CN101176791A - 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途 - Google Patents

连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101176791A
CN101176791A CNA2006100974165A CN200610097416A CN101176791A CN 101176791 A CN101176791 A CN 101176791A CN A2006100974165 A CNA2006100974165 A CN A2006100974165A CN 200610097416 A CN200610097416 A CN 200610097416A CN 101176791 A CN101176791 A CN 101176791A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polyethylene glycol
amino acid
aminoacid
dichloromethane
dissolved
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2006100974165A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101176791B (zh
Inventor
姚文兵
田浤
高向东
陈阳建
宋潇达
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Pharmaceutical University
Original Assignee
China Pharmaceutical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Pharmaceutical University filed Critical China Pharmaceutical University
Priority to CN2006100974165A priority Critical patent/CN101176791B/zh
Publication of CN101176791A publication Critical patent/CN101176791A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101176791B publication Critical patent/CN101176791B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

一种连接有聚乙二醇的氨基酸，它具有以下结构通式：R－PEG－CO－X－氨基酸或R－PEG－X－氨基酸，其中PEG为聚乙二醇链，R为PEG的羟基或烃氧基，烃氧基可以选自C1～C12烷氧基、环烷氧基或芳烷氧基，X为氨基酸中除α－羧基和α－氨基外的脱去活性氢的杂原子。用本发明的连接有聚乙二醇的氨基酸合成多肽，可以得到聚乙二醇链在特定位置的多肽，如此的多肽不但改善了它们的药代动力学，而且不影响多肽原有的治疗作用。本发明公开了其制法。

Description

连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途
技术领域
本发明涉及连接了聚乙二醇长链的氨基酸、其制备方法及其用于多肽的合成，用于制备带有聚乙二醇长链的多肽。
背景技术
随着生物技术的发展，越来越多的具有生物活性的小肽被研究者发现具有治疗作用，如：胸腺肽、生长抑素、血管紧张素、阿基瑞林等等。但小肽应用于临床也有许多不利之处，例如易产生免疫排斥反应、稳定性较差、在体内被清除速率较快等。因此，人们采用了各种方法消除上述不利因素，其中手段之一是采用聚乙二醇化技术。
聚乙二醇化技术(PEGylation PEG化)又称为化学修饰，是目前分子变构化学(molecule altering structure chemistry，MASC)中最重要的技术之一。PEG化技术的研究始于20世纪80年代，Abuchowski等第一次将聚乙二醇共价结合到蛋白质上，以保护蛋白质免遭破坏，结果发现聚乙二醇修饰不仅可以增加蛋白质的水溶性，还能减缓肾脏的清除，改变了蛋白质的药代动力学和药效学性质。经过近几十年的发展，PEG化技术不仅在蛋白质类药物的开发中得到普遍的应用，而且已扩展到新型药物载体、控释制剂等各个领域。
许多制备聚乙二醇化小肽的方法已被报道，潘和平等在中国专利200310117356.5中报道了胸腺五肽的聚乙二醇化衍生物，含有它们的药物组合物及用途；中国专利200410066897.4中报道了一种人胰高血糖素样肽-1的复合物及其制备方法，连接了PEG的人胰高血糖素样肽-1生物稳定性高，体内半衰期长，生物利用度高。
在传统的聚乙二醇化技术中，需要对聚乙二醇的端基进行活化，引入适当的活性基团，此活性基团对要结合的药物分子中的至少一个官能团具有活性，能与之形成稳定的化学键。但这种方法在用于小肽的PEG化时存在着许多的局限性：其一是小肽的氨基酸中可能不具有能与活化的PEG结合的侧链基团。另外，小肽的分子量较小，PEG化的位点可能覆盖了活性部位。
本发明提供的带有PEG的氨基酸用于多肽的合成，可以在设定好的位点引入PEG，避免了传统PEG化方法的局限性。
发明内容
本发明提供一种新型的，带有聚乙二醇的氨基酸，能用于多肽的化学合成。
本发明的技术方案如下：
一种连接有聚乙二醇的氨基酸，它具有以下结构通式：
R-PEG-CO-X-氨基酸
或
R-PEG-X-氨基酸
其中PEG为聚乙二醇链，R为PEG的羟基或烃氧基，烃氧基可以选自C1～C12烷氧基、环烷氧基或芳烷氧基，X为氨基酸中除α-羧基和α-氨基外的脱去活性氢的杂原子。
本发明的连接有聚乙二醇的氨基酸，其中的氨基酸优选的是侧链含杂原子的天然氨基酸。它们中最优选的天然氨基酸是赖氨酸、组胺酸、半胱氨酸、酪氨酸或精氨酸，烃氧基为甲氧基，它们有如下几种结构：
结构1
Figure A20061009741600052
结构2
Figure A20061009741600053
结构3
Figure A20061009741600054
结构4
Figure A20061009741600061
结构5
一种制备上述连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇酸，α-叔丁氧羰基氨基酸和二环己基碳二亚胺(DCC)溶于二氯甲烷中，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有带活性氢的氮原子的氨基酸，在室温下搅拌回流4~16小时，将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
其反应式如下：
Figure A20061009741600062
一种制备上述连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇酰氯溶于二氯甲烷中，再加入α-叔丁氧羰基氨基酸和三乙胺(TEA)，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有带活性氢的杂原子(N、O或S)的氨基酸，室温下搅拌过夜，将反应混合物过滤，滤液蒸发浓缩并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
其反应式如下：
一种制备上述连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇溶于二氯亚砜中，室温搅拌2小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于二氯甲烷中，再加入α-叔丁氧羰基氨基酸和三乙胺，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有带活性氢的杂原子的氨基酸，室温下搅拌过夜，过滤反应混合物，滤液蒸发浓缩并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
其反应式如下：
Figure A20061009741600071
一种制备上述连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇胺，α-叔丁氧羰基氨基酸和二环己基碳二亚胺(DCC)溶于二氯甲烷中，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有其它羧基的氨基酸，在室温下搅拌回流4～16小时，将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
其反应式如下：
Figure A20061009741600072
将上述所得的连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸溶于二氯甲烷中，并加入适量三氟乙酸，搅拌，然后蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用二氯甲烷溶解并用干燥剂干燥，过滤后再加入冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥，即得连接有聚乙二醇的氨基酸。
其反应式如下：
Figure A20061009741600081
本发明的连接有聚乙二醇的氨基酸的用途，是用于多肽的合成，或将其连接到药物上以改变它们的药代动力学和药效学性质。
用本发明的连接有聚乙二醇的氨基酸合成多肽，可以得到聚乙二醇链在特定位置的多肽，如此的多肽不但改善了它们的药代动力学，而且不影响多肽原有的治疗作用。
具体实施方式
实施例1：mPEG-CO-ε-NH-Lys的制备
反应式：
Figure A20061009741600082
取1g单甲氧基聚乙二醇酸1000(0.001mol)，0.74g α-叔丁氧羰基-L-赖氨酸(0.003mol)和0.62g二环己基碳二亚胺(DCC，0.003mol)溶于100ml二氯甲烷中，室温下搅拌回流16小时。将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥。将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，并加入适量三氟乙酸，搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-CO-ε-NH-Lys 1.52g。
实施例2：mPEG-CO-His的制备
反应式：
取1g单甲氧基聚乙二醇酸1000(0.001mol)溶于50ml二氯甲烷中，加入二氯亚砜(2ml，0.004mol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌过夜。将混合液旋转蒸发，所得固体残渣真空干燥。将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.77g α-叔丁氧羰基-L-组氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-CO-His1.43g。
实施例3：mPEG-CO-Trp的制备
反应式：
Figure A20061009741600101
取4g单甲氧基聚乙二醇酸4000(0.001mol)溶于50ml二氯甲烷中，加入二氯亚砜(2ml，0.004mol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌过夜。将混合液旋转蒸发，所得固体残渣真空干燥。将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.91g α-叔丁氧羰基-L-色氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-CO-Trp 4.12g。
实施例4：mPEG-CO-S-Cys的制备
反应式：
取4g单甲氧基聚乙二醇酸4000(0.001mol)溶于50ml二氯甲烷中，加入二氯亚砜(2ml，0.004mol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌过夜。将混合液旋转蒸发，所得固体残渣真空干燥。将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.66g叔丁氧羰基-L-半胱氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-CO-S-Cys 4.08g。
实施例5：mPEG-CO-O-Tyr的制备
反应式：
Figure A20061009741600121
取8g单甲氧基聚乙二醇酸8000(0.001mol)溶于50ml二氯甲烷中，加入二氯亚砜(2ml，0.004mol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌过夜。将混合液旋转蒸发，所得固体残渣真空干燥。将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入1.14g叔丁氧羰基-L-酪氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-CO-O-Tyr 7.25g。
实施例6：mPEG-CO-O-Ser的制备
反应式：
Figure A20061009741600131
取8g单甲氧基聚乙二醇酸8000(0.001mol)溶于50ml二氯甲烷中，加入二氯亚砜(2ml，0.004mol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌过夜。将混合液旋转蒸发，所得固体残渣真空干燥。将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.62g叔丁氧羰基-L-丝氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-CO-O-Ser 7.14g。
实施例7：mPEG-CO-O-Thr的制备
反应式：
Figure A20061009741600141
取8g单甲氧基聚乙二醇酸8000(0.001mol)溶于50ml二氯甲烷中，加入二氯亚砜(2ml，0.004mol)的二氯甲烷溶液，室温下搅拌过夜。将混合液旋转蒸发，所得固体残渣真空干燥。将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.66g叔丁氧羰基-L-苏氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产mPEG-CO-O-Thr 6.89g。
实施例8：mPEG-NH-Glu的制备
反应式：
Figure A20061009741600151
取10g单甲氧基聚乙二醇胺10000(0.001mol)，0.45g谷氨酸1甲酯(0.003mol)和0.62g二环己基碳二亚胺(DCC，0.003mol)溶于100ml二氯甲烷中，室温下搅拌回流16小时。将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥。将所得固体物质溶于200ml蒸馏水并加入50ml甲醇，用KOH调pH值至10后搅拌过夜。然后过滤并将滤液用二氯甲烷萃取(50ml*3)，合并有机层并用无水硫酸镁干燥，过滤后加入200ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-NH-Glu 8.92g。
实施例9：mPEG-NH-Asp的制备
反应式：
Figure A20061009741600161
取10g单甲氧基聚乙二醇胺10000(0.001mol)，0.4g天冬氨酸α甲酯(0.003mol)和0.62g二环己基碳二亚胺(DCC，0.003mol)溶于100ml二氯甲烷中，室温下搅拌回流16小时。将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥。将所得固体物质溶于200ml蒸馏水并加入50ml甲醇，用KOH调pH值至10后搅拌过夜。然后过滤并将滤液用二氯甲烷萃取(50ml*3)，合并有机层并用无水硫酸镁干燥，过滤后加入200ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-NH-Asp8.85g。
实施例10：mPEG-S-Cys的制备
反应式：
Figure A20061009741600171
取10g单甲氧基聚乙二醇10000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌2小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml乙醇中，再加入0.66g叔丁氧羰基-L-半胱氨酸(0.003mol)和0.4g NaOH(0.01mol)，室温下搅拌回流8小时。将混合液减压蒸干，所得固体物质溶解于100ml二氯甲烷中，并加入适量三氟乙酸，搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-S-Cys 8.89g。
实施例11：mPEG-ε-NH-Lys的制备
反应式：
取20g单甲氧基聚乙二醇20000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌3小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.74g叔丁氧羰基-L-赖氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-ε-NH-Lys 17.38g。
实施例12：mPEG-O-Ser的制备
反应式：
取20g单甲氧基聚乙二醇20000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌3小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.62g叔丁氧羰基-L-丝氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-O-Ser 16.97g。
实施例13：mPEG-O-Thr的制备
反应式：
Figure A20061009741600201
取20g单甲氧基聚乙二醇20000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌3小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.66g叔丁氧羰基-L-苏氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-O-Thr 18.16g。
实施例14：mPEG-O-Tyr的制备
取40g单甲氧基聚乙二醇40000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌3小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml乙醇中，再加入1.14g叔丁氧羰基-L-酪氨酸(0.003mol)和0.4g NaOH(0.01mol)，室温下搅拌回流8小时。将混合液减压蒸干，所得固体物质溶解于100ml二氯甲烷中，并加入适量三氟乙酸，搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-O-Tyr 35.14g。
实施例15：mPEG-N-Arg的制备
反应式：
Figure A20061009741600221
取40g单甲氧基聚乙二醇40000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌3小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.82g叔丁氧羰基-L-精氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-N-Arg 36.42g。
实施例16：mPEG-N-His的制备
反应式：
Figure A20061009741600231
取60g单甲氧基聚乙二醇60000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌4小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.77gα-叔丁氧羰基-L-组氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-N-His 52.45g。
实施例17：mPEG-N-Trp的制备
反应式：
Figure A20061009741600241
取60g单甲氧基聚乙二醇60000(0.001mol)溶于25ml二氯亚砜中，室温搅拌4小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于100ml二氯甲烷中，再加入0.91gα-叔丁氧羰基-L-色氨酸(0.003mol)和0.6ml三乙胺，室温下搅拌过夜。过滤，将适量三氟乙酸加入到滤液中搅拌然后在55℃旋转蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用50ml二氯甲烷溶解并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入100ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-N-Trp50.34g。
实施例18：PEG-胸腺五肽的合成：Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-PEG
(1)第1个氨基酸与树脂的连接：称取树脂(Wang树脂，上海吉尔生化)0.5g，置多肽合成反应器中，加入二氯甲烷浸泡树脂过夜后，抽干；在多肽合成反应器中，加入NMP(N-甲基吡咯烷酮)溶解的经Fmoc保护的、带有PEG的酪氨酸(Fmoc-Tyr(OtBu)-O-PEG)0.5g(实施例14制备的mPEG-O-Tyr再进行Fmoc保护)后，将1mmol的DCC和浓度为5％(质量分数)的DMAP(4-N，N-二甲基氨基吡啶)NMP溶液加入到反应器在室温振荡反应20min；用NMP冲洗树脂除去多余保护氨基酸。
(2)脱除Fmoc保护基：向反应器中加入20％哌啶/NMP溶液脱除Fmoc基团，反应20min，排空反应器的液体，用5ml NMP冲洗树脂，手摇振荡，重复冲洗3次。仍用上述同样量的溶液重复操作两次，抽干。
(3)接位氨基酸C末端的活化：将1mmol将市售的氨基保护的Val氨基酸(Fmoc-Val-OH)加入到反应容器中；加入3ml 0.1333mol/L HBTU(2-(1H-苯并三唑)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐)与1mol/L HOBt(1-羧基苯并三氮唑，)/NMP振荡反应，将保护了氨基的Val氨基酸的羧基活化。
(4)肽键的形成：在步骤(2)脱除Fmoc保护基的树脂中加入步骤(3)得到的羧基活化、氨基保护的氨基酸Val进行耦合反应，抽干、洗涤。
(5)肽链的延长：重复(2)-(4)步骤，依次将氨基保护的Asp、Lys、Arg的C末端活化后加入上一级的脱去Fmoc的树脂，完成肽链的延长。
(6)脱除侧链保护基及肽链上的树脂：在最后形成的五肽树脂中，加入二氯甲烷、三氟乙酸，于25℃反应60min，加入含50％三氟乙酸(体积分数)的二氯甲烷溶液10mL，反应20min，滤去树脂后，滤液经旋转蒸发仪浓缩，加入过量乙醚，析出白色粉末状物，离心分离除去清液，真空干燥，即得PEG-胸腺五肽，0.375g。
实施例19：PEG-阿拉瑞林的合成：Glu-His-Trp-Ser(PEG)-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro
(1)第1个氨基酸与树脂的连接：称取树脂0.5g，置多肽合成反应器中，加入二氯甲烷浸泡树脂过夜后，抽干；在多肽合成反应器中，加入NMP(N-甲基吡咯烷酮)溶解经Fmoc保护的脯氨酸(Fmoc-Pro-OH)0.5g后，将1mmol的DCC和5％DMAP(4-N，N-二甲基氨基吡啶)加入到反应器室温振荡反应20min；用NMP冲洗树脂除去多余保护氨基酸。
(2)脱除Fmoc保护基：向反应器中加入20％哌啶/NMP溶液脱除Fmoc基团，反应20min，排空反应器，用5mL NMP冲洗树脂，手摇振荡，重复3次。仍用上述同样量的溶液重复操作两次，抽干。
(3)接位氨基酸C末端的活化：将1mmol保护氨基酸(Fmoc-Arg-OH)加入到活化器中；加入3ml 0.1333mol/L HBTU(2-(1H-苯并三唑)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐)与1mol/L HOBt(1-羧基苯并三氮唑)/NMP振荡反应，活化保护氨基酸。
(4)肽键的形成：在上述脱除Fmoc保护基的树脂中加入羧基活化、氨基保护的氨基酸进行耦合反应，抽干、洗涤。
(5)肽链的延长：重复(2)-(4)步骤，依次将氨基保护的Leu、D-Ala、Tyr的C末端活化后加入上一级的脱去Fmoc的树脂上，进行肽链的延长。
(6)连接带有PEG的丝氨酸：将PEG-O-Ser(实施例12制备)用Fmoc进行氨基保护后加入到活化器中，加入3ml 0.1333mol/L HBTU与1mol/L HOBt/NMP振荡反应，活化保护氨基酸。
(7)将上一级脱除Fmoc保护基的树脂中加入羧基活化、氨基保护的PEG-O-Ser进行耦合反应，抽干、洗涤。
(8)肽链的延长：重复(2)-(4)步骤，依次将氨基保护的Trp、His、Glu的C末端活化后加入上一级的脱去Fmoc的树脂，进行肽链的延长。
(6)脱除侧链保护基及肽链上的树脂：在最后形成的九肽树脂中，加入二氯甲烷、三氟乙酸，于25℃反应60min，将含50％三氟乙酸(体积分数)的二氯甲烷溶液10mL加入，反应20min，之后经旋转蒸发仪蒸至余液少许，加入过量乙醚，析出白色粉末状物，离心分离除去清液，真空干燥，得多肽产物0.429g。
实施例20：mPEG-NH-Glu-Ibuprofen的制备
取10g制备好的mPEG-NH-Glu 10000(0.001mol)和0.62g布洛芬(Ibuprofen)(0.003mol)和0.62g二环己基碳二亚胺(DCC，0.003mol)溶于100ml二氯甲烷中，室温下搅拌回流16小时。将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥。将所得固体物质溶于75ml二氯甲烷中并用无水硫酸镁干燥，过滤后再加入200ml冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥。得产物mPEG-NH-Glu-Ibuprofen 8.62g。

Claims (9)

1.一种连接有聚乙二醇的氨基酸，其特征是它具有以下结构通式：
     R-PEG-CO-X-氨基酸
           或
     R-PEG-x-氨基酸
其中PEG为聚乙二醇链，R为PEG的羟基或烃氧基，烃氧基选自C1～C12烷氧基、环烷氧基或芳烷氧基，X为氨基酸中除α-羧基和α-氨基外的脱去活性氢的杂原子。
2.根据权利要求1所述的连接有聚乙二醇的氨基酸，其特征是：其中的氨基酸是侧链含杂原子的天然氨基酸。
3.根据权利要求2所述的连接有聚乙二醇的氨基酸，其特征是：它们中的天然氨基酸是赖氨酸、组胺酸、半胱氨酸、酪氨酸或精氨酸，烃氧基为甲氧基。
4.一种制备权利要求1所述的连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，其特征是它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇酸，α-叔丁氧羰基氨基酸和二环己基碳二亚胺溶于二氯甲烷中，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有带活性氢的氮原子的氨基酸，在室温下搅拌回流4～16小时，将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
5.一种制备权利要求1所述的连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，其特征是它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇酰氯溶于二氯甲烷中，再加入α-叔丁氧羰基氨基酸和三乙胺，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有带活性氢的杂原子的氨基酸，室温下搅拌过夜，将反应混合物过滤，滤液蒸发浓缩并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
6.一种制备权利要求1所述的连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，其特征是它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇溶于二氯亚砜中，室温搅拌2小时，旋转蒸发除去剩余的二氯亚砜，将所得固体物质溶于二氯甲烷中，再加入α-叔丁氧羰基氨基酸和三乙胺，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有带活性氢的杂原子的氨基酸，室温下搅拌过夜，过滤反应混合物，滤液蒸发浓缩并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
7.一种制备权利要求1所述的连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，其特征是它包括以下步骤：
取单烃氧基聚乙二醇胺，α-叔丁氧羰基氨基酸和二环己基碳二亚胺(DCC)溶于二氯甲烷中，所述的氨基酸是除α-羧基和α-氨基外还具有其它羧基的氨基酸，在室温下搅拌回流4～16小时，将混合物过滤，滤液减压蒸干并真空干燥，即得连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸。
8.根据权利要求4、5、6或7的制备连接有聚乙二醇的氨基酸的方法，其特征是：将权利要求4、5、6或7所得的连接有聚乙二醇的α-叔丁氧羰基氨基酸溶于二氯甲烷中，并加入三氟乙酸，搅拌，然后蒸发浓缩并真空干燥，所得固体物质用二氯甲烷溶解并用干燥剂干燥，过滤后再加入冷却乙醚至滤液中，将所得沉淀物过滤后真空干燥，即得连接有聚乙二醇的氨基酸。
9.一种权利要求1所述的连接有聚乙二醇的氨基酸的用途，其特征是将其用于多肽的合成，或将其连接到药物上。
CN2006100974165A 2006-11-07 2006-11-07 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途 Expired - Fee Related CN101176791B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2006100974165A CN101176791B (zh) 2006-11-07 2006-11-07 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2006100974165A CN101176791B (zh) 2006-11-07 2006-11-07 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210321683.1A Division CN102827365B (zh) 2006-11-07 2006-11-07 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101176791A true CN101176791A (zh) 2008-05-14
CN101176791B CN101176791B (zh) 2013-01-09

Family

ID=39403311

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006100974165A Expired - Fee Related CN101176791B (zh) 2006-11-07 2006-11-07 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101176791B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102786682A (zh) * 2011-05-20 2012-11-21 上海景宇生物科技有限公司 聚乙二醇醛基活性物
CN101870732B (zh) * 2009-04-22 2013-03-20 兰州大学 用固-液相结合法进行单聚乙二醇化胸腺五肽的合成方法
CN107778476A (zh) * 2017-11-27 2018-03-09 淮阴师范学院 一种超分子水凝胶材料的构建方法及应用
CN109438568A (zh) * 2018-11-30 2019-03-08 湖南华腾制药有限公司 单分散聚乙二醇单甲醚修饰的白介素il-12前药的制备与应用
CN113786493A (zh) * 2021-10-13 2021-12-14 湖南赛隆药业(长沙)有限公司 一种聚乙二醇修饰的伐地昔布及其制备方法和用途
CN114099640A (zh) * 2021-12-14 2022-03-01 立康荣健(北京)生物医药科技有限公司 用于抑杀幽门螺杆菌的抗菌肽组合物及其制备方法和应用
CN117417292A (zh) * 2023-02-20 2024-01-19 浙江新码生物医药有限公司 一种含有杂芳基的非天然氨基酸及其用途

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1254496C (zh) * 2002-05-30 2006-05-03 中国科学院过程工程研究所 制备分枝型聚乙二醇的方法
CN100372870C (zh) * 2003-03-21 2008-03-05 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 胸腺素α1的聚乙二醇化衍生物
CN100415801C (zh) * 2003-10-28 2008-09-03 北京键凯科技有限公司 聚乙二醇氨基酸n-内环羰酐活性衍生物及其药物键合物和凝胶
CN1626549A (zh) * 2003-12-11 2005-06-15 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 胸腺五肽的聚乙二醇化衍生物，含有它们的药物组合物及用途
CN1660920A (zh) * 2005-02-01 2005-08-31 华东理工大学 末端连接ω－氨基酸的聚乙二醇酸或活性酯及制法和应用
CN1298734C (zh) * 2005-03-25 2007-02-07 山东格兰百克生物制药有限公司 一种聚乙二醇修饰蛋白质α－氨基的方法
CN100543063C (zh) * 2006-04-03 2009-09-23 中国科学院过程工程研究所 氨基酸端基聚乙二醇及其制备方法

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101870732B (zh) * 2009-04-22 2013-03-20 兰州大学 用固-液相结合法进行单聚乙二醇化胸腺五肽的合成方法
CN102786682A (zh) * 2011-05-20 2012-11-21 上海景宇生物科技有限公司 聚乙二醇醛基活性物
CN107778476A (zh) * 2017-11-27 2018-03-09 淮阴师范学院 一种超分子水凝胶材料的构建方法及应用
CN107778476B (zh) * 2017-11-27 2020-04-10 淮阴师范学院 一种超分子水凝胶材料的构建方法及应用
CN109438568A (zh) * 2018-11-30 2019-03-08 湖南华腾制药有限公司 单分散聚乙二醇单甲醚修饰的白介素il-12前药的制备与应用
CN109438568B (zh) * 2018-11-30 2022-01-11 湖南华腾制药有限公司 单分散聚乙二醇单甲醚修饰的白介素il-12前药的制备与应用
CN113786493A (zh) * 2021-10-13 2021-12-14 湖南赛隆药业(长沙)有限公司 一种聚乙二醇修饰的伐地昔布及其制备方法和用途
CN114099640A (zh) * 2021-12-14 2022-03-01 立康荣健(北京)生物医药科技有限公司 用于抑杀幽门螺杆菌的抗菌肽组合物及其制备方法和应用
CN117417292A (zh) * 2023-02-20 2024-01-19 浙江新码生物医药有限公司 一种含有杂芳基的非天然氨基酸及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN101176791B (zh) 2013-01-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101176791B (zh) 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途
JPH03504013A (ja) Ｔ細胞ヘルパー活性を有するペプチド
CN103314010B (zh) h[Gly2]GLP-2的固相合成
JPH05508860A (ja) 細胞接着制御環状化合物
CN101240030B (zh) 正十一烷基和rgd肽构建的缀合物、它们的合成及在医学中的应用
JPH06501950A (ja) 環状ペプチド、その調製法およびその薬理組成物としての使用
JPS62129297A (ja) カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体
CN102887941A (zh) Pak/咪唑啉/rgd三元缀合物及其制备方法和用途
JPH02500517A (ja) ペプチド化合物
Sluka et al. Reagents and methods for the solid-phase synthesis of protein-EDTA for use in affinity cleaving
JPH06510028A (ja) ランチオニン架橋ペプチド
US20030125243A1 (en) Synthesis of cyclic peptides
CN102827365B (zh) 连接有聚乙二醇的氨基酸及其制法和用途
CN101085809A (zh) 巴替非班及其类似物的合成与制备工艺
CN101280005A (zh) 晋美拉肽的制备方法
CN103965297B (zh) 一种多肽、其制备方法和应用
JP2008308423A (ja) 両親媒性の高分子配位子によって安定化された高分子錯体および検査用組成物および医薬組成物
CN103012596A (zh) 具有血脑屏障通透性的内吗啡肽衍生肽及其合成和应用
LENDER et al. Design and synthesis of sulfur‐free cyclic hexapeptides which contain the RGD sequence and bind to the fibrinogen GP IIb/IIIa receptor: A conformation‐based correlation between propensity for imide formation and receptor affinity
JPH05501865A (ja) チオアシル化試薬および中間体，チオペプチド，およびこれらの調製および使用法
CN107778350A (zh) 一种合成罗米地辛的方法
CA2133090A1 (en) Endothelin antagonists ii
JPH01199997A (ja) 哺乳動物の脳下垂体に作用するペプチド
Brandenburger et al. Synthesis and receptor binding analysis of thirteen oligomeric α-MSH analogs
CN100537599C (zh) 一种新的抗血小板四肽——nb06及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130109

Termination date: 20211107