JP2023512376A - ブラシカ・ジュンセア系統ｎｕｂｊ１２０７ - Google Patents

Abstract

【解決手段】本実施形態は、ＮＵＢＪ１２０７として指定される新規のＤＰＡ生成ブラシカ・ジュンセア（ＤＰＡジュンセア）系統を提供する。実施形態はまた、ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の種子、植物、および植物の一部（ＤＮＡを含む）、並びに、ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７を、それ自体または別のブラシカ系統と交雑させることによって生成されるブラシカ植物を生成するための方法を、提供する。これらの実施形態はまた、その遺伝物質内に１以上の導入遺伝子を含む、ＤＰＡ生成ブラシカ植物を生成する方法、および、それらの方法によって生成される遺伝子導入植物および遺伝子導入植物の一部を提供する。これらの実施形態はさらに、ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７由来の、ＤＰＡ生成系統またはＤＰＡ育種系統、および植物の一部、系統ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ系統または植物の一部を生成する方法、および、それらの方法の使用に由来するＤＰＡ生成ブラシカ植物、亜種、およびそれらの一部、を提供する。これらの実施形態はまた、ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７を、別のブラシカ系統またはキャノーラ系統と交雑させることによって生成される、ハイブリッドの種子、植物、および植物の一部を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、２０１９年８月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／８９１，９０８号の優先権利益を主張するものであり、これは、あらゆる目的に対し、参照によって本明細書に完全に組み込まれる。

配列表
本出願は、配列表（２０１９年６月２０日に作成され、ＡＳＣＩＩフォーマットでＥＦＳ－Ｗｅｂを介して、２０１９年８月２６日に２，９１４バイトのファイルとして、８７３７６＿００１５ＰＲＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔというタイトルで最初に提出された）を含有し、それは、本明細書と共に同時に出願され、かつその全体が参照によって本明細書に完全に組み込まれる。

本実施形態は、新規かつ特有の、ＤＰＡ生成ブラシカ・ジュンセア系統指定ＮＵＢＪ１２０７に関する。

長鎖のオメガ－３多価不飽和脂肪酸（ω３ ＬＣ ＰＵＦＡ）は、ヒトの食餌におけるそれらの重大な役割のために、広く認識されている。ω３ ＬＣ ＰＵＦＡΔ７，１０，１３，１４，１７－ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）は、心臓および血管の健康から脳の発達および生涯にわたる脳機能までの、ヒトの健全な生活の様々な側面に寄与する。ＤＰＡの陸上ベースの供給源が必要とされている。

本実施形態は、ＤＰＡブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７（「ＤＰＡジュンセア」）の植物、派生物あるいは後代植物、植物の一部、または種子を提供し、この種子の代表的なサンプルは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている（付録を参照）。実施形態の１つの態様は、ＤＰＡジュンセア種子を生成するための方法を提供し、当該方法は、２つのブラシカ植物を交雑させる工程と、結果として生じる種子を収穫する工程と、を含み、ここで、２つのブラシカ植物の少なくとも１つは、ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７またはその後代である。

本発明は、本明細書に記載される特定の方法、プロトコル、および試薬に制限されず、またそのように変動し得ることがあることに留意されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明することを目的としており、本発明の範囲を制限することを意図しておらず、それは請求項によってのみ定義される。

すべての特許または他の公開公報は、例えば、本発明に関連して使用されてもよいこうした公開物に記載される方法を説明および開示する目的のために参照によって本明細書に組み込まれるが、本明細書で提示される用語の定義と一致しない用語の定義を与えるものではないものとする。こうした公開公報は本出願の出願日の前に開示するためだけに与えられる。この点に関して、発明者が先の発明によって、または他のいかなる理由によってもそのような開示に先行する資格がないという承認として解釈されるべきものはなにもない。こうした書類の日付に関する記述または内容に関する表現はすべて、出願人が入手可能な情報に基づき、こうした書類の日付または内容の正確さに関して承認を構成するものではない。

本明細書や請求項で使用されるように、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に他のことを明記していない限りは、複数の参照物を含む。本明細書全体にわたって、特段の定めがない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、排他的ではなく包括的に用いられ、結果として、記載される整数または整数のグループは１以上の他の記載されていない整数または整数のグループを含むことがある。用語「または（ｏｒ）」は、例えば「いずれか（ｅｉｔｈｅｒ）」によって修飾されない限り、包括的である。したがって、文脈による別段の定めがない限り、単語「または（ｏｒ）」は、特定のリストの任意の１つのメンバーを意味し、そのリストのメンバーの任意の組み合わせも含む。

全ての値は、脂肪酸組成物には環境条件によるなんらかの変動が存在するために、およそのものである。値は一般に、面積パーセントで表され、これは、合計脂肪酸の重量パーセント、または合計種子の重量パーセントを概数にしたものである。したがって、操作の例以外は、または他に指示がある場合以外は、本明細書で使用される量または反応条件を表す全ての数は、全ての例で、用語「約」によって修飾されているものと理解されたい。

別段の定めがない限り、本明細書で使用される技術的かつ科学的な用語はすべて当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態だけを説明することを目的としており、本発明の範囲を制限することを意図しておらず、それは請求項によってのみ定義される。本開示をよりよく理解することができるように、特定の用語が最初に定義される。さらなる定義は詳細な記載の全体にわたって説明される。

本実施形態は、その種子油中にＬＣ ω３ ＰＵＦＡ ＤＰＡを生成するブラシカ系統を提供し、特に、Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の特質を具現化する系統を提供する。ＬＣ ω３ ＰＵＦＡは、これらについて、および他の脂肪酸についての適切な議論によって当技術分野で知られており、例えば米国特許第１０，５７０，４０５号を参照されたい。

ブラシカ・ジュンセアは、アブラナ科（ｍｕｓｔａｒｄ ｆａｍｉｌｙ）として一般に知られているアブラナ科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）（アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ））植物ファミリーに属する。一般に、Ｂ．ジュンセアは、第一葉、および葉柄で留まる葉身に少数の毛を有する、淡緑色の葉を有しており、当該植物は、高さ１－２メートルに到達し、下葉に深い浅裂があり、上葉は幅が狭く、全体的に開いており、閉じることがなく、花は、淡黄色で、細長い総状花序の底部から上に向かって漸進的に開き、長角果（種子鞘）は、わずかに密着し、そして０．５～１ｃｍ長の嘴部（ｂｅａｋ）を除いて、長さ２．５～５ｃｍであり、種子は円形で、黄色または茶色である場合がある。Ｂ．ジュンセアは、Ｂ．ニグラ（ＢＢゲノム、２ｎ＝１６）による、Ｂ．ラパ（Ｂ．ｒａｐａ）（ＡＡゲノム、２ｎ＝２０）の複二倍体（ＡＡＢＢゲノム、２ｎ＝３６）である。

ブラシカ・ジュンセアｓｓｐ．ジュンセアは、主としてその種子のために栽培される。より具体的には、油糧種子Ｂ．ジュンセアは北米で香辛料作物（カラシナ種子）として生育されるが、アジアおよび他の地域では調理油のソースとしても使用される。（ほとんどがインド亜大陸で）生育される油糧種子Ｂ．ジュンセアのほぼ全ては、エルカ酸およびグルコシノレート（ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ）の両含有量が高いものの、低グルコシノレートおよび低エルカ酸の亜種の中には、キャノーラ品質の食用油を提供するものも存在する。より具体的には、「キャノーラ油」は、含有するエルカ酸が２％未満でなければならず、また、キャノーラのミール（ｍｅａｌ）は、１グラムの大気乾燥させた、ノンオイルのミールで、３０μモル未満の３－ブテニルグルコシノレート、４－ペンテニルグルコシノレート、２－ヒドロキシ－３ブテニルグルコシノレート、２－ヒドロキシ－４－ペンテニルグルコシノレート、またはそれらの混合物を含まなければならないものとして、定義されている。例えば、ＣＯＤＥＸ ＡＬＩＭＥＮＴＡＲＩＵＳ： ＦＡＴＳ， ＯＩＬＳ ＆ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ， Ｖｏｌ． ８ （第２版， Ｆｏｏｄ ＆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｒｇ． Ｕｎｉｔｅｄ Ｎａｔｉｏｎｓ， Ｒｏｍｅ， Ｉｔａｌｙ， ２００１）を参照されたい。とりわけ、Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の種子油が含有するエルカ酸は、１％未満である。

より広範囲で生育されているキャノーラ種Ｂ．ナパスおよびＢ．ラパと比較して、Ｂ．ジュンセアは、熱および乾燥による負荷に対する耐性が高い。通常、Ｂ．ジュンセアは、いくつかのＢ．ナパスよりも粉砕に対する耐性が高いので、帯状または直線状で組み合わされるかのいずれかであってもよい。Ｂ．ジュンセアの生態、交雑、および疾患に関するさらなる情報は、容易に利用可能である。例えば、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｆｏｏｄ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ａｇｅｎｃｙ， Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｄｏｃｕｍｅｎｔ ＢＩＯ２００７－０１， Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ （Ｃａｎｏｌａ／Ｍｕｓｔａｒｄ） （２０１２）を参照されたい。野生型のＢ．ジュンセア、Ｂ．ナパス、またはＢ．ラパはいずれも、種子油にＤＰＡを生成しない。

「系統」は、その指定を共有する個体間で全体的な変異をほとんど示さない、植物の群である。「系統」はまた、実質的に同じ遺伝物質を有する植物の均質集団を指し、それは少なくとも１つの特質について、個体間で、特に系統ＮＵＢＪ１２０７および結果として生じるＤＰＡの生成物に存在する導入遺伝子において、遺伝的変異をほとんど、またはまったく提示しない。「亜種」または「栽培品種」は、「系統」と互換的に使用されてもよいが、一般的に、前者の２つの用語は商業上の生産に適切な系統を指す。例えば、句「親系統に遺伝的に由来する」で使用される通りの、「遺伝的に由来する」は、問題の特徴が、問題の植物の遺伝的構成のある態様によって全体的にまたは部分的に指示されることを意味する。

「後代」は、植物の子孫および派生物を含む全ての末裔を意味し、そして、第１世代、第２世代、第３世代、およびその後の世代を含み、並びに、植物の自家受粉、あるいは、同じ植物また異なる遺伝子型を有する植物との交雑によって生成されてもよく、そして、様々な適切な遺伝子工学技術によって改質されてもよい。成長種は通常、ヒトによって意図的に変質されかつ選択された植物に関連する。「Ｔ０」は、形質転換された植物物質の第１世代を指し、「Ｔ１」はＴ０植物上で生成された種子を指し、Ｔ１種子は後のＴｘ後代へのＴ２種子等を生成する植物を生じさせる。

「植物の一部」は、植物細胞、植物器官、植物原形質体、植物が再分化可能な植物細胞組織培養物、植物カルス、植物凝集塊、および、胚、花粉、胚珠、種子、鞘、葉、花、枝、果実、柄、根、根端、葯、子葉、胚軸、幼根、単細胞、生殖体、細胞培養物、組織培養物などの植物またはその一部において無傷の植物細胞を含む。子葉は子葉（ｓｅｅｄ ｌｅａｆ）の一種であり、小さな葉が植物胚上に含まれている。子葉は、種子の食品貯蔵（ｆｏｏｄ ｓｔｏｒａｇｅ）組織を含む。胚は、成熟種子内に含まれる小さな植物である。「植物細胞」はまた、非再分化可能植物細胞を包含する。再分化植物の後代、派生物、変異体、および突然変異体も、もしこれらの一部が配列番号：１と２、配列番号：３と４、および配列番号：５と６によって例証される通りの核酸分子の１つ、２つ、または３つを含むのであれば、本実施形態の範囲内に含まれ、その分子はＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の特徴を有するものである。本実施形態はまた、植物の細胞培養物と組織培養物におけるエリートイベントＮＵＢＪ１２０７導入遺伝子の使用に関する。本実施形態は、エリートイベントＮＵＢＪ１２０７系統からの植物および植物の一部、並びに、記載される方法によって生成される他の植物を含む。

本明細書に記載される少なくとも１つの実施形態は、新規のＢ．ジュンセア系統、指定ＮＵＢＪ１２０７を提供し、これは、その種子油中にＤＰＡを生成する。本実施形態の他の態様は、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子、植物、および植物の一部と、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７を、それ自体と、または他のキャノーラ遺伝子型と交雑させることによって生成されるキャノーラ植物を生成するための方法と、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の突然変異生成または形質転換による、変異体の生成と、を提供する。したがって、本実施形態は、系統ＮＵＢＪ１２０７を使用する任意の方法を含み、その例としては、自殖、戻し交雑、ハイブリッド生成、および集団への交雑が挙げられる。系統ＮＵＢＪ１２０７を親として使用して生成される植物は全て、本実施形態の範囲内にある。少なくとも１つの実施形態では、ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７が他の異なるキャノーラ植物との交雑に使用されて、優れた特徴を有する第一世代（Ｆ_１）のハイブリッドの種子と植物が生成される。したがって、本実施形態を実践する際に有用なブラシカ属のメンバーの例は、Ｂ．ジュンセアに加えて、Ｂ．ナパス、Ｂ．ナポブラシカ、Ｂ．オレラセア、Ｂ．カリナタ、Ｂ．ラパ、およびＢ．カンペステリス、ならびにブラシカ種間の育種を可能にするブラシカ属に属する任意の他の植物を含む。通常、「油糧種子植物」は、Ｂ．ナパス、Ｂ．ラパ（またはカンペステリス）、あるいはＢ．ジュンセアの種のうちのいずれか１つを指す。

ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の表現型の特徴付けは、種子油中のＤＰＡの生成に加えて、次のものを含む。

本明細書に記載されるＤＰＡジュンセアは、Ａ系統、Ｂ系統、またはＲ系統であってもよい。Ａ系統は雄性の不稔系統であり、Ｂは全ての特徴において「Ａ」に類似しているが、雄性の稔性系統であり、Ｒは、Ｂ系統と交雑されると、Ｆ１ハイブリッドにおいて稔性を回復する。Ｂ系統は、稔性を維持するために使用されるため、維持系統と呼ばれることもある。回復系統は、雄性の不稔系統に授粉して、雄性の稔性であるために自殖で種子を生成するＦ１後代を生成するために使用される、授粉亜種である。同系交配の系統は、それが交雑される雄性の不稔性系統の後代に対して、稔性の回復を可能にしてもよい。したがって、ハイブリッド系統は、２つの同系交配（純系）の系統を交雑させることによって生成されるＦ１種子から生育されてもよく、そのうちの１つは雄性の不稔性のものであるかもしれない。

純系系統選択のために、単一植物選択による後代（自家受粉）は、別々に維持され、そしてバルク（ｂｕｌｋ）と共にされることはない。遺伝学的に均質である系統のセットが、予期される結果である。したがって、純系系統は、単一の自家受精によるホモ接合性植物の後代であってもよい。

したがって、本実施形態は、望ましい特質をＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７に導入する方法を提供し、ここで、当該方法は、ＮＵＢＪ１２０７植物を、後代植物を生成するための望ましい特質を含む別のブラシカ遺伝子型の植物で交雑させる工程であって、ここで、望ましい特質は、雄性の不稔性、除草剤耐性、虫害耐性、改変された脂肪酸代謝、改変された炭水化物代謝、改変された種子の収量、改変された油パーセント、改変されたタンパク質パーセント、改変された耐倒伏性、および細菌性疾患、菌類性疾患、またはウイルス性疾患に対する抵抗、からなる群から選択される、工程と、選択された後代植物を生成するために、望ましい特質を有する１以上の後代植物を選択する工程と、戻し交雑による後代植物を生成するために、選択された後代植物を、ＮＵＢＪ１２０７植物と交雑させる工程と、選択された、戻し交雑による後代植物を生成するために、ＮＵＢＪ１２０７系統の望ましい特質、並びに生理学的および形態学的な特徴の実質的に全てを有する、戻し交雑による後代植物を選択する工程と、本明細書に記載される通りの、系統ＮＵＢＪ１２０７の望ましい特質、並びに生理学的および形態学的な特徴の実質的に全てを含む、戻し交雑による、選択された、四代目以降の後代植物を生成するために、これらの工程を３回以上繰り返す工程と、を含む。本方法によって生成される植物が、実施形態のこの態様に含まれ、ここで、植物は、ＮＵＢＪ１２０７系統の望ましい特質（つまりＤＰＡ生成）、並びに生理学的および形態学的な特徴の実質的に全てを有する。

「育種」は、植物を発育または繁殖させる方法を全て含み、種間と種内および系統間と系統内両方の交雑の他、全ての適切な従来の育種技術および人工育種技術を含む。望ましい特質（例えばＮＵＢＪ１２０７のＤＰＡ特質）が、他のキャノーラ系統またはＢ．ジュンセア系統、栽培品種、または成長種に移されるかもしれず、あるいは従来の育種方法を通して移されるかもしれず、また、種間交雑を通してＢ．ナパスおよびＢ．ラパなどの他のブラシカ種に移され得る。従来の育種方法と種間交雑方法の両方、並びに植物間で遺伝物質を移す他の方法が、当該技術分野で周知である。

Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７は、遺伝子構築物ｐＪＰ３４１６＿ＧＡ７－ｍｏｄＢ（「ｍｏｄＢ」）でアグロバクテリウム・ツメファシエンス媒介形質転換によって開発され、種子中にオメガ－３脂肪酸の蓄積を促進することができる７つの遺伝子を含む。簡潔に言えば、ｍｏｄＢ構築物は、マイクロアルジェ・ミクロモナス・プシラからクローン化されたΔ６デサチュラーゼ、マイクロアルジェ・ピラミモナス・コルダタからクローン化されたΔ６－エロンガーゼおよびΔ５エロンガーゼ、マイクロアルジェ・パブロバ・サリナからクローン化されたΔ５デサチュラーゼ、酵母ピキア・パストリスからクローン化されたΔ１５／ω３－デサチュラーゼ、酵母Ｌａｃｈａｎｃｅａ ｋｌｕｙｖｅｒｉからクローン化されたΔ１２デサチュラーゼ、パブロバ・サリナからクローン化されたΔ４デサチュラーゼ、をコードする遺伝子を含み、各々が、適切な転写プロモータおよびターミネータを有する。例えば、米国特許第１０，５７０，４０５号（図１）、第１０，５６３，２１８号、第１０，１２５，０８４号、第９，７１８，７５９号、第９，９３２，５４１号を参照されたい。しかし、ＮＵＢＪ１２０７が由来する、Ｂ．ジュンセア（低エルカ酸、低グルコシノレート系統）への挿入時に、ｍｏｄＢのΔ４－デサチュラーゼ遺伝子は切り捨てられて、操作不能にされた。

遺伝子分析は、ＮＵＢＪ１２０７が３つの組み換え導入遺伝子の遺伝子座を含み、その各々が、発現カセットを含む別個の導入遺伝子挿入物を有し、各挿入物が異なる染色体中に位置していることを、明らかにした。特に、ＮＵＢＪ１２０７染色体Ａ０６中の導入遺伝子挿入物は、切り捨てられたＭＡＲ配列（タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）の６４０ｂｐのＲｂ７マトリックス付着領域）、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）ＦＡエロンガーゼ１のプロモータ（Ｐｒｏ＿Ａｒａｔｈ－ＦＡＥ１）、Ｐ．コルダタΔ６－エロンガーゼ遺伝子、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ）レクチンのターミネータ（Ｔｅｒ＿Ｇｌｙｍａ－Ｌｅｃｔｉｎ）、カリフラワー・モザイク・ウイルス（ｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）３５Ｓ ＲＮＡのプロモータ、ホスフィノトリシン・アセチルトランスフェラーゼ（ＰＡＴ）酵素のコード配列、Ａ．ツメファシエンス（ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）・ノパリン（ｎｏｐａｌｉｎｅ）合成酵素からのターミネータ（ＴＥＲ＿Ａｇｒｔｕ－ＮＯＳ）、および、Ｔ－ＤＮＡの転写に使用されるＡ．ツメファシエンス左側境界配列（ＬＢ）、を含む。ＮＵＢＪ１２０７染色体Ｂ０７中の導入遺伝子挿入物は、Ｔ－ＤＮＡの転写に使用されるＡ．ツメファシエンス右側境界配列（ＲＢ）、リヌム・ウシタチジマム・コンリニン２（Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ ｃｏｎｌｉｎｉｎ２）のターミネータ（ＴＥＲ＿Ｌｉｎｕｓ－Ｃｎｌ２）、Ｍ．プシラΔ６デサチュラーゼ、および、Ｌ．ウシタチジマム・コンリニン２の切り捨てられたプロモータ（ＰＲＯ＿Ｌｉｎｕｓ－Ｃｎｌ２）（５’２２８ｂｐ無し）、を含む。ＮＵＢＪ１２０７染色体Ａ０８中の導入遺伝子挿入物は、ＲＢ、ＴＥＲ＿Ｌｉｎｕｓ－Ｃｎｌ２、Ｍ．プシラΔ６デサチュラーゼ、ＰＲＯ＿Ｌｉｎｕｓ－Ｃｎｌ２と、Ｐｒｏ＿Ａｒａｔｈ－ＦＡＥ１、Ｐ．コルダタΔ５エロンガーゼ、Ｔｅｒ＿Ｇｌｙｍａ－レクチンと、Ｂ．ナパス・ナピン（ｎａｐｉｎ）のプロモータ（ＰＲＯ＿Ｂｒａｎａ－Ｆｐ１）、Ｐ．サリナΔ５デサチュラーゼ、ＴＥＲ＿Ａｇｒｔｕ－ＮＯＳと、Ｌ．ウシタチジマム・コンリニン１のターミネータ（ＴＥＲ＿Ｌｉｎｕｓ－Ｃｎｌ１）、Ｐ．パストリスΔ１５／ω３－デサチュラーゼ、Ｌ．ウシタチジマム・コンリニン１のプロモータ（ＰＲＯ＿Ｌｉｎｕｓ－Ｃｎｌ１）と、ＰＲＯ＿Ｌｉｎｕｓ－Ｃｎｌ２、そしてＰ．サリナΔ４－デサチュラーゼの２１の塩基対と、を含む。（先に記載された発現カセットは、遺伝子が同じ５’～３’の配向で配置されないベクター設計を反映することに、留意されたい）。さらに、Ａ０８中の導入遺伝子挿入物に関して、切り捨てられたΔ４－デサチュラーゼ配列は、酵素の最初の７つのＮ末端アミノ酸残基のみをコードし、Δ４－デサチュラーゼ活性を有するとは予期されておらず、系統ＮＵＢＪ１２０７種子油に関して観察されている脂肪酸含有量と一致している。

系統ＮＵＢＪ１２０７中の３つの導入遺伝子挿入物は、Δ１２－デサチュラーゼ遺伝子とΔ４－デサチュラーゼ遺伝子を除いて、二値ベクトル（ｂｉｎａｒｙ ｖｅｃｔｏｒ）ｍｏｄＢからのほとんどの遺伝子を提供する。しかし、Ｂ．ジュンセアは内在性のΔ１２－デサチュラーゼ遺伝子とΔ１５／ω３－デサチュラーゼ遺伝子とを含み、その結果、Δ１２－不飽和化活性が内在性遺伝子によって補足される。追加的に、系統ＮＵＢＪ１２０７は、Δ６－デサチュラーゼ導入遺伝子の２つのコピーを含む。これらの導入遺伝子挿入物は、オレイン酸（ＯＡ）をＤＰＡに変換するが、Δ４デサチュラーゼ活性の欠如によりＤＰＡをＤＨＡにさらに変換することはない。

したがって、ある実施形態は、ブラシカ・ジュンセア系統指定ＮＵＢＪ１２０７の種子を提供し、この種子の代表的なサンプルは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されており、ここで、上記種子は、そのゲノム内に、Ｐ．コルダタΔ６－エロンガーゼおよびホスフィノトリシン・アセチルトランスフェラーゼを含む、第１の染色体に位置する第１の遺伝子導入遺伝子座と、Ｍ．プシラΔ６デサチュラーゼを含む、第２の染色体に位置する第２の遺伝子導入遺伝子座と、Ｍ．プシラΔ６デサチュラーゼ、Ｐ．コルダタΔ５－エロンガーゼ、Ｐ．サリナΔ５デサチュラーゼ、ピキア・パストリスΔ１５／ω３デサチュラーゼ、およびＰ．サリナΔ４デサチュラーゼの非官能性部を含む、第３の染色体上に位置する第３の遺伝子導入遺伝子座と、を含む。

最初の形質転換から、後代は自家受粉され、そして、植物育種の系図体系はその後、本実施形態の、系統ＮＵＢＪ１２０７を開発するのに使用された。様々な世代において選択用に使用される基準のうちのいくつかは、ＤＰＡ含有量（種子中の合計脂肪酸の％として）、活発性（ｖｉｇｏｒ）、稔性、自立性（ｓｔａｎｄａｂｉｌｉｔｙ）、耐病性、油分、成熟度を含む。ＮＵＢＪ１２０７はしたがって、遺伝的に安定し、均一性を有する遺伝子導入ブラシカであり、そして、オフ型（ｏｆｆ－ｔｙｐｅ）の植物は評価中に示されていない。ＮＵＢＪ１２０７系統は、表現型説明情報中に説明される通り、遺伝的安定性および均一性を示している。それは、植物型に関する均一性に対して慎重に注意を払いながら、十分な数の世代にわたり自家受粉をしてきたものである。本系統は、均一性に対して継続的な観察を行いながら増やされてきた。

ＮＵＢＪ１２０７の主要な表現型の特徴は、その種子中の顕著な量のＤＰＡの生成である。本明細書に示される通り、ＮＵＢＪ１２０７のバルク種子は、一般に、約１０％のＤＰＡまたはそれ以上（種子中の合計脂肪酸の％として）を含む。

少なくとも１つの実施形態は、第１の親植物を、第２の親植物と交雑させることによって、ＤＰＡブラシカ植物を生成するための方法に関し、ここで、第１の植物または第２の植物は、ブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７からの植物である。少なくとも１つの実施形態では、第１の親植物および第２の親植物の両方は、系統ＮＵＢＪ１２０７からのものであってもよい。系統ＮＵＢＪ１２０７を使用する任意の育種方法が予見され、その例としては、自殖、戻し交雑、ハイブリッド育種、および集団への交雑が挙げられる。Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７を親として使用して生成される植物はいずれも、本実施形態の範囲内にある。例えば、Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７は、キャノーラ品質の低グルコシノレートＢ．ジュンセア系統と交雑させて、低グルコシノレートＤＰＡ Ｂ．ジュンセアを提供してもよい。

本実施形態の追加的な方法は、遺伝子直接導入方法を使用する、植物組織に導入される発現ベクターの導入を含み、その方法の例としては、微粒子媒介（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ）送達、ＤＮＡ注入、電気穿孔、またはアグロバクテリウム媒介形質転換を使用することによるものなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＮＵＢＪ１２０７の遺伝子導入変異体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の追加的な導入遺伝子などの、少なくとも１つの追加的な導入遺伝子（ＮＵＢＪ１２０７中に存在するものに加えて）を含んでいてもよい。したがって、本発明はまた、主張される系統ＮＵＢＪ１２０７の超形質転換（ｓｕｐｅｒ－ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ）された変異体、またはＮＵＢＪ１２０７を１以上の他の遺伝子導入ブラシカと育種することによって得られた変異体に関する。そのような導入遺伝子は、当技術分野で周知の調節配列（例えば、プロモータ、エンハンサ、介在配列、ターミネータ）の制御下で発現させられる。１つの実施形態では、望ましい特質は、除草剤耐性、虫害耐性、耐病性、改変された種子の収量、改変された油パーセント、改変されたタンパク質パーセント、改変された耐倒伏性、または改変された脂肪酸代謝あるいは炭水化物代謝の１以上であってもよい。特異的遺伝子は、当技術分野で周知の、あるいは本明細書に列挙されている任意の遺伝子であってもよく、その例としては、マーカー遺伝子、イミダゾリノンに対する抵抗または耐性を与えるポリヌクレオチド（核酸分子）、スルホニル尿素、グリホサート、グルホシネート、２，４－Ｄ，ジカンバ、Ｌ－ホスフィノトリシン、トリアジン、ヒドロキシフェニルピルバート、ジオキシゲナーゼ阻害剤、プロトポルフィリノーゲン・オキシダーゼ阻害剤、フェノキシ・プロピオン酸、シクロヘキサオン、またはベンゾニトリル、バチルス－スリンギエンシスをコードするポリヌクレオチド、フィターゼをコードするポリヌクレオチド、１－アシル－グリセロール－３－フォスフェート・アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）をコードするポリヌクレオチド、ガラクチノール・シンターゼ、またはラフィノース人工酵素、あるいは、黒脚症、白銹病、または他の一般的なキャノーラ疾患に対する抵抗を与えるポリヌクレオチド、を含むがこれらに限定されない。そのような導入遺伝子および関連手法は、当技術分野で周知であり、例えば、米国特許第９，７１８，７５９号、第８，１４３，４８８号を参照されたい。代替的に、そのような遺伝子導入の実施形態のＤＰＡ特質は、少なくとも１つの導入遺伝子を含むキャノーラを、ちょうど説明されている通りにＮＵＢＪ１２０７で育種することによって、得られるかもしれない。例えば、ＤＰＡ収率は、米国特許第１０，５６３，２１８号に記載される通り、ＮＵＢＪ１２０７を、遺伝子導入Ｂ．ナパスＡ０２染色体で遺伝子移入することによって増加するかもしれない。ＤＨＡ並びにＤＰＡを生成する特質は、米国特許第１０，５７０，４０５号に記載される通り、例えば、遺伝子導入Ａ０５染色体などの少なくとも１つの完全なｍｏｄＢ挿入物（２つのｍｏｄＢ構築物を含む１つの遺伝子座）を、ＮＵＢＪ１２０７に遺伝子移入することによって得られるかもしれない。

したがって、導入遺伝子または他の表現型特質をＮＵＢＪ１２０７に導入することができ、あるいはＮＵＢＪ１２０７のＤＰＡ生成特質を他のブラシカ系統またはキャノーラ系統に導入することができ、それらは、当技術分野で周知の遺伝子移入あるいは戻し交雑などの従来の育種技術を使用して行われる。ＮＵＢＪ１２０７の後代を産生する際に利用され得るキャノーラ植物育種技術の例としては、例えば、循環選抜、バルク選択、集団選択、突然変異育種、戻し交雑、系図育種、組織培養、放任受粉育種、制限断片長多型増強選択、遺伝マーカー増強選択、倍加単数体の生成が挙げられる。このような技術の組み合わせが、しばしば使用される。植物育種プログラムにおけるブラシカ亜種の開発は、通常、ホモ接合性亜種の開発と評価とを必要とする。例えば、ＵＳ２０１８／００１６５９１、米国特許第８，１４３，４８８、Ｄｏｗｎｅｙ等， Ｒａｐｅｓｅｅｄ ＆ Ｍｕｓｔａｒｄ， ａｔ ４３７ ｉｎ ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＯＦ ＣＵＬＴＩＶＡＲ ＤＥＶＥＬ． （Ｆｅｈｒ （ｅｄ．）， Ｍａｃｍｉｌｌａｎ ＆ Ｃｏ．， ＮＹ， １９８７）、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ， Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｗｉｎｔｅｒ ｏｉｌｓｅｅｄ ｒａｐｅ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ， ７ Ａｄｖ． Ａｐｐｌ． Ｂｉｏｌ． １－１０４ （１９８３）、Ｗａｒｄ等， Ｏｉｌｓｅｅｄ Ｒａｐｅ （Ｆａｒｍｉｎｇ Ｐｒｅｓｓ Ｌｔｄ．， Ｗｈａｒｅｆｅｄａｌｅ Ｒｏａｄ， Ｉｐｓｗｉｃｈ， Ｓｕｆｆｏｌｋ， １９８５）、を参照されたい。

本実施形態の別の態様では、ＮＵＢＪ１２０７およびその後代は、その表現型特質（つまりＤＰＡの生成）によってのみ同定することができるというわけではなく、その遺伝子型の同定によっても同定することができる。本明細書の実施例３に説明されている通り、ＮＵＢＪ１２０７は、その導入遺伝子によってもたらされる固有の遺伝子プロファイルを有しているだけではなく、遺伝子導入カセットのＢ．ジュンセアゲノム中への挿入時に作成される結合部における固有のＤＮＡ配列をも含む。より具体的には、遺伝子構築物ＧＡ７－ｍｏｄＢの一部は、３つの遺伝子座に存在し、その各々の遺伝子座は異なる染色体（染色体Ａ０８、Ａ０６、およびＢ０７）に存在し、各々、固有のＤＮＡ配列で６つの固有の結合部を作り出す。

ＮＵＢＪ１２０７のマーカープロファイルは、ＲＦＬＰ、ランダム増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）、任意プライムポリメラーゼ連鎖反応（ＡＰ－ＰＣＲ）、ＤＮＡ増幅フィンガープリンティング（ＤＡＦ）、配列特徴化増幅領域（ＳＣＡＲ）、増幅断片長多型（ＡＦＬＰ）、マイクロサテライトとも呼ばれるＳＳＲ、またはＳＮＰなどの技術を使用して、認識され得る。例えば、Ｇｌｉｃｋ等、ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＰＬＡＮＴ ＭＯＬＥＣ． ＢＩＯＬ． ＆ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬ． （ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， １９９３）を参照されたい。ＮＵＢＪ１２０７結合部の識別のための例示的アッセイは、Ｋｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ Ａｌｌｅｌｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ（ＫＡＳＰ）アッセイであり、その方法はＵＳ２０１８／００１６５９１に例証されている。

現在、キャノーラは、ますます重要な油糧種子作物として、および世界の多くの場所におけるミール（ｍｅａｌ）のソースとして認められる。ＤＰＡジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７またはその後代は、既知の技術に従って、油、ミール、または、栄養補助食品あるいは薬品を含む他の食品あるいは食用供給品の製造に使用することができる。有利に、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７から得られる油は、エルカ酸が低い（１％未満）。グルコシノレートは、処理された種子のミール部分に確認されることがあり、そして、当技術分野で既知の方法によって最小限に抑えることができる。

ブダペスト条約に従って、出願人は、ＤＰＡ Ｂ．ジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子を、０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．， Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖａ．， ２０１１０－２２０９ Ｕ．Ｓ．Ａ．に位置するアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣＲ）に、受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託した。出願人は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§１．８０１－１．８０９の要件を充足している。出願人は、生体物質の移動または通商におけるその輸送に関する法令によって課されるいずれの制限をも放棄する権限を有していない。出願人は、特許法の下で与えられるいずれの権利も、また植物育成者の権利も放棄しない。

したがって、本実施形態のある態様は、ブラシカ・ジュンセア系統指定ＮＵＢＪ１２０７（ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７）の種子を供給し、その種子の代表的なサンプルは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている。少なくとも１つの実施形態は、ブラシカ植物またはその一部を提供し、それらは、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子を生育させることによって生成される、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子のゲノムを含み、その例としては、種子、花粉、子葉、半子葉（ｈａｌｆ－ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ）、再分化可能な細胞の組織培養物、または胚珠が挙げられる。１つの実施形態に係る組織培養物または再分化可能な細胞は、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の形態学的および生理学的な特徴を全て発現することができる植物を再分化し、そして、葉、花粉、胚、根、根端、鞘、花、胚珠、および柄を構成してもよい。別の実施形態は、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の生理学的および形態学的な特徴を全て有している、ブラシカ植物またはその一部を提供する。別の実施形態は、Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の細胞を提供し、その種子の代表的なサンプルは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている。

本実施形態の別の態様は、ブラシカ種子を生成する方法を提供し、当該方法は、種子を生成し、そして種子を収穫するために、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７を生育する工程と栽培する工程とを含み、この種子の代表的なサンプルは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている。この生育する工程または栽培する工程は、温室、テント、または野原で行われ得る。この生育する工程または栽培する工程は、商業的規模で行われてもよい。少なくとも１つの実施形態は、この方法を実践することによって得られる油、ミール、またはミールタンパク質を含む組成物を提供する。油は、１以上の脂肪酸の原油、精製油、または濃縮油であってもよい。

本実施形態の別の態様は、油またはミールを生成する方法を提供し、当該方法は、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子、またはその関連する後代を得る工程と、油またはミールを得るために種子を処理する工程と、を含む。少なくとも１つの実施形態は、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子、またはその関連する後代の油を含む組成物を提供する。油は、１以上の脂肪酸の原油、精製油、または濃縮油であってもよい。少なくとも１つの実施形態は、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子、またはその関連する後代のミールを含む組成物を提供する。

本実施形態の別の態様は、ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７由来のブラシカ植物またはその一部（例えば後代）を提供し、ここで、植物またはその一部は、その遺伝物質が、ブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７に存在する導入遺伝子に加えて、１以上の調節エレメントに操作可能に結合される１以上の導入遺伝子を含むように形質転換されている。したがって、少なくとも１つの実施形態は、その遺伝物質に、系統ＮＵＢＪ１２０７の導入遺伝子に加えて、少なくとも１つの導入遺伝子を含むブラシカ植物を生成する方法を提供し、当該方法は、ＮＵＢＪ１２０７植物またはそれに由来する植物を、別のブラシカ系統の第２の植物と交雑させる工程を含み、その結果、交雑に起因する後代の遺伝物質は、追加的な少なくとも１つの導入遺伝子を発現する。代替的に、少なくとも１つの実施形態は、その遺伝物質に、系統ＮＵＢＪ１２０７の導入遺伝子に加えて、少なくとも１つの導入遺伝子を含むブラシカ植物を生成する方法を提供し、当該方法は、ＮＵＢＪ１２０７に、少なくとも１つの追加的な導入遺伝子を導入する工程を含む。そのような方法では、交雑または形質転換に起因する後代の遺伝物質は、望ましい追加的な特質を発現する。追加的な導入遺伝子は、除草剤耐性、虫害耐性、細菌性疾患耐性、菌類性疾患耐性、ウイルス性疾患耐性、または不稔性を与えてもよい。

別の実施形態は、ブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を生成するための方法を提供し、当該方法は、（ａ）後代キャノーラ種子を産出するために、Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７を、第２のキャノーラ植物と交雑させる工程と、（ｂ）ブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を産出するために、植物生育条件下で上記後代キャノーラ種子を生育させる工程と、を含む。本実施形態は、さらに、（ｃ）追加的な、ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ後代種子を産出するために、ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を、それ自体と、または別のキャノーラ植物と交雑させる工程と、（ｄ）追加的な、ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を産出するために、植物生育条件下で工程（ｃ）の上記後代キャノーラ種子を生育させる工程と、（ｅ）ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物をさらに産生するために、（ｃ）の交雑させる工程と（ｄ）の生育させる工程とを、ゼロ（０）回～１０（１０）回繰り返す工程と、を含み、ここで、ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物は、ＤＰＡ生成物から選択された少なくとも２つのＮＵＢＪ１２０７特質と、少なくとも１つの追加的な農業経済学的に望ましい特質とを発現する。関連する実施形態は、そのような方法によって生成される、ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物またはその一部を提供する。

別の実施形態は、ブラシカ種子を生成するための方法を提供し、当該方法は、第１の親ブラシカ植物を第２の親ブラシカ植物と交雑させる工程と、結果として生じる第１世代のブラシカ種子を収穫する工程と、を含み、ここで、上記第１の親ブラシカ植物または上記第２の親ブラシカ植物は、ブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７植物である。具体的には、第１の親ブラシカ植物は第２の親ブラシカ植物とは異なるものであり、そして、結果として生じる種子は第１世代（Ｆ１）のハイブリッドブラシカ種子である。関連する実施形態は、戻し交雑による後代種子を生成するために、選択されたＦ１ハイブリッド植物を、系統ＮＵＢＪ１２０７と、または望ましい特質を有する異なるブラシカ植物と、戻し交雑させる工程と、結果として生じる戻し交雑による後代種子を生育させ、かつ望ましい特質を有する戻し交雑による後代植物を選択する工程と、ブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７由来の後代ブラシカ植物を生成するために、戻し交雑させる工程と生育させる工程とを、選択された、戻し交雑による後代植物上で、１～１０世代にわたって繰り返す工程と、のさらなる工程を、提供する。関連する実施形態では、ブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７由来の後代は、Ｆ１後代を自家受粉（自殖）させることによって得ることができる。

別の実施形態は、ブラシカ同系交配の系統を得るための方法を提供し、当該方法は、（ａ）ハイブリッドの種子を含む種子のコレクションを植える工程であって、その親の１つがブラシカＮＵＢＪ１２０７であり、上記コレクションはさらにブラシカＮＵＢＪ１２０７の種子を含む、工程と、（ｂ）種子の上記コレクションからキャノーラ植物を生育させる工程と、（ｃ）上記同系交配の系統からの同系交配の植物を同定する工程と、（ｄ）上記同系交配の植物を選択する工程と、（ｅ）上記同系交配の植物のホモ接合性を保持する様式で受粉を制御する工程と、を含む。同系交配のブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７の種子は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている。この方法のいくつかの実施形態では、ブラシカ同系交配の系統は、Ｂ．ジュンセアまたはＢ．ナパスであってもよい。

少なくとも１つの実施形態は、倍加単数体亜種を生成する方法を提供し、当該方法は、（ａ）本明細書に提供されるＦ１植物の蕾を単離する工程と、（ｂ）単数体花粒粉を解剖する工程と、（ｃ）培養物中に単数体花粒粉を配置する工程と、（ｄ）胚、そしてその後にさらに小さな胚（ｐｌａｎｔｌｅｔ）へと分化するように、花粒粉を誘導する工程と、（ｅ）さらに小さな胚が二倍体の染色体数を含んでいるか否かを同定する工程であって、ここで、二倍体の染色体数は染色体の倍加を通じて生じる、工程と、さらに小さな胚が、二倍体の染色体数を含んでいる場合にはその小さな胚を生育させ続ける工程と、を含む。

本実施形態のさらなる態様は、導入遺伝子挿入物およびＢ．ジュンセアゲノムの結合によって具現化される新規の核酸分子（例えばＤＮＡ分子）、および、そのような核酸を含む細胞または組成物を提供する。例示的な実施形態は、（ａ）配列番号：１として提供される配列と配列番号：２として提供される配列とを含むＤＮＡ分子、（ｂ）配列番号：３として提供される配列と配列番号：４として提供される配列とを含むＤＮＡ分子、または、（ｃ）配列番号：５として提供される配列と配列番号：６として提供される配列とを含むＤＮＡ分子、から選択される、１つ、２つ、または３つのＤＮＡ分子を含むＤＮＡ分子を提供する。この態様に係る例示的な組成物は、そのようなＤＮＡ分子を含む種子ミールであってもよい。少なくとも１つの実施形態は、本明細書に記載される、（ブラシカ植物などの）植物、種子、植物の一部、種子ミール等を提供し、これらはそのようなＤＮＡ分子を含む。

関連する実施形態は、（ａ）配列番号：１として提供される配列と配列番号：２として提供される配列とを含むＤＮＡ分子、（ｂ）配列番号：３として提供される配列と配列番号：４として提供される配列とを含むＤＮＡ分子、（ｃ）配列番号：５として提供される配列と配列番号：６として提供される配列とを含むＤＮＡ分子、から選択される、１つ、２つ、または３つの核酸分子を含む細胞を、提供する。細胞はＢ．ジュンセア細胞であってもよい。細胞は、本明細書に記載される通りの、植物、種子、または植物の一部の中に存在してもよい。細胞はミール（つまり、種子ミール）中に存在してもよい。

別の態様は、配列番号：１－配列番号：６のＤＮＡ分子、またはその一部を使用する方法を提供する。そのような使用は、例えば、ＮＵＢＪ１２０７の遺伝子座特徴の少なくとも１つの存在を同定することを含む。ある実施形態は、配列番号：１－配列番号：６のうちの１つからの、少なくとも２０の連続するヌクレオチドの配列を含むＤＮＡ分子の増幅などの、ＤＮＡ分子を検出する方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、ＫＡＳＰアッセイであってもよい。関連する実施形態は、プライマーまたはプローブなどの、配列番号：１－配列番号：６の核酸のうちのいずれか１つの単鎖部分を提供する。

本実施形態の別の態様は、植物ＤＮＡを含むサンプルのイベントＮＵＢＪ１２０７の存在を検出する方法を提供し、ここで、方法は、上記サンプルを、配列番号：１～配列番号：６に示される通りのブラシカゲノムの少なくとも１つの導入遺伝子隣接結合領域に結合する、少なくとも１つのプライマーと接触させる工程を含む。この方法は、ＫＡＳＰ（商標）遺伝子型決定アッセイを利用するものであってもよい。関連する実施形態は、そのような方法によって同定される、植物、植物物質、または植物由来物質を提供する。別の関連する実施形態は、そのような方法を実行するためのコンポーネントを含む、キットを含む。

少なくとも１つの実施形態は、植物ＤＮＡを含むサンプルのイベントＮＵＢＪ１２０７の存在を検出する方法を提供し、当該方法は、（ａ）上記サンプルを、ＮＵＢＪ１２０７のブラシカゲノムの隣接結合領域に結合する第１のプライマー、およびＮＵＢＪ１２０７の導入遺伝子に結合する第２のプライマーに接触させる工程と、（ｂ）上記サンプルをポリメラーゼ連鎖反応にさらす工程と、（ｃ）上記プライマー間に産生されるアンプリコンを特徴付ける工程と、を含む。

本実施形態の別の態様は、同系交配のＢ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７のゲノムＤＮＡを提供し、上記同系交配の系統の代表的な種子は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている。関連する実施形態は、（ａ）配列番号：１～配列番号：６の少なくとも１つに示される配列を有するＤＮＡ、（ｂ）配列番号：１～配列番号：６の少なくとも１つとの少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ、または、（ｃ）（ａ）または（ｂ）の補体、を含む、植物細胞を提供する。

本実施形態の別の態様は、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％のＤＰＡ（種子油における合計脂肪酸の％として）を含む、Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の種子、またはそれに由来する植物（つまり、後代または関連後代）を提供する。別の実施形態は、Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の種子の少なくとも９５％を含む種子のコレクション、またはそれに由来する植物を提供し、ここで、上記種子は、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％のＤＰＡ（種子油における合計脂肪酸の％として）を含む。特定の実施形態は、そのような種子または種子のコレクションから得られる種子油を提供する。

さらなる態様は、（ａ）ＮＵＢＪ１２０７のＤＰＡ特質を、雄性の不稔性であるエリートブラシカ系統に遺伝子移入する工程と、（ｂ）ＮＵＢＪ１２０７のＤＰＡ特質を、稔性である第２のエリートブラシカ系統に遺伝子移入する工程と、（ｃ）ハイブリッド後代を得るために、２つの系統（ａ）および（ｂ）を交雑する工程と、（ｄ）ハイブリッド後代の種子を栽培する工程と、（ｅ）栽培されたハイブリッド後代によって生成される穀物を収穫する工程と、を含む、ＤＰＡ含有ブラシカ穀物を得る方法を提供する。

実施例１．栽培の試み（北米）
ＮＵＢＪ１２０７のエリートイベント由来のＢ系統から得られた種子は、ガスクロマトグラフィーによって判定された通り、以下の脂肪酸プロファイルを有していた（表２）。

種子を春に、北米のゾーン７に播種した。以下の表３に示される通り、栽培中、特定の農学的特徴をおよそ週毎にモニタリングした。

実施例２．栽培の試み（オーストラリア）
ＮＵＢＪ１２０７を含むＤＰＡ生成Ｂ．ジュンセアの４系統を、オーストラリアの別々のテントにおけるフィールドトライアル（ｆｉｅｌｄ－ｔｒｉａｌｅｄ）に使用し、そして、成熟種子（プールされているバルク）の脂肪酸含有量を、ガスクロマトグラフィーによって分析した（代替的に、種子脂肪酸を高解像度ＮＭＲを使用して測定することもできる）。存在する脂肪酸が（合計脂肪酸％の）１％を超える脂肪酸含有量が、以下の表４に示される。データは、バルクの植物由来の世代と単一の植物由来の世代との間で、一貫性を示す。

ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７を、２０１７年の冬の間に、南東オーストラリアで、野原で生育させた。種子を５月に播種し、結果として生じる植物は播種後１３９日で開花し始め、そして、種子は播種後２１８日で収穫した。

テント生育ＮＵＢＪ１２０７の同胞からの単一の植物由来のプーリンされた種子データが、以下の表５に示される。データは、Ｔ５世代の同胞間で一貫性を示す。

さらなる実験では、種子鞘を、成熟度合いおよび植物位置（ｐｏｓｉｔｉｏｎ）の様々な段階で、１０の個々のテント生育植物から収穫し、その種子を分析した。以下のデータ、つまり表６は、植物における成熟度合いおよび位置が異なる鞘間で、一貫性を示す。

実施例４．固有の隣接領域
本明細書の方法およびキットは、特にＮＵＢＪ１２０７中に導入遺伝子を含む植物物質、並びに遺伝子導入ブラシカ植物、植物物質、およびそのようなイベントを含む種子の存在を、生体サンプルにおいて同定するのに有用である。本明細書に記載されるエリートイベントＮＵＢＪ１２０７は、遺伝子型によって同定することができ、遺伝子型は、同じ栽培品種または関連する栽培品種の植物を同定することができたり、あるいは系図を判定または確認するために使用することができるたりする、遺伝マーカープロファイルを通じて特徴付けすることができる。遺伝マーカープロファイルは、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）、ランダム増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）、任意プライムポリメラーゼ連鎖反応（ＡＰ－ＰＣＲ）、ＤＮＡ増幅フィンガープリンティング（ＤＡＦ）、配列特徴化増幅領域（ＳＣＡＲ）、増幅断片長多型（ＡＦＬＰ）、単純反復配列（ＳＳＲ）（マイクロサテライトとも呼ばれる）、および単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）などの技術によって、得ることができる。

例えば、本明細書に記載されるエリートイベントＮＵＢＪ１２０７は、植物物質のサンプルからの遺伝子地図の生成によって同定することができる。遺伝子地図は、従来のＲＦＬＰ、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析、または 異種タンパク質をコードする組込ＤＮＡ分子（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）のおよその染色体位置を同定するＳＳＲによって生成することができる。Ｇｌｉｃｋ ＆ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ， ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＰＬＡＮＴ ＭＯＬＥＣ． ＢＩＯＬ． ＆ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬ． ２６９ （ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， ＦＬ， １９９３）を参照されたい。染色体位置に関する地図情報は、対象の遺伝子導入植物の所有者保護に有用である。例えば、組込領域の地図を、疑わしい植物の同様のマップと比較して、後者が対象植物と共通の譜系を有しているか否かを判定することができる。地図比較の例としては、ハイブリッド化、ＲＦＬＰ、ＰＣＲ、ＳＳＲ、および配列決定を挙げることができ、これらの全ては従来技術である。

ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７は、親植物ゲノムと挿入された遺伝子導入構築物との結合部における固有のＤＮＡ配列によって特徴付けおよび同定することができる、エリートイベントからの同系交配系統である。より具体的には、染色体Ａ０８、Ａ０６、およびＢ０７の各々は、ＤＰＡジュンセアに固有の５’および３’の結合部を含む。

例えば、染色体Ａ０８の５’結合部のＤＮＡ配列は、Ｂ．ジュンセアの１００のヌクレオチド（イタリック体）と、導入遺伝子の１００のヌクレオチド（非イタリック体）とを含む。

例えば、染色体Ａ０８の３’結合部のＤＮＡ配列は、導入遺伝子の１００のヌクレオチド（非イタリック体）と、Ｂ．ジュンセアの１００のヌクレオチド（イタリック体）とを含む。

例えば、染色体Ａ０６の５’結合部のＤＮＡ配列は、Ｂ．ジュンセアの１００のヌクレオチド（イタリック体）と、導入遺伝子の１００のヌクレオチド（非イタリック体）とを含む。

例えば、染色体Ａ０６の３’結合部のＤＮＡ配列は、導入遺伝子の１００のヌクレオチド（非イタリック体）と、Ｂ．ジュンセアの１００のヌクレオチド（イタリック体）とを含む。

例えば、染色体Ｂ０７の５’結合部のＤＮＡ配列は、Ｂ．ジュンセアの１００のヌクレオチド（イタリック体）と、導入遺伝子の１００のヌクレオチド（非イタリック体）とを含む。

例えば、染色体Ｂ０７の３’結合部のＤＮＡ配列は、導入遺伝子の１００のヌクレオチド（非イタリック体）と、Ｂ．ジュンセアの１００のヌクレオチド（イタリック体）とを含む。

ＤＰＡジュンセアＮＵＢＪ１２０７の同定については、結合部を同定するためのプライマーは、より大きな結合配列に由来する任意の適切な長さであり得る。ＤＰＡ Ｊｕｎｃｅａ ＮＵＢＪ１２０７を同定するために使用される結合配列の長さは、固有の結合部の同定を提供する任意の適切な長さであってもよく、例えば、導入遺伝子とＢ．ジュンセアＤＮＡとの結合部から少なくとも１０、または少なくとも１５、または２０の連続的なヌクレオチドであってもよい。

既出の実施形態が、明瞭性および理解を目的として、例証および例示としてかなり詳細に記載されてきたが、単一遺伝子の改変および突然変異、ソマクローン変異体、本同系交配系統の植物の大規模な集団から選択された変異個体等などの特定の変更および改変が、添付の請求項によってのみ限定される本発明の範囲内で実践されてもよいことは、当業者には明らかであろう。

Claims (53)

1. ブラシカ・ジュンセア系統指定ＮＵＢＪ１２０７の種子であって、前記種子の代表的なサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている、種子。
2. 請求項１の種子のゲノムを含み、請求項１の種子を育てることによって生成される、ブラシカ植物またはその一部。
3. 請求項２に記載の植物の花粉。
4. 請求項２に記載の植物の胚珠。
5. 請求項２に記載の植物の生理学的および形態学的特徴を全て有する、ブラシカ植物またはその一部。
6. 請求項２に記載のブラシカ植物から生成される、再分化可能な細胞の組織培養物。
7. 前記細胞または原形質体は、葉、花粉、胚、根、根端、鞘、花、胚珠、および柄から成る群から選択される組織のものである、請求項６に記載の組織培養物。
8. 前記組織は、請求項２に記載の植物の形態学的および生理学的な特徴を全て発現することが可能な植物を再分化する、請求項２に記載のブラシカ植物の再分化可能な細胞の組織培養物。
9. ブラシカ種子を生成する方法であって、前記方法は、種子を生成するために請求項２に記載の植物を生育させる工程、および前記種子を収穫する工程を含む、方法。
10. 前記生育させる工程は温室で行われる、請求項９に記載の方法。
11. 前記生育させる工程はテントで行われる、請求項９に記載の方法。
12. 前記生育させる工程は野原で行われる、請求項９に記載の方法。
13. 請求項２に記載の前記植物の種子を得る工程、および油を得るために前記種子を処理する工程を含む、油を生成する方法。
14. 前記植物またはその一部は、その遺伝物質が、ブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７に存在する導入遺伝子に加えて、１以上の調節エレメントに操作可能に結合される１以上の導入遺伝子を含むように形質転換されている、請求項５に記載のブラシカ植物またはその一部。
15. その遺伝物質に、ＮＵＢＪ１２０７系統の導入遺伝子に加えて、少なくとも１つの導入遺伝子を含むブラシカ植物を生成する方法であって、前記方法は、請求項１４に記載の前記植物を、別のブラシカ系統の第２の植物またはＮＵＢＪ１２０７属の植物のいずれかと交雑させる工程を含み、その結果、前記交雑に起因する後代の前記遺伝物質は、追加的な少なくとも１つの導入遺伝子を発現する、方法。
16. 追加的な導入遺伝子は、除草剤耐性、虫害耐性、細菌性疾患耐性、菌類性疾患耐性、ウイルス性疾患耐性、または不稔性を与える、請求項１５に記載の方法。
17. 前記植物またはその一部は、従来の育種技術の産物であり、そして、組み換え型、突然変異型、またはＮＵＢＪ１２０７に関連したエリートイベント以外の他の遺伝子改変によって改質されていない、請求項５に記載のブラシカ植物またはその一部。
18. 同系交配のブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７の特質に加えて、少なくとも１つの望ましい特質を付加したブラシカ植物を生成するための方法であって、前記方法は、請求項１７に記載の植物を、別のブラシカ系統の植物、または同系交配の系統ＮＵＢＪ１２０７の植物と交雑させる工程を含み、その結果、前記交雑に起因する後代の遺伝物質は望ましい追加的な特質を発現する、方法。
19. 前記追加的な導入遺伝子は、除草剤耐性、虫害耐性、細菌性疾患耐性、菌類性疾患耐性、ウイルス性疾患耐性、または不稔性を与える、請求項１８に記載の方法。
20. ブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を生成するための方法であって、前記方法は、
    （ａ）後代キャノーラ種子を産出するために、ブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の植物を、第２のキャノーラ植物と交雑させる工程と、
    （ｂ）ブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を産出するために、植物生育条件下で前記後代キャノーラ種子を生育させる工程と、を含む、方法。
21. （ｃ）追加的なＮＵＢＪ１２０７由来の後代キャノーラ種子を産出するために、ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を、それ自体と、または別のキャノーラ植物と交雑させる工程と、
    （ｄ）追加的なＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物を産出するために、植物生育条件下で工程（ａ）の前記後代キャノーラ種子を生育させる工程と、
    （ｅ）ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物をさらに産生するために、（ａ）の前記交雑させる工程と（ｂ）の前記生育させる工程とを、ゼロ（０）回～７（７）回繰り返す工程と、を含み、ここで、前記ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物は、ＤＰＡ生成物から選択された少なくとも２つのＮＵＢＪ１２０７特質と、少なくとも１つの追加的な農業経済学的に望ましい特質とを発現する、請求項２０に記載の方法。
22. 請求項２０に記載の方法により生成される、ブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物またはその一部。
23. 請求項２１に記載の方法により生成される、キャノーラＮＵＢＪ１２０７由来のキャノーラ植物またはその一部。
24. ブラシカ種子を生成するための方法であって、前記方法は、第１の親ブラシカ植物を第２の親ブラシカ植物と交雑させる工程と、結果として生じる第１世代のブラシカ種子を収穫する工程と、を含み、ここで、前記第１の親ブラシカ植物または前記第２の親ブラシカ植物は、請求項２に記載のブラシカ植物である、方法。
25. 前記第１の親ブラシカ植物は前記第２の親ブラシカ植物とは異なるものであり、そして、結果として生じる種子は第１世代（Ｆ１）のハイブリッドブラシカ種子である、請求項２４に記載の方法。
26. キャノーラ同系交配の系統を得るための方法であって、前記方法は、
    （ａ）ハイブリッドの種子を含む種子のコレクションを植える工程であって、その親の１つが、請求項２に記載のブラシカ植物であり、前記コレクションはさらに、前記同系交配の系統の種子を含む、工程と、
    （ｂ）種子の前記コレクションからキャノーラ植物を生育させる工程と、
    （ｃ）前記同系交配の系統からの同系交配の植物を同定する工程と、
    （ｄ）前記同系交配の植物を選択する工程と、
    （ｅ）前記同系交配の植物のホモ接合性を保持する様式で受粉を制御する工程と、
    を含む、方法。
27. １つの親が同系交配のブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７の生理学的および形態学的な特徴を全て有し、前記系統の種子がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている、請求項２６に記載の方法。
28. 前記キャノーラ同系交配の系統は、Ｂ．ジュンセアまたはＢ．ナパスである、請求項２６に記載の方法。
29. ブラシカ・ジュンセアＮＵＢＪ１２０７の細胞であって、ブラシカ・ジュンセアＮＵＢＪ１２０７の種子の代表的なサンプルがＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている、細胞。
30. （ａ）配列番号：１の核酸配列および配列番号：２の核酸配列を含む核酸分子、
    （ｂ）配列番号：３の核酸配列および配列番号：４の核酸配列を含む核酸分子、または、
    （ｃ）配列番号：５の核酸配列および配列番号：６の核酸配列を含む核酸分子、
    から選択される、ＤＮＡ分子、または２つまたは３つのＤＮＡ分子の組み合わせを含む、核酸分子。
31. 請求項３０に記載の前記核酸分子を含む植物、種子、植物の一部、または種子ミール。
32. 前記植物、種子、植物の一部、または種子ミールは、ブラシカ・ジュンセアの植物、種子、植物の一部、または種子ミールである、請求項３１に記載の植物、種子、植物の一部、または種子ミール。
33. （ａ）配列番号：１の核酸配列および配列番号：２の核酸配列を含む核酸分子、
    （ｂ）配列番号：３の核酸配列および配列番号：４の核酸配列を含む核酸分子、
    （ｃ）配列番号：５の核酸配列および配列番号：６の核酸配列を含む核酸分子、または、
    （ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）の補体、
    から選択される１つ、２つ、あるいは３つのＤＮＡ分子を含む細胞。
34. 前記細胞は、ブラシカ・ジュンセア細胞である、請求項３３に記載の細胞。
35. 前記細胞は、植物、種子、植物の一部、または種子ミール中に存在する、請求項３３に記載の細胞。
36. 植物ＤＮＡを含むサンプル中のイベントＮＵＢＪ１２０７の遺伝子座特徴の少なくとも１つの存在を同定する方法であって、ここで、前記方法は、
    （ａ）前記サンプルを、請求項３０に記載の核酸分子の少なくとも１つ、またはその一部と接触させる工程と、
    （ｂ）前記サンプルを、ポリメラーゼ連鎖反応にさらす工程と、
    （ｃ）配列番号：１～配列番号：６のうちの１つから、少なくとも２０の連続するヌクレオチドで構成される核酸分子を含む、アンプリコンをアッセイする工程と、を含む、方法。
37. 前記方法は、ＫＡＳＰ（商標）遺伝子型決定アッセイである、請求項３６に記載の方法。
38. 配列番号：１～配列番号：６の前記核酸分子のいずれか１つの単鎖部分は、プライマーまたはプローブとして使用される、請求項３６に記載の方法。
39. 植物ＤＮＡを含むサンプルのイベントＮＵＢＪ１２０７の存在を検出する方法であって、ここで、前記方法は、前記サンプルを、配列番号：１～配列番号：６に示される通りのブラシカゲノムの少なくとも１つの導入遺伝子隣接結合領域に結合する、少なくとも１つのプライマーと接触させる工程を含む、方法。
40. 前記方法は、ＫＡＳＰ（商標）遺伝子型決定アッセイである、請求項３９に記載の方法。
41. 請求項３９または請求項４０に記載の方法によって同定される、植物、植物物質、または植物由来の物質。
42. 請求項３９または請求項４０に記載の方法を実行するためのコンポーネントを含む、キット。
43. 植物ＤＮＡを含むサンプルのイベントＮＵＢＪ１２０７の存在を検出する方法であって、ここで、前記方法は、（ａ）前記サンプルをＮＵＢＪ１２０７のブラシカゲノムの隣接結合領域に結合する第１のプライマー、およびＮＵＢＪ１２０７の導入遺伝子に結合する第２のプライマーに接触させる工程と、（ｂ）前記サンプルをポリメラーゼ連鎖反応にさらす工程と、（ｃ）前記プライマー間に生成されるアンプリコンを特徴付ける工程と、を含む、方法。
44. 同系交配のブラシカ系統ＮＵＢＪ１２０７のゲノムＤＮＡであって、同系交配のキャノーラ系統の代表的な種子が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１２５９５４の下で寄託されている、ゲノムＤＮＡ。
45. （ａ）配列番号：１～配列番号：６の少なくとも１つに示される配列を有するＤＮＡ、（ｂ）配列番号：１～配列番号：６の少なくとも１つとの少なくとも９５％の同一性を有するＤＮＡ、または、（ｃ）（ａ）または（ｂ）の補体、を含む、植物細胞。
46. 約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％のＤＰＡ（種子油における合計脂肪酸の％として）を含む、ブラシカ・ジュンセア系統の種子。
47. ブラシカ・ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７の種子の少なくとも９５％を含む種子のコレクションであって、ここで、前記種子は、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％のＤＰＡ（種子油における合計脂肪酸の％として）を含む、コレクション。
48. 請求項４６に記載の種子または請求項４７に記載の種子のコレクションから得られる、種子油。
49. 請求項４６に記載の種子または請求項４７に記載の種子のコレクションから得られる、ミール。
50. 請求項４６に記載の種子または請求項４７に記載の種子のコレクションから得られる、ミールタンパク質。
51. ＤＨＡ含有ブラシカ穀物を得る方法であって、前記方法は、
    （ａ）Ｂ．ジュンセア系統ＮＵＢＪ１２０７のＤＰＡ特質を、雄性の不稔性であるエリートブラシカ系統に遺伝子移入する工程と、
    （ｂ）系統ＮＵＢＪ１２０７のＤＰＡ特質を、稔性である第２のエリートブラシカ系統に遺伝子移入する工程と、
    （ｃ）ハイブリッド後代を得るために、２つの系統（ａ）および（ｂ）を交雑する工程と、
    （ｄ）前記ハイブリッド後代の種子を栽培する工程と、
    （ｅ）栽培されたハイブリッド後代によって生成される穀物を収穫する工程と、を含む、方法。
52. エステル化された形態の脂肪酸を含む、抽出された種子油であって、前記脂肪酸は、パルミチン酸（Ｃ１６）、ステアリン酸（Ｃ１８）、オレイン酸（Ｃ１８：１）、シス形バクセン酸（Ｃ１８：１ｎ７ｃ）、リノール酸（Ｃ１８：２ｎ６ｃ）、α－リノレン酸（Ｃ１８：３ｎ３）、ステアリドン酸（Ｃ１８：４ｎ３）、ゴンドイン酸（Ｃ２０：１ｎ９ｃ）、エイコサテトラエン酸（Ｃ２０：４ｎ３）、ω３ドコサトリエン酸（Ｃ２２：４ｎ３）、およびω３ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５ｎ３）を含み、
    ここで、前記種子油の合計脂肪酸含有量において、
    パルミチン酸のレベルは５％未満であり、ステアリン酸のレベルは４％未満であり、オレイン酸のレベルは３５％－４８％であり、シス形バクセン酸のレベルは４％未満であり、リノール酸のレベルは９％未満であり、α－リノレン酸のレベルは１５％－２０％であり、ステアリドン酸のレベルは２％未満であり、ゴンドイン酸のレベルは２％未満であり、エイコサテトラエン酸のレベルは４．５％未満であり、ω３ドコサトリエン酸のレベルは１％－３％であり、および、ω３ドコサペンタエン酸のレベルは８％～１５％である、抽出された種子油。
53. 前記種子油は、ブラシカ・ジュンセア由来のものである、請求項５２に記載の抽出された種子油。