CN101322723B - 一种蟾酥提取物及其制备方法 - Google Patents
一种蟾酥提取物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101322723B CN101322723B CN2007100418807A CN200710041880A CN101322723B CN 101322723 B CN101322723 B CN 101322723B CN 2007100418807 A CN2007100418807 A CN 2007100418807A CN 200710041880 A CN200710041880 A CN 200710041880A CN 101322723 B CN101322723 B CN 101322723B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- venenum bufonis
- silica gel
- extract
- preparation
- medical material
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种蟾酥提取物及其制备方法,该制备方法包括:①将蟾酥药材用无水乙醇回流提取;②将上述提取液浓缩,经硅胶柱分离,用体积比为3~10:1的石油醚和丙酮等度洗脱,收集洗脱液,过滤,蒸干即得含有三种蟾毒配基混合物的蟾酥提取物。本发明的制备方法简便、易于操作并适于工业化生产,制得的本发明蟾酥提取物中三种蟾毒配基混合物的含量均≥90%。
Description
技术领域
本发明涉及一种蟾酥提取物及其制备方法,该蟾酥提取物的主要成分为脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵这三种蟾毒配基混合物。
背景技术
药用蟾蜍为两栖纲蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufo bufogargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)。蟾酥为中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液,经加工干燥制成。古今验方广泛应用蟾蜍、蟾酥拔毒消肿、定痛杀虫、强心利尿。经现代科学研究,发现蟾酥中的脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种脂溶性成分的混合物不但具有明显的抗肿瘤作用,而且还能将肿瘤细胞转化为正常细胞(诱导肿瘤细胞分化)、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成、降低肿瘤转移等作用。
中国专利申请“蟾蜍或蟾酥中三种抗癌化合物的制剂及其制备方法”(申请号:200610045893.7,公开号为1810827A)使用乙醇、丙酮等有机溶剂提取,提取物经硅胶、氧化铝等色谱柱分离,并以不同比例石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等溶剂梯度洗脱的方法分别得到脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种脂溶性成分,合并取得此三种蟾毒配基混合物,其总含量高于80%。但其中许多条件如溶剂的浓度、样品上样方法及洗脱剂的具体比例等都尚未公开,且梯度洗脱操作复杂、费时。此外,从安全性和疗效的角度考虑,三种脂溶性成分的总含量有待进一步提高。
发明内容
本发明要解决的技术问题即是提供一种脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵三种蟾毒配基混合物含量超过90%的蟾酥提取物及其制备方法。
本发明人经过试验惊奇地发现,采用无水乙醇为提取溶剂;并且采用一定比例的石油醚和丙酮等度洗脱,不仅提取效率高,简化了步骤,还进一步提高了上述三种蟾毒配基混合物含量,可以达到90%水平以上。
本发明提供的一种蟾酥提取物的制备方法,其包括下列步骤:
①将蟾酥药材用无水乙醇回流提取;
②将上述提取液浓缩后经硅胶柱分离,用体积比为3~10:1的石油醚和丙酮等度洗脱,收集洗脱液,过滤,蒸干即得含有三种蟾毒配基混合物的蟾酥提取物。
较佳地,为增加提取效率及节约提取溶剂,步骤①中所述的蟾酥药材通常先研磨粉碎成粉(过60目筛);而综合考虑提取效果及所需的成本、时间,每次提取时药材与无水乙醇的比例优选1g:5~20ml,更优选1g:10~12.5ml;每次提取时间优选20~60分钟,一般在40分钟左右;共提取1~3次。
较佳地,为增大上样量,易于工业化生产,步骤②中将浓缩的提取液加入硅胶拌样,蒸干得拌样硅胶,所得拌样硅胶干法上样。其中,加入硅胶的量以能完全吸附蟾酥提取物浓缩液为宜,优选为最初称取的蟾酥药材重量的0.5~3倍左右,更优选0.6~1倍。
更佳地,为达到更好的纯化效果,在所得拌样硅胶干法上样前先将硅胶湿法装柱,预先用所述洗脱剂石油醚和丙酮浸泡洗脱。
本发明步骤②中洗脱剂石油醚和丙酮的更佳体积比为4~6:1。
本发明优选的硅胶为100~160目的粗孔硅胶。
采用本发明上述制备方法制得的蟾酥提取物中脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种蟾毒配基混合物的重量百分比含量均在90%以上,通常在91~99%范围。
本发明与现有技术相比,其优点在于采用绿色安全的乙醇溶剂提取,采用上样量较大的干法上样,使用等度洗脱,简化了纯化方法,进一步提高了三种脂溶性成分的总含量,达到高于90%水平。并且,本发明提取纯化方法及所用设备简单,成本较低,操作简便,耗时较短,易于工业化生产,三种脂溶性成分可以得到较好的纯化,纯化效率高,纯化纯度大幅提高,减小了药物的毒副作用,可以提高药物的安全有效性。
附图说明
图1为本发明蟾酥提取物经纯化后的HPLC色谱图。
具体实施方式
下面用实施例来进一步说明本发明,但本发明并不受其限制。
实施例1
取蟾酥药材1克,加无水乙醇10ml,加热回流40min,上述条件下提2次。将提取液趁热过滤,旋蒸浓缩后加入0.9克硅胶拌样,得拌样硅胶。取20克硅胶以石油醚:丙酮(体积比5:1)浸泡后湿法装柱,加入拌样硅胶,用石油醚:丙酮(体积比5:1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别(如图1所示,保留时间为7.184min的为蟾毒灵,8.886min的为华蟾毒精,9.549min的为脂蟾毒配基),收集含有这三种脂溶性成分的洗脱液,蒸干,即得本发明蟾酥提取物,其中三种蟾毒配基混合物占整个提取物的重量百分比为98.01%。
实施例2
取蟾酥药材2克,加无水乙醇25ml,加热回流40min,上述条件下提2次。将提取液趁热过滤,旋蒸浓缩后加入1.8克硅胶拌样,得拌样硅胶。取22克硅胶以石油醚:丙酮(体积比5:1)浸泡后湿法装柱,加入拌样硅胶,用石油醚:丙酮(体积比5:1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别,收集含有脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种脂溶性成分的洗脱液,蒸干,即得本发明蟾酥提取物,其中三种蟾毒配基混合物含量为97.94%。
实施例3
取蟾酥药材3克,加无水乙醇35ml,加热回流40min,上述条件下提2次。将提取液趁热过滤,旋蒸浓缩后加入3克硅胶拌样,得拌样硅胶。取22克硅胶以石油醚:丙酮(体积比5:1)浸泡后湿法装柱,加入拌样硅胶,用石油醚:丙酮(体积比5:1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别,收集含有脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种脂溶性成分的洗脱液,蒸干,即得本发明蟾酥提取物,其中三种蟾毒配基混合物含量为99.08%。
实施例4
取蟾酥药材2克,加无水乙醇15ml,加热回流40min,上述条件下提3次。将提取液趁热过滤,旋蒸浓缩后加入1.8克硅胶拌样,得拌样硅胶。取22克硅胶以石油醚:丙酮(体积比6:1)浸泡后湿法装柱,加入拌样硅胶,用石油醚:丙酮(体积比6:1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别,收集含有脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种脂溶性成分的洗脱液,蒸干,即得本发明蟾酥提取物,其中三种蟾毒配基混合物含量为96.37%。
实施例5
取蟾酥药材2克,加无水乙醇10ml,加热回流20min,上述条件下提3次。将提取液趁热过滤,旋蒸浓缩后加入1克硅胶拌样,得拌样硅胶。取22克硅胶以石油醚:丙酮(体积比4:1)浸泡后湿法装柱,加入拌样硅胶,用石油醚:丙酮(体积比4:1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别,收集含有脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种脂溶性成分的洗脱液,蒸干,即得本发明蟾酥提取物,其中三种蟾毒配基混合物含量为91.06%。
实施例6
取蟾酥药材2克,加无水乙醇40ml,加热回流60min,上述条件下提1次。将提取液趁热过滤,旋蒸浓缩后加入2克硅胶拌样,得拌样硅胶。取22克硅胶以石油醚:丙酮(体积比3:1)浸泡后湿法装柱,加入拌样硅胶,用石油醚:丙酮(体积比3:1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别,收集含有脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种脂溶性成分的洗脱液,蒸干,即得本发明蟾酥提取物,其中三种蟾毒配基混合物含量为90.33%。
实施例7
取蟾酥药材1克,加无水乙醇15ml,加热回流40min,上述条件下提2次。将提取液趁热过滤,旋蒸浓缩后加入3克硅胶拌样,得拌样硅胶。取21克硅胶以石油醚:丙酮(体积比10:1)浸泡后湿法装柱,加入拌样硅胶,用石油醚:丙酮(体积比10:1)洗脱剂进行等度洗脱。通过HPLC鉴别,收集含有脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵这三种脂溶性成分的洗脱液,蒸干,即得本发明蟾酥提取物,其中三种蟾毒配基混合物含量为95.38%。
上述实施例中所述的蟾酥药材购自江苏宝应兴平蟾蜍养殖基地,粉碎研磨至60目左右;硅胶为青岛美高集团产品,粗孔,100~160目,柱直径2厘米,柱高20厘米。
Claims (17)
1.一种蟾酥提取物,其含有重量百分比≥90%的脂蟾毒配基、华蟾毒精和蟾毒灵三种蟾毒配基混合物;其制备方法包含下列步骤:
①将蟾酥药材用无水乙醇回流提取;
②将上述提取液浓缩后经硅胶柱分离,用洗脱剂:体积比为3~10∶1的石油醚和丙酮等度洗脱,收集洗脱液,过滤,蒸干即得含有三种蟾毒配基混合物的蟾酥提取物。
2.如权利要求1所述的蟾酥提取物,其特征在于该三种蟾毒配基混合物在蟾酥提取物中的含量为91~99%。
3.如权利要求1所述的蟾酥提取物,其特征在于步骤①中所述的蟾酥药材为蟾酥粉,每次提取时药材与无水乙醇的比例为1g∶5~20ml,提取时间为20~60分钟,共提取1~3次。
4.如权利要求1所述的蟾酥提取物,其特征在于步骤②中将浓缩的提取液加入硅胶拌样,蒸干得拌样硅胶,所得拌样硅胶干法上样。
5.如权利要求4所述的蟾酥提取物,其特征在于所述的加入硅胶的重量为蟾酥药材重量的0.5~3倍。
6.如权利要求5所述的蟾酥提取物,其特征在于所述的加入硅胶的重量为蟾酥药材重量的0.6~1倍。
7.如权利要求4所述的蟾酥提取物,其特征在于在所得拌样硅胶干法上样前先将硅胶湿法装柱,预先用所述洗脱剂石油醚和丙酮浸泡洗脱。
8.如权利要求1所述的蟾酥提取物,其特征在于步骤②中洗脱剂石油醚和丙酮的体积比为4~6∶1。
9.如权利要求1~8任一项所述的蟾酥提取物,其特征在于所述的硅胶为100~160目的粗孔硅胶。
10.如权利要求1所述的蟾酥提取物的制备方法,其包括下列步骤:
①将蟾酥药材用无水乙醇回流提取;
②将上述提取液浓缩后经硅胶柱分离,用洗脱剂:体积比为3~10∶1的石油醚和丙酮等度洗脱,收集洗脱液,过滤,蒸干即得含有三种蟾毒配基混合物的蟾酥提取物。
11.如权利要求10所述的制备方法,其特征在于步骤①中所述的蟾酥药材为蟾酥粉,每次提取时药材与无水乙醇的比例为1g∶5~20ml,提取时间为20~60分钟,共提取1~3次。
12.如权利要求10所述的制备方法,其特征在于步骤②中将浓缩的提取液加入硅胶拌样,蒸干得拌样硅胶,所得拌样硅胶干法上样。
13.如权利要求12所述的制备方法,其特征在于所述的加入硅胶的重量为蟾酥药材重量的0.5~3倍。
14.如权利要求13所述的制备方法,其特征在于所述的加入硅胶的重量为蟾酥药材重量的0.6~1倍。
15.如权利要求12所述的制备方法,其特征在于在所得拌样硅胶干法上样前先将硅胶湿法装柱,预先用所述洗脱剂石油醚和丙酮浸泡洗脱。
16.如权利要求10所述的制备方法,其特征在于步骤②中洗脱剂石油醚和丙酮的体积比为4~6∶1。
17.如权利要求10~16任一项所述的制备方法,其特征在于所述的硅胶为100~160目的粗孔硅胶。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2007100418807A CN101322723B (zh) | 2007-06-12 | 2007-06-12 | 一种蟾酥提取物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2007100418807A CN101322723B (zh) | 2007-06-12 | 2007-06-12 | 一种蟾酥提取物及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101322723A CN101322723A (zh) | 2008-12-17 |
CN101322723B true CN101322723B (zh) | 2011-04-20 |
Family
ID=40186524
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2007100418807A Expired - Fee Related CN101322723B (zh) | 2007-06-12 | 2007-06-12 | 一种蟾酥提取物及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101322723B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102247335A (zh) * | 2011-06-02 | 2011-11-23 | 江苏省中医药研究院 | 一种蟾毒灵干粉吸入剂及其制备方法、应用 |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102973604B (zh) * | 2011-06-02 | 2015-05-27 | 江苏省中医药研究院 | 一种蟾皮提取物干粉吸入剂及其制备方法、应用 |
CN103083286B (zh) * | 2011-06-02 | 2014-06-18 | 江苏省中医药研究院 | 一种蟾酥脂溶性提取物干粉吸入剂及其制备方法、应用 |
CN102512453B (zh) * | 2011-12-29 | 2013-11-06 | 北京协和制药二厂 | 中药蟾酥提取物及其制备方法 |
CN105125592A (zh) * | 2015-10-12 | 2015-12-09 | 北京诺康达医药科技有限公司 | 一种含蟾酥脂溶物的药物及其制备方法 |
CN105687251A (zh) * | 2016-01-21 | 2016-06-22 | 中国人民解放军第四军医大学 | 蟾酥提取物在制备治疗人脑胶质瘤药物中的应用 |
CN107158039A (zh) * | 2017-06-28 | 2017-09-15 | 四川仟源中药饮片有限公司 | 一种高纯度蟾酥直接口服饮片及其制备方法 |
CN108836982A (zh) * | 2018-07-06 | 2018-11-20 | 合肥华方医药科技有限公司 | 一种蟾皮有效部位及其制备方法 |
CN110590893A (zh) * | 2019-09-20 | 2019-12-20 | 重庆医药高等专科学校 | 一种蟾酥有效成分分离纯化的方法 |
CN116196279B (zh) * | 2023-04-27 | 2023-07-25 | 上海中医药大学 | 一种蟾酥提取物无胆固醇脂质体及其制备方法和应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1360909A (zh) * | 2000-12-29 | 2002-07-31 | 杨孟君 | 一种纳米华蟾素制剂药物及其制备方法 |
CN1810827A (zh) * | 2006-02-23 | 2006-08-02 | 崔彬 | 蟾蜍或蟾酥中三种抗癌化合物的制剂及其制备方法 |
-
2007
- 2007-06-12 CN CN2007100418807A patent/CN101322723B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1360909A (zh) * | 2000-12-29 | 2002-07-31 | 杨孟君 | 一种纳米华蟾素制剂药物及其制备方法 |
CN1810827A (zh) * | 2006-02-23 | 2006-08-02 | 崔彬 | 蟾蜍或蟾酥中三种抗癌化合物的制剂及其制备方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102247335A (zh) * | 2011-06-02 | 2011-11-23 | 江苏省中医药研究院 | 一种蟾毒灵干粉吸入剂及其制备方法、应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101322723A (zh) | 2008-12-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101322723B (zh) | 一种蟾酥提取物及其制备方法 | |
CN104031013B (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸b和迷迭香酸的方法 | |
CN107823237A (zh) | 一种牛蒡根总黄酮的提取方法 | |
CN102631414B (zh) | 地不容总生物碱提取纯化工艺 | |
CN103724389A (zh) | 一种分离制备抗肿瘤成分灵芝酸c1和灵芝酸f的方法 | |
CN104829666A (zh) | 一种从黄芩中制备高纯度黄芩苷的方法 | |
CN104231032A (zh) | 一种从雷公藤叶中分离雷公藤内酯二醇的方法 | |
CN108295114A (zh) | 丹参茎叶中酚酸类及黄酮类成分的提取纯化方法 | |
CN102659903A (zh) | 柴胡皂苷a或柴胡皂苷d的提取纯化方法 | |
CN110194758B (zh) | 一种从关木通中分离纯化马兜铃酸类化合物的方法 | |
CN106957310A (zh) | 一种山楂叶中黄酮类单体的高效制备方法 | |
CN106420871A (zh) | 富含Fe、Fd的三七总皂苷及其单体Fe和Fd的制备方法 | |
CN110862399A (zh) | 一种从汉防己总碱中制取汉防己甲素的方法 | |
CN103570647A (zh) | 从红豆杉细胞培养液中制备高纯度紫杉醇的方法 | |
CN103524578B (zh) | 一种从牡丹雄蕊中提取分离芍药苷类化合物的方法 | |
CN106831936B (zh) | 采用中、高压制备液相法制备丹参酮iia和二氢丹参酮i的方法 | |
CN101973861A (zh) | 一种吉马酮的制备方法 | |
CN101210039B (zh) | 一种羟基积雪草甙化学对照品的分离制备方法 | |
CN107721857A (zh) | 一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法 | |
CN101721449B (zh) | 一种应用凹凸棒土吸附法制备野马追总黄酮的方法 | |
CN106699711B (zh) | 一种大孔吸附树脂分离纯化党参中苍术内酯i和苍术内酯ii的工艺 | |
CN102133258A (zh) | 水黄皮黄酮类成分的提取纯化工艺 | |
CN103833806A (zh) | 一种中药化学成分制备方法 | |
CN103965276A (zh) | 从野马追中快速分离纯化单体化合物的方法 | |
CN103896892A (zh) | 高速逆流色谱从川芎提取物中制备洋川芎内酯i和h |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110420 Termination date: 20160612 |