CN101213308B - 胶原蛋白人造产品、胶原蛋白溶液制备方法及从动物组织中分离胶原蛋白的方法 - Google Patents
胶原蛋白人造产品、胶原蛋白溶液制备方法及从动物组织中分离胶原蛋白的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101213308B CN101213308B CN2006800064045A CN200680006404A CN101213308B CN 101213308 B CN101213308 B CN 101213308B CN 2006800064045 A CN2006800064045 A CN 2006800064045A CN 200680006404 A CN200680006404 A CN 200680006404A CN 101213308 B CN101213308 B CN 101213308B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- collagen
- solution
- supernatant
- centrifugal
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 206
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 206
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 113
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 95
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 64
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 44
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 14
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims abstract description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 64
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 56
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 50
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 25
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 24
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 24
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 21
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 20
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 19
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 18
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 17
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 17
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 17
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 16
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 238000004448 titration Methods 0.000 claims description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 7
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 238000007669 thermal treatment Methods 0.000 claims description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 4
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 1
- 238000010129 solution processing Methods 0.000 claims 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 abstract 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 8
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 6
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 241001232809 Chorista Species 0.000 description 3
- 108090000270 Ficain Proteins 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- POTUGHMKJGOKRI-UHFFFAOYSA-N ficin Chemical compound FI=CI=N POTUGHMKJGOKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019836 ficin Nutrition 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 210000002356 skeleton Anatomy 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- -1 oxyproline Chemical compound 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000000515 tooth Anatomy 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了不同动物组织中分离胶原蛋白的方法,制备胶原蛋白溶液的方法及胶原蛋白的人造产品。为了这个目的,本发明提供了一种从动物组织制备胶原蛋白溶液的方法,包括胶原蛋白的最终处理:在中性、低温条件下处理就有预定浓度的胶原蛋白溶液,然后在30至35℃过夜处理;离心收集胶原蛋白;将收集到的胶原蛋白溶解于弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液(PBS),从而制备浓度为1至5mg/mL的胶原蛋白溶液。本发明由上述组成,可以实现从动物骨和软骨组织、皮肤组织和腱/韧带组织有效分离胶原蛋白的方法,从上述分离组织制备胶原蛋白溶液的方法,利用上述胶原蛋白制备基质和高度浓缩胶原蛋白溶液。
Description
技术领域
本发明涉及从不同动物组织中分离胶原蛋白的方法,制备胶原蛋白溶液的方法及胶原蛋白的人造产品。本发明尤其涉及一种从动物骨骼、软骨组织、皮肤组织及腱/韧带组织有效分离胶原蛋白的方法,一种利用上述分离组织制备胶原蛋白溶液、胶原蛋白基质及高度浓缩胶原蛋白溶液的方法。
背景技术
通常,胶原蛋白是一种构成动物骨骼、软骨、牙齿、腱、皮肤及鱼鳞的硬质蛋白。胶原蛋白是一种纤维样的固体,在电子显微镜下观察,呈现为缠结的具有交叉条纹的周期结构。
胶原蛋白是一种结构蛋白,常常存在于各种哺乳动物中,其构成了机体所有蛋白总重量的30%。目前,已知的胶原蛋白有20种,其中I型胶原蛋白是最大量的。胶原蛋白是由分子量大约为300kDa的单体蛋白通过特定位点的共价键横向连接而成的。因此,成熟的胶原蛋白呈现为一种典型的纤维样形状,不溶于水,具有高拉伸强度。胶原蛋白由组成型氨基酸构成,例如,甘氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、丙氨酸及谷氨酸,其显著特征是羟基脯氨酸含量高,这在其它形式的蛋白中是不常见的。
其中,胶原蛋白具有一种结构,三个多肽链通过氢键围绕另一个多肽链呈螺旋状扭转。胶原蛋白在水、弱酸和弱碱中不降解,但是胶原蛋白煮沸后导致其变成单链结构的明胶,是可溶的。与明胶不同,胶原蛋白不需加热即有一定的粘度,因此其易于凝胶化。另外,由于胶原蛋白的分子量比明胶大,胶原蛋白更适合生物组织并且具有高生物活性。因此,当用胶原蛋白处理伤口时,与明胶促进组织再生相比,胶原蛋白更易促进愈合过程。另外,即使胶原蛋白变硬,其还是具有高柔韧性,并且在短时间内快速横向连接,这致使减少凝胶化时间。胶原蛋白对蛋白水解酶不敏感,例如胰蛋白酶、胃蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶和弹性蛋白酶,但是其易被胶原酶降解。从组织中分离胶原蛋白包括有机溶剂萃取,酸/碱处理,蛋白水解酶作用,例如胰蛋白酶、胃蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶和弹性蛋白酶,得到胶原蛋白。
另外,为了体内应用,如上获得的胶原蛋白溶解于生物无毒溶剂,例如水、生理盐水、硼酸盐缓冲液,或者含盐水溶液,例如氯化钠、蛋白质、糖和脂肪。
目前,许多提高胶原蛋白分离效率的方法正在研究中。为了保证足够的医疗用途用胶原蛋白,需要大量的原材料,也需要胶原蛋白分离方法的重大改进。
尤其,胶原蛋白不仅在提高血小板浓度和聚集血小板方面有一定作用,而且可以通过改变血小板的形状和生物化学结构来激活血小板,因此胶原蛋白可以广泛地被应用于止血剂。
自从十九世纪五十年代以来,已有大量分离胶原蛋白的方法,但是分离非变性形式的纯胶原蛋白是十分困难的。因此,为了在不同领域应用胶原蛋白,发展从不同组织中分离胶原蛋白并获得大量胶原蛋白的方法是必要的。
然而,现在已知的分离胶原蛋白的方法是从哺乳动物(鼠、牛、猪及类似物)的皮肤或腱中分离胶原蛋白。不幸的是还没有能从骨组织中分离胶原的方法。
发明内容
本发明鉴于上述问题,第一个目的是提供一种从动物不同组织中分离及利用胶原蛋白的方法。
为了这个目的,本发明的第二个目的是提供一种从动物骨及软骨组织、皮肤组织和腱/肌肉组织中有效分离胶原蛋白的方法。
本发明的第三个目的是提供一种从上述分离组织中制备胶原蛋白溶液的方法。
本发明的第四个目的在于提供一种利用上述胶原蛋白溶液制备胶原蛋白基质和高度浓缩胶原蛋白溶液的方法。
本发明的第五个目的在于提供一种从各种动物组织中分离胶原蛋白的方法,一种制备胶原蛋白溶液及人造产品的方法,通过显著地提高产品质量和可靠性来提高消费者的满意度。
上述其它目的与本发明的一个方面一致,通过提供用动物不同组织制备胶原蛋白溶液的方法来实现,包括在最终处理胶原蛋白后将具有预定浓度的胶原蛋白溶液置于低温中性条件,然后30-35℃过夜处理;离心收集胶原蛋白;将上述收集的胶原蛋白溶解于冷弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液(PBS),胶原蛋白的浓度为1至5mg/mL。
为达到上述目的,本发明的首选方式将配合附图作详细描述。
本发明应用的一种从动物不同组织分离胶原蛋白的方法,一种制备胶原蛋白溶液及人工制品的方法,参见图1至图4。
与本发明以下的描述相关,考虑到与本发明相关的已知功能或结构的描述可能会使本发明不清楚,其中的详细描述会被省略掉。
下文提到的术语是考虑到本发明的功能而确定的,可能与厂商的意图或者相关领域的普通实践不同。因此,这里用到的术语是根据本发明的说明书内容定义的。
本发明提供可一种改进的从不同组织中有效分离胶原蛋白的方法,尤其是从骨组织中分离胶原蛋白的方法,及分离的胶原蛋白的应用方法。
这里使用的术语“分离的胶原蛋白”是指胶原蛋白经处理后去除了强抗原性肽,用酸或酶从不同动物中提取来的,例如胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶。
本发明所述的胶原蛋白在4-10℃,酸性条件下可溶,但是在30-37℃,中性条件下不可溶解。另外,当预定浓度的胶原蛋白在30-37℃时,将PH值由酸性调至中性,本发明所述的胶原蛋白呈凝胶形式。给胶原蛋白一个刺激导致其由凝胶形式转变为不可溶的纤维样形式。
在本方法适合的温度和PH条件下,在4℃,中性条件下滴定胶原蛋白,在预定的时间段内,甚至是中性条件下,可以保持特定的溶液状态。
另外,利用胶原蛋白在不同PH值、温度、盐浓度和乙醇沉淀条件下的优点分离胶原蛋白。
进一步,本发明利用胶原蛋白置于30-37℃,中性条件下一段时间可发生分层分离的特点聚集胶原蛋白,离心使胶原蛋白沉淀。
如下文讨论,胶原蛋白可以提高血小板浓度,引起血小板凝集,通过改变血小板形状和生物化学结构来激活血小板。因此胶原蛋白可以被广泛应用于止血剂。
胶原蛋白的粘度与PH相关,在pH5.0至6.0粘度最高。
为此,本发明所述的胶原蛋白经过最终处理,胶原蛋白溶液具有一个预定的浓度,先在低温、中性条件下处理,然后30-35℃振荡过夜处理。过夜处理后,离心收集胶原蛋白,浓缩的胶原蛋白溶解在弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液(PBS),冷藏,制备胶原蛋白浓度为1-5mg/mL的胶原蛋白溶液。
本发明所述的胶原蛋白可被应用于制备基质和高度浓缩溶液。
如图3所示,基质的制备是将过滤纯空气注入到适合浓度和PH值的胶原蛋白中,形成预定气孔,冻干,干热干燥。
胶原蛋白基质是由浓度为3-5mg/mL的胶原蛋白溶液制备的。特别地,过滤纯空气被注入至PH为5.0-6.0的胶原蛋白溶液中,因此形成预定的气孔。然后将形成气孔的胶原蛋白溶液冻干处理,热处理包装,环氧乙烷气体或γ-射线照射灭菌,形成胶原蛋白基质。基质根据模子的形状可以被制成各种形式。上述制备的基质可以用作止血剂,支持物及类似物,不同形式的胶原蛋白止血剂及支持物通常可以在市场上购买到。进一步,胶原蛋白基质还可以包括其它成分,例如纤维蛋白原、凝血酶,用来提高胶原蛋白作为止血剂的作用。所述胶原蛋白基质还可以用在附着有止血剂的绑带上。
为了利用高度浓缩胶原蛋白,参见图4,本发明通过用孔径为的0.22μm的滤器过滤灭菌浓度为1mg/mL的胶原蛋白溶液,然后浓缩灭菌胶原蛋白至胶原蛋白浓度为3-7%,制备胶原蛋白溶液。高度浓缩胶原蛋白溶液可以作为皮肤去皱填充物,作为相关产品还可以购买到。另外,在伤口和被损坏区域喷洒含有抗生物质或者生长因子的高度浓缩胶原蛋白溶液,可以促进创伤和损坏区域组织再生。
附图说明
图1是本发明制备的胶原蛋白SDS-PAGE电泳分离结果照片;
图2是利用图象分析仪分析本发明制备的胶原蛋白结果曲线图及照片;
图3是利用本发明的胶原蛋白制造的基质产品照片;
图4是利用本发明胶原蛋白制造的高度浓缩胶原蛋白溶液照片。
具体实施方式
现在,参考如下实施例,对本发明做进一步详细描述。这些实施例仅用于解释本发明,不限制本发明的范围和精神。
实施例1
将猪骨组织粉碎成粒径为1-500μm的粉末,用0.5N HCl处理。经酸处理的骨组织用胃蛋白酶重复处理2至5次,共计3至7天,分离I型胶原蛋白,I型胶原蛋白用盐处理进行分级分离和乙醇处理,从而获得重量为原始组织重量5-10%的胶原蛋白。特别地,本程序如下做进一步详细描述:
1.分离的猪骨组织经蒸馏水、乙醇、丙酮及类似物充分洗涤。
2.骨组织切成圆环形状,-20℃保存。
3.为了从骨组织中分离胶原蛋白,骨组织制成粒径为1-500μm的粉末。
4.研磨成粉末的骨组织用乙醇和蒸馏水洗涤。
5.上述洗涤过的骨粉末用0.5N HCl过夜处理,10-100rpm振荡。
6.过夜处理后,骨粉末用胃蛋白酶处理,组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中。
7.胃蛋白酶处理2-5次,共计3-7天。
8.胃蛋白酶处理过的骨粉末溶液4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤7。
9.用终浓度为0.5至0.8M的NaCl处理上述分离并保存的上清,4℃,4小时至1天。
10.12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清。
11.上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为1.6M。
12.上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清。
13.向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为2.6M,4℃静置4小时至1天。
14.离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬。
15.在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL1N HCl,4℃中性条件下滴加。
16.上述滴定溶液30-37℃静置4小时至1天,离心。
17.沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
实施例2
将猪软骨组织粉碎为粉末,用0.5N HCl处理。经酸处理的软骨组织用胃蛋白酶重复处理,分离II型胶原蛋白,II型胶原蛋白用盐处理进行分级分离和乙醇处理,从而获得重量为原始组织重量5%-10%的胶原蛋白。特别地,本程序如下做进一步详细描述:
1.分离的猪软骨组织经蒸馏水、乙醇、丙酮及类似物充分洗涤。
2.为了从软骨组织中分离胶原蛋白,软骨组织制成粒径为1-500μm的粉末。
3.研磨成粉末的软骨组织用乙醇和蒸馏水洗涤。
4.上述洗涤过的软骨粉末用盐酸胍溶液(4M盐酸胍,0.05MTris-HCl,pH 7.5)过夜处理。
5.过夜处理的软骨粉末用0.1N HCl洗涤一至两次。
6.软骨粉末用0.5N HCl过夜处理,10至100rpm振荡。
7.过夜处理后,软骨粉末用胃蛋白酶处理,组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中。
8.胃蛋白酶处理2-5次,共计3-7天。
9.胃蛋白酶处理过的软骨粉末溶液4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤8。
10.用终浓度为0.5-0.8M的NaCl处理上述分离并保存的上清,4℃,4小时至1天。
11.12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清。
12.上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为2.6M。
13.上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清。
14.向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为3.5-4.0M,4℃静置4小时至1天。
15.离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬。
16.在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL1N HCl,4℃中性条件下滴加。
17.上述滴定溶液30-37℃静置4小时至1天,离心。
18.沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
实施例3
将猪皮肤组织制成厚度为500μm-5mm的片,置于网格尺寸为200-500μm的网中,用0.5N HCl处理。经酸处理的软骨组织用胃蛋白酶重复处理,分离I型胶原蛋白,I型胶原蛋白用盐处理进行分级分离和乙醇处理,从而获得重量为原始组织重量10%-15%的胶原蛋白。特别地,本程序如下做进一步详细描述:
1.分离的猪皮肤组织经蒸馏水、乙醇及类似物充分洗涤,-20℃保藏。
2.为了从皮肤组织中分离胶原蛋白,皮肤组织制成厚度为500μm-5mm的片状。
3.片状组织至于网格尺寸为200-500μm的网中,用乙醇和蒸馏水洗涤。
4.洗涤过的组织片用胃蛋白酶(组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中)处理。
5.胃蛋白酶重复处理2-3次,共计2-3天。
6.胃蛋白酶处理过的皮肤组织溶液,4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤5。
7.用终浓度为0.5至0.8M的NaCl处理分离并保存的上清,4℃,4小时至1天。
8.12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清。
9.上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为1.6M。
10.上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清。
11.向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为2.6M,4℃静置4小时至1天。
12.离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬。
13.在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL1N HCl,4℃中性条件下滴加。
14.上述滴定溶液30-37℃静置4小时至1天,离心。
15.沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
实施例4
将猪腱/韧带组织制成厚度为500μm-5mm的片,用胃蛋白酶处理,分离I型胶原蛋白,I型胶原蛋白用盐处理进行分级分离和乙醇处理,从而获得重量为原始组织重量10%-20%的胶原蛋白。特别地,本程序如下做进一步详细描述:
1.分离的猪腱/韧带组织经蒸馏水、乙醇及类似物充分洗涤,-20℃保藏。
2.为了从腱/韧带组织中分离胶原蛋白,腱/韧带组织制成厚度为500μm-5mm的片状。
3.用乙醇和蒸馏水洗涤组织片。
4.洗涤过的组织片用胃蛋白酶处理,组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中。
5.胃蛋白酶重复处理2-3次,共计2-3天。
6.胃蛋白酶处理过的腱/韧带组织溶液,4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤5。
7.用终浓度为0.5-0.8M的NaCl处理上述分离并保存的上清,4℃,4小时至1天。
8.12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清。
9.上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为1.6M。
10.上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清。
11.向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为2.6M,4℃静置4小时至1天。
12.离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬。
13.在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL1N HCl,4℃中性条件下滴加。
14.上述滴定溶液30-37℃静置4小时至1天,离心。
15.沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
实施例1-4提到的效果通过SDS-PAGE分析结果可以得到证实,参见图1所示,相关条带分子量分别是大约140kDa和130kDa。
另外,图2所示的胶原蛋白图象分析结果证实了I型胶原蛋白的特性,例如α1∶α2是2∶1,此为实验结果的评估。图3展示了利用本发明所得的胶原蛋白制备的人造基质产品。图4展示了利用本发明的胶原蛋白制备的人造高度浓缩胶原蛋白溶液。
从以上描述可见本发明可以从动物不同组织中分离并利用胶原蛋白。为了这个目的,本发明提供了一种从动物骨、软骨组织、皮肤和腱/韧带组织有效分离胶原蛋白的方法,一种利用上述分离组织制备胶原蛋白溶液的方法,一种利用胶原蛋白溶液制备基质和高度浓缩溶液的方法。因此,本发明实现了产品的高质量和可靠性,有助于提高消费者的满意度。
尽管本发明的较佳实施例揭示了目的,然而对本技术的修改、增加和代替是允许的,并没有避开本发明的权利范围和精神。
Claims (12)
1.一种从动物组织中分离胶原蛋白的方法,从而获得重量为原始组织重量5-10%的胶原蛋白,包括:
1)分离的猪骨组织经蒸馏水、乙醇和丙酮充分洗涤;
2)骨组织切成圆环形状,-20℃保存;
3)为了从骨组织中分离胶原蛋白,骨组织制成粒径1-500μm的粉末;
4)用乙醇和蒸馏水洗涤骨组织粉末;
5)洗涤过的骨粉末用0.5N HCl过夜处理,10-100rpm振荡;
6)骨粉末用胃蛋白酶处理,组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中;
7)胃蛋白酶反复处理2至5次,共计3至7天;
8)蛋白酶处理过的骨粉末溶液,4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤7);
9)用终浓度为0.5至0.8M的NaCl溶液处理上述分离并保存的上清,4℃,4小时至1天;
10)12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清;
11)上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为1.6M;
12)上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清;
13)向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为2.6M,4℃静置4小时至1天;
14)离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬;
15)在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL 1N HCl,4℃中性条件下滴定;
16)上述滴定溶液30-37℃静置4小时至1天,离心;
17)沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
2.如权利要求1所述的从动物组织制备胶原蛋白溶液的方法,对胶原蛋白做最后处理,其特征在于,在上述步骤17)之后,包括
18)中性、低温条件下,将胶原蛋白溶液处理成预定浓度,接下来30-35℃过夜处理;
离心收集胶原蛋白;
将收集到的胶原蛋白溶解于冷弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液,制备胶原蛋白浓度为1-5mg/mL的溶液。
3.如权利要求1或2所述的制备胶原蛋白基质的方法,其特征在于,在上述步骤17)或18)之后包括:
向适合浓度和pH值的胶原蛋白溶液中注入经过滤的纯空气,形成预定的气孔;
冻干形成气孔的溶液制成基质;
所述基质是由浓度为3-5mg/mL的胶原蛋白溶液制成的,将过滤的纯空气注入到pH值为5.0-6.0的胶原蛋白溶液中,形成预定的气孔,冻干已形成气孔的胶原蛋白溶液,包装,冻干产品热处理,然后环氧乙烷气体或者γ射线照射灭菌,由此制备胶原蛋白基质。
4.一种从动物组织中分离胶原蛋白的方法,从而获得重量为原始组织重量5-10%的胶原蛋白,包括:
1)分离的猪骨组织经蒸馏水、乙醇和丙酮充分洗涤;
2)为了从软骨组织中分离胶原蛋白,软骨组织制成粒径为1-500μm的粉末;
3)软骨组织粉末用乙醇和蒸馏水洗涤;
4)上述洗涤过的软骨组织用盐酸胍溶液过夜处理,盐酸胍溶液为4M盐酸胍,0.05M Tris-HCl,pH7.5;
5)过夜处理的软骨粉末用0.1N HCl洗涤一至两次;
6)洗过的软骨粉末用0.5N HCl过夜处理,10至100rpm振荡;
7)软骨粉末用胃蛋白酶处理,组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中;
8)胃蛋白酶反复处理2至5次,共计3至7天;
9)胃蛋白酶处理过的软骨粉末溶液,4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤8);
10)用终浓度为0.5-0.8M的NaCl溶液处理上述分离并保存的上清,4℃,4小时至1天;
11)12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清;
12)上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为2.6M;
13)上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清;
14)向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为3.5-4.0M,4℃静置4小时至1天;
15)离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬;
16)在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL 1N HCl,4℃中性条件下滴定;
17)上述滴定溶液30-37℃静置4小时至1天,离心;
18)沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
5.如权利要求4所述的从动物组织制备胶原蛋白溶液的方法,对胶原蛋白做最后处理,其特征在于,在上述步骤18)之后,包括:
19)中性、低温条件下,将胶原蛋白溶液处理成预定浓度,接下来30-35℃过夜处理;
离心收集胶原蛋白;
将收集到的胶原蛋白溶解于冷弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液,制备胶原蛋白浓度为1-5mg/mL的溶液。
6.如权利要求4或5所述的制备胶原蛋白基质的方法,其特征在于,在上述步骤18)或19)之后,包括:
向适合浓度和pH值的胶原蛋白溶液中注入经过滤的纯空气,形成预定的气孔;
冻干形成气孔的溶液制成基质;
所述基质是由浓度为3-5mg/mL的胶原蛋白溶液制成的,将过滤的纯空气注入到pH值为5.0-6.0的胶原蛋白溶液中,形成预定的气孔,冻干已形成气孔的胶原蛋白溶液,包装,冻干产品热处理,然后环氧乙烷气体或者γ射线照射灭菌,由此制备胶原蛋白基质。
7.一种从动物组织中分离胶原蛋白的方法,从而获得重量为原始组织重量的10%-15%的胶原蛋白,包括:
1)分离的猪皮组织经蒸馏水和乙醇充分洗涤,-20℃保藏;
2)为了从皮肤组织中分离胶原蛋白,皮肤组织制成厚度为500μm-5mm的片状;
3)片状组织置于网格尺寸为200-500μm的网中,用乙醇和蒸馏水洗涤;
4)洗涤过的皮肤组织用胃蛋白酶处理,其中组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中;
5)胃蛋白酶重复处理2-3次,共计2-3天;
6)胃蛋白酶处理过的皮肤组织溶液4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤5);
7)用终浓度为0.5至0.8M的NaCl溶液处理上述分离并保存的上清,4℃,4小时至1天;
8)12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清;
9)上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为1.6M;
10)上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清;
11)向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为2.6M,4℃静置4小时至1天;
12)离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬;
13)在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL1N HCl,4℃中性条件下滴定;
14)上述滴定溶液30至37℃静置4小时至1天,离心;
15)沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
8.如权利要求7所述的从动物组织制备胶原蛋白溶液的方法,对胶原蛋白做最后处理,其特征在于,在上述步骤15)之后,包括:
16)中性、低温条件下,将胶原蛋白溶液处理成预定浓度,接下来30-35℃过夜处理;
离心收集胶原蛋白;
将收集到的胶原蛋白溶解于冷弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液,制备胶原蛋白浓度为1-5mg/mL的溶液。
9.如权利要求7或8所述的制备胶原蛋白基质的方法,其特征在于,在上述步骤15)或16)之后,包括:
向适合浓度和pH值的胶原蛋白溶液中注入经过滤的纯空气,形成预定的气孔;
冻干形成气孔的溶液制成基质;
所述基质是由浓度为3-5mg/mL的胶原蛋白溶液制成的,将过滤的纯空气注入到pH值为5.0-6.0的胶原蛋白溶液中,形成预定的气孔,冻干已形成气孔的胶原蛋白溶液,包装,冻干产品热处理,然后环氧乙烷气体或者γ射线照射灭菌,由此制备胶原蛋白基质。
10.一种从动物组织中分离胶原蛋白的方法,从而获得重量为原始组织重量10%-20%的胶原蛋白,包括:
1)分离的猪腱/肌肉组织用蒸馏水和乙醇充分洗涤,-20℃保藏;
2)为了从腱/韧带组织中分离胶原蛋白,腱/韧带组织制成厚度为500μm-5mm的片状;
3)用乙醇和蒸馏水洗涤组织片;
4)洗涤过的腱/韧带组织用胃蛋白酶处理,组织和胃蛋白酶的比例是10-50∶1,胃蛋白酶用前溶在0.1N HCl中;
5)胃蛋白酶重复处理2-3次,共计2-3天;
6)胃蛋白酶处理过的腱/韧带组织溶液,4℃,12,000g离心30分钟,分离并保存上清,沉淀重复步骤5;
7)用终浓度为0.5-0.8M的NaCl溶液处理上述分离并保存的上清,4℃,4小时至1天;
8)12,000g,4℃离心30分钟,弃沉淀,收集上清;
9)上清在中性条件下滴定至NaCl终浓度为1.6M;
10)上述溶液4℃处理4小时至1天,离心,弃沉淀,收集上清;
11)向收集到的上清中加入NaCl,至NaCl终浓度为2.6M,4℃静置4小时至1天;
12)离心,弃上清,所得沉淀用95%乙醇洗涤一至两次,蒸馏水重悬;
13)在重悬溶液中加入1N HCl,每100mL悬浮液加1mL1N HCl,4℃中性条件下滴定;
14)上述滴定溶液30-37℃静置4小时至1天,离心;
15)沉淀下来的胶原蛋白用弱酸溶剂或PBS重悬,浓度为1-30mg/mL,4℃保藏。
11.如权利要求10所述的从动物组织制备胶原蛋白溶液的方法,对胶原蛋白做最后处理,其特征在于,在上述步骤15)之后,包括:
16)中性、低温条件下,将胶原蛋白溶液处理成预定浓度,接下来30-35℃过夜处理;
离心收集胶原蛋白;
将收集到的胶原蛋白溶解于冷弱酸溶剂或者磷酸缓冲盐溶液,制备胶原蛋白浓度为1-5mg/mL的溶液。
12.如权利要求10或11所述的制备胶原蛋白基质的方法,其特征在于,在上述步骤15)或16)之后,包括:
向适合浓度和pH值的胶原蛋白溶液中注入经过滤的纯空气,形成预定的气孔;
冻干形成气孔的溶液制成基质;
所述基质是由浓度为3-5mg/mL的胶原蛋白溶液制成的,将过滤的纯空气注入到pH值为5.0-6.0的胶原蛋白溶液中,形成预定的气孔,冻干已形成气孔的胶原蛋白溶液,包装,冻干产品热处理,然后环氧乙烷气体或者γ射线照射灭菌,由此制备胶原蛋白基质。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020050020367 | 2005-03-11 | ||
KR10-2005-0020367 | 2005-03-11 | ||
KR1020050020367A KR100676285B1 (ko) | 2005-03-11 | 2005-03-11 | 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 매트릭스 |
PCT/KR2006/000849 WO2006096027A1 (en) | 2005-03-11 | 2006-03-09 | Manufactured product using and collagen solution manufacturing method and collagen separation method of animal tissue |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101213308A CN101213308A (zh) | 2008-07-02 |
CN101213308B true CN101213308B (zh) | 2011-12-21 |
Family
ID=36953592
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2006800064045A Active CN101213308B (zh) | 2005-03-11 | 2006-03-09 | 胶原蛋白人造产品、胶原蛋白溶液制备方法及从动物组织中分离胶原蛋白的方法 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7781158B2 (zh) |
EP (1) | EP1856272B1 (zh) |
KR (1) | KR100676285B1 (zh) |
CN (1) | CN101213308B (zh) |
CY (1) | CY1114710T1 (zh) |
DK (1) | DK1856272T3 (zh) |
ES (1) | ES2439445T3 (zh) |
HR (1) | HRP20131129T1 (zh) |
PL (1) | PL1856272T3 (zh) |
PT (1) | PT1856272E (zh) |
RS (1) | RS53066B (zh) |
SI (1) | SI1856272T1 (zh) |
WO (1) | WO2006096027A1 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112501229A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-03-16 | 广州天启生物科技有限公司 | 一种牛骨胶原肽的生产工艺 |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9248165B2 (en) | 2008-11-05 | 2016-02-02 | Hancock-Jaffe Laboratories, Inc. | Composite containing collagen and elastin as a dermal expander and tissue filler |
KR101158338B1 (ko) * | 2010-05-14 | 2012-06-22 | (주)다림티센 | 아텔로콜라겐 분리방법 |
GB2482166A (en) * | 2010-07-22 | 2012-01-25 | Tissue Science Lablratories Ltd | Manufacture of collagenous material from use in therapy from collagen particles |
JP5753356B2 (ja) * | 2010-09-13 | 2015-07-22 | 株式会社龍泉堂 | 活性エピトープを有する非変性ii型コラーゲンの抽出方法 |
KR101105603B1 (ko) * | 2011-09-05 | 2012-01-19 | (주)유바이오시스 | 염침전 압축 농축법을 이용한 콜라겐 용액 제조방법 |
CN102350007B (zh) * | 2011-10-18 | 2015-03-04 | 崇州市地龙海龙生物制品开发研究所 | 一种人体可吸收医用整容制品制备方法 |
KR101188164B1 (ko) | 2011-11-18 | 2012-10-08 | (주)다림티센 | 숙시닐화 아텔로 콜라겐 제조방법 |
KR101188167B1 (ko) | 2011-11-18 | 2012-10-08 | (주)다림티센 | 에스테르화 아텔로 콜라겐 제조방법 |
KR101460245B1 (ko) | 2012-04-26 | 2014-11-10 | 한국과학기술원 | 비세포변성 간염바이러스의 정량화를 위한 발색 병소형성 검사방법 및 영상분석을 이용한 병소 개수 자동 산출방법 |
KR101697324B1 (ko) * | 2014-02-28 | 2017-01-19 | 전남대학교산학협력단 | 생체적합성 콜라겐 및 이의 제조방법 |
KR101663625B1 (ko) | 2014-05-21 | 2016-10-10 | 강호창 | 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그 제조방법 |
US10052400B2 (en) | 2014-05-30 | 2018-08-21 | Sofradim Production | Method for preparing neutralized matrix of non-antigenic collagenous material |
KR101531479B1 (ko) * | 2014-11-21 | 2015-06-26 | 세원셀론텍(주) | 의료용 재료로 사용하기 위한 고농도 콜라겐 제조방법 |
US10736990B2 (en) | 2015-02-11 | 2020-08-11 | Mimedx Group, Inc. | Collagen and micronized placental tissue compositions and methods of making and using the same |
KR101669478B1 (ko) * | 2015-11-23 | 2016-10-26 | 세원셀론텍(주) | 콜라겐의 수득율을 높이는 방법 |
WO2017165281A1 (en) * | 2016-03-22 | 2017-09-28 | Avicenna Nutraceutical, Llc | Hydrolyzed collagen compositions and methods of making thereof |
CN116966345A (zh) * | 2016-05-26 | 2023-10-31 | 汀布特Ip有限公司 | 3d可打印生物凝胶及其使用方法 |
KR101863532B1 (ko) * | 2017-06-15 | 2018-06-01 | 세원셀론텍(주) | 연골조직 수복용 콜라겐의 제조 및 사용방법 |
US20190100785A1 (en) * | 2017-10-03 | 2019-04-04 | Robert den Hoed | Method of producing undenatured collagen from cartilage with low temperature hydrolysis |
TWI770078B (zh) * | 2017-11-10 | 2022-07-11 | 惠合再生醫學生技股份有限公司 | 膠原蛋白處理方法 |
US10934342B1 (en) * | 2017-11-16 | 2021-03-02 | OrthoGraft Pvt. Ltd. | Method for manufacture of demineralized bone material |
TWI687437B (zh) * | 2018-06-29 | 2020-03-11 | 臺鹽實業股份有限公司 | 高純度未變性膠原蛋白及其製造方法 |
CN109369799A (zh) * | 2018-10-31 | 2019-02-22 | 白晋 | 一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法 |
CN109207545B (zh) * | 2018-12-03 | 2020-08-28 | 杭州蓝朗生物技术有限公司 | 一种胶原蛋白提取方法 |
CN109602896A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-04-12 | 无限极(中国)有限公司 | 一种胶原蛋白肽和弹性蛋白肽的组合物及其制备方法和应用 |
KR102098134B1 (ko) | 2019-02-13 | 2020-04-08 | 성균관대학교산학협력단 | 나노 섬유질 콜라겐 3차원 구조체 제조방법 |
CN110038158A (zh) * | 2019-05-27 | 2019-07-23 | 中国人民解放军第四军医大学 | 光固化3d打印哈弗氏系统人工骨支架的配方及其制备方法 |
CN111748030A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-10-09 | 华南理工大学 | 一种可溶性非变性ii型胶原蛋白及其制备方法 |
CN112410392A (zh) * | 2020-11-11 | 2021-02-26 | 武汉盛世伟度生物科技有限公司 | 一种i型胶原蛋白的提取方法及其应用 |
CN113201569B (zh) * | 2021-06-21 | 2022-08-30 | 江南大学 | 一种牛ⅰ型胶原蛋白的纯化方法 |
CN114794297B (zh) * | 2022-05-23 | 2023-06-06 | 甘肃农业大学 | 可食动物皮液态胶原蛋白及其制备的液态胶原蛋白果冻 |
CN115109144A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-09-27 | 成都汉丁新材料科技有限公司 | 一种生物活性胶原肽的制备方法和生物活性胶原肽 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5814328A (en) * | 1997-01-13 | 1998-09-29 | Gunasekaran; Subramanian | Preparation of collagen using papain and a reducing agent |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4294753A (en) * | 1980-08-04 | 1981-10-13 | The Regents Of The University Of California | Bone morphogenetic protein process |
US4434094A (en) * | 1983-04-12 | 1984-02-28 | Collagen Corporation | Partially purified osteogenic factor and process for preparing same from demineralized bone |
US4550080A (en) * | 1984-06-05 | 1985-10-29 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for the preparation of a plasminogen activator |
US4975526A (en) * | 1989-02-23 | 1990-12-04 | Creative Biomolecules, Inc. | Bone collagen matrix for zenogenic implants |
KR20020029859A (ko) * | 2000-10-14 | 2002-04-20 | 지귀환 | 제 1 형 아텔로교원질의 직접 분리추출 방법 |
KR100465015B1 (ko) * | 2002-03-04 | 2005-01-13 | 이재관 | 유기용매를 이용한 가용성 콜라겐의 제조방법 |
KR20040055931A (ko) * | 2002-12-23 | 2004-06-30 | (주)바이오 앤 바이오 | 콜라겐펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한식품·의약품·화장품 |
CN1802437A (zh) * | 2003-04-11 | 2006-07-12 | 寰宇生物研发公司 | 通过微生物发酵提取胶原蛋白的方法 |
-
2005
- 2005-03-11 KR KR1020050020367A patent/KR100676285B1/ko active IP Right Grant
-
2006
- 2006-03-09 CN CN2006800064045A patent/CN101213308B/zh active Active
- 2006-03-09 EP EP06716299.0A patent/EP1856272B1/en active Active
- 2006-03-09 WO PCT/KR2006/000849 patent/WO2006096027A1/en active Application Filing
- 2006-03-09 RS RS20130548A patent/RS53066B/en unknown
- 2006-03-09 PL PL06716299T patent/PL1856272T3/pl unknown
- 2006-03-09 SI SI200631709T patent/SI1856272T1/sl unknown
- 2006-03-09 PT PT67162990T patent/PT1856272E/pt unknown
- 2006-03-09 US US11/885,386 patent/US7781158B2/en active Active - Reinstated
- 2006-03-09 DK DK06716299.0T patent/DK1856272T3/da active
- 2006-03-09 ES ES06716299.0T patent/ES2439445T3/es active Active
-
2013
- 2013-11-26 HR HRP20131129TT patent/HRP20131129T1/hr unknown
- 2013-12-05 CY CY20131101102T patent/CY1114710T1/el unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5814328A (en) * | 1997-01-13 | 1998-09-29 | Gunasekaran; Subramanian | Preparation of collagen using papain and a reducing agent |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Boris BATGE et al..A critical crosslink region in human-bone-derived collagen type I Specific cleavage site at residue Leu95.《Eur. J. Biochem.》.1990,第 192 卷153-159. * |
Holger Notbohm et al..Comparative Study on the Thermostability of Collagen I of Skin and Bone: Influence of Posttranslational Hydroxylation of Prolyl and Lysyl Residues.《Journal of Protein Chemistry》.1992,第 11 卷(第 6 期),635-643. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112501229A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-03-16 | 广州天启生物科技有限公司 | 一种牛骨胶原肽的生产工艺 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK1856272T3 (da) | 2013-12-09 |
WO2006096027A1 (en) | 2006-09-14 |
CN101213308A (zh) | 2008-07-02 |
EP1856272A1 (en) | 2007-11-21 |
EP1856272B1 (en) | 2013-09-11 |
US7781158B2 (en) | 2010-08-24 |
CY1114710T1 (el) | 2016-10-05 |
SI1856272T1 (sl) | 2014-01-31 |
HRP20131129T1 (hr) | 2013-12-20 |
ES2439445T3 (es) | 2014-01-23 |
EP1856272A4 (en) | 2009-04-22 |
PT1856272E (pt) | 2013-12-17 |
RS53066B (en) | 2014-04-30 |
PL1856272T3 (pl) | 2014-02-28 |
KR100676285B1 (ko) | 2007-01-30 |
US20080118947A1 (en) | 2008-05-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101213308B (zh) | 胶原蛋白人造产品、胶原蛋白溶液制备方法及从动物组织中分离胶原蛋白的方法 | |
Maruyama | Connectin, an elastic filamentous protein of striated muscle | |
JP3101739B2 (ja) | 天然の骨組織から骨形成術のための材料を製造する方法及びこれによって得られた材料 | |
AU2006274362B2 (en) | Biological artificial blood vessel and preparation method thereof | |
WO2003097694A1 (en) | Collagen and method for producing same | |
US10537662B2 (en) | Method for preparing biological tissue | |
EP0297972A2 (fr) | Procédé de fabrication de structures organisées de collagène, notamment d'origine humaine, et structures organisées de collagène correspondantes | |
JP4490268B2 (ja) | システインプロテアーゼ処理コラーゲンの製造方法およびシステインプロテアーゼ処理コラーゲン | |
Laing et al. | Experimental assessment of a new, low-cost antivenom for treatment of carpet viper (Echis ocellatus) envenoming | |
Seghir et al. | Preparation methods keratin and nanoparticles keratin from wool: a review | |
KR101916759B1 (ko) | 고농도, 고순도의 동종 콜라겐 제조 방법 및 동종 콜라겐 지지체의 제조방법 | |
JP6047689B1 (ja) | 血液凝固剤溶液、血液凝固剤溶液の製造方法、および液体の血液塞栓性タンパク質固有組成物e2pの製造方法 | |
JPH0782299A (ja) | ペプチド組成物とその製造法 | |
JPS62502833A (ja) | ヒアルロン酸の製法 | |
JPS6253927A (ja) | 胎盤コラ−ゲンの新規製品、その抽出法およびその応用 | |
AU648800B2 (en) | Immune suppressive product | |
FR2854801A1 (fr) | Implant injectable de globine insoluble | |
TWI236501B (en) | Process for extracting soluble collagen from animal tissue and products containing soluble collagen prepared therefrom | |
US20160354519A1 (en) | Method for preparing biological tissue | |
CN1094759C (zh) | 骨基质明胶载体的去活方法 | |
CN115054740B (zh) | 一种低致敏性胶原蛋白肽人体腔道润滑剂及其制备方法 | |
JP4726359B2 (ja) | マイタケ由来のレクチン及びその精製方法 | |
CN113893389B (zh) | 重组胶原蛋白-脱钙骨基质微粒双相凝胶软组织填充剂及其制备方法 | |
CH656068A5 (en) | Process for the preparation of human transfer factor products | |
DE69937552T2 (de) | Knochenxenottransplantate |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP03 | Change of name, title or address | ||
CP03 | Change of name, title or address |
Address after: Gyeongnam, South Korea Patentee after: Shiyuan Construction Co.,Ltd. Address before: Special city, Seoul, Korea Patentee before: SEWON CELLONTECH CO.,LTD. |
|
TR01 | Transfer of patent right | ||
TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230310 Address after: Seoul, South Kerean Patentee after: Shilong Technology Co.,Ltd. Address before: Gyeongnam, South Korea Patentee before: Shiyuan Construction Co.,Ltd. |