CN101232891A - 胶原产生增强剂及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明以提供能够持续发挥增强胶原产生作用的方法为课题,解决方法是提供含有α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物作为有效成分的胶原产生增强剂、或者配合有该胶原产生增强剂的胶原产生增强用的组合物。
Description
技术领域
本发明涉及新型的胶原产生增强剂以及胶原产生增强用的组合物,详细地说,涉及由α,α-海藻糖和/或含有α,α-海藻糖的糖质衍生物制成的胶原产生增强剂以及含有该胶原产生增强剂的胶原产生增强用的组合物。
背景技术
现在,进入老龄化社会,世界上很多的中老年人,特别是女性人群,随着年龄的老化而引起的皮肤厚度减小,新陈代谢降低等的变化和骨密度的降低,是令人感到烦恼的事,特别是明显感到的伴随脸上的细纹·皱纹、皮肤松弛的发生、张力的消失、弹性的减少等而产生的容貌的变化是具有代表性的现象。迄今为止,人们为了确保皮肤的保湿性,虽然开发了配合有胶原、透明质酸等的粘多糖的化妆品作为抗老化用的化妆品,但是这些化妆品却得不到充分的皮肤抗老化的效果。近年来,通过对老化的研究得知,用于形成真皮的胶原纤维的显著减少,成为皮肤老化的主要原因。因此,可以启示,脸上的细纹和皱纹的发生、张力的消失、松弛的发生、皮肤弹性的降低等的容貌变化的原因,与胶原纤维的减少有关,虽然皮肤老化的原因各种各样,但结局就是由于真皮中存在的成纤维细胞的胶原产生能力降低、成纤维细胞本身的增殖性降低,从而使胶原的代谢降低。
另外,成纤维细胞中的胶原的产生量的降低,不仅会使皮肤老化,而且使作为皮肤的重要功能之一的机体防御能力降低,进而会引起以骨或血管为代表的由胶原来维持其结构的体内的组织、脏器的脆弱化,成为引起健康障碍的原因。但是,胶原是蛋白质,仅经口摄取或是涂布到皮肤表面,难以被直接吸收到体内,况且,由于不能增强成纤维细胞的胶原产生活性,因此不能从根本上预防和治疗皮肤的老化。因此,为了防止以皮肤、血管、骨骼为代表的组织老化以及维持和增进健康,希望开发一种能够使作为以真皮和骨骼、血管为代表的组织、脏器的主要构成成分的胶原持续产生,使健康增强至健壮水平而且安全的胶原产生增强剂,例如,有人曾提出一种配合有L-抗坏血酸的衍生物或蜂王浆的胶原产生增强剂(参照特开2003-171290号公报)。另外,也有报告称,葡萄糖等的糖质能够增强胶原的产生(参照例如,Han D.C.等、Journal of the American Society ofNephrology、第10卷、第9号、第1891-1899页(1999年))。但是,这些成分往往存在由于组合物的配方和使用条件等而引起稳定性等方面的问题,因此希望开发一种新型的胶原产生增强剂。
另一方面,α,α-海藻糖是一类由2分子的葡萄糖通过还原性基团彼此键合而成的二糖类,其糖质衍生物是一类由分子内具有该α,α-海藻糖结构的3个以上的葡萄糖构成的非还原性的糖质,这些糖质中的任一种都可在食品、化妆品、准药品(日本称为医药部外品是一种含药物疗效化妆品的批号)或者药品等领域中作为代替蔗糖等的糖质,对利用这些糖质的保湿作用、抗淀粉老化、抑制脂质劣化、抑制蛋白质变性等的特性的饮食品和皮肤外用剂的需求正在急速增长。
α,α-海藻糖以及该α,α-海藻糖的糖质衍生物是公知的物质,例如,相同申请人还申请了许多关于这些糖质的制备方法及其用途的专利(参照例如,特开平7-143876号公报、特开平7-213283号公报、特开2000-228980号公报、国际公开WO2004/056216号说明书)。另外,虽然还公开了α,α-海藻糖作为胶原产生增强剂的赋形剂的使用(参照例如,特开2003-171290号公报),但这些文献中,既没有记载也没有暗示关于α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生发挥显著的增强作用,迄今为止,仍然没有人注意到α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物可以增强胶原的产生这一点。
发明内容
本发明的课题是提供一种能有效地增强由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的方法。
本发明人等为了解决上述课题而反复进行深入研究,结果发现了α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物能高效率地增强由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的能力这一意外的结果,从而完成本发明。
本发明是基于发现了α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物对于包括人在内的动物,显示出显著增强由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的作用而完成的。另外,α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物是稳定且安全的,不必担心发生严重的副作用,因此可以长期连续使用,可以用于包括人在内的动物类简便且快速地防止皮肤老化、维持和增进美容和健康、强化骨骼和血管等的用途。
具体实施方式
由于本发明所用的α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物对于包括人在内的动物体能够发挥一种增强由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的作用,因此上述物质中的任一种均可以有利地用于本发明中。因此,本发明的胶原产生增强剂中,这些α,α-海藻糖和α,α-海藻糖的糖质衍生物中的1种或者2种以上只要作为整体达到有效含量即可。
本发明所用的α,α-海藻糖和α,α-海藻糖的糖质衍生物,可以采用发酵法、酶法、合成法等各种方法来制备,含有它们的糖浆、糖液(マスキツト)、非晶质粉末、含密结晶粉末、结晶等均可有利地利用。该α,α-海藻糖和α,α-海藻糖的糖质衍生物,不一定要进行高度精制,它可以是作为与制备过程中共存的其他糖质的未分离组合物的形态、也可以是部分精制的形态或者高度精制的形态,或者,也可以是一种通过把在制备工序中共存的还原性糖加氢,使其转变成糖醇而形成的形态,也可以是与基本上不妨碍包括人在内的哺乳类的L-抗坏血酸类引起的胶原产生的增强作用的其他适宜成分的混合物的形态。应予说明,本发明由于不是关于α,α-海藻糖或其衍生物的制备方法的发明,故对其省略详细说明,如果遇到经济性的问题,可以优选采用例如,特开平7-143876号公报、特开平7-213283号公报、特开2000-228980号公报、国际公开WO2004/056216号说明书等中公开的使非还原性糖质生成酶和海藻糖游离酶与淀粉的部分水解产物相作用的方法。采用该方法,可以由作为廉价材料的淀粉以高收率得到α,α-海藻糖或含有α,α-海藻糖的糖质。顺便说明,作为采用这种方法配制的α,α-海藻糖的市售品,有按固体成分换算含有9 8质量%以上含水结晶海藻糖的食品级α,α-海藻糖粉末(株式会社林原商事出售,商品名“Toreha”)。另外,作为含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖质,例如有:按无水物换算含有50质量%以上α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、且含有按无水物换算约7质量%α,α-海藻糖的糖质衍生物的市售的糖浆(株式会社林原商事出售,商品名“Hallodex”);或者是一种按无水物换算含有50质量%以上通过对其加氢而使共存的还原性糖质转变成其糖醇的α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、且含有按无水物换算约10质量%α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆(株式会社林原生物化学研究所出售,商品名“Tornare”)。
本发明所用的α,α-海藻糖的糖质衍生物,只要是能够增强由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的能力,就没有特殊限制。具体地说,只要是从由3个以上在分子内具有海藻糖结构的葡萄糖构成的非还原性低聚糖中选出的1种或者2种以上的糖质,哪一种都可以。更具体地可列举出,由α,α-海藻糖分子的至少一个的葡萄糖与选自单-葡萄糖、二-葡萄糖、三-葡萄糖和四-葡萄糖中的任一种结合而成的糖质等。
上述的α,α-海藻糖的糖质衍生物中,α-葡糖基-α,α-海藻糖、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、α-麦芽三糖基-α,α-海藻糖和α-麦芽四糖基-α,α-海藻糖等在分子末端具有海藻糖结构的糖质,对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生所起的增强作用显著,可有利地利用于本发明中。特别地,优选是含有在国际公开WO2004/056216号说明书等中公开的α-麦芽糖基-α,α-海藻糖为主成分、还含有从α-葡糖基-α,α-海藻糖、α-麦芽三糖基-α,α-海藻糖、以及其他的α-葡糖基-α-葡萄糖中选出的1种或者2种以上的糖质。此时,期望是相对于总糖质,按无水物换算含有约5质量%以上、优选约10质量%以上、更优选约30质量%以上的α-麦芽糖基-α,α-海藻糖的糖质。
本发明的胶原产生增强剂中,在不妨碍其胶原产生增强作用的范围内,可以添加葡萄糖、果糖、葡糖胺、乳糖、蔗糖、α,β-海藻糖、β,β-海藻糖、低聚乳果糖、麦芽低聚糖、糖蜜等的糖类、环糊精或由相同申请人申请的国际公开WO02/10361号说明书等中记载的具有环{→6)-α-D-吡喃葡糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡糖基-(1→)的结构的环状四糖、或者特开平2005-95148号公报(特愿2004-174880号说明书)等中记载的具有环{→6)-α-D-吡喃葡糖基-(1→4)-α-D-吡喃葡糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡糖基-(1→4)-α-D-吡喃葡糖基-(1→}的结构的环状四糖等的环状糖类、赤藓醇、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、还原糖蜜等的糖醇类、阿斯帕坦、甜菊提取物、三氯蔗糖、丁磺胺K等的高甜味度甜味料、普鲁兰糖、角叉菜胶、硫酸软骨素等的粘多糖类和其盐类、天然胶类、壳质、壳聚糖、以羧甲基纤维素为代表的合成高分子聚合物、胶原、明胶等的增粘剂中的任1种或者2种以上。
另外,在本发明的胶原产生增强剂中,还可以根据需要配合α,α-海藻糖和α,α-海藻糖的糖质衍生物以外的添加剂,例如,特开平10-203952号公报中公开的从山毛榉科山毛榉属的树芽提取的提取物等α,α-海藻糖和α,α-海藻糖的糖质衍生物以外的具有胶原产生增强作用的成分。进而还可以根据需要,使其含有海洋深层水、牡蛎壳钙等的矿物质类;乳化剂、香料、香辛料、色素;例如,维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、L-抗坏血酸、维生素E、芦丁·橙皮苷·柚皮苷等的维生素P类或者这些维生素类的衍生物等的维生素类;氨基酸类、CoQ10(辅酶Q10)、腺苷或其衍生物、它们的单磷酸酯、二磷酸酯或者三磷酸酯等碱类等的成分中的1种或者2种以上,从而也可以有利地实施本发明。其中,如果并用硫酸软骨素等的粘多糖类、CoQ10(辅酶Q10)、腺苷或其衍生物、它们的单磷酸酯、二磷酸酯或者三磷酸酯等的碱类,还可以进一步增强α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物的胶原产生增强作用。这些成分的选择基准,通常可以根据本发明的胶原产生增强剂在各利用领域中的必要性来适宜选择。
本发明所说的L-抗坏血酸类,是指L-抗坏血酸及其衍生物本身、或者是通过酶等的分解或修饰等而可以发挥出诱发成纤维细胞的胶原产生的作用的物质。具体地说,包括L-抗坏血酸、L-抗坏血酸2-葡糖苷等的L-抗坏血酸糖苷、L-抗坏血酸糖苷的酰化衍生物、L-抗坏血酸的磷酸酯或硫酸酯或它们的盐类等。通常,在包括人在内的动物的生物体内,由于存在成纤维细胞的胶原产生所必须量的L-抗坏血酸,因此,本发明的胶原产生增强剂中没必要加入L-抗坏血酸类,但在由于生物体内的L-抗坏血酸量不足而造成胶原产生能力降低时,优选合并使用L-抗坏血酸类。此时的L-抗坏血酸类的使用量的基准,可以根据本发明的胶原产生增强剂的各个利用领域来适宜选择包括人在内的动物的胶原产生所必须的量。
关于本发明的胶原产生增强剂的使用方法,针对人的情况举例说明,经口使用或者非经口使用本发明的胶原产生增强剂,都可以发挥胶原产生增强作用。另外,本发明的胶原产生增强剂,由于上述那样的作用,在经口和非经口使用的任何场合,对胶原产生的增强作用均是有效的。根据使用目的,通常可以按食品或者液体制剂、糖浆剂、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂等的形态经口或者经消化道(经胃、经肠等)进行摄取,也可以作为皮肤外用剂经皮给予,随不同时而异,可以按滴眼剂、注射液、输液、腹腔或胸腔的灌流液、脏器·伤口·眼·鼻腔·烧伤、炎症部位等的清洗液·消毒液、腹膜透析液、组织或脏器的保存液等的形态非经口使用,由此增强对象部位的胶原产生,也可以有利地强化组织和脏器或者促进伤口·烧伤·炎症部位的治愈。应予说明,本发明所说的皮肤外用剂,只要是可以使配合有α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物的组合物直接与皮肤接触的剂型,什么剂型都可以,不仅是化妆品、准药品(医药部外品)、药品,也可以包括洗剂等的日用品(杂货)类等。
本发明的胶原产生增强剂在通过经口、经皮、或者注射(包括腹腔内等的灌流)中的任一种途径向包括人在内的动物类给予时,其有效成分在生物体内被快速吸收,从而增强在真皮、组织、骨、脏器等中存在的成纤维细胞中的L-抗坏血酸类引起的胶原产生的能力,因此,当包括人在内的动物类摄取该胶原产生增强剂时,就会使胶原的产生稳定地增强,并使因伴随年龄增长的老化、透析、伴随炎症的疾病或手术等引起的组织障碍或因以紫外线为代表的因素而造成损伤的皮肤等的胶原产生能力的降低得以恢复,能向皮肤赋予张力和湿润,能够除去细纹·皱纹,恢复皮肤的弹性;强化以骨骼或血管为代表的各种组织、脏器;可以发挥治愈创伤的效果。另外,特别是当经皮给予时,α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物能持续地增强由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的能力,强化皮肤的真皮和角质层,增强生物体的防御能力,同时,抑制和改善肌肤的粗糙化,因此,可以使得因伴随年龄增长所导致的老化、或因以紫外线或有害微生物等为代表的因素而造成损伤的皮肤的胶原产生能力的降低能够迅速恢复,并能向皮肤赋予张力和湿润,除去细纹·皱纹,抑制肌肤的粗糙化和恢复皮肤的弹性,在用作适用于包括头皮在内的皮肤的化妆品时,由于上述作用效果而能增强对皮肤疾病的预防效果和增强对该疾病的治疗效果,并具有生发·养发等的功能。进而,当将本发明的胶原产生增强剂和/或含有该增强剂的组合物作为化妆品等直接涂布到皮肤上时,可以根据需要,通过使用例如由相同申请人申请的国际公开WO01/60388号说明书等中公开的离子导入工具来促进向皮肤的渗透。因此,本发明的胶原产生增强剂也可以用作皱纹或细纹的产生抑制剂和改善剂、生发·养发剂、组织强化剂等。而且,本发明的胶原产生增强剂可以简便地用于包括人在内的动物,也可以用于健康的维持和增进,还可以以例如强壮剂、健康食品、健康辅助食品、特殊用途食品、保健功能食品、化妆品、准药品(医药部外品)、药品、饲料、饵料、宠物食品、日用品(杂货)等的形式来利用。
本发明的胶原产生增强剂的摄取量或者给予量,根据作为对象的以人为代表的动物或者宠物等的种类、年龄、性别等的不同而异,可采用经口给予(包括经消化道给予)或者经皮给予以外的非经口给予,通常对每1kg体重的α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物的给予量,按无水物换算,为0.001g~2g,优选为0.01g~1g,可以1天1次或数次,根据效果连续每天或者间隔1天以上进行摄取或者给予均可。对于经口给予的强壮剂、健康食品、健康辅助食品、特殊用途食品、保健功能食品、准药品、药品、饲料、饵料、宠物食品等,可以使用例如液体制剂、片剂、粉末剂、颗粒剂、糊剂、糖浆剂、胶囊剂等根据各种用途中的剂型使用。此时,通常按无水物换算含有α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物0.1质量%以上,优选1质量%以上。另外,在将本发明的胶原产生增强剂用作化妆品等直接与皮肤接触的皮肤外用剂时,用于该胶原产生增强剂的α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物,按无水物换算,在皮肤外用剂总量中,为0.1质量%~20质量%,优选1质量%~20质量%,为了获得稳定的效果,特别优选2质量%~20质量%,可按1天1次或数次,根据效果连续每天或者间隔1天以上采用喷雾或涂布等的方法使其与皮肤接触。当将用量增加大于20质量%时,不仅没有进一步的效果,而且,随皮肤外用剂形态的不同往往在物性方面或使用感等方面产生配方上的问题,因此,以该用量作为配合量的上限。应予说明,除了在皮肤外用剂的物性面和使用感等方面不够好的情况以外,α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物在皮肤外用剂中的配合量没有上限。另外,在要使配合有α,α-海藻糖的衍生物的皮肤外用剂具有较佳粘附感时,可以并用聚丙烯酸钠、聚谷氨酸钠、硬葡聚糖、榅桲种子提取物、普鲁兰糖等水溶性多糖类等的增粘剂或乙醇,或者也可以按照质量比1∶20~20∶1的比例配合丁二醇和甘油。
本发明的胶原产生增强剂,如上所述,其本身是有用的,另一方面,也可以作为配合到其他成分中而形成的组合物的形态来利用。为了制备含有本发明的胶原产生增强剂的组合物,根据作为对象的动物类或其摄取方法或者给予方法等来选择适宜的组成,根据这些组成,将α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物以及可以在以上所示的饮食品、化妆品、准药品、药品、饲料、饵料、宠物食品的任何领域所用的1种或者2种以上的成分,根据使用目的并按照各自的含量来适宜地实施混合等的工序,由此制备含有α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物的组合物,可以根据需要将其成形为所希望的形状。本发明的胶原产生增强剂或者含有它的组合物的制备,可以按照下述方法实施,即,对上述各种成分实施从原料阶段到制品阶段的适宜工序,或者,对已有的制品适当组合实施例如稀释、浓缩、干燥、过滤、离心分离、混合、混捏、溶解、熔融、分散、悬浮、乳化、浸渍、浸透、散布、涂布、包覆、喷雾、注入、结晶、固化、反向胶束化等的方法中的1种或者2种以上。应予说明,如上述药品等那样,对于那些经口、经肠摄取的制剂或者是按照使用于皮肤以外的方法供给到生物体内的制剂等,希望除去细菌和热源。
作为本发明所用的向包括人在内的动物经口或者经皮使用或者允许作为皮肤外用的成分,可列举出上述的或者上述以外的、在本发明组合物的各个利用领域中通常使用的例如水、醇类、淀粉质、蛋白质、氨基酸、纤维质、糖质、脂质、脂肪酸、维生素、矿物质、香料、着色料、甜味料、调味料、香辛料、防腐剂、抗氧化剂、乳化剂、表面活性剂、粉末等。
本发明的胶原产生增强剂或者配合有该增强剂的组合物,表示能够增强胶原产生的能力,可用于增强胶原产生。配合有本发明胶原产生增强剂的组合物的形态没有特殊限制。作为优选的皮肤外用剂的形态,可列举出例如,国际公开WO2004/056216号说明书等中公开的洗发剂、乳液、乳膏、固体制剂、粉末、凝胶、摩丝、剥离式面膜、面膜、薄膜等形态的基础化妆品、洗涤用化妆品、沐浴用化妆品、口腔化妆品、日晒·防晒化妆品、美容化妆品、头发化妆品(生发剂、养发剂等)、厨房用洗涤剂等直接对肌肤有影响的日用品类等。作为药品,可列举出在皮内、皮下、血管内给予用的注射、腹腔内灌流液·洗涤液、腹膜透析等的透析液、外伤的洗涤液·消毒液、滴眼剂、滴鼻剂、外用剂等。作为食品可列举出例如,旨在用于增强胶原产生能力的冰激凌、冰棍、冰糕等的冰点、冰蜜等的果汁、掺糖乳脂、蛋奶冻、鲜花酱、花生酱、果酱等的涂抹料和酱类、巧克力、果冻、糖果、胶糖、焦糖、口香糖、布丁、奶油泡夫·松蛋糕为代表的烘烤点心等的西式点心、果酱、橘皮果酱、糖浆汁、果脯等的加工果实或加工蔬菜、包子、米粉糕、馅类、羊羹、软羊羹点心、葡式蛋糕、糖球儿、米制点心等的日式点心、面类、皮糖点心、米饭、家常菜、干燥食品、袋装食品、冷冻食品、酱油、粉末酱油、豆酱、粉末豆酱、蛋黄酱、调味汁、食醋、三料调合醋、料酒、食糖、咖啡糖等的调味料等。作为优选的饮料形态,可列举出例如,合成酒、酿造酒、发泡酒、果酒、洋酒等的酒类、果汁、矿物质饮料、碳酸饮料、乳酸饮料、乳酸菌饮料、运动饮料、营养饮料剂,绿茶、红茶、乌龙茶等的茶饮料,咖啡、可可等的清凉饮料等。以上所述的本发明组合物,相对于制品质量,通常含有0.01质量%~20质量%、优选0.1质量%~10质量%的本发明胶原产生增强剂。
下面,基于实验例更详细地说明本发明。
<实验1:α,α-海藻糖对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的影响>
使用正常人新生儿真皮成纤维细胞(Fibrocell NHDF、仓敷纺绩株式会社出售)(以下简写为“NHDF细胞”),按照“Bioscience,Biotechnology,and Biochemistry”、第68卷、第4期、第767-773页(2004年)中记载的方法进行考察α,α-海藻糖对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的影响的实验。下面简述该方法。
<试验溶液>
在含有10%(v/v)牛胎血清和抗生素的Dulbecco的MEM培养基(以下简写为“D-MEM培养基”)中,溶解L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原生物化学研究所出售、试剂级)(以下有时简写为“AA-2G”)和α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所出售、试剂级),以使AA-2G的最终浓度成为50μM、使α,α-海藻糖的最终浓度成为7.5mg/ml、15mg/ml或者30mg/ml,如此配制试验液。
<NHDF细胞中胶原产生量的定量方法>
使用D-MEM培养基,回收继代培养的NHDF细胞,使其再次悬浮于D-MEM培养基中,在96孔微量培养板中,以2.5×104细胞/200μl/孔进行接种,培养24小时。然后,抽吸除去培养液,按200μl/孔添加试验液中的任一种,进行5天培养。作为对照,按200μl/孔添加D-MEM培养基、含有30mg/ml α,α-海藻糖的D-MEM培养基或者含有50μM AA-2G的D-MEM培养基的任一种,进行5天培养。然后,抽吸除去培养液,向各孔中按50μl/孔加入含有1mg/ml胃蛋白酶的1M乙酸,振荡4小时,将细胞表面上附着的胶原溶解,用硅(Sircol)胶原定量试剂盒(Biocolor公司出售)测定细胞中蓄积的胶原量。对于对照液或者试验液,各使用3孔进行实验,求出各孔的胶原量的平均值,作为胶原产生量。应予说明,NHDF细胞的培养在任何场合均使用5容量%二氧化碳气体培养装置。通过将使用含有AA-2G的D-MEM培养基进行培养时的NHDF细胞的胶原产生量作为100来求出相对值,结果示于表1中。
表1
培养液的种类 | α,α-海藻糖浓度(mg/ml) | 胶原产生量 | |
对照 | D-MEM培养基 | 0.0 | 43 |
30.0 | 41 | ||
含有50μM AA-2G的D-MEM培养基 | 0.0 | 100 | |
试验液 | 含有50μM AA-2G的D-MEM培养基 | 7.5 | 150 |
15.0 | 217 | ||
30.0 | 264 |
从表1可以看出,当使用未添加AA-2G的D-MEM培养基以及使用向其中添加α,α-海藻糖的培养基进行培养时,NHDF细胞的胶原产生量分别为43或者41,由此可以看出,在单独使用α,α-海藻糖的情况下,观察不到象使用AA-2G时所出现的胶原产生增强作用。与此相反,当使用向含有50μM AA-2G的D-MEM培养基中添加7.5mg/ml、15mg/ml或者30mg/ml的α,α-海藻糖的培养基来培养NHDF细胞时,胶原产生量分别为150、217、264,由此可以看出,由AA-2G引起的胶原产生的增强与α,α-海藻糖的添加量相关。
<实验2:糖质对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的影响>
使用NHDF细胞,按如下那样进行考察α,α-海藻糖和麦芽糖对胶原产生的影响的实验。
<试验液>
在D-MEM培养基中溶解AA-2G以及含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所出售、试剂级)或者含水结晶麦芽糖(株式会社林原生物化学研究所出售、试剂级)中的任一种,以使AA-2G的最终浓度成为50μM,使α、α-海藻糖或者麦芽糖的最终浓度成为0.6mg/ml、1.7mg/ml、5.0mg/ml或者15.0mg/ml,如此配制试验液。
<NHDF细胞中胶原产生量的定量方法>
对于NHDF细胞的培养和胶原产生量的定量方法,与实验1同样地进行。另外,回收NHDF细胞的培养上清液,使用硅胶原定量试剂盒测定该上清液中放出的胶原量。作为对照,使用含有50μM AA-2G的D-MEM培养基。对于对照液或者试验液,各使用3孔进行实验,求出平均值,作为胶原产生量。结果,关于在细胞表面上沉积的和在培养上清液中存在的或者它们的合计胶原产生量,通过将使用含有50μMAA-2G的D-MEM培养基时在NHDF细胞的细胞表面上沉积的和在培养上清液中存在的或者它们的合计胶原产生量作为100来求出相对值,结果示于表2中。
表2
培养液的种类 | α,α-海藻糖或麦芽糖的浓度(mg/ml) | 胶原产生量 | |||
细胞表面上的沉积 | 培养上清液中 | 合计 | |||
对照 | 含有50μM AA-2G的D-MEM培养基 | 0 | 100 | 100 | 100 |
试验液 | 含有50μM AA-2G的D-MEM培养基+α,α-海藻糖 | 0.2 | 101 | 103 | 101 |
0.6 | 118 | 203 | 131 | ||
1.7 | 137 | 250 | 154 | ||
5.0 | 157 | 232 | 169 | ||
15.0 | 207 | 1058 | 335 | ||
含有50μM AA-2G的D-MEM培养基+麦芽糖 | 0.2 | 98 | 101 | 99 | |
0.6 | 85 | 134 | 92 | ||
1.7 | 63 | 288 | 97 | ||
5.0 | 25 | 256 | 61 | ||
15.0 | 11 | 228 | 44 |
从表2可以看出,当使用添加了α,α-海藻糖并含有50μMAA-2G的D-MEM培养基进行培养时,不管是从在细胞表面上沉积的以及在培养上清液中存在的这两种情况的任一种来看,均可以看出,由AA-2G引起的胶原产生的增强与α,α-海藻糖的添加量有关。另一方面,在添加了麦芽糖时,虽然也能观察到在培养上清液中的胶原量有所增加,但是可以确认,在细胞表面上沉积的胶原量、以及在细胞表面上沉积的与在上清液中存在的胶原的合计量,随着麦芽糖添加量的增加而受到抑制。
<实验3:α,α-海藻糖<α,α-海藻糖的糖质衍生物>对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的影响>
已经确认,α,α-海藻糖具有增强由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的作用,因此,为了确认α,α-海藻糖的糖质衍生物是否具有同样的作用效果,进行了如下实验。
<试验液>
在D-MEM培养基中溶解AA-2G以及含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所出售、试剂级)、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所制备、纯度98%以上)、含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆(株式会社林原商事出售、商品名“Hallodex”、按无水物换算含有约53%α-麦芽糖基-α,α-海藻糖以及合计约5%的其他α,α-海藻糖的糖质衍生物,固体成分浓度约75%)中的任一种糖质,以使AA-2G的最终浓度成为50μM,使糖质的最终浓度成为15.0mg/ml,配制试验液。另外,作为对照,在D-MEM培养基中溶解含水结晶α,α-海藻糖、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆中的任一种糖质,以使最终浓度成为15.0mg/ml,如此配制试验液。应予说明,添加了含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆的培养基按照能使其中所含有的作为α,α-海藻糖的糖质衍生物的浓度最终成为15.0mg/ml的条件来配制。
<NHDF细胞中胶原产生量的定量方法>
对于NHDF细胞的培养和胶原产生量的定量方法,与实验1同样地进行。另外,与实验1同样,将使用含有AA-2G的D-MEM培养基进行培养时的NHDF细胞的胶原产生量作为100来求出相对值,结果示于表3中。
表3
向培养基中添加的糖质的种类 | 是否向培养基中添加AA-2G | 胶原产生量 |
未添加 | - | 42 |
+ | 100 | |
α,α-海藻糖 | - | 40 |
+ | 227 | |
α-麦芽糖基-α,α-海藻糖 | - | 39 |
+ | 182 | |
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆 | - | 45 |
+ | 163 |
+:向培养基中添加;-:未向培养基中添加
从表3可以看出,当使用未添加AA-2G的D-MEM培养基、以及向其中添加了α,α-海藻糖、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆中的任一种糖质的培养基进行培养时,NHDF细胞的胶原产生量为39~45,由此可见,单独使用任何一种糖质,均没有观察到在使用AA-2G时所出现的胶原产生增强作用。与此相反,当使用通过向含有50μM AA-2G的D-MEM培养基中添加α,α-海藻糖、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆中的任一种而获得的培养基进行培养时,NHDF细胞的胶原产生量分别为227、182、163,由此可以看出,无论添加了任何糖质,都可以观察到由AA-2G引起的胶原产生的增强。
<实验4:α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物、或者这些糖质与透明质酸和/或硫酸软骨素并用时对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的影响>
按如下那样进行考察α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物、或者这些糖质与透明质酸和/或硫酸软骨素并用时对由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的影响的实验。
<试验液>
在D-MEM培养基中溶解AA-2G以及含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所出售、试剂级)、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所制备、纯度98%以上)或者含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆(株式会社林原商事出售、商品名“Hallodex”),以使AA-2G的最终浓度成为50μM,使糖质的最终浓度成为15.0mg/ml。另外,配制试验溶液,使这些溶液中溶解的透明质酸为1mg/ml、硫酸软骨素为1mg/ml,或者透明质酸和硫酸软骨素各自为0.5mg/ml。应予说明,配制添加了含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆(按无水物换算含有约59%α,α-海藻糖的糖质衍生物)的培养基,以使其中含有的α,α-海藻糖的糖质衍生物的浓度成为15.0mg/ml。
<NHDF细胞中胶原产生量的定量方法>
NHDF细胞的培养和胶原产生量的定量方法与实验1同样进行。另外,与实验1同样,将使用含有AA-2G的D-MEM培养基进行培养时的NHDF细胞的胶原产生量作为100来求出相对值,结果也示于表4中。
表4
向培养基中添加的糖质的种类 | 向培养基中添加的物质 | 胶原产生量 | ||
AA-2G | 透明质酸钠 | 硫酸软骨素 | ||
未添加 | - | - | - | 42 |
+ | - | - | 100 | |
+ | + | - | 98 | |
+ | - | + | 97 | |
+ | + | + | 101 | |
α,α-海藻糖 | - | - | - | 42 |
+ | - | - | 203 | |
+ | + | - | 276 | |
+ | - | + | 256 | |
+ | + | + | 344 | |
α-麦芽糖基-α,α-海藻糖 | - | - | - | 39 |
++ | - | - | 158 | |
+ | + | - | 199 | |
+ | - | + | 188 | |
+ | + | + | 276 | |
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆 | - | - | - | 42 |
+ | - | - | 154 | |
+ | + | - | 192 | |
+ | - | + | 180 | |
+ | + | + | 256 |
+:向培养基中添加;-:未向培养基中添加
从表4可以看出,当使用未添加AA-2G的D-MEM培养基、以及向其中添加了α,α-海藻糖、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆中的任一种的培养基进行培养时,NHDF细胞的胶原产生量为39~42,由此可见,单独使用任何糖质,都观察不到象使用AA-2G时所出现的胶原产生增强作用。另外,当使用通过向含有50μM AA-2G的D-MEM培养基中添加α,α-海藻糖、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、或者含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆中的任一种糖质而获得的培养基进行培养时,NHDF细胞的胶原产生量分别为203、158、154,由此可见,在添加任何糖质的情况,都与实验3同样,观察到AA-2G对胶原产生的增强作用。与此相反,当使用加入了α,α-海藻糖、α-麦芽糖基-α,α-海藻糖、或者含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆和透明质酸而获得的培养基进行培养时,NHDF细胞的胶原产生量分别为276、199、192,当使用添加了上述3种糖质中的任一种和硫酸软骨素而获得的培养基进行培养时,分别为256、188、180。另外,当使用添加了上述3种糖质中的任一种和透明质酸以及硫酸软骨素而获得的培养基进行培养时,NHDF细胞的胶原产生量分别为344、276、256。这些结果显示出,透明质酸或者硫酸软骨素具有进一步增强α,α-海藻糖或其糖质衍生物对于由AA-2G引起的胶原产生的作用。另外,将透明质酸和硫酸软骨素并用时,与添加其中任一方的情况相比,α,α-海藻糖或其糖质衍生物使由AA-2G引起的胶原产生量更多,因此可以确认,透明质酸和硫酸软骨素协同地增强了α,α-海藻糖或其糖质衍生物对由AA-2G引起的胶原产生的作用。
<实验5:α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物与透明质酸和/或硫酸软骨素并用时对皮肤的影响>
按如下那样进行考察α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物与透明质酸钠和/或硫酸软骨素对皮肤的影响的实验。即,由于在生物体内存在一定量的L-抗坏血酸,因此由L-抗坏血酸引起的胶原产生能稳定地进行。因此,在下述化妆水的基本处方中,按照下述表5所示的组合、配合量,加入透明质酸钠、硫酸软骨素、含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所出售、化妆品用)、含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆(株式会社林原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”、按无水物换算含有α-麦芽糖基-α,α-海藻糖约53%、以及其他的α,α-海藻糖的糖质衍生物合计约5%,固体成分浓度约75%),加入适量精制水,配制100质量份的化妆水。应予说明,表5所示的各糖质的添加量以无水物换算来表示。另外,含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆,通过按照表5所示的配合比例添加α,α-海藻糖的糖质衍生物来制备。
<化妆水的基本处方>
甘油 5质量份
1,3-丁二醇 6.5质量份
聚氧乙烯(20E.O.)山梨糖醇酐单月桂酸酯 1.2质量份
乙醇 8质量份
乳酸 0.05质量份
乳酸钠 0.1质量份
对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯 0.1质量份
防腐剂 适量
香料 适量
<化妆水对皮肤的皱纹、细纹和松弛的效果的评价>
以苦恼于皮肤的皱纹、细纹或松弛的女性11人作为受试者,将表5所示的任一种配方的化妆水用于脸部,每天3次,共4个月,根据受试者自己的诉述来评价与使用前相比的皮肤状态。评价按照下述方法进行,即,将皮肤的皱纹、细纹和松弛的变化分为4个等级:皮肤有张力,皱纹和细纹的深度变浅,皱纹和细纹的数量变少(显著效果);皮肤有张力,皱纹和细纹的深度变浅的数量变少(有效);皮肤的松弛虽然得到改善,但皱纹和细纹的深度和数量没有变化(稍微有效);无变化(无效);进行各评价的受试者的人数示于表5中。
表5
添加的糖质的种类 | 糖质添加量(质量份) | 透明质酸钠和/或硫酸软骨素的添加量(质量份) | 效果的评价(人数) | ||||
透明质酸钠 | 硫酸软骨素 | 显著有效 | 有效 | 稍微有效 | 无效 | ||
未添加 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 10 |
0.5 | 0 | 0 | 0 | 2 | 9 | ||
0 | 0.5 | 0 | 0 | 1 | 10 | ||
0.25 | 0.25 | 0 | 0 | 3 | 8 | ||
α,α-海藻糖 | 0.05 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 8 |
0.1 | 0 | 0 | 0 | 2 | 5 | 4 | |
1 | 0 | 0 | 2 | 2 | 6 | 1 | |
2 | 0 | 0 | 2 | 4 | 4 | 1 | |
10 | 0 | 0 | 3 | 3 | 5 | 0 | |
20 | 0 | 0 | 3 | 3 | 5 | 0 | |
2 | 0.5 | 0 | 3 | 4 | 3 | 1 | |
0 | 0.5 | 3 | 5 | 3 | 0 | ||
0.25 | 0.25 | 6 | 3 | 2 | 0 | ||
α,α-海藻糖的糖质衍生物 | 0.05 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 8 |
0.1 | 0 | 0 | 0 | 1 | 6 | 4 | |
1 | 0 | 0 | 1 | 3 | 6 | 1 | |
2 | 0 | 0 | 2 | 3 | 6 | 0 | |
10 | 0 | 0 | 2 | 3 | 6 | 0 | |
20 | 0 | 0 | 3 | 2 | 6 | 0 | |
2 | 0.5 | 0 | 4 | 4 | 2 | 1 | |
0 | 0.5 | 4 | 3 | 4 | 0 | ||
0.25 | 0.25 | 6 | 3 | 2 | 0 |
从表5可以看出,当使用通过向基本处方的化妆水中添加2质量份~20质量份的α,α-海藻糖而获得的化妆水时,每组11人中均有6人评价为有效以上;当使用添加了2质量份~20质量份的α,α-海藻糖的糖质衍生物而获得的化妆水时,每组11人中均有5人评价为有效以上;可以确认α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物对皮肤的松弛、皱纹和细纹具有改善效果和抑制效果。进而,在添加0.1质量份的α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物时,可以观察到每组都存在有效例;在添加1质量份时,可以观察到每组都存在显著效果例。这些结果表明,α,α-海藻糖和其糖质衍生物显示出对皮肤的皱纹和细纹的改善效果·抑制效果。另外,当使用通过向基本处方的化妆水中添加透明质酸钠和/或硫酸软骨素以及2质量份的α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物而获得的化妆水时,与单独使用2质量份的α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物时相比,可以观察到对皮肤的松弛、皱纹和细纹具有很强的改善效果。由该透明质酸钠和/或硫酸软骨素引起的,α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物对皮肤的松弛、皱纹和细纹的改善效果的增强作用,与单独配合透明质酸钠或者硫酸软骨素时相比,可以确认将两者并用时的效果更强一些。当使用基本处方的化妆水、或者按照表5所示的量向其中添加透明质酸钠和/或硫酸软骨素而获得的化妆水时,受试者中没有人将这些化妆水评价为显著效果或有效。
<实验6:α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物与透明质酸钠和/或硫酸软骨素再并用单磷酸腺苷和/或辅酶Q10时对皮肤的影响>
按如下那样进行考察α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物以及透明质酸钠和/或硫酸软骨素进一步并用单磷酸腺苷(以下有时简写为“AMP”)和/或辅酶Q10(以下有时简写为“CoQ10”)时对皮肤的影响的实验。即,向实验5使用的相同化妆水的基本处方中,按照下述表6所示的组合和配合量,加入透明质酸钠、硫酸软骨素、含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所出售、化妆品用)、含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆(株式会社林原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”),进而向其中加入AMP、CoQ10,再加入适量的精制水,如此配制100质量份的化妆水。应予说明,表6所示的各糖质的添加量换算成无水物来表示。另外,含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆,通过按照表6所示的配合比例添加α,α-海藻糖的糖质衍生物来制备。与实验5同样,以对皮肤的皱纹、细纹或松弛感到烦恼的女性11人作为受试者,将该配合的任一种化妆水用于脸部,每天3次,共3个月,采用与实验5相同的方法,评价对皮肤的皱纹、细纹和松弛的效果,结果示于表6中。
表6
添加的糖质及其添加量 | 透明质酸钠、硫酸软骨素、AMP和/或CoQ1 0的添加量(质量份) | 效果的评价(人数) | ||||||
透明质酸钠 | 硫酸软骨素 | AMP | CoQ10 | 显著有效 | 有效 | 稍微有效 | 无效 | |
α,α-海藻糖(1质量份) | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 2 | 6 | 2 |
0 | 0 | 0.2 | 0 | 2 | 2 | 6 | 1 | |
0 | 0 | 0 | 0.2 | 1 | 3 | 6 | 1 | |
0 | 0 | 0.1 | 0.1 | 2 | 3 | 5 | 1 | |
0.1 | 0.1 | 0 | 0 | 2 | 4 | 4 | 1 | |
0.1 | 0.1 | 0.2 | 0 | 3 | 4 | 4 | 0 | |
0.1 | 0.1 | 0 | 0.2 | 4 | 3 | 4 | 0 | |
0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 5 | 5 | 1 | 0 | |
α,α-海藻糖的糖质衍生物(1质量份) | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 6 | 3 |
0 | 0 | 0.2 | 0 | 1 | 2 | 6 | 2 | |
0 | 0 | 0 | 0.2 | 1 | 2 | 5 | 3 | |
0 | 0 | 0.1 | 0.1 | 2 | 2 | 5 | 2 | |
0.1 | 0.1 | 0 | 0 | 2 | 3 | 5 | 1 | |
0.1 | 0.1 | 0.2 | 0 | 3 | 3 | 5 | 0 | |
0.1 | 0.1 | 0 | 0.2 | 3 | 4 | 4 | 0 | |
0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 5 | 4 | 2 | 0 |
从表6可以看出,当使用向基本处方的化妆水中添加了α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物以及AMP和/或CoQ10的化妆水时,与单独使用α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物时相比,观察到对皮肤的松弛、皱纹和细纹具有更强的改善效果。由该AMP和/或CoQ10引起的α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物对皮肤的松弛、皱纹和细纹的改善效果的增强作用,与单独向化妆水中配合AMP或者CoQ10时相比,可以确认将两者并用时的作用更强。另外,当使用通过向基本处方的化妆水中添加α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物、0.1质量份的透明质酸、0.1质量份的硫酸软骨素并进而向其中添加AMP和/或CoQ10而获得的化妆水时,与使用添加了α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物和0.1质量份的透明质酸钠以及0.1质量份的硫酸软骨素而获得的化妆水时相比,可以确认对皮肤的松弛、皱纹和细纹具有更强的改善效果。由该AMP和/或CoQ10引起的上述添加了α,α-海藻糖或者α,α-海藻糖的糖质衍生物和透明质酸钠以及硫酸软骨素而获得的化妆水对皮肤的松弛、皱纹和细纹的改善效果的增强作用,与单独配合AMP或者CoQ10时相比,可以确认将两者并用时的作用更强。
这些实验结果表明,α,α-海藻糖及其糖质衍生物对于由L-抗坏血酸类引起的胶原产生具有显著的增强作用,因此,含有α,α-海藻糖或其衍生物的组合物可以用作由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的增强剂、皮肤的松弛的改善剂·抑制剂、皱纹和细纹的改善剂·抑制剂。另外,透明质酸钠和/或硫酸软骨素或者再与AMP和/或CoQ10一起使用时,对于α,α-海藻糖或其糖质衍生物使由AA-2G引起的胶原产生的增强具有更大的增强作用,这一事实表明,通过向含有α,α-海藻糖或其糖质衍生物的组合物中配合选自透明质酸钠、硫酸软骨素、AMP和CoQ10中的任一种以上而获得的组合物,与含有α,α-海藻糖或其糖质衍生物的组合物相比,可以更有利地用作由L-抗坏血酸类引起的胶原产生的增强剂、皮肤松弛的改善剂·抑制剂、皱纹和细纹的改善剂·抑制剂。
下面基于实施例更详细地说明本发明,但本发明不受这些实施例的限定。
【实施例1】
<胶原产生增强剂>
将以下成分按以下配比均匀混合,制备成胶原产生增强剂。
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原商事出售、商品名“Toreha”)
49质量份
L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原生物化学研究所出售、商品名
“AA2G”) 1质量份
本品显示出增强胶原产生的作用,对皮肤具有保湿作用,能有效地防止皮肤的老化,是一类能够简便使用且显示出显著效果的胶原产生增强剂。另外,本品由于适度的酸味而显示出良好的味道,因此可以附上具有胶原产生增强作用的文字标识,作为增强胶原产生的健康辅助食品,既可以直接经口摄取,或者也可以溶解于水或其他饮料等中来摄取,这两种摄取方式可以自由选择。进而,也可以自由地将其配合到特殊用途食品、保健功能食品、化妆品、准药品、药品、饲料、饵料、宠物食品、日用品等中,由此向它们赋予胶原增强作用。
将本品每1g进行压片,制备片剂。本品可以标注增强胶原产生的作用来出售。
【实施例2】
<健康辅助食品>
将以下成分按以下配比均匀混合,制备成粉末状的胶原产生增强用的健康辅助食品。将本品用与上述实验1所用的相同的D-MEM培养基稀释,按照实验1测定本品的胶原产生的增强活性,从而确认该活性得到发挥。
L-抗坏血酸 5质量份
鹿角灵芝(株式会社林原生物化学研究所出售) 1.5质量份
蓼蓝(株式会社林原生物化学研究所出售) 1.5质量份
含有α,α-海藻糖糖质的糖浆(株式会社林原商
事出售、商品名“Hallodex”) 25质量份
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原商事出
售、商品名“Toreha”) 10质量份
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此,可用作增强胶原产生的健康辅助食品。另外,本品具有优良的皮肤组织正常化和抗老化的效果,由于具有温和的甜味和适度的酸味而显示出良好的味道,适合用作日常利用的健康辅助食品。另外,本品不仅可用于人,而且可以作为家畜、宠物等动物的经口摄取或者经消化道给予用的组合物,或者以直接或者与饲料混合的形式用于鱼、虾、蟹等的养殖动物。
另外,向该胶原产生增强用的健康辅助食品中添加1质量%的蔗糖脂肪酸酯,用压片机成型为每片约300mg的片剂。本品显示出持续的胶原产生增强作用,是一种长期稳定、携带方便且经口摄取容易、并显示出显著效果的胶原产生增强用的健康辅助食品。另外,本品可以标识出具有增强胶原产生的作用,而用作增强胶原产生用的健康辅助食品。
【实施例3】
<健康辅助食品>
将以下成分按以下配比均匀混合,制备成粉末状的胶原产生增强用的健康辅助食品。制备后,确认该胶原产生增强剂稳定并显示出胶原产生增强作用。
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原商事
出售、商品名“Toreha”) 5.5质量份
L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原商事出
售、商品名“アスコ フ レツシユ”) 1.5质量份
硫酸软骨素钠 1质量份
壳聚糖 1质量份
转糖芦丁(株式会社林原商事出售、商品名
“αG芦丁”) 1质量份
单磷酸腺苷 0.1质量份
辅酶Q10 0.05质量份
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此,可用作增强胶原产生的健康辅助食品。另外,本品具有优良的皮肤组织正常化和抗老化的效果,由于具有温和的甜味和适度的酸味而显示出良好的味道,因此适合用作日常利用的健康辅助食品。
【实施例4】
<健康辅助饮料>
粉末麦芽糖醇 500质量份
采用实施例1的方法制备的胶原产生增强剂 100质量份
粉末蛋黄 190质量份
脱脂奶粉 200质量份
氯化钠 4.4质量份
氯化钾 1.85质量份
硫酸镁 4质量份
硫酸软骨素 0.1质量份
硫胺 0.01质量份
维生素E乙酸酯 0.6质量份
烟酰胺 0.04质量份
转糖橙皮苷(东洋精糖株式会社出售、商品
名“αG橙皮苷PS”) 0.02质量份
制备含有上述配比组成的配合物。将该配合物25质量份均匀分散·溶解于精制水150质量份中,将各200g封入褐色玻璃瓶中。
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此可用作增强胶原产生的健康辅助饮料。另外,本品除了可以持续地发挥胶原产生的增强作用之外,还可以补充营养源,而且可以降低来自这些成分的异味和异臭,是一类美味的饮料,可有利地用于美容和健康等的目的。应予说明,本品不仅适用于人,还可以有利地作为家畜、宠物等动物的经口摄取或者经消化道给予用组合物。另外,本品由于含有转糖橙皮苷,因此,可以无障碍地标注本品可用于减少血中脂质和血中胆固醇等的血中脂质的文字。
【实施例5】
<健康辅助食品>
粉末麦芽糖醇 25质量份
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原商事
出售、商品名“Toreha”) 67质量份
润滑剂 3质量份
葡糖胺 2.5质量份
硫酸软骨素钠 1.5质量份
透明质酸 1质量份
按照上述配方,将这些成分搅拌混合至均匀,采用常规方法,每片0.5g压片,制成片剂。
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此可用作增强胶原产生的健康辅助食品。另外,本品除了可以持续地发挥胶原产生增强作用之外,还由于含有葡糖胺、硫酸软骨素、透明质酸,因此,特别是对骨组织的强化作用和对关节的强化作用优良。本品能够抑制来自葡糖胺、硫酸软骨素、透明质酸的异味和异臭,是一类美味的健康食品,可以有利地用于美容和健康等的目的。应予说明,本品不仅适用于人,而且可以有利地作为家畜、宠物等动物的经口摄取或者经消化道给予用的组合物。
【实施例6】
<健康辅助食品>
精制麦芽糖(株式会社林原商事出售、商品名
“サンマルトS”) 25质量份
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原商事出
售、商品名“Toreha”) 54.2质量份
润滑剂 5质量份
牡蛎壳钙 2质量份
透明质酸 0.2质量份
L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原商事出
售、商品名“アスコフレツシユ”) 10质量份
转糖芦丁(东洋精糖株式会社出售、商品名“α
G芦丁P”) 0.5质量份
酸味料(有机酸类) 适量
柠檬和酸橙的调味料 适量
使总量为100质量份,将这些成分搅拌混合至均匀,采用常规方法,每片0.5g压片,制成片剂。
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此,可用作增强胶原产生的健康辅助食品。另外,本品除了能持续地发挥胶原产生增强作用之外,还由于含有透明质酸,因此,特别是对肌肤松弛的改善作用、对骨组织的强化作用、对关节的强化作用和对关节痛的改善效果优良。本品是美味的健康食品,可有利地用于美容和健康等的目的。应予说明,本品不仅适用于人,而且可以有利地作为家畜、宠物等动物的经口摄取或者经消化道给予用的组合物。
【实施例7】
<冰淇淋>
鲜奶油(油脂含量约46质量%) 18质量份
脱脂奶粉 7质量份
全脂牛奶 51质量份
砂糖 13质量份
普鲁兰糖 2质量份
瓜尔豆胶 1质量份
将上述配比组成的混合物溶解,在70℃下保持30分钟,灭菌后,用均化器使其乳化分散,接着,急冷至3~4℃,向其中进一步加入含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖浆(株式会社林原商事出售、商品名“Hallodex”)5质量份,混合,熟化整夜后,用冷冻机使其冻结,得到冰淇淋。
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此,可以用于胶原产生增强用途。本品可使皮肤滋润,是具有防止皮肤老化效果的冰淇淋。
【实施例8】
<果冻>
砂糖 14质量份
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社
林原商事出售、商品名“Toreha”) 4质量份
明胶 2.5质量份
葡萄柚汁 34质量份
水 45.5质量份
按照上述配比组成,加入砂糖、α,α-海藻糖、明胶、水,加热至95℃使其溶解后,加入葡萄柚汁,混合,进而在80℃下进行30分灭菌,然后冷却,制成果冻。
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此,可以用于胶原产生增强用途。本品是一种具有适度的甜味和光滑的质地,可防止皮肤老化以及维持、增进美容和健康效果的果冻。
【实施例9】
<茶饮料>
将用于掺合到液体饮料中的绿茶50g用65℃的去离子水1500g提取5分钟,接着用滤纸过滤以除去茶叶,得到1320g的绿茶提取液(pH6.0)。将该绿茶提取液用去离子水稀释约5倍,以使其达到饮用浓度,添加L-抗坏血酸达300ppm后,用碳酸氢钠将其调节至pH6.0,得到调和液。向该调和液中添加含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原商事出售、商品名“Toreha”),使其达到0.75%,并添加转糖橙皮苷(株式会社林原制备、转糖橙皮苷纯度95%以上),使其达到1%。将这些调和液按一份300g装入到耐热性透明玻璃容器中并密封,进行蒸汽灭菌处理(121℃、7分钟),制成绿茶饮料。
本品显示出对胶原产生的增强作用,因此,可以用于胶原产生增强用途。本品是一种可以防止皮肤老化,具有维持、增进美容和健康的效果的茶饮料。另外,本品由于含有转糖橙皮苷,因此可以无障碍地标注能够用于降低血中中性脂肪和血中胆固醇等的血中脂质。
【实施例10】
<皮肤外用乳剂>
向下述的配合物A中,按照常规方法添加混合配合物B,冷却至30℃以下后,用氢氧化钾将pH值调节至弱酸性,用均化器进行乳化,如此制备皮肤外用乳剂。
<配合物A>
单硬脂酸聚氧乙烯甘油 2质量份
自乳化型单硬脂酸甘油 5质量份
山萮酸二十烷基酯 1质量份
液体石蜡 1.9质量份
三辛酸三羟甲基丙烷 10质量份
<配合物B>
1,3-丁二醇 4质量份
α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学研究所
出售、试剂级) 3质量份
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖质(株式林
原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”) 1质量份
乳酸钠液体 10质量份
L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原生物化学
研究所出售、商品名“AA2G”) 2质量份
大叶藻提取物 0.5质量份
大豆提取物 0.5质量份
芦荟提取物 0.5质量份
对羟基苯甲酸甲酯 0.1质量份
硫酸软骨素钠 0.1质量份
甘草提取物 0.5质量份
精制水 62.4质量份
应予说明,本乳剂还可以根据需要进一步加入氢氧化钾,制成弱碱性的乳剂。
本品由于能够增强皮肤的胶原产生并使其持续,因此,可以改善皮肤的松弛,对细纹和皱纹也有效,抗老化的效果优良。另外,本品由于显示出优良的保湿性,可用作基础化妆品。
【实施例11】
<洗发剂>
基于以下所示的配方,采用常规方法,配制洗发剂。
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖质(株式
林原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”) 10质量份
L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原生物化
学研究所出售、商品名“AA2G”) 2质量份
甘草酸二钾 0.05质量份
乙醇 10质量份
1,3-丁二醇 5质量份
转糖橙皮苷(株式会社林原生物化学研究所
出售、商品名“α-葡糖基橙皮苷”) 1质量份
蓼蓝水提取物 1质量份
单磷酸腺苷 0.5质量份
辅酶Q10 0.5质量份
透明质酸钠 0.1质量份
感光素201号 0.005质量份
聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油 1质量份
加入适量精制水,使总量成为100质量份。
本洗发剂由于具有增强且持续增强皮肤的胶原产生的作用,能够保持皮肤的水嫩度,改善松弛,对细纹和皱纹也有效,抗老化的效果优良,另外,由于蓼蓝水提取物和甘草酸二钾显示出优良的抗炎作用和美白作用,因此可以用作基础化妆品、美白化妆品。
【实施例12】
<洗发剂>
将下述的配合物A溶解于精制水中,配制水溶液。称取配合物B,加热使其溶解,向其中加入配合物C,使其生成凝胶,然后将该凝胶生成物加入到配合物A的水溶液中,搅拌直至均匀,然后采用常规方法,配制洗发剂。
<配合物A>
1,3-丁二醇 5质量份
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖质(株式会
社林原生物化学研究所出售、商品名“Torna re”) 3质量份
小核菌胶(Sclerotium gum)液(含有1%β-葡
聚糖的溶液) 3质量份
柠檬酸 0.01质量份
柠檬酸钠 0.04质量份
对羟基苯甲酸丙酯 0.2质量份
精制水 85.65质量份
<配合物B>
羟基硬脂酸植物甾醇酯 0.04质量份
三2-乙基己酸甘油酯 0.24质量份
异硬脂醇 0.12质量份
角鲨烷 0.18质量份
聚氧乙烯氢化蓖麻油 0.69质量份
聚二异硬脂酸甘油酯 0.46质量份
对羟基苯甲酸丙酯 0.1质量份
甘油 1.13质量份
<配合物C>
精制水 0.14质量份
由于本品是稳定配合少量油分的微乳,具有增强且持续增强皮肤的胶原产生的作用,因此,能够保持皮肤的水嫩度、改善松弛,对细纹·皱纹也有效,抗老化的效果优良。另外,由于本品含有水溶性多糖类的硬葡聚糖,因此,可以进一步提高含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的皮肤外用剂的使用感,获得具有持续性的湿润感,保湿性也优良。
【实施例13】
<香精>
称取下述的配合物A,加温使其溶解。称取配合物B,加温使其溶解,将其加入到上述配合物A中,乳化,用均相混合机搅拌冷却至室温,采用常规方法配制香精。
<配合物A>
大豆溶血磷脂液(25%) 1质量份
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖质(株式会社
林原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”) 4质量份
1,3-丁二醇 5质量份
硬葡聚糖液(1%) 10质量份
榅桲种子提取物(2%) 10质量份
对羟基苯甲酸甲酯 0.2质量份
精制水 54.9质量份
<配合物B>
单硬脂酸山梨糖醇酐 0.5质量份
自乳化型单硬脂酸甘油酯 1质量份
鲸蜡醇 1质量份
羟基硬脂酸植物甾醇酯 0.3质量份
N-月桂酰-L-谷氨酸二(植物甾醇基-2-辛基
十二烷基)酯 0.5质量份
角鲨烷 6质量份
棕榈酸辛酯 2质量份
三2-乙基己酸甘油酯 2质量份
对羟基苯甲酸丙酯 0.1质量份
聚甲基硅氧烷 0.5质量份
本品由于具有增强且持续增强皮肤的胶原产生的作用,能够保持皮肤的水嫩度、改善松弛,对细纹和皱纹也有效,抗老化的效果优良。另外,由于本品含有硬葡聚糖和榅桲种子提取物等水溶性多糖类,因此,可以进一步提高含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的皮肤外用剂的使用感,获得具有持续性的湿润感,保湿性也优良。
【实施例14】
<D相调制物>
将下述的配合物A加热溶解,向其中加入加热溶解了的配合物B并将其搅拌溶解至均质,进而一边缓慢加入精制水,一边搅拌混合,然后冷却至室温,采用常规方法,配制D相调制物。
<配合物A>
聚硬脂酸甘油酯-10 1.75质量份
聚肉豆蔻酸甘油酯-10 5.2质量份
含有α,-海藻糖的糖质衍生物的糖质(株式林
原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”) 16.4质量份
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原生物化学
研究所出售、化妆品用) 1质量份
甘油 8.7质量份
对羟基苯甲酸甲酯 0.13质量份
<配合物B>
三辛酸甘油酯(Trioctanoin) 52.22质量份
生育酚 0.05质量份
对羟基苯甲酸丙酯 0.05质量份
加入精制水,使总量成为100质量份。
本品由于具有增强并持续增强皮肤的胶原产生的作用,能够保持皮肤的水嫩度、改善松弛,对细纹和皱纹也有效,因此可以有利地用于基础化妆品。另外,由于本品使用了α,α-海藻糖的糖质衍生物,因此表面张力下降,与以往的使用多元醇的D相调制物相比,具有质地微细、且其状态成为稳定的乳化液滴状的特征,可以配合到清洁凝胶、化妆水、乳膏、沐浴剂等中使用。
【实施例15】
<面膜剂(凝胶状剥离型面膜)>
采用下述的配方,按照常规方法配制面膜剂。
聚乙烯醇 7质量份
普鲁兰糖 7质量份
1,3-丁二醇 3质量份
甘油 15质量份
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖质(株式会
社林原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”) 12质量份
乙醇 8质量份
L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原生物化学
研究所出售、商品名“AA2G”) 1质量份
POE油醇醚 0.5质量份
海洋深层水 0.5质量份
香料 适量
缓冲剂 适量
精制水 15质量份
本品由于能使皮肤的胶原产生增强并持续,能够保持皮肤的水嫩度,改善松弛,对细纹和皱纹也有效,抗老化的效果和保湿效果优良。另外,本品使用感优良,而且,半干燥后或者干燥后容易从皮肤上擦拭除去或剥离下来,皮肤表面和毛孔的清洁效果也优良。
【实施例16】
<牙膏>
基于以下所示的构成处方,按照常规方法配制牙膏。本品由于含有α,α-海藻糖及其糖质衍生物,因此可以增强牙颈细胞的胶原产生,因此,可以抑制因老化或牙龈炎等造成的牙颈减少,而且可以改善起泡症状,具有舒畅的洗涤后感,是可以用于清洁地除去牙垢的牙膏。另外,由于本品中的α,α-海藻糖和α,α-海藻糖的糖质衍生物可以有效地抑制由虫牙菌(变形链球菌)的葡聚糖转移酶引起的蔗糖来源的附着性不溶性葡聚糖的生成,因此抗龋齿效果也优良。
β-甘草次酸 0.4质量份
氯化鲸蜡基吡啶 0.2质量份
乙酸生育酚 0.1质量份
含水结晶α,α-海藻糖(株式会社林原生物化
学研究所出售、化妆品用) 6质量份
浓甘油 10质量份
含有α,α-海藻糖的糖质衍生物的糖质(株式会
社林原生物化学研究所出售、商品名“Tornare”) 9质量份
精制水 23.5质量份
乙醇 3质量份
蜂胶提取物 1质量份
蓼蓝水提取物 1质量份
L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原生物化学
研究所出售、试剂级) 2质量份
透明质酸钠 0.1质量份
角叉菜胶 0.3质量份
羧甲基纤维素钠 0.3质量份
磷酸氢钙 20质量份
羟基磷灰石 3.5质量份
碳酸钙 1质量份
氧化钛 0.4质量份
硅酸酐 0.1质量份
月桂基硫酸钠 1质量份
月桂酰替肌氨酸钠 0.5质量份
【实施例17】
<腹膜透析液>
将含有α-麦芽糖基-α,α-海藻糖的糖浆(株式会社林原生物化学研究所制备、纯度98.5%、固体成分含量7 5%)6g、L-抗坏血酸2-葡糖苷(株式会社林原生物化学研究所制备、纯度99.5%、)2.1g、氯化钠0.567g、乳酸钠3.92g、氯化钙0.294g、氯化镁0.103g溶解于蒸馏水中,用氢氧化钠0.294g将pH值调节至约7.5后,用蒸馏水补足至总量成为1000ml。将上述溶液用0.2μm的膜滤器过滤后,填充入聚氯乙烯树脂(PVC)制的袋子中,在121℃下进行20分钟高压蒸汽灭菌。应予说明,本品的配制中,使用预先除去微生物和热源的原料。另外,本品也可以使用其他的缓冲剂(碳酸氢钠等)替代上述乳酸钠。
本品是增强腹腔内脏器和腹腔壁的胶原产生、强化腹腔内组织和脏器的腹膜透析液。另外,本品的保存稳定性很好,生物适应性优良,可以用作血液透析用的透析液、伤口或脏器的洗涤液、腹腔内或胸腔内的灌流液、组织或脏器的保存液等。
产业实用性
如上所述,含有α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物的胶原产生增强剂在用于包括人在内的动物时,对于由L-抗坏血酸类引起的胶原产生显示出显著有效的增强作用,本发明正是完全基于上述的独自的认知而完成的。另外,该胶原产生增强剂不用担心严重的副作用,用于包括人在内的动物类时,能够简便且快速地防止皮肤老化、维持和增进美容和健康。另外,具有以上特点的本发明的胶原产生增强剂,也可以通过与其他成分配合,有利地作为食品、饮料、特殊用途食品、保健功能食品、化妆品、准药品、药品、饲料、饵料、宠物食品、日用品等的各种组合物来利用。本发明是发挥出如此显著作用效果的发明,在本领域具有很大的贡献,是具有真正意义的发明。
Claims (8)
1.胶原产生增强剂,其中含有作为有效成分的α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物。
2.权利要求1所述的胶原产生增强剂,其中还含有L-抗坏血酸类。
3.权利要求1或2所述的胶原产生增强剂,其中还含有葡糖胺和/或粘多糖类。
4.权利要求3所述的胶原产生增强剂,其中还含有腺苷或其衍生物、它们的单磷酸酯、二磷酸酯或者三磷酸酯等碱类的1种以上或者2种以上和/或辅酶Q10。
5.权利要求2~4任一项所述的胶原产生增强剂,其特征在于,L-抗坏血酸类为L-抗坏血酸2-葡糖苷。
6.权利要求1~5任一项所述的胶原产生增强剂,其特征在于,含有按无水物换算合计为1质量%以上的α,α-海藻糖和/或α,α-海藻糖的糖质衍生物。
7.对胶原产生显示增强作用的用于增强胶原产生的组合物,其中含有权利要求1~6任一项所述的胶原产生增强剂。
8.权利要求1~6任一项所述的胶原产生增强剂,用作皮肤松弛、皱纹或细纹的发生抑制剂和/或改善剂。
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