CN101490547A - 血小板的计数 - Google Patents

Abstract

一种用于体积计数血液样本中的血小板的样本获取设备，其包括用于容纳血液样本的测量腔。该测量腔具有预定的固定厚度。该样本获取设备还包括反应物，其以干燥的形式设置在限定该测量腔的表面上。该反应物包括溶解血液样本中的血红细胞的溶血剂，并且可选的是包括选择性着色所述血液样本中的血小板的着色剂。一种系统包括该样本获取设备和测量装置。该测量装置包括样本获取设备支架、光源和用于获取该样本放大的数字图像的成像系统。该测量装置还包括设置为分析所获取的数字图像以确定血液样本中的血小板数量的图像分析器。

Description

血小板的计数

技术领域

本发明涉及一种样本获取设备、一种用于对血液样本中的血小板进行体积计数的方法和系统。

背景技术

血小板是由巨细胞(巨核细胞)的细胞质获得的循环血液元素。严格地讲，它们不是细胞并且不具有细胞核。它们在止血、凝血收缩、破损血管和炎症康复方面都起到重要作用，并且一般血小板的浓度是每升血液250×10⁹个。在血液中的存活时间通常为8-10天。它们很小并且是盘形的，其直径约为2μm，体积约为7fl。血小板包含血液凝结中包含的物质，这些物质存储在血小板内的某些颗粒中，并且当活化血小板时该物质释放，例如在血管的裂口处。

确定血小板数量在治疗患者方面通常是重要的。可能需要这种分析来诊断多种病症。例如，血小板数量低(小于每升血液50×10⁹个)代表血小板减少症，这是出血倾向的普遍原因。血小板浓度低的原因可能是例如再生障碍性贫血、急性白血病骨髓瘤或者细胞生长抑制造成的破损骨髓引起的产量减少，血小板存活时间减少或者血小板分布变化，例如血小板聚合造成的。另一方面，血小板浓度增大可能是因为慢性炎症(血小板增多症)，例如风湿性动脉炎，或者可能是因为骨髓中不受约束地产生血小板(血小板增多症)并且会导致血液凝结、血栓症。

希望能够尽可能快地获得分析结果，以便使患者等待时间最小化并且能够使医师在第一次检查该患者时便直接决定治疗和诊断。因此，优选的是提供一种可以由医师或护士快速实施而无需向实验室发送测试的分析方法。

目前，通常利用自动Coulter计数器获得血小板数量，由此利用电导率或者电阻率确定血液成分(细胞和血小板)。美国专利4240029公开了一种利用孔径型转换器计数血小板和血红细胞的装置，该孔径型转换器能够度量血小板与血红细胞之间的区别。

另一种计数血小板的自动方法在流动血细胞计数器中使用激光散射。由测量光散射表示的相对小的尺寸来识别血小板。例如美国专利5817519公开了这种方法的应用。

其它当前估计血小板计数的方法是利用血小板特效抗体，例如WO00/25140中公开的，或者测量样本中释放的血小板微粒蛋白质的量，例如凝血栓蛋白或者β-血小板球蛋白，例如US6027904公开的。

根据Brecher-Cronkite方法，有时还在显微镜中计数血小板，其中将血液样本与草酸铵溶液混合，此后在相衬显微镜中计数血小板，该血小板可见为具有暗边的亮点。另一种已知的计数血小板的方法是利用市场上可以买到的反应物Plaxan^TM结合计数腔，例如Bürker腔。计数腔设有将该腔分成确定好的小体积的格栅。然后能够通过计数格栅中每个盒子的血小板数量来确定血小板计数。分析员手动获得血小板计数，该分析员必须是在实施分析方面有经验的，以便能够实施可靠的分析。这些分析花费时间。此外，因为手动实施，所以分析结果可能会根据实施分析的人变化。

仍然需要加速并且简化现有的确定血小板计数的自动方法，使得可以在医疗点提供分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种确定血小板体积计数的简单分析。本发明的另一个目的是提供一种快速分析而无需复杂的装置或者大量的样本准备。

利用根据独立权利要求的样本获取设备、方法和系统部分或者全部实现这些目的。由从属权利要求可以清楚优选实施方式。

因此，提供了一种用于体积计数血液样本中的血小板的样本获取设备。该样本获取设备包括用于容纳血液样本的测量腔。该测量腔具有预定的固定厚度。该样本获取设备还包括反应物，其以干燥的形式设置在形成该测量腔的表面上，所述反应物包括溶解血液样本中的血红细胞的溶血剂，并且可选的是，包括选择性着色血液样本中的血小板的着色剂。

该样本获取设备提供了将全部血液的样本直接提取到测量腔中并且将其用于分析的可能性。无需样本准备。实际上，可以直接从患者刺破的手指将血液样本吸入测量腔。为该样本获取设备提供反应物能够使得在该样本获取设备内反应，从而使得该样本为分析做好准备。当血液样本与反应物相接触时开始反应。因此，无需手工准备该样本，从而使得这种分析特别适合在患者等候的同时直接在检查室中进行。

因为所提供的反应物是干燥形式的，所以可以运输和长期存储该样本获取设备，而不会影响该样本获取设备的可用性。因此，可以在进行血液样本分析的很久以前便制造和准备具有反应物的该样本获取设备。

尽管许多现有的方法能够计数不同的血液细胞，甚至是计数血液细胞的亚群，但是根据本发明的样本获取设备特别适于实施血小板的体积计数。该反应物包括溶血剂，其溶解血液样本中的血红细胞，而不溶解血小板。这使得不可能计数该样本中的血红细胞。另一方面，血红细胞的溶解简化了在血液样本内对血小板的辨别和识别。还可能存在一些完整的白细胞，但是它们与血小板相比相当少，并且可以通过尺寸和外观容易地与血小板区分开。

可选的着色剂为单独的血小板提供了标记。这是一种能够使得血小板被单独地观察或探测的方式。另一种能够使得血小板被单独地观察或探测的方式是利用相衬方法(phase contrast approach)，优选的是利用相衬显微镜。还可以使用着色剂与相衬方法相结合。例如，可以通过扫描测量腔或者获得测量腔的图像来探测血小板。因此，可以通过将限定体积中一个一个地探测的血小板的数量相加来获得血小板计数。

本发明还提供了一种体积计数血液样本中的血小板的方法。该方法包括将血液样本获取到样本获取设备的测量腔中，所述测量腔具有反应物，包括溶血剂，并且可选的是包括着色剂，其与样本反应，使得血小板着色，照射具有血小板的该样本，从而获得测量腔中受照射样本放大的数字图像，其中通过着色剂的选择性着色和/或相衬(phase contrast)来区分血小板，以及数字分析该数字图像以识别血小板并且确定该样本中的血小板数量。

本发明还提供了一种体积计数血液样本中的血小板的系统。该系统包括如上所述的样本获取设备。该系统还包括测量装置，其包括设置为容纳样本获取设备的样本获取设备支架，该样本获取设备将血液样本保持在测量腔中，以及包括设置来照射血液样本的光源。该测量装置还包括成像系统，其包括放大系统和用于获取测量腔中受照射样本放大的数字图像的数字图像获取装置，其中在该数字图像中通过着色剂的选择性着色和/或相衬来区分血小板。该测量装置还包括设置为分析所获取的数字图像以识别该血液样本中的血小板以及确定血小板数量的图像分析器。

本发明的方法和系统提供了一种用于确定血小板计数的对血液样本进行的非常简单的分析。这种分析不需要复杂的测量装置或者预先需要由操作员实施的步骤。因此，其可以直接与对患者的检查联系起来，而无需具有资格的技师。该测量装置利用该样本获取设备的属性，对已经直接获取到测量腔中的未稀释的全血样本进行分析。该测量装置设置为对一定体积的样本成像，以根据一个图像对血小板进行体积计数。

可以将血液样本与测量腔中的反应物相混和。在几分钟内，血液样本与反应物的反应将使血红细胞溶解，并且如果提供了着色剂，则使血小板着色，使得该样本为光学测量做好准备。可以通过例如将反应物散布或者扩散到血液样本中，或者主动地振动或移动该样本获取设备使得测量腔中发生搅拌作用来使血液样本与反应物混合。

该样本获取设备可以包括具有限定所述测量腔的两个平面表面的体部件。该两个平面表面可以设置为相互之间具有预定距离，以确定用于光学测量的样本厚度。这意味着，该样本获取设备为光学测量提供了确定好的厚度，其可以用于精确地确定该血液样本每个体积单位的血小板计数。被分析样本的体积将由测量腔的厚度和被成像样本的面积完全确定。因此，可以将该确定好的体积用于使血小板的数量与血液样本的体积相关，从而确定血小板体积计数。

测量腔优选具有50-170微米的均匀厚度。至少50微米的厚度意味着，测量腔不会迫使该血液样本分布成单层，从而允许在小横截面面积上分析较大体积的血液。因此，使用较小的血液样本图像可以分析足够大体积的血液样本，以便给出可靠的血小板计数值。该厚度更优选的是至少80微米，这允许分析更小的横截面面积或者分析更大的样本体积。而且，至少50微米并且更优选的是80微米的厚度还简化了在两个平面表面之间具有确定好的厚度的测量腔的制造。

对于设置在厚度约为100微米的腔中的大多数样本而言，血小板计数仍然太高，从而由于血小板排列在彼此之上而使得血小板计数存在偏差。然而，这些偏差的影响与血小板计数有关，并且因此至少对于大血小板计数值而言，可以利用对结果的统计校正来处理该偏差的影响。该统计校正可以基于测量装置的校准。如果进一步将腔厚度减小到例如50微米，则这种校正更不复杂，但是这可以与上述小厚度的不利影响相权衡。

而且，测量腔的厚度足够小以使得测量装置能够获得数字图像，从而可以同时分析测量腔的全部深度。因为测量装置中将要使用放大系统，所以获得大景深是不简单的。因此，测量腔的厚度优选不超过150微米，以便在数字图像中同时分析全部厚度。景深可以设置为处理170微米的测量腔深度。

可以以至少对应于测量腔厚度的景深获取该数字图像。如本文中使用的“景深”意味着沿着光轴的方向上能够获得充分聚焦图像的长度，从而允许进行图像分析以识别位于该长度内的细胞。该“景深”可能大于由光学设置限定的常规景深。

因为以至少对应于测量腔厚度的“景深”获取了该数字图像，所以在整个样本厚度上获得了充分聚焦，使得在该样本的数字图像中可以同时分析测量腔的整个厚度。通过选择不要在该样本特定部分非常清晰地聚焦，获得了整个样本厚度的充分聚焦，从而可以确定该样本中血小板的数量。这意味着，血小板可能有些模糊，但仍然视为在景深范围内聚焦清晰。

可以将反应物引入样本获取设备的测量腔中，使其溶解或悬浮在液体中，该反应物包含溶血剂，可选的是包含着色剂。然后，通过在室温和室压下蒸发，或者辅以加热或者抽真空，或者通过冻结真空干燥，将该反应物转变为干燥形式。如果在室温和室压下或者通过加热使该反应物蒸发，则优选使该反应物溶解或者悬浮在挥发性液体中，例如甲醇。

本发明的反应物，包括其全部成分，优选是可以溶解和/或悬浮在所要分析的液体样本中的，并且优选希望在分析期间一直保持在溶液/悬浮液中。如上所述，因为该方法设置为探测测量腔全部厚度中的血小板，并且无需将血小板吸引或者固定到观察表面，所以也无需固定或者以任何其它方式避免该反应物或者该反应物的任何成分的溶解/悬浮。相反，使用可溶解/可悬浮的反应物，优选的是容易溶解/悬浮的反应物有助于反应物与液体样本的混合，并且加速了反应物与包含所要测量的血小板的液体样本之间的任何反应。

可以设置可选的着色剂从而选择性地使血小板的膜、细胞质、颗粒或任何其它部分或者其组合着色。这意味着在数字图像中，可以将血小板识别为彩色点，并且因此可以容易地计数。

可选的着色剂可以是亚甲蓝、曙红亚甲蓝、天青曙红亚甲蓝、Plaxan^TM、苏木精、亚甲绿、甲苯胺蓝、龙胆紫、苏丹红类似物、花青和品红类似物的组中的任意一种。然而，应当理解该着色剂不限于该组物质，而是可以考虑许多其它物质。优选的是，该可选的着色剂是曙红亚甲蓝或者天青曙红亚甲蓝。

溶血剂可以是季铵盐、皂角苷、胆汁酸，例如脱氧胆酸、毛地黄毒苷、蛇毒、吡喃葡糖苷或者Triton型非离子清洁剂。然而，应当理解，该溶血剂不限于该组物质，而是可以考虑许多其它物质。优选的是该溶血剂是皂角苷。

样本获取设备还可以包括使测量腔与样本获取设备的外部相连通的样本入口，所述入口被设置来获取血液样本。该样本入口可以设置为通过毛细作用力吸入血液样本，并且该测量腔还可以将血液从入口吸入到该腔中。因此，通过简单地移动样本入口使其与血液相接触，便可以容易地将血液样本获取到测量腔中。然后，样本入口和测量腔的毛细作用力将准确确定的量的血液吸入测量腔中。或者，可以通过向样本获取设备施加外部泵力，将血液样本吸入或者推入测量腔中。根据另一个可选的方式，可以将血液样本获取到吸液管中，然后利用该吸液管将其引入测量腔中。

该样本获取设备可以是用后丢弃的，即其设置为一次性使用的。该样本获取设备为实施血小板计数提供成套用具，这是因为该样本获取设备能够容纳血液样本并且保存所需的所有反应物，以便对该样本进行细胞计数。这是特别可行的，因为该样本获取设备适于一次性使用，并且可以在不考虑清洁样本获取设备和再次应用反应物的可能性的情况下形成该设备。而且，可以用塑料材料模制该样本获取设备，从而可以以低成本制造该设备。因此，使用用后丢弃的样本获取设备仍是划算的。

如果使用着色剂，则可以利用波长对应于着色剂吸收率峰值的光照射该样本。因此，将利用低透射率的光探测包含堆积的着色剂的着色血小板。

在这种情况下，可以利用激光源实施照射。激光源可以提供具有与着色剂吸收率匹配的准确确定的波长的光。而且，该激光源提供准直光，从而使杂散光的干扰最小化，使得清晰地区分开光透射率低的点。

可选的是，利用发光二极管实施照射。该光源仍可以提供充分的照射条件，从而适当地将血小板与该样本中的其它物质区分开。

可选的是，特别是如果利用相衬，则可以使用钨-卤素灯照射该样本。

可以使用3-200×、更优选的是4-20×的放大率来获取数字图像。在该放大率范围内，充分放大了血小板以便进行探测，同时景深可以设置为覆盖该样本厚度。低放大率意味着可以获得大景深。然而，如果使用低放大率，则难以探测血小板。通过增大所获取图像中的像素数量，即通过改善数字图像的分辨率，可以使用更低的放大率。

一种可选方式是使用相衬显微镜，其利用由照射血液样本的光中遇到膜和其它结构等的部分光产生的相移。在这种情况下，被分析的血液样本的血小板将呈现具有暗边的亮的、闪光的点。

这种分析包括确定数字图像中的具有高光吸收率的区域。该分析还可以包括确定数字图像中的黑的或暗的点，或者当使用相衬(具有足够高的放大率)时，确定对应于血小板边缘的暗环。

该分析还可以包括电子放大所获取的数字图像。尽管为了获取样本的放大数字图像放大了该样本，但是为了对简化所获取数字图像中成像为彼此非常接近的物体之间的区分，也可以电子放大所获取数字图像本身。

附图说明

现在，参照附图，通过举例的方式进一步详细描述本发明。

图1是根据本发明实施例的样本获取设备的示意图；

图2是根据本发明另一个实施例的样本获取设备的示意图；

图3是根据本发明实施例的测量装置的示意图；

图4是根据本发明实施例的方法的流程图。

具体实施方式

现在参照图1，描述根据本发明实施例的样本获取设备10。该样本获取设备10是用后丢弃型的，并且将在已经用于分析之后扔掉。这意味着，该样本获取设备10不需要复杂的处理。优选用塑料材料形成该样本获取设备10，并且可以通过注模制造。这使得该样本获取设备10的制造简单并便宜，由此可以缩减样本获取设备10的成本。

该样本获取设备10包括主体部件12，其具有基座14，操作员可以触摸基座14而不会造成对分析结果的任何干扰。该基座14还可以具有突起16，其可以安装到分析装置中的支架上。该突起16可以设置为将样本获取设备10准确地定位在分析装置中。

该样本获取设备10还包括样本入口18。该样本入口18被确定在样本获取设备10内的相对壁之间，该壁设置为彼此接近从而可以在样本入口18中产生毛细作用力。该样本入口18与样本获取设备10的外部相通，从而允许血液被吸入样本获取设备10中。该样本获取设备10还包括设置在样本获取设备10内的相对壁之间的测量腔20。该测量腔20设置为与样本入口18相连通。形成测量腔20的壁彼此设置得比样本入口18的壁更近，使得毛细作用力可以将血液从样本入口18吸入测量腔20中。

测量腔20的壁设置为彼此距离50-170微米，更优选的是80-150微米。该距离在整个测量腔20范围上是均匀的。测量腔20的厚度确定了被检查的血液体积。因为分析结果将与被检查的血液样本的体积作对比，所以测量腔20的厚度必须非常精确，即在测量腔20内以及不同样本获取设备10的测量腔20之间仅允许非常小的厚度变化。该厚度使得可以在该腔的很小区域中分析相对大的样本体积。该厚度理论上可以使血小板在测量腔20内设置在彼此之上，但是这可以利用统计模型来解决。

测量腔20的壁的表面至少部分地涂敷有反应物22。该反应物22可以是冰冻干燥的、热干燥的或者真空干燥的，并且可以施加到测量腔20的表面。当将血液样本获取到测量腔20中时，血液将与干燥的反应物22相接触，并且引发反应物22与血液之间的反应。

通过使用吸液管或者分配器将反应物22插入测量腔20中来施加反应物22。当插入测量腔20中时，该反应物22溶解在水中或者有机溶剂中。具有反应物22的溶剂可以填充测量腔20。然后，实施干燥，使得该溶剂蒸发并且反应物22将附着到测量腔20的表面。

根据另一制造方法，可以通过将两个片附着在一起来形成该样本获取设备10，其中一片形成测量腔20的底壁，并且另一片形成测量腔20的顶壁。这可以使反应物22在两个片附着在一起之前在开放表面上干燥。

该反应物22包括溶血剂，并且可选的是包括着色剂。该溶血剂可以是季铵盐、皂角苷、胆酸，例如脱氧胆酸、洋地黄毒苷、蛇毒、吡喃葡糖苷或者Triton型非电离清洁剂，优选的是皂角苷。如果使用着色剂，其可以是亚甲蓝、曙红亚甲蓝、天青曙红亚甲蓝、Plaxan^TM、苏木精、亚甲绿、甲苯胺蓝、龙胆紫、苏丹红类似物、花青或者品红类似物。当血液样本与反应物22相接触时，该溶血剂将使血红细胞溶解，使得该血红细胞与血浆相混合。而且，如果使用着色剂，着色剂会累积在血小板中，例如在血小板的膜中。如果使用着色剂，则该反应物22应当包含足够量的着色剂，从而清楚地使所有血小板着色。因此，通常存在过剩的着色剂，它们将混和到血浆中。过剩的着色剂将在血浆中产生均匀的、低的着色剂背景。血小板中累积的着色剂能够从着色剂的背景中区分开。

该反应物22还可以包括其它成分，其可以是活性的，即参与与血液样本的化学反应，或者是非活性的，即不参与与血液样本的化学反应。该活性成分例如可以设置为催化该溶血或者着色作用。该非活性成分例如可以设置为改善反应物22在测量腔20的壁的表面的附着。

在几分钟之内，该血液样本将与反应物22反应，使得血红细胞溶解，并且如果使用着色剂，则其累积在血小板中。

参照图2，描述样本获取设备的另一个实施例。该样本获取设备110包括形成测量腔的腔120。该样本获取设备110具有进入该腔120的入口118，以用于将血液传送到该腔120中。该腔120通过吸入管121与泵(未示出)相连。该泵可以通过吸入管121在该腔120中施加吸取力，使得可以将血液通过入口118吸入腔120中。该样本获取设备110可以在实施测量之前与泵断开。与样本获取设备的测量腔类似，该腔120具有限定所检查样本的厚度的准确定义的厚度。而且，将反应物22施加到腔120的壁，以便与血液样本反应。

现在参照图3，描述用于体积计数血小板的装置30。该装置30包括样本支架32，用于容纳具有血液样本的样本获取设备10。该样本支架32设置为容纳样本获取设备10，使得样本获取设备10的测量腔20准确放置在装置30内。该装置30包括用于照射样本获取设备10内的血液样本的光源34。该光源34可以是白炽灯，其发射全部可见光谱的光。

如果使用着色剂，则累积在血小板中的着色剂将吸收特定波长的光，使得血小板在该样本的数字图像中显现出来。如果获取彩色图像，则血小板将作为特定颜色的点显现出来。如果获取黑白图像，则血小板将作为相对于较亮背景的暗点显现出来。

如果利用相衬方法，则无需着色，然而无论怎样实际情况是着色，以便进一步有助于血小板的探测，并且血小板将作为具有暗边的亮点显现出来。

可选的是，该光源34可以是激光器或者发光二极管。这可以用于提高图像的对比度，使得可以更加容易地探测血小板。在这种情况下，该光源34设置为发射波长对应于着色剂吸收峰值的电磁辐射。应当进一步选择该波长，使得血液混合物的吸收率相对低。而且，该样本获取设备的壁本质上应当对于该波长透明。例如，如果将亚甲蓝用作着色剂，则光源34可以设置为发射具有667nm波长的光。

该装置30还包括成像系统36，其设置在样本支架32相对于光源34的相对侧上。因此，该成像系统36设置为接收已经透过血液样本的辐射。该成像系统36包括放大系统38和图像获取装置40。该放大系统38设置为提供3-200×，更优选的是4-20×的放大率。在这些放大率范围内，可以区分开血小板。而且，该放大系统38的景深仍可以设置为至少对应于测量腔20的厚度。

该放大系统38包括物镜或者物镜系统42，其接近样本支架32设置，并且包括接目镜或者目镜系统44，其设置在与物镜42相距一定距离处。该物镜42提供样本的第一放大，然后由目镜44进一步放大。该放大系统38可以包括用于完成样本的适当放大和成像的其它透镜。该放大系统38设置为当测量腔20中的样本放置在样本支架32中时，使其聚焦到图像获取装置40的像平面上。

如果图3的测量装置中包括相衬显微镜，则在光源34与样本支架32之间包括聚光器和聚光器环面，并且在物镜42与图像获取装置40之间包括相位板。

该图像获取装置40设置为获取样本的数字图像。该图像获取装置40可以是任意种类的数字照相机，例如CCD照相机。数字照相机的像素尺寸设定了对于成像系统36的限制，使得像平面中的模糊的圆斑在景深内不会超过像素尺寸。该数字照相机40获取测量腔20中的样本的数字图像，其中全部样本厚度充分聚焦在用于计数血小板的数字图像中。该成像系统36限定了将要成像在数字图像中的测量腔20的区域。被成像的区域连同测量腔20的厚度限定了所成像的样本的体积。将该成像系统36设定为匹配样本获取设备10中的成像血液样本。无需改变成像系统36的设置。优选的是，将该成像系统36设置在壳体内，使得该设置不会被意外改变。

该装置30还包括图像分析器46。该图像分析器46与数字照相机40相连，以便接收数字照相机40获取的数字图像。该图像分析器46设置为识别数字图像中对应于血小板的图案，以便计数该数字图像中出现的血小板的数量。因此，该图像分析器46可以设置为识别较亮背景中的暗点。该图像分析器46可以设置为在分析数字图像之前首先电子放大该数字图像。这意味着，即使数字图像的电子放大会使该数字图像某种程度上变模糊，但该图像分析器46仍能够更加容易地区分开彼此接近成像的血小板。

该图像分析器46可以通过将数字图像中识别的血小板的数量除以血液样本的体积(这已经如上所述准确定义了)来计算每单位血液体积的血小板数量。可以在装置30的显示器上显示血小板体积计数。

该图像分析器46可以以处理单元实现，其包括用于实施图像分析的编码。

参照图4，描述对血小板进行体积计数的方法。该方法包括将血液样本获取到样本获取设备中(步骤102)。在样本获取设备中获取全血的未稀释样本。可以从毛细管血或静脉血获取该样本。毛细管血样本可以直接从患者刺破的手指吸入测量腔中。该血液样本与样本获取设备中的反应物相接触，从而开始反应。血红细胞被溶解并且着色剂累积在血小板中。在获取血液样本后的几分钟之内，该样本已经为进行分析做好准备。将该样本获取设备放置在分析装置中(步骤104)。通过按动分析装置的按钮开始分析。可选的是，探测到出现了样本获取设备时，该装置可以自动地开始分析。

照射该样本(步骤106)，并且获取该样本放大的数字图像(步骤108)。利用波长对应于着色剂的吸收峰值的电磁辐射照射该样本。这意味着，该数字图像在血小板的位置将包含黑色的或者较暗的点。

将所获取的数字图像发送到图像分析器，其实施图像分析(步骤110)，以便计数该数字图像中黑色点的数量。

本文中表述的方法和装置例如可以设置为计数大约25000个血小板，其对于所获得的结果提供了更好的统计确定性。一个正常的健康成年人具有大约250×10⁹个/升血液的血小板计数。这意味着，在具有大约0.1微升的体积的样本中找到25000个血小板。例如，如果对厚度为100微米的测量腔中的1.0×1.0mm的区域成像，则被成像的体积为0.10微升。可以选择部分所获取的图像以进行分析。因此，可以首先粗略分析所获取的图像，使得在用于确定血小板计数的部分中不会出现异常。为分析而选择的部分所获取图像可以选择为具有适当尺寸，从而分析足够体积的血液样本。

应当强调的是，本文中描述的优选实施例不是用来进行限制的，并且在权利要求限定的保护范围内许多可选的实施例都是可能的。

Claims (29)

1.一种用于对血液样本中的血小板进行体积计数的样本获取设备，所述样本获取设备包括：

用于容纳血液样本的测量腔，所述测量腔具有预定的固定厚度，

反应物，其以干燥的形式设置在限定该测量腔的表面上，所述反应物包括溶解血液样本中的血红细胞的溶血剂，并且所述反应物还包括选择性着色所述血液样本中的血小板的着色剂。

2.根据权利要求1所述的样本获取设备，其中该样本获取设备包括具有两个平面表面以限定所述测量腔的体部件。

3.根据权利要求2所述的样本获取设备，其中该平面表面彼此之间以预定距离设置，以确定用于光学测量的样本厚度。

4.根据前述任一项权利要求所述的样本获取设备，其中该测量腔具有50-170微米、更优选的是80-150微米的均匀厚度。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的样本获取设备，其中该着色剂设置为选择性地使血小板的膜着色。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的样本获取设备，其中该着色剂是亚甲蓝、曙红亚甲蓝、天青曙红亚甲蓝、Plaxan^TM、苏木精、亚甲绿、甲苯胺蓝、龙胆紫、苏丹红类似物、花青和品红类似物的组中的任意一种。

7.根据前述任一项权利要求所述的样本获取设备，其中该溶血剂是季铵盐、皂角苷、胆汁酸、洋地黄毒苷、蛇毒、吡喃葡糖苷或者Triton型非离子清洁剂，优选为皂角苷。

8.根据前述任一项权利要求所述的样本获取设备，还包括使测量腔与样本获取设备的外部相连通的样本入口，所述入口设置为获取血液样本。

9.一种用于对血液样本中的血小板进行体积计数的方法，所述方法包括：

将血液样本获取到样本获取设备的测量腔中，所述测量腔保持有反应物，该反应物包括溶血剂并且可选的是包括着色剂，以与样本反应，使得血小板着色，

照射具有血小板的该样本，

获得测量腔中受照射样本放大的数字图像，其中通过着色剂的选择性着色和/或相衬来区分血小板，利用至少对应于测量腔厚度的景深获取所述数字图像，以及

数字分析该数字图像以识别血小板并且确定该样本中的血小板数量。

10.根据权利要求9所述的方法，其中将该血液样本与测量腔中的反应物混和。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中该测量腔具有50-170微米、更优选的是80-150微米的厚度。

12.根据权利要求11所述的方法，其中被分析样本的体积是由测量腔的厚度和被成像的样本的面积准确确定的。

13.根据权利要求9-12中任一项所述的方法，其中利用波长对应于着色剂吸收率峰值的光照射该样本。

14.根据权利要求9-13中任一项所述的方法，其中所述照射是利用激光源实现的。

15.根据权利要求9-13中任一项所述的方法，其中所述照射是利用发光二极管实现的。

16.根据权利要求9-15中任一项所述的方法，其中利用3-200×、更优选的是4-20×的放大率获取该数字图像。

17.根据权利要求9-16中任一项所述的方法，其中所述分析包括识别数字图像中具有高光吸收率的区域。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述分析包括识别数字图像中的暗点。

19.根据权利要求9-18中任一项所述的方法，其中所述分析包括电子放大所获取的数字图像。

20.一种用于对血液样本中的血小板进行体积计数的系统，所述系统包括：

根据权利要求1-8中任一项所述的样本获取设备，以及

测量装置，其包括：

设置为容纳样本获取设备的样本获取设备支架，该样本获取设备将血液样本保持在测量腔中，

设置为照射血液样本的光源，

成像系统，其包括放大系统和用于获取测量腔中受照射样本放大的数字图像的数字图像获取装置，其中在该数字图像中通过着色剂的选择性着色和/或相衬来区分血小板，以及

设置为分析所获取的数字图像以识别该血液样本中的血小板以及确定血小板数量的图像分析器。

21.根据权利要求20所述的系统，其中该放大系统设置为具有至少为样本获取设备的测量腔厚度的景深。

22.根据权利要求20或21所述的系统，其中被分析样本的体积是由测量腔的厚度和被成像样本的面积准确确定的。

23.根据权利要求20-22所述的系统，其中该光源设置为发射波长对应于着色剂吸收率峰值的光。

24.根据权利要求20-23中任一项所述的系统，其中所述光源包括激光源。

25.根据权利要求20-23中任一项所述的系统，其中所述光源包括发光二极管。

26.根据权利要求20-25中任一项所述的系统，其中该放大系统具有3-200×、更优选的是4-20×的放大率。

27.根据权利要求20-26中任一项所述的系统，其中该图像分析器设置为识别数字图像中高光吸收率的区域。

28.根据权利要求27所述的系统，其中该图像分析器设置为识别数字图像中的黑点。

29.根据权利要求20-28中任一项所述的系统，其中该图像分析器设置为电子放大所获取的数字图像。

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