CN112702908B

CN112702908B - 抗生物胁迫的水稻植株材料

Info

Publication number: CN112702908B
Application number: CN201980060196.4A
Authority: CN
Inventors: 孙传信; Y·金
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-09-14
Filing date: 2019-09-12
Publication date: 2023-02-21
Anticipated expiration: 2039-09-12
Also published as: EP3850087A1; CN112702908A; US20220033835A1; EP3850087A4; WO2020055318A1

Abstract

对包括稻褐飞虱和稻瘟病菌的生物胁迫因素具有改进的抗性的水稻植株材料通过在所述水稻植株材料中过表达FatB基因以引起所述水稻植株材料中油或三酰甘油含量的增加来获得。

Description

抗生物胁迫的水稻植株材料

技术领域

本发明的一般目的在于提供一种对生物胁迫，且特别是对稻褐飞虱(rice brownplanthopper)和稻瘟病菌(rice blast fungus)具有改进的抗性的水稻植株材料。

背景技术

大米是世界上主要的主食，超过一半的人群食用大米作为主食。大米的年产量为70,000万吨左右。在水稻农业中存在与水稻与害虫和微生物的生物胁迫因素之间的相互作用有关的几个问题，并且这些问题通过直接影响人类食品安全而威胁人类未来。这些问题包括稻褐飞虱(BPH)(褐飞虱(Nilaparvata lugens))的主要虫害和稻瘟病菌(稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae))的病害，也称为水稻烂颈、水稻幼苗枯萎和稻瘟病。每年，稻褐飞虱和稻瘟病菌引起在12％至40％之间且最差甚至高达100％的水稻产量损失。因此，了解水稻与稻褐飞虱和稻瘟病菌之间的相互作用对于人类食品安全是非常重要的。

因此，需要提供一种对生物胁迫，且特别是稻褐飞虱和稻瘟病菌具有改进的抗性的水稻植株材料。

发明内容

本发明总体涉及一种对稻褐飞虱和稻瘟病菌具有抗性的水稻植株材料。

本发明在独立权利要求中限定。本发明的另外实施方案在从属权利要求中限定。

本发明的水稻植株材料具有由FatB基因，优选FatB6基因的过表达引起的增加的油(三酰甘油)含量。由FatB基因在水稻植株材料中的过表达引起的油或三酰甘油含量增加改进了水稻植株材料对稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性。

附图说明

通过参考以下结合附图的描述，可以最佳地理解实施方案及其另外目的和优点，其中：

图1A和图1B是野生稻(wild rice)(紧穗野生稻(Oryza eichigeri)，图1A)和日本晴稻(Nipponbare rice)(粳稻(Oryza sativa L.ssp Japonica)，图1B)在人工气候室(phytotron)中的图像。

图2A至图2C示出野生稻的叶鞘和茎中的高油(三酰甘油(TAG))含量的鉴定。图2A和图2B指示与日本晴稻(图2B)相比，野生稻(图2A)的高油含量。比例尺＝20μm。图2C是比较野生稻和日本晴中的TAG含量(％/鲜重(FW))的图。统计分析通过单向ANOVA(**P≤0.01，误差条显示标准偏差(s.d.))进行。

图3示出野生稻和日本晴的叶鞘和茎中TAG形成中五种关键基因的基因表达分析，并且显示相对基因表达水平。统计分析通过单向ANOVA(*P≤0.05或**P≤0.01，误差条显示s.d.)进行。

图4示出日本晴FatB2、FatB6和FatB11在茎和叶鞘的组织以及种子中的基因表达分析。

图5A和图5B示出NippFatB6(图5A)和对照(图5B)的转基因系(T₀)中的油丰度。比例尺＝20μm。

图6A至图6C示出NippFatB6的转基因系(T₀)对稻褐飞虱的抗性。图6A显示在NippFatB6和对照(Nipp)的水稻植株上接种稻褐飞虱的一式三份样品。图6B显示接种后第2天生物一式三份样品的每分蘖(tiller)的平均害虫数量。图6C展示接种后第2天对照植株(黑色箭头)上相比NippFatB6上具有更多害虫的图像。统计分析通过单向ANOVA(*P≤0.05，误差条显示s.d.)进行。

图7A至图7C示出NippFatB6的转基因系(T₀)对稻瘟病菌的抗性。图7A展示接种稻瘟病菌后第5天的病斑大小的图像。图7B和图7C分别指示接种后第5天的病斑宽度(图7B)和病斑长度(图7C)。统计分析通过单向ANOVA(*P≤0.05或**P≤0.01，误差条显示s.d.)进行。

图8A和图8B示出控制大麦中淀粉和果聚糖的协调合成的糖感知竞争性转录因子结合系统。糖响应性激活剂-阻遏物SUSIBA2-SUSIBA1转录因子在大麦中经由蔗糖/葡萄糖/果糖(Suc/Glc/Fru)信号传导精心编排(duo orchestrate)协调的淀粉和果聚糖。当糖水平低时(图8A)，募集的转录因子或复合物(带有问号的球)结合到SUSIBA1启动子中的糖响应序列，并激活SUSIBA1表达。SUSIBA1的高表达导致高水平的SUSIBA1，其结合SUSIBA2启动子中的W盒，防止SUSIBA2结合，且结合果聚糖基因启动子中的顺式元件，并且阻遏SUSIBA2和果聚糖基因的表达，并且因此，在低糖水平上产生淀粉和果聚糖的低合成和含量。当糖增加到高水平时(图8B)，转录因子/复合物的水平降低，并且当糖继续增加时最终变为零。在转录因子或复合物不与SUSIBA1启动子中的糖响应序列结合的情况下，SUSIBA1的表达是低的。SUSIBA1的低表达导致果聚糖基因的高表达和SUSIBA2表达的进行性增加。SUSIBA2结合其自身启动子中的W盒并增强其自身表达。更多的SUSIBA2结合W盒，并且产生更多的SUSIBA2转录物。这种积极的自身调节将导致SUSIBA2的高表达和淀粉的高合成。因此，在高糖水平下，产生淀粉和果聚糖的高合成和含量。

图9示出三种野生稻的FatB6启动子序列与日本晴的比对。金穗(Jinsui)(紧穗野生稻(Oryza eichingeri))(对应于SEQ ID NO:57中的核苷酸1-1,235)、短花(Duanhua)(短花药野生稻(Oryza brachyantha))(SEQ ID NO:66)和CCDD(宽叶野生稻(Oryzalatifolia))(SEQ ID NO:67)通过DNASTAR lasergene 14与日本晴(对应于SEQ ID NO:54中的核苷酸1-1,367)比对。框出了具有与35S启动子富CT基序类似的富CT基序的核苷酸序列(Pauli等，2004)。

图10示出与日本晴相比，三种野生稻中FatB6的相对基因表达水平，指示了富CT基序在FatB6启动子中的作用。统计分析通过单向ANOVA(*P≤0.05，误差条显示s.d.)进行。

具体实施方式

本发明的一般目的在于提供一种对生物胁迫，且特别是对稻褐飞虱和稻瘟病菌具有改进的抗性的水稻植株材料。

与栽培稻(亚洲稻，亚洲栽培稻(Oryza sativa)，和非洲稻，非洲栽培稻(Oryzaglaberrima))相比，野生稻，诸如紧穗野生稻、短花药野生稻和宽叶野生稻，通常具有更高的对害虫和微生物的生物胁迫因素的抗性。特别地，野生稻对稻褐飞虱(BPH)(褐飞虱(Nilaparvata lugens))的主要虫害和稻瘟病菌(稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae))的病害更有抗性。如本文所示，与栽培稻相比，对这样的生物胁迫因素的更高抗性至少部分地取决于野生稻的叶、叶鞘和茎中的高油(三酰甘油(TAG))含量。如本文所示的实验数据指示，与栽培稻相比，野生稻中更高的油或TAG含量主要与野生稻中FatB基因，特别是FatB6基因的表达显著增加相关。野生稻中FatB基因，特别是FatB6基因的高表达归因于野生稻特异性启动子，其在稻评价和驯化期间在栽培稻中已经改性。例如，野生稻FatB6启动子包含在栽培稻FatB6启动子中缺乏的富CT基序。栽培稻中FatB基因，特别是FatB6基因的表达增加导致油或TAG含量增加，以及对稻褐飞虱和稻瘟病菌的改进抗性。

FatB基因编码酶酰基-酰基载体蛋白(ACP)硫酯酶B(FatB或FATB)，EC 3.1.2.14。品种为日本晴(粳稻(Oryza sativa L.ssp.。Japonica))的栽培稻含有位于染色体2、6和11上并命名为FatB2、FatB6和FatB11的三种FatB基因，参见SEQ ID NO:41至46。野生稻也包含三种对应的FatB基因，参见SEQ ID NO:47至52。与栽培稻相比，野生稻中三种FatB基因的表达显著更高。FatB基因的基因表达的这种差异似乎是与栽培稻相比野生稻中的油和TAG含量更高的原因，并且从而是与栽培稻相比野生稻对生物胁迫如稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性更高的原因。

稻属由超过20种物种组成，包括约20种野生稻种和两种栽培种(亚洲栽培稻和非洲栽培稻)。

一个实施方案涉及一种水稻植株材料，与野生型水稻植株材料相比，其具有更高的油或TAG含量，并且特别是在叶、叶鞘和/或茎中具有更高的油或TAG含量。

一个实施方案涉及一种水稻植株材料，其特征在于过表达FatB基因。

一个实施方案涉及一种水稻植株材料，其包含适于过表达FatB酶的FatB基因。

在一个实施方案中，所述FatB酶选自由如SEQ ID NO:42或48中所定义的FatB2、如SEQ ID NO:44或50中所定义的FatB6、如SEQ ID NO:46或52中所定义的FatB11、与如SEQ IDNO:42、44、46、48、50或52中所定义的FatB酶具有至少80％序列同一性的FatB酶及其组合组成的组。在一个特定实施方案中，FatB酶与如SEQ ID NO:42、44、46、48、50或52中所定义的FatB酶具有至少85％、至少90％、至少95％或至少99％序列同一性。在一个特定实施方案中，与如SEQ ID NO:42、44、46、48、50或52中所定义的FatB酶具有至少80％序列同一性的FatB酶能够催化将酰基-ACP的酰基链连接到ACP的磷酸泛酰巯基乙胺辅基的硫酯键的水解。因此，FatB酶在水解这种硫酯键方面具有酶活性。

在一个实施方案中，与缺乏FatB基因或FatB酶的过表达的野生型水稻植株材料相比，所述水稻植株材料诸如在叶、叶鞘和/或茎中具有较高的油和/或TAG含量。

FatB基因优选选自由FatB2、FatB6、FatB11及其组合组成的组。因此，水稻植株材料的特征可在于过表达FatB2基因、过表达FatB6基因、过表达FatB11基因、过表达FatB2和FatB6基因、过表达FatB2和FatB11基因、过表达FatB6和FatB11基因、或过表达FatB2、FatB6和FatB11基因。在一个实施方案中，水稻植株材料的特征在于过表达FatB6基因、过表达FatB2和FatB6基因、过表达FatB6和FatB11基因、或过表达FatB2、FatB6和FatB11基因，优选过表达FatB6基因。

FatB基因可为任何FatB基因，优选为植株FatB基因，且更优选为稻属FatB基因(Oryza FatB gene)。例如，FatB基因可为亚洲栽培稻FatB基因、非洲栽培稻FatB、紧穗野生稻FatB基因、短花药野生稻FatB基因、宽叶野生稻FatB基因或其组合。

FatB基因可为异源基因或内源基因。例如，如果水稻植株材料为亚洲栽培稻植株材料，则内源FatB基因将为亚洲栽培稻FatB基因，而异源FatB基因可为紧穗野生稻FatB基因或非洲栽培稻FatB基因。

根据各个实施方案可实现FatB基因的过表达。在一个实施方案中，内源FatB基因的天然或野生型启动子或其至少一部分由另一启动子或启动子部分或元件如增强元件替换，所述另一启动子或启动子部分或元件引起内源FatB基因在水稻植株材料中的表达增加。替代地，或除了替换天然或野生型启动子之外，可添加一个或多个增强元件并将其操作性地连接到天然或野生型启动子，从而增强天然或野生型启动子的活性。所述另一启动子可例如为组成型活性启动子或诱导型启动子。这类组成型活性启动子的说明性而非限制性实例包括ARP1、H3F3、HSP、H2BF3和花椰菜花叶病毒(Cauliflower Mosaic Virus，CaMV)35S启动子。在一个实施方案中，所述启动子为大麦SBEIIb启动子。另外，如果水稻植株材料为亚洲栽培稻植株材料或非洲栽培稻植株材料，则其内源FatB基因的启动子可由异源FatB启动子，诸如来自野生稻的相应FatB启动子，例如紧穗野生稻FatB启动子、短花药野生稻FatB启动子、宽叶野生稻FatB启动子或其组合替换。

在一个实施方案中，异源FatB启动子为选自由紧穗野生稻FatB2启动子、紧穗野生稻FatB6启动子、紧穗野生稻FatB11启动子或其组合组成的组的紧穗野生型FatB启动子，优选紧穗野生型FatB6启动子。相应优选的短花药野生稻和宽叶野生稻FatB启动子包括短花药野生稻FatB6启动子和宽叶野生稻FatB6启动子。

如本文所示的实验数据指示，除了在野生稻FatB6启动子中存在富CT基序，而在亚洲栽培稻的FatB6启动子中缺乏富CT基序之外，亚洲栽培稻的FatB6启动子与由紧穗野生稻、短花药野生稻和宽叶野生稻代表的野生稻的相应FatB6启动子类似。这种来自紧穗野生稻、短花药野生稻和宽叶野生稻的富CT基序的共有序列为

AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAG(SEQID NO:61)。这种富CT基序与花椰菜花叶病毒35S RNA的转录起始位点下游60-核苷酸区域(S1)内的相应富CT基序，ACCAATCTCTCTCTACAAATCTATCTCTCTCTATAA(SEQ ID NO:62)类似。富CT基序既参与增强子功能又参与与植株核蛋白的相互作用(Pauli等，2004)。

在一个实施方案中，FatB基因的过表达可通过将一个或多个富CT基序引入FatB启动子中，优选引入亚洲栽培稻FatB启动子中或引入非洲栽培稻FatB启动子中来实现。在一个实施方案中，富CT基序可根据上述共有序列，根据紧穗野生稻FatB6启动子中的富CT基序

AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAAAAAAAAGTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAG(SEQID NO:63)，根据短花药野生稻FatB6启动子中的富CT基序AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAGAAGAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAG(SEQ ID NO:64)，根据宽叶野生稻FatB6启动子中的富CT基序AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAC(SEQ ID NO:65)，或根据花椰菜花叶病毒35S启动子的S1区域中的富CT基序，或其组合。

在另一实施方案中，FatB基因的过表达可通过增加内源FatB基因的拷贝数实现。因此，在这样的实施方案中，水稻植株材料包含内源FatB基因的多个，即至少两个拷贝。多个内源FatB基因可全部或至少其一部分与单一启动子操作性地连接并受其控制，或者不同的内源FatB基因可与不同启动子操作性地连接并受其控制，所述不同启动子可为相同启动子类型或不同启动子类型。

在另一实施方案中，FatB基因的过表达通过用异源FatB基因的一个或多个拷贝转化水稻植株材料来实现，如果所述水稻植株材料为亚洲栽培稻或非洲栽培稻植株材料，则所述异源FatB基因例如为紧穗野生稻FatB基因、短花药野生稻FatB基因、宽叶野生稻FatB基因或其组合。

可以将实现FatB基因的过表达的任何上述实施方案组合。例如，水稻植株材料可包含内源FatB基因的至少一个拷贝和异源FatB基因的至少一个拷贝。在这种情况下，不同的FatB基因可处于同一启动子或不同启动子的控制之下。

水稻植株材料不是野生稻的植株材料。因此，水稻植株材料优选为栽培稻的植株材料。在一个实施方案中，水稻植株材料为亚洲栽培稻植株材料或非洲栽培稻植株材料。

在一个特定实施方案中，水稻植株材料为具有FatB基因的过表达的亚洲栽培稻植株材料或非洲栽培稻植株材料。

在一个实施方案中，水稻植株材料为包含操作性地连接到内源FatB基因的野生稻FatB启动子的亚洲栽培稻或非洲栽培稻植株材料，优选为亚洲栽培稻植株材料。在一个实施方案中，野生稻FatB启动子为紧穗野生稻FatB启动子，优选为紧穗野生稻FatB2启动子、紧穗野生稻FatB6启动子或紧穗野生稻FatB11启动子，且更优选为紧穗野生稻FatB6启动子。替代地或除此之外，可使用来自短花药野生稻和/或宽叶野生稻的FatB启动子，例如短花药野生稻FatB6启动子和/或宽叶野生稻FatB6启动子。

在一个实施方案中，内源FatB基因为内源FatB2基因、内源FatB6基因或内源FatB11基因，优选为内源FatB6基因。

在另一实施方案中，水稻植株材料为亚洲栽培稻或非洲栽培稻植株材料，优选为亚洲栽培稻植株材料，其包含操作性地连接到异源FatB基因，优选野生稻FatB基因的野生稻FatB启动子。在一个实施方案中，野生稻FatB启动子为紧穗野生稻FatB启动子，优选为紧穗野生稻FatB2启动子、紧穗野生稻FatB6启动子或紧穗野生稻FatB11启动子，更优选为紧穗野生稻FatB6启动子。在一个实施方案中，异源FatB基因为紧穗野生稻FatB基因，优选为紧穗野生稻FatB2基因、紧穗野生稻FatB6基因或紧穗野生稻FatB11基因，且更优选为紧穗野生稻FatB6基因。替代地，或除此之外，可使用短花药野生稻和/或宽叶野生稻FatB启动子和/或基因。

例如，紧穗野生稻FatB启动子可操作性地连接到紧穗野生稻FatB基因、短花药野生稻FatB基因和/或宽叶野生稻FatB基因；短花药野生稻FatB启动子可操作性地连接到紧穗野生稻FatB基因、短花药野生稻FatB基因和/或宽叶野生稻FatB基因；和/或宽叶野生稻FatB启动子可操作性地连接到紧穗野生稻FatB基因、短花药野生稻FatB基因和/或宽叶野生稻FatB基因。

在另一实施方案中，水稻植株材料为包含操作性地连接到内源FatB基因的组成型活性启动子或强启动子的亚洲栽培稻或非洲栽培稻植株材料，优选为亚洲栽培稻植株材料。在一个实施方案中，所述启动子为大麦SBEIIb启动子。在一个实施方案中，内源FatB基因为内源FatB2基因、内源FatB6基因或内源FatB11基因，优选为内源FatB6基因。

水稻植株材料的非限制性实例包括水稻植株、水稻植株细胞、水稻组织和水稻种子。

在一个实施方案中，本文对FatB基因、FatB酶或FatB启动子的提及还涵盖与所提及的FatB基因、FatB酶或FatB启动子具有至少80％、优选至少85％、至少90％、至少95％或至少99％序列同一性的FatB基因、FatB酶或FatB启动子。具有至少80％序列同一性的FatB基因、FatB酶或FatB启动子优选保持所提及的FatB基因、FatB酶或FatB启动子的功能，也就是说，在具有至少80％序列同一性的FatB基因的情况下，能够编码功能性FatB酶(具有酰基-ACP硫酯酶活性)，在具有至少80％序列同一性的FatB酶的情况下，具有酶促酰基-ACP硫酯酶活性，或在具有至少80％序列同一性的FatB启动子的情况下，能够起始操作性地连接的FatB基因的转录。

根据实施方案的对稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性的增加可有利地应用于具有受控的碳水化合物，特别是淀粉产生的水稻植株材料。这样的水稻植株材料还可减少甲烷排放，并且从而可成为对稻褐飞虱和稻瘟病菌具有改进抗性的高淀粉且低甲烷的水稻植株材料。可根据实施方案使用的具有受控的碳水化合物产生和减少的甲烷排放的水稻植株材料在公开号为WO 2018/182493的PCT/SE2018/050335中公开。

在这样的情况下，水稻植株材料还包含在水稻植株材料中有活性的启动子的转录控制下编码大麦2样转录因子中的糖信号传导(本文中称为SUSIBA2)的基因组核苷酸序列。编码SUSIBA2的基因组核苷酸序列缺乏在编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列的野生型版本的内含子中存在的SUSIBA1启动子(SUSIBA1 p)的激活区的至少一部分。

因此，根据这样的实施方案，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列，即SUSIBA2基因，缺乏另外存在于SUSIBA2基因的野生型版本中的内含子中的SUSIBA1 p的激活区的至少一部分。不存在激活区的至少一部分意味着所有反式激活因子或复合物都不能有效地结合到激活区，从而不能有效地激活SUSIBA1 p。因此，无论水稻植株材料中的糖水平如何，在水稻植株材料中都不会产生或仅产生少量的SUSIBA1转录因子。在水稻植株材料中不存在或存在少量的SUSIBA1转录因子又意味着SUSIBA2转录因子将在结合到SUSIBA2p，且更详细地结合到SUSIBA2 p中的至少一个W盒方面胜过SUSIBA1转录因子。这反过来将引起SUSIBA2 p的激活和SUSIBA2转录因子在水稻植株材料中的进一步产生。在水稻植株材料中高水平的SUSIBA2转录因子和低水平的SUSIBA1转录因子诱导水稻植株材料中淀粉的产生，参见图8A和图8B，其显示涉及SUSIBA1和SUSIBA2的糖感知竞争性转录因子结合系统，在此以大麦为例，与水稻形成鲜明对比，大麦能够合成果聚糖。

由于缺乏或不存在SUSIBA1 p的激活区的至少一部分，SUSIBA1基因的抑制表达和由此SUSIBA1转录因子的低水平引起SUSIBA2基因的表达增强和从而SUSIBA2转录因子的高水平。SUSIBA2转录因子反过来将激活水稻植株材料中的淀粉合成所涉及的基因。

这些实施方案的水稻植株材料从而将是对稻褐飞虱和稻瘟病菌具有改进的抗性的高淀粉水稻植株材料。

在一个实施方案中，SUSIBA1 p的激活区的至少一部分自编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列的野生型版本缺失。由于SUSIBA1 p的激活区的至少一部分的这种缺失和从而不存在，水稻植株材料包含编码SUSIBA2转录因子且缺乏SUSIBA1 p的激活区的至少一部分的基因组核苷酸序列。因此，水稻植株材料不包含SUSIBA1 p的激活区的任何这样的部分。

在一个特定实施方案中，通过成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)介导的缺失从编码SUSIBA2转录因子的基因组序列的野生型版本中缺失SUSIBA1 p的激活区的至少一部分。

CRISPR/Cas9为DNA切割方法，其涉及表达RNA导向Cas9内切核酸酶以及向导RNA，所述向导RNA将其引导向待编辑的特定序列。当Cas9切割靶序列时，植株细胞通过用同源DNA替换原始序列来修复损伤。通过引入具有适当同源性的额外模板，Cas9可用于以前所未有的简单方式缺失、添加或修饰基因。CRISPR/Cas9从而成为一种用于在水稻植株材料中从编码SUSIBA2转录因子的基因组序列的野生型版本中缺失SUSIBA1 p的激活区的至少一部分的有效技术。

尽管CRISPR/Cas9介导的SUSIBA1 p的激活区的至少一部分的缺失是产生不具有SUSIBA1基因的表达或具有受抑制的SUSIBA1基因表达的水稻植株材料的优选技术，但实施方案不限于此。替代地，可使用本领域已知的并且可用于去除或缺失水稻植株材料中的基因组核苷酸序列的其他工艺和技术。例如，启动子缺失可用于产生或生成编码SUSIBA2转录因子但缺乏另外存在于核酸序列(SUSIBA2基因)的内含子中的SUSIBA1 p的激活区的至少一部分的核苷酸序列。然后可将所得构建体农杆菌渗入到水稻植株材料中。

农杆菌渗入法是一种在植株生物学中使用以诱导基因在水稻植株材料中表达的方法。在所述方法中，通过直接注射或通过真空渗入将根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)的悬浮液引入水稻植株材料中，或使其与支撑物上的水稻植株材料结合，其中在细菌转移之后，所需产生的核苷酸序列经由T-DNA的转移进入水稻植株材料中。

第一步骤是将核苷酸序列引入根癌农杆菌的菌株。随后，使所述菌株在液体培养物中生长，并且洗涤所得细菌并使其悬浮在合适的缓冲溶液中。为了注射，然后将这种溶液置于注射器中。注射器的尖端压靠在水稻植株材料如叶的下侧，同时向叶的另一侧施加轻微的反向压力。然后将农杆菌悬浮液通过气孔或有时通过在叶下侧形成的微小切口注入叶内部的空隙。

真空渗入是将农杆菌引入水稻植株组织深处的另一方法。在这种工序中，将叶盘、叶或整个水稻植株浸没在含有溶液的烧杯中，并将烧杯置于真空室中。然后施加真空，迫使空气通过气孔离开叶内的细胞间隙。当释放真空时，压差迫使农杆菌悬浮液进入叶，通过气孔进入叶肉组织。这可导致任何给定叶中的几乎所有的水稻细胞与细菌接触。

一旦处于水稻植株材料内，农杆菌就保留在细胞间隙中，并将核苷酸序列作为Ti质粒衍生的T-DNA的一部分以高拷贝数转移到水稻细胞中。

在一个实施方案中，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列为基因组内源核苷酸序列。在一个特定实施方案中，所述基因组内源核苷酸序列存在于水稻植株材料的染色体中。因此，根据实施方案，SUSIBA1 p的激活区的至少一部分已经例如通过CRISPR/Cas9介导的缺失从优选存在于水稻植株材料的染色体中的基因组内源核苷酸序列中缺失。

在一个实施方案中，SUSIBA1 p的激活区的一部分从编码SUSIBA2转录因子的核苷酸序列中缺失。在这样的情况下，优选选择缺失的部分以对应于反式激活因子或复合物与之结合的激活区的子区域或序列。因此，缺失这种子区域或序列从而防止或至少显著降低反式激活因子或复合物与SUSIBA1 p的激活区的结合。

在另一实施方案中，激活区从核苷酸序列中缺失。在这个实施方案中，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列缺乏SUSIBA1 p的激活区。激活区的这种完全去除从而有效地防止了反式激活因子或复合物结合到SUSIBA1。

水稻中SUSIBA1 p的激活区如下所示(SEQ ID NO:58)：

野生型SUSIBA1 p除了激活区之外通常还包含抑糖区。在一个实施方案中，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列还缺乏编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列的野生型版本的内含子中存在的SUSIBA1 p的抑糖区的至少一部分。

因此，在一个实施方案中，SUSIBA1 p包含两个控制元件：激活区和抑糖区。这两个控制元件存在于编码SUSIBA2转录因子的核苷酸序列的对应于内含子的部分中。这些控制元件从而是SUSIBA1 p的内含子部分的一部分。SUSIBA1 p还包含存在于编码SUSIBA2转录因子的核苷酸序列的外显子中的外显子部分。

在一个实施方案中，SUSIBA1 p的抑糖区的一部分从编码SUSIBA2转录因子的核苷酸序列中缺失。在另一实施方案中，抑糖区从核苷酸序列中缺失。

抑糖区或其至少一部分的缺失可使用例如CRISPR/Cas9介导的缺失或例如针对激活区的前述内容中描述的另一技术进行。

除了SUSIBA1 p的完整激活区的一部分或其全部的缺失之外，还存在SUSIBA1 p的完整抑糖区的一部分或其全部的缺失。

在一个实施方案中，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列缺乏SUSIBA1 p的i)激活区的至少一部分，ii)完整激活区，iii)激活区的至少一部分和抑糖区的至少一部分，iv)激活区的至少一部分和完整抑糖区，v)完整激活区和抑糖区的至少一部分，或vi)完整激活区和完整抑糖区。

水稻中SUSIBA1 p的抑糖区如下所示(SEQ ID NO:59)：

水稻中的抑糖区包含与大麦中的相应抑糖区具有高序列同一性的第二在后部分和大麦中不存在的第一在前部分。

SUSIBA1 p的激活区和抑糖区两者都存在于SUSIBA2基因的内含子中。在一个实施方案中，这个内含子从SUSIBA2基因中缺失。因此，在这个实施方案中，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列缺乏包含SUSIBA1 p的激活区和抑糖区的内含子。在一个特定实施方案中，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列缺乏内含子2。

在一个实施方案中，编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列缺乏SUSIBA1 p的内含子部分。在大麦中，内含子2由激活区和抑糖区组成，即HvSUSIBA1 p的内含子部分占据内含子2。水稻中的相应内含子2包含与大麦中的相应区域具有高序列同一性的激活区和抑糖区。不过，水稻中的内含子2还包含位于与大麦激活区具有高序列同一性的激活区之前的核苷酸序列。这个在前核苷酸序列可为水稻中较大激活区的一部分，构成水稻中SUSIBA1 p内的另一区域或不形成SUSIBA1 p的一部分。因此，在一个实施方案中，内含子可包含除SUSIBA1 p的内含子部分之外的一个或多个核苷酸序列。在这样的实施方案中，内含子由SUSIBA1 p的内含子部分，优选激活区和抑糖区，和至少一种其他核苷酸序列组成。在本实施方案中，SUSIBA1 p的内含子部分从编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列的野生型版本中缺失。这意味着在内含子部分缺失后，如果内含子部分占据内含子2的完整序列，则编码SUSIBA2转录因子的基因组核苷酸序列可缺乏内含子2，或者如果内含子部分占据内含子2的完整序列的一部分，则可缺乏内含子2的一部分。

水稻中SUSIBA1 p的核苷酸序列如下呈现(SEQ ID NO:60)。核苷酸序列的加下划线部分对应于SUSIBA2基因的内含子2中存在的SUSIBA1 p的部分。核苷酸序列的加下划线斜体部分对应于激活区，而核苷酸序列的加下划线粗体部分对应于抑糖区。在前核苷酸序列以加下划线、粗体和斜体部分显示。所述核苷酸序列的其余部分对应于SUSIBA2基因的外显子3中存在的SUSIBA1 p的部分。

然后，基因组核苷酸序列优选编码SUSIBA2转录因子(OsSUSIBA2 TF)，所述SUSIBA2转录因子缺乏在编码SUSIBA2转录因子(OsSUSIBA2 TF)的基因组核苷酸序列的野生型版本的内含子中存在的SUSIBA1 p(OsSUSIBA1 p)的激活区的至少一部分。

缺乏SUSIBA1 p的上述激活区的水稻植株材料还具有低甲烷排放。已经表明大麦SUSIBA2(HvSUSIBA2)转录因子在水稻中的表达导致高淀粉合成，但也导致低甲烷排放和根际产甲烷菌水平的降低。然而，这样的水稻品种是转基因水稻品种，其包含操作性地连接到大麦SBEIIb启动子的大麦SUSIBA2转录因子的编码序列。所得的转基因水稻品种从而包含编码HvSUSIBA2转录因子的非基因组核苷酸序列的转基因版本和编码OsSUSIBA2转录因子的基因组内源核苷酸序列。编码水稻SUSIBA2转录因子的这种基因组内源核苷酸序列包含包括激活区和抑糖区的水稻SUSIBA1启动子(OsSUSIBA1 p)的完整序列。

如本文所用的术语“过表达(overexpress/overexpression)”是指与在天然或野生型状态的水稻植株材料中，例如在水稻细胞中相比，例如基因转录的基因活性的水平较高；mRNA翻译成蛋白质的水平较高；和/或基因产物的生产水平较高。这些术语也可指水稻植株材料如水稻细胞中基因拷贝数增加和/或mRNA和/或基因产物的量增加。与对照水平相比，过表达可导致水稻细胞中25％、50％、100％、200％、500％、1000％、2000％或更高的水平。

“启动子”是控制或调节与启动子操作性地缔合的核苷酸序列(即编码序列)的转录的核苷酸序列。所述编码序列可编码多肽。通常，启动子是指含有RNA聚合酶II的结合位点并引导转录起始的核苷酸序列。通常，启动子位于相对于相应编码序列的编码区的起点而言的5'或上游。启动子区可包含其他充当基因表达的调节物的元件。启动子可包括例如组成型、诱导型、暂时调节型、发育调节型、化学调节型、组织优选型和/或组织特异性启动子。

如本文所用，“操作性地连接”或“操作性地缔合”是指所指示的元件在功能上彼此相关，并且通常也是物理相关的。因此，术语操作性地连接或操作性地缔合是指在单个核酸分子上的核苷酸序列是功能性缔合的。因此，操作性地连接到第二核苷酸序列的第一核苷酸序列意指第一核苷酸序列与第二核苷酸序列处于功能关系的情况。例如，如果启动子实现核苷酸序列的转录或表达，即核苷酸序列处于启动子的转录控制下，则启动子与核苷酸序列操作性地缔合。本领域技术人员将理解，控制序列如启动子不必与其操作性地缔合的核苷酸序列邻接，只要控制序列发挥引导其表达的功能即可。因此，例如，在启动子和核苷酸序列之间可存在间插的未翻译、但已转录的序列，并且所述核苷酸序列仍然可以可操作性地连接并且处于启动子的转录控制下。

如本文关于核苷酸序列或基因所用的“异源”是核苷酸序列或基因不与其被引入其中的水稻植株材料如宿主水稻细胞天然相关，包括天然存在的基因的非天然存在的多个拷贝。异源核苷酸序列或基因可任选地根据本领域熟知的技术和如本文进一步描述的技术进行密码子优化以在栽培稻中表达。在一些实施方案中，异源基因还涵盖由异源启动子和/或控制元件控制的内源基因，以实现比基因在包含内源基因的水稻中在野生型(内源)启动子和控制元件的控制下的正常或基线表达更高的基因表达，即所谓的过表达。

如本文所用，术语“内源”在关于核苷酸序列或基因使用时是指天然地作为其所处的水稻植株材料的基因组的一部分而存在的核苷酸序列或基因。内源核苷酸序列或基因在本文中有时被称为天然或野生型核苷酸序列或基因。

“基因组核苷酸序列”是指存在于水稻植株材料的基因组中，优选水稻植株材料的染色体中的核苷酸序列。

基因组核苷酸序列的“野生型版本”是指天然存在于水稻植株材料中的未修饰的基因组核苷酸序列。这与已经例如通过从水稻植株材料的基因组中去除基因组核苷酸序列的野生型版本的一部分进行修饰的基因组核苷酸序列形成对比。

在一个实施方案中，“水稻植株材料”为水稻植株。在另一实施方案中，水稻植株材料为水稻细胞，包括多个这样的水稻细胞。在另一实施方案中，水稻植株材料为水稻植株组织或器官，包括但不限于表皮；基本组织；维管组织，诸如木质部或韧皮部；分生组织，诸如顶端分生组织、侧生分生组织或居间分生组织；永久组织，诸如简单永久组织，包括例如薄壁组织、厚角组织、厚壁组织或表皮，复杂永久组织，包括例如木质部、韧皮部，或特殊或分泌组织。在再一实施方案中，水稻植株材料为水稻种子。

“序列同一性”是指两个核苷酸序列或两个肽或蛋白质序列之间的序列相似性。相似性是指两个最佳比对的核苷酸、肽或蛋白质序列在整个核苷酸或氨基酸比对窗口中不变的程度。同一性可容易地通过已知方法计算，所述方法包括但不限于以下中描述的那些：Computational Molecular Biology(Lesk,A.M.编)Oxford University Press，New York(1988)；Biocomputing:Informatics and Genome Projects(Smith,D.W.编)AcademicPress，New York(1993)；Computer Analysis of Sequence Data，第I部分(Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编)Humana Press，New Jersey(1994)；Sequence Analysis in MolecularBiology(von Heinje,G.编)Academic Press(1987)；以及Sequence Analysis Primer(Gribskov,M.和Devereux,J.编)Stockton Press，New York(1991)。对于序列比较，通常一个序列充当测试序列与之比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机中，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。序列比较算法随后基于指定的程序参数计算一个或多个测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。用于比对比较窗口的序列的最佳比对是本领域技术人员熟知的，并且可通过工具以及任选地通过算法的计算机化实施进行，所述工具诸如为Smith和Waterman的局部同源性算法、Needleman和Wunsch的同源性比对算法、Pearson和Lipman的相似性方法的搜索，所述算法诸如为可作为

Wisconsin

(Accelrys公司，San Diego,CA)的一部分获得的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA。测试序列和参考序列的比对区段的同一性分数是这两个比对序列共有的相同核苷酸或氨基酸的数目除以参考序列区段(即，整个参考序列或参考序列的较小的限定部分)中的核苷酸或氨基酸的总数。序列同一性百分比表示为同一性分数乘以100。

一个实施方案涉及一种改进水稻植株材料对生物胁迫的抗性的方法。所述方法包括在水稻植株材料中过表达FatB基因。

在一个实施方案中，过表达FatB基因包括由选自由ARP1启动子、H3F3启动子、HSP启动子、H2BF3启动子、CaMV 35S启动子、大麦SBEIIb启动子和异源FatB启动子组成的组的启动子替换FatB基因的启动子或其至少一部分。

在一个实施方案中，水稻植株材料为亚洲栽培稻植株材料或非洲栽培稻植株材料。在一个特定实施方案中，过表达FatB基因包括由紧穗野生稻FatB启动子替换亚洲栽培稻或非洲栽培稻FatB基因的启动子。

在一个实施方案中，生物胁迫为稻褐飞虱和/或稻瘟病菌。

实施例

本实施例表明，水稻FatB6的单一基因赋予对稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性。与日本晴(亚洲栽培稻，日本晴)相比，野生稻(紧穗野生稻)在其叶、叶鞘和茎中具有高油(三酰甘油)含量。野生稻中的油含量与FatB6基因的高表达相关。通过稳定转化实现的FatB6基因在日本晴中的过表达导致日本晴的叶、叶鞘和茎中的高油含量。重要的是，具有高油含量的转化水稻表现出对稻褐飞虱和稻瘟病菌的显著抗性。因此，FatB6基因经由高油含量在野生稻对稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性中发挥重要作用。所述基因可用于育种，以提高对虫害和病害的生物胁迫因素的抗性。

材料和方法

植株材料和生长条件

使野生稻(紧穗野生稻)、品种日本晴(粳稻)和转化系的水稻植株在人工气候室、温室或露地中生长。以与先前描述(Zhang等，2012)的相似方式进行露地栽培。应用人工气候室条件以模拟田间条件，但具有有限的高温。在人工气候室中，使水稻植株在具有含植株残体的有机土的圆筒形盆(高30cm，上部直径29cm且底部直径19cm)中生长。人工气候室生长管理类似于先前描述的人工气候室生长管理(Nalawade等，2012)，其中对水稻的设置进行了修改，即在30℃/21℃下14小时光照/10小时黑暗，恒定相对湿度为80％且光强度为400μmol光子m^-2s^-1。

寡核苷酸

在本实施例中使用的寡核苷酸列于表1中，并且购自西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)(St.Louis,MO,USA)。

表1-寡核苷酸

通过定量聚合酶链式反应(qPCR)进行的基因表达分析

根据先前的报道(Sun等，2005；Zhang等，2012；Jin等，2017a)进行RNA分离、cDNA合成和qPCR分析。简而言之，将来自不同组织的植株材料在液氮中研磨成细粉，并使用30mg植株材料，根据制造商的方案，通过Spectrum^TM植株总RNA试剂盒(西格玛-奥德里奇，St.Louis,MO,US)分离总RNA。所有样品都用DNase I(西格玛-奥德里奇，St.Louis,MO,US)处理以去除痕量的DNA污染。使用1μg的总RNA作为模板用于用Quanta qScript cDNA合成试剂盒(广达生物科学(Quanta Biosciences)，Gaitherburg,MD,USA)的cDNA合成。将合成的cDNA调节到5ng/μl的浓度，并将15ng用于qPCR分析。在20μl体积中进行具有至少90％扩增效率的qPCR反应，所述体积含有5μM特异性引物和SYBR Green PCR主混合物(应用生物系统(Applied Biosystems)，欧洲生物技术公司(Life Technologies Europe BV)，Stockholm，Sweden)。PCR程序由95℃的起始温度持续4分钟，然后在95℃下30秒和在60℃下30秒的35至40个循环组成。通过以0.05℃/秒的速度将温度从60℃升至95℃来产生熔融曲线。通过凝胶分析中的单一条带产物来验证qPCR特异性扩增。数据用比较C_t方法(Zhang等，2012)计算，并将单向ANOVA(Zhang等，2012)用于统计分析。使用Ubiquitin10(Jain等，2006)将通过qPCR得到的基因表达水平归一化。

水稻基因组DNA分离和启动子序列分析

使用如(Su等，2015)所述的CTAB方法从叶中分离水稻基因组DNA。日本晴金穗(紧穗野生稻)、短花(短花药野生稻)和CCDD(宽叶野生稻)的启动子区通过PCR扩增(引物参见表1)，并且通过DNASTAR lasergene 14分析。

质粒构建和水稻转化

根据先前开发的方案(Sun等，2003；Sun等，2005；Sun等，1998)进行质粒构建和一般分子克隆工序。克隆来自野生稻和日本晴的不同FatB基因，并将其融合到大麦SBEIIb启动子(HvSBEIIb p；Genbank登录号AF064563)的核苷酸1-936上。将融合的DNA片段在pCAMBIA 1301二元载体中克隆。遵循公开的方案(Hiei等，1994)，将质粒构建体用于农杆菌介导的水稻转化。后转化体的筛选基于潮霉素抗性和T-DNA插入的PCR测定进行。融合的大麦SBEIIb启动子的T₀系和日本晴FatB6系用于油含量和对稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性的详细研究。还构建了含有HvSBEIIb p:GUS的二元载体，并将其转化到日本晴。所有最终的构建体都通过在欧洲麦格根(Macrogen Europe)(Amsterdam,the Netherlands)进行DNA测序来验证，并在农杆菌转化到水稻之前将其转化到根癌农杆菌菌株EHA105中。

水稻中的油丰度观察和油含量测定

为了观察油丰度，将水稻叶和叶鞘以3pm分离，并在真空条件下，在含4％甲醛的pH7.4的1×PBS磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液中孵育15分钟，以固定组织细胞中的油体。然后在真空下用溶于1×PBS中的25μg ml^-1尼罗红的染料溶液将组织染色20分钟。用1×PBS洗涤三次之后，将组织置于载玻片上，在共聚焦显微镜下用488nm激发光对油滴进行荧光观察。为了测定油含量，根据Aslan等(2015)和Jin等(2017b)，遵循并进行油提取、薄层色谱(TLC)分离和气相色谱(GC)测量的方案。

对稻褐飞虱(褐飞虱)的抗性检测

自中国浙江省的稻田收集用于接种的稻褐飞虱，并将其在具有26℃和相对湿度70％下12小时光照(270μmol光子m^-2s^-1)/12小时黑暗的条件的人工气候室中保持在TN1植株上。转基因水稻植株对稻褐飞虱的抗性基本上通过如Du等(2009)先前描述的宿主选择测试在适当修改下来评价。将一株4个月大的转基因水稻植株与一株相同阶段的对照植株一起置于26℃下具有12小时光照(270μmol光子m^-2s^-1)/12小时黑暗的净室中。水稻植株以每分蘖大约2个龄若虫和2个成虫的比率被稻褐飞虱侵染。在侵染后2、7、14、21、28、35和44天记录转基因水稻或日本晴的每个分蘖上的稻褐飞虱的数量。进行生物学一式三份实验。

对稻瘟病菌(稻瘟病菌)的抗性检测

稻瘟病菌病原体最初从浙江省的稻田中收集并分离，并且在用于接种前在马铃薯葡萄糖琼脂(PAD)培养基中在25℃下培养。稻瘟病菌接种如前(Li等，2010)所述在稍加修改的情况下进行。从转基因系和对照的六至八周大的水稻植株上切下叶片段，并在叶片段末端置于覆盖有湿式过滤器的塑料板中。将稻瘟病菌孢子悬浮液的液滴(10μl)(大约1×10⁵个孢子/ml)小心接种在叶表面上。将接种的叶保持在处于26℃的具有12小时光照/12小时黑暗的生长室中。在接种后3至8天对病斑症状和大小拍照并测量。

结果和讨论

与日本晴相比，野生稻(紧穗野生稻)的叶和茎中具有更多的油(三酰甘油)

野生稻的叶和茎的表型性状与日本晴相似，不同之处在于野生稻在其叶鞘中可能具有更多的色素，参见图1A和图1B。叶鞘和茎中的油含量在尼罗红染色之后通过共聚焦显微镜检测，且在TLC分离之后通过GC定量检测。共聚焦显微镜图像显示，野生稻叶鞘细胞比日本晴具有更多的油滴，参见图2A和图2B，并且GC定量(参见图2C)表明野生稻叶鞘和茎中的油含量明显高于日本晴。

野生稻中的高油含量与野生稻中FatB6的高表达相关

为了阐明哪种基因负责野生稻中的高油含量，通过qPCR筛选参与野生稻中的油形成的五种关键基因，参见图3。有趣的是，FatB6的高表达与野生稻组织中的高油含量相关。由于粳稻的基因组序列是可获得的，因此使用所述基因组序列将所有三种FatB cDNA克隆到日本晴中。这些基因分别位于粳稻染色体2、6和11中，因此被定义为日本晴稻FatB2(NippFatB2)、FatB6(NippFatB6)和FatB11(NippFatB11)。

NippFatB2 cDNA(SEQ ID NO:41)

NippFatB2肽(SEQ ID NO:42)

NippFatB6 cDNA(SEQ ID NO:43)

NippFatB6肽(SEQ ID NO:44)

NippFatB11 cDNA(SEQ ID NO:45)

NippFatB11肽(SEQ ID NO:46)

使用日本晴序列，还克隆了相应的野生稻FatB cDNA，即紧穗野生稻FatB2(OeFatB2)、FatB6(OeFatB6)和FatB11(OeFatB11)。

OeFatB2 cDNA(SEQ ID NO:47)

OeFatB2肽(SEQ ID NO:48)

OeFatB6 cDNA(SEQ ID NO:49)

OeFatB6肽(SEQ ID NO:50)

OeFatB11 cDNA(SEQ ID NO:51)

OeFatB11肽(SEQ ID NO:52)

当在日本晴的茎和叶鞘中分析所有三种NippFatB的表达时，除了NippFatB6的表达稍高外，所有三种FatB基因在日本晴组织中的表达都非常低，参见图4。日本晴稻中的低油含量可能是由于FatB基因的低表达。因此，克隆日本晴和野生稻中FatB基因的启动子区以检测启动子序列是否不同，这导致FatB在野生稻和日本晴中的不同表达，特别是对于FatB6而言。使用PCR克隆，成功地获得NippFatB2、NippFatB6和NippFatB11以及OeFatB2和OeFatB6的启动子序列。SEQ ID NO:53-57中加下划线的核苷酸表示开放阅读框。

NippFatB2启动子(SEQ ID NO:53)

NippFatB6启动子(SEQ ID NO:54)

NippFatB11启动子(SEQ ID NO:55)

OeFatB2启动子(SEQ ID NO:56)

OeFatB6启动子(SEQ ID NO:57)

OeFatB6和NippFatB6的启动子序列的比对显示，在一些区域中，启动子序列确实彼此相差甚远。因此，推测野生稻和日本晴之间的油含量差异是由于由它们的不同启动子引起的FatB6的不同表达。

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

大多数

OeFatB6启动子序列

NippFatB6启动子序列

上文所示的共有FatB6启动子序列见于SEQ ID NO:69(没有任何核苷酸缺口)。

水稻FatB6赋予对稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性

野生稻对包括主要虫害稻褐飞虱和病害稻瘟病菌在内的大多数虫害和病害具备抗性(Fu等，2007)。假设野生稻中由FatB6引起的高油含量可显著赋予所述抗性。为了证明这个假设，FatB基因在日本晴背景下使用强启动子，大麦SBEIIb启动子过表达(Su等，2015)，以测试不同基因可以如何有效地增加日本晴稻中的油含量，并因此导致对虫害和病害的抗性。第一种可得到的转化体是具有NippFatB6的过表达的稻系，参见图5A和图5B。当在转化体中观察油丰度时，与对照相比，叶鞘中的油丰度高得多，参见图5A和图5B。使用相同的水稻来测试对稻褐飞虱和稻瘟病菌的抗性，并且所有三个生物学重复样品都显示对虫害(参见图6A至图6C)和病害(参见图7A至图7C)的显著抗性。

有趣的是，当FatB6的启动子区从另外两种野生稻短花(短花药野生稻)和CCDD(宽叶野生稻)分离，并与日本晴和金穗(紧穗野生稻)的FatB6启动子区比对时，发现所有三种野生稻都具备具有与35S启动子中的富CT基序相似的富CT基序的核苷酸序列(Pauli等，2004)，但在日本晴中并非如此，参见图9。富CT基序可能在野生稻中FatB6的高表达方面起作用。图10示出野生稻和日本晴中FatB6基因表达的分析，这支持了所述概念。

短花药野生稻FatB6启动子(SEQ ID NO:66)

ACAGAAATTTCGCTGGCCATGCACAATCTTCTCTTTGTCAAGGAGCTGGAATCCAAAATGATTGCTCGAAGATTTCGTGTAGATAGATAGAACCATCGGCCAGCAAAGGAGAGGGGAAAAAAAAAATGAAAAACGTCTTTTTGTGGGCCCCACCTGCACTGCACTGAGTTGACCAAGTTGACCATACCGCTCAGAGGGGGGGCATTTCCGTCCTTTCGTATAAACGTATACGAATACGTATCTCACACGCGCTCTGTATATATAGACGGTAACGGCTCCGCGAAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAGAAGAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAGTCGCGGCTGAACAGGGGAGGGGCGGCGATCTCCATCTGGCGAGCAGAGCAGGGAAGGGGAGGGGATCCTGGTGAGCATCCACATCCTTTTTCTGATTCATATCTCTCTCCCACCGGGAGTACTTTTGTCTGGAATTTGCTTGCATTAACCCTAGCTTCTCTTGTAGATCTGGAAGAAGCTCTTCTCTTAATTTCAGAGCCTTAACCTTAATACAAGTAACAGTTTGTTGTTTGTTCCCCCAAAAGTTTGCTGCGCGTTTTTTTAGCATCTCTTGATATGAACAAGAGGAACAAGCTGAATTTTTTCTTAGCTTTGGAAGCATTTACCGTCCCAGTATTTTCTCCTACCGGTAGTAGAATATTTTGTTTGATTGGAGGGTTGCCTTCTTTTGCTAAATTGAATCAAATGCTCTCGGATGTTTTTTAAAATTTCGGTGGACTCCTTTTGCCCCAAGGGAGGCCAGTTTTAGCAGCTGGATCCCGTGTTTTCATTTCAACTTCTTGTTTTCCTTGTCTCCATATATTTCTGATTGTTAACTCGGATTCTCTACCTCAAATATGTAATATCACACTTAAAGACAAATCCGGAATTTTAAGCATGCTATCATAGTATCATTAGATTCCCCCTTTACAGGGAAGAAAAGTTCTACATTTTGTGCTTTCGGTAGCTTTTAATTGATGCCATGTTTTTTAGACAATGTTAATTGATGCCATGTGACTATAAGGCACATTATATTGCGTTTCTGAATATATCACCTCATGAAACTGATAATTTTGTTGATTATTTGTTCAGTTTGCCCTTCTAGTGTGTAACTTCGAGCAAATTTGGACCCTGAGGCGCAGTTCAGTC

宽叶野生稻FatB6启动子(SEQ ID NO:67)

ACAGAAATTTCGCTGGCCATGCACAATCTTCTCTTTGTCAAAGAGCTGGAATCCAAAATGATTGCTCGAAGATTTCGTGTAGATAGATAGAACCATCGGCCAGCAAAGGAGAGGGGAACAAAAAGGAAAAAAGTCTTTTTGTGGGCCCCACCTGCACTGCACTGAGTTGACCAAATTGACCATACCGCTCAGAGGGGGGCATTTCCGTCCTTTCGTATAAACGTATACGAATACGTATCTCACACGCGCTCTGTATATATAGACGGTAACGGCTCCGCGAAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGACTCGCGGCTGAACAGGGGAGGGGCGGCGATCTCCATCTGGCGAGCAGAGCAGGGAAGGGGAGGGGATCCTGGTGAGCATCCACATCCTTTTTCTGATTCATATATCTCTCCCACCGGGAGTACTTTTGTCTGGAATTTGCTTGCGTTAACCCTAGCTTCTCTTGTAGATCTGGAAGAAGCTCTTCTCCTAATTTCAGAGCCTTAACCTTAATACAAGTAACAGTTTGTTGTTTGTTCCCCCAAAAGTTTGCTGCGCGTTTTTTTGGCATCTCTTGATATGAACAAGAGAAACAAGCTGAATTTTTTCTTAGCTTTGGAAGCATTTACCGTCCCAGTATTTTCTCCTACCGGTAGAATATTTTGTTTGATTGGAGGCTTGCCTTCTTTTGCTAAATCGAATCAAATGCTCTCGGATGTTTTTAAAATTTCGGTGGACTCCCTTTGCCCCAAGGGAGGCCAGTTTTAGCAGCTGGATCCCGTGTTTTCATTTCAACTTCTTGTTTTCCTTGTCTCCATATATTTCTGATTGTTAACTCGGATTCTCTACCTCAAATATGTAATATCACACTTTAAGACAAATCCGGAATTTTAAGCATGCTATCATAGTATCATTAGATTCCCCCTTTTACAGGGAAGAAAAGTTCTACATTTTGTGCTTTCGGTAGCTTTTAATTGATGCCATGTTTTTTAGACAATGTTAATTGATGCCATGTGACTATAGGGCACATTATATTGCGATTCTGAATATATCACCTCATGAAACTGATAATTTTGTTGATTATTTGTTCAGTTTGCCCTTCTAGTGTGTAACTTCGAGCAAATTTGGACCCTGAGGCGCAGTTCAGTC

图9中所示的共有FatB6启动子序列见于SEQ ID NO:68(没有任何核苷酸缺口)。

上述实施方案应被理解为是本发明的几个说明性实施例。本领域的技术人员应当理解，可以对实施方案做出各种修改、组合和变化，而不背离本发明的范围。具体地讲，在技术上可能的情况下，不同实施方案中的不同部分解决方案可以组合为其他配置。

参考文献

Aslan，S.，Hofvander，P.，Dutta，P.，Sitbon，F.&Sun，C.Transient silencing ofthe KASII genes is feasible in Nicotiana benthamiana for metabolicengineering of wax ester composition.Sci.Rep.5，11213(2015).

Du，B.，Zhang，W.，Liu,B.，Hu，J.，Wei，Z.，Shi，Z.，He，R.，Zhu，L.，Chen，R.，Han，B.&He G.Identification and characterization of Bph14，a gene conferringresistance to brown planthopper in rice.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106，22163-22168(2009).

Fu，X.-L.，Lu，Y.-G.，Liu X.-D.&Li，J.-Q.Progress on transferring elitegenes from non-AA genome wild rice into Oryza sativa through interspecifichybridization.Chinese J.Rice Sci.21，559-566(2007).

Hiei，Y.，Ohta，S.，Komari，T.&Kumashiro，T.Efficient transformation ofrice(Oryza sativa L.)mediated by Agrobacterium and sequence analysis of theboundaries of the T-DNA.Plant J.6，271-82(1994).

Jain，M.，Nijhawan，A.，Tyagi，A.K.&Khurana，J.P.Validation of housekeepinggenes as internal control for studying gene expression in rice byquantitative real-time PCR.Biochem.Biophys.Res.Commun.345，646-651(2006).

Jin，Y.，Fei，M.，Rosenquist，S.，Jin，L.，Gohil，S.，

C.，Olsson，H.，Persson，C.，

A.-S.，Fransson，G.，Ruan，Y.，

P.，Jansson，C.，Liu，C.，Andersson，R.&Sun，C.A dual-promoter Gene orchestrates the sucrose-coordinatedsynthesis of starch and fructan in barley.Mol.Plant 10，1556-1570 as a coverimage paper(2017a).

Jin，Y.，Hu，J.，Liu，X.，Ruan，Y.，Sun，C.&Liu，C.T-6b allocates moreassimilation product for oil synthesis and less for polysaccharide synthesisduring the seed development of Arabidopsis thaliana.Biotech.Biofuels 10，19(2017b).

Li，Y.，Yah，X.，Wang，H.，Liang，S.，Ma，W.-B.，Fang，M.-Y.，Talbot，N.-J.&WangZ.-Y.MoRic8 Is a novel component of G-protein signaling during plantinfection by the rice blast fungus Magnaporthe oryzae.Mol.Plant MicrobeInteract.23，317-331(2010).

Nalawade，S.，Nalawade，S.，Liu，C.，Jansson，C.&Sun，C.Development of anefficient tissue culture after crossing(TCC)system for transgenic improvementof barley as a bioenergy crop.Appl.Energy 91，405-411(2012).

Pauli，S.，Rothnie，H.-M.，Chen，G.，Xiaoyuan He，X.，&Hohn，T.The CauliflowerMosaic Virus 35S Promoter Extends into the Transcribed Region.Journal ofVirology 78，12120-12128(2004.

Sun，C.，Sathish，P.，Ahlandsberg，S.，Deiber，A.&Jansson，C.The two genesencoding starch-branching enzymes Ila and Ilb are differentially expressed inbarley.Plant Physiol.118，37-49(1998).

Sun，C.，Palmqvist，S.，Olsson，H.，Borén，M.，Ahlandsberg，S.&Jansson，C.Anovel WRKY transcription factor，SUSIBA2，participates in sugar signaling inbarley by binding to the sugar-responsive elements of the iso1 promoter.PlantCell 15，2076-2092(2003).

Sun，C.，

A.-S.，Olsson，H.，Mangelsen，E.&Jansson，C.Antisenseoligodeoxynucleotide inhibition as a potent strategy in plant biology：identification of SUSIBA2 as a transcriptional activator in plant sugarsignaling.Plant J.44，128-138(2005).

Su，J.，Hu，C.，Yah，X.，Jin，Y.，Chen，Z.，Guan，Q.，Wang，Y.，Zhong，D.，Jansson，C.，Wang，F.，Schnürer，A.&Sun，C.Expression of barley SUSIBA2 transcriptionfactor yields high-starch low-methane rice.Nature 523，602-606 and as afeatured paper(2015).

Zhang，M.-Z.，Fang，J.-H.，Yan，X.，Liu，J.，Bao，J.-S.，Fransson，G.，Andersson，R.，Jansson，C.，

P.&Sun，C.Molecular insights into how a deficiency ofamylose affects carbon allocation-carbohydrate and oil analysis and geneexpression profiling in the seeds of a rice waxy mutant.BMC Plant Biol.12，230(2012).

序列表

<110> 孙传信(Sun, Chuanxin)

<120> 抗生物胁迫的水稻植株材料

<130> HSJ102767P.WOP

<150> US 62/731,282

<151> 2018-09-14

<160> 69

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 1

gcggtaacca acttcgacat 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 2

ctgcattctc acttcggtca 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 3

ccgcgctctc cgtgttctc 19

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 4

gtgctgcgcc gcctcctt 18

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 5

tcggatggtt cgcggcgaag 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 6

gtcgtacatg cgccggatgg 20

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 7

ttctgccaaa gccaccgatt c 21

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 8

acggatgcga cgccaatacg 20

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 9

cctccatcca gtgtgaccat c 21

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 10

agcccatgtt cccctcgccc 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 11

cggtgcctca cagtgctcca 20

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 12

aacaccatac cgtcctggat g 21

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 13

caccagcatt ggcgccgaca 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 14

gcgttctcag ctgctgcgtg 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 15

gagctgaaat aggcccgtac 20

<210> 16

<211> 21

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 16

gaggattctt tgttgccatc g 21

<210> 17

<211> 22

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 17

ataggcccgt acttcaatgg tt 22

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 18

gagaaccagc catccatccg 20

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 19

gctgctacca aacaattcac aa 22

<210> 20

<211> 22

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 20

actccagctg aagcagatgg tt 22

<210> 21

<211> 29

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 21

gctctagaat ggcagggtct cttgccgcc 29

<210> 22

<211> 29

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 22

cggaattcct aggctaactt ttcactctg 29

<210> 23

<211> 28

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 23

gctctagaat ggctggttct cttgcggc 28

<210> 24

<211> 28

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 24

cggaattctc atgcactctc agctggga 28

<210> 25

<211> 29

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 25

gctctagaat ggcagggtct cttgccgcc 29

<210> 26

<211> 30

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 26

cggaattctt acgcgttctc agctgctgcg 30

<210> 27

<211> 28

<212> DNA

<213> 大麦(Hordeum vulgare)

<400> 27

gctctagact gcaggtcaac ggatcctt 28

<210> 28

<211> 28

<212> DNA

<213> 大麦(Hordeum vulgare)

<400> 28

gctctagaag ttctatttca ctcagggt 28

<210> 29

<211> 28

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 29

tttctagaat ggctggttct cttgcggc 28

<210> 30

<211> 28

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 30

atgaattctt gccggataaa ctacagaa 28

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 31

gtacatgtag gtcttgttta 20

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 32

cttctagctg atgctgcagg 20

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 33

acagaaattt cgctggccat 20

<210> 34

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 34

ctggcaattc accggttgtg 20

<210> 35

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 35

ttctcgtatc ctagcccata 20

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 36

cttctagctg atgctgcagg 20

<210> 37

<211> 21

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 37

acagaaattt cgctggccat g 21

<210> 38

<211> 20

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 38

ccacagacac tcaaattctc 20

<210> 39

<211> 21

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 39

acagaaattt cgctggccat g 21

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 40

ccacagacac tcaaattctc 20

<210> 41

<211> 897

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 41

atggcagggt ctcttgccgc ctcagcattc ttcccaggtc caggctcatc tcctgcagca 60

tcagctagaa gctccaagaa tgctgctgtt accggcgaat tgccggagaa tttgagtgtc 120

tgtggcattg tcgcaaagcc taacccacct cctgcagcca tgcaagtaaa ggcacaggct 180

caaacccttc ccaaggttaa tggtacgaag gttaacctca agacggtgaa gcctgacatg 240

gaggaaacgg tgcctcacag tgctccaaag acgttctata accaactgcc ggattggagc 300

atgcttcttg cggctattac aaccatcttc ctcgccgcag agaagcagtg gacactgctt 360

gattggaagc cgaagaaacc tgacatgctt gttgacacat ttggctttgg taggatcatc 420

caggacggta tggtgtttag gcagaacttc atgattcggt cctacgagat tggcgctgat 480

cgtacagctt ctatagagac attgatgaat catttacagg aaacggctct taaccatgta 540

aggactgctg gtcttcttgg agatggtttt ggggctacac cggagatgag caaacggaac 600

ttgatatggg ttgtcagcaa aatccagctt cttgttgagc aataccccgc atggggagat 660

atggttcaag ttgacacatg ggtcgctgct gctggcaaaa atggcatgcg tcgagactgg 720

catgttcgtg actacaactc tggccgaaca atcttgagag ctacaagtgt ttgggtgatg 780

atgcacaaga aaactagaag actttcaaaa atgccagatg aagttagagc tgaaataggc 840

ccatatttca atgaccgttc agctataaca gaggagcaga gtgaaaagtt agcctag 897

<210> 42

<211> 298

<212> PRT

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 42

Met Ala Gly Ser Leu Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Gly Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Pro Ala Ala Ser Ala Arg Ser Ser Lys Asn Ala Ala Val Thr Gly

20 25 30

Glu Leu Pro Glu Asn Leu Ser Val Cys Gly Ile Val Ala Lys Pro Asn

35 40 45

Pro Pro Pro Ala Ala Met Gln Val Lys Ala Gln Ala Gln Thr Leu Pro

50 55 60

Lys Val Asn Gly Thr Lys Val Asn Leu Lys Thr Val Lys Pro Asp Met

65 70 75 80

Glu Glu Thr Val Pro His Ser Ala Pro Lys Thr Phe Tyr Asn Gln Leu

85 90 95

Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala

100 105 110

Ala Glu Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Lys Lys Pro Asp

115 120 125

Met Leu Val Asp Thr Phe Gly Phe Gly Arg Ile Ile Gln Asp Gly Met

130 135 140

Val Phe Arg Gln Asn Phe Met Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp

145 150 155 160

Arg Thr Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala

165 170 175

Leu Asn His Val Arg Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ala

180 185 190

Thr Pro Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Ser Lys Ile

195 200 205

Gln Leu Leu Val Glu Gln Tyr Pro Ala Trp Gly Asp Met Val Gln Val

210 215 220

Asp Thr Trp Val Ala Ala Ala Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp

225 230 235 240

His Val Arg Asp Tyr Asn Ser Gly Arg Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser

245 250 255

Val Trp Val Met Met His Lys Lys Thr Arg Arg Leu Ser Lys Met Pro

260 265 270

Asp Glu Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Asn Asp Arg Ser Ala

275 280 285

Ile Thr Glu Glu Gln Ser Glu Lys Leu Ala

290 295

<210> 43

<211> 1284

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 43

atggctggtt ctcttgcggc gtctgcattc ttccctgtcc cagggtcttc ccctgcagct 60

tcggctagaa gctctaagaa cacaaccggt gaattgccag agaatttgag tgtccgcgga 120

atcgtcgcga agcctaatcc gtctccaggg gccatgcaag tcaaggcgca ggcgcaagcc 180

cttcctaagg ttaatggaac caaggttaac ctgaagacta caagcccaga caaggaggat 240

ataataccgt acactgctcc gaagacattc tataaccaat tgccagactg gagcatgctt 300

cttgcagctg tcacgaccat tttcctggca gctgagaagc agtggactct gcttgactgg 360

aagccgaaga agcctgacat gctggctgac acattcggct ttggtaggat catccaagac 420

gggctggtgt ttaggcaaaa cttcttgatt cggtcctacg agattggtgc tgatcgtaca 480

gcttctattg agacattaat gaatcattta caggaaacag ctctgaacca tgtgaaaact 540

gctggtctct taggtgatgg ttttggtgct acgccggaga tgagcaaacg gaacttaata 600

tgggttgtca gcaaaattca gcttcttgtt gagcgatacc catcatgggg agatatggtc 660

caagttgaca catgggtagc tgctgctggc aaaaatggca tgcgtcgaga ttggcatgtt 720

cggaactaca actctggtca aacaatcttg agggctacaa gtgtttgggt gatgatgaat 780

aagaacacta gaagactttc aaaaatgcca gatgaagtta gagctgaaat aggcccgtat 840

ttcaatggcc gttctgctat atcagaggag cagggtgaaa agttgcctaa gccagggacc 900

acatttgatg gcgctgctac caaacaattc acaagaaaag ggcttactcc gaagtggagt 960

gaccttgatg tcaaccagca tgtgaacaat gtgaagtata ttggttggat acttgagagt 1020

gctccaattt cgatactgga gaagcacgag cttgcaagca tgaccttgga ttacaggaag 1080

gagtgtggcc gtgacagtgt gcttcagtcg cttaccgctg tttcaggtga atgcgatgat 1140

ggcaacacag aatcctccat ccagtgtgac catctgcttc agctggagtc cggagcagac 1200

attgtgaagg ctcacacaga gtggcgaccg aagcgagctc agggcgaggg gaacatgggc 1260

tttttcccag ctgagagtgc atga 1284

<210> 44

<211> 427

<212> PRT

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 44

Met Ala Gly Ser Leu Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Val Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Pro Ala Ala Ser Ala Arg Ser Ser Lys Asn Thr Thr Gly Glu Leu

20 25 30

Pro Glu Asn Leu Ser Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Asn Pro Ser

35 40 45

Pro Gly Ala Met Gln Val Lys Ala Gln Ala Gln Ala Leu Pro Lys Val

50 55 60

Asn Gly Thr Lys Val Asn Leu Lys Thr Thr Ser Pro Asp Lys Glu Asp

65 70 75 80

Ile Ile Pro Tyr Thr Ala Pro Lys Thr Phe Tyr Asn Gln Leu Pro Asp

85 90 95

Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Val Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu

100 105 110

Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Lys Lys Pro Asp Met Leu

115 120 125

Ala Asp Thr Phe Gly Phe Gly Arg Ile Ile Gln Asp Gly Leu Val Phe

130 135 140

Arg Gln Asn Phe Leu Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Thr

145 150 155 160

Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn

165 170 175

His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ala Thr Pro

180 185 190

Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Ser Lys Ile Gln Leu

195 200 205

Leu Val Glu Arg Tyr Pro Ser Trp Gly Asp Met Val Gln Val Asp Thr

210 215 220

Trp Val Ala Ala Ala Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp His Val

225 230 235 240

Arg Asn Tyr Asn Ser Gly Gln Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser Val Trp

245 250 255

Val Met Met Asn Lys Asn Thr Arg Arg Leu Ser Lys Met Pro Asp Glu

260 265 270

Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Asn Gly Arg Ser Ala Ile Ser

275 280 285

Glu Glu Gln Gly Glu Lys Leu Pro Lys Pro Gly Thr Thr Phe Asp Gly

290 295 300

Ala Ala Thr Lys Gln Phe Thr Arg Lys Gly Leu Thr Pro Lys Trp Ser

305 310 315 320

Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp

325 330 335

Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ile Ser Ile Leu Glu Lys His Glu Leu Ala

340 345 350

Ser Met Thr Leu Asp Tyr Arg Lys Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu

355 360 365

Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Gly Glu Cys Asp Asp Gly Asn Thr Glu

370 375 380

Ser Ser Ile Gln Cys Asp His Leu Leu Gln Leu Glu Ser Gly Ala Asp

385 390 395 400

Ile Val Lys Ala His Thr Glu Trp Arg Pro Lys Arg Ala Gln Gly Glu

405 410 415

Gly Asn Met Gly Phe Phe Pro Ala Glu Ser Ala

420 425

<210> 45

<211> 1278

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 45

atggcagggt ctcttgccgc ctcagcattc ttcccaggtc caggctcatc tcctgcagca 60

tcagctagaa gctccaagaa tgctgctgtt accggcgaat tgccggagaa tttgagtgtc 120

cgtggcattg tcgcaaagcc taacccacct cctgcagcca tgcaagtaaa ggcacaggct 180

caaacccttc ccaaggttaa tggtacgaag gttaacctca agacggtgaa gcctgacatg 240

gaggaaacgg tgccttacag tgctccaaag acgttctata accaactgcc ggattggagc 300

atgcttcttg cggctattac aaccatcttc cttgccgcag agaagcagtg gacactgctt 360

gattggaagc caaagaaacc tgacatgctt gttgacacat ttggctttgg taggattatc 420

caggacggta tggtgtttag gcagaacttc atgattcggt cctacgagat tggtgctgat 480

cgtacagctt ctatagagac attgatgaat catttacagg aaacagctct taaccatgtg 540

aggactgctg gtcttcttgg agatggtttt ggggctacac cggagatgag caaacggaac 600

ttgatatggg ttgtcagcaa aatccagctt cttgttgagc aataccccgc atggggagat 660

acggttcaag ttgacacatg ggttgctgct gctggcaaaa atggcatgcg tcgagactgg 720

catgttcgtg actacaactc tggccgaaca atcttgagag ctacaagtgt ttgggtgatg 780

atgcacaaga aaactagaag actttcaaaa atgccagatg aagttagagc tgaaataggc 840

ccatatttca atgaccgttc agctataaca gaggagcaga gtgaaaagtt agccaagaca 900

ggaaataaag ttggtgatga tgctacagag caattcataa gaaaggggct cactcctaga 960

tggggtgacc tcgatgtcaa tcagcatgtg aacaatgtta aatatattgg gtggatcctt 1020

gagagtgctc caatttcagt actggagaag catgagcttg caagcatgac cctggattac 1080

aggaaggagt gtggtcgaga cagcgtgctg caatcactta ccaccgtgtc aggggaatgc 1140

accagcattg gcgccgacaa gcaggcttct gccatccagt gcgaccatct tcttcagctt 1200

gagtcaggag ctgatattgt gaaggcacac acagagtggc gaccaaagcg atcgcacgca 1260

gcagctgaga acgcgtaa 1278

<210> 46

<211> 425

<212> PRT

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 46

Met Ala Gly Ser Leu Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Gly Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Pro Ala Ala Ser Ala Arg Ser Ser Lys Asn Ala Ala Val Thr Gly

20 25 30

Glu Leu Pro Glu Asn Leu Ser Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Asn

35 40 45

Pro Pro Pro Ala Ala Met Gln Val Lys Ala Gln Ala Gln Thr Leu Pro

50 55 60

Lys Val Asn Gly Thr Lys Val Asn Leu Lys Thr Val Lys Pro Asp Met

65 70 75 80

Glu Glu Thr Val Pro Tyr Ser Ala Pro Lys Thr Phe Tyr Asn Gln Leu

85 90 95

Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala

100 105 110

Ala Glu Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Lys Lys Pro Asp

115 120 125

Met Leu Val Asp Thr Phe Gly Phe Gly Arg Ile Ile Gln Asp Gly Met

130 135 140

Val Phe Arg Gln Asn Phe Met Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp

145 150 155 160

Arg Thr Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala

165 170 175

Leu Asn His Val Arg Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ala

180 185 190

Thr Pro Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Ser Lys Ile

195 200 205

Gln Leu Leu Val Glu Gln Tyr Pro Ala Trp Gly Asp Thr Val Gln Val

210 215 220

Asp Thr Trp Val Ala Ala Ala Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp

225 230 235 240

His Val Arg Asp Tyr Asn Ser Gly Arg Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser

245 250 255

Val Trp Val Met Met His Lys Lys Thr Arg Arg Leu Ser Lys Met Pro

260 265 270

Asp Glu Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Asn Asp Arg Ser Ala

275 280 285

Ile Thr Glu Glu Gln Ser Glu Lys Leu Ala Lys Thr Gly Asn Lys Val

290 295 300

Gly Asp Asp Ala Thr Glu Gln Phe Ile Arg Lys Gly Leu Thr Pro Arg

305 310 315 320

Trp Gly Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile

325 330 335

Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ile Ser Val Leu Glu Lys His Glu

340 345 350

Leu Ala Ser Met Thr Leu Asp Tyr Arg Lys Glu Cys Gly Arg Asp Ser

355 360 365

Val Leu Gln Ser Leu Thr Thr Val Ser Gly Glu Cys Thr Ser Ile Gly

370 375 380

Ala Asp Lys Gln Ala Ser Ala Ile Gln Cys Asp His Leu Leu Gln Leu

385 390 395 400

Glu Ser Gly Ala Asp Ile Val Lys Ala His Thr Glu Trp Arg Pro Lys

405 410 415

Arg Ser His Ala Ala Ala Glu Asn Ala

420 425

<210> 47

<211> 1083

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 47

atggctggtt ctcttgcggc gtctgcattc ttccctagcc cagggtcttc ccctgcagca 60

tcgactagaa gttctaagaa tacaaccagt gaattgccag agaatttgag tgtccgtgga 120

atcgtcgcga agcctaaccc gcctccgggg gccatgcaag tcaaggcgca agcgcaagcc 180

cttcccaagg ttaatggaac caaggttaac ctgaagacta caagcccaga gaaggaggat 240

acaataccgt acactgctcc gaagacgttc tataaccaac tgccagactg gagcatgctt 300

cttgcagctg tcacaaccat tttcctggca gctgagaagc aatggactct gcttgactgg 360

aagccgaaga agcctgacat gctggctgac acattcagct ttggtaggat tatccaagac 420

gggctggtgt ttaggcaaaa cttcttgatt cggtcctacg agattggtgc tgatcgtaca 480

gcttctatag agacattaat gaatcattta caggaaacag ctctgaacca tgtgaaaact 540

gctggtctcc taggtgatgg ttttggtgct acgccggaga tgagcaaacg gaacttaata 600

tgggttgtca gcaaaattca gcttcttgtt gagcgatacc catcatgggg agatatggtc 660

caagttgaca catgggtagc tgctgctggc aaaaatggca tgcgtcgaga ttggcatgtt 720

tgtgactaca actctggtca aacaatcttg agggctacaa gtgtttgggt gatgatgaat 780

aagaacacta gaagactttc aaaaatgcca gatgaagtta gagctgaaat aggcccgtac 840

ttcaatggtt gttccgctat aacagaggag cagtgtgaaa agttgcctaa gccagggacc 900

acatttgatg gcactgctac caaacaattc acaagaaaag ggcttactcc gaagtggagt 960

gaccttgatg tcaaccagca tgtgaacaat gtgaagtata tcggatggat ggctggttct 1020

cttgcggcgt ctgcattctt ccctagccca gggcgagggg aacatgggtt ttttcccagc 1080

tga 1083

<210> 48

<211> 360

<212> PRT

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 48

Met Ala Gly Ser Leu Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Ser Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Pro Ala Ala Ser Thr Arg Ser Ser Lys Asn Thr Thr Ser Glu Leu

20 25 30

Pro Glu Asn Leu Ser Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Asn Pro Pro

35 40 45

Pro Gly Ala Met Gln Val Lys Ala Gln Ala Gln Ala Leu Pro Lys Val

50 55 60

Asn Gly Thr Lys Val Asn Leu Lys Thr Thr Ser Pro Glu Lys Glu Asp

65 70 75 80

Thr Ile Pro Tyr Thr Ala Pro Lys Thr Phe Tyr Asn Gln Leu Pro Asp

85 90 95

Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Val Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu

100 105 110

Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Lys Lys Pro Asp Met Leu

115 120 125

Ala Asp Thr Phe Ser Phe Gly Arg Ile Ile Gln Asp Gly Leu Val Phe

130 135 140

Arg Gln Asn Phe Leu Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Thr

145 150 155 160

Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn

165 170 175

His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ala Thr Pro

180 185 190

Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Ser Lys Ile Gln Leu

195 200 205

Leu Val Glu Arg Tyr Pro Ser Trp Gly Asp Met Val Gln Val Asp Thr

210 215 220

Trp Val Ala Ala Ala Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp His Val

225 230 235 240

Cys Asp Tyr Asn Ser Gly Gln Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser Val Trp

245 250 255

Val Met Met Asn Lys Asn Thr Arg Arg Leu Ser Lys Met Pro Asp Glu

260 265 270

Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Asn Gly Cys Ser Ala Ile Thr

275 280 285

Glu Glu Gln Cys Glu Lys Leu Pro Lys Pro Gly Thr Thr Phe Asp Gly

290 295 300

Thr Ala Thr Lys Gln Phe Thr Arg Lys Gly Leu Thr Pro Lys Trp Ser

305 310 315 320

Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp

325 330 335

Met Ala Gly Ser Leu Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Ser Pro Gly Arg

340 345 350

Gly Glu His Gly Phe Phe Pro Ser

355 360

<210> 49

<211> 1284

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 49

atggctggtt ctcttgcagc gtctgcattc ttccctggcc cagggtcttc ccctgcagca 60

tcagctagaa gttctaagaa cacaaccggt gaattgccag agaatttgag tgtccgcgga 120

atcgttgcga agcctaatcc gcctccggga gccatgcaag tcaaggcgca ggcgcaagcc 180

cttcctaagg ttaatggaac caaggttaac ctgaagacta ctagcccaga caaggaggat 240

acaataccat acactgctcc gaagacattc tataaccaat tgccagactg gagcatgctt 300

cttgcagctg tcacgaccat tttcctggca gctgagaagc aatggactct gcttgactgg 360

aagccgaaga agcctgacat gctggctgac acatttggct ttggtaggat catccaagat 420

gggctggtgt ttaggcaaaa cttcctgatt cggtcctacg aaattggtgc tgatcgtaca 480

gcttctatag agacattaat gaatcattta caggaaacag cactgaacca tgtgaaaact 540

gctggtctcc taggtgatgg ttttggtgct acgccggaga tgagcaaacg gaacttaata 600

tgggttgtca gcaaaattca gcttcttgtt gagcgatacc catcatgggg agatatggtc 660

caagttgaca catgggtagc tgctgctggc aaaaatggca tgcgtcgaga ttggcatgtt 720

tgtgactaca actctggtca aacaatcttg agggctacaa gtgtttgggt gatgatgaat 780

aagaacacta gaagactttc aaaaatgcca gatgaagtta gagctgaaat aggcccgtac 840

ttcaatggtt gttccgctat aacagaggag cagtgtgaaa agttgcctaa gccagggacc 900

acatttgatg gcactgctac caaacaattc acaagaaaag ggcttactcc gaagtggagt 960

gaccttgatg tcaaccagca tgtgaacaat gtgaagtata ttggatggat acttgagagt 1020

gctccaattt ccatactgga gaagcacgag cttgcaagca tgaccttgga ttacaggaag 1080

gagtgtggcc gtgacagtgt gcttcagtca cttaccaccg tatcaggtga atgtgtcgat 1140

ggcaacaaag aatcctccat ccagtgtaac catctgcttc agctggagtc cggagcagac 1200

attgtgaagg ctcacacaga gtggcgacca aagcgagcgc agggcgaggg gaacatgggt 1260

tttttcccag ctgagagcgc atga 1284

<210> 50

<211> 427

<212> PRT

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 50

Met Ala Gly Ser Leu Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Gly Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Pro Ala Ala Ser Ala Arg Ser Ser Lys Asn Thr Thr Gly Glu Leu

20 25 30

Pro Glu Asn Leu Ser Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Asn Pro Pro

35 40 45

Pro Gly Ala Met Gln Val Lys Ala Gln Ala Gln Ala Leu Pro Lys Val

50 55 60

Asn Gly Thr Lys Val Asn Leu Lys Thr Thr Ser Pro Asp Lys Glu Asp

65 70 75 80

Thr Ile Pro Tyr Thr Ala Pro Lys Thr Phe Tyr Asn Gln Leu Pro Asp

85 90 95

Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Val Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu

100 105 110

Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Lys Lys Pro Asp Met Leu

115 120 125

Ala Asp Thr Phe Gly Phe Gly Arg Ile Ile Gln Asp Gly Leu Val Phe

130 135 140

Arg Gln Asn Phe Leu Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Thr

145 150 155 160

Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn

165 170 175

His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ala Thr Pro

180 185 190

Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Ser Lys Ile Gln Leu

195 200 205

Leu Val Glu Arg Tyr Pro Ser Trp Gly Asp Met Val Gln Val Asp Thr

210 215 220

Trp Val Ala Ala Ala Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp His Val

225 230 235 240

Cys Asp Tyr Asn Ser Gly Gln Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser Val Trp

245 250 255

Val Met Met Asn Lys Asn Thr Arg Arg Leu Ser Lys Met Pro Asp Glu

260 265 270

Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Asn Gly Cys Ser Ala Ile Thr

275 280 285

Glu Glu Gln Cys Glu Lys Leu Pro Lys Pro Gly Thr Thr Phe Asp Gly

290 295 300

Thr Ala Thr Lys Gln Phe Thr Arg Lys Gly Leu Thr Pro Lys Trp Ser

305 310 315 320

Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp

325 330 335

Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ile Ser Ile Leu Glu Lys His Glu Leu Ala

340 345 350

Ser Met Thr Leu Asp Tyr Arg Lys Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu

355 360 365

Gln Ser Leu Thr Thr Val Ser Gly Glu Cys Val Asp Gly Asn Lys Glu

370 375 380

Ser Ser Ile Gln Cys Asn His Leu Leu Gln Leu Glu Ser Gly Ala Asp

385 390 395 400

Ile Val Lys Ala His Thr Glu Trp Arg Pro Lys Arg Ala Gln Gly Glu

405 410 415

Gly Asn Met Gly Phe Phe Pro Ala Glu Ser Ala

420 425

<210> 51

<211> 1284

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 51

atggctggtt ctcttgcggc gtctgcattc ttccctggcc cagggtcttc ccctgcagca 60

tcagctagaa gttctaagaa cacaaccggt gaattgccag agaatttgag tgtccgcgga 120

atcgttgcga agcctaatcc gcctccggga gccatgcaag tcaaggcgca ggcgcaagcc 180

cttcctaagg ttaatggaac caaggttaac ctgaagacta ctagcccaga caaggaggat 240

acaataccgt acactgctcc gaagacgttc tataaccaat tgccagactg gagcatgctt 300

cttgcagctg tcacgaccat tttcctggca gctgagaagc aatggactct gcttgactgg 360

aagccgaaga agcctgacat gctggctgac acatttggct ttggtaggat catccaagat 420

gggctggtgt ttaggcaaaa cttcctgatt cggtcctacg aaattggtgc tgatcgtaca 480

gcttctatag agacattaat gaatcattta caggaaacag cactgaacca tgtgaaaact 540

gctggtctcc taggtgatgg ttttggtgct acaccggaga tgagcaaacg gaacttaata 600

tgggttgtca gcaaaattca gcttcttgtt gagcgatacc catcatgggg agatatggtc 660

caagttgaca cgtgggtagc tgctgctggc aaaaatggca tgcgtcgaga ttggcatgta 720

cgggactaca actctggtca aacaatcttg agggctacaa gtgtttgggt gatgatgaat 780

aagaacacta gaagactttc aaaaatgcca gatgaagtta gagctgaaat aggcccgtac 840

ttcaatggtc gttctgttat cacagaggag cagggtgaaa agttgcctaa gccagggacc 900

acatttgatg gcgctgctac caaacaattc acaagaaaag ggcttactcc aaagtggagt 960

gaccttgatg tcaaccagca tgtgaacaat gtgaagtata ttggatggat acttgagagt 1020

gctccaattt cgatactgga gaagcacgag cttgcaagca tgaccttgga ttacaggaag 1080

gagtgtggcc gtgacagtgt gcttcagtca cttaccaccg tatcaggtga atgtgtcgat 1140

ggcaacaaag aatcctccat ccagtgtaac catctgcttc agctggagtc cggagcagac 1200

attgtgaagg ctcacacaga gtggcgacca aagcgagcgc agggcgaggg gaacatgggt 1260

tttttcccag ctgagagcgc atga 1284

<210> 52

<211> 427

<212> PRT

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 52

Met Ala Gly Ser Leu Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Gly Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Pro Ala Ala Ser Ala Arg Ser Ser Lys Asn Thr Thr Gly Glu Leu

20 25 30

Pro Glu Asn Leu Ser Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Asn Pro Pro

35 40 45

Pro Gly Ala Met Gln Val Lys Ala Gln Ala Gln Ala Leu Pro Lys Val

50 55 60

Asn Gly Thr Lys Val Asn Leu Lys Thr Thr Ser Pro Asp Lys Glu Asp

65 70 75 80

Thr Ile Pro Tyr Thr Ala Pro Lys Thr Phe Tyr Asn Gln Leu Pro Asp

85 90 95

Trp Ser Met Leu Leu Ala Ala Val Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu

100 105 110

Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Lys Lys Pro Asp Met Leu

115 120 125

Ala Asp Thr Phe Gly Phe Gly Arg Ile Ile Gln Asp Gly Leu Val Phe

130 135 140

Arg Gln Asn Phe Leu Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Thr

145 150 155 160

Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn

165 170 175

His Val Lys Thr Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ala Thr Pro

180 185 190

Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Ser Lys Ile Gln Leu

195 200 205

Leu Val Glu Arg Tyr Pro Ser Trp Gly Asp Met Val Gln Val Asp Thr

210 215 220

Trp Val Ala Ala Ala Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp His Val

225 230 235 240

Arg Asp Tyr Asn Ser Gly Gln Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser Val Trp

245 250 255

Val Met Met Asn Lys Asn Thr Arg Arg Leu Ser Lys Met Pro Asp Glu

260 265 270

Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Asn Gly Arg Ser Val Ile Thr

275 280 285

Glu Glu Gln Gly Glu Lys Leu Pro Lys Pro Gly Thr Thr Phe Asp Gly

290 295 300

Ala Ala Thr Lys Gln Phe Thr Arg Lys Gly Leu Thr Pro Lys Trp Ser

305 310 315 320

Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp

325 330 335

Ile Leu Glu Ser Ala Pro Ile Ser Ile Leu Glu Lys His Glu Leu Ala

340 345 350

Ser Met Thr Leu Asp Tyr Arg Lys Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu

355 360 365

Gln Ser Leu Thr Thr Val Ser Gly Glu Cys Val Asp Gly Asn Lys Glu

370 375 380

Ser Ser Ile Gln Cys Asn His Leu Leu Gln Leu Glu Ser Gly Ala Asp

385 390 395 400

Ile Val Lys Ala His Thr Glu Trp Arg Pro Lys Arg Ala Gln Gly Glu

405 410 415

Gly Asn Met Gly Phe Phe Pro Ala Glu Ser Ala

420 425

<210> 53

<211> 1660

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 53

gtacatgtag gtcttgttta gatcccaaaa aattttagcc aaaacctcac atcaaatatt 60

tggacacatg cacccctacc agtgtgtgga ggcattgcat acacgaaaca tggaaaagga 120

atcaacttga gaggttagac ctgctagctc tactaggtct ggatggtcat gcattttttt 180

ttgaaaaaaa ccacgctgca agctcgacag cctcaacctc aatggcaacc atgacaataa 240

tatgcatgac aatggtgtag gagaaaagac acgtcgataa ccaaagggcg cggctgcgca 300

tacaaaggcg gagagaagga acgatggtgg ctcaaaaaga aagagcgtcg gtggcagtgg 360

tgcgtggagc gacactaaag ttagtggttg ctgatggtct cacacaatcc ctaatcgaaa 420

tatttatttt ttttcactta gtattgctga tccgtgggcc accagccaat cataaagaaa 480

aatgttgaga taaaaggtgg agtatcttcc ccttccttcc ctttttgact cgaaaaaaaa 540

aagcgtcggt ggcggccgtg cgtgtaacaa cactaaagtt agtggttgct ggtggtctga 600

cacaatccct aatcaagttt gataataata ataatttatt tcctcttatt agtattgctg 660

atgcgtgggc caccaatcaa tcgtaaagaa aaaaaatgtt gagataaaag gtgggggtat 720

cttctccttc tctttttttt tggctaaaat aaaagtggtt tctggtagtc tgacacaatc 780

tctaatcgaa atatttattt ttttctctta gtattgctga tacgtgggcc accagccaat 840

aataaagaaa aaaaatgtta gagataaaag gcggagagta tcttcccctt cctttttttt 900

ggcgtaaatg aaagaaaaga gaaaatctcc cgtcgtctcc ttccttgcgc caagaaagac 960

gagccgcggc tcaacaccgg aggggagggg cgccgatctc catcgccaag gagagcagag 1020

caggggaggg gatcctggtg agcctcctct tcctgattca tctctctccc attctagctt 1080

cgggggacta cttttgcctg gaatttgctc gcgttcgttc gtgcgttcgt tcgttaaccc 1140

tagcttcttc tcttctagat ctggaggaag ctcttctcct ccttaatttc agagccttaa 1200

tacaagtagt aacagtttaa cctcccccat gtcccaagtt ggatccgccc ctgcgagttc 1260

cgatattggg tcctcccaat tctcaatgcc attttgttca tcggggggca tatggttcat 1320

ttttgcctgc attgattcaa atgtggtttc gaatcgtttg tgaaattcgc gggtgtactt 1380

gtttatgata catgaggcct tttttccccc atgaggaggc aaacttttta gtgggtggat 1440

ccactagttc atgcctcaat tttttttctc ctcttttaag ttttccaaag agctacattg 1500

ttgtaaagtg tctgatacaa ttgattgttt attcaggtta gcgcttttgg cgtgtgattg 1560

atttctaaac gaattttggg ccgtgagggg aagttcaatc atggcagggt ctcttgccgc 1620

ctcagcattc ttcccaggtc caggctcatc tcctgcagca 1660

<210> 54

<211> 1541

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 54

acagaaattt cgctggccat gcacataatc ttctctttgt caaagagctg gaatccaaaa 60

tgattgctcg aagatttcgt gaagatagat agaaccatcg gctagcaaag gagaggaaat 120

aaaaaaacaa aaaaaaagtt tttttgtggg ctccaccttg cgctgcactg agctgaccaa 180

attgaccata ccgcacagag actgagggag gggcacttcc gtcatttcgt ataagcgtat 240

acgaatacgt atctcatacg cgctctgtat atatagacgg taacggctcc gcgtcgtgtg 300

agttggcgag cccgaggagc ggaggcggcc acaagtctaa tccgcgtcgt ctgcgcgttc 360

gtgggcgagg aggagaaaga agaggaggaa gagagggaag ggggcttgat ttgatttggg 420

cgcgtctcgt ggagtatccg gtgagttctt ggcgatctgg cgaggcgagt gatgagtgat 480

tcctgctgct gctgggggat tttggcgtga ttttcgttgg ttgcattttg tttctttttt 540

tttgtatcga tttgttggag ctttattcgg tagatctggt cgattccatg gtgagttgta 600

tcggcgccgg agtgatagct gattctgttt ttttgtgtga tttttttttt gttttggaaa 660

tagggtttgt gtcgaattga gggcattttt tttccttagg caatgcagga tttcgttttg 720

tatgtttttg cgtggaatgg atatgaacag acctcgaaca aatggaagaa tttgtatttt 780

gtatgatgga ttgcaatgcg atacttgttt tggggcgtga ttcgattgaa ataaatgaaa 840

tattagagtt attttgggat tcctgtttgc tgcgcctttt tttttagcat ttcttgatat 900

gaacaagaga agaagggctg aatttttttc ttagctttgg aggcatttac tgtcccagta 960

ttttctccta ccggaagcag aatattttgt ttgattggag ggttgcctcc ctttgccaaa 1020

ttgaatcaaa tgttctcgga tgttttaaaa tttccgtgga ctctttttgc cccaggggag 1080

accgctttta gcagctggat cccgtgtttt catttcaagt tcttgttttc ctagtctcca 1140

tatatttctg attgttaact cgtattctct acctcacata tgcaaaatca cacttgcgtc 1200

gttctgtaat tagttagatt ctgcaagaaa aatccggaat tttcaagcat gctagtagtt 1260

ttaaattgat gccatgtttt ttagacaatg ttaattgatg ccatatgact ataggacaca 1320

ttatattgcg tttctgaata taccacctca tgaaactcat aattttgttg attaattgtt 1380

caggttgccc cttctagtgt gtaacttgga gcaaatttgg accctgagac gcaaatcagt 1440

catggctggt tctcttgcgg cgtctgcatt cttccctgtc ccagggtctt cccctgcagc 1500

ttcggctaga agctctaaga acacaaccgg tgaattgcca g 1541

<210> 55

<211> 1560

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 55

ttctcgtatc ctagcccata tatttttaca gattcgggtt caagctcgca taatatcggg 60

tatccaattt tctctggcat attcttcatg caagccttga gttgagtgaa cgatcgggaa 120

atacctgccc cattttcacc cctaccagtg ggtgggggca ttgcatgaac gaaacatgga 180

aaaggaatcg acttgagagg ctagacctgc tagctctact gggtctggat ggtcatgcat 240

ttatttgaaa aaaaaacacg ccgcaagctc gataaccccg acctcaacgg caaccatgac 300

aacaatatgc atgacattgg gggaggagaa aagacatgtt gataactaga gggcgcggct 360

acgcatgtaa atgcggagag aaggaacgac ggtagctcaa aaagtaagag cgtcggtggc 420

ggtggtgcgt ggagcgacac taaagttagt ggttgctggt ggtctgacac aaatccctaa 480

tcgaaatatt tattttttct cttagtatta ctgatacgtg ggccacccgc caattataaa 540

gaaaaatgtt gagataaaag gtggagtatc tttcccttcc ttcccttttt tgccttaaaa 600

aaaagagcgt cggtgacggc cgtgcgtgta gcaatactaa agttagtggt tgatggtggt 660

ctgacacaat ccctaatcga gtttgataat aatatttatt tttctcttag tatcgctgat 720

acgtgggcca ccagccaatc ataaaggaaa aaaaatgttg agataaaagg tggatagtat 780

cttccccctt ccttcccttt tttggcgtaa aagaaagagg agaaattctc ccgtcgtctc 840

cttccttgcg ccaagaaaga cgagccgcgg ctcaacagcg gagtggaggg gcgccgatct 900

ccatcgccga ggagagcaga gcaggggagg ggaggggatc ctggtgagcc tcctcttcct 960

gattcacctc tctctcattc tagcttcggg ggactacttt tgcctcgaat ttgcttgcgt 1020

tcgttcgtta accctagctt cttctcttct agatctggag gaagctcttc tcctccttaa 1080

tttcagagcc ttaatacaag tagtaacagt ttaacccccc ccccccccat gtcccaagtt 1140

ggatccgccc ctgcgagttc cgatattggg tcctcccaat tctcaatgcc attttgttca 1200

tcggggggca tatggttcat tttgcctgca ttgattcaaa tgtggtttcg aatcgtttgg 1260

gaaattcgcg ggtgtacttg tttatgatat atgaggcctt ttttttcccc atgaggaggc 1320

aaacttttta gtgggtggat ccactagttc atgcctcaat tttttttctc ctcttttaag 1380

ttttccaaag agctacattg ttgtaaagtg tctaatacaa ttgattgttt attcaggtta 1440

gcgcttttgg cgtgtgattg atttctaaac gaattttggg ccgtgaaggg aagttcaatc 1500

atggcagggt ctcttgccgc ctcagcattc ttcccaggtc caggctcatc tcctgcagca 1560

<210> 56

<211> 1678

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 56

acagaaattt cgctggccat gcacataatc ttctctttgt caaagagctg gaatccaaaa 60

taattgctcg aagatttcgt gtagatagaa ccatcggcca gcaaaggagt ggaaaaagaa 120

aacgtttttt tgtgggcccc accggcgctg cactgagctg accaaatgac tataccgcac 180

agagggaggg gggcatttcc gtcctttcgt atagacgtat atgaatacgt atctcatacg 240

cgctctgtgt atatagacgc acctgcgcca gaggagacgg taacggctca gcgaagggga 300

gagagagaag aaggaaaaaa aaactcatct ctctctctct ctcttgtttc tctctgcctc 360

gcgtcgtgtg agttggcgag cccgaggagc ggaggccaca agtctaatcc gccgtatcta 420

atccgctcga ccgcgtctgc gcgtgcgtgg gtgaggagaa agaggaggag gtggaggaga 480

aagagagggg gcttgatctg ggcgcttctc gtggagtatc cggtgagttc ttggcgatct 540

ggcgaggcga gtggtgagtg gctccgcgtg tgctgctgcc gggggatttt ggcgtgattt 600

tcgttggttg cattttgttt tttttgtgta tcgatttgtt ggagcttatt cggtagatct 660

ggtcgattac atggtgagtt gtataggcgc cagagtgata gctgattttg ttttggtgta 720

aattttgttt tggaaggagg gtttgtgtcg atttgagggc atttttcctc gggcaatgca 780

ggatttggat ttgtatgttt ttgcatggaa tggatatgaa cggacctcaa acaaatggag 840

gagtttgtac tttggatgga ttgcaatgtg gttttgaggc gtgattcggt tgaagaaatg 900

aactaaggaa tattcgagtt attttgggat tcctgtttgc tgcgcctttt tttagcattt 960

cttgatatga acaagagaaa aagggctgat tttttcctta gctttggagg catttactgt 1020

cccagtattt tctcctaccg gaagcagaat attttgtttg attggagggt tgtctccttt 1080

tgccaaatcg aatcaaatgc tctcggatgt tttgaaattt cggtggactc cttttgccca 1140

agggaggcca cttttagcag ctgtggatcc cgtgttttca ttcaagttct tgttttccta 1200

gtctccatat atttctgatt attaactcgg attctctaca tcaaatatgc gaaatcacac 1260

ttgcgtcgtt ctgtagttag ttaggttctg caagacaaat ccgaaatttt taagcatgct 1320

gtcatagtat cattggattc ccccttttac tgggaagaaa gttctacctt ttgtgctttc 1380

ggtagttttt aattgatgcc atgtttttta gataatgtta attgatgcca tgtgactata 1440

ggacacatta tattgcgttt ctgaatatat cacctcatga aactcataat tttgttgatt 1500

atttgttcag gttgcccctt ctagcgtgta gcttcgagca aatttggact ctgaggcgca 1560

tttcggtcat ggctggttct cttgcagcgt ctgcattctt ccctagccca gggtcttccc 1620

ctgcagcatc gactagaagt tctaagaata caaccagtga attgccagag aatttgag 1678

<210> 57

<211> 1307

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<220>

<221> misc_feature

<222> (462)..(462)

<223> n为a、c、g或t

<400> 57

acagaaattt cgctggccat gcacaatctt ctctttgtca aagagctgga atccaaaatg 60

attgctcgaa gatttcgtgt agatagatag aaccatcggc cagcaaagga gaggggaaca 120

aaaaggaaaa aagtcttttt gtgggcccca cctgcactgc actgggttga ccaaattgac 180

cataccgctc agaggggggg gggcatttcc gtcctttcgt ataaacgtat acgaatacgt 240

atctcacacg cgctctgtat atatagacgg taacggctcc gcgaaggaga gagaagaaga 300

agaaaaaaaa agtcatcttt ctctctcttg tttctctctg cctcgagtcg cggctgaaca 360

ggggaggggc ggcgatctcc atctggcgag cagagcaggg aaggggaggg gatcctggtg 420

agcatccaca tcctttttct gattcatata tctctcccac cngggagtac ttttgtctgg 480

aatttgcttg cattaaccct agcttctctt gtagatctgg aagaagctct tctcttaatt 540

tcagagcctt aaccttaata caagtaacag tttgttgttt gttcccccaa aagtttgctg 600

cgcgtttttt tggcatctct tgatatgaac aagagaaaca agctgaattt tttcttacct 660

ttggaagcat ttaccgtccc agtattttct cctaccggta gtagaatatt ttgtttgatt 720

ggaggcttgc cttcttttgc taaatcgaat caaatgctct cggatgtttt taaaatttcg 780

gtggactcct tttgccccaa gggaggccag ttttagcagc tggatcccgt gttttcattt 840

caacttcttg ttttccttgt ctccatatat ttctgattgt taactcggat tctctacctc 900

aaatatgtaa tatcacactt taagacaaat ccggaatttt aagcatgcta tcatagtatc 960

attagattcc cccttttaca gggaagaaaa gttctacatt ttgtgctttc ggtagctttt 1020

aattgatgcc atgtttttta gacaatgtta attgatgcca tgtgactata gggcacatta 1080

tattgcgttt ctgaatatat cacctcatga aactgataat tttgttgatt atttgttcag 1140

tttgcccttc tagtgtgtaa cttcgagcaa atttggaccc tgaggcgcag ttcagtcatg 1200

gctggttctc ttgcagcgtc tgcattcttc cctggcccag ggtcttcccc tgcagcatca 1260

gctagaagtt ctaagaacac aaccggtgaa ttgccagaga atttgag 1307

<210> 58

<211> 398

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 58

atttccttgc taggtgagac ttgagtggtg ctagtctggc tgcaaattta tagaagtatg 60

tgaaaatttg aggtcagaat acaagtaatt gaatggacca atctaatgag ttctgtagct 120

ttagaataat taatgttaac ataaaaatat gttcatgaaa tcaggtcctt ctgcattttg 180

ttgttaaccg aattccacat tcttctttag ttctcacaag tacagacaag tatcttgtaa 240

tggtggattc ttttttggaa aacaaacttc attacatatt ttgtgtgatc catctatgcc 300

ttgtgccctt gttacctttt tttccctaca ccttgttttc tcttgtactt agttttgcat 360

tgtataacct tttgctgtac tcgtgtcttg tactgtag 398

<210> 59

<211> 605

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 59

gtatggatcc tttctttgag tgattacctg gtatcgtgta attcttcatt tgtgtatact 60

gtatttgaga gtttgaaaaa atttccatag aaaataataa catttgttgt ttacaaatgg 120

tcccgccaaa acagtggaat ttatattggg gatgtacata aaaggagtgt aaagttctaa 180

tgtgcttatg ctaacttcct ttccatgatc taaagttgtt accttacggt atgctattta 240

ttggatctat attgcatttt acttggtaaa tctatctgag gttccagctt ttgatattta 300

agttttccta tgtttaattc aaaatattct cacgtgaatc gcaaacctca ccaggagtac 360

aataaattcg ttttattatt attgtaggct gtgttatttc tagtccatgg ttcggtgtct 420

tgaaatttca gtgccaaaat tgggatggat ctggttacat cttcaagtct aataaatgat 480

cacaccgact ttattgtgtg atttgattat agcagggtct tgcaacataa atacaagcta 540

ttaattgtga aaggagaaat gagatctttg gtgagatcat gagaataggg tataacagac 600

acaat 605

<210> 60

<211> 1384

<212> DNA

<213> 亚洲栽培稻(Oryza sativa)

<400> 60

gtatggatcc tttctttgag tgattacctg gtatcgtgta attcttcatt tgtgtatact 60

gtatttgaga gtttgaaaaa atttccatag aaaataataa catttgttgt ttacaaatgg 120

tcccgccaaa acagtggaat ttatattggg gatgtacata aaaggagtgt aaagttctaa 180

tgtgcttatg ctaacttcct ttccatgatc taaagttgtt accttacggt atgctattta 240

ttggatctat attgcatttt acttggtaaa tctatctgag gttccagctt ttgatattta 300

agttttccta tgtttaattc aaaatattct cacgtgaatc gcaaacctca ccaggagtac 360

aataaattcg ttttattatt attgtaggct gtgttatttc tagtccatgg ttcggtgtct 420

tgaaatttca gtgccaaaat tgggatggat ctggttacat cttcaagtct aataaatgat 480

cacaccgact ttattgtgtg atttgattat agcagggtct tgcaacataa atacaagcta 540

ttaattgtga aaggagaaat gagatctttg gtgagatcat gagaataggg tataacagac 600

acaatatttc cttgctaggt gagacttgag tggtgctagt ctggctgcaa atttatagaa 660

gtatgtgaaa atttgaggtc agaatacaag taattgaatg gaccaatcta atgagttctg 720

tagctttaga ataattaatg ttaacataaa aatatgttca tgaaatcagg tccttctgca 780

ttttgttgtt aaccgaattc cacattcttc tttagttctc acaagtacag acaagtatct 840

tgtaatggtg gattcttttt tggaaaacaa acttcattac atattttgtg tgatccatct 900

atgccttgtg cccttgttac ctttttttcc ctacaccttg ttttctcttg tacttagttt 960

tgcattgtat aaccttttgc tgtactcgtg tcttgtactg taggcttctg ctatcaatga 1020

tcccaaaaag catgaaactt ctatgaaaaa tgaaagcctg aatactgccc tgtcatctga 1080

cgatatgatg atcgacaata tacctctatg ttctcgtgag tcaactctcg cagtcaatat 1140

ttcaagtgcc ccgagccaac tggttggaat ggttggttta actgacagct cacctgctga 1200

agttggtaca tctgagttgc atcagatgaa tagctctgga aatgctatgc aggagtcaca 1260

gcctgaaagt gtggctgaaa agtctgcaga ggatggttat aactggcgca aatatgggca 1320

aaagcatgtt aagggaagtg agaacccgag aagctattac aagtgcacac atcctaactg 1380

tgat 1384

<210> 61

<211> 64

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 共有富CT基序

<400> 61

aaggagagag aagaagaaga aaaaaaaact catctttctc tctcttgttt ctctctgcct 60

cgag 64

<210> 62

<211> 36

<212> DNA

<213> 花椰菜花叶病毒(Cauliflower Mosaic Virus)

<400> 62

accaatctct ctctacaaat ctatctctct ctataa 36

<210> 63

<211> 64

<212> DNA

<213> 紧穗野生稻(Oryza eichingeri)

<400> 63

aaggagagag aagaagaaga aaaaaaaagt catctttctc tctcttgttt ctctctgcct 60

cgag 64

<210> 64

<211> 68

<212> DNA

<213> 短花药野生稻(Oryza brachyantha)

<400> 64

aaggagagag aagaagaaga agaagaaaaa aactcatctt tctctctctt gtttctctct 60

gcctcgag 68

<210> 65

<211> 64

<212> DNA

<213> 宽叶野生稻(Oryza latifolia)

<400> 65

aaggagagag aagaagaaga aaaaaaaact catctttctc tctcttgttt ctctctgcct 60

cgac 64

<210> 66

<211> 1199

<212> DNA

<213> 短花药野生稻(Oryza brachyantha)

<400> 66

acagaaattt cgctggccat gcacaatctt ctctttgtca aggagctgga atccaaaatg 60

attgctcgaa gatttcgtgt agatagatag aaccatcggc cagcaaagga gaggggaaaa 120

aaaaaatgaa aaacgtcttt ttgtgggccc cacctgcact gcactgagtt gaccaagttg 180

accataccgc tcagaggggg ggcatttccg tcctttcgta taaacgtata cgaatacgta 240

tctcacacgc gctctgtata tatagacggt aacggctccg cgaaggagag agaagaagaa 300

gaagaagaaa aaaactcatc tttctctctc ttgtttctct ctgcctcgag tcgcggctga 360

acaggggagg ggcggcgatc tccatctggc gagcagagca gggaagggga ggggatcctg 420

gtgagcatcc acatcctttt tctgattcat atctctctcc caccgggagt acttttgtct 480

ggaatttgct tgcattaacc ctagcttctc ttgtagatct ggaagaagct cttctcttaa 540

tttcagagcc ttaaccttaa tacaagtaac agtttgttgt ttgttccccc aaaagtttgc 600

tgcgcgtttt tttagcatct cttgatatga acaagaggaa caagctgaat tttttcttag 660

ctttggaagc atttaccgtc ccagtatttt ctcctaccgg tagtagaata ttttgtttga 720

ttggagggtt gccttctttt gctaaattga atcaaatgct ctcggatgtt ttttaaaatt 780

tcggtggact ccttttgccc caagggaggc cagttttagc agctggatcc cgtgttttca 840

tttcaacttc ttgttttcct tgtctccata tatttctgat tgttaactcg gattctctac 900

ctcaaatatg taatatcaca cttaaagaca aatccggaat tttaagcatg ctatcatagt 960

atcattagat tcccccttta cagggaagaa aagttctaca ttttgtgctt tcggtagctt 1020

ttaattgatg ccatgttttt tagacaatgt taattgatgc catgtgacta taaggcacat 1080

tatattgcgt ttctgaatat atcacctcat gaaactgata attttgttga ttatttgttc 1140

agtttgccct tctagtgtgt aacttcgagc aaatttggac cctgaggcgc agttcagtc 1199

<210> 67

<211> 1189

<212> DNA

<213> 宽叶野生稻(Oryza latifolia)

<400> 67

acagaaattt cgctggccat gcacaatctt ctctttgtca aagagctgga atccaaaatg 60

attgctcgaa gatttcgtgt agatagatag aaccatcggc cagcaaagga gaggggaaca 120

aaaaggaaaa aagtcttttt gtgggcccca cctgcactgc actgagttga ccaaattgac 180

cataccgctc agaggggggc atttccgtcc tttcgtataa acgtatacga atacgtatct 240

cacacgcgct ctgtatatat agacggtaac ggctccgcga aggagagaga agaagaagaa 300

aaaaaaactc atctttctct ctcttgtttc tctctgcctc gactcgcggc tgaacagggg 360

aggggcggcg atctccatct ggcgagcaga gcagggaagg ggaggggatc ctggtgagca 420

tccacatcct ttttctgatt catatatctc tcccaccggg agtacttttg tctggaattt 480

gcttgcgtta accctagctt ctcttgtaga tctggaagaa gctcttctcc taatttcaga 540

gccttaacct taatacaagt aacagtttgt tgtttgttcc cccaaaagtt tgctgcgcgt 600

ttttttggca tctcttgata tgaacaagag aaacaagctg aattttttct tagctttgga 660

agcatttacc gtcccagtat tttctcctac cggtagaata ttttgtttga ttggaggctt 720

gccttctttt gctaaatcga atcaaatgct ctcggatgtt tttaaaattt cggtggactc 780

cctttgcccc aagggaggcc agttttagca gctggatccc gtgttttcat ttcaacttct 840

tgttttcctt gtctccatat atttctgatt gttaactcgg attctctacc tcaaatatgt 900

aatatcacac tttaagacaa atccggaatt ttaagcatgc tatcatagta tcattagatt 960

ccccctttta cagggaagaa aagttctaca ttttgtgctt tcggtagctt ttaattgatg 1020

ccatgttttt tagacaatgt taattgatgc catgtgacta tagggcacat tatattgcga 1080

ttctgaatat atcacctcat gaaactgata attttgttga ttatttgttc agtttgccct 1140

tctagtgtgt aacttcgagc aaatttggac cctgaggcgc agttcagtc 1189

<210> 68

<211> 1193

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 共有FatB6启动子

<400> 68

acagaaattt cgctggccat gcacaatctt ctctttgtca aagagctgga atccaaaatg 60

attgctcgaa gatttcgtgt agatagatag aaccatcggc cagcaaagga gaggggaaca 120

aaaaggaaaa aagtcttttt gtgggcccca cctgcactgc actgagttga ccaaattgac 180

cataccgctc agaggggggg catttccgtc ctttcgtata aacgtatacg aatacgtatc 240

tcacacgcgc tctgtatata tagacggtaa cggctccgcg aaggagagag aagaagaaga 300

aaaaaaaact catctttctc tctcttgttt ctctctgcct cgagtcgcgg ctgaacaggg 360

gaggggcggc gatctccatc tggcgagcag agcagggaag gggaggggat cctggtgagc 420

atccacatcc tttttctgat tcatatatct ctcccaccgg gagtactttt gtctggaatt 480

tgcttgcgtt aaccctagct tctcttgtag atctggaaga agctcttctc ttaatttcag 540

agccttaacc ttaatacaag taacagtttg ttgtttgttc ccccaaaagt ttgctgcgcg 600

tttttttggc atctcttgat atgaacaaga gaaacaagct gaattttttc ttagctttgg 660

aagcatttac cgtcccagta ttttctccta ccggtagtag aatattttgt ttgattggag 720

gcttgccttc ttttgctaaa tcgaatcaaa tgctctcgga tgtttttaaa atttcggtgg 780

actccttttg ccccaaggga ggccagtttt agcagctgga tcccgtgttt tcatttcaac 840

ttcttgtttt ccttgtctcc atatatttct gattgttaac tcggattctc tacctcaaat 900

atgtaatatc acactttaag acaaatccgg aattttaagc atgctatcat agtatcatta 960

gattccccct tttacaggga agaaaagttc tacattttgt gctttcggta gcttttaatt 1020

gatgccatgt tttttagaca atgttaattg atgccatgtg actatagggc acattatatt 1080

gcgtttctga atatatcacc tcatgaaact gataattttg ttgattattt gttcagtttg 1140

cccttctagt gtgtaacttc gagcaaattt ggaccctgag gcgcagttca gtc 1193

<210> 69

<211> 942

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 共有FatB6启动子

<400> 69

acagaaattt cgctggccat gcacaatctt ctctttgtca aagagctgga atccaaaatg 60

attgctcgaa gatttcgtga gatagataga accatcggca gcaaaggaga ggaaaaaaaa 120

aaaagttttt tgtgggccca cctgcctgca ctggtgacca aattgaccat accgccagag 180

gggggggcat tccgtctttc gtataacgta tacgaatacg tatctcaacg cgctctgtat 240

atatagacgg taacggctcc gcggggagag aggagaaagt cttctgttgg gggaaaggga 300

ggggcgggat catctggcga ggaggagggg gattggggca ttcttttttg atttaatctt 360

cccccgggtt tttttgattt ttgtttagtt tatgatttct taatcagtac ctaaaagaaa 420

tttgttttgt tcaaagtttg ctgcgctttt tttgcattct tgatatgaac aagagaaagc 480

tgaatttttt cttactttgg agcatttacg tcccagtatt ttctcctacc ggagagaata 540

ttttgtttga ttggaggttg cctctttgca aatgaatcaa atgtctcgga tgttttaaaa 600

tttcgtggac tcttttgccc cagggagcct tttagcagct ggatcccgtg ttttcatttc 660

aattcttgtt ttcctgtctc catatatttc tgattgttaa ctcgattctc tacctcaata 720

tgaaatcaca cttgctttat tttagattcc aagaaaatca ttttgctcgt agtttaattg 780

atgccatgtt ttttagacaa tgttaattga tgccattgac tataggcaca ttatattgcg 840

tttctgaata tacacctcat gaaactataa ttttgttgat tattgttcag ttgcccttct 900

agtgtgtaac ttgagcaaat ttggaccctg agcgcatcag tc 942

Claims

1.一种改进亚洲栽培稻水稻植株材料对选自由稻褐飞虱和稻瘟病菌组成的组的生物胁迫的抗性的方法，其特征在于通过在所述亚洲栽培稻水稻植株材料中过表达亚洲栽培稻FatB6基因来改进亚洲栽培稻水稻植株材料对生物胁迫的抗性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中亚洲栽培稻FatB6基因编码SEQ ID NO:44所定义的亚洲栽培稻FatB6酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述亚洲栽培稻FatB6基因是SEQ ID NO:43所定义的亚洲栽培稻FatB6基因。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于亚洲栽培稻水稻植株材料包括亚洲栽培稻FatB6基因的多个拷贝。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于亚洲栽培稻水稻植株材料包括亚洲栽培稻FatB6基因的至少一个拷贝和异源FatB基因的至少一个拷贝。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于在所述水稻植株材料中具有活性的启动子的转录控制下编码大麦2样(SUSIBA2)转录因子中的糖信号传导的基因组核苷酸序列，其中编码所述SUSIBA2转录因子的所述基因组序列缺乏存在于编码所述SUSIBA2转录因子的所述基因组核苷酸序列的野生型版本的内含子中的大麦1样(SUSIBA1)启动子中的糖信号传导的激活区的至少一部分。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于编码所述SUSIBA2转录因子的所述基因组核苷酸序列缺乏所述SUSIBA1启动子的激活区。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于所述SUSIBA1启动子的激活区是SEQ IDNO:58所定义。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于编码所述SUSIBA2转录因子的所述基因组核苷酸序列缺乏所述SUSIBA1启动子的抑糖区的至少一部分。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述SUSIBA1启动子的抑糖区是SEQ IDNO:59所定义。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其特征在于编码所述SUSIBA2转录因子的所述基因组核苷酸序列缺乏包含所述SUSIBA1启动子的激活区和抑糖区的内含子2的至少一部分。

12.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述SUSIBA1启动子是SEQ ID NO:60所定义。

13.根据权利要求6所述的方法，其特征在于编码所述SUSIBA2转录因子的所述基因组核苷酸序列是存在于所述水稻植株材料的染色体中的基因组内源核苷酸序列。

14.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于所述水稻植株材料选自由水稻植株、水稻植株细胞、水稻组织和水稻种子组成的组。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于过表达所述亚洲栽培稻FatB6基因包括由选自由ARP1启动子、H3F3启动子、HSP启动子、H2BF3启动子、花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子、大麦SBEIIb启动子和异源FatB启动子组成的组的启动子替换所述亚洲栽培稻FatB6基因的启动子或其至少一部分，所述异源FatB启动子选自由紧穗野生稻FatB启动子、短花药野生稻FatB启动子、宽叶野生稻FatB启动子及其组合组成的组。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于

过表达所述亚洲栽培稻FatB6基因包括由选自由紧穗野生稻FatB6启动子、短花药野生稻FatB6启动子、宽叶野生稻FatB6启动子及其组合组成的组的异源FatB启动子替换亚洲栽培稻FatB6基因的启动子或其至少一部分。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于所述紧穗野生稻FatB6启动子是SEQ IDNO:57定义，所述短花药野生稻FatB6启动子是SEQ ID NO:66定义，并且所述宽叶野生稻FatB6启动子是SEQ ID NO:67定义。

18.根据权利要求15所述的方法，其特征在于过表达亚洲栽培稻FatB6基因包括由选自由紧穗野生稻FatB2启动子、紧穗野生稻FatB6启动子和紧穗野生稻FatB11启动子组成的组的紧穗野生稻FatB启动子替换亚洲栽培稻FatB6基因的启动子或其至少一部分。

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于所述紧穗野生稻FatB启动子选自由SEQID NO:56所定义的紧穗野生稻FatB2启动子和SEQ ID NO:57所定义的紧穗野生稻FatB6启动子组成的组。

20.根据权利要求1所述的方法，其特征在于

过表达所述亚洲栽培稻FatB6基因包括将富CT基序引入亚洲栽培稻FatB6基因的启动子中。

21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于所述富CT基序选自由以下组成的组：

AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAG(SEQ IDNO:61)；

AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAAAAAAAAGTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAG(SEQ IDNO:62)；

AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAGAAGAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAG(SEQID NO:63)；

AAGGAGAGAGAAGAAGAAGAAAAAAAAACTCATCTTTCTCTCTCTTGTTTCTCTCTGCCTCGAC(SEQ IDNO:64)；

ACCAATCTCTCTCTACAAATCTATCTCTCTCTATAA(SEQ ID NO:65)；及

其组合。