CN101354400A - 用于胶乳聚集反应的试剂及检测目标物质的方法 - Google Patents
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Abstract
用于胶乳聚集反应的试剂,所述试剂含有具有所述式(1)所示重复单元的水溶性聚合物,其中,R1和R2彼此独立地为氢原子或具有1~8个碳原子的取代的或未取代的烷基。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于胶乳聚集反应的试剂,以及一种检测目标物质的方法。
背景技术
为了通过抗原-抗体的聚集反应检测特定的抗原或抗体(目标物质),在临床实验室检测、生物化学研究等中广泛采用免疫胶乳聚集检测法,该方法将免疫活性物质如抗体或抗原负载在载体颗粒上,并通过特异性反应来检测目标物质如相应的抗原或抗体(如JP-A-2006-266970)。
在免疫胶乳聚集检测法中,一般地,将固定有待测目标抗原(抗体)的抗体(抗原)的载体颗粒与可能含有目标物质的分析物接触,当存在目标物质时,能检测出由抗体-抗原反应造成的在混合液体中发生的颗粒聚集反应。
但是,已指出,与其他检测方法(如酶增殖法,化学发光检测法)相比,在免疫胶乳聚集检测法中,在光吸收的检测方面存在测量极限并且对颗粒聚集的检测灵敏度不够。
在免疫胶乳聚集检测法中,为了获得更高的测量灵敏度,通常采用具有较大粒径的载体颗粒。但是,由于检测波长的限制,当载体颗粒的粒径超过一定上限时,可检测的范围显著变窄,而且载体颗粒的沉降性增大到在实际测量时间内无法忽略的程度。因此,很难大幅增加载体颗粒的粒径。
另一方面,为了通过使用小粒径的载体颗粒获得高的检测灵敏度,已经进行了大量研究。例如,JP-A-8-278308,JP-A-2003-294753,JP-A-2006-105910等公开了在特定条件下对载体颗粒具有聚集促进作用的水溶性聚合物,以促进载体颗粒的免疫反应。所述水溶性聚合物的例子包括聚乙二醇、多元醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、蔗糖、葡聚糖、聚氨基酸、藻酸、氨基乙磺酸衍生物、氨基丙磺酸衍生物等。
但是,这些水溶性聚合物中的任一种在颗粒聚集反应中都具有有限的敏化效应,而且在大多数情况下,它们具有致命的缺陷,即,会使颗粒由于非抗原-抗体反应的因素而聚集。因此,前述水溶性聚合物的应用和应用条件受到限制。而且,由于任一种前述水溶性聚合物的溶液即使是在浓度低的情况下都具有很高的溶液粘度,因而载体颗粒在免疫反应体系中是以不均匀的形式存在的。因此,存在检测结果差异或检测精度差的问题。
发明内容
本发明提供一种用于胶乳聚集反应的试剂,所述试剂能促进固定有抗体或抗原的颗粒与抗原或抗体的免疫反应,从而加速颗粒的聚集,并能抑制背景噪声的升高和非特异性反应的发生;以及一种检测目标物质的方法。
根据本发明的一个实施方案,用于胶乳聚集反应的试剂含有水溶性聚合物,所述聚合物具有下式(1)所示的重复单元:
其中,R1和R2彼此独立地为氢原子或具有1~8个碳原子的取代的或未取代的烷基。
本发明中的“水溶性聚合物”是指在加入到纯水中并与之混合、且将固含量调整为25℃下1%时,能提供视觉上清澈的溶液的聚合物。
在上述用于胶乳聚集反应的试剂中,上述水溶性聚合物还可具有下式(2)所示的重复单元:
其中,R3为氢原子或甲基,R4为具有1~12个碳原子的取代的或未取代的烷基、脂环族烃基或芳族烃基。
在用于所述胶乳聚集反应的试剂中,上述水溶性聚合物可为选自聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、以及丙烯酰胺单体与(甲基)丙烯酸酯单体的共聚物中的至少一种。
根据本发明的一个实施方案,目标物质的检测方法包括如下步骤:
将具有下式(1)所示的重复单元的水溶性聚合物、固定有预定目标物质的抗体或抗原的颗粒和分析物混合的步骤:
其中,R1和R2彼此独立地为氢原子或具有1~8个碳原子的取代的或未取代的烷基;和
对混合步骤中形成的颗粒的聚集进行光学检测的步骤。
在上述目标物质的检测方法中,上述水溶性聚合物还可含有下式(2)所示的重复单元:
其中,R3为氢原子或甲基,R4为具有1~12个碳原子的取代的或未取代的烷基、脂环族烃基或芳族烃基。
在上述目标物质的检测方法中,上述水溶性聚合物可为选自聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、以及丙烯酰胺基单体与(甲基)丙烯酸酯单体的共聚物中的至少一种。
在免疫胶乳聚集检测方法中,通过采用用于胶乳聚集反应的含上述式(1)所示水溶性聚合物的试剂检测目标物质,颗粒的聚集反应能够被增强,从而提高目标物质的检测灵敏度。而且,与采用其他水溶性聚合物作为敏化剂的情况相比,非特异性反应的发生能够得到抑制。因此,胶乳聚集反应的检测的再现性和精度能够得以提高。
此外,上述用于胶乳聚集反应的试剂容易操作,且随着时间的流逝的劣化很小,因而能获得满意的储存稳定性。
此外,根据上述检测目标物质的方法,通过采用包括如下步骤的方法,能获得宽的可检测范围以及高的检测灵敏度和定量检测能力,所述方法包括:将具有上述式(1)所示重复单元的水溶性聚合物、固定有预定目标物质的抗体或抗原的颗粒以及分析物混合的步骤;和对混合步骤中形成的颗粒的聚集进行光学检测的步骤。
下文将根据本发明的一个实施方案,具体描述用于胶乳聚集反应的试剂,以及检测目标物质的方法。
1.用于胶乳聚集反应的试剂
根据本发明的一个实施方案,用于胶乳聚集反应的试剂含有水溶性聚合物,所述水溶性聚合物具有下述式(1)所示的重复单元:
其中,R1和R2彼此独立地为氢原子或具有1~8个碳原子的取代的或未取代的烷基。
1.1.水溶性聚合物
在根据本发明实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂中,所述水溶性聚合物起着敏化剂的作用。
在上述式(1)中,R1和R2所代表的具有1~8个碳原子的取代或未取代的烷基的例子包括:甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基,以及这些基团被例如羟基或烷氧基的官能团取代的基团。作为R1和R2,氢原子和甲基是更优选的。
此外,所述水溶性聚合物还可含有下式(2)所示的重复单元:
其中,R3为氢原子或甲基,R4为具有1~12个碳原子的取代的或未取代的烷基、脂环族烃基或芳族烃基。
在上述式(2)中,R4代表的具有1~12个碳原子的取代的或未取代的烷基的例子包括R1和R2。作为R4,更优选选自甲基、乙基和甲氧基乙基中的至少一个,且进一步优选为甲氧基乙基。
此外,在上述式(2)中,R4代表的脂环族烃基的例子包括异冰片基和环己基。R4代表的芳族烃基的例子包括苄基。
水溶性聚合物可为:仅由上述式(1)所示的重复单元构成的均聚物,如聚丙烯酰胺或聚二甲基丙烯酰胺;或含有上述式(1)所示重复单元和其他重复单元的杂聚物(共聚物)。
例如,优选水溶性聚合物为选自聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺,丙烯酰胺单体与(甲基)丙烯酸酯单体的共聚物中的至少一种。丙烯酰胺单体与(甲基)丙烯酸酯单体的共聚物的例子包括二甲基丙烯酰胺-甲氧基乙基丙烯酸酯共聚物。
在采用二甲基丙烯酰胺-甲氧基乙基丙烯酸酯共聚物作为水溶性聚合物的情况下,上述式(1)所示的重复单元(二甲基丙烯酰胺:R1和R2均为甲基)与上述式(2)所示的重复单元(甲氧基乙基丙烯酸酯:R3为氢原子,R4为甲氧基乙基)的比优选为1/9~9/1。
所述水溶性聚合物可通过通常的聚合反应制备。通过控制聚合条件,可以控制得到的水溶性聚合物的分子量、分子量分布和聚合组成。为了提高聚合物的纯度,也可用诸如传统的渗析、超滤或溶剂沉淀的方法,对所述水溶性聚合物进行提纯。
优选所述水溶性聚合物的重均分子量(Mw)为2,000~500,000,更优选为5,000~100,000。分子量分布Mw/Mn优选为1.0~4.0,更优选为1.0~2.5。
而且,根据本发明实施方案的用于胶乳聚集反应的所述试剂中所用的水溶性聚合物的纯度优选为90%以上。
当所述水溶性聚合物的重均分子量、分子量分布或纯度没有落入上述各个范围之内时,会出现对颗粒聚集的敏化效应受到抑制,且由于粘度的增大导致操作变得困难的问题。
所述水溶性聚合物可为粉体。在这种情况下,所述水溶性聚合物可在溶解于水性介质中后,再加以使用。水性介质的例子包括蒸馏水和各种通常用于生物化学领域的缓冲液如磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、Good’s缓冲液、Tris缓冲液和氨缓冲液。作为水性介质,更优选磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和Good’s缓冲液等。
1.2.其他组分
在根据本发明的实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂中,可单独使用或与其他水溶性聚合物组合使用上述水溶性聚合物。
其他水溶性聚合物的例子包括:背景技术部分描述的聚乙二醇、多元醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、蔗糖、葡聚糖、支链淀粉、聚氨基酸、藻酸、氨基乙磺酸衍生物、氨基丙磺酸衍生物;以及牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、block ace、阿拉伯树胶、蛋白水解物、氨基酸、肽、多肽、表面活性剂等。
此外,根据本发明实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂可含有附加成分如pH缓冲液、盐和表面活性剂。
根据本发明实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂中的水溶性聚合物的浓度优选为0.01~30质量%,更优选为0.1~5质量%。当水溶性聚合物的浓度低于0.01质量%时,会出现无法获得所期望的敏化效应的问题。另一方面,当水溶性聚合物的浓度超过30质量%时,会出现由于粘度的增大而导致称量误差增大以及由副反应导致的非特异性反应的增多。
在根据本发明的实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂中,当水溶性聚合物的浓度落在0.01~30质量%的范围内时,所述试剂通常为无色澄清溶液。关于这一点,当进行胶乳聚集反应测试时,根据本发明的实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂的用量可根据测试对象的不同而加以调整。
1.3.使用指南
在免疫胶乳聚集测试中,反应体系中的水溶性聚合物的浓度优选为0.0001~10质量%,更优选为0.0005~5质量%。当反应体系中的水溶性聚合物的浓度低于0.0001质量%时,在某些情况下无法表现出敏化效应。另一方面,当反应体系中的水溶性聚合物的浓度超过5质量%时,敏化效应几乎恒定,而在某些情况下反而使诱发非特异性反应的副反应变得显著。
根据本发明的实施方案,用于胶乳聚集反应的试剂可事先制备成试剂,或者通过在免疫反应即将开始时将水溶性聚合物加入到反应体系中而制备。
可根据试剂组成、实际诊断对象的所要求规格和临床使用情形,适当地选择根据本发明实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂的制备方法,。
此外,根据本发明的实施方案的用于胶乳聚集反应的试剂,可既用作分析物的稀释剂又用作聚集剂,所述试剂除了含有水溶性聚合物之外,还含有用作分析物稀释剂的组分和用于聚集剂的必要组分。采用这种试剂,仅仅通过将分析物与试剂的直接混合,而不需要事先稀释分析物,就能发生适当的聚集反应。
2.检测目标物质的方法
根据本发明的一个实施方案,检测目标物质的方法包括:将上述水溶性聚合物、固定有预定目标物质的抗体或抗原的颗粒(称之为固定有抗体或抗原的颗粒)以及分析物混合的步骤;和对混合步骤中形成的颗粒的聚集进行光学检测的步骤。
2.1混合步骤
在上述混合步骤中,尽管必须要求固定有抗体或抗原的颗粒、分析物和水溶性聚合物同时存在,但是对它们的混合顺序没有特别的限制。
因此,固定有抗体或抗原的颗粒、分析物和水溶性聚合物可同时混合,或者在对上述三种组分进行混合的步骤之前,将固定有抗体或抗原的颗粒与水溶性聚合物、固定有抗体或抗原的颗粒与分析物、以及水溶性聚合物与分析物中的任一种预先混合。
在上述混合步骤中,混合温度通常为4~50℃。当上述温度低于4℃时,会出现抗体和抗原的相遇机会降低的问题。另一方面,当上述温度超过50℃时,会出现抗体和抗原的复合物的稳定性降低的问题。上述温度优选为15~40℃,更优选为30~40℃。
在上述混合步骤中,混合时间通常为60分钟以下。混合溶液的pH值通常为5~10,考虑到使抗体和抗原的复合物的稳定性更高,混合溶液的pH值更优选为6~9。
根据本发明的实施方案,在目标物质的检测方法中的上述混合步骤中,优选在即将对目标物质进行光学检测之前,才将上述水溶性聚合物与固定有抗体或抗原的颗粒混合。下文将描述其原因。
通常,颗粒的聚集反应的灵敏度和胶体的稳定性具有此消彼长的关系。因此,例如,当颗粒的粒径下降从而提高聚集反应的灵敏度时,颗粒的胶体稳定性下降。结果,颗粒的储存变得困难从而使试剂的储存稳定性降低。因此,根据本发明的一个实施方案,在目标物质的检测方法中,通过在即将对目标物质进行检测之前,才将上述水溶性聚合物与所述颗粒混合,可以减少颗粒聚集反应的灵敏度和胶体稳定性的下降。
2.2.颗粒聚集的光学检测步骤
根据本发明的实施方案,在目标物质的检测方法中,通过将上述水溶性聚合物、固定有抗体或抗原的颗粒和可能含有目标物质的分析物混合的步骤,上述水溶性聚合物与固定有抗体或抗原的颗粒和分析物接触。
根据本发明的实施方案,在目标物质的检测方法中,在上述混合步骤中形成的上述颗粒的聚集的光学检测步骤中,颗粒的聚集反应能够被增强,从而提高目标物质的检测灵敏度。
本发明中的术语“颗粒的聚集”是指通过抗体和抗原的反应,使固定有抗体或抗原的颗粒之间的排斥力变弱,从而使颗粒彼此粘结。
颗粒的彼此粘结是多点型(multipoint type)的。在初始阶段,两个固定有抗体或抗原的的颗粒粘结在一起,随着反应的进行,多个颗粒粘结,最终,形成由大量颗粒组成的颗粒复合体。
2.3.分析物
根据本发明的实施方案,在目标物质的检测方法中,将分析物(如任何各种生物学液体试样如血清和血浆)稀释至适当的浓度。在这种情况下,通过向分析物-稀释溶液中加入水溶性聚合物,将水溶性聚合物与分析物混合。
分析物-稀释溶液通常为含有诸如pH缓冲剂、包括白蛋白或球蛋白的蛋白质、氨基酸和/或表面活性剂的成分的水性溶液。
2.4.抗体和抗原
抗原的例子包括受体、酶、血液蛋白(如癌胚蛋白)、与传染性疾病相关的抗原(如B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、梅毒病原体、人体免疫缺陷病毒、病原性大肠杆菌(Escherichia coli)的抗原)。抗原的例子包括这些抗原的抗体。本文中的“抗体”还包括各种抗体的片段等,只要它们具备粘结特定抗原的能力。
2.5.目标物质
本发明中的“目标物质”是指可能会引起免疫反应,成为待检测的目标的物质,如抗原、病毒、病原体、抗体或自身抗体。
2.6.固定有抗体或抗原的颗粒
固定有抗体或抗原的颗粒是指固定有抗体或抗原的水溶性载体颗粒,其平均粒径通常为0.1~10μm。当固定有抗体或抗原的颗粒的平均粒径小于0.1μm时,会出现对颗粒的光信号敏化效应低的问题。另一方面,当固定有抗体或抗原的颗粒的平均粒径大于10μm时,由于与测量波长相比粒径太大,聚集导致的吸光度的变化减小。因此,在某些情况下可能出现检测灵敏度下降的问题。
用于固定有抗体或抗原的颗粒的载体颗粒的例子包括红细胞、碳粉、膨润土、高岭土、卵磷脂胶束、明胶颗粒、合成胶乳等。特别地,考虑到粒径和粒径的严格要求,优选采用主要成分为聚苯乙烯的胶乳颗粒。
在胶乳颗粒被用作载体颗粒的情况下,如果需要,可对表面进行化学改性或在表面引入官能团,而后表面可与抗体或抗原化学连接。
载体颗粒的制备方法以及在载体颗粒上负载目标物质的抗体或抗原的方法,对本领域技术人员而言是已知的。
2.7.测量仪器
根据本实施方案,在目标物质的检测方法中,在颗粒聚集的光学检测步骤中可采用已知的检测仪器。能够自动跟踪颗粒聚集的仪器的例子包括能够检测散射光强度、透射光强度,吸光度等的光学仪器。
作为颗粒聚集程度的光学检测方法,可采用任何已知的方法。所述方法的例子包括:通过浊度的增大来检测聚集的形成的浊度分析法;通过测量粒径尺寸分布的变化或平均粒径的变化来检测聚集的形成的方法;积分球浊度法,其中通过积分球测量由于聚集的形成导致的向前散射光的变化,并比较透射光强度系数;等等。在上述检测方法中,可采用:速率测定,即在不同时间点获得至少两个测定值,然后基于这些时间点之间测定值的增大即增大率来确定聚集度;终点测定,即在通常被认为是反应终点的特定的时间点获取测定值,然后基于所述测定值来确定聚集度。考虑到测试的便利和快速,优选通过浊度分析法进行速率测定。
适于在本发明实施方案的用于目标物质检测方法中用来检测免疫胶乳聚集反应的临床实验室测试自动仪器的例子包括商业上可获得的自动检测仪如Hitachi 7070,7150,7170和LPIA-A700,S500。
根据本实施方案的检测目标物质的方法,通过包括将上述水溶性聚合物、固定有抗体或抗原的颗粒和分析物混合的步骤以及对混合步骤中形成的上述颗粒的聚集进行光学检测的步骤,在浊度或吸光度的测定中,低值区域的吸光度变化与背景之间的差异是清晰的;。由此,目标物质的检测灵敏度能得到提高。
具体实施方式
尽管下文将通过实施例进一步具体描述本发明,但是本发明不限于此。在本发明的实施例中,%和份都基于重量。
在本发明的实施例中,重均分子量(Mw)和数均分子量(Mn)是通过凝胶渗透色谱法(GPC)测定的,采用由Tosoh Corporation生产的TSKgelα-M柱,分析条件为流速1mL/min,洗脱溶剂为0.1mM的氯化钠水溶液/丙烯腈的混合溶剂,柱温40℃,采用单分散聚乙二醇作为标准物。
实施例1(聚丙烯酰胺的合成)
将100g的丙烯酰胺和作为链转移剂的2g的盐酸半胱胺在900g的水中混合。得到的混合物置于装有搅拌器的可拆的烧瓶中,在氮气吹扫下加热到70℃。在加入作为引发剂的1g 2,2’-偶氮二(2-甲基丙脒)二盐酸盐后,进行2小时的聚合。再加热到80℃陈化3小时,然后冷却至室温。得到的水性溶液采用渗析法提纯,得到聚丙烯酰胺的6%水溶液。得到的聚丙烯酰胺通过GPC测定的重均分子量(Mw)为46,600,且Mw/Mn为1.9。
实施例2(二甲基丙烯酰胺-甲氧基乙基丙烯酸酯共聚物的合成)
通过与实施例1相同的方法,得到二甲基丙烯酰胺-甲氧基乙基丙烯酸酯共聚物的6%水溶液,除了用80g的二甲基丙烯酰胺和20g的甲氧基乙基丙烯酸酯代替100g的丙烯酰胺和用4g的盐酸半胱胺代替2g的盐酸半胱胺。所得共聚物通过GPC测定的重均分子量(Mw)为23,600,且Mw/Mn为2.4。
实施例3(抗体在胶乳颗粒上的固定)
向10mL的1/15M磷酸盐缓冲液(pH7.2)和10mL生理盐水(下文称之为PBS)的混合溶液中,分散1mL用于免疫诊断的胶乳颗粒的10%溶液(产品号:coat G0305(平均粒径:0.31μm,表面COOH基团含量:0.21mmol/g-LTx,由JSR Co.,Ltd.生产)),以调整颗粒浓度为1质量%。
然后,加入盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(DojindoLaboratories,下文称之为WSC),以调整最终浓度为0.05%。向颗粒分散体中加入等量的抗CRP(C反应蛋白)抗体(兔)的1mg/mL溶液,在慢速旋转下,在56℃下,3小时内,将抗体(抗CRP抗体)固定到颗粒表面。然后,向颗粒分散体中加入0.5mL的1%牛血清白蛋白/0.05%Rapigest SF,随后在室温慢速旋转搅拌10小时。在这些操作之后,将颗粒分散体转移到离心管中,在10,000rpm下离心20分钟,以收集沉淀物的颗粒,除去含有未反应的抗体、WSC等的上清液。随后,将颗粒重新悬浮在50mM的、pH为7.4的Tris缓冲液中,用超声波分散10分钟。重复该操作两次,最后用超声波对颗粒进行分散。使得到的分散体通过0.8μm的盘式过滤器,然后用10mM的PBS缓冲液/0.02%牛血清白蛋白/0.01%的聚乙烯吡咯烷酮(分子量:360,000)的溶液对颗粒进行调节以将颗粒的固含量调节为0.05%。获得固定有抗体(抗CRP抗体)的胶乳颗粒的分散体。
实施例4(用于胶乳聚集反应的试剂的制备以及性能评价)
分别将上述实施例1和2合成的丙烯酰胺(AAM)和二甲基丙烯酰胺-甲氧基乙基丙烯酸酯共聚物(DMAA/MEA)作为敏化剂,在表1所示的条件下,和水一起加入到试剂中。此外,使用所制备的用于胶乳聚集反应的所述试剂,在表1所示的条件下,进行免疫胶乳聚集测试。
在免疫胶乳聚集测试中,采用Hitachi 7020型自动分析设备,并使用了3μL的分析物(目标物质(CRP抗原)的标准溶液),150μL的第一种试剂(0.1%牛血清白蛋白/PBS),50μL的第二种试剂(0.05%胶乳颗粒分散体),和50μL的第三种试剂(敏化剂),使用的波长为570nm,测试温度为37℃。
此外,在本测试中,在分析物(目标物质)、第一种试剂、第二种试剂、第三种试剂的混合和搅拌之后,用速率测定法进行评价,其中测定50秒后的浊度和200秒后的浊度的差(变化)。表1表明了在每种CPR抗原浓度和每种敏化剂的添加量下的吸光度的变化。
实施例5(测试稳定性的评价)
为了证实使用实施例1和2获得的聚合物的胶乳聚集反应用试剂的测量稳定性,对下表1中测试号为1,2,8和10的试剂重复测量20次。在抗原浓度为0.02mg/dL下,测得的CV(变化系数)分别为8%,6%,10%和7%。同样,在抗原浓度为10mg/dL下,测得的CV(变化系数)分别为5%,4%,7%和5%。
从上述结果可以看出,在采用使用实施例1和2获得的聚合物的胶乳聚集反应用试剂的情况下,测定值的稳定性除了微小的增大之外,几乎没有变化。
实施例6(随着时间流逝的稳定性评价)
为了证实使用实施例1和2获得的聚合物的胶乳聚集反应用试剂的稳定性,将下表1中测试号为1,3,8和12的试剂,在4℃和37℃下,储藏1年。在相同的时间,对每个温度下储藏的试剂测定10次。结果发现,不同储藏条件下的试剂的测定值都处于同一水平。而且,这些值与制备后立即测得的值相同,当对每个测试号的测得的值进行统计处理时,抗原浓度为0.1mg/dL的CV值都为9%或更低。结果,由于采用实施例1和2获得的聚合物作为敏化剂时测定值都落入胶乳聚集反应用试剂的初始测量精度范围之内,因此可以认为,在使用实施例1和2获得的聚合物的胶乳聚集反应用试剂中,随时间流逝的性能下降能得到抑制。
尽管前文已经参考具体实施例对本发明进行了详细的描述,但是很明显,本领域技术人员可以对其进行各种改变和更改,只要这种改变和更改不偏离本发明的精神和范围。
本发明是基于2007年7月25日提交的日本专利申请No.2007-193688,其内容通过引用并入本文。
Claims (6)
3.如权利要求1所述的检测目标物质的方法,其中上述水溶性聚合物为选自聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺以及丙烯酰胺单体与(甲基)丙烯酸酯单体的共聚物中的至少一种。
6.如权利要求4所述的用于胶乳聚集反应的试剂,其中上述水溶性聚合物为选自聚丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺以及丙烯酰胺单体与(甲基)丙烯酸酯单体的共聚物中的至少一种。
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