CN101195598A

CN101195598A - 麦根酸类的高效制造方法

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Publication number: CN101195598A
Application number: CNA2007101655496A
Authority: CN
Inventors: 难波康祐; 村田佳子
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Holdings Ltd
Priority date: 2006-11-14
Filing date: 2007-11-02
Publication date: 2008-06-11
Also published as: EP2103599A1; CA2669629A1; KR20090078824A; TW200827335A; JP2008120741A; WO2008059782A1; RU2009122481A; US20100256395A1; AU2007320559A1; JP4117009B2

Abstract

本发明提供能廉价且大量地供给的麦根酸类的制造方法，更具体而言，为下述工序式表示的麦根酸类的制造方法，式中，R¹、R²表示氢原子或羟基，R³表示羟基或氨基，R⁴、R⁷表示氢原子或羧基的保护基，R⁵表示氨基的保护基，R⁶表示羧基的保护基，R⁸表示－OR⁹(R⁹表示羟基的保护基)或－NHR¹⁰(R¹⁰表示氨基的保护基)。

Description

麦根酸类的高效制造方法

技术领域

本发明涉及麦根酸类的高效且步骤少的制造方法。

背景技术

缺铁是当今世界上最普遍的人类营养问题，无论在发达国家还是在发展中国家，均有很多人存在缺铁问题。人也从农作物中获取必需的铁。但往往农作物不能从土壤吸收足够量的铁，缺乏叶绿素生物合成中起催化作用的铁，引起失绿、产量低、以及营养质量下降。遗憾的是，几乎所有农作物仅含有少量生物学上可利用的铁。而且，土壤中可利用的铁少会限制植物生长，导致产量下降。据说世界上约三分之一的土壤为潜在性铁缺乏地带。使植物对铁的吸收下降的原因不仅仅是因为铁少。例如，土壤中铁的生物学利用能力尤其受高pH(碱性)的影响。即，在碱性土壤中，铁离子以不溶于水的氢氧化铁[Fe(OH)₃]形式存在，因此，植物不能由根吸收充足的铁分。针对此问题，禾本科植物分泌被称为植物铁载体(phytosiderophore)的金属螯合剂麦根酸，使3价不溶态铁变为可溶的麦根酸铁络合物，由根吸收该铁络合物，从而可以获得铁(参照非专利文献1。)。麦根酸是1978年最先从缺铁大麦的根部分离并结构鉴定得到的与铁螯合的物质(参照非专利文献2。)。麦根酸是由氮杂环丁烷羧酸单元、天冬氨酸单元以及苹果酸单元经还原性结合而成的化合物，近年来已分离出从小麦分离的2’-脱氧麦根酸(参照非专利文献3。)等各种麦根酸类似物(参照非专利文献4。)，它们统称为麦根酸类。

今后，使用麦根酸类的研究或应用将进一步拓展，但这些麦根酸类难以大量获得。麦根酸类的制造例，如最早由Ohfune等在1981年报道的关于2’-脱氧麦根酸的制造(参照非专利文献5。)，同时期由Fushiya等报道了2’-脱氧麦根酸的其他制造方法(参照非专利文献6。)。之后，在1986年Hamada等报道了麦根酸的制造方法(参照非专利文献7。)。其后，Matsuura等报道了进一步简化改良后的麦根酸的制造方法(参照非专利文献8。)。而且，在2001年Miyakoshi等报道了2’-脱氧麦根酸及麦根酸类的前体烟草胺(3”位羟基被氨基取代后的物质)的高效制造方法(参照非专利文献9。)。由于该Miyakoshi等的高效制造方法的确立，由长谷川香料株式会社开始向市场出售烟草胺，使多数研究人员可容易地购得。最近，Singh等报道了2’-脱氧麦根酸的高效制造方法(参照非专利文献10。)。若采用该方法，对构成麦根酸的氮杂环丁烷羧酸单元、天冬氨酸单元以及苹果酸单元这三个单元中的氮杂环丁烷羧酸单元不进行保护，即可合成2’-脱氧麦根酸。此后，从2005年末开始由加拿大的TRC Inc.向市场出售2’-脱氧麦根酸。

非专利文献1：Marschner，H等，J.Plant Nutr.，1986年，第9卷，p.695-713

非专利文献2：Takemoto，T等，Proc.Japan Acad.，1978年，第54-B卷，p.469-473

非专利文献3：Nomoto，K等，Chimia，1981年，第7卷，p.249-250

非专利文献4：Ma，J.F.，Nomoto，K，Physiol.Plant.，1996年，第97卷，p.609-617

非专利文献5：Ohfune，Y.等，J.Am.Chem.Soc.，1981年，第103卷，p.2409-2410.

非专利文献6：Fushiya，S.等，Chem.Lett.，1981年，p.909-912

非专利文献7：Hamada，Y.，Shioiri，T.等，J.Org.Chem.，1986年，第51卷，p.5489-5490

非专利文献8：Matsuura，F.等，Tetrahedron，1993年，第49卷，p.8211-8222.

非专利文献9：Miyakoshi，K.等，Tetrahedron，2001年，第57卷，p.3355-3360.

非专利文献10：Singh，S.等，Tetrahedron Lett.，2005年，第46卷，p.1419-1421

发明内容

麦根酸类在植物铁吸收机制的阐明研究中被作为非常重要的工具使用。而且，麦根酸类由于其铁螯合能力，具有作为代替EDTA的安全金属螯合剂、作为对动植物缺铁症有效的手段在健康食品、化妆品或肥料等领域中应用的潜在可能性。因此，麦根酸类的制造方法的改善很重要。

迄今为止已报道的制造方法中，均对制造中间体进行分离精制，这些操作不仅需要大量劳动力和时间，还使收率下降。

例如上述非专利文献5～8所述的制造方法，由于需要较多的工序数、中间体的分离精制耗费大量劳动力等原因，为实现稳定的大量供给，需进一步改良。此外，上述非专利文献9所述的制造方法中，2’-脱氧麦根酸的收率低，仅为29％。通过同文献所述的方法，麦根酸类前体烟草胺易从市场上购得，但2’-脱氧麦根酸的价格依然较高，还不能以高收率获得，要想大量获得仍较困难。

若能够廉价地提供大量麦根酸类，则对上述研究领域的贡献、在健康食品、化妆品或肥料等领域中利用的可能性是不可估量的。但是，如上所述，迄今为止已报道的制造方法由于工序数多、中间体的分离精制需要大量劳动力、收率低等原因，难以廉价地大量供给。

本发明解决以往技术中存在的上述问题，以提供能够廉价地大量供给麦根酸类的麦根酸类制造方法为课题。即，为了在实用程度上制造麦根酸类，提出1)工序数的缩减化、2)制造中间体的分离精制操作的省略化、3)制造操作的简便化、4)廉价的反应试剂等必不可少的课题。本发明的目的在于提供能一次性解决上述必不可少的课题的麦根酸类制造方法。

麦根酸是由氮杂环丁烷羧酸单元、天冬氨酸单元以及苹果酸单元这三个单元形成的化合物，这些单元偶联反应时，它们所具有的多数的羧基、氨基或羟基的保护基需去除，这样的操作使工序数增加。为此，发明者通过最低程度抑制羧基、氨基或羟基的保护基的使用来减少工序数。即，发明者发现：通过构建以下方法能缩减工序数并使操作简便化，即在氮杂环丁烷羧酸单元和天冬氨酸单元的羧基上不引入保护基，或即使引入保护基也不分离精制而直接进入下一工序。本发明者进一步反复研究，完成了本发明。

即，本发明涉及

[1]麦根酸类的制造方法，其特征在于包括：使下述通式(2)表示的化合物的烯基氧化断裂，同时用氮杂环丁烷-2-羧酸进行还原性氨基化反应，得到下述通式(3)表示的化合物的工序1，

式中，R¹表示氢原子或羟基，R⁴表示氢原子或羧基的保护基，R⁵表示氨基的保护基，

式中，R¹、R⁴及R⁵表示与上述相同的意思；

将该通式(3)表示的化合物的羧基用保护基保护，同时除去氨基的保护基，制得下述通式(4)表示的化合物或其盐的工序2，

式中，R¹及R⁴表示与上述相同的意思，R⁶表示羧基的保护基；

然后用该通式(4)表示的化合物与下述通式(5)表示的醛进行还原性氨基化反应，制得下述通式(6)表示的化合物的工序3，

式中，R²表示氢原子或羟基，R⁷表示羧基的保护基，R⁸表示-OR⁹(R⁹表示羟基的保护基。)或-NHR¹⁰(R¹⁰表示氨基的保护基。)，

式中，R¹、R²、R⁴、R⁶、R⁷及R⁸表示与上述相同的意思；以及

除去该通式(6)表示的化合物的羧基的保护基及羟基或氨基的保护基，制得下述通式(1)表示的麦根酸类的工序4，

式中，R¹和R²表示与上述相同的意思，R³表示羟基或氨基。

[2]下述通式(3-1)表示的化合物，

式中，R¹表示氢原子或羟基，Boc表示叔丁氧基羰基，以及

[3]下述通式(4-1)表示的化合物，

式中，R¹表示氢原子或羟基，Et表示乙基。

根据本发明的麦根酸类的制造方法，用廉价的反应试剂即可制造麦根酸类。而且，根据本发明的麦根酸类的制造方法，只要从初始物质开始依次添加反应试剂，即可得到最终目的产物的官能团被保护基保护的保护体。结果，在整个工序中，精制只是简单的一次操作。因此，根据本发明，能在短时间内容易地制造麦根酸类。此外，作为本发明的制造方法的一大特征，尽管所有反应几乎在一个体系(one-pot)中进行，但能够以非常高的收率得到目的产物麦根酸类。本发明的麦根酸类的制造方法使整个工序的速度提高、制造操作简便化，这是实现大量廉价供给麦根酸类的显著优点。本发明麦根酸类制造方法的整个制造工序的实际估算，与现在市售的相比，会非常便宜。

附图说明

图1是表示麦根酸2’羟基S体(天然型)、麦根酸2’羟基R体以及麦根酸2’脱氧体作为铁络合物转运蛋白底物时的活性与天然麦根酸的活性的比较结果。

具体实施方式

本发明涉及麦根酸、2’-脱氧麦根酸、3-羟基麦根酸、3-表羟基麦根酸等麦根酸类及作为其前体的烟草胺或2”-羟基烟草胺等的新型制造方法。

在本发明中，作为R⁴、R⁶或R⁷表示的“羧基的保护基”，例如可例示酯残基，所述酯残基可列举：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基、环己基等碳原子数1～6的直链状、分支状或环状的低级烷基；苄基、对硝基苄基、邻硝基苄基、间硝基苄基、2，4-二硝基苄基、对氯苄基、对溴苄基、对甲氧基苄基等芳烷基；乙酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、丙酰氧基甲基、正丁酰氧基甲基、异丁酰氧基甲基、三甲基乙酰氧基甲基等低级脂肪族酰氧基甲基等。羧基的保护基优选低级烷基，特别优选乙基或叔丁基。

在本发明中，作为R⁵或R¹⁰表示的“氨基的保护基”，可列举：甲氧基羰基、乙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、叔丁氧基羰基(以下简称Boc。)等烷氧基羰基；乙烯氧基羰基等链烯氧基羰基；苄氧羰基(以下简称Cbz。)、9-芴基甲氧基羰基等芳烷基氧基羰基；苄基、4-甲氧基苄基等可取代的芳烷基；甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等酰基；对甲苯磺酰基、苯磺酰基等芳基磺酰基；甲磺酰基等烷基磺酰基等。氨基的保护基特别优选Boc或Cbz。

在本发明中，作为R⁹表示的“羟基的保护基”，可列举例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基等的碳原子数1～6的直链状或分支状的低级烷基；三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基等三烷基甲硅烷基；四氢吡喃-2-基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基等缩醛型保护基；叔丁氧基羰基等烷氧基羰基；苄基等芳烷基等。羟基的保护基优选低级烷基，特别优选叔丁基。

本发明的麦根酸类的制造方法包括以下工序1至4。

(式中，各符号表示与上述相同的意思。)

下面，对各工序进行说明。

(1)工序1

在工序1中，作为原料的以通式(2)表示的化合物[以下简称化合物(2)。]，优选例如氨基被保护基保护的、如Boc-L-烯丙基甘氨酸或Cbz-L-烯丙基甘氨酸或它们的羧基被保护基保护的化合物等。上述Boc-L-烯丙基甘氨酸或Cbz-L-烯丙基甘氨酸等，可利用市售的L-烯丙基甘氨酸，按照PROTECTIVE GROUPS inORGANIC SYNTHESIS(T.W.Green；P.G.M.Wuts著)中记载的方法容易地制造。另外，它们也可以优选使用作为试剂等市售的物质。

在工序1中，化合物(2)的烯基氧化断裂，与此同时，与氮杂环丁烷-2-羧酸发生还原性氨基化反应。氧化断裂优选例如用臭氧、高锰酸盐、RuCl₃或OsO₄-NaIO₄等来进行，更优选利用臭氧进行的氧化断裂。利用臭氧进行的氧化断裂，优选例如向在溶剂中溶解化合物(2)而得到的溶液中吹入臭氧气体(鼓泡)来进行。溶剂可列举例如甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯等有机溶剂。利用臭氧进行的氧化断裂结束后臭氧在溶液中达到饱和时，溶液呈蓝色，因此臭氧气体的鼓泡优选进行至溶液颜色变蓝为止。臭氧气体的鼓泡优选在约-100～-50℃的低温下进行。臭氧气体可利用例如臭氧气体发生器等来产生。臭氧气体鼓泡后，为除去过剩的臭氧，优选向溶液中通入例如氧气或氮气、氩气等进行鼓泡，直至溶液的蓝色消失。

与氧化断裂同时进行的与氮杂环丁烷-2-羧酸的还原性氨基化反应，优选在还原剂的存在下进行。该还原剂可优选例如氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠等。还原性氨基化反应中的pH通常优选约4～7，更优选约6～7。而且，还原性氨基化反应通常在冷却下至加温程度下、优选室温下进行，优选约搅拌1～2小时。优选相对于1摩尔化合物(2)的氮杂环丁烷-2-羧酸的比例约1摩尔(以1∶1的摩尔比获得高收率是本合成的优点)。另外，相对于1摩尔化合物(2)的还原剂的比例优选约1～2摩尔，更优选约1.1～1.5摩尔。L-氮杂环丁烷-2-羧酸可优选使用作为试剂等市售的物质。

通过上述工序1，可得到通式(3)表示的化合物[以下简称化合物(3)。]。

化合物(3)可优选例如通式(3-1)或(3-2)(式中，R¹表示与上述相同的意思。)表示的化合物[以下分别简称化合物(3-1)、化合物(3-2)。]等。

(2)工序2

在工序2中，将化合物(3)的羧基用保护基保护，同时除去氨基的保护基，可制得通式(4)表示的化合物[以下简称化合物(4)。]或其盐。关于将羧基用保护基保护的反应，可列举例如与醇的脱水缩合反应等。作为该反应中所用的醇，可列举例如甲醇、乙醇、叔丁醇等。工序2中的氨基的保护基去除反应(以下简称去保护。)，可以根据其保护基的种类，适宜地选择酸法或碱法、或催化加氢法等来进行。去保护的反应温度，通常在冷却下至加温程度下进行，反应时间优选约30分～24小时，更优选约10～18小时(用酸除去Boc基时优选0℃至室温)。

例如，当氨基的保护基是Boc时，优选例如在三氟乙酸、盐酸-四氢呋喃溶液等强酸性条件下进行去保护。更具体而言，优选使化合物(3)例如与盐酸/乙醇溶液反应。上述反应可通过例如在冰冷却下搅拌约30分～5小时、然后在室温下搅拌约1～24小时来实施。盐酸/乙醇溶液(以下简称盐酸乙醇。)，例如可通过将乙酰氯添加到过量乙醇中来制备。乙酰氯与乙醇的比例，优选例如相对于1容量乙酰氯，乙醇约为20～50倍容量，更优选约为15～40倍容量。或者，也可以通过在乙醇中进行氯化氢气体鼓泡来制备。通过比较事先称量的乙醇和氯化氢气体鼓泡后的乙醇的重量，可以确定盐酸的溶解量。上述反应后，将反应混合物例如减压浓缩后，优选通过添加例如甲苯等进行共沸蒸馏以馏去溶剂，进一步优选在共沸蒸馏后，例如用真空泵等进行抽吸来使其干燥。由此，化合物(3)的羧基被保护基保护，同时氨基的保护基被除去，生成例如化合物(4)的盐酸盐[通式(4-1)]。

(式中，R¹表示与上述相同的意思)。

此外，例如氨基的保护基是苄氧羰基(以下简称Cbz。)时，优选通过例如以钯为催化剂的加氢反应或伯奇还原等进行去保护。

(3)工序3

在工序3中，用工序2得到的化合物(4)与通式(5)表示的醛[以下简称醛(5)]进行还原性氨基化反应。该还原性氨基化反应，可以在有机溶剂中，与上述化合物(2)的还原性氨基化反应同样，例如在还原剂的存在下进行。有机溶剂可列举甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺等。醛(5)可以用例如Nishimaru，T etal.Peptide Science 2006，42，263-266.中记载的方法或依照该记载的方法来容易地制造。通过还原性氨基化反应而得到的反应混合物中，含有通式(6)表示的化合物[以下简称化合物(6)。]。优选从该反应混合物中分离或精制化合物(6)。该分离或精制可以采用公知的方法，例如利用乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等有机溶剂进行的提取或例如以硅胶等为载体的色谱法等，可以单独或组合进行。

(4)工序4

在工序4中，化合物(6)的羧基的保护基以及羟基或氨基的保护基的除去(去保护)反应，可以根据其保护基的种类，适宜选择酸法或碱法或催化加氢法来进行。采用酸法时，根据保护基的种类及其他条件的不同而不同，作为酸，可列举例如盐酸、溴化氢、氟化氢、碘化氢、甲磺酸、对甲苯磺酸、三氟甲磺酸、硫酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸等有机酸，还可以列举酸性离子交换树脂等。采用碱法时，根据保护基的种类及其他条件的不同而不同，作为碱，可列举例如钠、钾等碱金属或钙、镁等碱土类金属的氢氧化物、碳酸盐等的无机碱；金属烷氧化物类、有机胺类、季铵盐等的有机碱，还可列举碱性离子交换树脂等。采用上述酸法或碱法的情况下使用溶剂时，可以单独或混合使用例如水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、四氢呋喃、二噁烷、吡啶、乙酸、丙酮或二氯甲烷等。另外，在金属和酸的方法中，多用水、丙酮等作溶剂，但当酸是液体时，酸自身也可作为溶剂使用。酸法或碱法中的反应温度，通常在冷却下至加温程度下进行，反应时间约30分～20小时，优选约5～10小时。化合物(6)中羧基的保护基及羟基或氨基的保护基的去保护，优选利用酸、例如盐酸、特别是约4～6N盐酸和1N氢氧化钠的方法。

去保护反应后，从反应混合物中分离或精制通式(1)表示的化合物。该分离或精制方法可以使用公知的方法，例如液相色谱法、重结晶等。液相色谱法可列举离子交换色谱法、分配色谱法、吸附色谱法、凝胶渗透色谱法等，它们可以单独或组合进行。

另外，工序1中作为原料的化合物(2)的R¹是羟基的化合物，可以由化合物(2)的R¹是氢原子的化合物，通过例如下述方法来制造。

(式中，RX表示卤代烷，R⁵表示与上述相同的意思。)

首先，将通式(2-1)表示的化合物[例如Boc-L-烯丙基甘氨酸或Cbz-L-烯丙基甘氨酸等；以下简称为化合物(2-1)]溶于溶剂中，在碱存在下，使其与卤代烷反应，将羧基用保护基保护。作为上述溶剂，可列举例如二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二噁烷等。作为碱，优选列举例如碳酸钾等。化合物(2-1)与碳酸钾等碱的比例，优选相对于1摩尔化合物(2-1)，碱约为2～5摩尔，更优选约3～4摩尔。卤代烷的烷基若使用选自上述例示的羧基的保护基，则无需进行去保护和再保护。作为具有这样的烷基的卤代烷，可列举例如碘甲烷、碘乙烷、碘代正丙烷、碘代异丙烷、碘代正丁烷、碘代异丁烷、碘代环己烷等碘代烷化合物等。化合物(2-1)与卤代烷的比例，优选相对于1摩尔化合物(2-1)，卤代烷约为1.1～1.5摩尔。关于反应温度，从冷却至加温下，优选室温。反应时间一般约为30分～约8小时，优选约1～3小时。反应结束后，优选向反应混合物中加入诸如水等，用非极性溶剂(例如醚、己烷等)提取羧基被保护基保护的化合物1～数次。收集提取后的非极性溶剂，用例如硫酸镁等干燥剂干燥后，通过过滤等除去干燥剂，将滤液浓缩，馏去提取溶剂，可以得到化合物(2-1)的羧基被保护基保护的化合物。提取溶剂的馏去可以采用公知的方法例如减压蒸馏等来实施。

接着，优选将得到的化合物溶于溶剂中，使其氧化。作为溶剂，可列举例如1，2-二氯乙烷、二氯甲烷、叔丁醇、二噁烷、甲苯或三氯乙烷等有机溶剂。氧化，例如可以在催化剂量的二氧化硒的存在下，用氧化剂、例如叔丁基过氧化物或过氧化氢水溶液等来进行。关于二氧化硒的催化剂量，例如相对于1摩尔化合物(2-1)，二氧化硒约为0.5～0.95摩尔。关于氧化剂的量，例如相对于1摩尔化合物(2-1)，氧化剂优选约为2～5摩尔，更优选约为2.5～4摩尔。氧化优选在加温下进行，温度优选约50～90℃，更优选约为60～70℃。氧化的反应时间约1～24小时，优选约5～10小时。反应后，按常法进行后处理即可。即，在反应液中加入碳酸氢钠、氢氧化钠水溶液等后，添加乙酸乙酯、醚、二氯甲烷、氯仿等有机溶剂，提取1～数次。收集提取液，用硫酸镁等干燥剂干燥。干燥后，过滤除去干燥剂，将滤液例如通过减压浓缩等进行浓缩，馏去溶剂，可得到产物(7)。所得产物(7)优选通过柱色谱法等进行精制。

按上述方法操作，能以高收率制得麦根酸、2’-脱氧麦根酸、3-羟基麦根酸、3-表羟基麦根酸等麦根酸类及其前体烟草胺或2”-羟基烟草胺等。

下面，结合实施例，更具体地说明本发明，但本发明不限于这些。

[实施例1]

由Boc-L-烯丙基甘氨酸制造化合物(3-3)

将Boc-L-烯丙基甘氨酸1g(4.7毫摩尔)溶于甲醇(15毫升)中，使臭氧气体在-78℃下鼓泡。鼓泡至溶液颜色变蓝后，氧气鼓泡，直至蓝色消失。回到室温后，加入L-氮杂环丁烷-2-羧酸475毫克(4.7毫摩尔)和氰基硼氢化钠296毫克(4.7毫摩尔)，搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩后，通过使用了硅胶的短程硅胶色谱法[用流动相∶乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1(v/v)的混合溶液除去残留的氰基硼氢化钠及少量来自L-烯丙基甘氨酸的副产物后，通入甲醇溶液]，得到1.3g化合物(3-3)(收率90％)。

[实施例2]

由化合物(3-3)制造化合物(6-1)

将化合物(3-3)300毫克(1毫摩尔)在0℃下溶于10％(v/v)盐酸乙醇(由乙酰氯和乙醇调制)15毫升中，在室温下搅拌一晚。将反应混合物减压浓缩后，通过甲苯共沸，使其干燥，用真空泵抽吸直至干固。将生成的盐酸盐溶于4毫升甲醇中，依次添加式(5-1)表示的醛[以下简称为醛(5-1)。]250毫克(1.1毫摩尔)、

氰基硼氢化钠70毫克(1.1毫摩尔)，约搅拌2小时。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取2次。收集提取液，用无水硫酸镁干燥，过滤后，通过减压浓缩，得到油状物质。将其通过短程硅胶色谱法精制[流动相∶己烷∶乙酸乙酯＝2∶1(v/v)到乙酸乙酯]，得到372毫克无色油状物质即化合物(6-1)(收率79％)。

[实施例3]

由化合物(6-1)制造2’-脱氧麦根酸

在化合物(6-1)300毫克(0.6毫摩尔)中加入6N盐酸10毫升，约搅拌15小时。将反应混合物减压浓缩后，加入1N氢氧化钠水溶液10毫升，搅拌15小时后，用1N盐酸中和反应混合物。将反应混合物减压浓缩，得到粗2’-脱氧麦根酸的盐酸盐。将其溶于约5毫升水中，用Dowex 50Wx8离子交换树脂处理，用氨水洗脱，得到2’-脱氧麦根酸的铵盐溶液。将该溶液减压干燥，得到粗2’-脱氧麦根酸180毫克。用水-甲醇-乙醇使其结晶后，得到2’-脱氧麦根酸。所得2’-脱氧麦根酸的比旋光度、¹H NMR、¹³C NMR、以及MS各谱图均与天然的一致(Nomoto，K.Chemia，(1981)，7，p249)。

[实施例4]

由Boc-L-烯丙基甘氨酸制造化合物(3-3)

将Boc-L-烯丙基甘氨酸1.6g(7.4毫摩尔)溶于甲醇(25毫升)中，使臭氧气体在-78℃下鼓泡。鼓泡至溶液颜色变蓝后，氧气鼓泡，直至蓝色消失。回到室温后，加入L-氮杂环丁烷-2-羧酸752毫克(7.4毫摩尔)和氰基硼氢化钠470毫克(7.4毫摩尔)，搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩后，通过使用了硅胶的短程硅胶色谱法[用流动相∶乙酸乙酯∶甲醇＝5∶1(v/v)的混合溶液除去残留的氰基硼氢化钠及少量来自L-烯丙基甘氨酸的副产物后，通入甲醇溶液]，得到2.1g化合物(3-3)(收率93％)。

[实施例5]

由Boc-L-烯丙基甘氨酸制造化合物(3-4)

将Boc-L-烯丙基甘氨酸670毫克(3.1毫摩尔)溶于10毫升二甲基甲酰胺中，依次加入碳酸钾1.3克(9.1毫摩尔)、碘乙烷0.32毫升(4.1毫摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌2小时后，加水，用醚提取2次。收集提取液后，用硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得到乙酯体的粗产物。将该粗产物溶于1，2-二氯乙烷20毫升中，加入二氧化硒320毫克(2.9毫摩尔)、5.5M叔丁基过氧化物2毫升(11.6毫摩尔)，在70℃下搅拌8小时。在反应混合物中加入碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯提取2次。收集提取液，用硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得到产物(7-1)。将得到的粗产物通过硅胶柱色谱法精制，得到400毫克油状产物即产物(7-1)(收率55％)。对所得产物(7-1)进行与实施例4同样的操作，得到化合物(3-4)(收率80％)。

[实施例6]

由化合物(3-3)制造化合物(6-1)

在化合物(3-3)1.7克(5.6毫摩尔)中，加入冷却至0℃的盐酸乙醇(由乙酰氯4毫升和乙醇160毫升调制)140毫升，0℃下搅拌2小时，室温下搅拌一晚。将反应混合物减压浓缩后，通过甲苯共沸，使其干燥，用真空泵抽吸直至干固。将生成的盐酸盐溶于甲醇30毫升中，依次加入醛(5-1)1.3克(5.6毫摩尔)、氰基硼氢化钠354毫克(5.6毫摩尔)，约搅拌5小时。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取3次。收集提取液，用无水硫酸镁干燥，过滤后，通过减压浓缩，得到油状物质。将其通过短程硅胶色谱法精制[流动相∶己烷∶乙酸乙酯＝2∶1(v/v)到乙酸乙酯]，得到1.8克无色油状物质即化合物(6-1)(收率68％)。

[实施例7]

由化合物(3-4)制造化合物(6-2)

在化合物(3-4)170毫克(0.49毫摩尔)中，加入冷却至0℃的盐酸乙醇(由乙酰氯0.2毫升和乙醇10毫升调制)10.2毫升，0℃下搅拌2小时，室温下搅拌一晚。将反应混合物减压浓缩后，通过甲苯共沸，使其干燥，用真空泵抽吸直至干固。将生成的盐酸盐溶于30毫升甲醇中，依次加入醛(5-1)113毫克(0.49毫摩尔)、氰基硼氢化钠31毫克(0.49毫摩尔)，约搅拌5小时。将反应混合物减压浓缩后，通过短程硅胶色谱法精制[流动相∶己烷∶乙酸乙酯＝2∶1(v/v)到乙酸乙酯]，得到193毫克无色油状物质即化合物(6-2)(收率81％)。

[实施例8]

由Boc-L-烯丙基甘氨酸一锅法制造化合物(6-1)

将Boc-L-烯丙基甘氨酸400毫克(1.9毫摩尔)溶于15毫升甲醇中，在-78℃下臭氧鼓泡。鼓泡至溶液颜色变蓝为止，通入氧气鼓泡，直至蓝色消失。加入L-氮杂环丁烷-2-羧酸188毫克(1.9毫摩尔)和氰基硼氢化钠117毫克(1.9毫摩尔)，回到室温，搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩后，加入冷却至0℃的盐酸乙醇40毫升(由乙酰氯1.6毫升和乙醇40毫升调制)，0℃下搅拌2小时、室温下搅拌一晚后，减压浓缩，甲苯共沸，用真空泵使其干固。将生成的盐酸盐溶于20毫升甲醇中，依次加入醛(5-1)428毫克(1.9毫摩尔)、氰基硼氢化钠120毫克(1.9毫摩尔)，约搅拌5小时。在反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯提取3次。收集提取液，用无水硫酸镁干燥，过滤后，通过减压浓缩，得到油状物质。将其通过短程硅胶色谱法精制[流动相∶己烷∶乙酸乙酯＝2∶1(v/v)到乙酸乙酯(添加0.1％三乙胺)]，得到480毫克无色油状物质即化合物(6-1)(收率55％)。

[实施例9]

由化合物(6-1)制造2’-脱氧麦根酸

向化合物(6-1)300毫克(0.6毫摩尔)中0℃下加入6N盐酸10毫升，室温下约搅拌10小时。将反应混合物减压浓缩后，加入1N氢氧化钠水溶液15毫升，搅拌10小时。用1N盐酸中和后，通过减压浓缩，得到粗2’-脱氧麦根酸的盐酸盐。将其溶于约5毫升水中，用Dowex 50Wx8离子交换树脂处理，用氨水洗脱，得到2’-脱氧麦根酸的铵盐溶液。将该溶液减压干燥，得到粗2’-脱氧麦根酸180毫克(收率100％)。用水-甲醇-乙醇使其结晶，得到2’-脱氧麦根酸120毫克(收率66％)。所得2’-脱氧麦根酸的比旋光度、¹H NMR、¹³C NMR、以及MS各谱图均与天然的一致(Nomoto，K.Chemia，(1981)，7，p249)。

[实施例10]

由化合物(6-2)制造麦根酸

向化合物(6-2)100毫克(0.31毫摩尔)中0℃下加入6N盐酸10毫升，室温下约搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩后，加入1N氢氧化钠水溶液10毫升，搅拌10小时。将反应混合物用1N盐酸中和后，通过减压浓缩，得到粗麦根酸的盐酸盐。将其溶于约5毫升水中，用Dowex 50Wx8离子交换树脂处理，用氨水洗脱，得到麦根酸的铵盐溶液。将该溶液减压干燥，得到粗麦根酸99毫克。将得到的粉末溶于3毫升水中，用DIANION HP20(用水洗脱)精制后，再一次冷冻干燥，得到麦根酸95毫克(收率96％)。由¹H NMR和MS谱可知：所得麦根酸是天然麦根酸和其2’羟基立体异构体的混合物。

[实施例11]

制造麦根酸的其他方法

按照实施例5，首先由Cbz-L-烯丙基甘氨酸叔丁酯1.4克(4.6毫摩尔)制得化合物(8)(收率55％)，然后由550毫克的化合物(8)制得580毫克的化合物(9)(收率86％)。接着，将化合物(9)450毫克(1.1毫摩尔)溶于甲醇10毫升中，加入10％钯炭80毫克，在氢气环境下，搅拌1小时。用甲醇稀释后，通过硅藻土过滤、减压浓缩，得到胺体。然后，将减压浓缩物溶于甲醇15毫升后，加入乙酸66微升，调pH至4～6。依次加入醛(5-1)254毫克(1.1毫摩尔)、氰基硼氢化钠70毫克(1.1毫摩尔)，约搅拌5小时。将反应混合物减压浓缩，通过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯/甲醇[4∶1(v/v)]溶液除去残留的氰基硼氢化钠和醛后，先用氯仿/甲醇[4∶1(v/v)]溶液、再用氯仿/甲醇[2∶1(v/v)]溶液将化合物10洗脱，馏去洗脱液，得到480毫克化合物(10)(收率89％)。

将得到的化合物(10)200毫克(0.41毫摩尔)溶于0℃的6N盐酸中，约搅拌2小时后，减压浓缩，得到粗麦根酸的盐酸盐。将其溶于约5毫升水中，用Dowex 50Wx8离子交换树脂处理，用氨水洗脱，得到麦根酸的铵盐溶液。将该溶液减压干燥，得到粗麦根酸。将得到的粉末溶于3毫升水中，用DIANIONHP20(用水洗脱)精制后，再度冷冻干燥，得到麦根酸125毫克(收率95％)。由¹H NMR及MS谱可知：所得麦根酸是天然麦根酸和其2’羟基立体异构体的混合物。

[实施例12]

麦根酸的光学拆分

将实施例11中得到的化合物(10)250毫克(0.51毫摩尔)溶于20％乙腈水溶液(含有0.1％乙酸)10ml中，用液相色谱法分离。液相色谱法的条件如下所述。

柱：CAPCELLPAK C18-UG80(5μm)(Shiseido)

洗提速度：9.999ml/分

洗提条件：35％CH₃CN-H₂O(1％乙酸)

洗脱时间：minor：14.0分钟；major：16.3分钟

进样量：各200μl

收集各组分，减压下馏去溶剂。将次峰和主峰的各干固物溶于6N HCl(20ml)中，室温下搅拌5小时。减压下馏去溶剂，将得到的盐酸盐装入离子交换柱(Dowex 50Wx8，100-200mesh，H⁺form)，用5％NH₄OH水溶液洗脱，冷冻干燥。将得到的粉末溶于水，用DIANION HP20(用水洗脱)精制后，再度冷冻干燥。由次峰得到的精制物的收率为20mg，由主峰得到的精制物的收率为81mg。次峰精制物及主峰精制物的各种物性的测定值如下所示。

<次峰>

[α]²⁴ _D-63.5°(c 0.31，H₂O)；¹H NMR(400MHz，D₂O，pH＝4.53 adjusted by theaddition of 1N DCl)δ2.03(1H，m)，2.19(1H，m)，2.57(1H，m)，2.72(1H，m)，3.21(1H，m)，3.29(1H，m)，3.43(1H，dd，J＝2.7，13.7Hz)，3.56(1H，dd，J＝9.5，13.7Hz)，3.85(1H，d，J＝2.9Hz)，4.03(1H，app.q，J＝9.7Hz)，4.10(1H，dt，J＝4.2，10.1Hz)，4.17(1H，dd，J＝4.6，7.3Hz)，4.44(1H，dt，J＝9.3，2.9Hz)，4.88(1H，t，J＝9.5Hz)ppm；¹³C NMR(100MHz，D₂O，pH＝4.53 adjusted by the addition of 1N DCl)δ24.6，32.9，47.9，53.9，59.0，67.4(2C)，70.6，73.2，171.8，175.8，182.3 ppm；IR(film，cm^-1)3215，3061，2855，1618，1412，1319，1236，1115，1092，976，773；HRMS m/z calcd forC₁₂H₂₁N₂O₈ ⁺[M+H]⁺：321.1298，found：321.1292.

<主峰>

[α]²⁴ _D-48.8°(c 0.57，H₂O)；¹H NMR(400MHz，D₂O，pH＝4.50 adjusted by theaddition of 1N DCl)δ2.02(1H，m)，2.16(1H，m)，2.57(1H，m)，2.70(1H，m)，3.16(1H，dt，J＝12.7，7.1Hz)，3.30(1H，dt，12.7，7.1Hz)，3.41(1H，dd，J＝9.8，13.2Hz)，3.57(1H，dd，J＝2.7，13.2Hz)，3.63(1H，d，J＝8.3Hz)，4.06(1H，app.q，J＝9.7Hz)，4.09(1H，m)，4.16(1H，dd，J＝4.4，7.6Hz)，4.22(1H，ddd，J＝2.7，8.3，9.8Hz)，4.89(1H，t，J＝9.5Hz)；¹³C NMR(100MHz，D₂O，pH＝4.50 adjusted by the addition of 1NDCl)δ24.5，32.7，48.1，54.4，60.0，67.4，67.5，69.9，73.2，172.4，175.7，182.1ppm；IR(film，cm^-1)3213，3051，2839，1610，1412，1329，1238，1107，934，773；HRMSm/z calcd for C₁₂H₂₁N₂O₈ ⁺[M+H]⁺：321.1298，found：321.1298.

次峰精制物和主峰精制物除比旋光度外几乎一致。次峰中含有目的产物即与天然麦根酸具有相同立体构型的麦根酸(2’位羟基的S体)，主峰中含有2’位羟基的R体。通过¹H-NMR解析可知：S体和R体的摩尔比为1∶3。

[实施例13]

合成麦根酸的活性的确认

证实：实施例12中得到的2’位羟基的S体(天然型)和R体、实施例9中得到的2’位脱氧体、以及按照“Takagi，S等，J.Plant Nutr.，1984年，第7卷，p469-477”中记载的方法从大麦精制的麦根酸，它们的铁络合物通过麦根酸铁络合物转运蛋白切实地被细胞吸收。

<表达麦根酸铁络合物转运蛋白的非洲爪蟾卵母细胞的制备>

用“Murata，Y.等，Plant J.，2006年，第46卷，p.563-572.”中记载的方法，在非洲爪蟾的卵母细胞中，导入编码大麦麦根酸铁络合物转运蛋白(PlantJ.2006，vol46，563-572)的基因HvYS1基因。具体而言，在pSP64Poly(A)载体(Promega公司)的XbaI和BamHI位点，插入HvYS1 cDNA(序列号1的编码区域)，用该载体和Ambion公司的mMESSAGEmMACHINE Kit制备cRNA。

切开非洲爪蟾(从浜松生物教材购入)的腹部，摘取卵母细胞(XenopusOocytes)。加入Collagenase typeIA(Sigma)直至2mg/mL，将卵母细胞移至装有OR-2溶液(82.5mM NaCl、2mM KCl、1mM MgCl₂、5mM HEPES)的离心管，室温下约搅拌2小时后，用OR-2溶液洗涤3次，进一步用ND-96溶液(96mMNaCl、2mM KCl、1mM MgCl₂、1.8mM CaCl₂、5mM HEPES)洗涤3次。将cRNA50μg/mL，50nL用数字式微量分注器(Drummond SCIENTIFIC)注入非洲爪蟾的卵母细胞。卵母细胞在ND-96溶液中在17℃下培养48～72小时。

<麦根酸类的铁络合物的制备>

将2’位羟基的S体及R体、2’位脱氧体、以及从大麦精制的麦根酸各30mM与氯化铁30mM混合，在室温下静置2小时，稀释成铁络合物浓度为5mM。

<铁吸收活性的比较>

用卵母细胞钳OC-725C(Warner Instrument)，通过电化学信号的检测，对细胞内吸收的麦根酸铁络合物进行定量。具体而言，将表达了麦根酸铁络合物转运蛋白HvYS1的卵母细胞置于装满ND-96溶液的槽中，加入5mM的基质铁络合物溶液10μL(最终浓度50μM)，测定电生理活性。在卵母细胞中插入2根填充了3M KCl的微小电极，在实验槽的电位固定在0V的模式下，测定固定电位-60mV处变化的电流值。数据由PowerLab数据记录装置(Chart 4软件)记录。

结果如图1所示。2’羟基S体、2’羟基R体以及2’脱氧体中测定的电流值大小(电生理活性)，用以天然麦根酸中测定的电信号大小(电生理活性)为100时的相对值来表示。2’羟基S体、2’羟基R体以及2’脱氧体均与天然麦根酸相同。如通过一锅法合成得到的麦根酸那样，无论是合成的麦根酸的2’位羟基的立体构型混合，还是2’位脱氧体，均对铁络合物向植物内的转运有用。

本发明的制造方法能够廉价地大量制造可作为代替EDTA的螯合剂利用的麦根酸类，因此非常有用。通过本发明的制造方法制造的麦根酸可以在植物铁转运机制研究以及健康食品、化妆品或肥料等领域中应用。

序列表

SEQUENCE LISTING

<110>Suntory Limited (三得利有限公司)

<120>manufacturing method of mugineic acid(麦根酸的制造方法)

<130>S07F2386

<150>JP2006-307397

<151>2006-11-14

<160>1

<210>1

<211>2430

<212>DNA

<213>Hordeum vulgare L.

<223>HvYS1

<220>

<221>CDS

<222>(169)..(2202)

<400>1

taatctcacc gcaaaagcac acggttccag ctcgcctcgt gggcggaaac ggggaacgac 60

ttcctggaag ctgcggcctc cagtgattct tcttccacgg tacagtgatc agtcgaccac 120

tacgaccttg atcgttgagc agctgcggag gcaagaagca gagccacc atg gac atc 177

Met Asp Ile

1

gtc gcc ccg gac cgc acg cgg atc gcg ccg gag atc gac agg gac gag 225

Val Ala Pro Asp Arg Thr Arg Ile Ala Pro Glu Ile Asp Arg Asp Glu

5 10 15

gcc ctg gag ggc gac agg gag tcg gac ccg gcg ctg gcg tcg acg cgc 273

Ala Leu Glu Gly Asp Arg Glu Ser Asp Pro Ala Leu Ala Ser Thr Arg

20 25 30 35

gag tgg cag ctg gag gac atg cca cgg tgg cag gac gag ctg acg gtg 321

Glu Trp Gln Leu Glu Asp Met Pro Arg Trp Gln Asp Glu Leu Thr Val

40 45 50

cgg ggc ctg gtg gcg gcg ctg ctc atc ggg ttc atc tac acc gtc atc 369

Arg Gly Leu Val Ala Ala Leu Leu Ile Gly Phe Ile Tyr Thr Val Ile

55 60 65

gtc atg aag atc gcg ctc acc acg ggg ctg gtg ccc acg ctg aac gtc 417

Val Met Lys Ile Ala Leu Thr Thr Gly Leu Val Pro Thr Leu Asn Val

70 75 80

tcc gcc gcg ctg ctc tcc ttc ctg gcg ctc cgc ggg tgg acg cgc ctg 465

Ser Ala Ala Leu Leu Ser Phe Leu Ala Leu Arg Gly Trp Thr Arg Leu

85 90 95

ctg gag cgc ttc ggc gtc gtg tcc cgc ccc ttc acg cgg cag gag aac 513

Leu Glu Arg Phe Gly Val Val Ser Arg Pro Phe Thr Arg Gln Glu Asn

100 105 110 115

acc atc gtc cag acc tgc ggc gtg gca tgc tac acc atc gcg ttt gcc 561

Thr Ile Val Gln Thr Cys Gly Val Ala Cys Tyr Thr Ile Ala Phe Ala

120 125 130

ggt ggg ttc ggg tca acc ttg ctg ggc ctg aac aag aag acg tac gag 609

Gly Gly Phe Gly Ser Thr Leu Leu Gly Leu Asn Lys Lys Thr Tyr Glu

135 140 145

ctg gcc ggt gac tcg ccg ggc aac gtg ccc gga agc tgg aag gag cca 657

Leu Ala Gly Asp Ser Pro Gly Asn Val Pro Gly Ser Trp Lys Glu Pro

150 155 160

ggg ata ggc tgg atg acg ggg ttc ctc ctc gct tgc agc ttc ggg ggc 705

Gly Ile Gly Trp Met Thr Gly Phe Leu Leu Ala Cys Ser Phe Gly Gly

165 170 175

ctc ctc act ttg att ccc ctg aga cag gta ctg gtc gtc gac tac aaa 753

Leu Leu Thr Leu Ile Pro Leu Arg Gln Val Leu Val Val Asp Tyr Lys

180 185 190 195

tta gtt tac cca agt ggg act gca act gct att ctt ata aac ggg ttc 801

Leu Val Tyr Pro Ser Gly Thr Ala Thr Ala Ile Leu Ile Asn Gly Phe

200 205 210

cat acc gat caa ggg gac aag aat tca aga aag caa atc cgt gga ttc 849

His Thr Asp Gln Gly Asp Lys Asn Ser Arg Lys Gln Ile Arg Gly Phe

215 220 225

ctg aaa tac ttt ggg ggt agc ttt ctg tgg agt ttc ttc caa tgg ttc 897

Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Ser Phe Leu Trp Ser Phe Phe Gln Trp Phe

230 235 240

tac act gga ggc gat gct tgt gga ttt gtt cag ttc cca act ttc ggt 945

Tyr Thr Gly Gly Asp Ala Cys Gly Phe Val Gln Phe Pro Thr Phe Gly

245 250 255

ttg aag gcc tgg aag cag aca ttc tac ttt gac ttt agc atg aca tac 993

Leu Lys Ala Trp Lys Gln Thr Phe Tyr Phe Asp Phe Ser Met Thr Tyr

260 265 270 275

gtt ggt gcc ggg atg att tgt cca cat ata gta aat ata tct acc ctc 1041

Val Gly Ala Gly Met Ile Cys Pro His Ile Val Asn Ile Ser Thr Leu

280 285 290

ctt ggt gca att atc tca tgg gga ata atg tgg cca ctc atc agt aaa 1089

Leu Gly Ala Ile Ile Ser Trp Gly Ile Met Trp Pro Leu Ile Ser Lys

295 300 305

aac aag ggg gat tgg tac cct gca aaa gta cca gaa agc agc atg aaa 1137

Asn Lys Gly Asp Trp Tyr Pro Ala Lys Val Pro Glu Ser Ser Met Lys

310 315 320

agt ttg tac ggt tac aag gcc ttc ata tgc ata gct ctc atc atg ggg 1185

Ser Leu Tyr Gly Tyr Lys Ala Phe Ile Cys Ile Ala Leu Ile Met Gly

325 330 335

gat ggc atg tac cac ttc ata aaa att gtt gge atc act gct atg agc 1233

Asp Gly Met Tyr His Phe Ile Lys Ile Val Gly Ile Thr Ala Met Ser

340 345 350 355

atg tat cgg caa ttt agc cac aag cag gtt aac aac aaa gca aaa aat 1281

Met Tyr Arg Gln Phe Ser His Lys Gln Val Asn Asn Lys Ala Lys Asn

360 365 370

gcg gac gac act gtc tcg ctt gag gag tta cac cgc cag gag atc ttt 1329

Ala Asp Asp Thr Val Ser Leu Glu Glu Leu His Arg Gln Glu Ile Phe

375 380 385

aag aga ggc cae atc ccc tct tgg atg gca tac gct ggt tat gcc ttg 1377

Lys Arg Gly His Ile Pro Ser Trp Met Ala Tyr Ala Gly Tyr Ala Leu

390 395 400

ttt agc gtt ctt gca gtg gtt aca ata cca gta atg ttc aaa caa gtg 1425

Phe Ser Val Leu Ala Val Val Thr Ile Pro Val Met Phe Lys Gln Val

405 410 415

aag tgg tac tat gtt gtt ata gcc tat gtc gtt gcc ccc atg ctt gga 1473

Lys Trp Tyr Tyr Val Val Ile Ala Tyr Val Val Ala Pro Met Leu Gly

420 425 430 435

ttt gcc aat tca tac ggg aca ggg ctt acc gac atc aac atg ggc tat 1521

Phe Ala Asn Ser Tyr Gly Thr Gly Leu Thr Asp Ile Asn Met Gly Tyr

440 445 450

aac tat ggc aag atc gct ctc ttt gtc ttt gcg gga tgg gcc ggt aaa 1569

Asn Tyr Gly Lys Ile Ala Leu Phe Val Phe Ala Gly Trp Ala Gly Lys

455 460 465

gag aat ggt gtc att gcc ggc ctt gtt gct ggc acc ttg gtt aag cag 1617

Glu Asn Gly Val Ile Ala Gly Leu Val Ala Gly Thr Leu Val Lys Gln

470 475 480

ttg gtg ctt atc tct gcc gat ttg atg caa gac ttc aag acg agt tac 1665

Leu Val Leu Ile Ser Ala Asp Leu Met Gln Asp Phe Lys Thr Ser Tyr

485 490 495

ctc act caa aca tca cca aaa tcc atg atg att gca caa gtt gtt gga 1713

Leu Thr Gln Thr Ser Pro Lys Ser Met Met Ile Ala Gln Val Val Gly

500 505 510 515

aca gcc atg ggt tgc att gtc tcc ccc ctc acg ttc atg ctc ttc tac 1761

Thr Ala Met Gly Cys Ile Val Ser Pro Leu Thr Phe Met Leu Phe Tyr

520 525 530

aag gca ttt gat att ggt aac cca gat ggt act tgg aag gca cct tat 1809

Lys Ala Phe Asp Ile Gly Asn Pro Asp Gly Thr Trp Lys Ala Pro Tyr

535 540 545

gca ctc ata tac cgc aat atg gca ata ctt ggt gtg gag ggc ttc tcg 1857

Ala Leu Ile Tyr Arg Asn Met Ala Ile Leu Gly Val Glu Gly Phe Ser

550 555 560

gtg ttg ccg aag tat tgc atc gtg ata tcc ggt gga ttt ttc gcc ttt 1905

Val Leu Pro Lys Tyr Cys Ile Val Ile Ser Gly Gly Phe Phe Ala Phe

565 570 575

gcg gcg att tta agt ata aca aga gat gtc atg ccc cac aag tat gcg 1953

Ala Ala Ile Leu Ser Ile Thr Arg Asp Val Met Pro His Lys Tyr Ala

580 585 590 595

aag tat gtg ccc ctg cca atg gca atg gca gtt cca ttc ctt gta ggt 2001

Lys Tyr Val Pro Leu Pro Met Ala Met Ala Val Pro Phe Leu Val Gly

600 605 610

ggg agc ttt gct att gat atg tgc ctc ggg agt ttg ata gtt ttt gca 2049

Gly Ser Phe Ala Ile Asp Met Cys Leu Gly Ser Leu Ile Val Phe Ala

615 620 625

tgg acc aag ata aac aag aag gag gct ggc ttc atg gtg cct gcg gtt 2097

Trp Thr Lys Ile Asn Lys Lys Glu Ala Gly Phe Met Val Pro Ala Val

630 635 640

gca tcc gct ttg ata tgt ggg gat ggc ata tgg acg ttc cct gct tcc 2145

Ala Ser Ala Leu Ile Cys Gly Asp Gly Ile Trp Thr Phe Pro Ala Ser

645 650 655

att ctt gct ctt gcc aag att aaa cca cca att tgc atg aag ttt cta 2193

Ile Leu Ala Leu Ala Lys Ile Lys Pro Pro Ile Cys Met Lys Phe Leu

660 665 670 675

cct gct gcc taacggaccg aaaaatatac taggtgacca aagatgcatt 2242

Pro Ala Ala

gaatttccat agttgtgcct tgctgaacta tcttttagtg tttgtttact ggagatgctt 2302

cggtactcga gtgtctagga atgatacgtt ggtatgtgct tttacgggta taacctgaat 2362

tttcttattt tatgaatctg gggtatactt atcagttgct atgagtatgg atctaatgat 2422

ttggctga 2430

Claims

1.麦根酸类的制造方法，其特征在于包括：使下述通式(2)表示的化合物的烯基氧化断裂，同时用氮杂环丁烷-2-羧酸进行还原性氨基化反应，得到下述通式(3)表示的化合物的工序1，

式中，R¹、R⁴及R⁵表示与上述相同的意思；

式中，R¹和R²表示与上述相同的意思，R³表示羟基或氨基。

2.下述通式(3-1)表示的化合物，

式中，R¹表示氢原子或羟基，Boc表示叔丁氧基羰基。

3.下述通式(4-1)表示的化合物，

式中，R¹表示氢原子或羟基，Et表示乙基。