因和/或不同类型的fatB等位基因，从而显著降低该植物的种子油的饱和脂肪酸水平。
还提供使用发明的植物、众多种子、植物部分等的方法，用于从压碎的芸苔属种子中获得“低饱和”或“无饱和”种子油。如本文中使用的，“植物产物”包括源自发明的植物的任何对象，包括植物部分，例如种子、种子粗粉、种子饼、种子脂肪或油。
附图说明
图1：显示了实施例3的半定量RT-PCR的结果的图。显示了种子(基于10ng RNA)中每种FATB基因的时间分布(开花后11、21和34天)(X轴)和表示为基因组DNA的量(以ng)的表达水平(Y轴)，所述基因组DNA的量产生与FATB基因特异性RT-PCR产物的条带密度可比较的条带密度。
图2：FATB-A1基因(含有内含子)的示意图，所述基因编码来自春油菜(S)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO：13)
图3：FATB-A2基因(含有内含子)的示意图，所述基因编码来自春油菜(S)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO：15)
图4：FATB-A3基因(含有内含子)的示意图，所述基因编码来自春油菜(S)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO：17)
图5：FATB-C1基因(含有内含子)的示意图，所述基因编码来自春油菜(S)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO：19)
图6：FATB-C2基因(含有内含子)的示意图，所述基因编码来自春油菜(S)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO：21)
图7：FATB-C3基因(含有内含子)的示意图，所述基因编码来自春油菜(S)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白(SEQ ID NO：23)
在图2-7中，用灰色框表示外显子，内含子是位于外显子之间的水平线；用垂直线表示在实施例(如实施例所述，根据其分别的“FATB-Xx-EMSxx”名称，命名为“EMSxx”)中描述的突变的位置；用FATB基因示意图下方的垂直线表示具有SEQ ID NO：25和28的FATB特异性探针的长度和位置；通过箭头表示FATB特异性引物(根据它们各自的SEQ ID NO：xx，命名为“ID xx”)的位置；刻度线表示各FATB基因的长度。
图8：图显示了在芸苔属植物的纯合状态下，不存在至存在4个突变FATB等位基因，与芸苔属植物的种子油中总饱和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸)的水平(基于脂肪酸总量的重量百分比)之间的相关性。分析的芸苔属植物是包含3或4个突变FATB等位基因的芸苔属植物的后代植物，所述突变等位基因即表23中显示的FATB-AX-EMSY或FATB-CX-EMSY等位基因，表示为杂合子状态。突变FATB等位基因被称为“aX-Y”和“cX-Y”或称为“aX”和“cX”；野生型FATB等位基因被称为“AX”和“CX”。
常规定义
“饱和低(Low in saturates)”或“低饱和(low sats)”油在本文中指基于油中的总wt％脂肪酸，种子来源的油含有(平均)低于7wt％的总饱和脂肪酸。低饱和种子油的wt％饱和脂肪酸可以等于或少于6wt％、5wt％、4wt％，但高于3.5wt％(例如3.6wt％)。
“无饱和(no saturates)”或“无饱和(no sats)”油在本文中指基于油中的总wt％脂肪酸，种子来源的油含有(平均)低于3.6wt％的总饱和脂肪酸。无饱和种子油的wt％饱和脂肪酸可以等于或少于3.5wt％、3.0wt％、2.5wt％、2.0wt％、1.5wt％或1wt％。
“作物植物”指作为作物栽培的植物物种，例如欧洲油菜(AACC，2n＝38)、芥菜(AABB，2n＝36)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)(BBCC，2n＝34)、芜青(Brassicarapa)(同义词，芸苔(Brassica campestris))(AA，2n＝20)、甘蓝(Brassica oleracea)(CC，2n＝18)或黑芥(Brassica nigra)(BB，2n＝16)。定义没有涵盖草，例如拟南芥(Arabidopsis thaliana)。
术语“核酸序列”(或核酸分子)指单链或双链形式的DNA或RNA分子，特别是编码根据发明的蛋白质或蛋白质片段的DNA。“内源性核酸序列”指在植物细胞内的核酸序列，例如存在于芸苔属细胞的核基因组中的FATB基因的内源性等位基因。
术语“基因”意指包含在细胞内转录成RNA分子(例如，前mRNA，包含内含子序列，然后被剪接成成熟的mRNA)的区域(被转录区)的DNA序列，其与调控区(例如启动子)有效的连接。因此，基因可以包含一些有效的连接的序列，例如启动子、包含例如翻译起始涉及的序列的5’前导序列，(蛋白质)编码区(cDNA或基因组DNA)和包含例如转录终止位点的3’非翻译序列。“内源性基因”用于与“外来基因”、“转基因”或“嵌合基因”区分，指来自特定植物属、物种或变种的植物的基因，不是通过转化引入植物的(即，不是“转基因”)，而是通常存在于所述植物属、物种或变种的植物中的，或者是从其通常存在的另一种植物属、物种或变种的植物中，通过普通的育种技术或通过体细胞杂交(例如，通过原生质体融合)，引入到植物中的。相似的，基因的“内源性等位基因”不是通过植物转化引入到植物或植物组织中的，而是例如通过植物诱变和/或选择产生的，或通过筛选天然的植物群体获得的。
“表达基因”或“基因表达”指这样的过程，其中与合适的调控区(特别是启动子)有效连接的DNA区域，转录成RNA分子。然后，RNA分子在细胞内继续加工(通过转录后过程)，例如，通过RNA剪接和翻译起始，翻译成氨基酸链(多肽)，并且通过翻译终止密码子结束翻译。术语“功能性表达”在本文中用于表示生产了功能性蛋白质，术语“非功能性表达”表示生产的蛋白质具有降低的或没有功能(生物学活性)，或者未生产蛋白质(也参见下文)。
术语“蛋白质”或“多肽”可互换的使用，指由氨基酸链构成的分子，不涉及特殊的作用模式、大小、3维结构或起源。因此，FATB蛋白的“片段”或“部分”也可以称为“蛋白质”。“分离的蛋白质”用于指不再位于其天然环境中的蛋白质，例如在体外或在重组的细菌或植物宿主细胞中。“酶”是包含酶促活性的蛋白质，例如功能性FATB蛋白，其能够水解底物脂肪酰-ACP成为游离脂肪酸和ACP(EC号3.1.2.)。
术语“靶向肽”或“转运肽”指将蛋白质靶向到胞内细胞器例如质体的氨基酸序列。野生型FATB蛋白质在其N-末端包含质体靶向肽(或质体转运肽)。
“成熟蛋白”或“成熟FATB蛋白”指没有质体转运肽的功能性FATB酶。“前体蛋白”指具有其转运肽的成熟蛋白。
“FATB基因”在本文中指编码脂肪酰-ACP硫脂酶II型蛋白(即，FATB蛋白)的核酸序列。功能性“FATB蛋白“具有脂肪酰ACP硫酯酶活性，即，它能够水解脂肪酰-ACP底物，优选的饱和脂肪酰-ACP底物(例如，棕榈酰-ACP；C16:0-ACP)，成为游离脂肪酸(例如，C16:0)和ACP，这可以是由生物学测定来测试。为了确定特定FATB基因/蛋白质的功能和/或官能性，可以使用例如Salas和Ohlrogge(2002，Archives ofBiochemistry and Biophysics 403：25-34)中描述的细菌表达系统或Mayer和Shanklin(2007，BMC Plant Biology 7(1)：1-11)中描述的基于琼脂平板的比色筛选硫酯酶活性。为了确定植物或植物组织中的整体FATB活性，可以对植物提取物实施脂肪酰-ACP水解测定，如Bonaventure等人(2003，Plant Cell15：1020-1033)以及Eccleston和Ohlrogge(1998，Plant Cell 10：613-622)中描述的。
如本文中使用的，术语“等位基因”意指特定基因座的基因的任何一种或多种替换形式。在生物体的二倍体(双二倍体)细胞中，给定基因的等位基因位于染色体的特定位置或基因座(基因座的复数)上。一对等位基因存在于成对同源染色体的每条染色体上。
如本文中使用的，术语“同源染色体”意指这样的染色体，所述染色体含有相同生物学特征的信息，在相同基因座上含有相同的基因，但可能是这些基因的不同等位基因。同源染色体是在减数分裂过程中成对的染色体。“非同源染色体”代表了生物体的所有生物学特征，形成一组，而细胞内的组数被称为倍性。二倍体生物含有两组非同源染色体，其中每组同源染色体继承自不同的亲本。在双二倍体物种中，实质上存在两组二倍体基因组，从而将两组基因组的染色体称为部分同源染色体(相似的，两组基因组的基因座或基因被称为部分同源基因座或基因)。二倍体或双二倍体的植物品种在特定的基因座可以包含大量的不同等位基因。
如本文中使用的，术语“杂合”意指当分别位于细胞内相应的成对同源染色体上的特定基因座中存在两个不同的等位基因时所存在的遗传条件。相反的，如本文中使用的，术语“纯合”意指当分别位于细胞内相应的成对同源染色体上的特定基因座中存在两个相同的等位基因时所存在的遗传条件。
如本文中使用的，术语“基因座(复数基因座)”意指染色体上的一个或多个特定位置，或位点，其中发现了例如基因或遗传标记。例如“FATB-A1基因座”指在A基因组的染色体上发现FATB-A1基因(和两个FATB-A1等位基因)的位置。
无论何时，当涉及发明的“植物”或“多种植物”时，可以理解除非另外指明，本文还涵盖了植物部分(细胞、组织或器官、种子、已分离的部分如根、叶、花、花粉等)，保留了亲本的区别特征(特别是种子油组成)的植物后代，例如通过自交或杂交获得的种子(如，杂交种子(通过杂交两株近交亲本系获得的))，从其衍生的杂交植物和植物部分。
“分子测定”(或测试)指(直接或间接)表示在一个或多个FATB基因座(即，在基因座FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和/或FATB-C3中的一个或多个)上一种或多种特定FATB等位基因的存在或缺失的测定。在一个实施方案中，允许测定特定的(野生型或突变)等位基因在任何单个植物的基因座上是纯合还是杂合。
如本文中使用的，术语“野生型FATB”(例如，野生型FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)意指，在芸苔属植物中发现的天然发生的等位基因，其编码功能性FATB蛋白(例如，分别是功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)。相反，“突变FATB”(例如，突变FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)指不编码功能性FATB蛋白的FATB等位基因，即编码非功能性FATB蛋白(例如，分别是非功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3)或不编码FATB蛋白的FATB等位基因。此类“突变FATB等位基因”是在其核酸序列中包含一个或多个突变的野生型FATB等位基因，从而突变优选的导致体内细胞内功能性FATB蛋白的(绝对或相对)量显著降低。FATB-蛋白-编码核酸序列的突变等位基因在本文中命名为“fatB”(例如，分别是fatB-a1、fatB-a2、fatB-a3、fatB-c1、fatB-c2或fatB-c3)。突变等位基因可以是“天然突变”等位基因，其是在自然界中发现的突变等位基因(例如，在没有人为应用诱变剂的条件下自发产生的)，或通过人类干涉诱导的“诱导的突变”等位基因，例如，通过诱变。
“显著降低量的功能性FATB蛋白”(例如，功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和/或FATB-C3蛋白)指与不包含突变FATB等位基因的细胞产生的功能性FATB蛋白的量相比，通过含有突变FATB等位基因的细胞产生的功能性FATB蛋白的量降低至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％(即，细胞不产生功能性蛋白)。因此，该定义涵盖了在体内不具有生物学活性的“非功能性”蛋白(例如，截短的蛋白质)的生产，功能性蛋白的绝对量的降低(例如，由于基因突变产生的无功能蛋白)，和/或与野生型、功能性蛋白的活性相比，具有降低的生物学活性的蛋白质(即，“功能失常”蛋白质(例如通过可变mRNA剪接产生的截短的蛋白质或蛋白质))的生产。同样地，术语“突变FATB蛋白”涵盖了突变核酸序列(“fatB等位基因”)编码的蛋白质，从而与非突变、野生型序列(“FATB等位基因”)编码的蛋白质活性相比，所述突变导致显著降低的和/或没有体内FATB酶活性。
如本文中使用的，“诱变”指这样的过程，其中植物细胞(例如，芸苔属种子或组织，如花粉等)与诱变剂或电离辐射(中子(如快中子诱变等)、γ射线(如钴60源提供的)、X射线等)或前述的组合接触一次或多次，所述诱变剂例如化学物质(例如，乙基甲基磺酸盐(EMS)、乙基亚硝基脲(ENU)等)。辐射造成的突变通常是大段缺失或其它的严重损伤，例如易位或复杂的重排，而化学诱变剂造成的突变通常是更分散的损伤，例如点突变。例如，EMS烷基化鸟嘌呤碱基导致碱基错配：烷基化的鸟嘌呤将与胸腺嘧啶碱基配对，主要导致G/C向A/T转变。在诱变后，利用已知的技术从处理的细胞再生芸苔属植物。例如，可以根据常规的生长程序种植所获得的芸苔属种子，然后在植物上形成自花授粉的种子。可选的，可以提取双重单倍体小植物，立即形成纯合植物。可以收获作为此类自花授粉的结果，在这一代或下一代形成的其它种子，并就存在的突变FATB等位基因进行筛选。筛选特定突变等位基因的一些技术是已知的，例如DeleteageneTM(Delete-a-gene；Li等人，2001，Plant J 27：235-242)使用聚合酶链式反应(PCR)测定，来筛选通过快中子诱变产生的缺失突变，TILLING(基因组的靶向诱导局部缺失；McCallum等人，2000，NatBiotechnol 18：455-457)鉴别了EMS-诱导的点突变等。筛选特定突变FATB等位基因存在的其它技术描述在下文的实施例中。
术语基因或蛋白质的“直向同源物”在本文中指在另一个物种中发现的同源基因或蛋白质，其具有与基因或蛋白质相同的功能，但(通常)从物种具有偏离的基因(即，通过物种形成从共同的祖先进化的基因)的时间点开始，其序列偏离。因此，可以基于序列比较(例如，基于整个序列或特定结构域的百分比序列同一性)和/或功能分析，在其它的植物物种(例如，芥菜等)中鉴定欧洲油菜FATB基因的直向同源物。
本文中使用的“变种”与UPOV规范一致，指在单个已知最低级别的植物分类单位中的植物分组，所述分组可以通过由给定基因型或基因型的组合所导致的特征的表达来定义，可以通过至少一种所述特征的表达来与任何其它植物分组进行区分，并且在关于它进行无变化(稳定)繁殖的适合性方面可认为是一个单位。
术语“包含”理解为具体说明了所陈述部分、步骤或组分的存在，但不排除存在一种或多种其它的部分、步骤或组分。因此，包含一些性状的植物可以包含其它的性状。
可以理解，当以单数形式(例如，植物或根)指代词时，复数形式(例如，复数的植物，复数的根)也包括在内。因此，通过不定冠词但属性是(“a”或“an”)指代元件时，不排除存在一个以上的元件的可能性，除非上下文明确的要求有且仅有一个元件。因此，不定冠词单数形式(“a”或“an”)通常意指“至少一个”。
出于本发明的目的，两个相关核苷酸或氨基酸序列的“序列同一性”表示为百分比，指两条最优比对的序列中具有相同残基的位置数(x100)除以比较的位置数。将空位视为具有不相同残基的位置，所述空位是比对中这样的位置，所述位置上的残基存在于一条序列中，而不存在于另一条序列中。根据European Molecular Biology Open SoftwareSuite(EMBOSS，Rice等人，2000，Trends in Genetics 16(6)：276-277；参见例如http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html)中的Needleman和Wunsch总体对比算法(Needleman和Wunsch，1970，J Mol Biol 48(3)：443-53)，使用缺省设置(空位开放罚分＝10(对于核苷酸)/10(对于蛋白质)和空位延伸罚分＝0.5(对于核苷酸)/0.5(对于蛋白质))，通过在全长比对两条序列来发现两条序列的“最优比对”。对于核苷酸，使用的缺省评分矩阵是EDNAFULL，而对于蛋白质，缺省的评分矩阵是EBLOSUM62。
如本文中使用的，“基本相同(subtantially identical)”或“实质相似(essentially similar)”指，当如上述进行最优比对时，至少具有某一最小百分比的序列同一性(如下文进一步定义)的序列。
可以使用“严格杂交条件”来鉴定与给定的核苷酸序列基本相同的核苷酸序列。严格条件是序列依赖性的，在不同环境中可以不同。通常，选择的严格条件是比特定的序列在定义的离子强度和pH下的热解链点(Tm)低约5℃。Tm是(在定义的离子强度和pH下)50％的靶序列与完全匹配的探针杂交的温度。通常，所选择的严格条件是在pH7和至少60℃的温度下，盐浓度为约0.02摩尔。降低盐浓度和/或增加温度，可增加严格性。用于RNA-DNA杂交的严格条件(Northern印迹，使用探针例如100nt)是，例如包括至少一次在63℃下，在0.2XSSC中洗涤20min的条件，或等价的条件。
“高严格条件”可以例如通过如下提供：在65℃的水溶液中杂交，所述溶液含有6xSSC(20x SSC含有3.0M NaCl，0.3M Na-柠檬酸，pH 7.0)，5x Denhardt′s(100X Denhardt’s含有2％ Ficoll，2％聚乙烯吡咯烷酮，2％牛血清白蛋白)，0.5％十二烷基硫酸钠(SDS)，和作为非特异性竞争物的20μg/ml变性的载体DNA(单链鱼精子DNA，具有平均长度为120-3000核苷酸)。在杂交后，可以在若干步骤中进行高严格洗涤，最终洗涤(约30分钟)是在杂交温度下，0.2-0.1X SSC，0.1％SDS中进行。
“中严格条件”指与上述溶液杂交等价的条件，但是在约60-62℃。中等严格洗涤可以在杂交温度下，1X SSC，0.1％ SDS中进行。
“低严格性”指与上述溶液杂交等价的条件，但是在约50-52℃。低严格洗涤可以在杂交温度下，2X SSC，0.1％ SDS中进行。还参见Sambrook等人，(1989)以及Sambrook和Russell(2001)。
详细描述
本发明人发现，欧洲油菜(基因组AACC，2n＝4x＝38)是异源四倍体(双二倍体)物种，由于它来源于二倍体祖先，实质上含有两个二倍体基因组(A和C基因组)，所述欧洲油菜在它的基因组中包括共计6个FATB基因座和FATB基因，3个基因在A基因组(本文中称为“FATB-A1”、“FATB-A2”和“FATB-A3”)中，3个基因在C基因组中(本文中称为“FATB-C1”、“FATB-C2”和“FATB-C3”)。认为FATB-A1基因与FATB-C1基因是“部分同源的”，FATB-A2与FATB-C2是部分同源的，且FATB-A3与FATB-C3是部分同源的，即，“A基因”发现在A基因组中，且源自二倍体祖先芜菁(AA)，同时，“C基因”发现在欧洲油菜的C基因组中，且源自二倍体祖先甘蓝(CC)。
如任何二倍体基因组中，每个FATB基因在基因组的每个FATB基因座上可以存在2个“等位基因”(一个等位基因是在一条染色体上发现的基因序列，另一个位于同源染色体上)。在任何给定的植物中，这2个等位基因的核苷酸序列可以是相同(纯合)或不同的(杂合)，虽然在物种中，整体看来每个FATB基因存在的不同潜在等位基因的数量可以远大于2。
此外发现，在上述6个FATB基因中的仅1或2个中包含突变的植物，不足以显著降低植物种子油中的饱和脂肪酸的百分比(wt％)，所述突变导致突变fatB等位基因的野生型等价体编码的功能性FATB蛋白量的显著降低。认为，为了获得生产低饱和或无饱和的种子油的植物，植物中需要包含在3个不同的FATB基因(选自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)中的至少3个突变fatB等位基因。
因此，在发明的一个实施方案中，本文提供的植物至少包含3个不同FATB基因的3个突变fatB等位基因，从而突变fatB等位基因导致这些突变等位基因的野生型等价体编码的功能性FATB蛋白类型的量显著降低，因此，导致在体内在植物细胞，特别是发育的种子中，产生的功能性FATB蛋白的量整体显著降低。
通过在一株植物中组合足够拷贝的特定突变fatB等位基因与足够拷贝的特定野生型FATB等位基因，能够精细调整产生的功能性FATB蛋白的量和/或类型，这依次影响从质体中的游离饱和脂肪酸(的量和/或类型)输出，从而影响产生的种子油的脂肪酸组成。因此，可以以下述方式调整6种FATB蛋白中每一种的绝对和相对量，所述方式提供这样的植物，所述植物产生对植物生长和发育足量的FATB蛋白，同时在这些植物的种子油中产生和储存理想的脂肪酸的量和/或类型。因此，在发明的一个实施方案中，提供的植物和植物部分包括至少一种功能性表达的FATB等位基因，其选自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3，其编码完全功能性的FATB蛋白，同时剩余的等位基因可以是突变fatB等位基因。
因此，在发明的一个方面，提供了包括(6个FATB基因的)n-重数(tuple)的突变fatB等位基因的植物或植物部分，其中n≤12，优选的n≤11(例如，n＝10、9或8)，从而至少一个等位基因产生功能性FATB蛋白。
在发明的其它方面，提供了纯合FATB三突变(n＝6，即对于选自6个FATB基因的3个基因的突变等位基因而言是纯合)，纯合FATB四突变(n＝8)和/或纯合FATB五突变(n＝10)的植物或植物部分，其中，突变等位基因选自基因FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
因此，在发明的一个实施方案中，本文提供了纯合的FATB三突变植物，其中植物的基因型可以描述为：
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1-FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3.
在发明的另一个实施方案中，本文提供了纯合的FA TB四突变植物，其中植物的基因型可以描述为：
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3.
在发明的另一个实施方案中，本文提供了纯合的FATB五突变植物，其中植物的基因型可以描述为：
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FA TB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3.
在发明的其它方面，纯合的FATB三突变(n＝6)，四突变(n＝8)和/或五突变(n＝10)的植物或植物部分还包括其它的突变等位基因，其中对于所述其它的突变FATB等位基因而言，所述突变植物或植物部分是杂合的(即分别是n＝7、n＝9、和n＝11)，且其中突变等位基因选自剩余的野生型FATB基因(即FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2或FATB-C3基因)。
因此，在发明的其它实施方案中，本文提供了还包括一个其它突变FATB等位基因的纯合FATB三突变植物，其中植物的基因型可以描述为：
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FA TB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FA TB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or
-FATB-A1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3.
在发明的另一个实施方案中，本文提供了还包括一个其它突变FATB等位基因的纯合FATB四突变植物，其中植物的基因型可以描述为：
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/FATB-C3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/FATB-C3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，FATB-C2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，FATB-C1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，FATB-A3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/FATB-A1，FATB-A2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or
-FATB-A1/FATB-A1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3.
在发明的另一个实施方案中，本文提供了包括一个其它突变FATB等位基因的纯合FATB五突变植物，其中植物的基因型可以描述为：
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，FATB-C3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/FATB-C2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/FATB-C1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/FATB-A3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，
-fatB-a1/fatB-a1，fatB-a2/FATB-A2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3，or
-fatB-a1/FATB-A1，fatB-a2/fatB-a2，fatB-a3/fatB-a3，fatB-c1/fatB-c1，fatB-c2/fatB-c2，fatB-c3/fatB-c3.
本文还提供了来自芸苔属物种的野生型和突变FATB基因/等位基因的核酸序列，以及野生型和突变FATB蛋白。还提供了在芸苔属植物中产生和组合突变和野生型FATB等位基因的方法，以及在其基因组中包含野生型和突变FATB等位基因的特定组合的芸苔属植物和植物部分，其中，这些植物产生具有低饱和或无饱和的种子油，且植物优选的生长正常并具有正常的表型。这些植物用于向其它植物转移突变FATB等位基因的用途也是发明的实施方案，以及还有所述任何植物的植物产物。此外，提供了用于组合或检测FATB基因和/或等位基因的标志物辅助选择(MAS)的试剂盒和方法。下文将详细描述发明的各个实施方案。
根据本发明的核酸序列
提供了编码功能性FATB蛋白的野生型(FATB)核酸序列，和来自芸苔属物种，特别是欧洲油菜的FATB基因的突变(fatB)核酸序列(包括一个或多个突变，优选的是导致所编码的FATB蛋白的生物学活性显著降低的突变，或不产生FATB蛋白的突变)，但所述突变也可以来自其它芸苔属作物物种。例如，包含A和/或C基因组的芸苔属物种可以包括不同的FATB-A或FATB-C基因的等位基因，根据发明所述基因可以在单株植物中鉴别和组合。此外，可以使用诱变方法在野生型FATB等位基因中产生突变，从而产生根据发明使用的突变等位基因。由于特定的FATB等位基因优选的通过杂交和选择在欧洲油菜中组合，因此，在一个实施方案中，提供了在芸苔属植物中(即，内源性)的FATB和/或fatB核酸序列，所述植物可以与欧洲油菜杂交，或者可用于产生“合成的”欧洲油菜植物。本领域中描述了在不同芸苔属物种之间的杂交，例如Snowdon(2007，Chromosome research 15：85-95)中所述。可以使用种间杂交来例如从欧洲油菜(AACC)的C基因组向埃塞俄比亚芥(BBCC)的C基因组中转移基因，或者甚至从例如欧洲油菜(AACC)的C基因组向芥菜(AABB)的B基因组中转移基因(通过它们的C和B基因组之间非常规重组的偶发事件)。通过杂交原始祖先，甘蓝(CC)和芜菁(AA)，可以产生“重新合成的”或“合成的”欧洲油菜品系。在芸苔属作物物种及其亲属之间的杂交，可以成功的克服种间还有属间的不相容屏障，例如通过胚胎拯救技术或原生质体融合(参见例如，Snowdon，见上文)。
然而，本文还提供了分离的FATB和fatB核酸序列(例如，通过克隆从植物分离，或通过DNA合成合成地制造)，及任意上述序列的变体和片段，这些可用于确定植物或植物部分中内源的存在哪些序列，不论所述序列是否编码功能性蛋白或具有显著降低功能的或无功能的蛋白(例如，通过在重组宿主细胞和酶测定中表达)，以及为了产生具有理想组合的功能和突变等位基因的植物，所述这些用于选择和从一种芸苔属植物向另一种转移特定的等位基因。
已经从欧洲油菜的冬油菜(winter oilseed rape)(WOSR)和春油菜(oilseedrape)(SOSR)中分离出FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3的核酸序列，如序列表中所述。关于野生型FATB序列，描述了野生型FATB序列，而下文和实施例中描述了这些序列的突变fatB序列，和与其实质相似的序列。基因组FATB蛋白-编码DNA，和相应的前mRNA，包含被4个内含子(从5’端开始编号内含子1-4)中断的5个外显子(从5’端开始编号外显子1-5)。在cDNA和相应的加工的mRNA(即，剪接RNA)中，去除了内含子并且外显子是相连接的，如序列表所示。外显子序列是更加进化保守的，因此比内含子序列更少变化。
根据发明的“FATB-A1核酸序列”或“FATB-A1变体核酸序列”是编码这样的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，当所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2(WOSR FATB-A1)(在具有或不具有转运肽的条件下比对时)和/或SEQ ID NO：14(SOSR FATB-A1)(在具有或不具有转运肽的条件下比对时，)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列与SEQ ID NO：1(WOSRFATB-A1)(当在具有或不具有内含子1-4的条件下比对时)和/或SEQ IDNO：13(SOSR FATB-A1)(当在具有或不具有内含子1-4的条件下比对时)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些核酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-A2核酸序列”或“FATB-A2变体核酸序列”是编码这样的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：4(WOSR FATB-A2)和/或SEQ ID NO：16(SOSR FATB-A2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列当在具有或不具有内含子1-4的条件下比对时，与SEQ ID NO：3(WOSRFATB-A2)和/或SEQ ID NO：15(SOSR FATB-A2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些核酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-A3核酸序列”或“FATB-A3变体核酸序列”是编码这样的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：6(WOSR FATB-A3)和/或SEQ ID NO：18(SOSR FATB-A3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列当在具有或不具有内含子1-4的条件下比对时，与SEQ ID NO：5(WOSRFATB-A3)和/或SEQ ID NO：17(SOSR FATB-A3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些核酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-C1核酸序列”或“FATB-C1变体核酸序列”是编码这样的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：8(WOSR FATB-C1)和/或SEQ ID NO：20(SOSR FATB-C1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列当在具有或不具有内含子1-4的条件下比对时，与SEQ ID NO：7(WOSRFATB-C1)和/或SEQ ID NO：19(SOSR FATB-C1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些核酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-C2核酸序列”或“FATB-C2变体核酸序列”是编码这样的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：10(WOSRFATB-C2)和/或SEQ ID NO：22(SOSR FATB-C2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列当在具有或不具有内含子1-4的条件下比对时，与SEQ ID NO：9(WOSR FATB-C2)和/或SEQ ID NO：21(SOSR FATB-C2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些核酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-C3核酸序列”或“FATB-C3变体核酸序列”是编码这样的氨基酸序列的核酸序列或下述核酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：12(WOSRFATB-C3)和/或SEQ ID NO：24(SOSR FATB-C3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性；或者所述核酸序列当在具有或不具有内含子1-4的条件下比对时，与SEQ ID NO：11(WOSR FATB-C3)和/或SEQ ID NO：23(SOSR FATB-C3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些核酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
因此，发明提供了编码野生型、功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3蛋白的核酸序列，包括其变体和片段(如下文进一步定义的)，还提供了任意上述序列的突变核酸序列，与野生型蛋白相比，所述核酸序列中的突变优选的导致一个或多个氨基酸插入、缺失或取代。优选的，核酸序列中的突变导致一个或多个氨基酸改变(即，相对于野生型氨基酸序列，插入、缺失和/或取代了一个或多个氨基酸)，从而显著的降低了FATB蛋白的生物学活性。突变FATB蛋白的生物学活性的显著降低指，与野生型蛋白的活性相比，酶活性(即，酰基ACP-硫酯酶活性)降低至少30％、至少40％、50％或更多，至少90％或100％(无生物学活性)。
本文提供了内源性和分离的核酸序列。还提供了上文定义的FATB序列和FATB变体核酸序列的片段，用作引物或探针，以及作为根据发明的另一方面(见下文)的试剂盒的组分。FATB或fatB核酸序列或其变体的“片段”(如定义)可以是多种长度，例如FATB或fatB序列(或其变体序列)的至少10、12、15、18、20、50、100、200、500、1000个连续的核苷酸。
编码功能性FATB蛋白的核酸序列
序列表中描述的核酸序列编码来自欧洲油菜的野生型、功能性FATB蛋白。因此，这些序列对分离它们的WOSR和SOSR植物是内源性的。可以在其它的芸苔属作物物种、变种、育种品系或野生登记物中筛选其它的FA TB等位基因，所述基因编码相同的FATB蛋白或其变体。例如，可以使用核酸杂交技术(例如，使用严格杂交条件的Southern印迹)或基于PCR技术来鉴别其它芸苔属植物(例如不同的欧洲油菜变种、品系或登记物)的内源性FATB等位基因，而且也可以在芥菜(特别是A基因组的FATB等位基因)、埃塞俄比亚芥(特别是C基因组的FATB等位基因)和芜菁(A基因组)和甘蓝(C基因组)植物和组织中筛选其它的野生型FATB等位基因。为了在此类植物或植物组织中筛选FATB等位基因的存在，可以使用序列表中提供的FATB核酸序列，或任意这些序列的变体或片段。例如，可以使用完整序列或片段作为探针或引物。例如可以使用特异性或简并引物来从植物或植物组织的基因组DNA中扩增编码FATB蛋白的核酸序列。可以使用标准的分子生物学技术分离和测序这些FA TB核酸序列。然后，可以使用生物信息学分析来表征等位基因，例如为了确定序列对应哪些FATB等位基因，以及序列编码哪些FATB蛋白或蛋白变体。
可以通过本领域已知的重组DNA技术分析核酸序列是否编码功能性FATB蛋白，例如在宿主细胞(例如，细菌如大肠杆菌(E.coli))中表达核酸分子，分析酰基-ACP硫酯酶活性和/或所获得的蛋白或细胞的底物特异性。例如，在大肠杆菌中重组表达后的脂肪酰-ACP水解描述在Doermann等人，2000(Plant Physiology 123：637-643)和Doermann等人，1995(Arch Biochem Biophys 316：612-618)，Yuan等人，(1995，PNAS Vol92：10639-10643)，Salas和Ohlrogge(2002，Archives of Biochemistry andBiophysics 403：25-34)以及Mayer和Shanklin(2007，BMC Plant Biology7(1)：1-11)中。此外，Eccleston和Ohlrogge(关于C12:0-和C18:1-ACP水解；1998，Plant Cell 10：613-622)，Salas和Ohlrogge(2002，Archives ofBiochemistry and Biophysics 403：25-34)以及Bonaventure等人(关于C16:0-ACP和C18:1-ACP水解；2003，Plant Cell 15：1020-1033)已经描述了利用植物组织粗均浆物进行脂肪酰-ACP水解测定。
此外，可以理解，通过在核酸数据库中筛选实质相似的序列，可以以计算机(insilico)鉴别FATB核酸序列及其变体(或任意所述序列的片段)。类似的，可以化学合成核酸序列。还提供了根据发明的核酸分子的片段，其将在下文进一步描述。片段包括只编码成熟蛋白质的核酸序列，或者包括所有或部分外显子和/或内含子序列的更小片段，等。
编码突变FATB蛋白的核酸序列
相对于野生型核酸序列，包含一个或多个核苷酸缺失、插入或取代的核酸序列是发明的另一个实施方案，同样地此类突变核酸分子的片段也是。如下文进一步描述的，可以利用多种已知的方法产生和/或鉴别此类突变核酸序列(称为fatB序列)。此外，以内源性形式和以分离的形式提供了此类核酸分子。在一个实施方案中，突变导致所编码的FATB蛋白的氨基酸序列中的一个或多个改变(缺失、插入和/或取代)(即，不是“沉默突变”)。在另一个实施方案中，核酸序列中的突变导致相对于野生型蛋白，所编码的FATB蛋白的生物学活性显著降低或完全消失。
因此，核酸分子可以包含一个或多个突变，例如：
(a)“错义突变”，所述突变是核酸序列中的改变，其导致氨基酸取代另一个氨基酸；
(b)“无义突变”或“STOP密码子突变”，所述突变是核酸序列中的改变，其导致引入过早的STOP密码子，从而终止翻译(导致截短的蛋白质)；植物基因包含翻译终止密码子“TGA”(RNA中的UGA)、“TAA”(RNA中的UAA)和“TAG”(RNA中的UAG)；因此，在待翻译的成熟mRNA中(在阅读框中)导致上述密码子之一的任何核苷酸取代、插入、缺失将终止翻译。
(c)一个或多个氨基酸的“插入突变”，原因是在核酸的编码序列中添加一个或多个密码子；
(d)一个或多个氨基酸的“缺失突变”，原因是在核酸的编码序列中缺失一个或多个密码子；
(e)“移码突变”，导致在突变下游以不同的框翻译核酸序列。移码突变可以具有各种原因，例如一个或多个核苷酸的插入、缺失或重复，但是影响前-mRNA剪接的突变(剪接位点突变)也可以导致移码；
(f)“剪接位点突变”，其改变或消除了前-mRNA序列的正确剪接，导致与野生型不同氨基酸序列的蛋白质。例如，在RNA剪接过程中可以跳过一个或多个外显子，导致蛋白质缺失由跳过的外显子编码的氨基酸。可选的，可以通过错误剪接，或者可以保留一个或多个内含子，或者可以产生替代的剪接供体或受体，或者可以在替代位置(例如在内含子内)起始剪接，或者可以产生替代的多腺苷酸化信号，来改变阅读框。正确的前-mRNA剪接是复杂的过程，可以受到FATB-编码基因的核苷酸序列中不同突变的影响。在高等真核生物(例如植物)中，主要的剪接体剪接内含子，所述内含子在5’剪接位点(供体位点)含有GU，在3’剪接位点(受体位点)含有AG。核真核基因的约99％的剪接位点遵循该GU-AG法则(或GT-AG法则；参见Lewin，Genes VI，Oxford University Press 1998，第885-920页，ISBN0198577788)，同时，内含子在5’和3’剪接位点含有其他的二核苷酸，例如GC-AG和AU-AC，分别仅占约1％和0.1％。
如上明确所述，理想的是，核酸序列中的一个或多个突变优选的导致突变蛋白，所述蛋白在体内含有显著降低的酶活性或没有酶活性。根本而言，相对于野生型蛋白，导致蛋白质包含至少一个氨基酸插入、缺失和/或取代的任何突变都可以导致显著降低的酶活性或没有酶活性。然而，可以理解，在蛋白质一些部分的突变更容易导致突变FATB蛋白降低的功能，例如导致截短的蛋白质的突变，其中缺失了功能结构域(例如，催化结构域)的重要部分。
本文描述的芸苔属的FATB蛋白是长度约412-424个氨基酸，包括多个结构(和功能)结构域。所述结构域包括以下：约60个氨基酸的N-端质体靶向肽，后接约18个氨基酸的疏水区(假设形成了螺旋跨膜锚形体)。共计约90个氨基酸的该N端部分后接构成成熟FATB蛋白的部分(从N-端氨基酸LPDWSM开始)。它含有通过接头结构域分隔的螺旋/4链片层结构域(“HEEEE”或“4HBT”结构域，以及“热狗基序(hot dog motif)”)的随串联重复(Mayer和Shanklin，2005，J.Biol.Chem.280(5)：3621-3627)。第一个(N-端)螺旋/4链片层结构域(其是由部分外显子1、完整的外显子2和3，以及部分外显子4编码的)包含认为影响底物特异性的氨基酸残基，特别是两个保守的甲硫氨酸(Met或M)，保守的赖氨酸(Lys或K)，保守的缬氨酸(Val或V)，和保守的丝氨酸(Ser或S)(Mayer和Shanklin，2007，BMC Plant Biology 7(1)：1-11)；其第二个(C-端)螺旋/4链片层结构域(大部分由外显子5编码)包含催化氨基酸残基，特别是下述的木瓜蛋白酶样催化三联体：保守的天冬酰胺(Asn或N)，保守的组氨酸(His或H)残基和保守的半胱氨酸(Cys或C)。催化三联体位于第二个螺旋/4链片层结构域中，由蛋白质的外显子5编码。第二个HEEEE结构域还包含认为影响底物特异性的氨基酸残基，特别是保守的色氨酸(Trp或W)(Mayer和Shanklin，2007，见上文)。
表1a：WOSR FATB蛋白质——氨基酸(aa)区域和位置
FATB-A1SEQ ID：2 FATB-A2SEQ ID：4 FATB-A3SEQ ID：6 FATB-C1SEQ ID：8 FATB-C2SEQ ID：10 FATB-C3SEQ ID：12 AtFATBSEQ ID：80
蛋白质大小(aa) 414 424 415 412 415 415 412
N末端 1-90 1-90 1-91 1-88 1-90 1-91 1-88
成熟蛋白质 91-414 91-424 92-415 89-412 91-415 92-415 89-412
由外显子1所编码的aa 1-168 1-168 1-169 1-166 1-168 1-169 1-166
由外显子2所编码的aa 169-213 169-213 170-214 167-211 169-213 170-214 167-211
由外显子3所编码的aa 214-251 214-251 215-252 212-249 214-251 215-252 212-249
由外显子4所编码的aa 252-308 252-308 253-309 250-306 252-308 253-309 250-306
由外显子5所编码的aa 309-414 309-424 310-415 307-412 309-415 310-415 207-412
4HBT 140-277 140-277 141-278 138-275 140-277 141-278 138-275
接头 278-302 278-302 279-303 276-300 278-302 279-303 276-300
4HBT 303-407 303-407 304-408 301-405 303-407 304-408 301-405
保守的Met(M)Lys(K)Val(V)Met(M)Ser(S)Trp(W)Asn(N)His(H)Cys(C) 164176200231264311317319354 164176200231264311317319354 165177201232265312318320355 162174198229262309315317352 164176200231264311317319354 165177201232265312318320355 162174198229262309315317352
表1b：SOSR FATB蛋白质——氨基酸(aa)区域和位置
FATB-A1SEQ ID：14 FATB-A2SEQ ID：16 FATB-A3SEQ ID：18 FATB-C1SEQ ID：20 FATB-C2SEQ ID：22 FATB-C3SEQ ID：24
蛋白质大小(aa) 413 415 415 412 415 415
N末端 1-89 1-90 1-91 1-88 1-90 1-91
成熟蛋白质 90-413 91-415 92-415 89-412 91-415 92-415
由外显子1所编码的aa 1-167 1-168 1-169 1-166 1-168 1-169
由外显子2所编码的aa 168-212 169-213 170-214 167-211 169-213 170-214
由外显子3所编码的aa 213-250 214-251 215-252 212-249 214-251 215-252
由外显子4所编码的aa 251-307 252-308 253-309 250-306 252-308 253-309
由外显子5所编码的aa 308-413 309-415 310-415 307-412 309-415 310-415
4HBT 139-276 140-277 141-278 138-275 140-277 141-278
接头 277-301 278-302 279-303 276-300 278-302 279-303
4HBT 302-406 303-407 304-408 301-405 303-407 304-408
保守的Met(M)Lys(K)Val(V)Met(M)Ser(S)Trp(W)Asn(N)His(H)Cys(C) 163175199230263310316318353 164176200231264311317319354 165177201232265312318320355 162174198229262309315317352 164176200231264311317319354 165177201232265312318320355
因此，在一个实施方案中，提供了包含一个或多个上述任意类型突变的核酸序列。在另一个实施方案中，提供了包含一个或多个缺失突变，一个或多个终止密码子(无义)突变和/或一个或多个剪接位点突变的fatB序列。本质上(以分离的形式)提供了任何上述突变核酸序列，以及内源性的包含此类序列的植物和植物部分。
如本文所使用的，FATB等位基因中的缺失突变是FATB等位基因中这样的突变，其中从相应的野生型FATB等位基因中缺失了至少1、至少2、3、4、5、10、20、30、50、100、200、500、1000或更多个碱基，从而所述缺失导致突变FATB等位基因转录和翻译成在体内具有显著降低或无活性的突变蛋白。缺失可以导致移码和/或可以引入过早的终止密码子，或者可以导致去除编码序列的一个氨基酸或多个(例如，大部分)氨基酸，等。缺失导致具有显著降低的生物学活性的突变蛋白的确切潜在分子机制是不重要的。本文还提供了植物和植物部分，其中完全删除了特定的FATB等位基因，即缺少一个或多个FATB等位基因的植物和植物部分。
如本文中使用的，FATB等位基因中的无义突变是FATB等位基因中这样的突变，其中相应野生型FATB等位基因的编码DNA和相应mRNA序列中引入了一个或多个翻译终止密码子。翻译终止密码子是TGA(mRNA中的UGA)、TAA(UAA)和TAG(UAG)。因此，在编码序列(外显子序列)中导致产生框内终止密码子的任何突变(缺失、插入或取代)，都可以导致翻译的终止和氨基酸链的截短。在一个实施方案中，包含无义突变的突变FATB等位基因是这样的FATB等位基因，其中通过单核苷酸取代在FATB密码子序列中引入了框内终止密码子，例如CAG向TAG，TGG向TAG，TGG向TGA，或CGA向TGA的突变。在另一个实施方案中，包含无义突变的突变FATB等位基因是这样的FATB等位基因，其中通过双核苷酸取代在FATB密码子序列中引入了框内终止密码子，例如CAG向TAA，TGG向TAA，CGG向TAG或TGA，CGA向TAA的突变。在另一个实施方案中，包含无义突变的突变FATB等位基因是这样的FATB等位基因，其中通过三核苷酸取代在FATB密码子序列中引入了框内终止密码子，例如CGG向TAA的突变。截短的蛋白质缺少由突变的下游编码DNA所编码的氨基酸(即，FATB蛋白的C-端部分)，保留了由突变的上游编码DNA所编码的氨基酸(即，FATB蛋白的N-端部分)。在一个实施方案中，无义突变存在于催化三联体的保守性Cys残基之前的任何位置，从而至少缺失了保守性Cys残基，导致截短蛋白质的活性显著降低。与野生型蛋白相比，突变蛋白质截得越短，越易于缺失任何酶活性。因此，在另一个实施方案中，提供了以下包含无义突变的突变FATB等位基因，所述无义突变导致截短的蛋白质具有少于350个氨基酸(缺少保守性Cys)，少于315个氨基酸(缺少木瓜蛋白酶样催化三联体的所有三个保守性氨基酸)，少于300个氨基酸(缺少第二个4HBT结构域)，少于262个氨基酸(缺少保守性Ser)，少于229个氨基酸(缺少第二个保守性Met)，少于198个氨基酸(缺少保守性Val)，少于174个氨基酸(缺少保守性Lys)，至少于162个氨基酸(缺少第一个保守性Met)，或者甚至长度更短的氨基酸。在另一个实施方案中，无义突变导致一个或多个外显子未翻译成蛋白质，例如外显子5、外显子4和5、外显子3-5，或更多。
下文的表格描述了在本文提供的欧洲油菜序列中可能的无义突变的范围：
表2a：FATB-A1(WOSR，SEQ ID NO：1和2)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 53 157 cag→tag
外显子1 157+159 cag→taa
外显子1 79 235 cag→tag
外显子1 235+237 cag→taa
外显子1 90 268 cag→tag
外显子1 268+270 cag→taa
外显子1 94 281 tgg→tag
外显子1 282 tgg→tga
外显子1 281+282 tgg→taa
外显子1 111 331 cag→tag
外显子1 331+333 cag→taa
外显子1 112 335 tgg→tag
外显子1 336 tgg→tga
外显子1 335+336 tgg→taa
外显子1 117 350 tgg→tag
外显子1 351 tgg→tga
外显子1 350+351 tgg→taa
外显子1 136 406 cag→tag
外显子1 406+408 cag→taa
外显子1 143 427 cag→tag
外显子1 427+429 cag→taa
外显子1 148 442+443 cgg→tag
外显子1 442+444 cgg→tga
外显子1 442+443+444 cgg→taa
外显子1 168 502 cag→tag
外显子1 502+504 cag→taa
外显子2 198 678 tgg→tag
外显子2 679 tgg→tga
外显子2 678+679 tgg→taa
外显子2 204 695 cag→tag
外显子2 695+697 cag→taa
外显子2 213 723 tgg→tag
外显子3 798 tgg→tga
外显子2-3 723+798 tgg→taa
外显子3 222 824 tgg→tag
外显子3 825 tgg→tga
外显子3 824+825 tgg→taa
外显子3 225 832 cag→tag
外显子3 832+834 cag→taa
外显子3 235 863 tgg→tag
外显子3 864 tgg→tga
外显子3 863+864 tgg→taa
外显子3 238 871 cga→tga
外显子3 871+872 cga→taa
外显子4 253 986 tgg→tag
外显子4 987 tgg→tga
外显子4 986+987 tgg→taa
外显子4 271 1039 cga→tga
外显子4 1039+1040 cga→taa
外显子5 311 1250 tgg→tag
外显子5 1251 tgg→tga
外显子5 1250+1251 tgg→taa
外显子5 318 1270 cag→tag
外显子5 1270+1272 cag→taa
外显子5 328 1301 tgg→tag
外显子5 1302 tgg→tga
外显子5 1301+1302 tgg→taa
外显子5 341 1339 cag→tag
外显子5 1339+1341 cag→taa
外显子5 361 1399 cag→tag
外显子5 1399+1401 cag→taa
外显子5 383 1465 cag→tag
外显子5 1465+1467 cag→taa
外显子5 389 1483 cag→tag
外显子5 1483+1485 cag→taa
外显子5 401 1520 tgg→tag
外显子5 1521 tgg→tga
外显子5 1520+1521 tgg→taa
外显子5 410 1547 tgg→tag
外显子5 1548 tgg→tga
外显子5 1547+1548 tgg→taa
表2b：FATB-A1(SOSR，SEQ ID NO：13和14)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 53 157 cag→tag
外显子1 157+159 cag→taa
外显子1 78 232 cag→tag
外显子1 232+234 cag→taa
外显子1 89 265 cag→tag
外显子1 265+267 cag→taa
外显子1 93 278 tgg→tag
外显子1 279 tgg→tga
外显子1 278+279 tgg→taa
外显子1 110 328 cag→tag
外显子1 328+330 cag→taa
外显子1 111 332 tgg→tag
外显子1 333 tgg→tga
外显子1 332+333 tgg→taa
外显子1 116 347 tgg→tag
外显子1 348 tgg→tga
外显子1 347+348 tgg→taa
外显子1 135 403 cag→tag
外显子1 403+405 cag→taa
外显子1 142 424 cag→tag
外显子1 424+426 cag→taa
外显子1 147 439+440 cgg→tag
外显子1 439+441 cgg→tga
外显子1 439+440+441 cgg→taa
外显子1 167 499 cag→tag
外显子1 499+501 cag→taa
外显子2 197 675 tgg→tag
外显子2 676 tgg→tga
外显子2 675+676 tgg→taa
外显子2 203 692 cag→tag
外显子2 692+694 cag→taa
外显子2 212 720 tgg→tag
外显子3 795 tgg→tga
外显子2-3 720+795 tgg→taa
外显子3 221821 tgg→tag
外显子3 822 tgg→tga
外显子3 821+822 tgg→taa
外显子3 224 829 cag→tag
外显子3 829+831 cag→taa
外显子3 234 860 tgg→tag
外显子3 861 tgg→tga
外显子3 860+861 tgg→taa
外显子3 237 868 cga→tga
外显子3 868+869 cga→taa
外显子4 252 983 tgg→tag
外显子4 984 tgg→tga
外显子4 983+984 tgg→taa
外显子4 270 1036 cga→tga
外显子4 1036+1037 cga→taa
外显子5 310 1247 tgg→tag
外显子5 1248 tgg→tga
外显子5 1247+1248 tgg→taa
外显子5 317 1267 cag→tag
外显子5 1267+1269 cag→taa
外显子5 327 1298 tgg→tag
外显子5 1299 tgg→tga
外显子5 1298+1299 tgg→taa
外显子5 340 1336 cag→tag
外显子5 1336+1338 cag→taa
外显子5 360 1396 cag→tag
外显子5 1396+1398 cag→taa
外显子5 382 1462 cag→tag
外显子5 1462+1464 cag→taa
外显子5 388 1480 cag→tag
外显子5 1480+1482 cag→taa
外显子5 400 1517 tgg→tag
外显子5 1518 tgg→tga
外显子5 1517+1518 tgg→taa
外显子5 409 1544 tgg→tag
外显子5 1545 tgg→tga
外显子5 1544+1545 tgg→taa
表3a：FATB-A2(WOSR，SEQ ID NO：3和4)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 cag→tag
外显子1 154+156 cag→taa
外显子1 79235 cag→tag
外显子1 235+237 cag→taa
外显子1 90 268 cag→tag
外显子1 268+270 cag→taa
外显子1 94 281 tgg→tag
外显子1 282 tgg→tga
外显子1 281+282 tgg→taa
外显子1 111 331 cag→tag
外显子1 331+333 cag→taa
外显子1 112 335 tgg→tag
外显子1 336 tgg→tga
外显子1 335+336 tgg→taa
外显子1 117 350 tgg→tag
外显子1 351 tgg→tga
外显子1 350+351 tgg→taa
外显子1 136 406 cag→tag
外显子1 406+408 cag→taa
外显子1 143 427 cag→tag
外显子1 427+429 cag→taa
外显子1 168 502 cag→tag
外显子1 502+504 cag→taa
外显子2 198 672 tgg→tag
外显子2 673 tgg→tga
外显子2 672+673 tgg→taa
外显子2 204 689 cag→tag
外显子2 689+691 cag→taa
外显子2 213 717 tgg→tag
外显子3 812 tgg→tga
外显子2-3 717+812 tgg→taa
外显子3 222 838 tgg→tag
外显子3 839 tgg→tga
外显子3 838+839 tgg→taa
外显子3 225 846 cag→tag
外显子3 846+848 cag→taa
外显子3 235 877 tgg→tag
外显子3 878 tgg→tga
外显子3 877+878 tgg→taa
外显子3 238 885+886 cgg→tag
外显子3 885+887 cgg→tga
外显子3 885+886+887 cgg→taa
外显子3 248 915 cga→tga
外显子3 915+916 cga→taa
外显子4 253 1064 tgg→tag
外显子4 1065 tgg→tga
外显子4 1064+1065 tgg→taa
外显子4 271 1117 cga→tga
外显子4 1117+1118 cga→taa
外显子5 3111316 tgg→tag
外显子5 1317 tgg→tga
外显子5 1316+1317 tgg→taa
外显子5 318 1336 cag→tag
外显子5 1336+1338 cag→taa
外显子5 328 1367 tgg→tag
外显子5 1368 tgg→tga
外显子5 1367+1368 tgg→taa
外显子5 341 1405 cag→tag
外显子5 1405+1407 cag→taa
外显子5 361 1465 cag→tag
外显子5 1465+1467 cag→taa
外显子5 383 1531 cag→tag
外显子5 1531+1533 cag→taa
外显子5 387 1543 cga→tga
外显子5 1543+1544 cga→taa
外显子5 389 1549 cag→tag
外显子5 1549+1551 cag→taa
外显子5 401 1586 tgg→tag
外显子5 1587 tgg→tga
外显子5 1586+1587 tgg→taa
外显子5 404 1594 cag→tag
外显子5 1594+1596 cag→taa
外显子5 410 1613 tgg→tag
外显子5 1614 tgg→tga
外显子5 1613+1614 tgg→taa
表3b：FATB-A2(SOSR，SEQ ID NO：15和16)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 cag→tag
外显子1 154+156 cag→taa
外显子1 79 235 cag→tag
外显子1 235+237 cag→taa
外显子1 90 268 cag→tag
外显子1 268+270 cag→taa
外显子1 94 281 tgg→tag
外显子1 282 tgg→tga
外显子1 281+282 tgg→taa
外显子1 111 331 cag→tag
外显子1 331+333 cag→taa
外显子1 112 335 tgg→tag
外显子1 336 tgg→tga
外显子1 335+336 tgg→taa
外显子1 117 350 tgg→tag
外显子1 351 tgg→tga
外显子1 350+351 tgg→taa
外显子1 136 406 cag→tag
外显子1 406+408 cag→taa
外显子1 143 427 cag→tag
外显子1 427+429 cag→taa
外显子1 168 502 cag→tag
外显子1 502+504 cag→taa
外显子2 198 672 tgg→tag
外显子2 673 tgg→tga
外显子2 672+673 tgg→taa
外显子2 204 689 cag→tag
外显子2 689+691 cag→taa
外显子2 213 717 tgg→tag
外显子3 812 tgg→tga
外显子2-3 717+812 tgg→taa
外显子3 222 838 tgg→tag
外显子3 839 tgg→tga
外显子3 838+839 tgg→taa
外显子3 225 846 cag→tag
外显子3 846+848 cag→taa
外显子3 235 877 tgg→tag
外显子3 878 tgg→tga
外显子3 877+878 tgg→taa
外显子3 238 885+886 cgg→tag
外显子3 885+887 cgg→tga
外显子3 885+886+887 cgg→taa
外显子3 248 915 cga→tga
外显子3 915+916 cga→taa
外显子4 253 1064 tgg→tag
外显子4 1065 tgg→tga
外显子4 1064+1065 tgg→taa
外显子4 271 1117 cga→tga
外显子4 1117+1118 cga→taa
外显子5 311 1316 tgg→tag
外显子5 1317 tgg→tga
外显子5 1316+1317 tgg→taa
外显子5 318 1336 cag→tag
外显子5 1336+1338 cag→taa
外显子5 3281367 tgg→tag
外显子5 1368 tgg→tga
外显子5 1367+1368 tgg→taa
外显子5 341 1405 cag→tag
外显子5 1405+1407 cag→taa
外显子5 361 1465 cag→tag
外显子5 1465+1467 cag→taa
外显子5 383 1531 cag→tag
外显子5 1531+1533 cag→taa
外显子5 387 1543 cga→tga
外显子5 1543+1544 cga→taa
外显子5 389 1549 cag→tag
外显子5 1549+1551 cag→taa
外显子5 401 1586 tgg→tag
外显子5 1587 tgg→tga
外显子5 1586+1587 tgg→taa
外显子5 410 1613 tgg→tag
外显子5 1614 tgg→tga
外显子5 1613+1614 tgg→taa
表4a：FATB-A3(WOSR，SEQ ID NO：5和6)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 caa→taa
外显子1 81 241 caa→taa
外显子1 82 244 caa→taa
外显子1 91 271 cag→tag
外显子1 271+273 cag→taa
外显子1 952 84 tgg→tag
外显子1 285 tgg→tga
外显子1 284+285 tgg→taa
外显子1 112 334 cag→tag
外显子1 334+336 cag→taa
外显子1 113 338 tgg→tag
外显子1 339 tgg→tga
外显子1 338+339 tgg→taa
外显子1 137 409 cag→tag
外显子1 409+411 cag→taa
外显子1 144 430 cag→tag
外显子1 430+432 cag→taa
外显子1 169 505 cag→tag
外显子1 505+507 cag→taa
外显子2 199 828 tgg→tag
外显子2 829 tgg→tga
外显子2 828+829 tgg→taa
外显子2 205 845 cag→tag
外显子2 845+847 cag→taa
外显子2 214 873 tgg→tag
外显子3 947 tgg→tga
外显子2-3 873+947 tgg→taa
外显子3 223 973 tgg→tag
外显子3 974 tgg→tga
外显子3 973+974 tgg→taa
外显子3 236 1012 tgg→tag
外显子3 1013 tgg→tga
外显子3 1012+1013 tgg→taa
外显子3 239 1020+1021 cgg→tag
外显子3 1020+1022 cgg→tga
外显子3 1020+1021+1022 cgg→taa
外显子4 254 1146 tgg→tag
外显子4 1147 tgg→tga
外显子4 1146+1147 tgg→taa
外显子4 272 1199 cga→tga
外显子4 1199+1200 cga→taa
外显子5 312 1420 tgg→tag
外显子5 1421 tgg→tga
外显子5 1420+1421 tgg→taa
外显子5 319 1440 cag→tag
外显子5 1440+1442 cag→taa
外显子5 329 1471 tgg→tag
外显子5 1472 tgg→tga
外显子5 1471+1472 tgg→taa
外显子5 362 1569 cag→tag
外显子5 1569+1571 cag→taa
外显子5 384 1635 cag→tag
外显子5 1635+1637 cag→taa
外显子5 388 1647 cga→tga
外显子5 1647+1648 cga→taa
外显子5 390 1653 cag→tag
外显子5 1653+1655 cag→taa
外显子5 399 1680 cga→tga
外显子5 1680+1681 cga→taa
外显子5 402 1690 tgg→tag
外显子5 1691 tgg→tga
外显子5 1690+1691 tgg→taa
外显子5 411 1717 tgg→tag
外显子5 1718 tgg→tga
外显子5 1717+1718 tgg→taa
表4b：FATB-A3(SOSR，SEQ ID NO：17和18)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 cag→tag
外显子1 154+156 cag→taa
外显子1 81 241 caa→taa
外显子1 82 244 caa→taa
外显子1 91 271 cag→tag
外显子1 271+273 cag→taa
外显子1 95 284 tgg→tag
外显子1 285 tgg→tga
外显子1 284+285 tgg→taa
外显子1 112 334 cag→tag
外显子1 334+336 cag→taa
外显子1 113 338 tgg→tag
外显子1 339 tgg→tga
外显子1 338+339 tgg→taa
外显子1 137 409 cag→tag
外显子1 409+411 cag→taa
外显子1 144 430 cag→tag
外显子1 430+432 cag→taa
外显子1 169 505 cag→tag
外显子1 505+507 cag→taa
外显子2 199828 tgg→tag
外显子2 829 tgg→tga
外显子2 828+829 tgg→taa
外显子2 205 845 cag→tag
外显子2 845+847 cag→taa
外显子2 214 873 tgg→tag
外显子3 947 tgg→tga
外显子2-3 873+947 tgg→taa
外显子3 223 973 tgg→tag
外显子3 974 tgg→tga
外显子3 973+974 tgg→taa
外显子3 236 1012 tgg→tag
外显子3 1013 tgg→tga
外显子3 1012+1013 tgg→taa
外显子4 254 1144 tgg→tag
外显子4 1145 tgg→tga
外显子4 1144+1145 tgg→taa
外显子4 272 1197 cga→tga
外显子4 1197+1198 cga→taa
外显子5 312 1402 tgg→tag
外显子5 1403 tgg→tga
外显子5 1402+1402 tgg→taa
外显子5 319 1422 cag→tag
外显子5 1422+1424 cag→taa
外显子5 329 1453 tgg→tag
外显子5 1454 tgg→tga
外显子5 1453+1454 tgg→taa
外显子5 362 1551 cag→tag
外显子5 1551+1553 cag→taa
外显子5 3841617 cag→tag
外显子5 1617+1619 cag→taa
外显子5 388 1629 cga→tga
外显子5 1629+1630 cga→taa
外显子5 390 1635 cag→tag
外显子5 1635+1637 cag→taa
外显子5 399 1662 cga→tga
外显子5 1662+1663 cga→taa
外显子5 402 1672 tgg→tag
外显子5 1673 tgg→tga
外显子5 1672+1673 tgg→taa
外显子5 411 1699 tgg→tag
外显子5 1700 tgg→tga
外显子5 1699+1700 tgg→taa
表5a：FATB-C1(WOSR，SEQ ID NO：7和8)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 cag→tag
外显子1 154+156 cag→taa
外显子1 79 235 caa→taa
外显子1 88 262 cag→tag
外显子1 262+264 cag→taa
外显子1 92 275 tgg→tag
外显子1 276 tgg→tga
外显子1 275+276 tgg→taa
外显子1 109 325 cag→tag
外显子1 325+327 cag→taa
外显子1 110 329 tgg→tag
外显子1 330 tgg→tga
外显子1 329+330 tgg→taa
外显子1 115 344 tgg→tag
外显子1 345 tgg→tga
外显子1 344+345 tgg→taa
外显子1 134 400 cag→tag
外显子1 400+402 cag→taa
外显子1 141 421 cag→tag
外显子1 421+423 cag→taa
外显子1 146 436+437 cgg→tag
外显子1 436+438 cgg→tga
外显子1 436+437+438 cgg→taa
外显子1 166 496 cag→tag
外显子1 496+498 cag→taa
外显子2 196 667 tgg→tag
外显子2 668 tgg→tga
外显子2 667+668 tgg→taa
外显子2 202 684 cag→tag
外显子2 684+686 cag→taa
外显子2 211 712 tgg→tag
外显子3 791 tgg→tga
外显子2-3 712+791 tgg→taa
外显子3 220 817 tgg→tag
外显子3 818 tgg→tga
外显子3 817+818 tgg→taa
外显子3 223 825 cag→tag
外显子3 825+827 cag→taa
外显子3 233856 tgg→tag
外显子3 857 tgg→tga
外显子3 856+857 tgg→taa
外显子3 236 864 cga→tga
外显子3 864+865 cga→taa
外显子4 251 1000 tgg→tag
外显子4 1001 tgg→tga
外显子4 1000+1001 tgg→taa
外显子4 269 1053 cga→tga
外显子4 1053+1054 cga→taa
外显子5 309 1259 tgg→tag
外显子5 1260 tgg→tga
外显子5 1259+1260 tgg→taa
外显子5 316 1279 cag→tag
外显子5 1279+1281 cag→taa
外显子5 326 1310 tgg→tag
外显子5 1311 tgg→tga
外显子5 1310+1311 tgg→taa
外显子5 339 1348 cag→tag
外显子5 1348+1350 cag→taa
外显子5 359 1408 cag→tag
外显子5 1408+1410 cag→taa
外显子5 381 1474 cag→tag
外显子5 1474+1476 cag→taa
外显子5 3871492 cag→tag
外显子5 1492+1494 cag→taa
外显子5 399 1529 tgg→tag
外显子5 1530 tgg→tga
外显子5 1529+1530 tgg→taa
外显子5 408 1556 tgg→tag
外显子5 1567 tgg→tga
外显子5 1556+1557 tgg→taa
表5b：FATB-C1(SOSR，SEQ ID NO：19和20)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置突 变密码子
外显子1 52 154 cag→tag
外显子1 154+156 cag→taa
外显子1 79 235 caa→taa
外显子1 88 262 cag→tag
外显子1 262+264 cag→taa
外显子1 92 275 tgg→tag
外显子1 276 tgg→tga
外显子1 275+276 tgg→taa
外显子1 109 325 cag→tag
外显子1 325+327 cag→taa
外显子1 110 329 tgg→tag
外显子1 330 tgg→tga
外显子1 329+330 tgg→taa
外显子1 115 344 tgg→tag
外显子1 345 tgg→tga
外显子1 344+345 tgg→taa
外显子1 134 400 cag→tag
外显子1 400+402 cag→taa
外显子1 141 421 cag→tag
外显子1 421+423 cag→taa
外显子1 146 436+437 cgg→tag
外显子1 436+438 cgg→tga
外显子1 436+437+438 cgg→taa
外显子1 166 496 cag→tag
外显子1 496+498 cag→taa
外显子2 196 667 tgg→tag
外显子2 668 tgg→tga
外显子2 667+668 tgg→taa
外显子2 202 684 cag→tag
外显子2 684+686 cag→taa
外显子2 211 712 tgg→tag
外显子3 791 tgg→tga
外显子2-3 712+791 tgg→taa
外显子3 220 817 tgg→tag
外显子3 818 tgg→tga
外显子3 817+818 tgg→taa
外显子3 223 825 cag→tag
外显子3 825+827 cag→taa
外显子3 233 856 tgg→tag
外显子3 857 tgg→tga
外显子3 856+857 tgg→taa
外显子3 236 864 cga→tga
外显子3 864+865 cga→taa
外显子4 251 1000 tgg→tag
外显子4 1001 tgg→tga
外显子4 1000+1001 tgg→taa
外显子4 269 1053 cga→tga
外显子4 1053+1054 cga→taa
外显子5 3091259 tgg→tag
外显子5 1260 tgg→tga
外显子5 1259+1260 tgg→taa
外显子5 316 1279 cag→tag
外显子5 1279+1281 cag→taa
外显子5 3261 309 tgg→tag
外显子5 1310 tgg→tga
外显子5 1309+1310 tgg→taa
外显子5 339 1348 cag→tag
外显子5 1348+1350 cag→taa
外显子5 3591408 cag→tag
外显子5 1408+1410 cag→taa
外显子5 381 1474 cag→tag
外显子5 1474+1476 cag→taa
外显子5 387 1492 cag→tag
外显子5 1492+1494 cag→taa
外显子5 399 1529 tgg→tag
外显子5 1530 tgg→tga
外显子5 1529+1530 tgg→taa
外显子5 408 1556 tgg→tag
外显子5 1557 tgg→tga
外显子5 1556+1557 tgg→taa
表6a：FATB-C2(WOSR，SEQ ID NO：9和10)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 cag→tag
外显子1 154+156 cag→taa
外显子1 79 235 cag→tag
外显子1 235+237 cag→taa
外显子1 90 268 cag→tag
外显子1 268+270 cag→taa
外显子1 94 281 tgg→tag
外显子1 282 tgg→tga
外显子1 281+282 tgg→taa
外显子1 111 331 cag→tag
外显子1 331+333 cag→taa
外显子1 112 335 tgg→tag
外显子1 336 tgg→tga
外显子1 335+336 tgg→taa
外显子1 117 350 tgg→tag
外显子1 351 tgg→tga
外显子1 350+351 tgg→taa
外显子1 136406 cag→tag
外显子1 406+408 cag→taa
外显子1 143 427 cag→tag
外显子1 427+429 cag→taa
外显子1 168502 cag→tag
外显子1 502+504 cag→taa
外显子2 198 669 tgg→tag
外显子2 670 tgg→tga
外显子2 669+670 tgg→taa
外显子2 204 686 cag→tag
外显子2 686+688 cag→taa
外显子2 213 714 tgg→tag
外显子3 945 tgg→tga
外显子2-3 714+945 tgg→taa
外显子3 222 971 tgg→tag
外显子3 972 tgg→tga
外显子3 971+972 tgg→taa
外显子3 225 979 cag→tag
外显子3 979+981 cag→taa
外显子3 235 1010 tgg→tag
外显子3 1011 tgg→tga
外显子3 1010+1011 tgg→taa
外显子3 2381018+1019 cgg→tag
外显子3 1018+1020 cgg→tga
外显子3 1018+1019+1020 cgg→taa
外显子3 248 1048 cga→tga
外显子3 1048+1049 cga→taa
外显子4 253 1195 tgg→tag
外显子4 1196 tgg→tga
外显子4 1195+1196 tgg→taa
外显子4 271 1248 cga→tga
外显子4 1248+1249 cga→taa
外显子5 311 1454 tgg→tag
外显子5 1455 tgg→tga
外显子5 1454+1455 tgg→taa
外显子5 318 1474 cag→tag
外显子5 1474+1476 cag→taa
外显子5 328 1505 tgg→tag
外显子5 1506 tgg→tga
外显子5 1505+1506 tgg→taa
外显子5 341 1543 cag→tag
外显子5 1543+1545 cag→taa
外显子5 361 1603 cag→tag
外显子5 1603+1605 cag→taa
外显子5 383 1669 cag→tag
外显子5 1669+1671 cag→taa
外显子5 389 1687 cag→tag
外显子5 1687+1689 cag→taa
外显子5 401 1724 tgg→tag
外显子5 1725 tgg→tga
外显子5 1724+1725 tgg→taa
外显子5 410 1751 tgg→tag
外显子5 1752 tgg→tga
外显子5 1751+1752 tgg→taa
表6b：FATB-C2(SOSR，SEQ ID NO：21和22)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 cag→tag
外显子1 154+156 cag→taa
外显子1 79 235 cag→tag
外显子1 235+237 cag→taa
外显子1 90 268 cag→tag
外显子1 268+270 cag→taa
外显子1 94 281 tgg→tag
外显子1 282 tgg→tga
外显子1 281+282 tgg→taa
外显子1 111 331 cag→tag
外显子1 331+333 cag→taa
外显子1 112 335 tgg→tag
外显子1 336 tgg→tga
外显子1 335+336 tgg→taa
外显子1 117 350 tgg→tag
外显子1 351 tgg→tga
外显子1 350+351 tgg→taa
外显子1 136 406 cag→tag
外显子1 406+408 cag→taa
外显子1 143 427 cag→tag
外显子1 427+429 cag→taa
外显子1 168 502 cag→tag
外显子1 502+504 cag→taa
外显子2 198 669 tgg→tag
外显子2 670 tgg→tga
外显子2 669+670 tgg→taa
外显子2 204 686 cag→tag
外显子2 686+688 cag→taa
外显子2 213 714 tgg→tag
外显子3 945 tgg→tga
外显子2-3 714+945 tgg→taa
外显子3 222 971 tgg→tag
外显子3 972 tgg→tga
外显子3 971+972 tgg→taa
外显子3 225 979 cag→tag
外显子3 979+981 cag→taa
外显子3 235 1010 tgg→tag
外显子3 1011 tgg→tga
外显子3 1010+1011 tgg→taa
外显子3 238 1018+1019 cgg→tag
外显子3 1018+1020 cgg→tga
外显子3 1018+1019+1020 cgg→taa
外显子3 248 1048 cga→tga
外显子3 1048+1049 cga→taa
外显子4 253 1195 tgg→tag
外显子4 1196 tgg→tga
外显子4 1195+1196 tgg→taa
外显子4 271 1248 cga→tga
外显子4 1248+1249 cga→taa
外显子5 311 1454 tgg→tag
外显子5 1455 tgg→tga
外显子5 1454+1455 tgg→taa
外显子5 3181474 cag→tag
外显子5 1474+1476 cag→taa
外显子5 328 1505 tgg→tag
外显子5 1506 tgg→tga
外显子5 1505+1506 tgg→taa
外显子5 3411543 cag→tag
外显子5 1543+1545 cag→taa
外显子5 361 1603 cag→tag
外显子5 1603+1605 cag→taa
外显子5 383 1669 cag→tag
外显子5 1669+1671 cag→taa
外显子5 389 1687 cag→tag
外显子5 1687+1689 cag→taa
外显子5 401 1724 tgg→tag
外显子5 1725 tgg→tga
外显子5 1724+1725 tgg→taa
外显子5 410 1751 tgg→tag
外显子5 1752 tgg→tga
外显子5 1751+1752 tgg→taa
表7a：FATB-C3(WOSR，SEQ ID NO：11和12)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 caa→taa
外显子1 81 241 caa→taa
外显子1 82 244 caa→taa
外显子1 91 271 cag→tag
外显子1 271+273 cag→taa
外显子1 95 284 tgg→tag
外显子1 285 tgg→tga
外显子1 284+285 tgg→taa
外显子1 112 334 cag→tag
外显子1 334+336 cag→taa
外显子1 113 338 tgg→tag
外显子1 339 tgg→tga
外显子1 338+339 tgg→taa
外显子1 137 409 cag→tag
外显子1 409+411 cag→taa
外显子1 144 430 cag→tag
外显子1 430+432 cag→taa
外显子1 169 505 cag→tag
外显子1 505+507 cag→taa
外显子2 199 1018 tgg→tag
外显子2 1019 tgg→tga
外显子2 1018+1019 tgg→taa
外显子2 205 1035 cag→tag
外显子2 1035+1037 cag→taa
外显子2 214 1063 tgg→tag
外显子3 1138 tgg→tga
外显子2-3 1063+1138 tgg→taa
外显子3 223 1164 tgg→tag
外显子3 1165 tgg→tga
外显子3 1164+1165 tgg→taa
外显子3 236 1203 tgg→tag
外显子3 1204 tgg→tga
外显子3 1203+1204 tgg→taa
外显子3 239 1211+1212 cgg→tag
外显子3 1211+1213 cgg→tga
外显子3 1211+1212+1213 cgg→taa
外显子4 254 1329 tgg→tag
外显子4 1330 tgg→tga
外显子4 1329+1330 tgg→taa
外显子4 272 1382 cga→tga
外显子4 1382+1383 cga→taa
外显子5 312 1578 tgg→tag
外显子5 1579 tgg→tga
外显子5 1578+1579 tgg→taa
外显子5 319 1598 cag→tag
外显子5 1598+1600 cag→taa
外显子5 329 1629 tgg→tag
外显子5 1630 tgg→tga
外显子5 1629+1630 tgg→taa
外显子5 362 1727 cag→tag
外显子5 1727+1729 cag→taa
外显子5 384 1793 cag→tag
外显子5 1793+1795 cag→taa
外显子5 388 1805 cga→tga
外显子5 1805+1806 cga→taa
外显子5 390 1811 cag→tag
外显子5 1811+1813 cag→taa
外显子5 399 1838 cga→tga
外显子5 1838+1839 cga→taa
外显子5 402 1848 tgg→tag
外显子5 1849 tgg→tga
外显子5 1848+1849 tgg→taa
外显子5 411 1875 tgg→tag
外显子5 1876 tgg→tga
外显子5 1875+1876 tgg→taa
表7b：FATB-C3(SOSR，SEQ ID NO：23和24)中潜在的STOP密码子突变
外显子 氨基酸 核苷酸 野生型→
号 位置 位置 突变密码子
外显子1 52 154 caa→taa
外显子1 81 241 caa→taa
外显子1 82 244 caa→taa
外显子1 91 271 cag→tag
外显子1 271+273 cag→taa
外显子195 284 tgg→tag
外显子1 285 tgg→tga
外显子1 284+285 tgg→taa
外显子1 112 334 cag→tag
外显子1 334+336 cag→taa
外显子1 113 338 tgg→tag
外显子1 339 tgg→tga
外显子1 338+339 tgg→taa
外显子1 137 409 cag→tag
外显子1 409+411 cag→taa
外显子1 144 430 cag→tag
外显子1 430+432 cag→taa
外显子1 169 505 cag→tag
外显子1 505+507 cag→taa
外显子2 199 1019 tgg→tag
外显子2 1020 tgg→tga
外显子2 1019+1020 tgg→taa
外显子2 205 1036 cag→tag
外显子2 1036+1038 cag→taa
外显子2 214 1064 tgg→tag
外显子3 1139 tgg→tga
外显子2-3 1064+1139 tgg→taa
外显子3 223 1165 tgg→tag
外显子3 1166 tgg→tga
外显子3 1165+1166 tgg→taa
外显子3 236 1204 tgg→tag
外显子3 1205 tgg→tga
外显子3 1204+1205 tgg→taa
外显子3 239 1212+1213 cgg→tag
外显子3 1212+1214 cgg→tga
外显子3 1212+1213+1214 cgg→taa
外显子4 254 1330 tgg→tag
外显子4 1331 tgg→tga
外显子4 1330+1331 tgg→taa
外显子4 272 1383 cga→tga
外显子4 1383+1384 cga→taa
外显子5 312 1579 tgg→tag
外显子5 1580 tgg→tga
外显子5 1579+1580 tgg→taa
外显子5 319 1599 cag→tag
外显子5 1599+1601 cag→taa
外显子5 329 1630 tgg→tag
外显子5 1631 tgg→tga
外显子5 1630+1631 tgg→taa
外显子5 362 1728 cag→tag
外显子5 1728+1730 cag→taa
外显子5 384 1794 cag→tag
外显子5 1794+1796 cag→taa
外显子5 388 1806 cga→tga
外显子5 1806+1807 cga→taa
外显子5 390 1812 cag→tag
外显子5 1812+1814 cag→taa
外显子5 399 1839 cga→tga
外显子5 1839+1840 cga→taa
外显子5 402 1849 tgg→tag
外显子5 1850 tgg→tga
外显子5 1849+1850 tgg→taa
外显子5 411 1876 tgg→tag
外显子5 1877 tgg→tga
外显子5 1876+1877 tgg→taa
显而易见的，突变不限于上表显示的内容，可以理解在fatB等位基因中可以存在除序列表中所述以及上表所指的序列以外的类似的STOP突变。
如本文中使用的，FATB等位基因中的剪接位点突变是FATB等位基因中这样的突变，其中在相应的野生型FATB等位基因中的突变导致前mRNA的异常剪接，从而导致突变蛋白具有显著降低的活性或没有活性。突变可以是在共有剪接位点序列中。例如，下表描述了共有序列，所述序列如果突变，可能影响正确的剪接。GT-AG剪接位点通常具有其他的保守性核苷酸，例如在内含子的5’端(在外显子中)的2个高度保守的核苷酸，通常是5’-AG-3’。在GT二核苷酸的3’-侧(因而在内含子中)，可以发现高度保守的四核苷酸5’-AAGT-3’。这意味着在供体位点可以鉴别高度保守的8个核苷酸。
内含子类型 5’剪接点(外显子^内含子) 靠近3’剪接位点 3’剪接点(内含子^外显子) 发现于
GU-AG(标准内含子；约99％) CRN^GU(A/G)AGU A YnAG^N 核前-mRNA
(约1％) ^GC AG^ 核前-mRNA
非标准内含子(＜约0.1％) ^AU AC^ 核前-mRNA
标准分支位点 CUPuAPy 至核前-mRNA的剪接位点受体的20-50个核苷酸5’
^描述了剪接位点；R＝A或G；Y＝C或T；N＝A、C、G或T(但通常是G)；n＝多个核苷酸；粗体＝内含子序列中的共有二核苷酸。Pu＝嘌呤碱基；Py＝嘧啶碱基。
本领域描述了剪接位点结构和共有序列，用于鉴别外显子和剪接位点序列的计算机程序是可获得的，例如NetPLAntgene、BDGP或Genio、est2genome、FgeneSH等。比较基因组序列或前-mRNA序列与翻译的蛋白质可用于确定或验证剪接位点和异常剪接。
本文涵盖了任何突变(插入、缺失和/或取代一个或多个核苷酸)，所述突变改变前-mRNA剪接，从而导致具有显著降低的生物学活性的蛋白质。在一个实施方案中，包含剪接位点突变的突变FATB等位基因是这样的FATB等位基因，其中改变的剪接是由在FATB转录DNA区域中引入一个或多个上文粗体描述的共有二核苷酸的核苷酸取代产生的。例如，在供体剪接位点，可以将^GU突变成如^AU，和/或在受体剪接位点序列，可以将AG^突变成如AA^。在另一个实施方案中，包含剪接位点突变的突变FATB等位基因是这样的FATB等位基因，其中改变的剪接是由在FATB转录DNA区域中引入外显子序列的保守核苷酸中的一个或多个核苷酸取代产生的。
下表显示了FATB基因中可能的剪接位点，特别是在标准内含子的保守二核苷酸中，和外显子中直接邻接这些二核苷酸的核苷酸中(符号‘[’和‘]’表示外显子-内含子和内含子-外显子边界以及剪接位点；下划线的核苷酸是突变的)。
表8a：FATB-A1(WOSR，SEQ ID NO：1)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 504 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 505
内含子1-受体 589 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 590 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 723 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 724 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 797 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 798 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 911 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 912 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 980 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1153 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1242 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1243 ...ag]c→...ag]t
表8b：FATB-A1(SOSR，SEQ ID NO：13)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 501 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 502
内含子1-受体 586 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 587 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 720 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 721 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 794 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 795 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 908 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 909 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 977 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1150 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1239 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1240 ...ag]c→...ag]t
表9a：FATB-A2(WOSR，SEQ ID NO：3)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 504 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 505
内含子1-受体 583 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 584 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 717 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 718 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 811 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 812 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 925 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 926 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1058 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1231 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1308 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1309 ...ag]c→...ag]t
表9b：FATB-A2(SOSR，SEQ ID NO：15)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 504 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 505
内含子1-受体 583 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 584 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 717 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 718 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 811 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 812 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 925 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 926 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1058 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1231 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1308 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1309 ...ag]c→...ag]t
表10a：FATB-A3(WOSR，SEQ ID NO：5)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 507 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 508
内含子1-受体 739 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 740 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 873 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 874 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 946 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 947 ...ag]g →...ag]a
内含子3-供体 1060 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 1061 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1140 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1312 c[gt...→t[gt...
内含子4-供体 1313 c[gt...→c[at...
内含子4-受体 1412 ...ag]c→aa]c
内含子4-受体 1413 ...ag]c→...ag]t
表10b：FATB-A3(SOSR，SEQ ID NO：17)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 507 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 508
内含子1-受体 739 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 740 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 873 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 874 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 946 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 947 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 1060 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 1061 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1138 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1310 c[gt...→t[gt...
内含子4-供体 1311 c[gt...→c[at...
内含子4-受体 1394 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1395 ...ag]c→...ag]t
表11a：FA TB-C1(WOSR，SEQ ID NO：7)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 498 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 499
内含子1-受体 578 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 579 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 712 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 713 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 790 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 791 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 904 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 905 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 994 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1167 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1251 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1252 ...ag]c→...ag]t
表11b：FATB-C1(SOSR，SEQ ID NO：19)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 498 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 499
内含子1-受体 578 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 579 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 712 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 713 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 790 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 791 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 904 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 905 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 994 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1167 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1251 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1252 ...ag]c→...ag]t
表12a：FATB-C2(WOSR，SEQ ID NO：9)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 504 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 505
内含子1-受体 580 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 581 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 714 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 715 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 944 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 945 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 1058 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 1059 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1189 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1362 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1446 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1447 ...ag]c→...ag]t
表12b：FATB-C2(SOSR，SEQ ID NO：21)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 504 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 505
内含子1-受体 580 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 581 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 714 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 715 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 944 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 945 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 1058 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 1059 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1189 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1362 t[gt...→t[at...
内含子4-受体 1446 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1447 ...ag]c→...ag]t
表13a：FATB-C3(WOSR，SEQ ID NO：11)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 507 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 508
内含子1-受体 929 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 930 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 1063 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 1064 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 1137 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 1138 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 1251 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 1252 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1323 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1495 c[gt...→t[gt...
内含子4-供体 1496 c[gt...→c[at...
内含子4-受体 1570 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1571 ...ag]c→...ag]t
表13b：FATB-C3(SOSR，SEQ ID NO：23)中的潜在剪接位点突变
内含子数 核苷酸位置 野生型→突变体剪接位点
内含子1-供体 507 g[gt...→a[gt...
内含子1-供体 508
内含子1-受体 930 ...ag]g→...aa]g
内含子1-受体 931 ...ag]g→...ag]a
内含子2-供体 1064 g[gt...→a[gt...
内含子2-供体 1065 g[gt...→g[at...
内含子2-受体 1138 ...ag]g→...aa]g
内含子2-受体 1139 ...ag]g→...ag]a
内含子3-供体 1252 g[gt...→a[gt...
内含子3-供体 1253 g[gt...→g[at...
内含子3-受体 1324 ...ag]t→...aa]t
内含子4-供体 1496 c[gt...→t[gt...
内含子4-供体 1497 c[gt...→c[at...
内含子4-受体 1571 ...ag]c→...aa]c
内含子4-受体 1572 ...ag]c→...ag]t
根据发明的氨基酸序列
提供了来自芸苔属物种，特别是来自欧洲油菜的野生型(功能性)FATB氨基酸序列和突变FATB氨基酸序列(包括一个或多个突变，优选的导致FATB蛋白的生物学活性显著降低或无活性的突变)，但也可以来自其它的芸苔属作物物种。例如，包括A和/或C基因组的芸苔属物种，可以编码不同的FATB-A或FATB-C氨基酸。此外，可以使用诱变方法在野生型FATB等位基因中产生突变，从而产生可以编码其它突变FATB蛋白的突变等位基因。在一个实施方案中，在芸苔属植物中(即，内源性的)提供了野生型和/或突变FATB氨基酸序列。然而，本文也提供了分离的FATB氨基酸序列(例如，从植物分离的或合成制造的)以及其变体和任意上述序列的片段。
已经从欧洲油菜冬油菜(WOSR)和春油菜(SOSR)中分离了FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3蛋白的氨基酸序列，如序列表所示。描述了野生型FATB序列，同时根据野生型FATB序列，下文还描述了这些序列的突变FATB序列，和与这些序列实质相似的序列。
如上所述，本文描述的芸苔属FATB蛋白是长度约412-424个氨基酸，并包括多个结构和功能结构域。FATB蛋白N-末端部分的序列比成熟FATB蛋白的序列进化保守较低。因此，成熟FATB蛋白的序列比前体蛋白质的序列更少变化。
根据发明的“FATB-A1氨基酸序列”或“FATB-A1变体氨基酸序列”是这样的氨基酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：2(WOSRFATB-A1)和/或SEQ ID NO：14(SOSRFATB-A1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、98％、99％或100％序列同一性。这些氨基酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-A2氨基酸序列”或“FATB-A2变体氨基酸序列”是这样的氨基酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：4(WOSRFATB-A2)和/或SEQ ID NO：16(SOSRFATB-A2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些氨基酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-A3氨基酸序列”或“FATB-A3变体氨基酸序列”是这样的氨基酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：6(WOSRFATB-A3)和/或SEQ ID NO：18(SOSRFATB-A3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些氨基酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-C1氨基酸序列”或“FATB-C1变体氨基酸序列”是这样的氨基酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：8(WOSRFATB-C1)和/或SEQ ID NO：20(SOSRFATB-C1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些氨基酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-C2氨基酸序列”或“FATB-C2变体氨基酸序列”是这样的氨基酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：10(WOSRFATB-C2)和/或SEQ ID NO：22(SOSRFATB-C2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些氨基酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
根据发明的“FATB-C3氨基酸序列”或“FATB-C3变体氨基酸序列”是这样的氨基酸序列，当所述氨基酸序列在具有或不具有转运肽的条件下比对时，与SEQ ID NO：12(WOSRFATB-C3)和/或SEQ ID NO：24(SOSRFATB-C3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。这些氨基酸序列还可以被称为与序列表中提供的FATB序列“实质相似”或“实质相同”。
因此，发明提供了野生型、功能性FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3蛋白的氨基酸序列，包括其变体和片段(如下文进一步定义的)，还提供了任意上述序列的突变氨基酸序列，其中所述氨基酸序列中的突变优选的导致FATB蛋白生物学活性的显著降低。突变FATB蛋白的生物学活性的显著降低指，与野生型蛋白的活性相比，酶活性(即，酰基ACP-硫酯酶活性)降低至少30％、至少40％、50％或更多，至少90％或100％(无生物学活性)。
本文提供了内源性和分离的氨基酸序列。FATB氨基酸序列或其变体的“片段”(如定义)可以是多种长度，例如FATB序列(或变体序列)的至少10、12、15、18、20、50、100、200、400个连续的氨基酸。
功能性FATB蛋白的氨基酸序列
序列表中描述的氨基酸序列是来自欧洲油菜的野生型、功能性FATB蛋白。因此，这些序列对其分离来源的WOSR和SOSR植物是内源性的。可以在其它芸苔属作物物种、变种、育种品系或野生登记物(accessions)中，用上述相同的氨基酸序列或其变体，来筛选其它的功能性FATB蛋白。
此外，可以理解，通过在氨基酸数据库中筛选实质相似的序列，可以以计算机鉴别FATB氨基酸序列及其变体(或任意所述序列的片段)。还提供了根据发明的氨基酸分子的片段。片段包括成熟蛋白质的氨基酸序列，或者包含所有或部分氨基酸序列的更小片段，等。
突变FATB蛋白的氨基酸序列
相对于野生型氨基酸序列，包含一个或多个氨基酸缺失、插入或取代的氨基酸序列是发明的另一个实施方案，此类突变氨基酸分子的片段也是。如上文所述，可以利用多种已知的方法产生和/或鉴别此类突变氨基酸序列。此外，以内源性形式和以分离的形式提供了此类氨基酸分子。
在一个实施方案中，氨基酸序列中的突变导致相对于野生型蛋白，FATB蛋白的生物学活性显著降低或完全消失。如上所述，基本上，导致相对于野生型蛋白，蛋白质包含至少一个氨基酸插入、缺失和/或取代的任何突变，都可以导致显著降低的(或没有)酶活性。然而，可以理解，在蛋白质一些部分的突变更容易导致突变FATB蛋白降低的功能，例如导致截短的蛋白质的突变(其中缺失了功能结构域(例如，催化结构域或底物特异性涉及的氨基酸(见上文))的重要部分)；或者具有催化功能或在底物特异性中涉及的保守性氨基酸残基被取代的突变。
因此在一个实施方案中，提供了包含一个或多个缺失或插入突变的突变FATB蛋白，从而缺失或插入导致在体内具有显著降低的活性或无活性的突变蛋白。此类突变FATB蛋白是这样的FATB蛋白，其中与野生型FATB蛋白相比，缺失或插入了至少1个，至少2、3、4、5、10、20、30、50、100、200、300、400或更多个氨基酸，从而缺失或插入导致在体内具有显著降低的活性或无活性的突变蛋白。
在另一个实施方案中，提供的突变FATB蛋白是截短的，从而截短导致在体内具有显著降低的活性或无活性的突变蛋白。此类截短的FATB蛋白是在相应的野生型(成熟)FATB蛋白的C-末端部分缺少功能结构域，并且保留了相应的野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分的FATB蛋白。因此，在一个实施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相应野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，直到但不包括木瓜蛋白酶-样催化三联体(如上述)的保守性Cys残基。与野生型蛋白相比，突变蛋白截得越短，越容易缺失任何酶活性。因此，在另一个实施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相应野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，直到但不包括木瓜蛋白酶-样催化三联体(如上述)的保守性His或Asn残基。在另一个实施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相应野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，直到但不包括底物特异性所涉及(如上述)的保守性Met、Lys、Val、Ser或Trp残基。在另一个实施方案中，提供了截短的FATB蛋白，其包含相应野生型(成熟)FATB蛋白的N-末端部分，缺少部分或全部的第二个4HBT结构域，或缺少部分或全部的第一个4HBT结构域(如上述)，或甚至更多的氨基酸。
在另一个实施方案中，提供了包含一个或多个取代突变的突变FATB蛋白，其中取代导致突变蛋白在体内具有显著降低的活性或无活性。此类突变FATB蛋白是这样的FATB蛋白，其中具有催化功能的或者底物特异性涉及的保守性氨基酸残基(例如，如上述)是被取代的。因此，在一个实施方案中，提供了这样的突变FATB蛋白，所述蛋白包含保守性氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基具有催化功能，例如木瓜蛋白酶-样催化三联体的保守性Asn、His和Cys残基。在另一个实施方案中，提供了这样的突变FATB蛋白，所述蛋白包含保守性氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基涉及底物特异性，例如保守性Met、Lys、Val、Ser或Trp残基。
根据发明的方法
利用本领域常规的一系列方法，可以产生(例如通过诱变产生)和/或鉴别突变fatB等位基因，例如使用基于PCR的方法来扩增部分或全部的fatB基因组或cDNA。
如本文中使用的，术语“诱变”指这样的过程，其中植物细胞(例如，复数的芸苔属种子或其它部分，例如花粉)经过诱导细胞DNA突变的技术，例如接触诱变剂(如化学物质(例如，乙基甲基磺酸盐(EMS)、乙基亚硝基脲(ENU)等))或电离辐射(中子(如快中子诱变等)、α射线、γ射线(如钴60源提供的)、X射线、UV-辐射等)，或两个或多个前述技术的组合。因此，通过使用化学方式，例如通过将一种或多种植物组织与乙基甲基磺酸盐(EMS)、乙基亚硝基脲等接触；通过使用物理方式如X-射线等，或者通过γ辐射，如钴60源提供的，可以实现一个或多个FATB等位基因的理想诱变。
在诱变后，利用已知的技术，从处理的种子生长出，或从处理的细胞再生出芸苔属植物。例如，可以根据常规的生长规程种植所获得的芸苔属种子，在自花授粉后，在植物上形成种子。可选的，可以从处理的小孢子或花粉细胞中提取重双单倍体小植物，立即形成纯合植物。可以收获在这一代或下一代作为此类自花授粉的结果所形成的额外种子，并筛选突变FATB等位基因的存在，利用本领域常规的技术，例如基于聚合酶链式反应(PCR)的技术(扩增fatB等位基因)，或基于杂交的技术(例如，Southern印迹分析)，和/或fatB等位基因直接测序。为了在突变FATB等位基因中筛选点突变(所谓的单核苷酸多态性或SNP)的存在，可以使用本领域常规的SNP检测方法，例如基于寡连接的技术、基于单碱基延伸的技术，或基于限制性位点差异的技术，如TILLING。
如上所述，特定野生型FATB等位基因的诱变(自发的和诱导的)导致在获得的突变FATB等位基因中存在一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸(后文称为“突变区”)。因此，可以通过野生型FATB等位基因中的一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸的分布和构型，来表征突变FATB等位基因。一个或多个核苷酸在野生型FATB等位基因中分别插入、缺失或取代的位点也被称为“突变区”。本文中使用的“5’或3’侧翼区或序列”指突变(或相应野生型)FATB等位基因中的DNA区域或序列，所述DNA区域或序列是至少20bp，优选的至少50bp、至少750bp、至少1500bp，和多达5000bp的DNA(该DNA与含有一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸的DNA不同)，优选的所述DNA来自突变(或相应野生型)FATB等位基因，位于突变FATB等位基因(或相应的野生型FATB等位基因)突变区域直接相邻的上游且与之相连(5’侧翼区或序列)，或者位于所述突变区域直接相邻的下游且与之相连(3’侧翼区或序列)。
与相应的野生型FATB等位基因的基因组特征相比，基于特定突变FATB等位基因的特殊基因组特征，例如，包含突变区域的基因组区域的特殊限制性图谱、分子标志物、或者侧翼和/或突变区域的序列，开发了这样的工具，所述工具用于鉴别特定突变FATB等位基因，或者包含特定突变FATB等位基因的植物或植物材料，或者包含所述含有特定突变FATB等位基因的植物材料的产品。
一旦测序了特定突变FATB等位基因，就可以通过分子生物学技术开发引物和探针，所述引物和探针特异性识别样品核酸(DNA或RNA)中突变FATB等位基因的5’侧翼、3’侧翼和/或突变区域中的序列。例如，可以开发鉴别生物学样品(例如植物、植物材料或包含植物材料的产品的样品)中的突变FATB等位基因的PCR方法。此类PCR是基于至少两种特异性的“引物“：分别是一种识别突变FATB等位基因的5’或3’侧翼区中的序列，另一种识别突变FATB等位基因的3’或5’侧翼区中的序列；或者一种识别突变FATB等位基因的5’或3’侧翼区中的序列，另一种识别突变FATB等位基因的突变区中的序列；或者分别是一种识别突变FATB等位基因的5’或3’侧翼区中的序列，另一种识别跨越特定突变FATB等位基因的3’或5’侧翼区和突变区之间的连接区的序列(如下所述)。
优选的引物具有在15至35个核苷酸之间的序列，在优化的PCR条件下“特异性识别”在5’或3’侧翼区中的序列，在突变区中的序列，或者跨越特定突变FATB等位基因的3’或5’侧翼区和突变区之间的连接区的序列，从而从包含特定突变FATB等位基因的核酸样品中扩增特定的片段(“突变FATB特定片段”或鉴别性扩增子)。这意味着仅靶向突变FATB等位基因，在优化的PCR条件下不扩增植物基因组中的任何其它序列。
适合发明的PCR引物可以是以下的：
-长度范围在17nt至约200nt的寡核苷酸，在其3’末端包含这样的核苷酸序列，所述序列是选自特定突变FATB等位基因的5’侧翼序列的至少17个连续的核苷酸，优选的20个连续核苷酸(即，例如，与发明的突变FATB等位基因的一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸5’侧接的序列，例如与上述缺失、无义或剪接位点突变5’侧接的序列，或与上述表格中表示的潜在STOP密码子或剪接位点突变5’侧接的序列)(识别5’侧翼序列的引物)；或
-长度范围在17nt至约200nt的寡核苷酸，在其3’末端包含这样的核苷酸序列，所述序列是选自特定突变FATB等位基因的3’侧翼序列至少17个连续的核苷酸，优选的20个连续核苷酸(即，例如，与发明的突变FATB等位基因的一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸3’侧接的序列的互补序列，例如与上述缺失、无义或剪接位点突变3’侧接的序列的互补序列，或与上述表格中表示的潜在STOP密码子或剪接位点突变3’侧接的序列的互补序列)(识别3’侧翼序列的引物)；或
-长度范围在17nt至约200nt的寡核苷酸，在其3’末端包含这样的核苷酸序列，所述序列是选自特定突变FATB等位基因的突变区的序列的至少17个连续的核苷酸，优选的20个核苷酸(即，例如，在发明的FATB基因中插入或取代的核苷酸序列，或其互补序列)(识别突变序列的引物)。
引物理所当然的可以长于所述的17个连续的核苷酸，可以是例如20、21、30、35、50、75、100、150、200nt长或更长。引物可以完全由选自所述侧翼和突变序列的核苷酸序列的核苷酸序列组成。然而，引物5’末端的核苷酸序列(即，位于3’-的17个连续核苷酸外侧)较不关键。因此，视情况，引物的5’序列可以包括选自侧翼或突变序列的核苷酸序列，但也可以含有一些(例如，1、2、5、10个)错配。引物的5’序列甚至可以完全由侧翼或突变序列不相关的核苷酸序列组成，例如，表示限制性酶识别位点的核苷酸序列。此类不相关的序列或具有错配的侧翼DNA序列应该优选的不长于100个，更优选的不长于50个甚至25个核苷酸。
此外，合适的引物在其3’端可以包含或由这样的核苷酸序列组成，所述序列跨越侧翼和突变序列之间的连接区(即，例如，在发明的突变FATB等位基因的一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸5’侧翼的序列，与一个或多个插入或取代的核苷酸的序列或在一个或多个缺失的核苷酸3’侧翼的序列之间的连接区，例如，在与上述发明的FATB基因中的缺失、无义或剪接位点突变5’侧翼的序列，和无义或剪接位点突变的序列或缺失突变3’侧翼的序列之间的连接区；或者在上述表格所示的潜在STOP密码子或剪接位点突变5’侧翼的序列，和潜在STOP密码子或剪接位点突变的序列之间的连接区)，条件是所述位于3’的核苷酸不是专一的源自突变区或侧翼区。
对本领域技术人员也是显而易见的，适当选定的PCR引物对还应当不包含彼此互补的序列。
出于发明的目的，“SEQ ID NO：X代表的核苷酸序列的互补序列”是这样的核苷酸序列，所述序列可以源自将所代表的核苷酸序列，根据沙加夫法则(Chargaff’s rules)()通过其互补的核苷酸来取代核苷酸，并以5’至3’方向阅读序列，即，与所代表的核苷酸序列相反的方向。
适合鉴别特定突变FATB等位基因的引物实例描述在实施例中。
如本文中使用的，“从位置X至位置Y的核苷酸序列SEQ ID NO：Z”表示包括两个核苷酸端点的核苷酸序列。
优选的，扩增的片段具有在50和1000核苷酸之间的长度，例如在50和500核苷酸之间的长度，或在100和350核苷酸之间的长度。特定的引物可以具有与以下序列80至100％同一性的序列，所述序列是5’或3’侧翼区中的序列、突变区中的序列或跨越特定突变FATB等位基因的3’或5’侧翼和突变区之间的连接区的序列，条件是错配仍然允许用这些引物在优化的PCR条件下特异性鉴别特定的突变FATB等位基因。但是，通过实验可以容易的确定可允许的错配范围，这是本领域技术人员已知的。
“突变FATB特异性片段”的检测和/或鉴别可以以不同的方式发生，例如，在凝胶或毛细管电泳后通过大小评估，或通过基于荧光的检测方法。还可以直接测序突变FATB特异片段。用于检测扩增的DNA片段的其它序列特异性方法也是本领域已知的。
本领域描述了标准的PCR规程，例如“PCR应用手册”(RocheMolecularBiochemicals，第2版，1999)和其他参考文献。对于各个特定的突变FATB等位基因，“PCR应用手册”中详细说明了优化的PCR条件，包括特异性引物的序列。然而，可以理解，需要调整PCR鉴别规程中的多个参数适应特定的实验室条件，并可以轻微调节来获得相似的结果。例如，使用不同的制备DNA的方法可以需要调整例如引物的量、聚合酶、MgCl2浓度或使用的退火条件。相似的，其他引物的选择可以指定用于PCR鉴别规程的其他优化条件。然而，这些调整对本领域技术人员是显而易见的，进一步详述在目前的PCR应用手册中，例如上文引用的。
实施例中描述了用于鉴别特定突变FATB等位基因的PCR鉴别规程的实例。
可选的，可以使用特定的引物来扩增突变FATB特异性片段，所述片段可以用作“特异性探针”，用于鉴别生物学样品中的特定突变FATB等位基因。在允许探针与核酸中相应片段杂交的条件下，将生物学样品的核酸与探针接触，导致形成核酸/探针杂合体。可以检测该杂合体的形成(例如，核酸或探针的标记)，从而该杂合体的形成表示特定突变FATB等位基因的存在。本领域中已经描述了此类基于特异性探针杂交(在固相载体或溶液中)的鉴别方法。特异性探针优选的是序列，其在优化的条件下，与特定突变FATB等位基因的5’或3’侧翼区和/或突变区中的区域(后文称为“FATB突变特异区”)特异性杂交。优选的，特异性探针包括20至1000bp、50至600bp、100至500bp、150至350bp之间的序列，其与特定区域的核苷酸序列至少80％，优选的80至85％，更优选的85至90％，特别优选的90至95％，最优选的95％至100％同一(或互补)。优选的，特异性探针可以包括约15至约100个连续的核苷酸的序列，所述核苷酸与特定突变FATB等位基因的特定区相同(或互补)。
适合发明的特异性探针可以是如下：
-长度范围在20nt至约1000nt的寡核苷酸，包含这样的核苷酸序列或者与之具有至少80％序列同一性的序列，所述序列为至少20个连续的核苷酸，所述核苷酸选自特定突变FATB等位基因的5’侧翼序列(即，例如，发明的突变FATB等位基因的一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸5’侧翼的序列，例如上述缺失、无义或剪接位点突变5’侧翼的序列，或上述表格中表示的潜在STOP密码子或剪接位点突变5’侧翼的序列)(识别5’侧翼序列的探针)；或
-长度范围在20nt至约1000nt的寡核苷酸，包含这样的核苷酸序列或者与之具有至少80％序列同一性的序列，所述序列为至少20个连续的核苷酸，所述核苷酸选自特定突变FATB等位基因的3’侧翼序列(即，例如，发明的突变FATB等位基因的一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸3’侧翼的序列，例如上述缺失、无义或剪接位点突变3’侧翼的序列，或上述表格中表示的潜在STOP密码子或剪接位点突变3’侧翼的序列)，(识别3’侧翼序列的探针)；或
-长度范围在20nt至约1000nt的寡核苷酸，包含这样的核苷酸序列或者与之具有至少80％序列同一性的序列，所述序列为至少20个连续的核苷酸，所述核苷酸选自特定突变FATB等位基因的突变序列(即，例如，在发明的FATB基因中插入或取代的核苷酸序列，或其互补序列)(识别突变序列的探针)。
探针可以完全由选自所述侧翼和突变序列的核苷酸序列组成。然而，在探针的5’或3’末端的核苷酸序列较不关键。因此，视情况，探针的5’或3’序列可以由选自侧翼或突变序列的核苷酸序列组成，但也可以由与侧翼或突变序列不相关的核苷酸序列组成。此类不相关的序列应该优选的不长于50，更优选的不长于25或者甚至不长于20或15个核苷酸。
此外，合适的探针可以包含或由这样的核苷酸序列组成，所述序列跨越了侧翼和突变序列之间的连接区(即，例如，在发明的突变FATB等位基因的一个或多个缺失、插入或取代的核苷酸5’侧翼的序列，与一个或多个插入或取代的核苷酸的序列或在一个或多个缺失的核苷酸3’侧翼的序列之间的连接区，例如，在上述发明的FATB基因中的缺失、无义或剪接位点突变5’侧翼的序列，和无义或剪接位点突变的序列或缺失突变3’侧翼的序列之间的连接区；或者在上述表格所示的潜在STOP密码子或剪接位点突变5’侧翼的序列，和潜在STOP密码子或剪接位点突变的序列之间的连接区)，条件是所述核苷酸序列不专一的源自突变区或侧翼区。
实施例中描述了适合鉴别特定突变FATB等位基因的特异性探针的实例。
与特异性探针杂交的“突变FATB特异区”的检测和/或鉴别可以以不同的方式进行，例如，在凝胶电泳后通过大小评估，或通过基于荧光的检测方法。其它用于检测与特异性探针杂交的“突变FATB特异区”的序列特异性方法也是本领域已知的。
可选的，可以利用其它方法产生和鉴别包含一个或多个突变fatB等位基因的植物或植物部分，例如“Delete-a-geneTM”方法，所述方法使用PCR筛选通过快中子诱变(综述见Li和Zhang，2002，Funct Integr Genomics2：254-258)产生的缺失突变，例如鉴别EMS-诱导的点突变的TILLING方法(在基因组中靶向诱导的局部损伤)，其使用变性高效液相色谱(DHPLC)鉴别EMS-诱导的点突变，从而通过异源双链体分析(McCallum等人，2000，NatBiotech 18：455，和McCallum等人，2000，Plant Physiol.123，439-442)检测碱基对改变等。如上所述，TILLING使用高通量筛选突变(例如，使用突变体-野生型DNA异源双链体的Cel 1切割，和使用凝胶测序系统检测)。因此，本文涵盖了使用TILLING鉴别在一种或多种组织中包含一个或多个突变fatB等位基因的植物、种子和组织，以及用于产生和鉴别此类植物的方法。因此，在一个实施方案中，根据发明的方法包括步骤诱变植物种子(例如，EMS诱变)，植物个体或DNA的混合，目标区域的PCR扩增，异源双链体形成和高通量检测，突变植物的鉴别，突变PCR产物的测序。可以理解其它诱变和选择方法可以等价的用于产生此类突变植物。
除了在fatB等位基因中诱导突变以外，可以通过本领域已知的方法鉴别天然(自发)突变等位基因。例如，可以使用ECOTILLING(Henikoff等人，2004，Plant Physiology135(2)：630-6)在复数的植物或植物部分中筛选天然突变fatB等位基因的存在。对于上述诱变技术，优选的筛选包含A和/或C基因组的芸苔属物种，使鉴别的fatB等位基因可以通过杂交(种间或种内杂交)和选择，随后引入到其它芸苔属物种中，例如欧洲油菜。在ECOTILLING中，通过上述TILLING方法学，筛选育种品系或相关物种中的天然多态性，其中，使用单个植物或植物库进行PCR扩增fatB靶，异源双链体形成和高通量分析。然后可以选择具有所需突变的单个植物，其随后可以用于育种项目中来掺入所需的突变等位基因。
然后，可以测序所鉴别的突变等位基因，序列可以与野生型等位基因比较，来鉴别突变。任选的，可以通过同源或异源宿主中的表达来测试功能，以及在酶测定中测试突变FATB蛋白的功能。利用该方法可以鉴别复数的突变fatB等位基因(和含有一个或多个所述基因的芸苔属植物)。然后，如下文所述，可以通过杂交和选择方法，将理想的突变等位基因与理想的野生型等位基因组合。最后，产生包含理想数量的突变fatB和理想数量的野生型FATB等位基因的单个植物。
适合作为PCR引物或特异性探针，用于检测特定突变FATB等位基因的寡核苷酸也可用于开发确定特定突变FATB等位基因接合性状态的方法。
为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以开发基于PCR的检测，来确定突变和/或相应野生型FATB特异性等位基因的存在：
为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以以这样的方式设计特异性识别野生型FATB等位基因的两种引物，所述方式使所述引物针对彼此，并具有位于引物之间的突变区。这些引物可以是分别特异性识别5’和3’侧翼序列的引物。该套引物允许突变体以及相应的野生型FATB等位基因的同时诊断性PCR扩增。
可选的，为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以以这样的方式设计特异性识别野生型FATB等位基因的两种引物，所述方式使所述引物针对彼此，并且其中之一特异性的识别突变区。这些引物可以是分别特异性识别野生型FATB等位基因的5’或3’侧翼区和突变区序列的引物。该套引物与特异性识别突变FATB等位基因中的突变区序列的第三引物一起，允许突变FATB基因以及野生型FATB基因的同时诊断性PCR扩增。
可选的，为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以以这样的方式设计特异性识别野生型FATB等位基因的两种引物，所述方式使所述引物针对彼此，并且其中之一特异性的识别在5’或3’侧翼区和突变区之间的连接区。这些引物可以是分别特异性识别野生型FATB等位基因的5’或3’侧翼序列，和在突变区和3’或5’侧翼区之间的连接区的引物。这套引物与第三引物一起，允许突变FATB基因以及野生型FATB基因的同时诊断性PCR扩增，所述第三引物特异性的识别突变FATB等位基因的在突变区和3’或5’侧翼区之间的连接区。
可选的，可以通过使用替代的引物组，确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，所述引物组特异性识别突变和野生型FATB等位基因。
如果对于突变FATB基因或相应的野生型FATB基因，植物是纯合的，则不论对于突变或野生型FATB等位基因，上述诊断性PCR测定可以产生典型的单PCR产物，优选在长度上具有典型性。如果对于突变FATB基因，植物是杂合的，则会出现两种特异的PCR产物，反映了突变和野生型FATB等位基因的扩增。
进行野生型和突变FATB特异性PCR产物的鉴别，例如可以通过在凝胶或毛细管电泳后的大小评估(例如，对于包含多个插入或缺失的核苷酸的突变FATB等位基因，导致从野生型和突变FATB等位基因扩增的片段之间的大小差异，从而所述片段可以在凝胶上可视的分离)；通过在凝胶或毛细管电泳后，评估两种不同片段的存在或缺失，从而突变FATB等位基因的诊断性PCR扩增可以任选的与野生型FATB等位基因的诊断性PCR扩增分别实施；通过扩增片段的直接测序；或通过基于荧光的检测方法。
实施例中描述了适合确定特定突变FATB等位基因接合性的引物实例。
可选的，为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以开发基于杂交的测定，来确定突变和/或相应野生型FATB特定等位基因的存在：
为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以以这样的方式设计识别野生型FATB等位基因的两种特异性探针，所述方式使每种探针特异性识别FATB野生型等位基因中的序列，并且突变区位于探针识别的序列之间。这些探针可以是分别特异性识别5’和3’侧翼序列的探针。一种或，优选的两种上述探针的使用，允许突变以及相应的野生型FATB等位基因的同时诊断杂交。
可选的，为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以以这样的方式设计识别野生型FATB等位基因的两种特异性探针，所述方式使探针之一特异性识别FATB野生型等位基因中在突变区上游或下游的序列，优选的在突变区上游，且探针之一特异性识别突变区。这些探针可以是分别特异性识别野生型FATB等位基因的5’或3’侧翼区序列，优选的5’侧翼区序列，和突变区序列的探针。一种或，优选的两种上述探针，任选的与第三探针一起使用，允许突变以及野生型FATB基因的诊断杂交，所述第三探针特异性识别突变FATB等位基因的突变区序列。
可选的，为了确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，可以以这样的方式设计识别野生型FATB等位基因的特异性探针，所述方式使探针特异性识别在野生型FATB等位基因的5’或3’侧翼区(优选的5’侧翼区)和突变区之间的连接区。该探针任选的与第二探针一起，允许突变以及野生型FATB基因的诊断杂交，所述第二探针特异性识别突变FATB等位基因的5’或3’侧翼区，优选的5’侧翼区和突变区之间的连接区，。
可选的，可以通过使用替代的探针组，来确定特定突变FATB等位基因的接合性状态，所述探针组特异性识别突变和野生型FATB等位基因。
如果对于突变FATB基因或相应的野生型FATB基因，植物是纯合的，则无论对于突变或野生型FATB基因，上述诊断杂交测定可以产生典型的单特异性杂交产物，例如一种或多种杂交DNA(限制性)片段，优选的在长度上具有典型性。如果对于突变FATB等位基因，植物是杂合的，则可以出现两种特异性杂交产物，反映了突变和野生型FATB基因的杂交。
进行野生型和突变FATB特异性杂交产物的鉴别，例如可以通过在凝胶或毛细管电泳后的大小评估(例如，对于包含多个插入或缺失的核苷酸的突变FATB等位基因，导致来自野生型和突变FATB等位基因的杂交DNA(限制性)片段之间的大小差异，从而所述片段可以在凝胶上可视的分离)；通过在凝胶或毛细管电泳后，评估两种不同的特异性杂交产物的存在或缺失，从而突变FATB等位基因的诊断杂交可以任选的与野生型FATB等位基因的诊断杂交分别实施；通过杂交DNA(限制性)片段的直接测序；或通过基于荧光的检测方法。
实施例中描述了适合确定特定突变FATB等位基因接合性的探针实例。
此外，还可以利用本文提供的特定突变FATB等位基因的特异性序列信息，开发特异性针对特定突变FATB等位基因的、不同于基于PCR-或基于杂交扩增方法的检测方法。此类替代的检测方法包括基于特定核酸结构的侵入性切割的线性信号扩增检测方法，也已知为InvaderTM技术(描述在例如美国专利5,985,557“Invasive Cleavage of NucleicAcids”，6,001,567“Detection of Nucleic Acid sequences by InvaderDirectedCleavage”，通过引用整合到本文中)，基于RT-PCR的检测方法，例如Taqman，或其他检测方法，例如SNPlex。
根据发明的试剂盒
如本文中使用的，“试剂盒”指用于实施发明方法的目的的试剂集合，更特别的，用于生物学样品中特定突变FATB等位基因的鉴别，或包含特定突变FATB等位基因的植物材料的接合性状态的确定等目的。更特别的，发明的试剂盒的优选实施方案包括，如上所述，用于特定突变FATB等位基因鉴别的至少两种特异性引物，或者用于接合性状态确定的至少两种或三种特异性引物。任选的，试剂盒还可以包括任何本文中描述的PCR鉴别规程中的其它试剂。可选的，根据本发明的另一个实施方案，试剂盒可以包含至少一种特异性探针，如上所述，所述探针与生物学样品的核酸特异性杂交，来鉴别其中特定突变FATB等位基因的存在，用于特定突变FATB等位基因的鉴别，或者包含至少两种或三种用于确定接合性状态的特异性探针。任选的，试剂盒还可以包括任何其它试剂(例如但不限于杂交缓冲液，标记)，利用特异性探针，用于生物学样品中特定突变FATB等位基因的鉴别。
发明的试剂盒可以用于质量控制(例如，种子批次的纯度)、检测植物材料或包含或源自植物材料的材料(例如但不限于食品或饲料产品)中特定突变FATB等位基因的存在或缺失的目的，并且它的组分可以特异性调节用于上述目的。
如本文中使用的，术语“引物”涵盖了能够在依赖模板的过程，例如PCR中，引发新生核酸合成的任何核酸。通常，引物是10至30个核苷酸的寡核苷酸，但可以使用更长的序列。可以以双链形式提供引物，尽管单链形式是优选的。探针可以作为引物使用，但被设计用于与靶DNA或RNA结合，而不需要在扩增过程中使用。
如本文中使用的，当术语“识别”指特异性引物时，指在方法所述条件下(例如PCR鉴别规程的条件)，特异性引物与特定突变FATB等位基因中的核酸序列特异性杂交的事实，从而通过阳性和阴性对照的存在确定特异性。
如本文中使用的，当术语“杂交”指特异性探针时，指在标准严格条件下，探针与特定突变FATB等位基因的核酸序列中的特定区域结合的事实。如本文中使用的，标准严格条件指本文描述的用于杂交的条件，或Sambrook等人，1989(Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbour Laboratory Press，NY)描述的常规杂交条件，例如可以包括下列步骤：1)在滤膜上固定植物基因组DNA片段或BAC文库DNA，2)在65℃，6X SSC，5X Denhardt氏试剂，0.5％SDS和20μg/ml变性载体DNA中预杂交滤膜1至2小时，3)添加已经标记的杂交探针，4)孵育16至24小时，5)在68℃，6X SSC，0.1％SDS中，洗涤滤膜一次30分钟，6)在68℃，2X SSC，0.1％SDS中，洗涤滤膜三次(在30ml中两次，各30分钟，在500ml中1次，10分钟)，和7)将滤膜在-70℃下暴露于X射线膜4至48小时。
如本文中使用的，“生物学样品”是植物、植物材料或包含植物材料的产品的样品。术语“植物”意在涵盖任何成熟阶段的芸苔属植物组织，以及来自或衍生自任何此类植物的任何细胞、组织或器官，包括但不限于任何种子、叶、茎、花、根、单细胞、配子、细胞培养物、组织培养物或原生质体。如本文中使用的，“植物材料”指从植物获得的或源自植物的材料。包含植物材料的产品涉及食品、饲料或其他产品，所述产品使用植物材料生产或可以被植物材料污染。可以理解，在本发明的上下文中，在此类生物学样品中测试特异性针对特定突变FATB等位基因的核酸的存在，提示样品中核酸的存在。因此，本文所指的用于在生物学样品中鉴别特定突变FATB等位基因的方法，涉及鉴别生物学样品的核酸，所述核酸包含特定突变FATB等位基因。
本发明还涉及将一株芸苔属植物中的一个或多个特定突变FATB等位基因转移到另一芸苔属植物中，涉及在一株植物中特定FATB等位基因的组合，涉及包含一种或多种特定突变FATB等位基因的植物，从这些植物获得的后代，以及涉及源自这些植物的植物细胞或植物材料。
因此，在发明的一个实施方案中，提供了用于从一株芸苔属植物向另一芸苔属植物转移突变FATB等位基因的方法，包括步骤：
(a)如上述，将包含突变FATB等位基因的芸苔属植物，与第二芸苔属植物杂交，
(b)从杂交种(cross)收集F1杂种种子，
(c)任选的，回交源自F1种子的F1植物(进行一代或多代(x))，从杂交种收集BCx种子，并且在源自BCx种子的每一代BCx植物中鉴别，其包含如上述突变FATB等位基因，
(d)任选的，从处理的F1或BC1植物的小孢子或花粉细胞中提取重双单倍体植物，获得纯合植物，
(e)将源自F1或BCx种子的F1或BC1植物自交，
(f)从自交中收集F1 S1或BCx S1种子，
(g)鉴别源自F1 S1或BCx S1种子的F1 S1或BCx S1植物，其包含上述突变FATB等位基因。
在发明的另一个实施方案中，提供了用于在一株芸苔属植物中组合至少两种突变FATB等位基因的方法，其包括步骤：
(a)如上述，从一株芸苔属植物中向另一芸苔属植物转移突变FATB等位基因，
(b)重复步骤(a)直到在第二植物中组合了理想数量和/或类型的突变FATB等位基因。
在发明的另一个实施方案中，提供了生产芸苔属植物的方法，所述植物包含本文的三种不同的FA TB基因的至少3种突变fatB等位基因，包括步骤：
(a)如上述，在一株芸苔属植物中，组合至少三种不同的FATB基因的至少3种突变FATB等位基因，
(b)任选的，如上述，通过确定一种或多种突变FATB等位基因的接合性状态，鉴别植物或其部分，所述植物或其部分对于一种或多种突变FATB等位基因是纯合或杂合的，
(c)任选的，鉴别具有显著降低量的功能性FATB蛋白的植物或其部分，
(d)任选的，鉴别生产种子油的植物，与相应野生型芸苔属植物的种子油脂肪酸组成相比，所述种子油的脂肪酸组成被显著改变，
(e)任选的，生长此类植物并从此类植物分离种子油，用于人类消费品。
根据发明的植物种子油
根据发明提供了源自芸苔属植物的种子的“低饱和”和“无饱和”的油，特别是源自本文提供的欧洲油菜植物的种子，但也来自其它的芸苔属油料种子物种。例如，包含突变FATB-A和/或FATB-C基因的芸苔属油料种子物种，例如芥菜和芜菁。
发现，仅在六个FATB基因中的一个或两个中包含突变的欧洲油菜植物，不足以显著降低植物种子油的饱和脂肪酸的百分比(wt％)，所述突变导致由突变fatB等位基因的野生型等价物编码的功能性FATB蛋白的量显著降低。认为为了获得产生低或无饱和的种子油的植物，植物中需要包含三种不同的FATB基因(选自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)的至少三个突变fatB等位基因。
因此，在发明的一个方面，提供了源自芸苔属植物种子的“低饱和”或“无饱和”的种子油，所述植物包含三种不同的FATB基因(选自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3)的至少三个突变fatB等位基因，从而突变fatB等位基因导致由这些突变fatB等位基因的野生型等价物编码的功能性FATB蛋白类型的量显著降低，从而在体内在植物细胞中(特别是在发育的种子中)生产的功能性FATB蛋白的量整体显著降低。
在发明的其它方面，提供了源自纯合FA TB三突变-、纯合FA TB四突变-和/或纯合FATB五突变-芸苔属植物种子的”低饱和”或“无饱和”的种子油，其中突变等位基因选自基因FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
在发明的其它方面，提供了源自纯合FA TB三突变-、纯合FA TB四突变-和/或纯合FATB五突变-芸苔属植物种子的”低饱和”或“无饱和”的种子油，所述芸苔属植物还包括其它突变FATB等位基因，其中对于另外的突变FATB等位基因而言，所述突变植物或植物部分是杂合的，并且其中突变等位基因选自基因FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3。
通过在一株植物中组合充分拷贝的特定突变fatB等位基因和充分拷贝的特定野生型FATB等位基因，可以精细调整产生的功能性FATB蛋白的量和/或类型，其随后影响从质体输出游离饱和脂肪酸(的量和/或类型)，从而影响产生的种子油的脂肪酸组成。
因此，在发明的另一个实施方案中，提供了包含特定量和/或类型的饱和脂肪酸的种子油，所述种子油源自包含至少一个根据发明的特定突变FATB等位基因，和至少一个根据发明的特定野生型FATB等位基因的芸苔属植物的种子，从而突变和野生型FATB等位基因的特定组合导致在体内植物细胞生产的功能性FATB蛋白的特定量和/或类型，特别是在发育的种子中。
发明还包括了本发明的种子油在食品应用中的用途，特别是可预见人类健康益处的食品应用。尽管本发明的油主要用作人类膳食(食品应用)的油，它们还可以具有在动物饮食(饲料应用)中的用途。其它应用，例如将具有根据发明的特定修饰相对量和/或组成的饱和脂肪酸的种子油(特别是根据发明含有显著低于7％饱和脂肪酸的种子油)与其它植物油(特别是含有显著高于7％饱和脂肪酸的植物油，例如在背景章节中提及的那些)混合，从而降低后者中的饱和脂肪酸水平，从而使其更适合一些应用，例如但不限于生物柴油的生产，也包括在发明中。
序列
序列表描述了野生型FATB序列的基因组FATB蛋白-编码DNA。这些序列包含由4个内含子间隔的5个外显子。在cDNA和相应的加工mRNA(即，剪接RNA)中，去除了内含子并连接了外显子。因此，例如，来自冬油菜(WOSR)欧洲油菜的编码野生型FATB-A1蛋白的FATB-A1基因的cDNA具有SEQ ID NO：1中位置1-504、590-723、798-911、981-1152和1243-1560的序列。
FATB基因
SEQ ID NO 1：FATB-A1基因(具有内含子)的DNA，编码来自冬油菜(WOSR)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 2：由SEQ ID NO：1编码的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 3：FATB-A2基因(具有内含子)的DNA，编码来自冬油菜(WOSR)欧洲油菜的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 4：由SEQ ID NO：3编码的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 5：FATB-A3基因(具有内含子)的DNA，编码来自冬油菜(WOSR)欧洲油菜的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 6：由SEQ ID NO：5编码的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 7：FATB-C1基因(具有内含子)的DNA，编码来自冬油菜(WOSR)欧洲油菜的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 8：由SEQ ID NO：7编码的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 9：FATB-C2基因(具有内含子)的DNA，编码来自冬油菜(WOSR)欧洲油菜的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 10：由SEQ ID NO：9编码的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 11：FATB-C3基因(具有内含子)的DNA，编码来自冬油菜(WOSR)欧洲油菜的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 12：由SEQ ID NO：11编码的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 13：FATB-A1基因(具有内含子)的DNA，编码来自春油菜(SOSR)欧洲油菜的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 14：由SEQ ID NO：13编码的野生型FATB-A1蛋白。
SEQ ID NO 15：FATB-A2基因(具有内含子)的DNA，编码来自春油菜(SOSR)欧洲油菜的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 16：由SEQ ID NO：15编码的野生型FATB-A2蛋白。
SEQ ID NO 17：FATB-A3基因(具有内含子)的DNA，编码来自春油菜(SOSR)欧洲油菜的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 18：由SEQ ID NO：17编码的野生型FATB-A3蛋白。
SEQ ID NO 19：FATB-C1基因(具有内含子)的DNA，编码来自春油菜(SOSR)欧洲油菜的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 20：由SEQ ID NO：19编码的野生型FATB-C1蛋白。
SEQ ID NO 21：FATB-C2基因(具有内含子)的DNA，编码来自春油菜(SOSR)欧洲油菜的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 22：由SEQ ID NO：21编码的野生型FATB-C2蛋白。
SEQ ID NO 23：FATB-C3基因(具有内含子)的DNA，编码来自春油菜(SOSR)欧洲油菜的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 24：由SEQ ID NO：23编码的野生型FATB-C3蛋白。
SEQ ID NO 79：FATB1基因的DNA，编码来自拟南芥的野生型FATB1蛋白。
SEQ ID NO 80：由SEQ ID NO：79编码的野生型FATB1蛋白。
引物和探针
SEQ ID NO 25：5′At FATB1探针
SEQ ID NO 26：寡核苷酸引物KVA05-14
SEQ ID NO 27：寡核苷酸引物KVA05-15
SEQ ID NO 28：3′At FATB1探针
SEQ ID NO 29：寡核苷酸引物KVA05-16
SEQ ID NO 30：寡核苷酸引物KVA05-17
SEQ ID NO 31：用于检测FATB-A1(SEQ ID NO：13)的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 32：用于检测FATB-A1(SEQ ID NO：13)的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 33：用于检测FATB-A2(SEQ ID NO：15)的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 34：用于检测FATB-A2(SEQ ID NO：15)的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 35：用于检测FATB-A3(SEQ ID NO：17)的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 36：用于检测FATB-A3(SEQ ID NO：17)的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 37：用于检测FATB-C1(SEQ ID NO：19)的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 38：用于检测FATB-C1(SEQ ID NO：19)的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 39：用于检测FATB-C2(SEQ ID NO：21)的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 40：用于检测FATB-C2(SEQ ID NO：21)的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 41：用于检测FATB-C3(SEQ ID NO：23)的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 42：用于检测FATB-C3(SEQ ID NO：23)的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 43：用于检测FATB-A1的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 44：用于检测FATB-A2的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 45：用于检测FATB-A2的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 46：用于检测FATB-A3的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 47：用于检测FATB-C1的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 48：用于检测FATB-C2的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 49：用于检测FATB-C3的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 50：用于检测FATB-A1-EMS05的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 51：用于检测FATB-A1的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 52：用于检测FATB-A1-EMS05和-A1的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 53：用于检测FATB-A1-EMS06的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 54：用于检测FATB-A1的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 55：用于检测FATB-A1-EMS06和-A1的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 56：用于检测FATB-A2-EMS05的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 57：用于检测FATB-A2的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 58：用于检测FATB-A2-EMS05和-A2的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 59：用于检测FATB-A2-EMS01的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 60：用于检测FATB-A2的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 61：用于检测FATB-A2-EMS01和-A2的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 62：用于检测FATB-A3-EMS01的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 63：用于检测FATB-A3的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 64：用于检测FATB-A3-EMS01和-A3的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 65：用于检测FATB-C1-EMS05的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 66：用于检测FATB-C1的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 67：用于检测FATB-C1-EMS05、-C1-EMS04和-C1的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 68：用于检测FATB-C1-EMS04的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 69：用于检测FATB-C1的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 70：用于检测FATB-C2-EMS02的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 71：用于检测FATB-C2的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 72：用于检测FATB-C2-EMS02和-C2的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 73：用于检测FATB-C2-EMS03的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 74：用于检测FATB-C2的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 75：用于检测FATB-C2-EMS03和-C2的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 76：用于检测FATB-C3-EMS02的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 77：用于检测FATB-C3的正向寡核苷酸
SEQ ID NO 78：用于检测FATB-C3-EMS02和-C3的反向寡核苷酸
SEQ ID NO 81：用于检测FATB-A1-EMS05的寡核苷酸
SEQ ID NO 82：用于检测FATB-A1-EMS05的寡核苷酸
SEQ ID NO 83：用于检测FATB-A1-EMS06的寡核苷酸
SEQ ID NO 84：用于检测FATB-A1-EMS06的寡核苷酸
SEQ ID NO 85：用于检测FATB-A2-EMS01的寡核苷酸
SEQ ID NO 86：用于检测FATB-A2-EMS01的寡核苷酸
SEQ ID NO 87：用于检测FATB-A2-EMS05的寡核苷酸
SEQ ID NO 88：用于检测FATB-A2-EMS05的寡核苷酸
SEQ ID NO 89：用于检测FATB-A3-EMS01的寡核苷酸
SEQ ID NO 90：用于检测FATB-A3-EMS01的寡核苷酸
SEQ ID NO 91：用于检测FATB-C1-EMS04的寡核苷酸
SEQ ID NO 92：用于检测FATB-C1-EMS04的寡核苷酸
SEQ ID NO 93：用于检测FATB-C1-EMS05的寡核苷酸
SEQ ID NO 94：用于检测FATB-C1-EMS05的寡核苷酸
SEQ ID NO 95：用于检测FATB-C2-EMS02的寡核苷酸
SEQ ID NO 96：用于检测FATB-C2-EMS02的寡核苷酸
SEQ ID NO 97：用于检测FATB-C2-EMS03的寡核苷酸
SEQ ID NO 98：用于检测FATB-C2-EMS03的寡核苷酸
SEQ ID NO 99：用于检测FATB-C3-EMS02的寡核苷酸
SEQ ID NO 100：用于检测FATB-C3-EMS02的寡核苷酸
SEQ ID NO 101：用于检测ENDO1的寡核苷酸
SEQ ID NO 102：用于检测ENDO1的寡核苷酸
除非在实施例中另外陈述，所有重组DNA技术都根据标准规程来进行，如Sambrook和Russell(2001)Molecular Cloning：A LaboratoryManual，第3版，Cold Spring HarborLaboratory Press，NY，Ausubel等人，(1994)Current Protocols in Molecular Biology，Current Protocols，USA的第1和2卷，以及Brown(1998)Molecular Biology LabFax，第二版，Academic Press(UK)的卷I和II中描述的。用于植物分子工作的标准材料和方法描述在R.D.D.Croy的Plant Molecular Biology Labfax(1993)中，由BIOS ScientificPublications Ltd(UK)和Blackwell ScientificPublications，UK联合出版。用于聚合酶链式反应的标准材料和方法可见于Dieffenbach和Dveksler(1995)PCR Primer：ALaboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory Press，和McPherson等人，(2000)PCR-Basics：From Background to Bench，第一版，Springer Verlag，Germany中。用于AFLP分析的标准程序描述在Vos等人，(1995，NAR 23：4407-4414)和公开的EP专利申请EP534858中。
实施例
实施例1-确定欧洲油菜中的FATB基因数和分离FATB基因的DNA序列
为了确定欧洲油菜中的FATB基因数，和不同FATB基因的序列，如下筛选不同的欧洲油菜变种的细菌人工染色体(BAC)文库：
1.1分离包含FATB序列的BAC克隆
为了鉴别含有这样的BAC克隆的大肠杆菌菌落，通过标准的Southern杂交程序，筛选良种的欧洲油菜春油菜品系(后文称为“SOSR”)和欧洲油菜冬油菜变种Express(后文称为“WOSR Express”)的BAC文库(平均克隆大小为大于120kb)，所述BAC克隆包含不同的欧洲油菜变种的FATB序列，所述文库在高密度尼龙滤膜上按独立的一式两份克隆排列：
-通过聚合酶链式反应(PCR)制备DNA模板，所述模板用于制备检测芸苔属FATB基因的探针：
-模板：
(a)pGEM5Zf(+)载体，包含来自拟南芥哥伦比亚变种(Arabidopisthalianacv.Colombia)(At1g08510)的FATB1基因5’部分的487bp片段(SEQ ID NO：25)(pKVA48)
(b)pGEM5Zf(+)载体，包含来自拟南芥哥伦比亚变种的FATB1基因3’部分的352bp片段(SEQ ID NO：28)(pKVA49)
-引物：
(a)正向引物：5’-GAACTTTCATCAACCAGTTACC-3’
(KVA05-14-SEQ ID NO：26)
反向引物：5’-TTATGC-AAGAGGATAGCTTACC-3’
(KVA05-15-SEQ ID NO：27)
(b)正向引物：5-CAGTGTGTGGGTGATGATGA-3’
(KVA05-16-SEQ ID NO：29)
反向引物：5’-TATTCCCACTGGAGCACTCT-3’
(KVA05-17-SEQ ID NO：30)
-PCR混合物：
20μl 10xPCR缓冲液，2μl dNTPs(25mM)，1μl Taq聚合酶()，H2O，和
-4μl KVA05-14(10μM)，4μl KVA05-15(10μM)，1μl pKVA48(20pg/μl)，
-4μl KVA05-16(10μM)，4μl KVA05-17(10μM)，1μl pKVA49(20pg/μl)，
分成4x 50μl
-热循环谱：94℃ 4min；5x[94℃(变性)1min和50℃(退火)1min和72℃(延伸)2min]；25x[94℃(变性)40see和50℃(退火)40sec和72℃(延伸)1min]；72℃ 5min：冷却至10℃。
-其产生：
(a)载体pKVA48中包含的拟南芥FATB1基因的487 bp DNA片段(SEQ ID NO：25；“5’AtFATB1探针”)。
(b)载体pKVA49中包含的拟南芥FATB1基因的352 bp DNA片段(SEQ ID NO：28；“3’AtFATB1探针”)。
-纯化DNA片段，根据标准规程标记478bp DNA片段(“5’AtFATB1探针”)(例如，使用α-32P-dCTP和Ready-To-Go DNA labeling Beads——Amersham)，将其用于与尼龙膜上的DNA杂交。可选的，可以标记352 bp DNA片段(“3’AtFATB1探针”)，并用于与尼龙膜上的DNA杂交。
-在65℃，30ml的下列杂交缓冲液中实施预杂交2小时：6X SSC(20XSSC含有3.0MNaCl，0.3M Na柠檬酸，pH 7.0)，5X Denhardt’s(100XDenhardt’s含有2％ Ficoll，2％聚乙烯吡咯烷酮，2％牛血清白蛋白)，0.5％SDS和20μg/ml变性载体DNA(单链鱼精子DNA，具有平均长度120-3000核苷酸)
-在下列条件下实施杂交：
-通过在95℃加热5min使标记的探针变性，并在冰上冷却5分钟，添加到15ml杂交缓冲液中(与预杂交相同的缓冲液)
-在65℃实施杂交过夜。
-在65℃，杂交管中洗涤印迹三次30分钟(在具有0.1％ SDS的30ml6x SSC中一次，在具有0.1％SDS的30ml 2x SSC中两次)，在65℃，在盒中用具有0.1％SDS的500ml 2x SSC洗涤一次，10分钟。
-在-70℃，将Kodak X-OMAT AR膜暴露在放射性印迹下4小时。
-基于阳性信号，通过筛选BAC文库，从WOSR Express中挑选了72个大肠杆菌菌落(阳性总数：114)，所述菌落含有的BAC克隆包含FA TB序列，并且在第二轮BAC文库筛选中，通过筛选来自SOSR的BAC文库，挑选了40个所述菌落(阳性总数：135)(后文中称为“阳性菌落”)。
1.2 包含全长FATB序列的BAC克隆的分离
为了鉴别包含具有一个FATB基因的全长基因组序列的BAC克隆的阳性菌落，对从阳性菌落分离的BAC克隆DNA和从欧洲油菜分离的基因组DNA实施Southern印迹分析：
-通过本领域已描述过的碱裂解，从在100ml(对于WOSR Express)或25ml(对于SOSR)含有25μg/ml氯霉素的Luria Broth培养基中生长的阳性菌落中，分离BAC克隆DNA。
-根据溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)方法(Doyle和Doyle，1987，PhytochemistryBulletin 19：11-15)，从欧洲油菜冬油菜变种Darmor(后文称为“WOSR Darmor”)的叶组织中分离基因组DNA。
-通过在含有溴化乙锭()的1％ TBE()琼脂糖凝胶()上，将1μl每种样品的带强度，与含有25ng/ml Lambda DNA()的1、2、4、8和20μl溶液的带强度比较，评估每种制品的DNA浓度。
-在20μl的终反应体积中，用限制性酶AseI和EcoRV，消化100-200ng(对于WOSRExpress)或10ng(对于SOSR)的BAC克隆DNA，以及从WOSR Darmor中分离1.7μg基因组DNA，使用生产商(New EnglandBiolabs)建议的条件。调整消化时间和/或限制性酶的量，保证在没有非特异性降解的条件下，完全消化基因组DNA样品。
-在消化后，向消化的DNA样品中加入2μl含有RNA酶的上样染料(12.5ml 1％二甲苯腈蓝FF；12.5ml1％溴酚蓝水溶性指示剂；25ml甘油；100μl 0.5M EDTA pH8；1μl RNA酶(10mg/ml))，在37℃孵育样品30min。
-在1％ TAE琼脂糖凝胶上上样。
-包括用PstI消化的噬菌体Lambda DNA()(产生29种片段(按bp)：11501、5077、4749、4507、2838、2556、2459、2443、2140、1986、1700、1159、1093、805、514、468、448、339、264、247、216、211、200、164、150、94、87、72、15——斜体字的片段在标准电泳中不可见)(对于WOSR Express)或1kbp DNA梯度(Life Technologies)(对于SOSR)作为大小标准。
-在电泳后，通过干燥碱性毛细管印迹，将DNA样品(消化的BAC克隆和基因组DNA)转移到尼龙膜上(Hybond-N+Amersham Pharmacia)。
-如上所述，通过标准的Southern杂交程序，筛选具有消化的BAC克隆和基因组DNA的尼龙膜，进行BAC文库筛选，除基因组DNA外，在-70℃将Kodak XOMAT AR膜暴露于放射性印迹下2天。
-用限制性酶AseI和EcoRV消化鉴别的阳性菌落的BAC克隆DNA和从欧洲油菜WOSRDarmor分离的基因组DNA，并且用5’AtFATB1探针(SEQ ID NO：25)杂交(参见表14)获得了杂交模式，基于上述杂交模式之间的比较，和表现出特定限制性模式的BAC克隆数，将BAC克隆分成6组，针对6组中的每一组选出含有全长FATB序列的BAC克隆(命名为FATB1至6)。
-通过标准的测序技术(Agowa)，确定在选定的阳性菌落的BAC克隆中包含的FATB序列。
表14：消化的BAC克隆和基因组DNA与5’AtFATB1探针(SEQ IDNO：25)杂交的杂交模式
通过对所鉴别的阳性菌落的BAC克隆DNA，和从欧洲油菜WOSRDarmor分离的基因组DNA的AFLP分析，验证了6个不同的BAC克隆组的存在(Vos等人，1995，Nucleic AcidsResearch 23(21)：4407-4414)。
实施例2-表征来自欧洲油菜的FATB基因序列
在测序后，用FgeneSH(Softberry，Inc.Mount Kisco，NY，USA)和est2genome(Rice等人，2000，Trends in Genetics 16(6)：276-277；Mott，1997，Comput.Applic.13：477-478)确定了FATB序列的编码区，如序列表所示。
不同FATB序列与分离自芫菁(AA)和甘蓝(CC)的部分FATB序列的比对显示，FATB1、FATB2和FATB3序列源自A基因组，而FATB4、FATB5和FATB6序列源自C基因组。
具有或不具有内含子序列的不同FATB编码区，以及FATB氨基酸序列的多路比对(Align Plus程序-Scientific & Educational Software，USA；利用下列缺省参数：错配罚分＝2，开发空位罚分＝4，延伸空位罚分＝1；对于核苷酸，所使用的缺省评分矩阵是标准线性的(Standard linear)，而对于蛋白质，缺省评分矩阵是BLOSUM62)显示，与其它FATB基因相比，FATB1和FATB4，FATB2和FATB5，FATB3和FATB6彼此更加相关，表明它们是部分同源基因。
基于上述分析，序列FA TB1-FA TB6分别重命名为FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3，并且该命名在说明书全文使用。本文提供了WOSR和SOSR欧洲油菜基因的蛋白质和核酸序列。
WOSR序列
WOSR Express的基因组序列，即包括内含子序列的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白质编码区，分别表示为SEQ IDNO：1，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：5，SEQ IDNO：7，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：11。这些核酸序列编码的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白质序列分别描述为SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：4，SEQID NO：6，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：12。
SOSR序列
SOSR的基因组序列，即包括内含子序列的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白质编码区，表示为SEQ ID NO：13，SEQ IDNO：15，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：19，SEQID NO：21和SEQ ID NO：23。这些核酸序列编码的FATB-A1至FATB-A3和FATB-C1至FATB-C3的蛋白质序列分别在SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：18，SEQID NO：20，SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24。
表15显示了在具有或不具有内含子序列的条件下，WOSR Express(表15a)和SOSR(表15b)的不同FATB编码区之间的百分比(核苷酸)序列同一性，并显示了在同源的FATB-A1和FATB-C1，FATB-A2和FATB-C2，FATB-A3和FATB-C3之间较高程度的相关性(参见下划线的值)，表明不同的FATB基因在外显子比内含子序列中更保守。
表15a：在具有/不具有内含子序列的条件下，获得自WOSR Express的不同FATB编码区之间的百分比(核苷酸)序列同一性
％序列同一性 FATB-A1 FATB-A2 FATB-A3 FATB-C1 FATB-C2 FATB-C3
FATB-A1 100/100 75.0/82.5 75.4/87.6 91.3/94.8 71.4/85.7 68.5/87.3
FATB-A2 100/100 70.6/83.0 77.5/83.4 85.2/94.3 64.4/83.3
FATB-A3 100/100 75.3/88.0 67.4/85.4 83.5/96.7
FATB-C1 100/100 73.0/86.6 68.5/88.0
FATB-C2 100/100 61.2/86.0
FATB-C3 100/100
表15b：在具有/不具有内含子序列的条件下，获得自SOSR的不同FATB编码区之间的百分比(核苷酸)序列同一性
％同一性 FATB-A1 FATB-A2 FATB-A3 FATB-C1 FATB-C2 FATB-C3
FATB-A1 100/100 76.1/84.1 75.6/87.6 91.4/94.8 71.4/85.7 68.6/87.5
FATB-A2 100/100 72.3/84.8 78.8/85.3 86.6/96.4 65.3/85.1
FATB-A3 100/100 76.1/87.9 68.0/85.3 84.2/96.4
FATB-C1 100/100 73.0/86.7 68.7/88.0
FATB-C2 100/100 61.1/86.0
FATB-C3 100/100
下表16显示了获得自WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同FA TB编码区(具有/不具有内含子序列)之间的百分比(核苷酸)序列同一性，并显示了，在不同的欧洲油菜变种或育种品系之间，部分同源的FATB-A1和FATB-C1，FATB-A2和FATB-C2，FATB-A3和FATB-C3之间较高程度的相关性是保守的(参见下划线的值)，即，例如，在来自不同变种的部分同源的FATB-A1和FATB-C1序列之间的百分比序列同一性，高于这些FATB基因与同一变种的其它FATB基因之间的百分比序列同一性。
此外可见，在相同基因的WOSR和SOSR等位基因之间存在高百分比序列同一性(例如，来自WOSR的FATB-A1和来自SOSR的FATB-A1，参见粗体值)，表明欧洲油菜变种和育种品系在其基因组中具有密切相关的FATB等位基因。
表16：在有/无内含子序列条件下WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同FATB编码区的序列同一性
％同一性 FATB-A1(W) FATB-A2(W) FATB-A3(W) FATB-C1(W) FATB-C2(W) FATB-C3(W)
FATB-A1(S) 99.7/99.6 76.3/84.3 75.4/87.4 91.2/94.6 71.4/85.7 68.4/87.2
FATB-A2(S) 74.8/82.3 98.3/97.8 71.2/82.9 77.5/83.4 85.2/94.3 64.3/83.2
FATB-A3(S) 75.6/87.9 71.7/84.9 97.8/98.6 75.4/88.0 67.4/85.4 83.4/96.6
FATB-C1(S) 91.5/950 78.8/85.3 76.0/88.0 99.8/99.7 73.0/86.6 68.5/87.9
FATB-C2(S) 71.4/85.7 86.6/96.4 68.0/85.3 73.0/86.7 100/100 61.1/86.0
FATB-C3(S) 68.7/87.5 65.3/85.2 84.3/96.5 68.6/87.9 61.2/86.0 99.9/99.9
表17a和b显示，WOSR Express(表17a)和SOSR(表17b)的不同FATB氨基酸序列之间的百分比(氨基酸)序列同一性。
表17a：WOSR Express的不同FATB氨基酸序列之间的百分比序列同一性
％同一性 FATB-A1 FATB-A2 FATB-A3 FATB-C1 FATB-C2 FATB-C3
FATB-A1 100.0 86.5 90.2 96.2 88.5 89.3
FATB-A2 100.0 85.0 86.8 95.3 83.8
FATB-A3 100.0 89.7 87.6 98.6
FATB-C1 100.0 88.9 88.7
FATB-C2 100.0 86.4
FATB-C3 100.0
表17b：SOSR的不同FATB氨基酸序列之间的百分比序列同一性
％同一性 FATB-A1 FATB-A2 FATB-A3 FATB-C1 FATB-C2 FATB-C3
FATB-A1 100.0 89.0 90.1 96.6 89.0 89.7
FATB-A2 100.0 87.3 88.9 98.6 86.6
FATB-A3 100.0 89.4 87.3 97.8
FATB-C1 100.0 88.9 88.7
FATB-C2 100.0 86.4
FATB-C3 100.0
表18显示，WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同FATB氨基酸序列之间的百分比(氨基酸)序列同一性。百分比序列同一性表示FATB-A1和FATB-C1，FATB-A2和FATB-C2，FATB-A3和FATB-C3是部分同源基因(参见下划线值)，并且在这些部分同源物之间较高程度的相关性在不同变种之间是保守的。
此外可见，相同FATB基因的WOSR和SOSR蛋白之间，存在高的百分比序列同一性(例如，来自WOSR的FATB-A1和来自SOSR的FATB-A1；参见粗体的值)，表明欧洲油菜变种和育种品系的基因组中具有密切相关的FATB等位基因，编码相同或高度相似的蛋白质。
表18：WOSR Express(W)和SOSR(S)的不同FA TB氨基酸序列之间的百分比序列同一性
％同一性 FATB-A1(W) FATB-A2(W) FATB-A3(W) FATB-C1(W) FATB-C2(W) FATB-C3(W)
FATB-A1(S) 99.5 88.6 89.7 96.2 88.5 89.3
FATB-A2(S) 86.9 96.5 84.5 86.8 95.3 83.8
FATB-A3(S) 90.7 87.8 99.3 89.7 87.6 98.6
FATB-C1(S) 96.6 88.9 89.4 100.0 88.9 88.7
FATB-C2(S) 89.0 98.6 87.3 88.9 100.0 86.4
FATB-C3(S) 89.7 86.6 97.8 88.7 86.4 100.0
实施例3-芸苔属FATB基因的表达
为了分析不同FATB基因在不同组织中的表达，对从不同芸苔属植物组织中分离的总RNA实施对各种FATB基因特异的半定量RT-PCR测定。
模板：
-一系列增加量的总RNA，即，0.1ng、1ng、10ng和100ng，分离自叶、根、未开放的花蕾和顶端(apiees)、子叶、开花11天后有he无种子的豆荚以及这些豆荚的种子、开花后21天和34天的豆荚的种子，和欧洲油菜SOSR的愈伤组织，根据生产商的说明使用RNeasy PlantMinikit(Qiagen)。
-一系列增加量的基因组DNA，即，0.1ng、1ng和10ng，根据CTAB方法(Doyle和Doyle，1987，Phytochemistry Bulletin 19：11-15)分离自欧洲油菜SOSR的叶组织。
引物和从靶FATB基因扩增的片段长度：
-确定FATB-A1基因的表达(SEQ ID NO：13)：
正向：5’-CTGATAACGAGACGTCCTCAC-3’(SEQ ID NO：31)
反向：5’-CATCCTGGAGACGGAGCAGG-3’(SEQ ID NO：32)
→对于FATB-A1 RNA模板957bp，和
→对于FATB-A1基因组DNA模板1275bp
-确定FATB-A2基因的表达(SEQ ID NO：15)：
正向：5’-CTGCCTGACTGGAGTATGCTG-3’(SEQ ID NO：33)
反向：5’-GTTGTTGCTCCTGTCTTGGAG-3’(SEQ ID NO：34)
→对于FATB-A2 RNA模板956bp，和
→对于FATB-A2基因组DNA模板1340bp
-确定FATB-A3基因的表达(SEQ ID NO：17)：
正向：5’-GCAGTGGATGATGCTTGATAC-3’(SEQ ID NO：35)
反向：5’-CAAGTCGTTGATGGTGTTTTC-3’(SEQ ID NO：36)
→对于FATB-A3 RNA模板900bp，和
→对于FATB-A3基因组DNA模板1367bp
-确定FATB-C1基因的表达(SEQ ID NO：19)：
正向：5’-CTGCCTGACTGGAGCATGCTC-3’(SEQ ID NO：37)
反向：5’-GTTCTTCCTCTCACCACTTCG-3’(SEQ ID NO：38/67)
→对于FATB-C1 RNA模板926bp，和
→对于FATB-C1基因组DNA模板1259bp
-确定FATB-C2基因的表达(SEQ ID NO：21)：
正向：5’-ATCGTTCAGGATGGTCTTGTC-3’(SEQ ID NO：39)
反向：5’-GCAGTCTTGTCATCAAGTTTG-3’(SEQ ID NO：40)
→对于FATB-C2 RNA模板500bp，和
→对于FATB-C2基因组DNA模板937bp
-确定FATB-C3基因的表达(SEQ ID NO：23)：
正向：5’-ACAGTGGATGATGCTTGACTC-3’(SEQ ID NO：41)
反向：5’-CGAACATAGTCAGCAGTCTTC-3’(SEQ ID NO：42)
→对于FTB-C3 RNA模板582bp，和
→对于FATB-C3基因组DNA模板1151bp。
PCR混合物：
-对于用RNA进行的RT-PCR(所述RNA用具有TaqDNA聚合酶(Invitrogen)的SuperscriptTMIII One-Step RT-PCR系统制备)：12.5μl 2x反应混合物，1μl SuperscriptTM Taq DNA聚合酶，9.5μl Milli-Q H2O，1μl RNA(0.1ng/μl，1ng/μl，10ng/μl和100ng/μl)，0.5μl正向引物(20μM)，0.5μl反向引物(20μM))＝总体积25μl；
-对于用基因组DNA进行的PCR：12.5μl 2x反应混合物，0.2μlTaqDNA聚合酶(5U/μl，Invitrogen)，0.5μl正向引物(20μM)，0.5μl反向引物(20μM))，1μl DNA(0.1ng/μl，1ng/μl和10ng/μl)，10.3μl Milli-Q H2O＝总体积25μl；
热循环谱：55℃ 30min(cDNA合成)，94℃ 2min；30x[94℃(变性)15see和57℃(退火)30see和68℃(延伸)2min]；68℃5min：冷却至10℃。
在扩增后，向PCR样品中加入5μl上样染料(2.5ml 0.1％溴酚蓝，2.5ml 0.1％二甲苯腈蓝，5ml甘油，50μl 0.5M EDTA，pH8)，将15μl样品上样至含有溴化乙锭的1％TAE(10x(400mM Tris-乙酸盐+100mM EDTA)；)琼脂糖()凝胶，同时上样合适的分子量标志(1Kb DNA梯，Life Technologies)。
从欧洲油菜SOSR的不同组织的总RNA和基因组DNA中，用FA TB基因-特异性引物扩增后获得条带模式评价如下：
-不接受来自单次RT-PCR运行和单份RT-PCR混合物的RNA样品的数据，但是下述情况除外：分别扩增自一系列增加量的基因组DNA和总RNA的PCR产物和RT-PCR产物(在RT-PCR产物的情况下如果有的话；见下文)表现出，针对靶FATB基因的预期的片段长度(如上述)，和与增量的模板DNA和RNA在量上分别成比例增加。
-泳道不含有任何针对特定靶FATB基因的预期大小的RT-PCR产物(所述产物扩增自系列增加量的总RNA)，表示在从其中制备模板RNA的相应组织中，不表达或以极低水平表达特定的靶FATB基因。
-泳道含有针对特定靶FATB基因的预期大小的RT-PCR产物(所述产物扩增自系列增加量的总RNA)，表示在从其中制备模板RNA的相应组织中，表达特定的靶FATB基因。
为了确定相对于特定组织中其它FATB基因的表达水平，特定组织中各FA TB基因的表达水平，将在电泳凝胶上观察到的FATB RT-PCR产物的条带强度(获得自DNA的溴化乙锭染色，在UV光下观察)，与在电泳凝胶上观察到的扩增自系列增量的基因组DNA的FATBPCR产物的条带强度相比。
结果
在分析的所有组织中表达所有的FATB基因(表19中的+)。在11、21和34天的豆荚种子和叶子中(基于10ng RNA)，各种FA TB基因的表达水平显示在表20中的括号中，所述表达水平表示为基因组DNA的量(ng)，所述基因组DNA的量产生的条带强度与FA TB基因-特异性RT-PCR产物的条带强度(如上所述)相当。
表20
组织 FATB-A1 FATB-A2 FATB-A3 FATB-C1 FATB-C2 FATB-C3
叶 +(0.1) +(5) +(＞10) +(＜0.1) +(5) +(10)
根 + + + + + +
未开放的花蕾+顶端 + + + + + +
子叶 + + + + + +
愈伤组织 + + + + + +
没有种子的11d豆荚 + + + + + +
有种子的11d豆荚 + + + + + +
来自11d豆英的种子 +(＜0.1) +(1) +(10) +(＜0.1) +(5) +(1)
没有种子的21d豆荚 + + + + + +
有种子的21d豆荚 + + + + + +
来自21d豆荚的种子 +(0.1) +(1) +(1) +(0.1) +(5) +(1)
没有种子的34d豆荚 + + + + + +
来自34d豆荚的种子 +(＜0.01) +(0.05) +(0.05) +(0.05) +(0.5) +(0.05)
图1中表示了种子中(基于10ng RNA)各种FATB基因的时间(开花后11、21和34天)和表达水平，所述表达水平以基因组DNA的量(ng)表示，所述基因组DNA的量产生的条带强度与FATB基因-特异性RT-PCR产物的条带强度(如上所述)相当。
实施例4-突变芸苔属FATB等位基因(fatB)的产生和分离
实施例1中鉴别的FATB基因中的突变是使用下述方法产生和鉴别的，如下所述。在4.1节中，描述了fatB等位基因的产生，所述等位基因包含一个或多个核苷酸的缺失，例如缺失部分或全部fatB等位基因(“缺失突变”)。在4.2节中，描述了fatB等位基因的产生和分离，所述等位基因包含STOP密码子突变(“无义突变”)和/或一个或多个剪接位点突变。
4.1 fatB缺失突变体的产生和筛选
-使用本领域所述的快中子诱变方法，诱变来自欧洲油菜SOSR的种子(野生型，称为“M0”种子)，产生突变种子群体(称为“M1”种子)。
-生长60000株M1植物，并自交。收获每一单株M1植物的M2种子。
-生长源自不同M1植物的1000株M2植物，并根据CTAB方法(Doyle和Doyle，1987，Phytochemistry Bulletin 19：11-15)，从每一单株M2植物的叶样品制备DNA样品。将M2植物自交，获得M3种子。
-如实施例1所述，评估DNA样品的浓度。在下列条件下，用限制性酶AseI和EcoRV消化1.7μg的基因组DNA，总反应体积为20μl(酶和缓冲液来自New England)：
-AseI消化：17μl DNA(100ng/μl)，1μl AseI(10U/μl)，2μl NEB3缓冲液
-EcoRV消化：17μl DNA(100ng/μl)，1μl EcoRI(10U/μl)，2μl NEB3缓冲液，100x牛血清白蛋白
在37℃孵育过夜或在37℃孵育4小时。
-消化后，向消化的DNA样品中加入2μl含有RNA酶的上样染料(12,5ml1％二甲苯腈蓝FF；12,5ml 1％溴酚蓝水溶性指示剂；25ml甘油；100μl 0.5M EDTA pH8；1μl RNase(10mg/ml))，在37℃孵育样品30min。样品上样至1％TAE()琼脂糖凝胶。包括用限制性酶PstI消化噬菌体Lambda DNA()(产生29种片段(bp))作为标准大小：11501、5077、4749、4507、2838、2556、2459、2443、2140、1986、1700、1159、1093、805、514、468、448、339、264、247、216、211、200、164、150、94、87、72、15(斜体字的片段在标准电泳中不可见)。
-在电泳后，通过干燥碱性毛细管印迹，将DNA样品(消化的基因组DNA)转移至尼龙膜(Hybond-N+Amersham Pharmacia)上。如实施例1所述，通过标准Southern杂交程序，针对基因组DNA，用5’AtFATB1探针(SEQ ID NO：25)筛选具有消化的基因组DNA的尼龙膜。在-70℃，将Kodak XOMAT AR膜暴露于放射性印迹2天。
结果：
将用AseI和EcoRV消化M2芸苔属植物的基因组DNA，并用5’AtFATB1探针(SEQ IDNO：25)杂交后获得的杂交模式，与用AseI和EcoRV消化野生型芸苔属SOSR植物的基因组DNA，并用5’At FATB1探针(SEQID NO：25)杂交后获得的杂交模式相比(表21)。为了确定杂交的DNA片段和不同FATB基因之间的对应性，将后者的杂交模式与具有实施例1鉴别的一种FATB基因的全长序列的BAC克隆DNA的杂交模式相比，所述BAC克隆DNA用AseI和EcoRV消化并用5’At FATB1探针(SEQ IDNO：25)杂交(参见上表14)。
表21：消化的欧洲油菜的基因组DNA与5’At FATB1探针杂交的杂交模式
缺少一种表21所示的杂交DNA片段表示，在用快中子诱变方法诱变植物中缺失了完整的FATB等位基因。
表22中显示了纯合的M2芸苔属植物以及缺失的杂交DNA片段(missinghybridizing DNA fragment)，所述植物包含鉴别的fatB缺失。
表22
通过下列PCR测定验证了纯合M2芸苔属植物中特定FATB等位基因的缺失：
-模板DNA：
-分离自M2芸苔属植物的叶材料的基因组DNA，所述植物被鉴别为含有特定FATB基因中的缺失或特定FATB基因缺失(“FATBx”)。
-阳性对照：FATBx基因的BAC克隆DNA(该阳性对照的成功扩增表明PCR在允许扩增特定靶FATBx序列的条件下运行)。
-阴性对照：不同于FATBx基因的FATB基因的BAC克隆DNA(当观察到预期的结果时，即，没有扩增特定的FATBx PCR产物，表示没有其它FATB基因的可检测的背景扩增)。
-野生型DNA对照：是这样的PCR，其中提供的模板DNA是从没有FATBx基因缺失的M2芸苔属植物制备的基因组DNA。当观察到预期的结果时，即，仅扩增特定的FATBx PCR产物，表示在基因组DNA样品中，没有可检测的背景扩增，例如其它FATB基因的可检测的背景扩增。
-引物和从野生型靶FATBx基因扩增的片段长度(“FATBx-特定PCR片段”)：
-为了证实存在FATB-A1基因(SEQ ID NO：13)中的缺失或FATB-A1基因缺失：
正向：5’-CTGATAACGAGACGTCCTCAC-3’(SEQ ID NO：31)
反向：5’-CAGTCTTAACATGGTTGAGTG-3’(SEQ ID NO：43)
→403bp
-为了证实存在FATB-A2基因(SEQ ID NO：15)中的缺失或FATB-A2基因缺失：
正向：5’-CATGTTCCATCTTCTTCCTCG-3’(SEQ ID NO：44)
反向：5’-TATTGGGACAACATGTGAGTG-3’(SEQ ID NO：45)
→513bp
-为了证实存在FATB-A3基因(SEQ ID NO：17)中的缺失或FATB-A3基因缺失：
正向：5’-GCAGTGGATGATGCTTGATAC-3’(SEQ ID NO：35)
反向：5’-TTCTTCTTAACCATCTCAGGT-3’(SEQ ID NO：46)
→487bp
-为了证实存在FATB-C1基因(SEQ ID NO：19)中的缺失或FATB-C1基因缺失：
正向：5’-CTGCCTGACTGGAGCATGCTC-3’(SEQ ID NO：37)
反向：5’-CCAAACCCATCTCCAAGCAGC-3’(SEQ ID NO：47)
→367bp
-为了证实存在FATB-C2基因(SEQ ID NO：21)中的缺失或FATB-C2基因缺失：
正向：5’-ATCGTTCAGGATGGTCTTGTC-3’(SEQ ID NO：39)
反向：5’-TAACTCACAACGAGAACCAGG-3’(SEQ ID NO：48)
→397bp
-为了证实存在FATB-C3基因(SEQ ID NO：23)中的缺失或FATB-C3基因缺失：
正向：5’-ACAGTGGATGATGCTTGACTC-3’(SEQ ID NO：41)
反向：5’-CTTTGATAATCTCCTTGTCAC-3’(SEQ ID NO：49)
→1035bp
-PCR混合物：2.5μl 10x PCR缓冲液，0.25μl dNTP(20μM)，0.5μl正向引物(10μM)，0.5μl反向引物(10μM)，0.25μl Taq聚合酶(5U/μl)，20μl Milli-Q H2O，1μl DNA(50ng/μl)＝总体积25μl；
-热循环谱：94℃ 4min；25x[94℃(变性)1min和57℃(退火)1min和72℃(延伸)2min]；72℃ 5min：冷却至4℃。
-在扩增后，向PCR样品中加入5μl上样染料(2.5ml 0.1％溴酚蓝，2.5ml 0.1％二甲苯腈蓝，5ml甘油，50μl 0.5M EDTA，pH8)，将样品上样至1％TAE(10x(400mM Tris-乙酸盐+100mM EDTA)；)琼脂糖()凝胶，同时上样合适的分子量标志(100bp DNA标志物，)。
-如下评价在用FATBx-特异性引物扩增M2芸苔属植物的基因组DNA后获得的条带模式：
-不接受来自单次PCR运行和单份PCR混合物的DNA样品的数据，所述DNA样品分离自M2芸苔属植物的叶材料，所述植物经鉴定包含FATBx基因内的缺失突变或所述基因的缺失突变，除非：
-阴性对照是PCR扩增阴性的(无片段)，
-阳性对照表现出预期的PCR产物(特定的FATBx片段)，
-野生型DNA对照显示出预期的结果(仅特定的FATBx片段)。
-没有表现出预期大小的特定FATBx基因的PCR产物的泳道，表示在从其中制备基因组模板DNA的相应植物中，包含特定FATBx基因内的缺失或所述基因的缺失。
-表现出预期大小的特定FATBx基因的PCR产物的泳道，表示在其中制备基因组模板DNA的相应植物中，不包含特定FATBx基因内的缺失或所述基因的缺失。
证实了纯合M2植物No.LOSA018包含FATB-A1的缺失，纯合M2植物Nrs.LOSA002、3、5包含FATB-A2的缺失，和纯合M2植物Nr.LOSA004包含FATB-C2的缺失。
4.2包含一个或多个点突变的FATB等位基因的产生和分离
-将来自欧洲油菜SOSR的30000颗种子(M0种子)在去离子的或蒸馏的水中在湿润滤纸上预浸渗2小时。半数种子暴露在0.8％EMS中，半数暴露在1％EMS(Sigma：M0880)，孵育4小时。
-将诱变的种子(M1种子)漂洗3次，并在通风橱中干燥过夜。在土壤中生长30000株M1植物，自交产生M2种子。收获每单株M1植物的M2种子。
-生长源自不同的M1植物的2倍4800株M2植物，并根据CTAB方法(Doyle和Doyle，1987，Phytochemistry Bulletin 19：11-15)，从每单株M2植物的叶样品中制备DNA样品。M2植物自交获得M3种子。
-通过标准测序技术(Agowa)直接测序，和使用NovoSNP软件(VIBAntwerp)分析序列中存在的点突变，在DNA样品中筛选FATB基因中点突变的存在，所述点突变导致引入STOP密码子或剪接位点突变。
-从而鉴别出以下突变FATB等位基因(fatB)：
表23a：SOSR的FATB基因中的STOP密码子突变
突变的FATB基因 外显子编号 氨基酸位置 核苷酸位置 野生型→突变密码子 M2植物No. 等位基因No.
FATB-A1(SEQ IDNO：13) 外显子1外显子1外显子1 93111116 279333348 tgg→tgatgg→tgatgg→tga LOSA101，LOSA103，LOSA102LOSA104LOSA105 FATB-A1-EMS01，FATB-A1-EMS02，FATB-A1-EMS03FATB-A1-EMS05(1)FATB-A1-EMS06(2)
FATB-A2(SEQ IDNO：15) 外显子1外显子1 94136 282406 tgg→tga cag→tag LOSA111，LOSA112LOSA108 FATB-A2-EMS04，FATB-A2-EMS05(3)FATB-A2-EMS01(2)
FATB-A3(SEQ IDNO：17) 外显子2 205 845 cag→tag LOSA114 FATB-A3-EMS01(1)
FATB-C1(SEQ IDNO：19) 外显子2 196 668 tgg→tga LOSA129 FATB-C1-EMS05(2，3)
FATB-C2(SEQ IDNO：21) 外显子1外显子1外显子1 79111112 235331336 cag→tagcag→tagtgg→tga LOSA119LOSA122LOSA120，LOSA123 FATB-C2-EMS02(3)FATB-C2-EMS05FATB-C2-EMS03(2)，FATB-C2-EMS06
(1)包含FATB-A1-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04和FATB-C3-EMS02的种子(命名为08MBBN000584)，已经于2008年6月27日，以登录号NCIMB 41568，保藏在NCIMBLimited中(弗格森大厦，克莱伯区，伯克伯恩，阿伯丁，苏格兰，AB219YA，英国(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
(2)包含FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS03的种子(命名为08MBBN000572)，已经于2008年6月27日，以登录号NCIMB 41567，保藏在NCIMBLimited(弗格森大厦，克莱伯区，伯克伯恩，阿伯丁，苏格兰，AB219YA，英国(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
(3)包含FATB-A2-EMS05、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS02的种子(命名为08MBBN000553)，已经于2008年6月27日，以登录号NCIMB 41566，保藏在NCIMB Limited(弗格森大厦，克莱伯区，伯克伯恩，阿伯丁，苏格兰，AB21 9YA，英国(Ferguson Building，CraibstoneEstate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB219YA，UK))。
表23b：SOSR的FATB基因中的剪接位点突变
(1)包含FATB-A1-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04和FATB-C3-EMS02的种子(命名为08MBBN000584)，已经于2008年6月27日，以登录号NCIMB 41568，保藏在NCIMBLimited中(弗格森大厦，克莱伯区，伯克伯恩，阿伯丁，苏格兰，AB21 9YA，英国(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
总而言之，上述实施例显示了如何产生并分离突变FATB等位基因。而且，包含此类突变等位基因的植物材料可用于组合植物中理想的突变和/或野生型等位基因，如下列实施例中所述。
实施例5-鉴别包含突变芸苔属FATB等位基因的芸苔属植物
在实施例5中鉴别的包含FATB基因内突变的芸苔属植物是如下鉴别的：
5.1包含FATB等位基因缺失的芸苔属植物的鉴别
-对于所鉴别的包含FATB基因缺失的每一株纯合的M2植物，生长M3植物，并从每单株M3植物的叶样品中制备DNA样品
-对每一单株M3植物的每一份DNA样品，实施特异性针对FATB基因的PCR测定，所述FATB基因经鉴别包含缺失突变(如实施例4.1所述)。
-将包含经鉴别的突变的纯合子M3植物自交，收获M4种子。
5.2在FATB基因中包含点突变的芸苔属植物的鉴别
-对于在M2植物的DNA样品中鉴别的每种突变FATB基因，当M2植物包含FATB突变时，生长50株源自同一M1植物的M2植物，并从每单株M2植物的叶样品中制备DNA样品。
-如以上实施例4.2所述，在DNA样品中筛选经鉴别的点FATB突变的存在。
-将包含相同突变的杂合或纯合(基于电泳图确定)M2植物自交，收获M3种子。
实施例6-包含突变芸苔属FATB基因的芸苔属植物种子油脂肪酸组成的分析
为了确定芸苔属植物中突变FATB基因的存在，与芸苔属植物的种子油脂肪酸组成之间的相关性，通过从种子中提取脂肪酰，并通过毛细管气相-液相色谱分析它们在种子油中的相对水平，来分析包含突变FATB基因的芸苔属植物的种子油的脂肪酸组成，如下：
-干燥种子样品并称重。将0.8g种子放入塑料瓶中。向每个瓶内加入钢轧碎杆(steel crushing rod)。然后用2ml甲基化溶液(10g甲醇钠在500ml甲醇中)和0.8ml石油醚填满该瓶。在Eberbach振荡器上振荡加盖的瓶。在揭盖和振荡前，向每个瓶中加入1ml去离子水。在3500rpm离心瓶5min。
-将25-50μl石油醚层从每个样品转移至气相色谱(GC)自动采样瓶中。在开始振荡前，向每个瓶内加入100μl 0.4M磷酸盐缓冲液和800μl石油醚。在气象色谱中注射0.4-0.6μl的样品石油醚层用于分析。分析从气象色谱打印输出的结果，并计算每种脂肪酸的含量。
6.1.芸苔属植物中一种芸苔属FATB等位基因的存在与所述芸苔属植物的种子油 脂肪酸组成之间的相关性
为了确定以纯合和/或杂合状态在芸苔属植物中的一种突变FATB等位基因的存在，与芸苔属植物的种子油脂肪酸组成之间的相关性，如上述分析实施例5.1中鉴别的芸苔属植物的种子油脂肪酸组成。
与野生型植物的种子油脂肪酸组成相比，没有观察到纯合的单突变植物的种子油脂肪酸组成有显著的差异，特别是总饱和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸的水平)，棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)的水平(参见表24)。
表24：在包含一种纯合状态的突变FATB等位基因(即，表22所示的FATB-AX-FNY或FATB-CX-FNY等位基因，在第2列称为‘aX-fnY’和‘cX-fnY’；野生型FATB等位基因被称为‘AX’和‘CX’)的芸苔属植物的种子油中，总饱和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸；‘饱和’)，棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)的水平(基于脂肪酸总量的重量百分比)。
6.2.芸苔属植物中存在一至四种突变芸苔属FATB等位基因与这些芸苔属植物的 种子油脂肪酸组成之间的相关性
为了确定以纯合和/或杂合状态存在于芸苔属植物中的一至四种突变FATB等位基因的存在，与芸苔属植物的种子油脂肪酸组成之间的相关性，将实施例5.2中鉴别的芸苔属植物，或其包含突变FA TB等位基因的后代彼此杂交，如上分析每株后代芸苔属植物的种子油脂肪酸组成。
表25和图8显示，野生型植物中平均总饱和脂肪酸水平的范围在8.24至10.52％之间，在纯合的单突变FATB植物中在6.53至12.12％之间，在纯合的双突变FATB植物中在6.47至10.01％之间，在纯合的三突变FATB植物中在5.68至8.43％之间，在纯合的四突变FATB植物中在5.72至7.7％之间。表25和图8还显示，在特定FATB基因中的突变，例如FATB-A2和FATB-C2，可以比其它FATB基因中的突变对饱和脂肪酸的水平具有更强的影响。
在温室中生长所分析的植物。由于在田间生长的野生型植物的种子油的平均总饱和脂肪酸水平通常在约6.5％和7.5％之间，而非在温室生长植物中观察到的8.24至10.52％，因此，预期在田间生长的突变植物的种子油的总饱和脂肪酸水平也将更低。突变植物生长在田间，确定种子油脂肪酸组成。
表25：在包含至少一种纯合状态的突变FATB等位基因(即，表23所示的FATB-AX-EMSY或FATB-CX-EMSY等位基因，在第1列称为‘aX-emsY’和‘cX-emsY’，在第2列中称为‘aX’和‘cX’；野生型FATB等位基因被称为‘AX’和‘CX’)的芸苔属植物的种子油中，总饱和脂肪酸(即，C14:0、C16:0、C18:0、C20:0、C22:0和C24:0脂肪酸；‘饱和’)，棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)的水平(基于脂肪酸总量的重量百分比)。
(1)包含FATB-A1-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS04和FATB-C3-EMS02的种子(命名为08MBBN000584)，已经于2008年6月27日，以登录号NCIMB 41568，保藏在NCIMBLimited中(弗格森大厦，克莱伯区，伯克伯恩，阿伯丁，苏格兰，AB219YA，英国(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB219YA，UK))。
(2)包含FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS03的种子(命名为08MBBN000572)，已经于2008年6月27日，以登录号NCIMB 41567，保藏在NCIMBLimited(弗格森大厦，克莱伯区，伯克伯恩，阿伯丁，苏格兰，AB21 9YA，英国(FergusonBuilding，Craibstone Estate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
(3)包含FATB-A2-EMS05、FATB-C1-EMS05和FATB-C2-EMS02的种子(命名为08MBBN000553)，已经于2008年6月27日，以登录号NCIMB 41566，保藏在NCIMB Limited(弗格森大厦，克莱伯区，伯克伯恩，阿伯丁，苏格兰，AB219YA，英国(Ferguson Building，CraibstoneEstate，Bucksburn，Aberdeen，Scotland，AB21 9YA，UK))。
6.3.芸苔属植物中以纯合和/或杂合状态存在五至六种突变芸苔属FATB等位基因 与这些芸苔属植物的种子油脂肪酸组成之间的相关性
为了确定以纯合和/或杂合状态存在于芸苔属植物中的五至六种突变FATB等位基因，与芸苔属植物的种子油脂肪酸组成之间的相关性，将实施例5.2中鉴别的芸苔属植物，或其包含突变FATB等位基因的后代彼此杂交，如上分析每株后代芸苔属植物的种子油脂肪酸组成。
实施例7-将突变FATB基因转移至(良种)芸苔属品系中
通过下列方法将突变FATB基因转移至(良种)芸苔属品系中：
将包含突变FATB基因的植物(供体植物)，与(良种)芸苔属品系(良种亲本/回归亲本)或缺失突变FATB基因的变种杂交。使用下列渐渗方案(突变FATB基因缩写为fatB，同时野生型描述为FATB)：
初始杂交：fatB/fatB(供体植物)X FATB/FATB(良种亲本)
F1植物：FATB/fatB
BC1杂交：FATB/fatB X FATB/FATB(回归亲本)
BC1植物：50％ FATB/fatB和50％ FATB/FATB
使用例如突变FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR标志物选择该50％FATB/fatB。
BC2杂交：FATB/fatB(BC1植物)X FATB/FATB
(回归亲本)
BC2植物：50％ FATB/fatB和50％FATB/FATB
使用例如针对突变FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR标志物选择该50％FATB/fatB。
重复回交至BC3至BC6
BC6植物：50％FATB/fatB和50％FATB/FATB
使用例如针对突变FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR标志物选择该50％FATB/fatB。
BC6S1杂交：FATB/fatB X FATB/fatB
BC6S1植物：25％ FATB/FATB和50％ FATB/fatB和25％fatB/fatB
使用例如针对突变FATB等位基因(fatB)的AFLP或PCR标志物选择含有fatB的植物。
使用例如针对突变和野生型等位基因的AFLP或PCR标志物选择单株BC6S1植物，所述植物对于突变FATB等位基因是纯合的(fatB/fatB)。
然后将这些植物用于生产种子。
为了选择包含FATB等位基因缺失的植物，可以使用如实施例4.1所述那些的杂交测定或PCR测定。
为了选择在FATB等位基因中包含点突变的植物，可以通过本领域已知的标准测序技术进行直接测序，例如实施例4.2所述的那些技术。可选的，可以开发PCR测定，来区分在FATB等位基因中包含特定点突变的植物，和不包含该特定点突变的植物。因此，开发了以下区分性PCR测定，来检测实施例4.2中鉴别的突变等位基因的存在或缺失，以及接合性状态(参见表23)：
-模板DNA：
-分离自纯合或杂合突变芸苔属植物的叶材料的基因组DNA(包含突变FATB等位基因，后文称为“FATB-Xx-EMSXX”)。
-野生型DNA对照：分离自野生型芸苔属植物的叶材料的基因组DNA(包含突变FATB等位基因的野生型等价体，后文称为“FATB-Xx-WT”)。
-阳性DNA对照：分离自纯合突变芸苔属植物的叶材料的基因组DNA，所述植物已知包含FATB-Xx-EMSXX。
-表26中显示了引物和扩增自突变和相应野生型靶FATB基因的片段的长度。每个引物组由一条特异针对突变体和野生型靶基因的引物(例如，引物LOSA104R5特异针对FATB-A1-EMS06和FATB-A1-WT)和一条特异针对核苷酸差异的引物(例如，引物LOSA105MF1特异针对FATB-A1-EMS06，和引物LOSA105WF1特异针对FATB-A1-WT)组成。通常，后一种引物的最后一个核苷酸与核苷酸差异相匹配(表26中下划线的核苷酸)，但是可以添加一个(或多个)额外的靶特异性核苷酸，来改善引物及其靶序列之间的退火(参见例如，特异针对FATB-A2-EMS05等位基因的引物LOSA112MR2中的粗体核苷酸，与引物LOSA112WR2相比，后者特异针对FATB-A2-WT等位基因)。
-PCR混合物：2.5μl 10x PCR缓冲液(15mM MgCl2)，0.25μl dNTP(20mM)，1μl正向引物(10μM)，1μl反向引物(10μM)，0.25μl Taq聚合酶(5U/μl)，19.5μl Milli-Q H2O，0.5μlDNA(20-50ng/μl)＝总体积25μl；
-热循环谱：95℃ 4min；30x[95℃(变性)1min，和表26说明的退火温度1min和72℃(延伸)2min]；72℃ 5min；冷却至4℃。通过在MJ Research热循环仪上的PTC-200(Biozym)上的温度梯度PCR确定优化的退火温度，其中退火温度在57℃至70℃之间变动。野生型FATB特异性引物的优化退火温度是这样的温度，在所述温度下，可以从野生型芸苔属植物DNA样品中检测到预期大小的清晰的PCR片段(如下所述)，而从突变芸苔属植物的DNA样品中检测不到。突变FATB特异性引物的优化退火温度是这样的温度，在所述温度下，可以从突变芸苔属植物DNA样品中检测到预期大小的清晰的PCR片段(如下所述)，而从野生型芸苔属植物的DNA样品中检测不到。
-在扩增后，向15μl PCR样品中添加5μl上样染料(橙色染料)，并将样品上样至1.5％琼脂糖凝胶中。
-如下评估扩增突变芸苔属植物的基因组DNA后所获得的条带模式：
-不接受在单次PCR运行和单份PCR混合物中的DNA样品的数据，所述DNA样品分离自突变芸苔属植物的叶材料，除非：
-野生型DNA对照在FATB-Xx-WT特异性PCR测定中显示出预期大小的PCR片段，在FATB-Xx-EMSXX特异性PCR测定中没有显示出预期大小的PCR片段
-阳性DNA对照在FATB-Xx-EMSXX特异性PCR测定中显示出预期大小的PCR片段，在FATB-Xx-WT特异性PCR测定中没有显示出预期大小的PCR片段
-在FATB-Xx-WT特异性PCR测定中没有显示出预期大小的PCR产物，而在FATB-Xx-EMSXX特异性PCR测定中显示出预期大小的PCR片段的泳道，表示从其中制备基因组模板DNA的相应植物是FATB-Xx-EMSXX的纯合突变。
-在FATB-Xx-WT特异性PCR测定和FATB-Xx-EMSXX特异性PCR测定中显示出预期大小的PCR片段的泳道，表示从其中制备基因组模板DNA的相应植物是FATB-Xx-EMSXX的杂合突变。
-在FATB-Xx-WT特异性PCR测定中显示出预期大小的PCR片段，而在FATB-Xx-EMSXX特异性PCR测定中没有显示出预期大小的PCR产物的泳道，表示从其中制备基因组模板DNA的相应植物是野生型植物。
表26：
＊ho＝纯合子，he＝杂合子
可选的，可以使用InvaderTM技术(Third Wave Agbio)来区分在FA TB等位基因中包含特定点突变的植物和不包含特定点突变的植物。因此，可以开发下列区分性InvaderTM探针，来检测实施例4中鉴别的突变等位基因的存在或缺失，以及接合性状态(参见表23a和b)：
-开发了特异针对突变(可以通过附加“flap1”序列来区分)或相应野生型(可以通过附加“flap2”序列来区分)靶FATB基因的探针，以及可以与其组合使用的“侵入型”探针。通常，每种探针组由特异针对突变或野生型靶基因的一种探针(所述探针在5’flap序列后的第一个核苷酸与核苷酸差异(表27中下划线的核苷酸)相匹配(所谓的“主探针”，例如具有SEQ ID NO：82的探针特异针对FATB-A1-EMS05))，和特异针对核苷酸差异上游的核苷酸的一种探针(所谓的“oligo”，例如具有SEQ ID NO：81的探针特异针对FATB-A1-EMS05和FATB-A1-WT之间的核苷酸差异的上游核苷酸)组成。后一引物的最后一个核苷酸可以与突变体中的核苷酸差异匹配，但该最后一个核苷酸也可以使用其它的核苷酸(如表27中粗体核苷酸所示)，只要当与靶DNA杂交时，所述主探针和oligo仍然能够形成单碱基重叠，产生被酶(ThirdWave Agbio)识别的特定侵入性结构(invasivestructure)。根据生产商(Third Wave Agbio)的规定，实施InvaderTM测定程序和数据解释。简而言之，表示为“flap1”和“flap2”的核苷酸序列代表5’“flap”序列，在InvaderTM测定的初级阶段，所述序列被从主探针上切除，并分别与FRETTM盒1和2中的序列互补，而不与靶突变或野生型序列互补。如果在初级阶段切除了主探针，且在次级阶段flap-1探针和/或flap-2-探针分别与FRETTM盒1和2杂交，则分别产生表示样品中存在突变或相应野生型靶FATB基因的信号。
-可选的，特异针对突变靶FA TB基因的探针(表27中表示为“5’flap1-x”)与特异针对内部对照基因的探针(表27中表示为“5’flap2-x”；对照基因表示为ENDO1)组合使用。如果在初级阶段切除了主探针，并在次级阶段flap1-探针和/或flap2-探针分别与FRETTM盒1和2杂交，则产生分别表示样品中存在突变靶FATB基因和内源性对照基因的信号。基于从FRETTM盒1产生的信号量相对于从FRETTM盒2产生的信号量，可以确定突变FATB等位基因的接合性状态(纯合的FATB等位基因产生的信号是杂合FATB等位基因的约2倍)。
表27
<110>拜尔生物科学公司(Bayer BioScience N.V.)
B·拉加(Laga，Benjamin)
B·登博尔(den Boer，Bart)
B·朗伯特(Lambert，Bart)
<120>包含突变脂酰-ACP硫酯酶等位基因的芸苔属植物
<130>BCS 07-2011
<160>102
<170>PatentIn版本3.3
<210>1
<211>1563
<212>DNA
<213>欧洲油菜(Brassica napus)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1560)
<223>在氨基酸91起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(490)..(492)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(590)..(723)
<220>
<221>misc_feature
<222>(611)..(613)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(683)..(685)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(798)..(911)
<220>
<221>misc_feature
<222>(850)..(852)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(981)..(1152)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1018)..(1020)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1243)..(1560)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1249)..(1251)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1267)..(1269)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1273)..(1275)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1378)..(1380)
<223>保守Cys
<400>1
atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct ttc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
ccc ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
ttc tcc ggc ctc tcc ccc act cca aac tcc tcc ggc agg atg aag gtt 144
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
35 40 45
aaa cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggt 192
Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly
50 55 60
ctc cct tct ggc tcg gtg aag cct gat aac gag acg tcc tca cag cat 240
Leu Pro Ser Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His
65 70 75 80
ccc gca gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg 288
Pro Ala Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctt ctt gct gca ata aca acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg 336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgc tct gac gtg att atg gat ccg 384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttt ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat 432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttc tct att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata 480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa acg gtt atg aat cat tta cag gtactgatta tgattatgat tatgattgta 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gttgcttgtt gttactggac aaagttaata tgtattgctg ttatggttat gatag gaa 592
Glu
acg gca ctc aac cat gtt aag act gct gga ctg ctt gga gat ggg ttt 640
Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe
170 175 180 185
ggt tct act cct gag atg gtt aag aag aac ttg att tgg gtt gtt act 688
Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr
190 195 200
cgt atg cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatt 733
Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
ctcaagcaac cctgagaatc actgcttcct ttgtcatttg cttattcaaa tatctgtctc 793
acag g gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga 840
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly
215 220 225
aag aac ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cga gat ggc aat act gga 888
Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly
230 235 240
gaa att tta aca aga gca tca ag gttagatttt tatttatcgg ttaggtatct 941
Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245 250
gaaaatttga gttactaatg caaaatatta tttttgcag t gtg tgg gtg atg atg 996
Val Trp Val Met Met
255
aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg 1044
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
gag ata gag cct tac ttt gtt aat tca gac cca gtc ctt gct gag gac 1092
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp
275 280 285
agc aga aag tta act aaa ctt gat gac aag act gct gac tat gtt cgt 1140
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
tct ggt ctc act gtaagtatgc atactttctc tatgtttcat caaagcctgt 1192
Ser Gly Leu Thr
305
aaacttctga gattcttaca gtttttattt ggtaatttaa acttttgcag ccg cgt 1248
Pro Arg
310
tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg aag tac atc 1296
Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile
315 320 325
ggg tgg ata ctg gag agt gca cct gtg ggg atg atg gag agt cag aag 1344
Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu Ser Gln Lys
330 335 340
ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg agg gac agt 1392
Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser
345 350 355
gtg ctt cag tcc ctc acc gcg gtt tcg ggc tgc gat gtt ggt agt ctt 1440
Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu
360 365 370
ggg aca gct ggt gaa gtg gaa tgt cag cac ctg ctc cgt ctc cag gat 1488
Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp
375 380 385 390
gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc aaa aca tca 1536
Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Lys Thr Ser
395 400 405
aca aca act tgg gac att aca ccg tga 1563
Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
410
<210>2
<211>414
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>2
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Phe
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
35 40 45
Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly
50 55 60
Leu Pro Ser Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His
65 70 75 80
Pro Ala Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly
325 330 335
Met Met Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>3
<211>1659
<212>DNA
<213>欧洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1656)
<223>在氨基酸91起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(490)..(492)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(584)..(717)
<220>
<221>misc_feature
<222>(605)..(607)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(677)..(679)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(812)..(925)
<220>
<221>misc_feature
<222>(864)..(866)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1059)..(1230)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1096)..(1098)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1309)..(1656)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1315)..(1317)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1333)..(1335)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1339)..(1341)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1444)..(1446)
<223>保守Cys
<400>3
atg gtg gct act tgc gct acg tcg tcg ttt ttt cat gtt cca tct tct 48
Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tcg ctt gat acg aat ggg aag ggg aac aga gtt ggg tcc act aat 96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
ttt gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aag 144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggc tct gta gag ata tca aag gct gac aac gag act tcg cag ccc 240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca cac gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agt atg 288
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctg ctt gct gct ata act acc att ttc ttg gca gcg gag aaa cag tgg 336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat cct 384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttt ggt tta ggg aga att gtt cag gat ggt ctt gtg ttc cgt cag aat 432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttt tcc att agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata 480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtc atg aat cat tta cag gtactgcttt gattgtggtt acactcacat 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gttgtcccaa tagatatatg ctcatgacaa gctcttatgc taatgacag gaa acg gcg 592
Glu Thr Ala
170
ctt aat cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggg tcc 640
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act cct gag atg ttt aag aag aat ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg 688
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gttagtctta 737
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
gcacttgact taaaatcatt ttgcatatta cagtgtgcgt agatcatttg cttattcaaa 797
tatctgactc acag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat act tgg gtt agt cag 848
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln
215 220 225
tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cgg gat tgc aat 896
Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn
230 235 240
act gga gaa att gta acg cga gca tca ag gtcagagttc ttatattttg 945
Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
245 250
gtttactcca gctattatcg ttttgctctc tgtttgtatt gtttcctctg ccattagttt 1005
gataattgag tctttatagt tgtatatgta tggcaatttt cttctttttg cag t ttg 1062
Leu
tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg tca aag att cct gaa 1110
Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu
255 260 265
gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg aac tct gat cct gtc 1158
Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val
270 275 280
att gcc gaa gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aag act gct 1206
Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala
285 290 295 300
gac tat gtt cgt tct ggt ctc act gtaagtacct tacctttcga caagcctgtc 1260
Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
305
aaaactcttg aggttctaat ggtttggtaa tgaacttttt tttggcag ccg agg tgg 1317
Pro Arg Trp
310
agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt aac aat gta aag tac att ggg 1365
Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly
315 320 325
tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg atg ctg gag agt cag aag ctg 1413
Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu
330 335 340
aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg aga gac agt gtg 1461
Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val
345 350 355
ctt cag tct ctc acc gca gtc tct gga tgt gat gtc ggt aac ctc ggg 1509
Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly
360 365 370 375
aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga 1557
Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln Hi s Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly
380 385 390
gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agc tcc cag aca gga gca 1605
Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Gln Thr Gly Ala
395 400 405
aca act tgg gga cac tac tac atc gta aac att ggt cct ttg gtt cct 1653
Thr Thr Trp Gly His Tyr Tyr Ile Val Asn Ile Gly Pro Leu Val Pro
410 415 420
ttg taa 1659
Leu
<210>4
<211>424
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>4
Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Gln Thr Gly Ala Thr Thr Trp Gly His Tyr Tyr Ile Val
405 410 415
Asn Ile Gly Pro Leu Val Pro Leu
420
<210>5
<211>1733
<212>DNA
<213>欧洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(507)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1730)
<223>在氨基酸92起始的成熟肽
<220>
<22l>misc_feature
<222>(493)..(495)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(740)..(873)
<220>
<221>misc_feature
<222>(761)..(763)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(833)..(835)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(947)..(1060)
<220>
<221>misc_feature
<222>(999)..(1001)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1141)..(1312)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1178)..(1180)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1413)..(1730)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1419)..(1421)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1437)..(1439)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1443)..(1445)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1548)..(1550)
<223>保守Cys
<400>5
atg gtg gcc acc tct gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac ccc aat ggc aaa acc aac aaa ctc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tcc gga ctc aac ccc aca cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa 144
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gcc caa gct cca tcc aag atc aac ggc aag aaa gtc tct ctg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg 240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa cac gca ccc aga acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc 288
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr PheIle Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gca gct gag aag cag 336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gat act aaa ccg aga cgc tcc gac atg att atg gat 384
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttt ggg tta ggg aga atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag 432
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aat ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gca tct 480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa act gtc atg aat cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
tttgatacta tagcttgacc cgcactgatg ttggttttta tatttttata aattatttag 587
tgacatatag atataggtta tttagatatt tctaggttcc tacgaaccta cccggactca 647
aaccctgtcc gtaaaattga gtttaatttt aaaccaaaaa aatccgatac ccgaaaaaac 707
cgatctgtat ctaactcttg tcctcatgac ag gaa acg gca ctc aac cat gtg 760
Glu Thr Ala Leu Asn His Val
170 175
aag tct gca gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct acg cct gag atg 808
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
gtt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt act cgt atg cag gtt gtc gtt 856
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
gat aaa tat cct act tg gtaagctctc ttgccactta accttaaaca 903
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
atatgcatga atcatttgct tattcaaatg tctgtttcac cag g gga gat gtt gtt 959
Gly Asp Val Val
215
gaa gta gat aca tgg gtc agt aag tct ggg aag aac ggt atg cgt cgt 1007
Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg
220 225 230
gat tgg cta gtt cgg gat tgc aat acc gga gaa atc tta aca cgt gca 1055
Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala
235 240 245 250
tca ag gttagcttct ttttgttttt ttgtttactc cagctattat ctgatgattg 1110
Ser Ser
agttataacc atctctatgt tacaaaacag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa 1162
Val Trp Val Met Met Asn Lys
255
ctg aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata 1210
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270 275
gag cct tac ttt gtg aac tct gac cca atc ctt gcc gag gac agc aga 1258
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg
280 285 290
aag tta aca aag cta gat gac aag act gct gac tat gtt cgc tct ggt 1306
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
295 300 305
ctc acc gtaagtataa atattcaact ctttatcttt tagcgtgtaa aactcttgag 1362
Leu Thr
agattcttat gagtttagat tcttatgagt ttggtgatga acttttgcag ccg aga 1418
Pro Arg
310
tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt aac aac gtg aag tac att 1466
Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile
315 320 325
ggt tgg ata ctc gag agt gct cca gta gag atg atg gag aag cat aag 1514
Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys
330 335 340
ctg aaa agc atg act ctg gag tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt 1562
Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser
345 350 355
gtg ctt cag tct ctc acc gcg gtt tcg gga tgc gat gtt ggt agc ctc 1610
Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu
360 365 370 375
ggg aca gct ggt gaa gtg gaa tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat 1658
Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp
380 385 390
gga gct gaa gtg gtg aag gga cga aca gtg tgg agt tcg aaa aca cca 1706
Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro
395 400 405
tca acg act tgg gac act aca tcg taa 1733
Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
410 415
<210>6
<211>415
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>6
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
<210>7
<211>1572
<212>DNA
<213>欧洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(498)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1569)
<223>在氨基酸89起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(484)..(486)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(579)..(712)
<220>
<221>misc_feature
<222>(610)..(612)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(672)..(674)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(791)..(904)
<220>
<221>misc_feature
<222>(843)..(845)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(995)..(1166)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1032)..(1034)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1252)..(1569)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1258)..(1260)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1276)..(1278)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1282)..(1284)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1387)..(1389)
<223>保守Cys
<400>7
atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
ccc ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
ttc tcc ggc ctc acc ccc acg ccg aac tcc gcc agg atg aag gtt aaa 144
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggc ctc 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
cct ggc tcg gtg gag atc ttg aag cct gat agc gag act tcg caa cca 240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg ctc ctc 288
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
gcc gcc atc acg acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg atg atg 336
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
ctc gac tgg aaa ccg agg cgt tct gac gtg att atg gat ccg ttt ggg 384
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat ttt tct 432
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata gaa acg 480
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
gtt atg aat cat tta cag gtactgatta tgattatgat tgtagtcgct 528
Val Met Asn His Leu Gln
165
tgttgttact gggcaaactt aaatatgtat tgctcttatg gttgtgatag gaa acg 584
Glu Thr
gca ctc aac cat gtt aag act gct ggg ctg ctt gga gat ggg ttt ggt 632
Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly
170 175 180
tct act cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtt act cgt 680
Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg
185 190 195 200
atg cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatt ctcaaacaac 732
Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
tctgagaatc actgcttcct ttgtgagtca tttgcttatt caaatatctg cctcatag g 791
gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga aag aac 839
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn
215 220 225
ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cga gat ggc aat act gga gag att 887
Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly Glu Ile
230 235 240
tta aca aga gca tca ag gttagatttt attttttggt ttacttgggt 934
Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245
tagatatctg ataattgagt tataatcatc tccgtgttgt gtaaactatt ctttttgcag 994
t gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct 1043
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro
250 255 260 265
gaa gag gtt cga ggg gag ata gag cct tac ttt gtt aac tca gac cca 1091
Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro
270 275 280
gtc ctt gcc gag gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aaa act 1139
Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr
285 290 295
gct gtc tat gtt cgt tct ggt ctc act gtaagtacaa atacttcact 1186
Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
ctatgtttca acaaagcctg taaatttttg agtctcttac aggtttggta atgaactttt 1246
tgcag ccg cgt tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg 1296
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val
310 315 320
aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gtg ggg atg atg gag 1344
Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu
325 330 335
agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgt ggg 1392
Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly
340 345 350
aga gac agt gtg ctc cag tcc ctc acc gcg gtt tcg ggc tgc gat atc 1440
Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Ile
355 360 365
ggt agc ctc ggg aca gcc ggt gaa gtg gaa tgt cag cat ctg ctc aga 1488
Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg
370 375 380 385
ctc cag gat gga gcc gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc 1536
Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser
390 395 400
aaa aca tca aca aca act tgg gac atc aca ccg tga 1572
Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>8
<211>412
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>8
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala
165 170 175
Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys
180 185 190
Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr
195 200 205
Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser
210 215 220
Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr
225 230 235 240
Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn Lys
245 250 255
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg
275 280 285
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly
290 295 300
Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn
305 310 315 320
Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met
325 330 335
Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys
340 345 350
Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp
355 360 365
Ile Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu
370 375 380
Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser
385 390 395 400
Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>9
<211>1770
<212>DNA
<213>欧洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1767)
<223>在氨基酸91起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(490)..(492)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(581)..(714)
<220>
<221>misc_feature
<222>(602)..(604)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(674)..(676)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(945)..(1058)
<220>
<221>misc_feature
<222>(997)..(999)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1190)..(1361)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1227)..(1229)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1447)..(1767)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1453)..(1455)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1471)..(1473)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1477)..(1479)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1582)..(1584)
<223>保守Cys
<400>9
atg gtg gct act tcc gct acg tcc tcg ttt ttt cat gtt cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tct ctt gat act aat ggg aag ggg aac aga gtt gcg tcc acg aac 96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Ala Ser Thr Asn
20 25 30
ttc gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aaa 144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggt tct gta gag ata tca aag tct gac aac gag act tcg cag ccc 240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccc gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg 288
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctt ctc gct gcc ata aca acc att ttc ttg gcg gct gag aaa cag tgg 336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccc agg cgt tct gat atg att atg gat cct 384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttc ggt tta ggg aga atc gtt cag gat ggt ctt gtc ttt cgt cag aat 432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttc tcc att agg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata 480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtt atg aat cat tta cag gtaggtacta ctttgattgt tatcacactt 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gtcaatagat atatatgctc atgacaagct cttatgctaa tgacag gaa acg gcc 589
Glu Thr Ala
170
cta aac cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggt tct 637
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act ccc gag atg ttt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg 685
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gtcagtctta 734
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
ccacttaact taaaatcatt atgctactgt ctctgagaat ccctggttct cgttgtgagt 794
tatccaaatt atcttgcata aacttgagta tgcaagttca tgctctcact tgctcatgtg 854
actaggacat tttgcaccct tagattacat gatgtgcttg catattacag tgtgcataga 914
tcattactta ttcaaatatc tgactaacag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat 966
Gly Asp Val Val Glu Val Asp
215 220
aca tgg gtt agt cag tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg ctg 1014
Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu
225 230 235
gtt cgg gat tgc aat act gga gaa att gta acg cga gca tca ag 1058
Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
240 245 250
gtcagagttc ttatgttttg gtttactgac tccagctatt atcattttgc tctctgtttg 1118
tattgtttgc tctgccatta gtttgataat agagacttta tatatgtatg gcaattttct 1178
tctttttgca g t ttg tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg 1226
Leu Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu
255 260
tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg 1274
Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val
265 270 275
aac tct gat cct gtc att gcc gaa gac agc aga aag tta acc aaa ctt 1322
Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu
280 285 290 295
gat gac aag act gct gac tat gtt cgt tcg ggt ctc act gtaagtaccc 1371
Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
tacctttcaa caacaagctt gtcaaaactc tcgaggttgg ttcttatgga ttggtaatga 1431
aactttttta ttcag ccg agg tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt 1482
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
310 315 320
aac aat gta aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg 1530
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
atg ctg gag agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg 1578
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
gag tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg gtc tct gga 1626
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
tgt gat gtc ggt aac ctc ggg aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat 1674
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
ttg ctt cgt ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag 1722
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
tgg agt tcc aag aca gaa gca aca act tgg gac act gct aca tcg taa 1770
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
405 4l0 415
<210>10
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<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>10
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Ala Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
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<213>欧洲油菜
<220>
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<220>
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atg gtg gcc acc tct gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac cct aat ggc aaa acc aac aaa ctc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tct gga ctc aac ccc ata cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa 144
Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gcc caa gct cca tcc aag atc aac ggc aat aat gtc tcc ttg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg 240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa cac gca ccc aga acg ttc atc aac cag cta cct gac tgg agc 288
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gct gct gag aaa cag 336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gac tcg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat 384
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttc ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag 432
Pro Phe Gly Leu Gly ArgIle Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aac ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct 480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa aca gtc atg aac cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
attgatacta gagcttgaca tgttggtttt tatcttttta taaattgttt agtgacattt 587
tcaaacatat agatataggt tatttagata tttctaggtt cctacaaacc tacccagact 647
caaaccccgt ccggaaattt ataatattaa taccgaacag agttttattt taaaccaaaa 707
aatcagttga cccgcacggg atgttggttt ttatctattt tatacattgt ttaaggacat 767
ttttaaacat ataaatatag gttatttaga tatttctagg ttcctacgaa cctacccgga 827
aatttataat acccgaacat agtttaattt ttaaaccaaa aatccaatac ccgaaaaaac 887
caatctgtga tatgcatgat ctaactcttg tcctcgtgac ag gaa acg gct ctc 941
Glu Thr Ala Leu
170
aac cat gtg aag tct gct gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct acc 989
Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr
175 180 185
cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt act cgt atg cag 1037
Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln
190 195 200 205
gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccctc ttagcactta 1083
Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
accttaaaac aatatgcatg aatcatttgc ttattcaaat gtctgcttca ccag g gga 1141
Gly
215
gat gtt gtt gaa gta gat aca tgg gtt agt aag tct ggg aag aat ggt 1189
Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly
220 225 230
atg cgt cgt gat tgg cta gtt cgg gat tgt aat act gga gaa att tta 1237
Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu
235 240 245
aca aga gca tca ag gttagcttct ttttgtttac tccagctatt atctgattat 1291
Thr Arg Ala Ser Ser
250
tgagttataa ccatctctgt gttgcaaaac ag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa 1345
Val Trp Val Met Met Asn Lys
255
gtg aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata 1393
Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
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gag cct tac ttt gtg aac tct gac cct atc ctt gcc gag gac agc aga 1441
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg
280 285 290
aag tta aca aaa cta gat gag aag act gct gac tat gtt cgc tct ggt 1489
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
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ctc acc gtaagtataa atatttgttt ttatctttca gcaagtgaga ttctgatggg 1545
Leu Thr
tttggtgatt atctaacttt tgcag ccg aga tgg agt gac ttg gat gtt aac 1597
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn
310 315
cag cat gtt aac aac gtg aag tac att ggt tgg ata ctc gag agt gct 1645
Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala
320 325 330
cca gtg gag atg atg gag aag cat aag ctg aaa agc atg act ctg gag 1693
Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu
335 340 345 350
tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg 1741
Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala
355 360 365
gtt tcg ggt tgc gat gtt ggt agc ctc ggg aca gct ggt gaa gtg gaa 1789
Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu
370 375 380
tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aag gga 1837
Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly
385 390 395
cga aca gtg tgg agt tcc aaa aca cca tca aca act tgg gac act aca 1885
Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr
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tcg taa 1891
Ser
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<212>PRT
<213>欧洲油菜
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Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
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Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
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Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
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Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
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Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp MetIle Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
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<212>DNA
<213>欧洲油菜
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atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
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cca ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
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ttc tcc ggc ctc tcc ccc act cca aac tcc tcc ggc agg atg aag gtt 144
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
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aaa cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggt 192
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Leu Pro Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His Pro
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gca gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg ctt 288
Ala Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu
85 90 95
ctt gct gca ata aca acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg atg 336
Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met
100 105 110
atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgc tct gac gtg att atg gat ccg ttt 384
Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe
115 120 125
ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat ttc 432
Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe
130 135 140
tct att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata gaa 480
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Glu
acg gca ctc aac cat gtt aag act gct gga ctg ctt gga gat ggg ttt 637
Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe
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Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr
185 190 195 200
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ctcaagcaac cctgagaatc actgcttcct ttgtcatttg cttattcaaa tatctgtctc 790
acag g gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga 837
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly
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aag aac ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cga gat ggc aat act gga 885
Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly
230 235 240
gaa att tta aca aga gca tca ag gttagatttt tatttatcgg ttaggtatct 938
Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245
gaaaatttga gttactaatg caaaatatta tttttgcag t gtg tgg gtg atg atg 993
Val Trp Val Met Met
255
aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg 1041
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
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gag ata gag cct tac ttt gtt aat tca gac cca gtc ctt gct gag gac 1089
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp
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agc aga aag tta act aaa ctt gat gac aag act gct gac tat gtt cgt 1137
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
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tct ggt ctc act gtaagtatgc atactttctc tatgt ttcat caaagcctgt 1189
Ser Gly Leu Thr
305
aaacttctga gattcttaca gtttttattt ggtaatttaa acttttgcag ccg cgt 1245
Pro Arg
tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg aag tac atc 1293
Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile
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ggg tgg ata ctg gag agt gca cct gtg ggg atg atg gag agt cag aag 1341
Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu Ser Gln Lys
330 335 340
ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg agg gac agt 1389
Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser
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ggg aca gct ggt gaa gtg gaa tgt cag cac ctg ctc cgt ctc cag gat 1485
Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp
375 380 385
gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc aaa aca tca 1533
Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Lys Thr Ser
390 395 400 405
aca aca act tgg gac att aca ccg tga 1560
Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
410
<210>14
<211>413
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>14
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Ser Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Met Lys Val
35 40 45
Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly
50 55 60
Leu Pro Gly Ser Val Lys Pro Asp Asn Glu Thr Ser Ser Gln His Pro
65 70 75 80
Ala Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu
85 90 95
Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met
100 105 110
Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe
115 120 125
Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe
130 135 140
Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu
145 150 155 160
Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr
165 170 175
Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys
180 185 190
Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys
195 200 205
Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln
210 215 220
Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn
225 230 235 240
Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn
245 250 255
Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu
260 265 270
Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser
275 280 285
Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser
290 295 300
Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn
305 310 315 320
Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met
325 330 335
Met Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu
340 345 350
Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys
355 360 365
Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu
370 375 380
Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp
385 390 395 400
Ser Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>15
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<212>DNA
<213>欧洲油菜
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atg gtg gct act tgc gct acg tcg tcg ttt ttt cat gtt cca tct tct 48
Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tcg ctt gat acg aat ggg aag ggg aac aga gtt ggg tcc act aat 96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
ttt gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aag 144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro LysIle Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggc tct gta gag ata tca aag gct gac aac gag act tcg cag ccc 240
Pro Gly Ser Val GluIle Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca cac gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agt atg 288
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctg ctt gct gct ata act acc att ttc ttg gca gcg gag aaa cag tgg 336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat cct 384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttt ggt tta ggg aga att gtt cag gat ggt ctt gtg ttc cgt cag aat 432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttt tcc att agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata 480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtc atg aat cat tta cag gtactgcttt gattgtggtt acactcacat 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gttgtcccaa tagatatatg ctcatgacaa gctcttatgc taatgacag gaa acg gcg 592
Glu Thr Ala
170
ctt aat cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggg tcc 640
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act cct gag atg ttt aag aag aat ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg 688
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gttagtctta 737
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
gcacttgact taaaatcatt ttgcatatta cagtgtgcgt agatcatttg cttattcaaa 797
tatctgactc acag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat act tgg gtt agt cag 848
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln
215 220 225
tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg cta gtt cgg gat tgc aat 896
Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn
230 235 240
act gga gaa att gta acg cga gca tca ag gtcagagttc ttatattttg 945
Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
245 250
gtttactcca gctattatcg ttttgctctc tgtttgtatt gtttcctctg ccattagttt 1005
gataattgag tctttatagt tgtatatgta tggcaatttt cttctttttg cag t ttg 1062
Leu
tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg tca aag att cct gaa 1110
Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu
255 260 265
gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg aac tct gat cct gtc 1158
Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val
270 275 280
att gcc gaa gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aag act gct 1206
Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala
285 290 295 300
gac tat gttcgt tct ggt ctc act gtaagtacct tacctttcga caagcctgtc 1260
Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
305
aaaactcttg aggttctaat ggtttggtaa tgaacttttt tttggcag ccg agg tgg 1317
Pro Arg Trp
310
agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt aac aat gta aag tac att ggg 1365
Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly
315 320 325
tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg atg ctg gag agt cag aag ctg 1413
Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu
330 335 340
aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgc ggg aga gac agt gtg 1461
Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val
345 350 355
ctt cag tct ctc acc gca gtc tct gga tgt gat gtc ggt aac ctc ggg 1509
Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly
360 365 370 375
aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga 1557
Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly
380 385 390
gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agc tcc aag aca gga gca 1605
Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser Lys Thr Gly Ala
395 400 405
aca act tgg gac act act aca tcg taa 1632
Thr Thr Trp Asp Thr Thr Thr Ser
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<213>欧洲油菜
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Met Val Ala Thr Cys Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Gly Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ala Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
8 590 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Lys Thr Gly Ala Thr Thr Trp Asp Thr Thr Thr Ser
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<213>欧洲油菜
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Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac ccc aat ggc aaa acc aac aaa gcc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Ala Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tcc gga ctc aac ccc aca cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa 144
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca tcc aag atc aac ggc aag aaa gtc tcc ttg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg 240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa aac gca ccc aga acg ttc atc aac cag cta cct gac tgg agc 288
Gln Gln Asn Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gca gct gag aag cag 336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gat act aaa ccg aga cgc tcc gac atg att atg gat 384
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttt ggg tta ggg aga atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag 432
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aat ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gca tct 480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa act gtc atg aat cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
tttgatacta tagcttgacc cgcactgatg ttggttttta tatttttata aattgtttag 587
tgacatatag atataggtta tttagatatt tctaggttcc tacgaaccta cccggactca 647
aaccctgtcc gtaaaattga gtttaatttt aaaccaaaaa aatccgatac ccgaaaaaac 707
cgatctgtat ctaactcttg tcctcatgac ag gaa acg gct ctc aac cat gtg 760
Glu Thr Ala Leu Asn His Val
170 175
aag tct gca gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct aca cct gag atg 808
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
gtt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtt act cgt atg cag gtt gta gtt 856
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
gat aaa tat cct act tg gtaagctctc ttgccactta accttaaaca 903
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
atatgcatga atcatttgct tattcaaatg tctgtttcac cag g gga gat gtt gtt 959
Gly Asp Val Val
215
gaa gta gat aca tgg gtc agt aag tct ggg aag aat ggt atg cgt cgt 1007
Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg
220 225 230
gat tgg cta gtt cgt gat tgc aat act gga gaa atc tta aca cgc gca 1055
Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala
235 240 245 250
tca ag gttagcttta ttttgttttt gtttactcca gctattatct gattattgag 1110
Ser Ser
ttataaccat ctctatgtta caaaacag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg 1163
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu
255 260
aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag 1211
Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu
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cct tac ttt gtg aac tct gac cca atc ctt gcc gag gac agc aga aag 1259
Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys
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tta aca aag cta gat gac aag act gct gac tat gtt cgc tct ggt ctc 1307
Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu
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acc gtaagtataa atattcaact ctttatcttt tagcgtgtaa aactcttgag 1360
Thr
agattcttat gagtttggtg atgaactttt gcag ccg aga tgg agt gac ttg gat 1415
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp
310 315
gtt aac cag cat gtt aac aac gtg aag tac att ggt tgg ata ctc gag 1463
Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu
320 325 330
agt gct cca gta gag atg atg gag aag cat aag ctg aaa agc atg act 1511
Ser Ala Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr
335 340 345
ctg gag tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc 1559
Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu
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acc gcg gtt tcg gga tgc gat gtt ggt agc ctc ggg aca gct ggt gaa 1607
Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu
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gtg gaa tgt cag cat ttg ctt cga cac cag gat gga gct gaa gtg gtg 1655
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aag gga cga aca gtg tgg agt tcg aaa aca cca tca acg act tgg gac 1703
Lys Gly Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp
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act aca tcg taa 1715
Thr Thr Ser
415
<210>18
<211>415
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>18
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Ala Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
Ser Gly Leu Asn Pro Thr Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Ser Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln Asn Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Thr Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg His Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
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<212>DNA
<213>欧洲油菜
<220>
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<220>
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<223>在氨基酸89起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
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<223>保守Met
<220>
<221>CDS
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<220>
<221>misc_feature
<222>(600)..(602)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(672)..(674)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(791)..(904)
<220>
<221>misc_feature
<222>(848)..(850)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(995)..(1166)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1032)..(1034)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1252)..(1569)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1258)..(1260)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1276)..(1278)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1282)..(1284)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1387)..(1389)
<223>保守Cys
<400>19
atg gtg gcc acc tca gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
ccc ctc gac ccc acc gca aaa acc aac aaa gtc acc acc tcc acc aac 96
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
ttc tcc ggc ctc aca ccc acg ccg aac tcc gcc agg atg aag gtt aaa 144
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gcc cca ccc aag atc aac ggc aag aga gtc ggc ctc 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
cct ggc tcg gtg gag atc ttg aag cct gat agc gag act tcg caa cca 240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccg agg acg ttc atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg ctc ctc 288
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
gcc gcc atc acg acc gtc ttc ttg gcg gct gag aag cag tgg atg atg 336
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
ctc gac tgg aaa ccg agg cgt tct gac gtg att atg gat ccg ttt ggg 384
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg ttc cgt cag aat ttt tct 432
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
att cgg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata gaa acg 480
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
gtt atg aat cat tta cag gtactgatta tgattatgat tgtagtcgct 528
Val Met Asn His Leu Gln
165
tgttgttact ggacaaactt aaatatgtat tgctcttatg gttgtgatag gaa acg 584
Glu Thr
gca ctc aac cat gtt aag act gct ggg ctg ctt gga gat ggg ttt ggt 632
Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly
170 175 180
tct act cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtt act cgt 680
Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg
185 190 195 200
atg cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatt ctcaaacaac 732
Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
tctgagaatc actgcttcct ttgtgagtca tttgcttatt caaatatctg cctcatag g 791
gga gat gtt gtg gaa gta gat aca tgg gtg agc cag tct gga aag aac 839
Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn
215 220 225
ggt atg cgt cgt gat tgg ctt gtt cgg gat ggc aat act gga gag att 887
Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr Gly Glu Ile
230 235 240
tta aca aga gca tca ag gttagatttt attttttggt ttacttgggt 934
Leu Thr Arg Ala Ser Ser
245
tagatatctg ataattgagt tataatcatc tccgtgttgt gtaaactatt ctttttgcag 994
t gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg aca aga aga tta tca aag att cct 1043
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro
250 255 260 265
gaa gag gtt cga ggg gag ata gag cct tac ttt gtt aac tca gac cca 1091
Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro
270 275 280
gtc ctt gcc gag gac agc aga aag tta aca aaa ctt gat gac aaa act 1139
Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr
285 290 295
gct gtc tat gtt cgt tct ggt ctc act gtaagtacaa atacttcact 1186
Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
ctatgtttca acaaagcctg taaatttttg agtctcttac aggtttggta atgaactttt 1246
tgcag ccg cgt tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cac gtt aac aat gtg 1296
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val
310 315 320
aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gtg ggg atg atg gag 1344
Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met Glu
325 330 335
agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg gag tgt ggg 1392
Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly
340 345 350
aga gac agt gtg ctc cag tcc ctc acc gcg gtt tcg ggc tgc gat atc 1440
Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp Ile
355 360 365
ggt agc ctc ggg aca gcc ggt gaa gtg gaa tgt cag cat ctg ctc aga 1488
Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu Arg
370 375 380 385
ctc cag gat gga gcc gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg agt tcc 1536
Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser Ser
390 395 400
aaa aca tca aca aca act tgg gac atc aca ccg tga 1572
Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>20
<211>412
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>20
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Thr Ala Lys Thr Asn Lys Val Thr Thr Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ser Gly Leu Thr Pro Thr Pro Asn Ser Ala Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Arg Val Gly Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Leu Lys Pro Asp Ser Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Val Ile Met Asp Pro Phe Gly
115 120 125
Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala
165 170 175
Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Val Lys Lys
180 185 190
Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr
195 200 205
Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser
210 215 220
Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Gly Asn Thr
225 230 235 240
Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn Lys
245 250 255
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg
275 280 285
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Val Tyr Val Arg Ser Gly
290 295 300
Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn
305 310 315 320
Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Met Met
325 330 335
Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys
340 345 350
Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Cys Asp
355 360 365
Ile Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His Leu Leu
370 375 380
Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser
385 390 395 400
Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Trp Asp Ile Thr Pro
405 410
<210>21
<211>1770
<212>DNA
<213>欧洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(504)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1767)
<223>在氨基酸91起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(490)..(492)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(581)..(714)
<220>
<221>misc_feature
<222>(602)..(604)
<223>保守Lys
<220>
<221>mi sc_feature
<222>(674)..(676)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(945)..(1058)
<220>
<221>misc_feature
<222>(997)..(999)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1190)..(1361)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1227)..(1229)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1447)..(1767)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1453)..(1455)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1471)..(1473)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1477)..(1479)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1582)..(1584)
<223>保守Cys
<400>21
atg gtg gct act tcc gct acg tcc tcg ttt ttt cat gtt cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
tcc tct ctt gat act aat ggg aag ggg aac aga gtt gcg tcc acg aac 96
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg ValAla Ser Thr Asn
20 25 30
ttc gct gga ctt aac tca acg cca agc tct ggg agg atg aag gtt aaa 144
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gct cag gct cca ccc aag atc aac ggg aag aaa gct aac ttg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
cct ggt tct gta gag ata tca aag tct gac aac gag act tcg cag ccc 240
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
gca ccc gca ccg agg acg ttt atc aac cag ctg cct gac tgg agc atg 288
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
ctt ctc gct gcc ata aca acc att ttc ttg gcg gct gag aaa cag tgg 336
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
atg atg ctt gac tgg aaa ccc agg cgt tct gat atg att atg gat cct 384
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
ttc ggt tta ggg aga atc gtt cag gat ggt ctt gtc ttt cgt cag aat 432
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
ttc tcc att agg tct tat gag ata ggt gct gat cgc tct gcg tct ata 480
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
gaa act gtt atg aat cat tta cag gtaggtacta ctttgattgt tatcacactt 534
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
gtcaatagat atatatgctc atgacaagct cttatgctaa tgacag gaa acg gcc 589
Glu Thr Ala
170
cta aac cat gtg aag tct gcc gga ctg ctg gaa aat ggg ttt ggt tct 637
Leu Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser
175 180 185
act ccc gag atg ttt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt gct cgt atg 685
Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met
190 195 200
cag gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccatt gtcagtctta 734
Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
205 210
ccacttaact taaaatcatt atgctactgt ctctgagaat ccctggttct cgttgtgagt 794
tatccaaatt atcttgcata aacttgagta tgcaagttca tgctctcact tgctcatgtg 854
actaggacat tttgcaccct tagattacat gatgtgcttg catattacag tgtgcataga 914
tcattactta ttcaaatatc tgactaacag g gga gat gtt gtg gaa gtg gat 966
Gly Asp Val Val Glu Val Asp
215 220
aca tgg gtt agt cag tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat tgg ctg 1014
Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu
225 230 235
gtt cgg gat tgc aat act gga gaa att gta acg cga gca tca ag 1058
Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser
240 245 250
gtcagagttc ttatgttttg gtttactgac tccagctatt atcattttgc tctctgtttg 1118
tattgtttgc tctgccatta gtttgataat agagacttta tatatgtatg gcaattttct 1178
tctttttgca g t ttg tgg gtg atg atg aat aaa ctc aca agg aga ttg 1226
Leu Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu
255 260
tca aag att cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg 1274
Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val
265 270 275
aac tct gat cct gtc att gcc gaa gac agc aga aag tta acc aaa ctt 1322
Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu
280 285 290 295
gat gac aag act gct gac tat gtt cgt tcg ggt ctc act gtaagtaccc 1371
Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
tacctttcaa caacaagctt gtcaaaactc tcgaggttgg ttcttatgga ttggtaatga 1431
aactttttta ttcag ccg agg tgg agt gac ttg gat gtt aac cag cat gtt 1482
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
310 315 320
aac aat gta aag tac atc ggg tgg ata ctg gag agt gct cca gca ggg 1530
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
atg ctg gag agt cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgc agg 1578
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
gag tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg gtc tct gga 1626
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
tgt gat gtc ggt aac ctc ggg aca gcc ggg gaa gtg gag tgt cag cat 1674
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
ttg ctt cgt ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aga gga aga aca gag 1722
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
tgg agt tcc aag aca gaa gca aca act tgg gac act gct aca tcg taa 1770
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
405 410 415
<210>22
<211>415
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>22
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe His Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ser Leu Asp Thr Asn Gly Lys Gly Asn Arg Val Ala Ser Thr Asn
20 25 30
Phe Ala Gly Leu Asn Ser Thr Pro Ser Ser Gly Arg Met Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Ala Asn Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val Glu Ile Ser Lys Ser Asp Asn Glu Thr Ser Gln Pro
65 70 75 80
Ala Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met
85 90 95
Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp
100 105 110
Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp Pro
115 120 125
Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn
130 135 140
Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile
145 150 155 160
Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Leu Leu Glu Asn Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe
180 185 190
Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Ala Arg Met Gln Val Val Val Asp
195 200 205
Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser
210 215 220
Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys
225 230 235 240
Asn Thr Gly Glu Ile Val Thr Arg Ala Ser Ser Leu Trp Val Met Met
245 250 255
Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly
260 265 270
Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Ile Ala Glu Asp
275 280 285
Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg
290 295 300
Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ala Gly
325 330 335
Met Leu Glu Ser Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg
340 345 350
Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly
355 360 365
Cys Asp Val Gly Asn Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln His
370 375 380
Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu
385 390 395 400
Trp Ser Ser Lys Thr Glu Ala Thr Thr Trp Asp Thr Ala Thr Ser
405 410 415
<210>23
<211>1892
<212>DNA
<213>欧洲油菜
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(507)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(1)..(1889)
<223>在氨基酸92起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(493)..(495)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(931)..(1064)
<220>
<221>misc_feature
<222>(952)..(954)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(1024)..(1026)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(1139)..(1252)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1191)..(1193)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1325)..(1496)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1362)..(1364)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(1572)..(1889)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1578)..(1580)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(1596)..(1598)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(1602)..(1604)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(1707)..(1709)
<223>保守Cys
<400>23
atg gtg gcc acc tct gct aca tcc tca ttc ttc cct ctc cca tct tcc 48
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
tct ctc gac cct aat ggc aaa acc aac aaa ctc acc tcc acc aac ttc 96
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
tct gga ctc aac ccc ata cca aac tct tcc ggc agg tta aag gtc aaa 144
Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
cca aac gcc caa gct cca tcc aag atc aac ggc aat aat gtc tcc ttg 192
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
50 55 60
cca ggc tca gta cac atc gta aag act gat aat aac cac gat ctc tcg 240
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
caa caa cac gca ccc aga acg ttc atc aac cag cta cct gac tgg agc 288
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
atg ctt ctc gcc gcc atc aca acg gtc ttc tta gct gct gag aaa cag 336
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
tgg atg atg ctt gac tcg aaa ccg agg cgt tct gat atg att atg gat 384
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
ccg ttc ggg tta ggg agg atc gtt cag gat ggg ctt gtg tac cgt cag 432
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
aac ttc gat atc agg tct tat gaa ata ggt gct gat cgc tct gcg tct 480
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
ata gaa aca gtc atg aac cac tta cag gtatattaca atcacactcg 527
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
165
attgatacta gagcttgaca tgttggtttt tatcttttta taaattgttt agtgacattt 587
tcaaacatat agatataggt tatttagata tttctaggtt cctacaaacc tacccagact 647
caaaccccgt ccggaaattt ataatattaa taccgaacag agttttattt taaaccaaaa 707
aatcagttga cccgcacggg atgttggttt ttatctattt tatacattgt ttaaggacat 767
ttttaaacat ataaatatag gttatttaga tatttctagg ttcctacgaa cctacccgga 827
aatttataat acccgaacat agtttaattt ttaaaccaaa aaatccaata cccgaaaaaa 887
ccaatctgtg atatgcatga tctaactctt gtcctcgtga cag gaa acg gct ctc 942
Glu Thr Ala Leu
170
aac cat gtg aag tct gct gga ctg ctg gga gat ggg ttt ggt tct acc 990
Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr
175 180 185
cct gag atg gtt aag aag aac ttg ata tgg gtc gtt act cgt atg cag 1038
Pro Glu Met Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln
190 195 200 205
gtt gtc gtt gat aaa tat cct act tg gtaagccctc ttagcactta 1084
Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
210
accttaaaac aatatgcatg aatcatttgc ttattcaaat gtctgcttca ccag g gga 1142
Gly
215
gat gtt gtt gaa gta gat aca tgg gtt agt aag tct ggg aag aat ggt 1190
Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly
220 225 230
atg cgt cgt gat tgg ctt gtt cgg gat tgt aat act gga gaa att tta 1238
Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu
235 240 245
aca aga gca tca ag gttagcttct ttttgtttac tccagctatt atctgattat 1292
Thr Arg Ala Ser Ser
250
tgagttataa ccatctctgt gttgcaaaac ag t gtg tgg gtg atg atg aat aaa 1346
Val Trp Val Met Met Asn Lys
255
gtg aca agg aga tta tca aag ctt cct gaa gag gtt cga ggg gaa ata 1394
Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270 275
gag cct tac ttt gtg aac tct gac cct atc ctt gcc gag gac agc aga 1442
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu Asp Ser Arg
280 285 290
aag tta aca aaa cta gat gag aag act gct gac tat gtt cgc tct ggt 1490
Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
295 300 305
ctc acc gtaagtataa atatttgttt ttatctttca gcaagtgaga ttctgatggg 1546
Leu Thr
tttggtgatt atctaacttt tgcag ccg aga tgg agt gac ttg gat gtt aac 1598
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn
310 315
cag cat gtt aac aac gtg aag tac att ggt tgg ata ctc gag agt gct 1646
Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala
320 325 330
cca gtg gag atg atg gag aag cat aag ctg aaa agc atg act ctg gag 1694
Pro Val Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu
335 340 345 350
tat agg agg gaa tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tct ctc acc gcg 1742
Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala
355 360 365
gtt tcg ggt tgc gat gtt ggt agc ctc ggg aca gct ggt gaa gtg gaa 1790
Val Ser Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu
370 375 380
tgt cag cat ttg ctt cga ctc cag gat gga gct gaa gtg gtg aag gga 1838
Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly
385 390 395
cga aca gtg tgg agt tcc aaa aca cca tca aca act tgg gac act aca 1886
Arg Thr Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr
400 405 410
tcg taa 1892
Ser
415
<210>24
<211>415
<212>PRT
<213>欧洲油菜
<400>24
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Leu Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Thr Asn Lys Leu Thr Ser Thr Asn Phe
20 25 30
Ser Gly Leu Asn Pro Ile Pro Asn Ser Ser Gly Arg Leu Lys Val Lys
35 40 45
Pro Asn Ala Gln Ala Pro Ser Lys Ile Asn Gly Asn Asn Val Ser Leu
50 55 60
Pro Gly Ser Val His Ile Val Lys Thr Asp Asn Asn His Asp Leu Ser
65 70 75 80
Gln Gln His Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser
85 90 95
Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Val Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln
100 105 110
Trp Met Met Leu Asp Ser Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Ile Met Asp
115 120 125
Pro Phe Gly Leu Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Tyr Arg Gln
130 135 140
Asn Phe Asp Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser
145 150 155 160
Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val
165 170 175
Lys Ser Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met
180 185 190
Val Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val
195 200 205
Asp Lys Tyr Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val
210 215 220
Ser Lys Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp
225 230 235 240
Cys Asn Thr Gly Glu Ile Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met
245 250 255
Met Asn Lys Val Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg
260 265 270
Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Ile Leu Ala Glu
275 280 285
Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Leu Asp Glu Lys Thr Ala Asp Tyr Val
290 295 300
Arg Ser Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His
305 310 315 320
Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val
325 330 335
Glu Met Met Glu Lys His Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg
340 345 350
Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser
355 360 365
Gly Cys Asp Val Gly Ser Leu Gly Thr Ala Gly Glu Val Glu Cys Gln
370 375 380
His Leu Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Lys Gly Arg Thr
385 390 395 400
Val Trp Ser Ser Lys Thr Pro Ser Thr Thr Trp Asp Thr Thr Ser
405 410 415
<210>25
<211>487
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>5’AtFATB1探针
<400>25
gaactttcat caaccagtta cctgactgga gcatgcttct tgctgctata actacgattt 60
tcttagcggc tgagaaacag tggatgatgc ttgattggaa acctaggcgt tctgacatgc 120
tggtggatcc ttttggtata gggagaattg ttcaggatgg ccttgtgttc cgtcagaatt 180
tttctattag gtcatatgaa ataggtgctg atcgctctgc atctatagaa accgtcatga 240
atcatctgca ggtaccattt gattatgatt acggttacct gttgtcactg gtttaattga 300
tatgtatgaa caagctctta tgctcatgac aggaaacggc gcttaatcat gttaagactg 360
ctggattgct tggagatggg tttggctcta cacctgagat gtttaagaag gacttgatat 420
gggttgtcac tcgtatgcag gttgtggttg ataaatatcc tacttggtaa gctatcctct 480
tgcataa 487
<210>26
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-14
<400>26
gaactttcat caaccagtta cc 22
<210>27
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-15
<400>27
ttatgcaaga ggatagctta cc 22
<210>28
<211>352
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>3’AtFATB1探针
<400>28
cagtgtgtgg gtgatgatga ataaactgac aaggagattg tcaaagattc ctgaagaggt 60
tcgaggggaa atagagcctt attttgtgaa ttctgatcct gtccttgccg aggacagcag 120
aaagttaaca aaaattgatg acaagactgc tgactatgtt cgatctggtc tcactgtaag 180
tatctagtat ttactgctgt atgtttcaac aaacctttga ccagcttgta agactctcta 240
atggcttggt aatgaacatt ttcagcctcg atggagtgac ctagatgtta accagcatgt 300
gaataatgta aagtacattg ggtggatcct ggagagtgct ccagtgggaa ta 352
<210>29
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-16
<400>29
cagtgtgtgg gtgatgatga 20
<210>30
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>寡核苷酸引物KVA05-17
<400>30
tattcccact ggagcactct 20
<210>31
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1(SOSR)的正向引物
<400>31
ctgataacga gacgtcctca c 21
<210>32
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1(SORS)的反向引物
<400>32
catcctggag acggagcagg 20
<210>33
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2(SOSR)的正向引物
<400>33
ctgcctgact ggagtatgct g 21
<210>34
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2(SOSR)的反向引物
<400>34
gttgttgctc ctgtcttgga g 21
<210>35
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3(SOSR)的正向引物
<400>35
gcagtggatg atgcttgata c 21
<210>36
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3(SOSR)的反向引物
<400>36
caagtcgttg atggtgtttt c 21
<210>37
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1(SOSR)的正向引物
<400>37
ctgcctgact ggagcatgct c 21
<210>38
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1(SOSR)的反向引物
<400>38
gttcttcctc tcaccacttc g 21
<210>39
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2(SOSR)的正向引物
<400>39
atcgttcagg atggtcttgt c 21
<210>40
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2(SOSR)的反向引物
<400>40
gcagtcttgt catcaagttt g 21
<210>41
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3(SOSR)的正向引物
<400>41
acagtggatg atgcttgact c 21
<210>42
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3(SOSR)的反向引物
<400>42
cgaacatagt cagcagtctt c 21
<210>43
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1中的缺失突变的反向引物
<400>43
cagtcttaac atggttgagt g 21
<210>44
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2中的缺失突变的正向引物
<400>44
catgttccat cttcttcctc g 21
<210>45
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2中的缺失突变的反向引物
<400>45
tattgggaca acatgtgagt g 21
<210>46
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3中的缺失突变的反向引物
<400>46
ttcttcttaa ccatctcagg t 21
<210>47
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1中的缺失突变的反向引物
<400>47
ccaaacccat ctccaagcag c 21
<210>48
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2中的缺失突变的反向引物
<400>48
taactcacaa cgagaaccag g 21
<210>49
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3中的缺失突变的反向引物
<400>49
ctttgataat ctccttgtca c 21
<210>50
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1-EMS05的正向寡核苷酸
<400>50
ggcggctgag aagcagtgaa ta 22
<210>51
<211>22
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1的正向寡核苷酸
<400>51
ggcggctgag aagcagtgga tg 22
<210>52
<211>19
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于FATB-A1-EMS05和-A1的反向寡核苷酸
<400>52
ggactgaagc acactgtcc 19
<210>53
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1-EMS06的正向寡核苷酸
<400>53
cagtggatga tgcttgactg a 21
<210>54
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1的正向寡核苷酸
<400>54
cagtggatga tgcttgactg g 21
<210>55
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1-EMS06和-A1的反向寡核苷酸
<400>55
gcatacgagt aacaacccaa 20
<210>56
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS05的反向寡核苷酸
<400>56
agcagcaagc agcatacttc 20
<210>57
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2的反向寡核苷酸
<400>57
tagcagcaag cagcatactc 20
<210>58
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS05和-A2的正向寡核苷酸
<400>58
gagttgggtc cactaatttt g 21
<210>59
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS01的反向寡核苷酸
<400>59
gagttgggtc cactaatttt g 21
<210>60
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2的反向寡核苷酸
<400>60
cggaacacaa gaccatccta 20
<210>61
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS01和-A2的正向寡核苷酸
<400>61
cggaacacaa gaccatcctg 20
<210>62
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3-EMS01的反向寡核苷酸
<400>62
tatttatcaa ctacaaccta 20
<210>63
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3的反向寡核苷酸
<400>63
tatttatcaa ctacaacctg 20
<210>64
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3-EMS01和-A3的正向寡核苷酸
<400>64
caatggcaaa accaacaaag c 21
<210>65
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1-EMS05的正向寡核苷酸
<400>65
gttaagaaga acttgatatg a 21
<210>66
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1的正向寡核苷酸
<400>66
gttaagaaga acttgatatg g 21
<210>67
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1-EMS05、-C1-EMS04和-C1的反向寡核苷酸
<400>67
gttcttcctc tcaccacttc g 21
<210>68
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1-EMS04的正向寡核苷酸
<400>68
cggttatgaa tcatttacaa 20
<210>69
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1的正向寡核苷酸
<400>69
cggttatgaa tcatttacag 20
<210>70
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2-EMS02的正向寡核苷酸
<400>70
gtctgacaac gagacttcgt 20
<210>71
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2的正向寡核苷酸
<400>71
gtctgacaac gagacttcgc 20
<210>72
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2-EMS02和-C2的反向寡核苷酸
<400>72
cagtattgca atcccgaacc 20
<210>73
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2-EMS03的正向寡核苷酸
<400>73
tggcggctga gaaacagtga 20
<210>74
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2的正向寡核苷酸
<400>74
tggcggctga gaaacagtgg 20
<210>75
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2-EMS03和-C2的反向寡核苷酸
<400>75
agggtactta cagtgagacc c 21
<210>76
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3-EMS02的正向寡核苷酸
<400>76
cagtcatgaa ccacttacag a 21
<210>77
<211>21
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3的正向寡核苷酸
<400>77
cagtcatgaa ccacttacag g 21
<210>78
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3-EMS02和-C3的反向寡核苷酸
<400>78
caacctgcat acgagtaacg 20
<210>79
<211>2864
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<220>
<221>CDS
<222>(501)..(998)
<220>
<221>mat_peptide
<222>(501)..(2361)
<223>在氨基酸89起始的成熟肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(984)..(986)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1080)..(1213)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1101)..(1103)
<223>保守Lys
<220>
<221>misc_feature
<222>(1173)..(1175)
<223>保守Val
<220>
<221>CDS
<222>(1441)..(1554)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1493)..(1495)
<223>保守Met
<220>
<221>CDS
<222>(1782)..(1953)
<220>
<221>misc_feature
<222>(1819)..(1821)
<223>保守Ser
<220>
<221>CDS
<222>(2044)..(2361)
<220>
<221>misc_feature
<222>(2050)..(2052)
<223>保守Trp
<220>
<221>misc_feature
<222>(2068)..(2070)
<223>保守Asn
<220>
<221>misc_feature
<222>(2074)..(2076)
<223>保守His
<220>
<221>misc_feature
<222>(2179)..(2181)
<223>保守Cys
<400>79
acaagttttt gtttttcttt tgcgtttcta cgatctggtt ttaccggctt tagctttttc 60
tcgcttctgt tctttgttgt tttgtatttc agatctggtg ttttttttct tacctgcatc 120
aaattggttt ctaccaaaac ttcggaaacc tcttttggca aatgttgaat ctttgaatac 180
aatgacgatt tacataatag tctcagtggc cgaactggat tatcttacaa tttacgcaat 240
aacaaaaagt tttttttttt tttttttttt tgtgtgtgtg tgtggtgtgt tgaagatttt 300
tagtgtttgt ttacttcgtt tatggaagtc cttttcctct tctgccattt ttgtagttaa 360
ctacaaatta tacctacttt aggaagatcc tcctgctagt agctaaaaga tgtagcattt 420
attttattat cactcacttg agctaacttt tttcgatctt tatttggtgg cagtgtcttt 480
gaacgcttca tctcctcgtc atg gtg gcc acc tct gct acg tcg tca ttc ttt 533
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe
1 5 10
cct gta cca tct tct tca ctt gat cct aat gga aaa ggc aat aag att 581
Pro Val Pro Ser Ser Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Gly Asn Lys Ile
15 20 25
ggg tct acg aat ctt gct gga ctc aat tct gca cct aac tct ggt agg 629
Gly Ser Thr Asn Leu Ala Gly Leu Asn Ser Ala Pro Asn Ser Gly Arg
30 35 40
atg aag gtt aaa cca aac gct cag gct cca cct aag att aat ggg aaa 677
Met Lys Val Lys Pro Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys
45 50 55
aag gtt ggt ttg cct ggt tct gta gat att gta agg act gat acc gag 725
Lys Val Gly Leu Pro Gly Ser Val Asp Ile Val Arg Thr Asp Thr Glu
60 65 70 75
acc tca tca cac cct gcg ccg aga act ttc atc aac cag tta cct gac 773
Thr Ser Ser His Pro Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp
80 85 90
tgg agc atg ctt ctt gct gct ata act acg att ttc tta gcg gct gag 821
Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu
95 100 105
aaa cag tgg atg atg ctt gat tgg aaa cct agg cgt tct gac atg ctg 869
Lys Gln Trp Met Met Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Leu
110 115 120
gtg gat cct ttt ggt ata ggg aga att gtt cag gat ggc ctt gtg ttc 917
Val Asp Pro Phe Gly Ile Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe
125 130 135
cgt cag aat ttt tct att agg tca tat gaa ata ggt gct gat cgc tct 965
Arg Gln Asn Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser
140 145 150 155
gca tct ata gaa acc gtc atg aat cat ctg cag gtaccatttg attatgatta 1018
Ala Ser Ile Glu Thr Val Met Asn His Leu Gln
160 165
cggttacctg ttgtcactgg tttaattgat atgtatgaac aagctcttat gctcatgaca 1078
g gaa acg gcg ctt aat cat gtt aag act gct gga ttg ctt gga gat ggg 1127
Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly
170 175 180
ttt ggc tct aca cct gag atg ttt aag aag aac ttg ata tgg gtt gtc 1175
Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys Asn Leu Ile Trp Val Val
185 190 195
act cgt atg cag gtt gtg gtt gat aaa tat cct act tg gtaagctatc 1223
Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr Pro Thr Trp
200 205 210
ctcttgcata aacctggttc tgcaggttca tgctctcact ctttttaacc aggtttggga 1283
aaaatgatgt gtatttcgtt ttttcagttg atactgcttt tacagtacga gatatatgct 1343
catatgacta atgacttctt gcaccctgaa ttatatgctc tgcatgcata ttatattgca 1403
tcataactca tttgcttatt caatatatgc ctcacag g gga gat gtt gtt gaa 1456
Gly Asp Val Val Glu
215
gta gac acc tgg gtc agt cag tct gga aag aat ggt atg cgt cgt gat 1504
Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp
220 225 230
tgg cta gtt cgg gac tgt aat act gga gaa acc tta aca cga gca tca 1552
Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr Gly Glu Thr Leu Thr Arg Ala Ser
235 240 245
ag gttagatttt cttttggtat atttataagt tattctcatt ttcttcatct 1604
Ser
gatcattcat tggtctttct gatgaagata cctgatgtct ttactctctt tttatagtgt 1664
ttgctctatc atcaattaaa caaaaaacta cacaagttta tgtaatgaat aattaggaat 1724
tttttggtct catgggttag ctatttgaca gatgtattgc aaaatattat cttgcagt 1782
gtg tgg gtg atg atg aat aaa ctg aca agg aga ttg tca aag att cct 1830
Val Trp Val Met Met Asn Lys Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro
250 255 260 265
gaa gag gtt cga ggg gaa ata gag cct tat ttt gtg aat tct gat cct 1878
Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro
270 275 280
gtc ctt gcc gag gac agc aga aag tta aca aaa att gat gac aag act 1926
Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg Lys Leu Thr Lys Ile Asp Asp Lys Thr
285 290 295
gct gac tat gtt cga tct ggt ctc act gtaagtatct agtatttact 1973
Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly Leu Thr
300 305
gctgtatgtt tcaacaaacc tttgaccagc ttgtaagact ctctaatggc ttggtaatga 2033
acattttcag cct cga tgg agt gac cta gat gtt aac cag cat gtg aat 2082
Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn
310 315
aat gta aag tac att ggg tgg atc ctg gag agt gct cca gtg gga ata 2130
Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Ile
320 325 330 335
atg gag agg cag aag ctg aaa agc atg act ctg gag tat cgg agg gaa 2178
Met Glu Arg Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu
340 345 350
tgc ggg aga gac agt gtg ctt cag tcc ctc act gca gtt acg ggt tgc 2226
Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Thr Gly Cys
355 360 365
gat atc ggt aac ctg gca aca gcg ggg gat gtg gaa tgt cag cat ttg 2274
Asp Ile Gly Asn Leu Ala Thr Ala Gly Asp Val Glu Cys Gln His Leu
370 375 380
ctc cga ctc cag gat gga gcg gaa gtg gtg aga gga aga aca gag tgg 2322
Leu Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp
385 390 395
agt agt aaa aca cca aca aca act tgg gga act gca ccg taagaaaaag 2371
Ser Ser Lys Thr Pro Thr Thr Thr Trp Gly Thr Ala Pro
400 405 410
aaaacacaac aacaatggct catttgaatc cccttgtaac tatatctgct actaccacct 2431
tgcttgcttg caaccaccac caccaccacc accatttcat gtcctcctcc tcacaaaagt 2491
ttcggccacc aaccctttgt atatttcttt ttttggttct tcttcttttt ttattcgatg 2551
gagatttatt atatttattt aatctttcta tttatttttt tgcttaatgg gaaatgggtg 2611
tcgtgtatca ttacgaattc tgatgttatg taacccatgt gccagcggaa gacaaaggca 2671
tcaactctct cttatcctaa atttattgta ctttgttgag ttttgtagtt gtttccagct 2731
aaacaagcac gtggacgatc cttgtaatga atttgtatga atgtgatgcc ttgtacctgt 2791
aaatttgatt gaaaggctat ttaataaaca cgaacaacca aaacggtttg tccaaacaat 2851
aaagccatcg cat 2864
<210>80
<211>412
<212>PRT
<213>拟南芥
<400>80
Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Val Pro Ser Ser
1 5 10 15
Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Gly Asn Lys Ile Gly Ser Thr Asn Leu
20 25 30
Ala Gly Leu Asn Ser Ala Pro Asn Ser Gly Arg Met Lys Val Lys Pro
35 40 45
Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Gly Leu Pro
50 55 60
Gly Ser Val Asp Ile Val Arg Thr Asp Thr Glu Thr Ser Ser His Pro
65 70 75 80
Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu
85 90 95
Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met
100 105 110
Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Leu Val Asp Pro Phe Gly
115 120 125
Ile Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser
130 135 140
Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr
145 150 155 160
Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala
165 170 175
Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys
180 185 190
Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr
195 200 205
Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser
210 215 220
Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr
225 230 235 240
Gly Glu Thr Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn Lys
245 250 255
Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile
260 265 270
Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg
275 280 285
Lys Leu Thr Lys Ile Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly
290 295 300
Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn
305 310 315 320
Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Ile Met
325 330 335
Glu Arg Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys
340 345 350
Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Thr Gly Cys Asp
355 360 365
Ile Gly Asn Leu Ala Thr Ala Gly Asp Val Glu Cys Gln His Leu Leu
370 375 380
Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser
385 390 395 400
Ser Lys Thr Pro Thr Thr Thr Trp Gly Thr Ala Pro
405 410
<210>81
<211>28
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1-EMS05的寡核苷酸
<400>81
gcgcctcggt ttccagtcaa gcatcatc 28
<210>82
<211>16
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1-EMS05的寡核苷酸
<400>82
tcactgcttc tcagcc 16
<210>83
<211>32
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1-EMS06的寡核苷酸
<400>83
gatccataat cacgtcagag cgcctcggtt tc 32
<210>84
<211>17
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A1-EMS06的寡核苷酸
<400>84
tcagtcaagc atcatcc 17
<210>85
<211>40
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS01的寡核苷酸
<400>85
acctaatgga aaaattctga cggaacacaa gaccatcctt 40
<210>86
<211>20
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS01的寡核苷酸
<400>86
aaacaattct ccctaaacca 20
<210>87
<211>40
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS05的寡核苷酸
<400>87
tgccaagaaa atggtagtta tagcagcaag cagcatactc 40
<210>88
<211>14
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A2-EMS05的寡核苷酸
<400>88
tcagtcaggc agct 14
<210>89
<211>41
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3-EMS01的寡核苷酸
<400>89
aagagagctt accaagtagg atatttatca actacaacct t 41
<210>90
<211>18
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-A3-EMS01的寡核苷酸
<400>90
acatacgagt aacaaccc 18
<210>91
<211>43
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1-EMS04的寡核苷酸
<400>91
ccagtaacaa caagcgacta caatcataat cataatcagt acc 43
<210>92
<211>23
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1-EMS04的寡核苷酸
<400>92
ttgtaaatga ttcataaccg ttt 23
<210>93
<211>41
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1-EMS05的寡核苷酸
<400>93
taggatattt atcaacgaca acctgcatac gagtaacaac c 41
<210>94
<211>23
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C1-EMS05的寡核苷酸
<400>94
tcatatcaag ttcttcttaa cca 23
<210>95
<211>43
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2-EMS02的寡核苷酸
<400>95
cctggttctg tagagatatc aaagtctgac aacgagactt cgc 43
<210>96
<211>12
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C2-EMS02的寡核苷酸
<400>96
tagcccgcac cc 12
<210>97
<211>31
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3-EMS03的寡核苷酸
<400>97
agaacgcctg ggtttccagt caagcatcat c 31
<210>98
<211>16
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3-EMS03的寡核苷酸
<400>98
tcactgtttc tcagcc 16
<210>99
<211>40
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3-EMS02的寡核苷酸
<400>99
cgctctgcgt ctatagaaac agtcatgaac cacttacagt 40
<210>100
<211>24
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测FATB-C3-EMS02的寡核苷酸
<400>100
atatattaca atcacactcg attg 24
<210>101
<211>26
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测ENDO1的寡核苷酸
<400>101
tgaggagcgt ggtggtccca cacctt 26
<210>102
<211>13
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>用于检测ENDO1的寡核苷酸
<400>102
cgatgcgacc agc 13

Claims (33)

1.种子油，其通过收获种子并且从所述种子中提取油获得，其中所述种子是来自包含至少三种FATB基因的芸苔属植物的种子，特征是在其基因组中包含至少三种突变FATB等位基因，从而突变FATB等位基因是至少三种不同的FATB基因的突变等位基因，其中所述突变FATB等位基因编码缺少第二个保守的甲硫氨酸的少于229个氨基酸的包含相应野生型FATB蛋白质的N末端部分的截短的FATB蛋白，或其中所述突变FATB等位基因不编码FATB蛋白，并且其中突变FATB等位基因是FATB基因的突变等位基因，所述FATB基因包含选自以下的核酸分子：
-由SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21或SEQID NO:23的序列组成的核酸分子；和
-编码由SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:24的序列组成的氨基酸序列的核酸分子。
2.根据权利要求1的种子油，其中所述植物在其基因组中包含至少四或五种突变FATB等位基因，其中突变FATB等位基因是至少四或五种不同的FATB基因的突变等位基因。
3.根据权利要求1的种子油，其中所述植物包含至少一种野生型FATB等位基因。
4.根据权利要求1的种子油，其中所述植物针对野生型和突变FATB等位基因是纯合的。
5.根据权利要求4的种子油，其中所述植物包含一种额外的突变FATB等位基因，其中额外的突变FATB等位基因选自剩余的野生型FATB等位基因，其中所述植物对于该额外的突变FATB等位基因是杂合的。
6.根据权利要求1的种子油，其中所述突变FATB等位基因包含缺失突变。
7.根据权利要求6的种子油，其中所述FATB等位基因选自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3和FATB-C2-FN1。
8.根据权利要求1的种子油，其中所述突变FATB等位基因包含无义突变。
9.根据权利要求8的种子油，其中所述FATB等位基因选自FATB-A1-EMS01、FATB-A1-EMS02、FATB-A1-EMS03、FATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS04、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03、FATB-C2-EMS05和FATB-C2-EMS06。
10.根据权利要求1的种子油，其中所述突变FATB等位基因包含剪接位点突变。
11.根据权利要求10的种子油，其中所述FATB等位基因选自FATB-A1-EMS07、FATB-A1-EMS09、FATB-A2-EMS02、FATB-A2-EMS03、FATB-C1-EMS04、FATB-C2-EMS04和FATB-C3-EMS02。
12.根据权利要求1的种子油，其中与不包含突变FATB等位基因的相应植物生产的功能性FATB蛋白的量相比，所述突变FATB等位基因导致在体内植物细胞内功能性FATB蛋白的量显著降低。
13.根据权利要求1的种子油，其中所述植物来自芸苔属作物物种。
14.根据权利要求13的种子油，其中所述芸苔属作物物种为欧洲油菜(Brassicanapus)、芥菜(Brassica juncea)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、芜菁(Brassicarapa)或甘蓝(Brassica oleracea)。
15.根据权利要求14的种子油，其中所述芸苔属油料种子物种为欧洲油菜、芥菜或芜菁。
16.根据权利要求1的种子油，其包含少于7wt％的总饱和脂肪酸。
17.根据权利要求1的种子油，其包含少于3.6wt％的总饱和脂肪酸。
18.用于确定在如权利要求7中所述的芸苔属植物或其植物材料或种子中突变FATB等位基因的存在的方法，其包括使芸苔属植物、植物材料或种子进行聚合酶链式反应测定，所述测定包括对所述植物、植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因的测定，所述突变的FATB等位基因的测定使用的引物组如下：
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A1-FN1，且其中所述引物组包括一种包含SEQ IDNO:31的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:32的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A1-FN1，且其中所述引物组包括一种包含SEQ IDNO:31的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:43的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因选自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:33的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:34的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因选自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:44的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:45的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C2-FN1，且其中所述引物组包括一种包含SEQ IDNO:39的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:40的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C2-FN1，且其中所述引物组包括一种包含SEQ IDNO:39的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:48的序列的引物。
19.用于确定在如权利要求9或11中所述的芸苔属植物或其植物材料或种子中的突变FATB等位基因的存在的方法，其包括使芸苔属植物、植物材料或种子进行聚合酶链式反应测定，所述测定包括对所述植物、植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因的测定，所述突变的FATB等位基因的测定使用的引物组如下：
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A1-EMS05，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:50的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:52的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A1-EMS06，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:53的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:55的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A2-EMS01，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:58的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:60的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A2-EMS05，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:58的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:56的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A3-EMS01，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:64的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:62的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C1-EMS04，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:68的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:38的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C1-EMS05，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:65的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:67的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C2-EMS02，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:70的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:72的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C2-EMS03，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:73的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:75的序列的引物，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C3-EMS02，并且其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:76的序列的引物，和/或一种包含SEQ ID NO:78的序列的引物。
20.用于确定在如权利要求7中所述的芸苔属植物或其植物材料或种子中的突变FATB等位基因的存在的方法，其包括将生物学样品进行使用至少一种特定探针的组的杂交测定，所述杂交测定包括对所述植物、植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因的测定，其中所述突变FATB等位基因选自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3和FATB-C2-FN1，且所述突变的FATB等位基因的测定使用的特异性探针包含SEQ ID NO:25或28的核苷酸序列。
21.用于确定在如权利要求9或11中所述的芸苔属植物或其植物材料或种子中的突变FATB等位基因的存在的方法，其包括将生物学样品进行使用至少一种特定探针的组的杂交测定，所述杂交测定包括对所述植物、或其植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因的测定，所述突变的FATB等位基因的测定使用的探针组如下：
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A1-EMS05，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:81的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:82的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A1-EMS06，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:83的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:84的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A2-EMS01，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:85的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:86的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A2-EMS05，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:87的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:88的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-A3-EMS01，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:89的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:90的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C1-EMS04，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:91的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:92的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C1-EMS05，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:93的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:94的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C2-EMS02，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:95的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:96的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C2-EMS03，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:97的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:98的序列的探针，或
-其中所述突变FATB等位基因是FATB-C3-EMS02，并且其中所述探针组包括一种包含SEQ ID NO:99的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:100的序列的探针。
22.确定如权利要求7中所述的芸苔属植物、或其植物材料或种子中的突变FATB等位基因接合性状态的方法，所述方法包括确定在所述植物、植物材料或种子的基因组DNA中突变和相应野生型FATB特定区域的存在，其包括使所述植物、植物材料或种子的基因组DNA进行使用至少2或至少3种引物的组的聚合酶链式反应测定，其中所述引物中的两种特异性识别野生型FATB等位基因，并且其中所述引物中的两种特异性识别突变FATB等位基因，所述聚合酶链式反应测定包括对所述植物、或其植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因的接合性状态的测定，所述突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因的接合性状态的测定使用的引物组如下：
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突变FATB等位基因是FATB-A1-FN1，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:31的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:32的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突变FATB等位基因是FATB-A1-FN1，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:31的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:43的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突变FATB等位基因选自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:33的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:34的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突变FATB等位基因选自FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2和FATB-A2-FN3，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:44的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:45的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突变FATB等位基因是FATB-C2-FN1，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:39的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:40的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突变FATB等位基因是FATB-C2-FN1，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:39的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:48的序列的引物。
23.用于确定如权利要求9或11中所述的芸苔属植物、或其植物材料或种子中的突变FATB等位基因接合性状态的方法，所述方法包括确定在所述植物、植物材料或种子的基因组DNA中突变和相应野生型FATB特定区域的存在，其包括使所述植物、植物材料或种子的基因组DNA进行使用至少2或至少3种引物的组的聚合酶链式反应测定，其中所述引物中的两种特异性识别野生型FATB等位基因，并且其中所述引物中的两种特异性识别突变FATB等位基因，所述聚合酶链式反应测定包括对所述植物、或其植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因接合性状态的测定，所述突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因的接合性状态的测定使用的引物组如下：
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突变FATB等位基因是FATB-A1-EMS05，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:50的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:51的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:52的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A1，且所述突变FATB等位基因是FATB-A1-EMS06，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:53的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:54的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:55的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突变FATB等位基因是FATB-A2-EMS01，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:59的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:60的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:61的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A2，且所述突变FATB等位基因是FATB-A2-EMS05，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:56的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:57的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:58的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-A3，且所述突变FATB等位基因是FATB-A3-EMS01，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:62的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:63的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:64的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C1，且所述突变FATB等位基因是FATB-C1-EMS04，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:67的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:68的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:69的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C1，且所述突变FATB等位基因是FATB-C1-EMS05，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:65的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:66的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:67的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突变FATB等位基因是FATB-C2-EMS02，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:70的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:71的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:72的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C2，且所述突变FATB等位基因是FATB-C2-EMS03，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:73的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:74的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:75的序列的引物，或
-其中所述野生型FATB等位基因是FATB-C3，且所述突变FATB等位基因是FATB-C3-EMS02，其中所述引物组包括一种包含SEQ ID NO:76的序列的引物，一种包含SEQ ID NO:77的序列的引物和/或一种包含SEQ ID NO:78的序列的引物。
24.用于确定如权利要求7中所述的芸苔属植物、或其植物材料或种子中的突变FATB等位基因接合性状态的方法，所述方法包括确定在所述植物、植物材料或种子的基因组DNA中突变和相应野生型FATB特定区域的存在，其包括使所述植物、植物材料或种子的基因组DNA进行使用至少2种特异性探针的组的杂交测定，所述杂交测定包括对所述植物、或其植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因的接合性状态的测定，其中所述特异性探针的至少一种特异性的识别野生型FATB等位基因或内源基因，并且其中所述特异性探针中的至少一种特异性识别突变FATB等位基因，其中分别的，所述野生型FATB等位基因选自FATB-A1、FATB-A2和FATB-C2，并且所述突变FATB等位基因选自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3和FATB-C2-FN1，且其中所述突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因的接合性状态的测定使用的特异性探针包含SEQ ID NO:25或28的核苷酸序列。
25.用于确定如权利要求9或11中所述的芸苔属植物、或其植物材料或种子中的突变FATB等位基因接合性状态的方法，所述方法包括确定在所述植物、植物材料或种子的基因组DNA中突变和相应野生型FATB特定区域的存在，其包括使所述植物、植物材料或种子的基因组DNA进行使用至少2种特异性探针的组的杂交测定，其中所述特异性探针的至少一种特异性的识别野生型FATB等位基因或内源基因，并且其中，所述特异性探针中的至少一种特异性识别突变FATB等位基因，所述杂交测定包括对所述植物、植物材料或种子的基因组中所述至少三种突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因的接合性状态的测定，所述突变的FATB等位基因和相应野生型FATB等位基因的接合性状态的测定使用的探针组如下：
-其中所述特异性针对所述内源基因的探针组包括一种包含SEQ ID NO:101的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:102的序列的探针，且
-其中所述特异性针对所述突变FATB等位基因的所述探针组，选自
-特异性针对FATB-A1-EMS05的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:81的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:82的序列的探针，
-特异性针对FATB-A1-EMS06的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:83的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:84的序列的探针，
-特异性针对FATB-A2-EMS01的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:85的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:86的序列的探针，
-特异性针对FATB-A2-EMS05的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:87的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:88的序列的探针，
-特异性针对FATB-A3-EMS01的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:89的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:90的序列的探针，
-特异性针对FATB-C1-EMS04的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:91的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:92的序列的探针，
-特异性针对FATB-C1-EMS05的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:93的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:94的序列的探针，
-特异性针对FATB-C2-EMS02的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:95的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:96的序列的探针，
-特异性针对FATB-C2-EMS03的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:97的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:98的序列的探针，和
-特异性针对FATB-C3-EMS02的探针组，其包括一种包含SEQ ID NO:99的序列的探针和/或一种包含SEQ ID NO:100的序列的探针。
26.用于在一株植物中组合如权利要求7、9或11中所述的至少三种选定的突变FATB等位基因的方法，其包括步骤：
-根据权利要求18至21的任一项鉴别至少两株植物，每株包含至少一种选定的突变FATB等位基因，
-将至少两株植物杂交，从至少一株杂交种中收集F1杂种种子，
-根据权利要求18-21的任一项鉴别这样的F1植物，所述F1植物包含至少两种选定的突变FATB等位基因，
-杂交包含根据权利要求18-21中任一项的至少两个选择的突变FATB等位基因的F1植物和包含选择的突变FATB等位基因的芸苔属植物。
27.根据权利要求26的方法，其还包括通过根据权利要求22-25的任一项确定选定的突变FATB等位基因的接合性状态来鉴别F1植物的步骤，所述植物对于选定的突变FATB等位基因是纯合的或杂合的。
28.用于将如权利要求7、9或11中所述的至少三种选定的突变FATB等位基因，从一株植物向另一植物转移的方法，其包括步骤：
(a)根据权利要求18-21的任一项鉴别第一植物，所述植物包含至少一种选定的突变FATB等位基因，
(b)将第一植物与第二植物杂交，所述第二植物不包含所述至少一种选定的突变FATB等位基因，并从所述杂交种中收集F1杂种种子，
(c)任选的，根据权利要求18-21的任一项鉴别这样的F1植物，所述F1植物包含所述至少一种选定的突变FATB等位基因，
(d)将包含所述至少一种选定的突变FATB等位基因的F1植物与第二植物回交至少一代(x)，所述第二种植物不包含所述至少一种选定的突变FATB等位基因，并从所述杂交种中收集BCx种子，
(e)根据权利要求18-21的任一项的方法，在每一代中鉴别包含所述至少一种选定的突变FATB等位基因的BCx植物，
(f)重复步骤(a)直到在第二种植物中组合至少三种突变FATB等位基因。
29.根据权利要求28的方法，其还包括通过根据权利要求22-25的任一项，确定选定的突变FATB等位基因的接合性状态来鉴别BCx植物的步骤，所述植物对于选定的突变FATB等位基因是纯合的或杂合的。
30.用于生产种子油的方法，所述种子油具有修饰的相对量和/或组成的饱和脂肪酸，所述方法通过从芸苔属植物收获种子，并从种子提取油，所述芸苔属植物包含如权利要求7、9或11所述的至少三种突变FATB等位基因，所述FATB等位基因选自FATB-A1-FN1、FATB-A2-FN1、FATB-A2-FN2、FATB-A2-FN3、FATB-C2-FN1、FATB-A1-EMS01、FATB-A1-EMS02、FATB-A1-EMS03、FATB-A1-EMS05、FATB-A1-EMS06、FATB-A2-EMS01、FATB-A2-EMS04、FATB-A2-EMS05、FATB-A3-EMS01、FATB-C1-EMS05、FATB-C2-EMS02、FATB-C2-EMS03,FATB-C2-EMS05、和FATB-C2-EMS06，从而突变FATB等位基因是至少三种不同的选自FATB-A1、FATB-A2、FATB-A3、FATB-C1、FATB-C2和FATB-C3的FATB基因的等位基因。
31.根据权利要求30的方法，其中与相应野生型芸苔属植物的种子油中的饱和脂肪酸水平相比，种子油的饱和脂肪酸水平显著降低。
32.根据权利要求30的方法，其中种子油具有等于或少于6wt％、5wt％、4wt％、3.5wt％、3wt％、2wt％或1wt％饱和脂肪酸，特别是棕榈酸和/或硬脂酸，这是基于种子油中的脂肪酸总量。
33.根据权利要求30的方法，其中种子油能够被标记为低饱和或无饱和油。
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