CN101076588A - 编码驱虫剂的核酸和由其制备的植物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了DNA构建物、含有所述构建物的转基因植物和制备该植物的方法。该DNA构建物编码了表达时能产生具有驱虫活性的脂肪酸化合物的多肽。表达这种多肽的转基因植物可增加对植物寄生线虫类的抵抗力，尤其是在营养组织中表达时。表达这种多肽的转基因植物也可用于非杀虫剂工业应用。

Description

编码驱虫剂的核酸和由其制备的植物

本申请是2004年8月4日提交的美国申请号10/912,534的国际PCT申请，它是2004年8月4日提交的美国申请号10/772,227的续展申请(并且根据35 USC 120要求优先权)，将其全文纳入本文作参考。

发明领域

本发明涉及植物病理学和植物遗传转化领域。更具体说，本发明涉及为工业目的(包括控制植物病原体如植物寄生线虫类)提高转基因植物的新脂肪酸产量的方法和组合物。

发明背景

线虫类(衍生自希腊语“线”)是在潮湿表面上或液体环境，包括土壤中的水膜和其它生物体的潮湿组织中生存的活泼、柔软、可拉伸的生物体。虽然仅鉴定到20,000种线虫，但估计实际上存在40,000-10,000,000种。一些线虫种类进化为非常成功的植物和动物寄生物，对农业和畜牧业造成大量经济损失，并且使人发病和死亡(Whitehead(1998)Plant Nematode Control.CAB International，纽约)。

植物的线虫寄生物可寄生于植物的所有部位，包括根、发育的花蕾、叶和茎。根据摄食习性将植物寄生物分为以下几大类：迁移性外寄生物，迁移性内寄生物和固着性内寄生物。固着性内寄生物包括根结线虫(根结线虫Meloidogyne)和球线虫(球异皮线虫(Globodera)和异皮线虫(Heterodera))，它们能在根中诱导摄食位点并建立长期感染，这常常对农作物非常有害(Whitehead，同上)。按照所有主要作物每年平均损失12％的预计，估计全世界寄生线虫每年消耗的园艺和农业成本超过$789亿。例如，估计全世界线虫每年使大豆损失约$32亿(Barker等，(1994)“植物和土壤线虫：社会影响和未来的焦点”(Plant and Soil Nematodes：Societal Impact and Focus for theFuture).线虫学国家需要和优先委员会.合作州立研究服务部，美国农业部和线虫学会)。几个因素造成对安全和有效的线虫控制的迫切需要。持续增加的人口、饥荒和环境退化提高了对农业可持续性的关注，新的政府法规可能防止或严格限制许多可用的农业驱虫剂的使用。

施用化学杀线虫剂仍然是控制线虫的主要方式。然而通常，化学杀线虫剂是高度毒性化合物，已知它会引起显著的环境影响，可施用的用量和位置也越来越受限。例如，土壤熏蒸剂甲基溴用于有效减少各种特定作物的线虫感染，联合国蒙特利尔公约将甲基溴作为臭氧破坏性物质而进行控制，美国计划于2005年清除甲基溴(Carter(2001)California Agriculture，55(3)：2)。如果不能发现甲基溴的合适替代品，那么预计草莓和其它商品作物工业都会受到很大影响。类似地，广谱杀线虫剂如Telone(1，3-二氯丙烯的各种制剂)的应用因为其毒理作用而显著受限(Carter(2001)California Agriculture，Vol.55(3)：12-18)。

大环内酯类(如除虫菌素和米尔倍霉素)和来自苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)的δ-内毒素是原理上提供可环境安全地控制植物寄生线虫类的出色特异性和效果的化学物质。不幸的是，在实践中证明，这两种杀线虫剂在对抗根病原体的农业应用中不大有效。虽然某些除虫菌素显示出对抗植物寄生线虫类的出色活性，但由于这些化学物质的光敏性、紧密结合于土壤颗粒和被土壤微生物降解造成它们的生物利用度差，因此阻碍了它们的应用(Lasota和Dybas(1990)Acta Leiden59(1-2)：217-225；Wright和Perry(1998)“肌肉系统和神经生物学”(Musculature andNeurobiology).《自由生活和植物寄生的线虫类的生理学和生化学》(The Physiologyand Biochemistry of Free-Living and Plant-parasitic Nematodes)(R.N.Perry和D.J.Wright编)，CAB International 1998)。因此，尽管在抵抗寄生于动物的线虫类、螨和昆虫(植物和动物应用)中进行了数年研究和广泛应用，但在商业上从未将大环内酯类(如除虫菌素和米尔倍霉素)开发用于控制土壤中的植物寄生线虫类。

Btδ内毒素必须被摄取才能影响其靶器官—中肠上皮细胞的刷状缘(Marroquin等，(2000)Genetics.155(4)：1693-1699)。因此，预计它们不能有效对抗田间分散、非摄食性、幼年期的植物寄生线虫类。因为易感性宿主被感染时幼年期仅刚开始摄食，所以可能需要杀线虫剂穿透植物表皮发挥作用。不大可能透表皮摄取65-130kDa蛋白质-这是Btδ末端毒素的典型大小。而且，预计土壤流动性相对较差。Btδ毒素的大小甚至妨碍了转基因方法，因为植物递送可能由于某些植物寄生线虫类如异皮线虫的摄食管(feeding tube)排阻大颗粒而受到限制(Atkinson等，(1998)“对植物寄生线虫类的工程抗性”(Engineering resistance to plant-parasitic nematodes).《自由生活和植物寄生的线虫类的生理学和生化学》(The Physiology and Biochemistry ofFree-Living and Plant-parasitic Nematodes)(R.N.Perry和D.J.Wright编)，CABInternational 1998)。

脂肪酸是经研究可用于替代有毒、非特异性的有机磷酸酯、氨基甲酸酯和熏蒸剂杀虫剂的另一类天然化合物(Stadler等，(1994)Planta Medica 60(2)：128-132；美国专利号5,192,546；5,346,698；5,674,897；5,698,592；6,124,359)。据提示，脂肪酸通过以去污剂(增溶)作用负面干扰线虫表皮或真皮或通过脂肪酸与目标质膜的亲脂性区域直接相互作用产生杀虫效果(Davis等，(1997)Journal of Nematology29(4S)：677-684)。根据这种预计作用方式，脂肪酸可用于各种杀虫应用，包括除草剂(如Dow Agrosciences的SCYTHE是C9饱和脂肪酸壬酸)、杀菌剂、杀真菌剂(美国专利号4,771,571；5,246,716)和杀昆虫剂(如Safer，Inc.的SAFER INSECTICIDALSOAP)并不令人惊讶。

脂肪酸的植物毒性已成为种后农业应用中一般使用的主要限制(美国专利号5,093,124)，在保持杀虫活性的同时减轻这些不良影响是主要研究领域。由于脂肪酸在田间条件下半衰期相对较短，所以需要种后应用。

脂肪酸的酯化可显著降低其植物毒性(美国专利号5,674,897；5,698,592；6,124,359)。然而，这种修饰可导致杀线虫活性丧失，如亚油酸、亚麻酸和油酸中可见的(Stadler等，(1994)Planta Medica 60(2)：128-132)，由于其非特异性作用方式，完全分开杀虫性脂肪酸的植物毒性和杀线虫活性也许是不可能的。可能不令人惊讶，杀线虫的脂肪酸壬酸甲酯(美国专利号5,674,897；5,698,592；6,124,359)显示出杀虫活性开始时和观察到显著的植物毒性之间的“治疗窗”相对较小(Davis等，(1997)JNematol 29(4S)：677-684)。如果植物毒性和杀线虫活性衍生自非特异性破坏质膜的完整性，那么这是预期结果。

用外翻的仓鼠空肠段和回肠段证明，蓖麻油的主要成分蓖麻油酸具有对水和电解质吸收的抑制作用(Gaginella等，(1975)JPharmacol Exp Ther 195(2)：355-61)，并且对分离的肠上皮细胞有细胞毒性(Gaginella等，(1977)J Pharmacol Exp Ther201(1)：259-66)。这些特征可能是蓖麻油轻泻特性的来源，蓖麻油可用作人和家畜的泻剂(如蓖麻油由于其轻泻特性是一些去线虫方案的组分)。相反，蓖麻油酸的甲酯不能有效抑制仓鼠模型中的水吸收(Gaginella等，(1975)J Pharmacol Exp Ther195(2)：355-61)。

据报道，短链和中链脂肪酸和盐(如C6-C12)具有出色的杀真菌活性(美国专利号5,093,124和5,246,716)。不出所料，市售杀真菌和杀藓产品De-Moss主要包含此种大小范围的脂肪酸和盐。这些较短脂肪酸的植物毒性也使它们在较高浓度时适合用作广谱除草剂，如市售除草剂SCYTHE，其包含C9脂肪酸壬酸。美国专利号5,093,124、5,192,546、5,246,716和5,346,698告诉我们，C16-C20脂肪酸和盐如油酸(C18:1)是合适的杀昆虫脂肪酸。活性成分包含较长链的脂肪酸(富含C16和C18)成分的杀昆虫脂肪酸产品如M-PEDE和SAFER Insecticidal Concentrate代表了这种科学信息在现实中的应用。相反，现有技术为选择合适的广谱杀线虫脂肪酸提供的指导很少，存在的信息常常相互矛盾。

Stadler和同事们(Stadler等，(1994)Planta Medica 60(2)：128-132)检测了对抗L4和成年秀丽新小杆线虫(C.elegans)的一系列脂肪酸，发现许多普通的较长链脂肪酸如亚油酸(C18:2)、肉豆蔻酸(C14:0)、棕榈油酸(C16:1)和油酸(C18:1)具有显著的杀线虫活性。秀丽新小杆线虫对C6-C10(中等链)脂肪酸不十分敏感。Stadler等评论，他们的结果与植物寄生物贝氏滑刃线虫(Aphelenchoides besseyi)的早期研究相反，早期研究中发现C8-C12脂肪酸活性高，而亚油酸-C18脂肪酸-无活性。特定线虫对各种脂肪酸的敏感性不同再次证明了Djian和同事们的研究(Djian等，(1994)Pestic.Biochem.Physiol.50(3)：229-239)，他们证明，短链挥发性脂肪酸如戊酸的杀线虫能力可能因种类而异(例如南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的敏感性比腐生线虫(Panagrellusredivivus)高100倍以上)。近年来，Momin和Nair发现(Momin和Nair(2002)J.Agric.Food Chem.50(16)：4475-4478)，100μg/mL油酸处理24小时以上不能杀死腐生线虫或秀丽新小杆线虫(Caenorhabditis elegans)，这进一步混淆了情况，因为它与Stadler和同事们测定的25μg/mL的LD50(LD90100μg/mL)直接矛盾。

总之，不像杀真菌剂、除草剂和杀昆虫剂的情况，现有技术没有提供能有助于选择合适杀线虫脂肪酸的具体或可信的指导。而且，虽然De-Moss、SCYTHE、M-PEDE和SAFER分别是这三个领域中成功的杀虫性脂肪酸产品的例子，但至今仍没有广泛使用的市售杀线虫脂肪酸产品的例子。

据报道，许多植物种类对线虫类的抵抗力很强。记录最全面的包括万寿菊(Tagetes spp.)、猪屎豆(大托叶猪屎豆(Crotalaria spectabilis))、苘蒿(Chrysanthemumspp.)、蓖麻子(蓖麻(ricinus))、印楝(Azardiracta indica)和菊科(Asteraceae，Compositae)的许多成员(Hackney和Dickerson.(1975)J Nematol 7(1)：84-90)。在菊科植物的情况下，证明光动力学化合物α-三噻吩(terthienyl)能使根产生强效杀线虫活性。在种子作物固定之前犁地，投下(plow under)蓖麻子，作为绿肥。然而，蓖麻的显著缺点是种子含有可杀死人、宠物和家畜的有毒化合物(如蓖麻毒蛋白)，并且具有高过敏原性。然而在许多情况下，没有发现植物杀线虫活性的有效成分，因此难以从这些抗性植物获得市场上成功的杀线虫产品或将此抗性转移到农业经济上重要的作物如大豆和棉花上。

在一些商品栽培变种(如大豆)中，可获得对某些线虫的遗传抗性，但这些数量有限，而且同时具有所需的农艺学特征和抗性的栽培变种的可利用度有限。根据遗传重组通过性交以常规植物品系产生具有线虫抗性的市售品种是一个缓慢过程，还常常受缺少合适种质阻碍。

引人注意的是，在较大分子被大小排阻时，小化学效应物可具有显著优点(如固着性植物寄生线虫类)。然而，除非小分子杀线虫活性物质在植物中具有高活动性，或者化学刺激提高了系统抗性，编码酶的转基因仍然必须以空间和时间合适的方式表达，以发挥作用。对于许多植物寄生线虫，这意味着杀线虫产物的根表达可能对线虫控制很重要。据报道，用组成性启动子如花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动某些羟化酶表达时，在非种子组织(如根或叶)中没有观察到显著的蛋白质产量或羟化酶活性，也没有羟基化脂肪酸累积(van de Loo等，(1995)Proc NatlAcadSci USA92(15)：6743-7；Broun和Sommerville(1997)Plant Physiol.113(3)：933-942；Broun等，(1998)Plant J.13(2)：201-210；US 6,291,742；US 6,310,194)。

仍然迫切地需要开发出环境安全、特异性靶向的方式来控制植物寄生线虫类。在专业作物市场上，在草莓、香蕉以及其它高价值蔬菜和水果中线虫感染引起的经济困难最高。在大播种面积作物市场上，线虫对大豆和棉花的伤害最大。然而，还有许多其它作物患有线虫感染，包括马铃薯、胡椒、洋葱、柑橘、咖啡、甘蔗、温室观赏植物和高尔夫球场草坪草。

发明概述

本发明涉及包含编码脂肪酸羟化酶或环加氧酶的序列的一种DNA构建物，携带这种构建物的转基因植物和制备这种转基因植物的方法。这些转基因植物可具有增强的线虫抗性，并可用于以环境安全方式控制线虫。本发明部分基于令人惊讶的发现：某些羟化或环加氧化的脂肪酸和甲酯(如蓖麻醇酸酯、灭草猛)具有杀线虫活性。相对于其它18碳游离脂肪酸如油酸、反油酸和亚油酸，这些脂肪酸显示出显著增强的杀线虫活性。可将编码羟化酶或环加氧酶多肽的核酸引入植物中，以提高羟化或环加氧化的脂肪酸的水平，从而帮助控制线虫对商业上重要的植物种类的伤害。这些新型羟化酶和环加氧酶构建物也可用于增加羟基和环氧脂肪酸的累积，用于其它工业用途(如提供蓖麻油酸的安全来源)。

在一个方面，本发明描述了含有至少一个DNA构建物的转基因植物的特征。所述构建物包含在植物营养组织中产生表达的至少一个调控元件。该调控元件操作性连接于编码能有效催化底物转变为C16、C18或C20单不饱和脂肪酸产物的多肽的核酸。所述C16-C20单不饱和脂肪酸产物可以是：

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，式中R₁和R₂都是羟基，R₁和R₂中一个是羟基、另一个是氢，或者R₁和R₂中一个是酮、另一个是氢，R₃是C2、C4或C6烷基。所述C16-C20单不饱和脂肪酸产物也可以是：

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，其中R₃是C2、C4或C6烷基。

C＝C双键可以是顺式或反式。C16-C20单不饱和脂肪酸产物的R₃部分可以是C2烷基。C16-C20单不饱和脂肪酸产物可含有羟基、氢和C4烷基(分别如R₁、R₂和R₃部分)，如蓖麻醇酸酯产物。或者，C16-C20单不饱和脂肪酸产物在从羰基碳数第12个和第13个碳上可具有环氧部分，R₃上具有C₄烷基，如灭草猛产物。

相对于缺少该DNA构建物的相应植物，该植物的营养组织中羟基-脂肪酸，如蓖麻油酸的含量可能增加。羟基-脂肪酸可占该组织总脂肪酸含量的约0.01％-25％。在一些实施方式中，相对于缺少该DNA构建物的对应植物，该植物的营养组织中环氧-脂肪酸，如斑鸠菊酸的含量可能增加。环氧-脂肪酸可占该组织总脂肪酸含量的约0.01％-25％。

调控元件可以是5’-调控元件或3’-调控元件。调控元件可在根组织或叶组织中产生表达。例如，5’-调控元件可以是CaMV35S启动子、马铃薯核糖体蛋白S27a Ubi3启动子、苜蓿组蛋白H3.2启动子、IRT2启动子、RB7启动子、拟南芥(Arabidopsis)FAD25’-UTR、拟南芥FAD3 5’-UTR、Ubi3 5’-UTR、苜蓿组蛋白H3.2 5’-UTR或CaMV35S5’-UTR。

在DNA构建物中，可以有一个以上调控元件可操作性连接于多肽编码序列。例如，DNA构建物可含有两个5’-调控元件。第一个5’-调控元件可以是Ubi3启动子，第二个5’-调控元件可以是拟南芥FAD2 5’-UTR、拟南芥FAD3 5’-UTR、马铃薯核糖体蛋白S27a Ubi3 5’-UTR或CaMV35S 5’-UTR。在一些实施方式中，DNA构建物具有5’-调控元件和3’-调控元件。3’-调控元件可以是Ubi3终止子或E9豌豆终止子。或者，5’-调控元件可以是拟南芥FAD2 5’-UTR或拟南芥FAD3 5’-UTR，3’-调控元件可以是拟南芥FAD2 3’-UTR或拟南芥FAD3 3’-UTR。

植物中的DNA构建物可包含编码PDAT或DAGAT或脂酶多肽的核酸，其操作性连接于在植物营养组织中产生表达的一个或多个调控元件。或者，PDAT或DAGAT或脂酶编码序列和调控元件可以是植物中分离的DNA构建物的一部分。在一些实施方式中，植物含有编码δ-12或δ-15脂肪酸去饱和酶的DNA构建物。

该多肽的氨基酸序列可以是SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、角力还阳参(C.palaestina)环加氧酶GenBank_No.CAA76156、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、角力还阳参环加氧酶嵌合体SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ IDNO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：138。编码该多肽的核酸可以是SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ IDNO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132或SEQ ID NO：133。

该植物可以是单子叶植物或双子叶植物。例如，该植物可以是大豆、玉米、棉花、水稻、烟草、番茄、小麦、香蕉、胡萝卜、马铃薯、草莓或草坪草。

在另一方面，本发明描述了制备转基因植物的方法的特征。该方法包括获得如本文所述的DNA构建物，和将该构建物引入植物。该DNA构建物可包含编码本文所述多肽的核酸，并可包含本文所述调控元件。

本发明也描述了筛选转基因植物的驱虫活性的方法的特征。该方法包括在有效测定该植物是否具有驱虫活性的条件下将转基因植物与线虫接触。例如，线虫可以与转基因植物的一个或多个根接触。该转基因植物含有DNA构建物，该DNA构建物包含编码本文所述羟化酶或环加氧酶多肽的核酸，并可包含本文所述调控元件。也可用植物组织，如所述转基因植物的根组织、叶组织或茎组织进行该方法。

在另一方面，本发明描述了分离核酸的特征。核酸可包含以下所列核苷酸序列：SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：129、SEQ IDNO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132或SEQ ID NO：133。

在另一方面，本发明描述了重组核酸构建物的特征。该构建物包含在植物营养组织中产生表达的至少一个调控元件。该调控元件操作性连接于具有以下所列核苷酸序列的核酸：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ IDNO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132或SEQ ID NO：133。该调控元件可在(例如)根或叶中产生表达。该调控元件可以是具有SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：44所列核苷酸序列的5’-调控元件。核酸构建物还可包含具有SEQ ID NO：45所列核苷酸序列的3’-调控元件。

本发明也描述了携带DNA构建物的转基因植物的特征。该构建物包含编码脂肪酸环加氧酶多肽或脂肪酸羟化酶多肽的核酸，其操作性连接于使该多肽在植物营养组织中表达的调控元件。该多肽可含有以下氨基酸序列：SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、角力还阳参环加氧酶(GenBank_No.CAA76156)、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：134、SEQ IDNO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：138。

相对于缺少该DNA构建物的对应植物，该植物的营养组织中羟基-脂肪酸，如蓖麻油酸的含量可能显著增加。羟基-脂肪酸可占该组织中总脂肪酸含量的约0.1％-10％。在一些实施方式中，相对于缺少该DNA构建物的对应植物，该植物的营养组织中环氧-脂肪酸，如斑鸠菊酸的含量可能显著增加。环氧-脂肪酸可占该组织中总脂肪酸含量的约0.1％-10％。

在另一方面，本发明描述了含有DNA构建物的转基因植物的特征。该构建物包含在植物种子的至少一种组织中产生表达的至少一个调控元件。该调控元件操作性连接于编码能有效催化底物转变为C16、C18或C20单不饱和脂肪酸产物的多肽的核酸。所述C16-C20单不饱和脂肪酸产物可以是：

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，其中R₁和R₂都是羟基，R₁和R₂中一个是羟基、另一个是氢，或者R₁和R₂中一个是酮、另一个是氢，R3是C2、C4或C6烷基。所述C16-C20单不饱和脂肪酸产物也可以是：

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，其中R₃是C2、C4或C6烷基。

C＝C双键可以使顺式或反式。C16-C20单不饱和脂肪酸产物的R₃部分可以是C2烷基。C16-C20单不饱和脂肪酸产物可含有羟基、氢和C4烷基(分别如R₁、R₂和R₃部分)，如蓖麻醇酸酯产物。或者，C16-C20单不饱和脂肪酸产物在从羰基碳数第12个和第13个碳上可具有环氧部分，R₃上具有C₄烷基，如灭草猛产物。

调控元件可以是5’-调控元件。相对于缺少该DNA构建物的对应植物，该植物种子的至少一种组织中羟基-脂肪酸，如蓖麻油酸的含量可能增加。在一些实施方式中，相对于缺少该DNA构建物的对应植物，该植物种子的至少一种组织中环氧-脂肪酸，如斑鸠菊酸的含量增加。

本文所用“纯化多肽”指与天然情况下伴随其存在的其它蛋白质、脂质和核酸分离的多肽。这种多肽至少可占纯化制剂干重的10、20、50、70、80或95％。

“分离核酸”是与任何天然产生核酸的结构，或与占据三个以上分离基因的天然产生基因组核酸片段的结构不同的核酸。因此，该术语包括例如：(a)一种DNA，它是天然产生的基因组DNA分子的一部分但不侧接于其天然产生生物体的基因组中该分子部分侧接的两个核酸序列；(b)以某种方式掺入载体或者掺入原核生物或真核生物的基因组DNA中的核酸，得到的分子与天然产生的载体或基因组DNA不同；(c)一种分离分子，如cDNA、基因组核酸片段、聚合酶链反应(PCR)产生的片段或限制性片段；和(d)作为杂交体或融合核酸(如编码融合蛋白的基因)的一部分的工程改造核酸，如重组DNA分子。本发明中分离核酸分子还包括合成产生的分子，以及经化学改变和/或具有修饰主链的核酸。此定义特别排除的是以下不同物质的混合物中存在的核酸：(i)DNA分子、(ii)转染细胞或(iii)DNA文库如cDNA或基因组DNA文库的细胞克隆，或(例如)含有基因组DNA限制性消化物的凝胶片中存在的几百个至几百万个其它核酸中的其它核酸。虽然术语“核酸分子”主要指物理上的核酸分子，术语“核酸序列”指核酸分子的核苷酸序列，但这两种术语可互换使用。

本文中提到给定多肽时所用术语“基本纯”指该多肽基本不含其它生物大分子。基本纯的多肽至少为75％(如至少80、85、95或99％)纯(干重)。可用任何合适的标准方法，如柱色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳或HPLC分析测定纯度。

术语“异位表达”指对所研究的具体基因或酶而言不正常的亚细胞模式、细胞类型、组织类型和/或发育或时间表达。它也指异源基因，如生物体中天然不存在的基因(以下也称为“转基因”)的表达。这种异位表达不一定排除正常组织或发育阶段中的表达。

本文所用术语“转基因”指与被引入核酸的转基因植物、动物或细胞部分或完全异源，即外来的核酸，或者与引入核酸的转基因植物、动物或细胞的内源性基因同源，但插入植物基因组以改变所插入的细胞基因组的核酸(如将其插入不同于天然基因的位置或其插入导致敲除)。转基因可包含操作性连接于多肽编码序列的一个或多个调控元件。

本文所用术语“转基因细胞”指含有转基因的细胞。本文所用“转基因植物”是任何其中一个或多个细胞、或所有细胞包含转基因的植物。转基因可整合到染色体中，或者转基因可以是染色体外复制的DNA。

术语“操作性连接”、“操作性插入”或“操作性相连”指调控元件位于与多肽编码序列相关的DNA构建物中，以有效表达多肽。

本文所用术语“在严格条件下杂交”和“在高度严格条件下杂交”指以下条件：在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)缓冲液中约45℃下杂交，然后用0.2×SSC缓冲液、0.1％SDS在60℃或65℃洗涤两次。本文所用术语“在低严格条件下杂交”指以下条件：在6X SSC缓冲液中约45℃下杂交，然后用6×SSC缓冲液、0.1％(w/v)SDS在50℃洗涤两次。

操作性连接于核酸序列的“异源启动子”指不与核酸序列天然相连的启动子。

本文所用术语“结合”指未共价连接的第一种化合物和第二种化合物之间发生物理作用的能力。结合事件的表观解离常数可以是1mM或更低，例如10nM、1nM、0.1nM或更低。

本文所用术语“特异性结合”指同时暴露于给定配体和非靶配体时，以及相对于抗体存在的靶配体和非靶配体都摩尔过量时，抗体通过结合于靶配体、不结合非靶配体区分靶配体和非靶配体的能力。

本文所用术语“改变活性”指活性增加或降低(如多肽结合或调节其它多肽或分子的能力增加或降低)的水平改变，所述活性具体是脂肪酸去饱和酶样活性或脂肪酸去饱和酶活性(如在脂肪酸的δ-12位引入双键的能力)。可通过定性或定量观察检测该改变。如果进行定量观察，如果对多个观察结果进行综合分析，本领域技术人员可使用常规的统计学分析来鉴定水平改变和统计学参数(例如)p值小于0.05时的调节。

除非另有说明，“取代”碳、碳链或甲基、烷基中的一个或多个氢可被另一基团如卤素或羟基所取代。

除非另有说明，本文所用科技术语的含义与本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义相同。虽然可用与本文所述方法和材料相似或等效的方法和材料实施本发明，但下面描述了合适的方法和材料。将本文所述的所有发表物、专利申请、专利和其它参考文献以全文纳入本文作参考。万一有抵触，本说明书，包括定义将其支配作用。此外，所述材料、方法和实施例仅为说明性，不旨在限制。

附图和以下说明书中列出了本发明一个或多个实施方式的详情。通过说明书和附图、实施例以及权利要求书，可以明白本发明的其它特征、目的和优点。

附图简要说明

图1是一组图，它们描述了蓖麻油酸、反蓖麻酸、12-氧-9(Z)-十八碳烯酸、12-氧-9(E)-十八碳烯酸、(12，13)-环氧-反式-9-十八碳烯酸和斑鸠菊酸的结构。以羰基(羧基)碳为碳1，对碳原子编号。R＝OH(酸)；OCH₃(甲酯)；O-Na⁺(钠盐)。

图2是羟化酶和环加氧酶多肽(SEQ ID NO：13-24；34-42)与拟南芥(A.thaliana)(SEQ ID NO：125)、甘蓝型油菜(B.napus)(SEQ ID NO：126)、栽培大豆(G.max)(SEQID NO：127)和栽培芝麻(S.indicum)(SEQ ID NO：128)FAD2δ-12去饱和酶多肽(分别为gi|15229956|ref|NP_187819.1、gi|8705229|gb|AAF78778.1、gi|904154|gb|AAB00860.1和gi|8886726|gb|AAF80560.1)的序列比对。

图3是转基因环加氧酶和羟化酶构建物的示意图。HA指氨基酸序列YPYDVPDYA(SEQ ID NO：139)，它对应于人流感病毒血凝素的残基99-107。LB和RB分别指土壤杆菌(Agrobacterium)T-DNA的左边界和右边界。

图4是质粒pUCAP6的示意图。

图5是质粒pUCAP4的示意图。

图6是质粒pUCAP3的示意图。

发明详述

本发明描述了一种基因和遗传构建物，它编码能有效产生显示出令人惊讶的杀线虫活性小分子化学物质的多肽。该杀线虫活性部分由于选择性抑制了似乎是线虫必需，而在脊椎动物和植物中不存在或不必需的代谢过程。因此，本发明提供了迫切需要的用于环境安全地控制植物寄生线虫类的DNA构建物、转基因植物和制备这种植物的方法。

脂肪酸

不饱和脂肪酸是生物膜行使正确功能所必需的。在生理温度下，仅含饱和脂肪酸的极性甘油脂不能形成作为生物膜基本结构的液晶双层。将合适数量的双键引入(称为去饱和的过程)膜甘油脂的脂肪酸能降低凝胶转变为液晶相的温度，并提供具有必需流动性的膜。膜的流动性对于维持脂质双层的屏障特性以及某些膜结合酶的活化和功能很重要。也有证据说明，不饱和对乙醇和氧化应激产生一些保护，这表明膜脂肪酸的不饱和程度不仅对温度适应具有重要性。不饱和脂肪酸也是动物中多不饱和酸(PUFA)花生四烯酸和二十碳五烯酸的前体，它们是前列腺素的重要来源。这些分子是局部激素，能改变合成它们的细胞和相邻细胞的活性，介导繁殖、免疫、神经生理、热生物学以及离子和液体转运中的过程。

细胞膜调节不饱和程度的能力主要取决于脂肪酸去饱和酶的作用。去饱和酶能用分子氧和来自NADH(或NADPH)的还原等效物催化插入双键，从而在脂肪酰基链底物的特定位置上引入不饱和键。在许多系统中，该反应采用由NAD(P)H、细胞色素b5还原酶和细胞色素b5组成的短电子传递链，将电子从NAD(P)H和碳碳单键转移到氧上，形成水和双键(C＝C)。许多真核去饱和酶是内质网(ER)结合的非血红素二铁-氧合蛋白，含有三个保守的富组氨酸基序和两个疏水残基长臂。认为这些疏水α螺旋结构域使该蛋白大部分暴露于ER的胞浆面，并组织活性位点组氨酸来适当调节活性二铁-氧合部分。

虽然大多数真核生物，包括哺乳动物可将双键引入18碳脂肪酸的Δ9位置，但哺乳动物不能将双键插入Δ12或Δ15位置。因此，亚油酸(18:2Δ9，12)和亚麻酸(18:3Δ9，12，15)必须获自食物，因此称为必需脂肪酸。由于开花植物不难去饱和Δ12和Δ15位，这些食物脂肪酸主要来自植物来源。某些无脊椎动物，包括一些昆虫和线虫可从头合成所有组成脂肪酸，包括亚油酸和亚麻酸。例如，秀丽新小杆线虫可从头合成许多多不饱和脂肪酸，包括花生四烯酸和二十碳五烯酸，这是哺乳动物或开花植物所不具有的特征(Spychalla等，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci USA 94(4)：1142-7)。

在酿酒酵母(S.cerevisiae)中表达秀丽新小杆线虫去饱和酶基因fat2，据证明它是δ-12脂肪酸去饱和酶(Peyou-Ndi等，(2000)Arch.Biochem.Biophys.376(2)：399-408)。此酶在第12个和第13个碳(从羧基端计)之间引入双键，并可分别将单不饱和油酸(18:1Δ9)和棕榈油酸(16:1Δ9)转变为双不饱和亚油酸(18:2Δ9，12)和16:2Δ9，12脂肪酸。

由于几种原因，线虫δ-12酶可能是抗线虫化合物的良好靶点。首先，如上所述，认为哺乳动物不含δ-12脂肪酸去饱和酶。此外，系统发育上，线虫酶似乎不同于植物中它的同源物，氨基酸水平的成对序列相同性小于40％，系统发育学分析证明，线虫δ-12和ω-3去饱和酶的成簇不同于植物中的同源物。转基因拟南芥和大豆的实验揭示出，植物可耐受亚油酸或亚麻酸的显著减少，这表明δ-12去饱和酶抑制剂可能对植物无毒(Miquel和Browse(1992)J.Biol.Chem.267(3)：1502-9；Singh等，(2000)Biochem.Society Trans.28：940-942；Lee等，(1998)Science 280：915-918)。因此，该酶的抑制剂可能对哺乳动物无毒。

我们惊讶地发现，母体脂肪酸和某些脂肪酸类似物的甲酯(如蓖麻醇酸酯、灭草猛)是杀线虫性的，具有与线虫δ-12去饱和酶的特异性抑制剂相一致的活性。与18碳游离脂肪酸和酯如油酸酯、反油酸酯和亚油酸酯相比，脂肪酸和甲酯的驱虫活性明显增加。与短链脂肪酸和酯如壬酸(壬酸或壬酸甲酯)相反，预计是δ-12去饱和酶抑制剂的脂肪酸类似物的植物毒性降低，因此可有效使用，同时最大程度减少对非靶生物体的不良损伤。合适的线虫抑制性化合物包括含有以下脂肪酸的游离或酯化形式的化合物：蓖麻油酸(12-羟基十八碳-顺-9-烯酸)、羟基棕榈油酸(12-羟基十六碳-顺-9-烯酸)、反蓖麻酸、斑鸠菊酸((12，13)-环氧-十八碳-顺-9-烯酸)和12-氧-9(Z)-十八碳烯酸。

多肽

适合用于本发明的多肽能有效催化底物转变为C16、C18或C20单不饱和脂肪酸产物，如羟化脂肪酸或环加氧化脂肪酸。用于本发明的羟化酶或环加氧酶的酶产物一般是长度为16、18或20个碳的脂肪酸，或其类似物。所述产物一般在δ-9位(从羰基(羧基)碳计C9和C10之间)具有顺式(Z)或反式(E)碳双键。所述产物也在C12、C13或者C12和C13上具有羟基或环氧修饰。本发明的脂肪酸羟化酶或环加氧酶包括一种多肽，它显示能够在合适条件下催化由辅酶A、酰基运载体蛋白(ACP)或脂质连接的单烯醇脂肪酸底物产生蓖麻油酸、lesquerolic、羟基芥子酸(16-羟基甘二烷-顺-13-烯醇酸)或羟基棕榈油酸(12-羟基十六碳-顺-9-烯酸)的多肽。

在一些实施方式中，产物是具有以下结构的C16-C20单不饱和氧代-脂肪酸：

R₁和R₂之一或二者可以是羟基，如R₁是氢、R₂是羟基，R₁是羟基、R₂是氢，或者R₁和R₂都是羟基。或者R₁可以是酮、R₂是氢，或者R₁可以是氢、R₂是酮。R₃可以是C2烷基、C4烷基或C6烷基。

在其它实施方式中，产物是具有以下结构的C16-C20环氧单不饱和脂肪酸产物：

如果上述结构中X是氢，那么产物是游离脂肪酸。然而，X也可以是CoA、ACP、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺。X也可以是甘油、甘油酯、甲基或Na+。在上述两种结构中，第9和第10个碳之间的双键可以是顺式或反式。

可用如US 6,310,194所述的羟化酶试验或US 6,329,518所述的环加氧酶试验检测多肽，从而测定该多肽具有羟化酶活性或是环加氧酶活性。鉴定合适多肽的快速有效方法是分析表达受试多肽的酵母产生的脂肪酸。由于酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)不产生亚油酸(δ-12去饱和酶-样环加氧酶的底物)，所以提供外源性亚油酸或亚油酸甲酯作为底物。可通过(例如)全部脂肪酸水解和转化为甲酯后的气相色谱-质谱(GC-MS)测定底物向羟化或环加氧化产物的转化。当表达该多肽的酿酒酵母中产生的羟基-或环氧-脂肪酸产量统计学显著性大于缺少或不表达该多肽的对应酿酒酵母对照的产量时，认为该多肽具有羟化酶活性或环加氧酶活性。鉴定合适多肽的另一种技术是分析拟南芥营养组织或种子中至少一种组织(如叶组织、根组织或者胚乳或胚芽组织)的脂肪酸含量。

一般地，采用合适的参数统计或非参数统计方法，如卡方检验、斯氏t检验、Mann-Whitney检验或F检验计算的p≤0.05时，认为有统计学显著性差异。在一些实施方式中，当p＜0.01、p＜0.005或p＜0.001时具有统计学显著性差异。例如，表达羟化酶多肽的转基因拟南芥植株的种子中蓖麻油酸的水平与对照拟南芥植株中的水平相比有统计学显著性差异，表明该多肽的表达导致蓖麻油酸水平增加。羟基-脂肪酸的统计学显著性增加量可占样品总脂肪酸含量重量的约0.01％-25％，例如，约0.03％-20％、约0.05％-20％、约0.1％-10％、约0.1％-5％、约0.2％-3％、约0.5％-5.0％、约0.5％-10％、约2.0％-15％、约1.0％-5.0％、约1.0％-10％、约3％-8％、约3％-10％、约4％-9％、约4％-13％、约5％-20％、约5％-15％或约5％-10％。环氧-脂肪酸的显著性增加量可占样品总脂肪酸含量重量的约0.01％-35％，例如，约0.03％-25％、约0.05％-20％、约0.1％-5％、约0.2％-3％、约0.5％-5.0％、约0.5％-10％、约2.0％-15％、约1.0％-5.0％、约1.0％-10％、约3％-8％、约3％-10％、约4％-9％、约4％-13％、约5％-20％、约5％-15％或约5％-10％。

在一些实施方式中，该多肽是分离自Lesquerella或蓖麻(ricinus)的基因编码的羟化酶。在其它实施方式中，该多肽是分离自琉璃菊(Stokesia)、还阳参(Crepis)或斑鸠菊(Vernonia)的基因编码的羟化酶。这些酶的例子包括来自蓖麻(ricinus communis)、Lesquerella fendleri、Lesquerella lindheimeri、Lesquerella gracilis的油酸羟化酶和来自琉璃菊(Stokesia laevis)、粗糙还阳参(Crepis biennis)、角力还阳参(Crepis palaestina)和斑鸠菊(Vernonia galamensis)的亚油酸环加氧酶。

在一些实施方式中，适合用于本发明的多肽是两种或多种天然产生的氨基酸序列的融合物。例如，获自蓖麻、Lesquerella fendleri、Lesquerella lindheimeri或Lesquerella gracilis的天然产生的油酸羟化酶多肽N末端的大约30个氨基酸可被拟南芥(Arabidopsis thaliana)FAD2基因的N-末端氨基酸取代。参见例如，SEQ ID NO：19-23。或者，融合多肽可以是N-末端氨基酸被拟南芥FAD2基因的N-末端氨基酸取代的获自琉璃菊或粗糙还阳参的天然产生的亚油酸环加氧酶(如SEQ ID NO：24)。

可用本文提供的特定示例序列获得其它天然产生的羟化酶和环加氧酶。而且，人们明白可以制备具有修饰的氨基酸序列的合成羟化酶。修饰的氨基酸序列包括被突变、截短、增加等的序列，这种序列是部分或完全合成的。

在一些实施方式中，适合用于本发明的羟化酶或环加氧酶与靶多肽的总氨基酸序列相同性至少为60％，如75％、80％、85％、90％、95％、96％、98％或99％。

可按照如下方法测定所研究的任何核酸或氨基酸序列(如本文所述任何羟化酶多肽)相对于另一“靶”核酸或氨基酸序列的序列相同性百分数。通过以下方法计算此相同性：测定比对核酸序列中匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以比对核苷酸总数乘以100。匹配位置指比对核酸序列中相同位置上出现相同核苷酸的位置。也可测定任何氨基酸序列的序列相同性百分数。为了确定序列相同性百分数，用含有BLASTN 2.0.14版和BLASTP 2.0.14版的单机版BLASTZ中的BLAST 2Sequences(Bl2seq)程序，比较靶核酸序列或氨基酸序列与鉴定的核酸序列或氨基酸序列。此单机版BLASTZ可获自Fish和Richardson的网址(万维网址：“fr.com/blast”)或美国政府的国家生物技术信息中心网址(万维网址：“ncbi.nlm.nih.gov”)。可在BLASTZ所附readme文件中找到解释如何使用B12seq程序的说明。

Bl2seq用BLASTN或BLASTP算法比较两个序列。用BLASTN比较核酸序列，用BLASTP比较氨基酸序列。为了比较两个核酸序列，选项设定如下：-i设定为含有第一个待比较核酸序列的文件(如C：\seq1.txt)；-j设定为含有第二个待比较核酸序列的文件(如C：\seq2.txt)；-p设定为blastn；-o设定为任何所需文件名(如C：\output.txt)；-q设定为-1；-r设定为2；所有其它选项均为默认设置。以下命令将产生含有两个序列的比较的输出文件：C：\Bl2seq-i c：\seq1.txt-j c：\seq2.txt-p blastn-o c：\output.txt-q-1-r2。如果靶序列与所鉴定序列的任何部分具有同源性，那么指定的输出文件将产生比对序列中具有同源性的区域。如果靶序列与所鉴定序列的任何部分没有同源性，那么指定的输出文件将不产生比对序列。

一旦比对后，对被鉴定的序列与靶序列比对中存在的、从匹配位置开始至任何其它匹配位置结束的连续核苷酸进行计数，以测定长度。匹配位置是靶序列和鉴定序列中都存在的相同核苷酸的位置。不计入靶序列中存在的缺口，因为缺口不是核苷酸。同样，不计入鉴定序列中存在的缺口，因为计入了靶序列核苷酸、而非鉴定序列的核苷酸。

通过以下方法测定具体长度上的相同性百分数：对该长度上的匹配位置进行计数，将该数字除以长度，然后将得到的值乘以100。例如，如果(i)将500个氨基酸的靶序列与所研究氨基酸序列进行比较，(ii)通过与靶序列中200个氨基酸区域的第一个和最后一个氨基酸匹配的所研究序列区域比对，Bl2seq程序产生这200个氨基酸，和(iii)这200个比对氨基酸中的匹配数为180，那么这500个氨基酸的靶序列所含长度为200，在该长度上的序列相同性为90％(即180/200×100＝90)。在一些实施方式中，适合用于本发明的多肽的氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO：13、14、15、16、17、18、36、134、135、136、137或138的序列相同性为40％。在其它实施方式中，适合用于本发明的多肽的氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID NO：13、14、15、16、17、18、36、134、135、136、137或138的序列相同性大于40％(如＞40％、＞50％、＞60％、＞70％、＞80％、＞90％或＞95％)。

应理解，与鉴定序列比对的单个核酸靶序列的不同区域各自可具有其自身的相同性百分数。需要注意，将相同性百分数值四舍五入到十分之一。例如，78.11、78.12、78.13和78.14四舍五入到78.1，而78.15、78.16、78.17、78.18和78.19四舍五入到78.2。也应注意到，长度值总是整数。

鉴定模板、或所研究多肽中的保守区可有助于同源性多肽序列分析。通过定位某模板多肽一级氨基酸序列中的一个区域鉴定保守区，该区域是重复序列，形成一些二级结构(如螺旋和β折叠)，建立带正电或负电的结构域，或者代表蛋白质基序和结构域。参见例如，描述各种蛋白质基序和结构域的共有序列的Pfam网址：http：//www.sanger.ac.uk/Pfam/和http：//genome.wustl.edu/Pfam/。Pfam数据库中包括的信息的说明见Sonnhammer等(1998)Nucl.Acids Res.26：320-322；Sonnhammer等(1997)Proteins 28：405-420；和Bateman等(1999)Nucl.Acids Res.27：260-262。通过Pfam数据库，可对蛋白质基序和结构域的共有序列和模板多肽序列进行比对，以测定保守区。

也可通过比对紧密相关的植物种类中相同或相关多肽的序列测定保守区。紧密相关的植物种类优选来自同一科。或者，用全部是单子叶植物或全部是双子叶植物的植物种类的序列进行比对。在一些实施方式中，比对两种不同植物种类的序列足矣。例如，可用加拿大低酸油菜子(canola)和拟南芥的序列鉴定一个或多个保守区。

一般地，氨基酸序列相同性至少约35％的多肽可用于鉴定保守区。相关多肽的保守区的氨基酸序列相同性有时至少为40％(如至少50％，至少60％；或至少70％，至少80％，或至少90％)。在一些实施方式中，靶多肽和模板多肽的保守区的氨基酸序列相同性至少为92、94、96、98或99％。可从氨基酸或核苷酸序列推断氨基酸序列相同性。

本发明所用多肽的氨基末端和羧基末端可任选地具有其它氨基酸残基。例如，6x His-标签或FLAG+残基可连接于多肽的氨基末端。参见例如，美国专利号4,851,341和5,001,912。另一个例子是，可将报道多肽如绿色荧光蛋白(GFP)融合于多肽的羧基端。参见例如，美国专利号5,491,084。

核酸

适合用于本发明的核酸是编码本文所述多肽的核酸。一般地，将这种核酸掺入适合引入植物和整合入植物基因组的DNA构建物。将包含编码羟化酶或环加氧酶多肽的核酸的DNA构建物操作性连接于在营养组织或植物种子的至少一种组织中产生表达的一个或多个调控元件。一般地，DNA构建物包括用于在转化植物中表达的5’-调控元件和3’-调控元件。在一些实施方式中，这种构建物是嵌合的，即编码序列和一个或多个调控序列来自不同来源。例如，多肽编码序列可以是蓖麻羟化酶，5’-调控元件可以是马铃薯S27a启动子。然而，也可采用非嵌合DNA构建物。DNA构建物也可包含克隆载体核酸。适合用于本发明的克隆载体是市售的和本领域普通技术人员通常使用的载体。

调控元件本身一般不编码基因产物。但是，调控元件影响编码序列的表达，即编码序列的转录以及所得mRNA的加工和翻译。适合用于DNA构建物的调控元件的例子包括调节核酸序列表达的启动子序列、增强子序列、效应元件或诱导元件。本文所用“操作性连接”指构建物中调控元件相对于核酸编码序列的定位，以便允许或有助于编码多肽的表达。构建物所包括元件的选择取决于几种因素，包括但不限于：复制效率、选择性、诱导性、所需表达水平和细胞或组织特异性。

合适的调控元件包括仅仅或主要在某些细胞类型中启动转录的启动子。例如，营养组织如基本分生组织、维管束、形成层、韧皮部、皮层、芽顶端分生组织、侧芽分生组织、根顶端分生组织、侧根分生组织、叶基、叶肉或叶表皮的特异性启动子可以是合适的调控元件。细胞类型或组织特异性启动子可驱动操作性连接序列在营养组织以外的组织中表达。因此，本文所用细胞类型或组织特异性启动子是驱动优选在靶组织中表达，但也可在其它细胞类型或组织中产生一些表达的启动子。鉴定和表征植物基因组DNA中启动子区域的方法包括例如，以下参考文献所述方法：Jordano等(1989)Plant Cell，1：855-866；Bustos等(1989)Plant Cell，1：839-854；Green等(1988)EMBO J.7：4035-4044；Meier等(1991)Plant Cell，3：309-316；和Zhang等(1996)Plant Physio.110：1069-1079。

在5’-非翻译区(5’-UTR)和3’-非翻译区(3’-UTR)中可发现其它合适的调控元件。术语5’-UTR和3’-UTR分别指位于DNA构建物编码序列的5’和3’，和可分别在mRNA启动密码子的5’和终止密码子的3’发现的核酸。5’-UTR和3’-UTR可包括影响编码序列转录的元件，以及影响mRNA加工和编码序列翻译的元件。

适合用于植物的调控元件包括胭脂碱(nopaline)和甘露碱(Mannopine)合酶调控元件、花椰菜花叶病毒35S启动子、拟南芥根外缘IRT2启动子、马铃薯(Solanumtuberosum)核糖体S27a Ubi3启动子、水稻肌动蛋白I基因启动子和玉米的泛素I基因启动子(McElroy等，(1995)Mol.Breed.1：27-37)。感兴趣的可诱导线虫反应(responsive)启动子包括烟草tobRB7(Yamamoto等，(1991)Plant Cell，3(4)：371-382)、向日葵Sun-RB7(Sarda等，(1999)Plant Mol Biol.40(1)：179-191)和马铃薯potRB7(Heinrich等，(1996)Plant Physiol.112(2)：861-864)启动子。可用于需要根表达的应用的其它示范性启动子-5’-UTR构建物见表8。

在植物营养组织如叶或根中需要多肽表达的实施方式中，考虑了采用全部拟南芥FAD2或FAD3基因的5′上游非编码区(5’-UTR)和3′下游非编码区(3’-UTR)或其中一部分。同样合适的是，通过交换去饱和酶如FAD2或FAD3去饱和酶的前(约)30个氨基酸与核酸SEQ ID NO：7-12和氨基酸序列SEQ ID NO：19-24所列羟化酶或环加氧酶的等价N末端区，构建嵌合羟化酶和环加氧酶。尤其需要采用具有非种子特异性UTR的嵌合去饱和酶样环加氧酶或羟化酶。

DNA构建物中可提供调控元件如转录终止区。如果DNA构建物中的编码序列和转录终止区来自不同天然产生来源，那么转录终止区一般包含获得该终止区的结构基因的3′端序列的至少约0.5kb，优选约1-3kb。

DNA构建物也可含有编码其它多肽的序列。这种多肽可(例如)帮助在宿主生物中引入或维持核酸构建物。可能的宿主细胞包括原核和真核细胞。宿主细胞可以是单细胞生物，或者来自分化或不分化的多细胞生物体，这取决于所需用途。根据宿主，调控元件可包括来自病毒、质粒或染色体基因等的元件。为了在原核或真核微生物，尤其是单细胞宿主中表达，可采用各种组成型或诱导型启动子。在微生物中表达可提供所需多肽的来源。所述转录起始区是来自细菌和酵母宿主的区域，包括基因如β-半乳糖苷酶、T7聚合酶、色氨酸E等，所述宿主有(例如)大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、酿酒酵母。

DNA构建物也可包含编码可影响羟化酶或环加氧酶多肽的表达、活性、生化活性或生理活性的其它多肽的序列。例如，DNA构建物可包含编码PDAT、DAGAT、脂酶、FAD2或FAD3多肽的核酸，它们操作性连接于在营养组织或植物种子的至少一种组织中产生表达的至少一个调控元件。在一些实施方式中，DNA构建物包含编码PDAT多肽的核酸和编码FAD2多肽的核酸。或者，可在不同DNA构建物上提供这些其它多肽编码序列。

合适的磷脂：二酰甘油酰基转移酶(PDAT)多肽和二酰甘油酰基转移酶(DAGAT)多肽包括拟南芥DAGAT或秀丽新小杆线虫DAGAT。合适的PDAT和DAGAT多肽的编码序列包括GenBank_登录号AAF19262、AAF19345、AAF82410和P40345。

DAGAT和PDAT酶是三酰基甘油(TAG)组分中发现的脂肪酸的含量(Bouvier-Nave等，(2000)Biochem.Soc.Trans.28(6)：692-695；Jako等，(2001)126(2)：861-874)和类型(Banas等，(2000)Biochem.Soc.Trans.28(6)：703-705；Dahlqvist等，(2000)Proc.Natl.Acad.Sci USA，97(12)：6487-6492)的重要决定因素。而且，三酰基甘油(TAG)组分是种子中新脂肪酸如蓖麻油酸和斑鸠菊酸的主要来源，人们认为这能最大程度减少这些不寻常脂肪酸对植物细胞膜的破坏作用(Millar等，(2000)Trends Plant Sci.5(3)：95-101)。在大多数植物中，根、叶和其它非种子组织通常不是三酰基甘油累积的主要部位。因此，在非种子组织中，TAG合成途径中关键酶如PDAT和DAGAT的活性可能对于预计应用不是最佳的，可通过使这些酶过表达来提高活性，这可导致TAG组分中脂肪酸累积的显著增加(Bouvier-Nave等，(2000)Eur.J.Biochem.267(1)：85-96)。

编码一种或多种去饱和酶的DNA构建物包括编码δ-12脂肪酸去饱和酶或δ-15脂肪酸去饱和酶的构建物。例如，拟南芥FAD2或拟南芥FAD3多肽可操作性连接于在非种子组织如根和/或叶中产生表达的合适启动子。δ-12去饱和酶和环加氧酶的表达可能有用，因为去饱和酶的产物亚油酸是通过环加氧酶转化为斑鸠菊酸的底物。

可用本文所述核酸鉴定同源植物羟化酶或环加氧酶编码序列，得到的序列可提供其它植物羟化酶或环加氧酶。具体说，PCR可能是由本文提供的序列数据获得相关核酸的有用技术。本领域技术人员能够根据序列比较或通常高度保守的序列区域设计寡核苷酸探针。特别感兴趣的是基于图2中羟化酶和环加氧酶之间氨基酸序列的保守区域(SEQ ID NO：13-24和34-42)的聚合酶链反应引物。实施例中更完整地描述了涉及设计和用这些探针进行PCR反应的方法的详情。如果采用核酸探针，它们可以比整个编码序列短。可采用寡核苷酸，如长度为10、15、20或25个核苷酸或更长的寡核苷酸。

在一些天然植物种类中发现大量羟化脂肪酸，这说明了几种可能的植物酶来源。例如，各种Lesquerella种的种子油中出现大量与蓖麻醇酸相关的羟基脂肪酸。特别感兴趣的lesquerolic acid是在链的羧基端加上两个碳的蓖麻醇酸的20碳同系物。羟化脂肪酸的其它天然植物来源包括亚麻属的种子，倒吊笔(Wrightia)种、石松(Lycopodium)种、毒毛旋花子(Strophanthus)种、旋花(Convolvulaces)种、金盏花种和许多其它植物的种子(van de Loo等，(1993)。例如，Lesquerella densipila含有具有羟基的双不饱和18碳脂肪酸(van de Loo等，(1993)Lipid Metabolism in Plants CRCPress，Boca Raton，99-126页)，认为它是通过与蓖麻和Lesquerella fendleri羟化酶紧密相关的酶产生的。类似地，在各种植物包括斑鸠菊属(Vernonia)、还阳参属(Crepis)、大戟属(Euphorbia)和琉璃菊中发现了环加氧化脂肪酸。

此外，可通过诱变产生编码天然存在序列经修饰的多肽的核酸。例如，δ-12去饱和酶可通过靶向诱变转化为油酸羟化酶(Broun等，(1998)Science，282(5392)：1315-1317；Broadwater等，(2002)J Biol Chem.277(18)：15613-15620)。可在编码序列如δ-15(ω-3)去饱和酶中产生相似改变，以产生新羟化酶。如本领域所熟知，一旦获得了编码植物羟化酶或环加氧酶的cDNA克隆后，可用其获得相应的基因组核酸。因此，本领域技术人员将知道，可制备抗体制剂、核酸探针等，并用其筛选和回收各种来源的同源或相关的羟化酶和环加氧酶。

一般地，本发明核酸与靶核酸的序列相同性为70％或更高，如80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或更高。如本文所述测定序列相同性。在一些实施方式中，核酸的长度是20-30个核苷酸、或20-50个核苷酸、或25-100个核苷酸、或500-1500个核苷酸、或900-2,000个核苷酸。核酸的特定实施方式包括序列表中所列核苷酸序列。需要注意，遗传密码的简并性允许修饰密码子而不改变相应氨基酸序列。因此，如果需要，可修饰核酸中的密码子，这种修饰可能优化多肽表达。例如，所选植物种类基因组中出现百分数为8％或更低的密码子可被更频繁出现的密码子，如特定氨基酸的最常见或第二常见的密码子取代。或者，如果毗邻密码子对在所选植物种类基因组的已知序列中出现频率为12％或更低，可修饰毗邻密码子对的一个成员。涉及密码子使用数据库的数据可参见例如，<http：//www.kazusa.or.jp/codon/>。

也可改变密码子以去除可能产生mRNA不稳定性的ATTTA(即AUUUA)元件，可改变密码子以消除可能的聚腺苷酸化位点。也可修饰密码子以破坏A、G、C或T的五个或更多个毗连核苷酸(如TTTTTT)。也可修饰密码子以降低异常剪接的可能性。可用预测算法如<http：//www.cbs.dtu.dk/services/NetPGene>的算法评价剪接可能性，消除供体(GT)或受体(AG)剪接位点，以降低剪接可能性。此外，可将多肽N末端附近的密码子改变为所选植物种类如大豆(glycine max)优选的密码子。应理解，可在核酸编码序列中产生一个或多个密码子修饰(包括但不限于上述修饰)。具有提高植物表达的一个或多个密码子修饰并具有相对于野生型序列的轻微氨基酸序列改变的序列的例子包括SEQ ID NO：28-33和129-133。

编码多肽的核酸可含有基因组编码序列、cDNA编码序列或mRNA编码序列。cDNA编码序列可以或可以不含有加工前序列，如运输或信号肽序列。运输或信号肽序列有助于将该蛋白递送至给定细胞器，常常在进入细胞器后从多肽上切下，释放“成熟”序列。前体DNA序列可用于植物细胞表达盒。

转基因植物

根据本发明的另一方面，提供转基因植物。这种植物一般表达本文所述DNA构建物的多肽编码序列，导致植物营养组织或所述植物种子的至少一种组织中羟化或环加氧化脂肪酸含量增加。可用编码不同植物种类或栽培变种的多肽的DNA构建物转化植物种类或栽培变种(如用编码蓖麻酶的基因转化大豆)。或者，可用编码相同植物种类或栽培变种的多肽的DNA构建物转化植物种类或栽培变种。

因此，本发明方法包括将本文所述DNA构建物引入植物。本领域已知将外源性核酸引入单子叶和双子叶植物的技术，包括但不限于：土壤杆菌介导的转化、脂质体融合、显微注射、病毒载体介导的转化、渗入(infiltration)、吸涨(imbibition)、电穿孔和粒子枪转化，如美国专利号5,204,253和6,013,863。如果将细胞或组织培养物用作转化的受体组织，可用本领域技术人员已知技术由转化培养物再生植物。可采用为转化提供的任何方法。

将土壤杆菌用于植物细胞转化时，可采用可引入土壤杆菌宿主以与土壤杆菌宿主中存在的Ti-或Ri-质粒同源重组的载体。用于重组的含有T-DNA的Ti-或Ri-质粒可以是武装的(arm)(能够引起菌瘿(gall)形成)或非武装的(disarm)(不能够引起菌瘿)，只要转化的土壤杆菌宿主中存在vir基因，后一种情况都是被允许的。武装质粒可产生正常植物细胞和菌瘿的混合物。

在一些情况下，当土壤杆菌用作转化植物细胞的运载体时，将以T-DNA边界为边界的DNA构建物插入广宿主谱的载体中，参考文献中描述了广宿主谱的载体。常用的是pRK2或其衍生物。表达构建物和T-DNA中包括了一种或多种标记，能够选择转化的土壤杆菌和转化的植物细胞。开发了用于植物细胞的许多标记，如对卡那霉素、氨基糖苷G418、潮霉素的抗性等。

产生除草剂抗性的许多基因可用作标记。对抑制生长点或分生组织的除草剂产生抗性的基因是合适的。此类型的示范性基因编码突变的ALS和AHAS酶，如美国5,767,366和5,928,937所述。美国专利号4,761,373和5,013,659涉及对各种咪唑啉酮或磺酰胺除草剂产生抗性的植物。美国专利号4,975,374涉及含有编码突变谷胺酰胺合成酶(GS)的基因的植物细胞和植物，该突变酶对已知能抑制GS的除草剂，如草胺膦(phosphinothricin)和甲硫氨酸磺基肟的抑制作用有抗性。美国专利号5,162,602公开了对环己二酮和芳氧基苯氧基丙酸除草剂的抑制作用有抗性的植物。改变的乙酰辅酶A羧化酶(ACC酶)产生抗性。草甘膦(商品名Roundup_)的抗性基因也适合。参见例如，美国专利号4,940,835和美国专利号4,769,061。美国专利号5,554,798公开了转基因草甘膦抗性玉米植株，它的抗性是通过改变5-烯醇丙酮-3-磷酸莽草酸(5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate，EPSP)合酶基因产生的。膦酰基化合物如固杀草(glufosinate ammonium)或草胺膦，以及吡啶氧基或苯氧基丙酸和环己酮的抗性基因也适合。参见欧洲申请号0 242 246。其它合适的除草剂包括抑制光合作用的除草剂，如三嗪和苯基腈(腈水解酶)。参见美国专利号4,810,648。其它合适的除草剂包括2，2-二氯丙酸、稀禾定、氟吡禾灵、咪唑啉酮除草剂、磺酰基脲除草剂、三唑嘧啶除草剂、s-三嗪除草剂和溴苯腈。产生原卟啉原氧化酶抗性的除草剂也合适。参见例如，美国专利申请号20010016956和美国专利号6,084,155。所用的具体标记对本发明并不重要，可采用根据具体宿主和构建方式适合采用的一种或另一种标记。

转基因植物一般含有整合入其基因组的DNA构建物，一般符合孟德尔遗传模式。转基因植物可进入育种程序，如将编码多肽的核酸引入其它品系、将核酸转移到其它种类或进一步选择其它所需特征。或者，对于适合相应技术的转基因植物种类，可无性繁殖这些植物。后代包括具体植株或植株品系的后代。植物后代包括F₁、F₂、F₃和后代植株上形成的种子，或者在BC₁、BC₂、BC₃和后代植株上形成的种子。可培养转基因植物产生的种子，然后自花授粉(或异型杂交和自花授粉)，以获得编码新多肽的核酸为纯合的种子。

可用于实施本发明的植物包括但不限于：烟草(Nicotiana tabacum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、大豆(Glycine max)、花生(Arachis hypogaea)、棉花(Gossypiumhirsutum)、甘薯(Ipomoea batatus)、木薯(Manihot esculenta)、咖啡(Cofea spp.)、椰子(Cocos nucifera)、菠萝(Ananas comosus)、柑橘树(Citrus spp.)、可可(Theobromacacao)、茶树(Camellia sinensis)、香蕉(Musa spp.)、鳄梨(Persea americana)、无花果(Ficus casica)、番石榴(Psidium guajava)、芒果(Mangifera indica)、橄榄(Oleaeuropaea)、木瓜(Carica papaya)、腰果(Anacardium occidentale)、澳大利亚坚果(Macadamia integrifolia)、扁桃(Prunus amygdalus)、甜菜(Beta vulgaris)、玉米(Zeamays)、小麦、燕麦、黑麦、大麦、水稻、蔬菜、观赏植物和针叶树。蔬菜包括番茄(Lycopersicon esculentum)、莴苣(如Lactuca sativa)、青豆(Phaseolus vulgaris)、利马豆(Phaseolus limensis)、豌豆(Lathyrus spp.)和香瓜属(Cucumis)成员如黄瓜(C.sativus)、哈密瓜(C.cantalupensis)和甜瓜(C.melo)。观赏植物包括杜鹃花(Rhododendron spp.)、绣球花(Macrophylla hydrangea)、木槿(Hibiscusrosasanensis)、玫瑰(Rosa spp.)、郁金香(Tulipa spp.)、水仙花(Narcissus spp.)、矮牵牛花(Petunia hybrida)、康乃馨(Dianthus caryophyllus)、一品红(Euphorbia pulcherima)和菊花。可用于实施本发明的针叶树包括例如，松树，如火炬松(Pinus taeda)、沼泽松(Pinus elliotii)、美国黄松(Pinus ponderosa)、扭叶松(Pinus contorta)和辐射松(Pinus radiata)；氯枞(Pseudotsuga menziesii)；西部铁杉(Tsuga canadensis)；西特喀云杉(Picea glauca)；红杉(Sequoia sempervirens)；枞树如银枞(Abies amabilis)和香脂冷杉(Abies balsamea)；以及雪松如西部侧柏(Thuja plicata)和黄扁柏(Chamaecyparisnootkatensis)。合适的草包括肯塔基蓝草(Poa pratensis)和匍匐翦股颖(creepingbentgrass，Agrostris palustris)。

应理解，可用通常存在于植物中或通过遗传工程方法引入植物的其它酶对本发明多肽在植物中产生的羟化或环加氧化脂肪酸进行进一步酶修饰。例如，认为许多Lesquerella种类中存在的lesquerolic acid是通过延长蓖麻油酸产生的(Moon等，(2001)Plant Physiol.127(4)：1635-1643)。因此，转基因植物中存在蓖麻羟化酶构建物可能足以在同一植物中通过羟化酶多肽产生蓖麻油酸和内源性多肽延长蓖麻油酸产生lesquerolic acid。

线虫抗性

可测定转基因植物的非种子组织中产生的羟基-和环氧-脂肪酸。也可测试这种植物的杀线虫活性。可以在用发根土壤杆菌(A.rhizogenes)转化形成的须根(hairy root)培养物上进行羟化和环加氧化脂肪酸的产生和杀线虫活性的相似测试。因此，本发明描述了筛选转基因植物驱虫活性的方法的特征，该方法包括在有效测定植物是否具有驱虫活性的条件下将植物与线虫接触。该转基因植物含有编码本文所述羟化酶或环加氧酶多肽的核酸。测定驱虫活性的合适条件如本文所述。也可用转基因植物的植物组织，如根组织、叶组织或茎组织实施该方法。

在另一方面，本发明描述了具有驱虫活性的植物的制备方法的特征。如本文所述，本领域已知将外源性核酸引入单子叶和双子叶植物的技术。在一些实施方式中，例如，具有驱虫活性的植物的制备方法包括(1)用本文所述DNA构建物转化植物物种的可再生细胞；和(2)从上述细胞再生一或多株转基因植物。与相应的未转化植物相比，所得转基因植物的非种子组织中羟化或环加氧化脂肪酸的含量统计学显著性增加。羟基-或环氧-脂肪酸的增加水平可产生具有驱虫活性的植物。可用本发明方法控制寄生于植物根、茎、芽或叶的线虫。

在植物中检测时，如果相对于不用本文所用脂肪酸化合物对照处理，本文所用脂肪酸化合物的杀线虫活性统计学显著性增加、线虫生育力统计学显著性降低、线虫不育率统计学显著性增加、线虫在其宿主中感染或繁殖的能力统计学显著性降低、线虫生长或发育统计学显著性降低，那么该化合物具有驱虫活性。相对于未接触具有驱虫活性的化合物的相似阶段的成虫，具有驱虫活性的化合物可以(例如)使线虫成虫的存活时间减少(如)约20％、40％、60％、80％或更多。在一些实施方式中，与不用具有驱虫活性的化合物的对照处理相比，具有驱虫活性的化合物也可引起(如)约20％、40％、60％、80％或更多线虫停止复制、再生和/或产生活后代。

相对于不用具有驱虫活性的化合物的对照处理，具有驱虫活性的化合物可导致驱除线虫特性统计学显著性增加。在该试验中，(如)在微量滴定板孔中将该化合物与线虫混合，该滴定板孔中是含有该化合物的液体或固体培养基或者土壤。将分阶段的线虫成虫放置在培养基上。测定存活时间、后代活力和/或线虫移动。

可通过本发明保护线虫寄生植物的示范性植物寄生线虫类及其对应植物如下：苜蓿：起绒草茎线虫(Ditylenchus dipsaci)、北方根结线虫(Meloidogyne hapla)、南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)、短体线虫(Pratylenchus spp.)、针线虫(Paratylenchus spp.)、剑线虫(Xiphinema spp.)；香蕉：相似穿孔线虫(Radopholus similis)、多环螺旋线虫(Helicotylenchus multicinctus)、南方根结线虫、花生根结线虫(M.arenaria)、爪哇根结线虫、咖啡短体线虫(Pratylenchuscoffeae)、肾形小盘旋线虫(Rotylenchulus reniformis)；豆类和豌豆：根结线虫、异皮线虫(Heterodera spp.)、剌线虫(Belonolaimus spp.)、螺旋线虫(Helicotylenchus spp.)、肾形小盘旋线虫、葵花状拟毛刺线虫(Paratrichodorus anemones)、毛刺线虫(Trichodorus spp.)；木薯：肾形小盘旋线虫、根结线虫；谷物：麦粒鳗线虫(Anguinatritici)(双粒小麦、黑麦、斯卑尔脱小麦)、禾谷胞囊线虫(Bidera avenae)(燕麦、小麦)、起绒草茎线虫(黑麦、燕麦)、根亚鳗线虫(Subanguina radicicola)(燕麦、大麦、小麦、黑麦)、禾谷根结线虫(Meloidogyne naasi)(大麦、小麦、黑麦)、短体线虫(燕麦、小麦、大麦、黑麦)、针线虫(小麦)、矮化线虫(Tylenchorhynchus spp.)(小麦、燕麦)；鹰嘴豆：木豆异皮线虫(Heterodera cajani)、肾形小盘旋线虫、塞氏纽带线虫(Hoplolaimus seinhorsti)、根结线虫、短体线虫；柑橘类：半穿刺小垫刃线虫(Tylenchulus semipenetrans)、相似穿孔线虫、柑橘穿孔线虫(Radopholuscitrophilus)(仅在佛罗里达)、鞘线虫(Hemicycliophora arenaria)、短体线虫、根结线虫、长尾刺线虫(Bolonolaimus longicaudatus)(仅在佛罗里达)、毛刺线虫、拟毛刺线虫、剑线虫；三叶草：根结线虫、三叶草异皮线虫(Heterodera trifolii)；椰子树：椰子细杆刃线虫(Rhadinaphelenchus cocophilus)；咖啡树：南方根结线虫(在巴西最重要)、短小根结线虫(Meloidogyne exigua)(广布)、咖啡短体线虫、最短尾短体线虫(Pratylenchus brachyurus)、相似穿孔线虫、肾形小盘旋线虫、螺旋线虫；玉米：短体线虫、小型拟毛刺线虫(Paratrichodorus minor)、长针线虫(Longidorus spp.)、矛状纽带线虫(Hoplolaimus columbus)；棉花：南方根结线虫、长尾刺线虫(Belonolaimuslongicaudatus)、肾形小盘旋线虫、盔状纽带线虫(Hoplolaimus galeatus)、短体线虫、矮化线虫和小型拟毛刺线虫；葡萄：剑线虫、胡桃短体线虫(Pratylenchusvulnus)、根结线虫、半穿刺小垫刃线虫、肾形小盘旋线虫；草：短体线虫、长针线虫、克氏拟毛刺线虫(Paratrichodorus christiei)、剑线虫、茎线虫(Ditylenchus spp.)；花生：短体线虫、北方根结线虫、花生根结线虫、小环线虫(Criconemella spp.)、长尾刺线虫(在美国东部)；木豆：大豆胞囊线虫、肾形小盘旋线虫、塞氏纽带线虫、根结线虫、短体线虫；菠萝：克氏拟毛刺线虫、小环线虫、根结线虫、肾形小盘旋线虫、螺旋线虫、短体线虫、针线虫；马铃薯：马铃薯金线虫(Globoderarostochiensis)、马铃薯白线虫(Globodera pallida)、根结线虫、短体线虫、原始毛刺线虫(Trichodorus primitivus)、茎线虫、拟毛刺线虫、Nacoabbus aberrans；水稻：贝氏滑刃线虫(Aphelenchiodes besseyi)、水稻茎线虫(Ditylenchus angustus)、Hirchmanniella spp.、水稻异皮线虫(Heterodera oryzae)、根结线虫；小果实：根结线虫；短体线虫、剑线虫、长针线虫、克氏拟毛刺线虫、滑刃线虫(Aphelenchoidesspp.)(草莓)；大豆：大豆异皮线虫(Heterodera glycines)、南方根结线虫、爪哇根结线虫、刺线虫、矛状纽带线虫；甜菜：甜菜异皮线虫(Heterodera schachtii)、起绒草茎线虫、根结线虫、Nacobbus aberrans、毛刺线虫、长针线虫、拟毛刺线虫；甘蔗：根结线虫、短体线虫、穿孔线虫(Radopholus spp.)、异皮线虫、纽带线虫(Hoplolaimus spp.)、螺旋线虫、盾线虫(Scutellonema spp.)、刺线虫(Belonolaimusspp.)、矮化线虫、剑线虫、长针线虫、拟毛刺线虫；茶树：根结线虫、短体线虫、相似穿孔线虫、卡氏拟鞘线虫(Hemicriconemoides kanayaensis)、螺旋线虫、弯曲针线虫(Paratylenchus curvitatus)；烟草：根结线虫、短体线虫、克莱顿矮化线虫(Tylenchorhynchus claytoni)、烟草球异皮线虫(Globodera tabacum)、毛刺线虫、美洲剑线虫(Xiphinema americanum)、起绒草茎线虫(仅在欧洲)、拟毛刺线虫；番茄：短体线虫、根结线虫；果树：短体线虫(苹果、梨、核果类)、针线虫(苹果、梨)、剑线虫(梨、樱桃、桃)、胡桃线虫(Cacopaurus pestis)(胡桃)、根结线虫(核果类、苹果等)、长针线虫(樱桃)、小环线虫(桃)和小垫刃线虫(Tylenchulus spp.)(橄榄)。

本文所述转基因植物可提供抑制线虫代谢、生长、活力、生殖力、发育、感染力和/或线虫生活周期的有效、环境安全的方式。该植物可单独使用或与化学杀线虫剂联用，或作为病虫害综合治理方案的一部分。转基因植物可提供长达一季的线虫控制，从而通过减少对化学控制的需要和降低化学控制的频率节约了劳动力。

下面描述了证明线虫存活需要δ-12脂肪酸去饱和酶活性的实验。也描述了某些杀线虫性脂肪酸和类似物，包括与δ-12脂肪酸去饱和酶抑制剂活性一致的杀线虫性脂肪酸和酯。也描述了编码产生这些脂肪酸的酶的DNA序列的克隆、修饰、引入植物和在非种子组织(如根)中表达，也描述了再生的植物细胞、根和植物的测试。以下实施例仅作为说明，不以任何方式限制。

实施例1

RNA介导的干扰(RNAi)

通过称为RNA介导的干扰的方法，用双链RNA(dsRNA)分子使细胞中的δ-12脂肪酸去饱和酶(δ-12 fat2)基因失活(Fire等，(1998)Nature 391：806-811，和G_nczy等，(2000)Nature 408：331-336)。dsRNA分子可能含有δ-12 fat2核酸(优选外显子)或其片段的核苷酸序列。可通过直接注射，或通过将线虫浸没在含有浓缩dsRNA的水溶液中，或通过用经遗传工程改造产生dsRNA分子的大肠杆菌(E.coli)培养嗜细菌(bacteriovorous)线虫，将dsRNA分子递送给线虫。

通过注射的RNAi：为了检测抑制δ-12 fat2活性的影响，将对应于秀丽新小杆线虫δ-12 fat2基因的dsRNA注射入线虫，基本如Mello等，(1991)EMBO J.10：3959-3970所述。简要说，构建含有秀丽新小杆线虫δ-12 fat2序列一部分，尤其是长651个核苷酸的片段的质粒，所述片段含有整个第一个外显子并且终止于紧接第一个外显子和第一个内含子之间的保守内含子剪接连接处之前。此构建物大约编码了秀丽新小杆线虫δ-12 fat2基因的前217个氨基酸。用引物将此序列特异性扩增为线性dsDNA。用T7RNA聚合酶和SP6RNA聚合酶从这些片段转录单链RNA(RNA对应于正义和反义RNA链)。沉淀RNA并重悬于无RNA酶的水中。为了使ssRNA退火形成dsRNA，混合ssRNA，加热到95℃2分钟，然后用1.5-2.5小时从70℃冷却到室温。

将dsRNA注射入15-20条幼年秀丽新小杆线虫两性体成虫的体腔中。将线虫固定在琼脂糖垫上，注射浓度一般为1mg/mL。例如，用装有10X和40X DIC目镜的Zeiss Axiovert组合显微镜观察注射。用Narishige拉针器(needle puller)、台式显微操纵仪(Leitz)和N2-驱动的注射器(Narishige)组以10-20p.s.i制备显微注射针头。注射后，将200μl回收缓冲液(0.1％鲑精DNA、4％葡萄糖、2.4mM KCl、66mM NaCl、3mM CaCl₂、3mM HEPES、pH 7.2)加在琼脂糖垫上，使线虫在琼脂糖垫上恢复0.5-4小时。恢复后，将线虫转移到NGM琼脂平板上，该平板上种有大肠杆菌菌株OP50的一个菌苔作为食物来源。第二天和其后三天，将7个单个健康注射线虫转移到种有OP50的新NGM平板上。测定每条线虫每天产卵数以及孵化和达到性成熟的卵数。作为对照，用相似方法制备和注射绿色荧光蛋白(GFP)dsRNA。GFP是常用的报道基因，最初分离自水母，广泛用于原核和真核系统。野生型秀丽新小杆线虫基因组中不存在GFP基因，因此，GFP dsRNA不引发野生型秀丽新小杆线虫的RNAi表型。秀丽新小杆线虫δ-12 fat2 RNAi注射表型表现为F1孵化率显著降低，并且少量存活个体阻滞在早幼虫期。

通过饲喂的RNAi：可在经遗传工程改造能产生抑制δ-12 fat2表达的双链RNA(dsRNA)的大肠杆菌菌苔上培养秀丽新小杆线虫。简要说，用秀丽新小杆线虫fat2基因序列一部分的基因组片段，尤其是长651个核苷酸的片段转化大肠杆菌，所述片段含有整个第一个外显子并且终止于紧接第一个外显子和第一个内含子之间的保守内含子剪接连接处之前。此构建物大约编码了秀丽新小杆线虫δ-12 fat2基因的前217个氨基酸。将此651个核苷酸的基因组片段克隆入大肠杆菌表达载体的反向T7聚合酶启动子之间。然后将此克隆转化入携带IPTG诱导型T7聚合酶的大肠杆菌菌株。作为对照，用编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因转化大肠杆菌。从秀丽新小杆线虫卵或秀丽新小杆线虫L4s开始饲喂RNAi。当从秀丽新小杆线虫卵开始饲喂RNAi时，用含有IPTG和表达秀丽新小杆线虫δ-12 fat2或GFP dsRNA的大肠杆菌的NGM平板在23℃培养，秀丽新小杆线虫δ-12 fat2 RNAi饲喂表型表现为部分不育的F1个体和死F2胚胎。从秀丽新小杆线虫L4幼虫开始饲喂RNAi时，用含有IPTG和表达秀丽新小杆线虫Δ-12 fat2或GFP dsRNA的大肠杆菌的NGM平板在23℃培养，秀丽新小杆线虫RNAi饲喂表型表现为部分不育的P0个体(即起初接触的个体)，以及发育阻滞的不育F1线虫。fat2基因序列是足够复杂的(即独特的)，以致RNAi不可能与其它基因交叉反应。

在表达dsRNA的大肠杆菌存在下培养秀丽新小杆线虫培养物，注射有δ-12 fat2基因dsRNA的线虫显著受损，这表明脂肪酸去饱和酶样基因提供了线虫的必需功能，当被秀丽新小杆线虫消化或被注射入线虫时，来自脂肪酸去饱和酶样基因的dsRNA是致死性的。

实施例2

用亚油酸甲酯拯救秀丽新小杆线虫Δ-12 fat2 RNAi饲喂表型

秀丽新小杆线虫δ-12脂肪酸去饱和酶(FAT-2蛋白)能将单不饱和油酸转变为双不饱和脂肪酸亚油酸。δ-12 fat2 RNAi能防止δ-12脂肪酸去饱和酶表达，预计会引起线虫中亚油酸水平降低，导致发育阻滞和死亡。将3mM亚油酸甲酯加入用于RNAi试验的NGM培养基中能够部分拯救δ-12 fat2 RNAi饲喂表型。加入3mM油酸甲酯不能拯救δ-12 fat2 RNAi饲喂表型(见下表1)。

          表1：秀丽新小杆线虫δ-12 fat2 RNAi饲喂表型

            (以秀丽新小杆线虫L4幼虫作为P0动物开始)

加入的脂肪酸	P0表型	F1表型	F2表型
				无	产卵减少(部分不育)	发育阻滞和不育	NA
油酸甲酯	产卵减少(部分不育)	发育阻滞和不育	NA
				亚油酸甲酯	产卵减少	中度发育迟缓和中度产卵减少	轻度发育迟缓

实施例3

秀丽新小杆线虫(Caenorhabditis elegans)和脂肪酸的制备

用M9溶液洗掉用OP50细菌接种的平板上混合阶段的秀丽新小杆线虫。将含有约50-100个线虫的250μl M9溶液吸入24-孔板的各孔。

除了脂肪酸盐和反蓖麻酸的游离酸，按照Kim等的内容制备所有其它脂肪酸乳剂(美国专利号5,698,592)。简要说，通过在1.5mL eppendorf管中混合10μl脂肪酸与20μl表面活性剂Igepal CO 630制备1mL 1％储液乳剂。小心混合脂肪酸与IgepalCO 630后，加入850μl ddH₂O，温和吹打混合，直到获得均一溶液。最后，加入120μl纯异丙醇，温和吹打混合。还制备了蓖麻油酸的钾盐、反蓖麻酸的钠盐和反蓖麻酸游离酸的1％储液乳剂。在1.5mL eppendorf管中将0.01克蓖麻油酸的钾盐溶解于100μl ddH₂O，与20μl表面活性剂Igepal CO 630混合。小心混合脂肪酸与Igepal CO630后，加入760μl ddH₂O，温和吹打混合，直到获得均一溶液。最后，加入120μl纯异丙醇，温和吹打混合。对于反蓖麻酸的钠盐和游离酸，在1.5mL eppendorf管中将0.01克反蓖麻酸的钠盐和游离酸溶解于100μl丙酮，与20μl表面活性剂Igepal CO630混合。小心混合脂肪酸与Igepal CO 630后，加入760μl ddH₂O，温和吹打混合，直到获得均一溶液。最后，加入120μl纯异丙醇，温和吹打混合。然后，在24孔板实验中用这些储液产生各种脂肪酸稀释乳剂。通过在1.5mL eppendorf管中混合100μl丙酮、20μl表面活性剂Igepal CO 630、760μl ddH2O和120μl纯异丙醇并混合至均一制备“丙酮对照”乳剂。

实施例4

单脂肪酸甲酯乳剂对秀丽新小杆线虫的杀线虫活性

将脂肪酸乳剂或对照乳剂加入各孔，通过涡旋快速混合。在加入乳剂或对照24小时后的各个时间点上通过目测和运动性实验对线虫活力进行评分。受试脂肪酸乳剂是壬酸、蓖麻油酸、斑鸠菊酸、亚油酸、油酸的甲酯和缺少脂肪酸的对照乳剂。

蓖麻油酸甲酯、反蓖麻酸甲酯(此表中不包括)和斑鸠菊酸甲酯的结构见图1。

         表2：脂肪酸甲酯乳剂对秀丽新小杆线虫的杀线虫活性

脂肪酸	浓度	线虫死亡百分数
					1小时	6小时	24小时
		壬酸(C9-甲酯)	0.1％	100％				100％	100％
0.003％	50％				50％	50％
			蓖麻油酸(C18-甲酯)	0.1％			80％	80％	90％
0.003％	40％	40％			40％
				斑鸠菊酸(C18-甲酯)		0.1％	65％	65％	75％
0.003％	20％	20％	20％
					亚油酸(C18-甲酯)	0.1％	0-5％	0-5％	0-5％
0.003％	0-5％	0-5％	0-5％
				油酸(C18-甲酯)		0.1％	0-5％	0-5％	0-5％
0.003％	0-5％	0-5％	0-5％
					对照(无甲酯)	0.1％	0-5％	0-5％	0-5％
0.003％	0-5％	0-5％	0-5％

浓度为0.1％的壬酸和蓖麻油酸甲酯乳剂都具有强烈的杀线虫作用。壬酸甲酯乳剂使线虫运动几乎立即停止和随后死亡，而蓖麻油酸甲酯乳剂需要长达30分钟才能显现出强烈的杀线虫作用。然而，0.003％的壬酸甲酯乳剂暂时“击昏”了秀丽新小杆线虫，起初产生100％死亡表型的表象。接种数小时后，许多线虫恢复并重新开始运动。用其它脂肪酸乳剂没有观察到这种“击昏”作用。

实施例5

单脂肪酸甲酯、盐和游离脂肪酸乳剂对秀丽新小杆线虫N2s和Dauers的杀线虫活性

L：亚油酸，R：蓖麻油酸，Re：反蓖麻酸；V-反式：(12，13)-环氧-反式-9-十八碳烯酸；ME：甲酯

   表3：秀丽新小杆线虫的结果(线虫死亡)

脂肪酸	0.1％	0.01％	0.001％
				蓖麻油	10％	＜5％	NA
壬酸ME	100％	100％	30％
				L ME	＜5％	＜5％	＜5％
L游离酸	10％	＜5％	＜5％
				R ME	90％	40％	20％
R游离酸	95％	50％	＜5％
				Re ME	100％	100％	80％
Re游离酸*	100％	98％	40％
				蓖麻油酸钾	90％	15％	5％
反蓖麻酸钠*	100％	100％	NA
				丙酮对照	10％	5％	5％

表4：秀丽新小杆线虫dauers的结果(线虫死亡)

脂肪酸	0.1％	0.01％	0.001％
				蓖麻油	NA	NA	NA
壬酸ME	NA	NA	NA
				L ME	40％	20％	NA
L游离酸	50％	40％	NA
				R ME	70％	30％	NA
R游离酸	90％	75％	NA
				Re ME	100％	100％	NA
Re游离酸*	75％	75％	NA
				蓖麻油酸钾	75％	20％	NA
反蓖麻酸钠*	NA	NA	NA
				丙酮对照	35％	20％	NA
V-反式ME	90％	50％	NA

实施例6

根结线虫J2幼虫的制备

从番茄根制备南方根结线虫和爪哇根结线虫。漂白根，过滤后通过蔗糖密度梯度离心将J2幼虫和卵与碎片(debris)分开。15℃4天孵化卵，通过滤纸、然后离心，从而收集J2幼虫。

实施例7

脂肪酸甲酯乳剂对根结线虫的杀线虫活性

室温振荡孵育线虫和乳剂48小时。将各孔内含物转移到没有细菌的NGM平板上的各个小点中。转移到平板约24小时后，在接种点上或以外的线虫分别记为不活和活。如果线虫爬出接种点，或者如果它们移动，则认为线虫是活的。如果线虫保留在接种点上则认为它们是不活的。

表5：脂肪酸甲酯乳剂对爪哇根结线虫和南方根结线虫的杀线虫活性

脂肪酸(0.1％)	爪哇根结线虫(％不活)	南方根结线虫(％不活)
			斑鸠菊酸(C18-甲酯)	90％	100％
壬酸(C9-甲酯)	100％	100％
			蓖麻油酸(C18-甲酯)	60％	95％
油酸(C18-甲酯)	20％	25％

浓度为0.1％的壬酸、斑鸠菊酸和蓖麻油酸甲酯乳剂对根结线虫有显著的杀线虫活性。

实施例8

脂肪酸甲酯的植物毒性评价

在含有Gamborg琼脂培养基的品红罐中使无菌番茄种子发芽。生长两周后，用250μl1％脂肪酸甲酯乳剂(壬酸、蓖麻油酸、反蓖麻酸、油酸或没有任何脂肪酸的对照乳剂)处理幼苗，直接施加于茎-培养基交界面。在施加乳剂后各个时间点上对番茄幼苗评分。在受试脂肪酸中，仅1％壬酸甲酯乳剂对番茄显示出明显的植物毒性作用。施用壬酸乳剂18小时内，那些番茄显示出膨压(tugor pressure)缺失(萎蔫表型)，外观上显然绿色更浅。24小时内，壬酸处理的番茄几乎被完全漂白至灰白色，并且几乎全部枯萎(collapse)，大部分叶子直接落在琼脂培养基表面上。重要的是，其它脂肪酸甲酯乳剂处理的番茄没有显示可见的效果。因此，根据其高杀线虫特性的组合并且具有有益的低植物毒性，蓖麻油酸和反蓖麻酸甲酯非常可能用作驱虫化学品。

实施例9

单脂肪酸甲酯乳剂对一系列自由生活的、动物寄生和植物寄生线虫的杀线虫活性

简要说，将所示脂肪酸乳剂加入含有线虫的24孔板的孔中，通过涡旋快速混合。在加入乳剂24小时(对于植物寄生线虫根结线虫和异皮线虫种类是48小时)后通过目测和运动性实验对线虫活力进行评分。受试脂肪酸乳剂是壬酸、反蓖麻酸、蓖麻油酸、斑鸠菊酸、亚油酸和油酸的甲酯。在一张表中合并了脂肪酸乳剂对自由生活的、动物寄生和植物寄生线虫类的结果，这有助于比较不同乳剂对具有不同生活方式的线虫的活性。所示结果为获自多次独立实验的平均值％。

表6：各种脂肪酸甲酯对各种自由生活、动物寄生和植物寄生的线虫类的杀线虫活性

	％线虫死亡(24小时)
							-对照		抑制剂			+对照
	线虫(％溶液)	油酸	亚油酸	斑鸠菊酸	蓖麻油酸	反蓖麻酸							壬酸
秀丽新小杆线虫(0.1％)							＜10	＜10	80	90	100	100
	秀丽新小杆线虫(0.01％)	＜10	＜10	50	50	100							100
秀丽新小杆线虫(0.001％)								＜10	30	30	75	30
	P.trichosuri(0.1％)	～10	～25	～95	～50	100
P.trichosuri(0.01％)							～10	～25	～90	～60	100
	P.trichosuri(0.001％)
南方根结线虫(0.1％)								20	98	95	～99	100
	南方根结线虫(0.01％)		20	73	83	～99
南方根结线虫(0.001％)											97
	爪哇根结线虫(0.1％)		20	90	60	100							100
爪哇根结线虫(0.01％)								0-5	60	5	100
	爪哇根结线虫(0.001％)					～60
大豆异皮线虫(0.1％)							＜10	＜20	30	～60	100	100
	大豆异皮线虫(0.01％)	＜10	＜20	20	～60	100							＞95
大豆异皮线虫(0.001％)							＜10	＜20	18	～40	100
	斯氏短体线虫(0.1％)	＜20	＜20	＜20	＜20	～70							＜20
斯氏短体线虫(0.01％)							＜20	＜20	＜20	＜20	～40	＜20
	斯氏短体线虫(0.001％)

秀丽新小杆线虫是混合阶段的群体。在几种其它自由生活的线虫种类上观察到相似作用。副圆线虫(Parastrongyloides trichosuri)(澳大利亚刷尾负鼠(bushtail possum)的寄生虫)是dauer-样感染性第三阶段幼虫。也观察到对自由生活阶段的相似作用。南方根结线虫和爪哇根结线虫(根结线虫)是第二阶段的幼虫(dauer-样感染阶段)。大豆异皮线虫是第二阶段幼虫(dauer-样感染阶段)。最后，斯氏短体线虫(Pratylenchusscribneri)(玉米枯斑线虫)是混合阶段的群体。

上表中的数据证明，浓度为0.1％和0.01％的反蓖麻酸和蓖麻油酸甲酯乳剂能强烈地杀死线虫。具体说，反蓖麻酸甲酯显示出对广谱分支(divergent)线虫属的有益杀线虫活性。

实施例10

下表列举了用于克隆和制备包含羟化酶、环加氧酶、5’-UTR和3’-UTR的各种核酸构建物的引物。

                           表7：克隆中所用的序列引物

名称	序列	SEQID NO	同源于
				Hvd1	atgggaggtggtggtcgcatg	46	蓖麻的前7个密码子
Hvd2	ttaatacttgttccggtacca	47	蓖麻的后7个密码子
				Les1	atgggtgctggtggaagaataatg	48	L.fendleri的前8个密码子
Les10	tcataacttattgaagtaatagtagacaccttt	49	L.fendleri的后11个密码子
				les6	tcataacttattgttgtaata	50	L.fendleri的后7个密码子
Ecrep2	gcaatccctccccattg	51	粗糙还阳参的密码子33-38
				Ecrep8	tcacaatttatcataccaataaacacc	52	粗糙还阳参的后9个密码子
5’UTR-HIIIF	atacaaaagcttagagagagagattctgcgga	53	拟南芥Fad2 5’UTR的前20个核苷酸
				3’UTR-SphIR	attcaatgcatgcaacataatgagcagccaaaa	54	拟南芥Fad2 3’UTR的后20个核苷酸
Fad-HIIIF	attcaataagcttatgggtgcaggtggaagaat	55	拟南芥Fad2的前7个密码子
				Fad-SphIR	atacaagcatgctcataacttattgttgtacc	56	拟南芥Fad2的后7个密码子
3’Fad/cas	aagcaatggggtgggatggctttcttcagatctcccaccg	57	密码子31-38Fad2/密码子43-49蓖麻
				5’Fad/cas	cggtgggagatctgaagaaagccatcccaccccattgctt	58	密码子31-47Fad2/密码子43-49蓖麻
Cas-SalR	gtcgacatacttgttccggtaccaga	59	蓖麻的后7个密码子
				3’Fad/les	cgattgctttcttcagatctcccaccgagaaaggcggtt	60	密码子28-33Fad2/密码子35-41 L.fendleri
5’Fad/les	aaccgcctttctcggtgggagatctgaagaaagcaatcc	61	密码子28-33Fad2/密码子35-41 L.fendleri
				Les-SalIR	gtcgactaacttattgttgtaatagt	62	L.fendleri的后7个AA
3’Fad/lind	gggattgctttccttagatctcccaccgagaaaggcggtt	63	密码子28-33Fad2/密码子35-41 L.lindheimeri
				5’Fad/lind	aaccgcctttctcggtgggagatctaaggaaagcaatccc	64	密码子28-33Fad2/密码子35-41 L.lindheimeri
Lind-SalIR	gtcgactaacttattgttgtaatagt	65	L.lindheimeri的后7个密码子
				3’Fad/grac	aaccgcctttctcggtgggagatctgaagaaagcaatccc	66	密码子28-33Fad2/密码子35-41 L.gracilis

5’Fad/grac	gggattgctttcttcagatctcccaccgagaaaggcggtt	67	密码子28-33 Fad2/密码子35-41 L.gracilis
				Grac-SalIR	gtcgactcataacttattgttgtaat	68	L.gracilis的后7个密码子
3’Fad/crep	cggtgggagatctgaagaaagcaatccctccccattgctt	69	密码子32-38 Fad2/部分粗糙还阳参的前7个密码子
				5’Fad/crep	aagcaatggggagggattgctttcttcagatctcccaccg	70	密码子32-38 Fad2/部分粗糙还阳参克隆的前7个密码子
Crep-SalIR	gtcgaccaatttatgataccaataaa	71	部分粗糙还阳参克隆的后7个密码子
				5’蓖麻hindIII-k	atacaaaagcttataatgggaggtggtggtcgcat	72	蓖麻的前7个密码子
3’蓖麻BamH1	atacaaggatccttaatacttgttccggtacc	73	蓖麻的后7个密码子
				蓖麻-HANOTI	atacaagcggccgcagcgtaatctggaacatcgt	74	蓖麻的后7个密码子
5’fendhindIII-K	atacaaaagcttataatgggtgctggtggaagaat	75	L.fendleri的前7个密码子
				3’fendBamHI	atacaaggatcctcataacttattgttgtaat	76	L.fendleri的前7个密码子
5’HindIIIK/HA/fend	atacaaaagcttataatgtacccatacgatgttcc	77	L.fendleri的前7个密码子
				UT3	atgagagctcgtttaaacgattttaatgtttagc	78	UBI3终止子的前24个核苷酸
UT4	atgagaattcggccggccaatagtctcgac	79	UBI3终止子的后20个核苷酸
				UP1	tcatgaggcgcgccaaagcacatacttatcg	80	UBI3启动子的前17个核苷酸
UP2	atgagcatgcaagcttcttcgcctggaggagag	81	UBI3启动子的后23个核苷酸
				HA5	agctatgtacccatacgatgttccagattacgctg	82	HA标签
HA6	tcgacagcgtaatctggaacatcgtatgggtacat	83	HA标签
				CHA1	gatccatgtacccaatacgatgttccagattacgctctcgaggagct	84	HA标签
CHA2	ctcgagagcgtaatctggaacatcgtatgggtacatg	85	HA标签
				IRT1	atgaggcgcgccctttctctgacttttaacatcc	86	IRT2启动子的前22个核苷酸
IRT2	actggcatgcgtattgagattgttttataatatatg	87	IRT2启动子的后26个核苷酸
				蓖麻5’HindIII	atacaaaagcttatgggaggtggtggtcgcat	88	蓖麻的前6个密码子
蓖麻3’BamHI	atacaaggatccatacttgttccggtaccaga	89	蓖麻的后6个密码子
				fend F SalI	atacaaaagcttatgggtgctggtggaagaat	90	L.fendleri的前6个密码子
Fend R B-终止	atacaaggatcctaacttattgttgtaatagt	91	L.fendleri的后6个密码子
				蓖麻5’SalI	atacaagtcgacatgggaggtggtggtcgcat	92	蓖麻的前6个密码子
蓖麻3’BamH1	atacaaggatccatacttgttccggtaccaga	93	蓖麻的后6个密码子
				5’ΔKKGG2	ataaccagcaacaacagtgagagcagccaccttaagcgagc	94	蓖麻的密码子11-17、密码子22-27
3’ΔKKGG2	gctcgcttaaggtggctgctctcactgttgttgctggttat	95	蓖麻的密码子11-17、密码子22-27
				5’ΔT	ttcttcctcagcctctctcttacctagcttggcctctctat	96	L.gracilis的密码子76-82、密码子84-90
3’ΔT	atagagaggccaagctaggtaagagagaggctgaggaagaa	97	L.gracilis的密码子76-82、密码子84-90
				蓖麻XbaI MfeI R	caattgtctagattaatacttgttccggtaccag	98	蓖麻的后22个核苷酸
HIII NcoI蓖麻F	aagcttaccatgggaggtggtggtcg	99	蓖麻的前17个核苷酸
				M13反向	gaaacagctatgaccatg	100	M13噬菌体(M13/pUC质粒)
gracilis XbaI MfeIR	caattgtctagatcataacttattgttgtaatag	101	L.gracilis的后22个核苷酸
				HIII NcoI gracilisF	aagcttaccatgggtgctggtggaagaat	102	L.gracilis的前20个核苷酸
Crepis XbaI MfeIR	caattgtctagatcacaatttatgataccaataaa	103	粗糙还阳参的后23个核苷酸

BamHI蓖麻F	atacaaggatccaaatgggaggtggtggtcgcat	104	蓖麻的前20个核苷酸
				BamHI gracilis F	atacaaggatccaaatgggtgctggtggaagaat	105	L.gracilis的前20个核苷酸
BamHI NcoI S.环加氧酶F	aggatccctaccatgggtgcaggtggtcggat	106	琉璃菊的前20个核苷酸
				S.环加氧酶XbaIR	tctagattacattttatggtaccagtaaa	107	琉璃菊的后20个核苷酸
BglII NcoI粗糙还阳参F	agatctctaccatgggtgcccacggccatgg	108	粗糙还阳参的前20个核苷酸
				HA-标签-F	agcttctcgagaccatggcgtacccgtacgacgtgcccgactacgccag	109	HA标签
HA-标签-R	gatcctggcgtagtcgggcacgtcgtacgggtacgccatggtctcgaga	110	HA标签
				Fad5′UTR-F	atcctcgagagagattctgcggaggagcttc	111	拟南芥的Fad2 5′UTR
Fad5′UTR-R	atcggatccatggttctgcagaaaaccaaaagca	112	拟南芥的Fad2 5′UTR
				Fad3′UTR-F	atctctagatgaggatgatggtgaagaaattg	113	拟南芥的Fad2 3′UTR
Fad3′UTR-R	atcaagcttactgtccgaaggtcacatttc	114	拟南芥的Fad2 3′UTR
				Crep12F	ggaatgcatgtacatcgagcc	115	粗糙还阳参的密码子355-360
Crep13R	ggaacttgtgttggcatggtg	116	粗糙还阳参的密码子138-144
				Estok-14	ttggccngtntaytggttytg	117	琉璃菊的密码子81-87
Estok-17	tcyttngcytcyctccacat	118	琉璃菊的密码子350-356
				Sl-1	atgggtgctggtggtcggatg	119	琉璃菊的密码子1-7
Stok-1R	gaacacgcttacacctaggac	120	琉璃菊的密码子254-260
				Stok12R	atcaatccactggtattcac	121	琉璃菊的密码子109-114
Stok14F	gtcctaggtgtaagcgtg	122	琉璃菊的密码子254-259
				HIII NcoI粗糙还阳参F	aagcttaccatgggtgcccacggccatgg	123	粗糙还阳参的前20个核苷酸
Asc1 Nco1粗糙还阳参F	ggcgcgccaccatgggtgcccacggccatgg	124	粗糙还阳参的前20个核苷酸

实施例11

下表列出了可用于在植物营养组织中表达多肽的启动子和UTR。

                表8：在植物根中强烈表达的基因的启动子-UTR序列

元件	物种-基因	登录号	核苷酸
				TobRB7	烟草(普通烟草)-水通道蛋白(aquaporin)	S45406	1-1953
TUB-1	拟南芥(thale cress)-β1-微管蛋白	M20405	1-569
				PsMTA	豌豆(Pisum sativum)-金属硫蛋白样蛋白	Z23097	1-804
RPL16A	拟南芥(thale cress)-核糖体蛋白L16	X81799	1-1014
				ARSK1	拟南芥(thale cress)-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶	L22302	1-807
AKT1	拟南芥(thale cress)-钾转运蛋白	U06745	1-231
				LJAS2	百脉根(Lotus japonicus)-天冬酰胺合成酶	X89410	1-144
MsH3g1	紫花苜蓿(Medicago sativa)-栽培变种主要组蛋白H3.2	U09458	1-482

实施例12

本实施例描述了δ-12去饱和酶样羟化酶和环加氧酶(序列表中的SEQ ID NO：1-6和27)的克隆。

蓖麻油酸羟化酶基因的克隆

基因组DNA分离自蓖麻叶组织。用KTLA DNA聚合酶的梯度PCR反应[30个热循环(95℃1分钟，48-63℃30秒，68℃2分钟)]在标准条件下以正义引物Hydl(SEQ ID NO：46)和反义引物Hyd2(SEQ ID NO：47)扩增蓖麻羟化酶基因的基因组拷贝。用1％琼脂糖凝胶分级PCR产物。剪下长度约为1100bp的条带并进行凝胶纯化(QIAquick Gel Extraction)。用TOPO TA试剂盒(Invitrogen)克隆DNA。用自动DNA测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对完整的候选克隆进行测序。Lesauerella lindheimeri和Lesauerella gracilis双功能羟化酶基因的克隆

基因组DNA分离自L.lindheimeri和L.gracilis叶组织。用KTLA DNA聚合酶的PCR反应[30个热循环(94℃2分钟，55℃1分钟，68℃2分钟)]在标准条件下以正义引物Les1(SEQ ID NO：48)和反义引物Les10(SEQ ID NO：49)扩增Lesquerella双功能羟化酶基因的基因组拷贝。用1％琼脂糖凝胶分级PCR产物。剪下长度约为1100bp的条带并进行凝胶纯化(QIAquick Gel Extraction)。用TOPO TA试剂盒(Invitrogen)克隆DNA。用自动DNA测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对完整的候选克隆进行测序。

Lesquerella fendleri双功能羟化酶基因的克隆

基因组DNA分离自L.fendleri。用梯度PCR反应[30个热循环(95℃1分钟，45-63℃30秒，68℃2分钟)]在标准条件下以正义引物Les1(SEQ ID NO：48)和反义引物Les6(SEQ ID NO：50)扩增L.fendleri双功能羟化酶基因的基因组拷贝。用1％琼脂糖凝胶分级PCR产物。剪下长度约为1100bp的条带并进行凝胶纯化(QIAquickGel Extraction)。用TOPO TA试剂盒(Invitrogen)克隆DNA。用自动DNA测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对完整的候选克隆进行测序。

粗糙还阳参环加氧酶基因的克隆

基因组DNA分离自粗糙还阳参。用梯度PCR反应[30个热循环(95℃1分钟，45-63℃30秒，68℃2分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件]以正义引物Ecrep2(SEQID NO：51)和反义引物Ecrep8(SEQ ID NO：52)扩增粗糙还阳参环加氧酶基因的部分基因组克隆。用1％琼脂糖凝胶分级PCR产物，剪下长度约为1100bp的条带并进行凝胶纯化(QIAquick Gel Extraction)。用TOPO TA试剂盒(Invitrogen)克隆基因片段。用自动DNA测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对完整的候选克隆进行测序，产生质粒克隆Div2966。粗糙还阳参环加氧酶的部分序列数据获自Div2966，包括密码子33-374和3’终止密码子的核苷酸序列。该克隆缺少粗糙还阳参环加氧酶的前32个密码子，以及5’非翻译区。为了获得粗糙还阳参环加氧酶基因的丢失5’序列，使用反向PCR技术。反向PCR能够快速扩增紧靠侧接于靶序列的DNA的未知节段。简要说，用所选限制性酶消化粗糙还阳参基因组DNA，然后连接环化基因组DNA的较小节段。然后，将这些环化节段用作PCR模板，用引物指导从感兴趣的已知基因区域向外进行DNA扩增，以扩增丢失的侧翼序列。可用反向PCR扩增丢失的5’或3’序列。用基因特异性引物(Crep12F；SEQ ID NO：115和Crep13R；SEQ ID NO：116)对消化的、连接的和环化的基因组DNA进行直接PCR扩增，该引物是从在感兴趣基因内退火的已知序列设计的。用此方法产生克隆Div4373，它含有密码子1-137和355-374。总之，克隆Div2966和Div4373含有包含粗糙还阳参环加氧酶基因的完整开放阅读框的序列。

琉璃菊环加氧酶基因的克隆

基因组DNA分离自琉璃菊。设计简并引物以退火至琉璃菊环加氧酶基因内的区域，预计该区域在许多植物环加氧酶中具有高度的序列保守性。用正义引物Estok14(SEQ ID NO：117)和反义引物Estok17(SEQ ID NO：118)扩增琉璃菊环加氧酶基因的基因组片段。然后将扩增的PCR产物克隆入合适载体，以进行DNA分析。用此方法获得克隆Div4023。此克隆含有密码子88-356。为了获得该基因的5’端序列，用在感兴趣基因内退火的已知序列设计基因特异性引物，用正义引物S1-1(SEQ IDNO：119)和反义引物Stok1R(SEQ ID NO：120)扩增环加氧酶基因的其余部分。这样产生质粒克隆Div4172。此克隆含有密码子1-260。为了获得琉璃菊环加氧酶基因的3’端，应用反向PCR技术。反向PCR能够快速扩增直接侧接于靶序列的DNA的未知节段。简要说，用所选限制性酶消化琉璃菊基因组DNA，然后连接环化基因组DNA的较小节段。然后将这些环化节段用作PCR模板，用引物指导从感兴趣的已知基因区域向外DNA扩增，以扩增丢失的侧翼序列。可用反向PCR扩增丢失的5’或3’序列。用基因特异性引物Stok12R(SEQ ID NO：121)和Stok14F(SEQ ID NO：122)对消化的、连接的和环化的基因组DNA进行直接PCR扩增，该引物是从在感兴趣基因内退火的已知序列设计的。用此方法产生克隆Div4324，它含有密码子1-108和254-377。总之，克隆Div4023、Div4172和Div4324含有包含琉璃菊环加氧酶基因的完整开放阅读框的序列。

克隆ΔTL.gracilis双功能羟化酶构建物：

设计特异性引物以去除全长蓖麻羟化酶基因的核苷酸245-247(CTA)。用基于两轮PCR的亚克隆方案产生ΔTL.gracilis双功能羟化酶。第一轮PCR引物如下：为了扩增不包含核苷酸245-247的双功能羟化酶的5’端，用克隆载体pCR2.1所含L.gracilis双功能羟化酶基因的一个拷贝作为模板，以正义引物M13 Reverse(SEQ IDNO：100)和反义引物3’ΔT(SEQ ID NO：97)进行PCR反应。为了扩增不包含核苷酸245-247的双功能羟化酶基因的3’端，采用正义引物5’ΔT(SEQ ID NO：96)和反义引物gracilis XbaI Mfe R(SEQ ID NO：101)。在第二轮PCR中，用正义引物HIII NcoIgracilis F(SEQ ID NO：102)和反义引物gracilis XbaI Mfe R(SEQ ID NO：101)产生PCR终产物ΔT L.gracilis羟化酶。用KTLA DNA聚合酶在标准条件下以5个热循环(94℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的15个热循环(94℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)扩增PCR产物。然后用NcoI和XbaI限制性酶切位点将构建物亚克隆入植物表达载体。

ΔKKGG蓖麻羟化酶构建物的克隆：

设计特异性引物以去除全长蓖麻羟化酶基因的核苷酸53-64(AGAAAGGAGGAA，SEQ ID NO：140)。用基于两轮PCR的亚克隆方案产生ΔKKGG蓖麻羟化酶基因。第一轮PCR引物如下：为了扩增不包含核苷酸53-64的蓖麻羟化酶基因的5’端，用克隆载体pCR2.1所含蓖麻羟化酶基因的一个拷贝作为模板，以正义引物M13Reverse(SEQ ID NO：100)和反义引物3’ΔKKGG2(SEQ ID NO：95)进行PCR反应。为了扩增不包含核苷酸53-64的蓖麻羟化酶基因的3’端，采用正义引物5’ΔKKGG2(SEQ ID NO：94)和反义引物蓖麻XbaI MfeI R(SEQ ID NO：98)。在第二轮PCR中，用正义引物HIII NcoI蓖麻F(SEQ ID NO：99)和蓖麻XbaI Mfe R(SEQ IDNO：98)产生PCR终产物ΔKKGG蓖麻羟化酶。用KTLA DNA聚合酶在标准条件下以5个热循环(94℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的15个热循环(94℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)扩增PCR产物。然后用NcoI和XbaI限制性酶切位点将构建物亚克隆入植物表达载体。

实施例13

本实施例描述了拟南芥fad2调控和编码序列的分离以及fad2/羟化酶和fad2/环加氧酶融合多肽的构建。参见序列表中的SEQ ID NO：7-12。

拟南芥fad2去饱和酶cDNA克隆的分离

总RNA分离自拟南芥叶组织(Qiagen RNeasy)。用Roche Titan单管RT-PCR系统以正义引物5’UTR-HIIIF(SEQ ID NO：53)和反义引物3’UTR-SphIR(SEQ ID NO：54)进行RT-PCR。按照试剂盒指南设定RT-PCR[1个循环(50℃30分钟)，1个循环(94℃2分钟)，10个循环(94℃10秒，60℃30秒，68℃1分钟)，25个循环(94℃10秒，60℃30秒，68℃1分钟+各循环中每次延伸5秒)，1个循环(68℃7分钟)]。剪下长度约为1100bp的条带并进行凝胶纯化(QIAquick Gel Extraction)。用TOPO TA试剂盒(Invitrogen)克隆DNA。用自动DNA测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对完整的候选克隆进行测序。

拟南芥fad2去饱和酶基因组DNA克隆的分离

基因组DNA分离自拟南芥叶组织。用KTLA DNA聚合酶的PCR反应[5个热循环(95℃1分钟，54℃30秒，68℃2分钟)，25个热循环(95℃1分钟，62℃30秒，68℃2分钟)]在标准条件下以正义引物5’UTR-HIIIF(SEQ ID NO：53)和反义引物3’UTR-SphIR(SEQ ID NO：54)扩增基因组fad2DNA。用1％琼脂糖凝胶分级PCR产物。剪下长度约为2400bp的条带并进行凝胶纯化(QIAquick Gel Extraction)。用TOPO TA试剂盒(Invitrogen)克隆DNA。用自动DNA测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对完整的候选克隆进行测序。

fad2/蓖麻羟化酶嵌合cDNA的产生

用基于两轮PCR的亚克隆方案产生所有嵌合cDNA。在第一轮PCR中，用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物3’Fad/cas(SEQ ID NO：57)扩增fad2cDNA克隆的前114个碱基。用PCR[1个热循环(94℃4分钟)，5个热循环(94℃45秒，50℃45秒，68℃60秒)，25个热循环(94℃45秒，57℃45秒，68℃60秒)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]以正义引物5’-Fad/cas(SEQ ID NO：58)和反义引物Cas-SalR(SEQ ID NO：59)扩增蓖麻羟化酶cDNA克隆的后1034个碱基(不包含TAA)。用1％琼脂糖凝胶分级PCR产物。剪下条带并清洁(QIAquick Gel Extraction-终体积50μL)。用TE 1∶100稀释清洁产物，在第二轮PCR中将两种DNA用作模板(各1μL)。在第二轮PCR中，用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物Cas-SalR(SEQ IDNO：59)产生PCR终产物fad2/蓖麻嵌合cDNA[1个热循环(94℃4分钟)，5个热循环(94℃45秒，50℃45秒，68℃60秒)，25个热循环(94℃45秒，57℃45秒，68℃60秒)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]。剪下长度约为1300bp的条带并进行凝胶纯化(QIAquick Gel Extraction)。用TOPO TA试剂盒(Invitrogen)克隆DNA。用自动DNA测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对完整的候选克隆进行测序。

fad2/Lesquerella fendleri羟化酶嵌合cDNA的产生

用相同的基于两轮PCR的亚克隆方案产生 fad2/Lesquerella fendleri嵌合cDNA。第一轮PCR引物如下：为了扩增拟南芥 fad2的5’端，采用正义引物Fad-HIIIF(SEQ IDNO：55)和反义引物3’-Fad/les(SEQ ID NO：60)。为了扩增L.fendleri双功能羟化酶基因的3’端，采用正义引物5’Fad/les引物(SEQ ID NO：61)和反义引物Les-SalIR(SEQID NO：62)。在第二轮PCR中，用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物Les-SalIR(SEQ ID NO：62)产生PCR终产物 fad2/Lesquerella fendleri嵌合cDNA。

fad22/Lesauerella lindheimeri羟化酶嵌合cDNA的产生

用相同的基于两轮PCR的亚克隆方案产生 fad2/Lesquerella lindheimeri嵌合cDNA。第一轮PCR引物如下：为了扩增拟南芥 fad2的5’端，采用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物3’-Fad/lind(SEQ ID NO：63)。为了扩增L.lindheimeri双功能羟化酶基因的3’端，采用正义引物5’Fad/lind引物(SEQ ID NO：64)和反义引物Lind-SalIR(SEQ ID NO：65)。在第二轮PCR中，用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物Lind-SalIR(SEQ ID NO：65)产生PCR终产物 fad2/Lesquerellalindheimeri嵌合cDNA。

fad2/Lesquerella gracilis A羟化酶嵌合cDNA的产生

用相同的基于两轮PCR的亚克隆方案产生 fad2/Lesquerella gracilis A嵌合cDNA。第一轮PCR引物如下：为了扩增拟南芥 fad2的5’端，采用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物3’-Fad/grac(SEQ ID NO：66)。为了扩增L.gracilis双功能羟化酶基因的3’端，采用正义引物5’-Fad/grac引物(SEQ ID NO：67)和反义引物Grac-SalIR(SEQ ID NO：68)。在第二轮PCR中，用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物Grac-SalIR(SEQ ID NO：68)产生PCR终产物 fad2/Lesquerella gracilisA嵌合cDNA。

fad2/粗糙还阳参环加氧酶嵌合cDNA的产生

用相同的基于两轮PCR的亚克隆方案产生 fad2/粗糙还阳参嵌合cDNA。第一轮PCR引物如下：为了扩增拟南芥 fad2的5’端，采用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物3’-Fad/crep(SEQ ID NO：69)。为了扩增粗糙还阳参环加氧酶的3’端，采用正义引物5’Fad/crep引物(SEQ ID NO：70)和反义引物Crep-SalIR(SEQ ID NO：71)。在第二轮PCR中，用正义引物Fad-HIIIF(SEQ ID NO：55)和反义引物Crep-SalIR(SEQ ID NO：71)产生PCR终产物 fad2/粗糙还阳参嵌合cDNA。

实施例14

本实施例描述了十一种(11)合成、优化的羟化酶和环加氧酶序列的构建。

如下所述构建五种密码子优化的羟化酶(蓖麻，HA-标记的蓖麻和Lesquerellagracilis)和环加氧酶(琉璃菊A和粗糙还阳参)序列。首先将起始甲硫氨酸密码子下游的第二个、第三个和第四个密码子改变为GCT、TCC和TCC(编码丙氨酸、丝氨酸和丝氨酸)。其次，在拟南芥、大豆、番茄或烟草基因组中出现的百分数为8％或更低的密码子(如精氨酸的CGG)用该氨基酸最常见或第二常见的密码子取代(如精氨酸的AGA或AGG)。最后，如果毗连密码子对中的两个密码子在拟南芥、大豆、番茄或烟草基因组中出现频率为12％或更低，那么优化毗连密码子对的一个成员。密码子优化过程的数据来自密码子使用数据库( http：//www.kazusa.or.jp/codon/)。

也改变密码子以去除可能使mRNA不稳定的ATTTA(即AUUUA)元件，以消除潜在的聚腺苷酸化位点，并破坏五个或多个重复的A、G、C或T核苷酸(如TTTTT)。也修饰密码子以降低异常剪接的可能性。用NetPlantGene预测服务器(http：//www.cbs.dtu.dk/services/NetPGene/)评价剪接可能性。只要预测供体和受体存在的置信度大于0.9，则使密码子突变以消除供体(GT)或受体(AG)位点，从而降低剪接可能性。SEQ ID NO：30、31、32和129是这些优化序列的例子。

制备蓖麻和Lesquerella gracilis羟化酶以及粗糙还阳参、角力还阳参和第二种琉璃菊(琉璃菊B)环加氧酶基因的其它密码子优化变体。这些其它序列含有修饰，以更接近地模拟最常见的大豆(Glycine max)密码子。将起始甲硫氨酸密码子下游的第二个、第三个和第四个密码子改变为GCT、TCC和TCC(编码丙氨酸、丝氨酸和丝氨酸)。也改变密码子以去除可能使mRNA不稳定的ATTTA(即AUUUA)元件，以消除潜在的聚腺苷酸化位点，并破坏五个或多个重复的A、G、C或T核苷酸(如TTTTT)。也修饰密码子以降低异常剪接的可能性。用NetPlantGene预测服务器(http：//www.cbs.dtu.dk/services/NetPGene/)评价剪接可能性。只要预测供体和受体存在的置信度大于0.9，则使密码子突变以消除供体(GT)或受体(AG)位点，从而降低剪接可能性。密码子优化过程的数据来自密码子使用数据库(http：//www.kazusa.or.jp/codon/)。SEQ ID No：28、29、130、131、132和133分别是这种优化的蓖麻、琉璃菊A、角力还阳参、琉璃菊B、粗糙还阳参和L.gracilis基因的例子。

实施例15

本实施例描述了羟化酶、双功能羟化酶和环加氧酶多肽在酿酒酵母中的表达，并通过GC-MS分析了酵母中的脂肪酸特征。

酵母菌株、培养基和培养条件

这些研究中通篇采用了酿酒酵母菌株YPH499(MATa ura3-52 lys2-801 ase2-101trp1-Δ63 his3-Δ2000 leu2-Δ1)和INVscl(MATa his3-Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATαhis3Δ1 leu2trp1-289 ura3-52)。

用于酵母转化的质粒

用质粒pYES2(Invitrogen)转化酵母菌株。质粒含有大肠杆菌复制来源、酵母质粒复制来源、大肠杆菌氨苄青霉素抗性基因和酵母基因URA3。它利用了包含半乳糖-诱导型启动子(GAL-1)的表达盒。

将感兴趣基因克隆入酵母表达载体pYES2

用特异性引物的PCR扩增修饰蓖麻羟化酶和L.gracilis双功能基因组克隆。

蓖麻羟化酶：设计以下特异性引物，以将Kozak共有序列和HindIII限制性位点引入起始密码子上游，将BamH1位点引入紧接终止密码子下游：正向引物：5’-蓖麻hindIII-k(SEQ ID NO：72)和反向引物：3’蓖麻BamHI(SEQ ID NO：73)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶。用HindIII和BamH1消化PCR产物，然后克隆入pYES2酵母表达载体的HindIII、BamH1。

含有C-末端HA标签的蓖麻羟化酶：设计以下特异性引物，以将Kozak共有序列和HindIII限制性位点引入起始密码子上游，将NotI位点和HA标签引入紧接终止密码子之前：正向引物：5’-蓖麻hindIII-k(SEQ ID NO：72)和反向引物：5’-蓖麻-HANOTI(SEQ ID NO：74)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]扩增含有C-末端HA标签的羟化酶。用Hindlll和NotI消化PCR产物，随后克隆入pYES2表达载体的Hindlll、NotI位点。

含有N-末端HA标签的蓖麻羟化酶：设计以下引物，以构建含有N-末端HA标签的蓖麻羟化酶，正向引物：BamHI蓖麻F(SEQ ID NO：104)和反向引物：蓖麻XbaIMfeI R(SEQ ID NO：98)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶。用BamHI/MfeI消化PCR产物，亚克隆入pUC-HA载体的BamHI/EcoRI位点。然后将羟化酶加N-末端HA标签亚克隆(HindIII/XbaI)入酵母表达载体pYES2。

Lesquerella lindheimeri双功能酶：设计以下特异性引物，以将Kozak共有序列和HindIII限制性位点引入紧接起始密码子上游，将BamH1位点引入紧接终止密码子下游：正向引物：5’-fendhindIII-K(SEQ ID NO：75)和反向引物：3’-fendBamHI(SEQID NO：76)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶。用Hindlll、BamH1消化PCR产物并克隆入pYES2酵母表达载体的Hindlll、BamH1位点。

含有N-末端HA标签的Lesquerella lindheimeri双功能酶：设计以下特异性引物，以将Kozak共有序列和HindIII位点引入紧接HA标签上游，将BamH1位点引入紧接终止密码子之前：正向引物：5’-HindIIIK/HA/fend(SEQ ID NO：77)和反向引物：3’-fendBamHI(SEQ ID NO：76)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]扩增含有N-末端HA标签的羟化酶。用Hindlll和BamH1消化PCR产物，随后克隆入pYES2表达载体的Hindlll、BamH1。

Lesquerella gracilis双功能酶：设计以下特异性引物，以引入Kozak共有序列：正向引物：HIII NcoI gracilis F(SEQ ID NO：102)和反向引物：gracilis XbaI MfeI R(SEQ ID NO：101)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶。用Hindlll、XbaI消化PCR产物并克隆入pYES2酵母表达载体的Hindlll、XbaI位点。

ΔT Lesquerella gracilis双功能酶：设计以下特异性引物，以引入Kozak共有序列：正向引物：HIII NcoI gracilis F(SEQ ID NO：102)和反向引物：gracilis XbaI MfeIR(SEQ ID NO：101)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]扩增ΔT L.gracilis羟化酶。用Hindlll、XbaI消化PCR产物，并克隆入pYES2酵母表达载体的Hindlll、XbaI。

ΔKKGG蓖麻羟化酶：设计以下特异性引物，以引入Kozak共有序列：正向引物：HIII NcoI蓖麻F(SEQ ID NO：99)和反向引物：蓖麻XbaI MfeI R(SEQ ID NO：98)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶。用Hindlll、XbaI消化PCR产物，并克隆入pYES2酵母表达载体的Hindlll、XbaI。

粗糙还阳参环加氧酶：设计以下特异性引物，以引入Kozak共有序列：正向引物：HIII NcoI粗糙还阳参F(SEQ ID NO：123)和反向引物：Crepis XbaI MfeI R(SEQID NO：103)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶。用Hindlll、XbaI消化PCR产物，并克隆入pYES2酵母表达载体的Hindlll、XbaI。

琉璃菊环加氧酶：设计以下特异性引物，以引入Kozak共有序列：正向引物：BamHI NcoI S.环加氧酶F(SEQ ID NO：106)和反向引物：S.环加氧酶XbaI R(SEQ IDNO：107)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶。用BamHI、XbaI消化PCR产物，并克隆入pYES2酵母表达载体的BamHI、XbaI。

核苷酸序列测定

用本领域技术人员熟知的方法通过自动测序仪(如Applied Biosystems，Inc.的373型)对蓖麻羟化酶、含有N-末端HA标签的蓖麻羟化酶、含有C-末端HA标签的蓖麻羟化酶、L.lindheimeri双功能酶、含有N-末端HA标签的L.lindheimeri双功能酶、ΔT L.gracilis和ΔKKGG蓖麻羟化酶进行测序。

转化酵母

根据Invitrogen pYES2试剂盒(V825-20)进行转化。用YPD培养基培养新鲜的酵母培养物(起始吸光度＝0.4)4小时。收集细胞并用1X TE洗涤一次，然后重悬于2mL1X LiAc/0.5X TE(100mm乙酸锂pH 7.5，5mm tris-HCL pH 7.5，0.5mm EDTA)。向1μg质粒DNA中加入100μg变性的鲱精DNA，作为DNA运载体。加入100μL感受态酵母和700μL 1×LiAc/40％PEG-3350/1×TE(100mM乙酸锂pH 7.5，40％PEG-3350，10mM tris-HCl pH 7.5，1mM EDTA)。在30℃孵育该混合物30分钟。加入88μL DMSO，在42℃孵育该混合物7分钟。离心后，将细胞重悬于1×TE(100μL)并接种在含有合适添加物的极限培养基上。

感兴趣基因在酵母中过度表达

同时培养用不携带插入物、或羟化酶或双功能酶之一的基因的pYES2质粒转化的酵母菌株。在蓖麻油酸分析中，用补充有2％葡萄糖和1％酪蛋白氨基酸的SC-URA(不含尿嘧啶的酵母合成完全培养基，Sigma)在30℃培养转化细胞，至光密度(600nm)为2.5。然后离心细胞，用不含葡萄糖的SC-URA培养基洗涤三次，用补充有2％半乳糖和1％酪蛋白氨基酸的SC-URA培养基(不含尿嘧啶的酵母合成完全培养基，Sigma)在30℃培养48小时。离心并干燥培养物。

酵母提取物的脂肪酸分析

用(400μL 1％甲醇钠的甲醇溶液)使干燥的酵母沉淀甲基化，用己烷提取，并进行三甲基甲硅烷基化(100μL BSTAFA-TMCS，Supelco，90℃45分钟)。用Agilent 6890GC-5973质量选择检测器(GC/MS)和Agilent DB-23毛细管柱(0.25mm×30m×0.25μm)分析样品。将注射器维持在250℃，炉温是235℃，将氦流速维持在1.0mL/分钟。

表9显示了表达实施例13所述一些酶的酵母的MS数据例子。

表9：含有或不含N-末端HA标签的蓖麻羟化酶：

构建物	％R
		3522	6.7
3522	4.1
		3522	4.8
3522	9.5
		3522	4.6
4074*	2.1
		4074*	3.0
4074*	5.3
		4074*	3.2

*指构建物携带N-末端HA标签。

这些GC/MS数据表明，在酵母中表达时蓖麻的羟化酶(3522或4074^*)是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数(％R)是总脂肪酸的百分数。

表10：酵母中表达的L.gracilis双功能羟化酶

构建物	％R
		3958	8.0
3958	8.2
		3958	13.1
3958	12.2
		3958	10.7
3958	9.2
		3958	6.3

这些GC/MS数据表明，在酵母中表达时L.Gracilus的羟化酶(3958)是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数(％R)是总脂肪酸的百分数。

表11：酵母中表达的ΔT Lesquerella gracilis双功能羟化酶

构建物	％R
		4323	5.9
4323	5.9
		4323	8.2
4323	7.2
		4323	7.4

这些GC/MS数据表明，在酵母中表达时，尽管缺失了氨基酸83，但是L.gracilis的羟化酶(3958)是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数(％R)是总脂肪酸的百分数。

表12：酵母中表达的ΔKKGG蓖麻羟化酶

构建物	％R
		4303	0.7
4303	1.4
		4303	1.5
4303	1.3
		4303	1.5

这些GC/MS数据表明，在酵母中表达时，尽管18-21位的氨基酸缺失，但是缺失突变的蓖麻羟化酶(ΔKKGG)是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数(％R)是总脂肪酸的百分数。

  表13：阴性对照

构建物	％R	％O
			3677	0	35.8
3677	0	34.71
			367736773677	000	36.3430.8730.16

这些GC/MS数据表明，不含插入物的载体在酵母中表达时，不能检测到所产生的蓖麻油酸的产量。该表中所列蓖麻油酸百分数(％R)和油酸百分数(％O)百分数是总脂肪酸的百分数。

实施例16

本实施例描述了适合在植物中表达的载体的构建。载体的示意图见图4-6。

转基因载体的产生：构建修饰的pUCAP载体

修饰pUCAP载体[Engelen等，(1995)Transgenic Res.4(4)：288-290]产生pUCAP2、pUCAP3、pUCAP4、pUCAP5和pUCAP6。

设计以下特异性引物，以引入侧接于Ubi3终止子的5’-SacI和3’-EcoRI位点：正向引物：UT3(SEQ ID NO：78)和反向引物：UT4(SEQ ID NO：79)。用PCR[25个循环(94℃4分钟，60℃30秒，68℃1分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]从pBinplus[Engelen等，(1995)Transgenic Res.4(4)：288-290]扩增Ubi3终止子。用SacI和EcoRI消化PCR产物，然后克隆入pUCAP产生pUCAP1。

设计以下特异性引物，以引入侧接于Ubi3启动子的5’-AscI和3’-SphI位点：正向引物：UP1(SEQ ID NO：80)和反向引物：UP2(SEQ ID NO：81)。用PCR[25个循环(94℃4分钟，60℃30秒，68℃1分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]从pBinplus[Engelen等，(1995)Transgenic Res.4(4)：288-290]扩增Ubi3启动子。用AscI和SphI消化PCR产物，然后克隆入pUCAP1的AscI/SphI位点产生pUCAP2。

设计以下特异性寡核苷酸，以产生BamH1悬挂于紧接启动密码子之前、SacI悬挂于紧接标签的最后一个密码子之后的HA标签：正义寡核苷酸：CHA1(SEQ IDNO：84)和反义寡核苷酸：CHA2(SEQ ID NO：85)。通过使寡核苷酸(0.1pg/μL)在92℃退火3分钟并缓慢回复到室温产生HA标签。将HA标签克隆入pUCAP2的BamHI/SacI位点产生pUCAP3。克隆入pUCAP3的MCS的DNA的C末端将含有HA标签。

设计以下特异性寡核苷酸，以产生Hindlll悬挂于紧接启动密码子之前、SalI悬挂于紧接标签的最后一个密码子之后的HA标签：正义寡核苷酸：HA5(SEQ ID NO：82)和反义寡核苷酸：HA6(SEQ ID NO：83)。通过使寡核苷酸(0.1pg/μL)在92℃退火3分钟并缓慢回复到室温产生HA标签。将HA标签克隆入pUCAP2的Hindlll/SalI位点产生pUCAP4。克隆入pUCAP4的MCS的DNA的N末端将含有HA标签。

设计以下特异性引物，以将侧接于拟南芥IRT2启动子的5’-AscI位点和3’-SphI位点加入pUCAP1的AscI和SphI：正向引物：IRT1(SEQ ID NO：86)和反向引物：IRT2(SEQ ID NO：87)。用30个循环的梯度PCR[(95℃4分钟，48-63℃30秒，68℃2分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]从拟南芥扩增IRT2启动子。用AscI/SphI消化PCR产物，将AscI/SphI克隆入pUCAP1产生pUCAP5。

通过AscI/SphI位点以IRT2启动子替换pUCAP3的Ubi3启动子，从而产生pUCAP6。

用于N-末端融合物的含HA-标签载体的产生。

用标准方法将寡核苷酸HA-标签-F(SEQ ID NO：109)和HA-标签-R(SEQ ID NO：110)混合并退火。退火产物产生HindIII和BamHI限制性位点的相容性末端，将其克隆入质粒载体pUC118，产生质粒pUC-HA。

含有拟南芥fad2基因的5′UTR和3′UTR区的植物转化载体。

将拟南芥基因组DNA用作模板，KTLA是选择用于PCR的DNA聚合酶。用Fad5′UTR-F(SEQ ID NO：111)和Fad5′UTR-R(SEQ ID NO：112)引物PCR扩增fad2的5′UTR、第一个内含子和第一个密码子，侧翼是限制性位点，5′端是XhoI，3′端是NcoI、BamHI。在标准条件下进行如下所述的PCR反应：97℃30秒，35个扩增循环(94℃45秒，55℃1分钟，72℃90秒)，最后在72℃延伸5分钟。将PCR产物克隆入质粒载体pCR2.1(Invitrogen)。

用引物Fad3′UTR-F(SEQ ID NO：113)和Fad3′UTR-R(SEQ ID NO：114)PCR扩增fad2的3′UTR。如下所述进行反应：97℃10秒，35个扩增循环(94℃30秒，60℃1分钟，72℃2.5分钟)。将PCR产物克隆入质粒载体pCR2.1。通过DNA测序验证了两种PCR产物fad2 5′UTR(SEQ ID NO：44)和Fad2 3′UTR(SEQ ID NO：45)的身份。

用两个步骤构建含有两种fad2 UTR区的植物转化载体：首先，将fad2 5′UTR片段作为XhoI/BamHI插入物亚克隆到紧接双载体的CaMV35S启动子的下游。然后，用XbaI和HindIII限制性位点之间的拟南芥fad2 3′UTR片段取代质粒中相同位点之间存在的根癌土壤杆菌NOS 3′UTR，产生称为pFADUTR的质粒。

将羟化酶和双功能羟化酶基因克隆入pUCAP3、pUCAP4和pUCAP6

用特异性引物通过PCR扩增产生蓖麻羟化酶和L.lindheimeri双功能羟化酶基因组克隆。

含有C-末端HA标签的蓖麻羟化酶：设计以下特异性引物，以将Hindlll位点引入紧接起始密码子的上游，将BamHI位点引入紧接终止密码子之前：正向引物：蓖麻5’-HindIII(SEQ ID NO：88)和反向引物：蓖麻3’-BamHI(SEQ ID NO：89)。用PCR[5个循环(94℃4分钟，94℃45秒，50℃45秒，72℃)和随后的25个循环(94℃45秒，58℃45秒，72℃2分钟)，KTLA，标准条件下]扩增羟化酶。用HindIII和BamH1消化PCR产物，然后克隆入pUCAP3表达载体的HindIII、BamH1产生Rc-pUCAP3。

含有N-末端HA标签的蓖麻羟化酶：设计以下引物，以用N末端HA标签标记蓖麻羟化酶：正向引物：BamHI蓖麻F(SEQ ID NO：104)和反向引物：蓖麻XbaI MfeIR(SEQ ID NO：98)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLADNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶基因。用BamHI/MfeI消化PCR产物，并亚克隆入pUC-HA载体的BamHI/EcoRI位点。

含有N末端HA标签的Lesquerella lindheimeri双功能酶：设计以下特异性引物，以将SalI位点引入紧接起始密码子的上游，将BamHI位点引入紧接终止密码子之后：正向引物fend F SalI(SEQ ID NO：90)和反向引物：Fend R B-stop(SEQ ID NO：91)。用PCR[5个循环(94℃4分钟，94℃45秒，50℃45秒，72℃2分钟)和随后的25个循环(94℃45秒，58℃45秒，72℃2分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]扩增双功能羟化酶基因。用SalI和BamH1消化PCR产物，然后克隆入pUCAP4的SalI/BamH1产生Rc-pUCAP4。

含有N末端HA标签的L.gracilis双功能羟化酶：设计以下引物，以用N末端HA标签标记L.gracilis双功能羟化酶，正向引物：BamHI gracilis F(SEQ ID NO：105)和反向引物：gracilis XbaI MfeI R(SEQ ID NO：101)。用PCR[5个热循环(92℃1分钟，50℃30秒，68℃1.5分钟)和随后的25个热循环(92℃1分钟，57℃30秒，68℃1.5分钟)，KTLA DNA聚合酶，标准条件下]扩增羟化酶基因。用BamHI/MfeI消化PCR产物，并亚克隆入pUC-HA载体的BamHI/EcoRI位点。

如上所述用BglII NcoI粗糙还阳参F(SEQ ID NO：108)/Crepis XbaI MfeI R(SEQID NO：103)和BamHI NcoI S.环加氧酶F(SEQ ID NO：106)/S.环加氧酶XbaI R(SEQ IDNO：107)将粗糙还阳参和琉璃菊环加氧酶基因亚克隆入pUC-HA载体。

如上所述用Asc1 Nco1粗糙还阳参F(SEQ ID NO：124)/Crepis XbaI MfeI R(SEQID NO：103)和BamHI NcoI S.环加氧酶F(SEQ ID NO：106)/S.环加氧酶XbaI R(SEQ IDNO：107)将缺少HA序列的粗糙还阳参和琉璃菊环加氧酶基因亚克隆入植物表达载体。

植物表达载体

用AscI和PacI消化构建物Rc-pUCAP3、Ll-pUCAP4和Rc-pUCAP6，以释放插入物，然后将插入物亚克隆入如[Engelen等，(1995)Transgenic Res.4(4)：288-290]所述工程改造的pBinPlusARS双元载体的AscI/PacI位点，产生Rc-3pBinPlusARS、Ll4-pBinPlusARS和Rc6-pBinPlusARS。

用NcoI/XbaI限制性酶位点将ΔKKGG蓖麻、ΔT gracilis、蓖麻羟化酶、嵌合fad2/蓖麻羟化酶、L.gracilis双功能羟化酶、嵌合fad2/L.gracilis双功能羟化酶、粗糙还阳参环加氧酶和琉璃菊环加氧酶基因亚克隆入植物表达载体。去除pUC-HA中的N-末端HA标记的嵌合fad2/蓖麻羟化酶和N-末端嵌合fad2/蓖麻羟化酶，并用NcoI/XbaI限制性酶位点亚克隆入植物表达载体。也用NcoI/XbaI限制性位点将上述构建物亚克隆入含有fad2 5’UTR和fad2 3’UTR(pFADUTR)的植物表达载体。

实施例17

本实施例描述了用实施例16所述质粒载体产生转基因拟南芥植物、转基因番茄愈伤组织、转基因番茄须根、拟南芥须根、大豆须根和大豆复合植物。

根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)和发根土壤杆菌的转化

如下所述将携带编码羟化酶、环加氧酶或嵌合fad2构建物的基因的植物表达载体转化入根癌土壤杆菌LB4404。用100mL LB[(1％细菌用胰蛋白胨，0.5％氯化钠和0.5％细菌酵母提取物)，补充有卡那霉素(50μg/mL)、利福平(10μg/mL)和链霉素(150μg/mL)]培养土壤杆菌过夜。用1mL过夜培养物接种补充有相同物质的100mL LB，在30℃培养4小时。使该培养物冷却10分钟，离心收获细胞。将细胞重悬于1mL冰冷的CaCl₂(20mM)并分成100μL等分。将1μg质粒DNA加入细胞，在干冰上冷冻，置入37℃5分钟，在1mL LB中30℃振荡90分钟。离心细胞并重悬于100μL LB，接种在LB平板[(1％细菌用胰蛋白胨、0.5％氯化钠、0.5％细菌酵母提取物和15％琼脂)，补充有卡那霉素(50μg/mL)、利福平(10μg/mL)和链霉素(150μg/mL)]上。

以与根癌土壤杆菌菌株LB4404相同的方式转化发根土壤杆菌菌株(Agrobacterium rhizogenes)A4，除了以下方面：所用培养基是MGL[提取物(2.5g/L)、胰蛋白胨(5g/L)、氯化钠(5g/L)、L-谷氨酸(1g/L)、甘露醇(5g/L)、磷酸钾(0.26g/L)、七水合硫酸镁(100mg/L)和生物素(1mg/L)]和MGL平板[酵母提取物(2.5g/L)、胰蛋白胨(5g/L)、氯化钠(5g/L)、L-谷氨酸(1g/L)、甘露醇(5g/L)、磷酸钾(0.26g/L)、七水合硫酸镁(100mg/L)、生物素(1mg/L)和细菌-琼脂(14g/L)]。

植物转化

按照Clough和Bent[Clough和Bent(1998)Plant J。19(3)：249-257]通过根癌土壤杆菌转化拟南芥。简要说，在30℃培养5mL转化的LB4404(LB-10μg/mL利福平、50μg/mL卡那霉素、150μg/mL链霉素)的过夜培养物。用5mL培养物接种500mLLB(10μg/mL利福平、50μg/mL卡那霉素、150μg/mL链霉素)，在30℃培养过夜。离心培养物(5K，5分钟)。将沉淀重悬于5％葡萄糖+.02％Silwet L-77。将上述植物的地面部分浸入土壤杆菌溶液5分钟，温和振荡。在穹顶下覆盖植物过夜。

拟南芥叶和根组织的脂肪酸分析

植物体的产生

种子杀菌：将来自转化植物的约200粒第二代种子放入eppendorf管中。加入1mL 20％漂白剂的乙醇溶液，使该管在室温下静置15分钟。然后用100％乙醇洗涤种子两次，打开管盖，放入层流净化罩干燥过夜。

种子发芽：将约50粒种子放在0.5X MS平板上，用石蜡膜封口，保持在室温下直到发芽。

将约0.10g根组织或叶组织放入1.5mL eppendorf管，在干冰上冷冻，然后用研棒研磨。然后用(500μL 1％甲醇钠的甲醇溶液)甲基化研磨过的根组织，用己烷抽提，并进行三甲基甲硅烷基化(100μL BSTAFA-TMCS，Supelco，90℃45分钟)。用Agilent6890GC-5973质量选择检测器(GC/MS)和Agilent DB-23毛细管柱(0.25mm×30m×0.25μm)分析样品。将注射器维持在250℃，炉温是235℃，将氦流速维持在1.0mL/分钟。

表14：携带嵌合fad2/蓖麻羟化酶拟南芥的抽提物的脂肪酸分析

组织	构建物	品系	％R	％L	％O
						叶	4028*	6	1.19	15.82	1.87
叶	4028*	6	1.11	15.22	2.02
						根	4028*	6	0.54	25.52	0.61
根	4028*	6	0.10	22.24	0.73
						根	4062	3	1.44	21.18	5.09
根	3819	-	0	21.54	1.96

*指构建物含有N末端HA标签。

这些GC/MS数据表明，在拟南芥中表达时操作性连接于5’和3’fad2 UTR的嵌合fad2/蓖麻羟化酶(4062或4028^*)是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数是总脂肪酸的百分数。用不含插入物的载体(3819)转化的拟南芥不累积蓖麻油酸(R)。

番茄的须根转化方案

植物体制备：此方案可用于番茄根转化。A.rhizogene的许多菌株可用作转化物，然而，将菌株A4(ATCC号43057)用于本方案。采用了番茄栽培变种Rutgers、MoneyMaker或Mountain Spring，但也可采用易于感染南方根结线虫的其它变种。将抗性栽培变种Motelle用作对照[Vos等，(1998)Nat.Biotechnol.16：1365-1369]。也可用此方案产生拟南芥的须根培养物，生态型Columbia。

该转化方案类似于以前所述方案[McCormick(1991)《用根癌土壤杆菌转化番茄》(Transformation of tomato with Agrobacterium tumefaciens)，《植物组织培养手册，基础和应用》(Plant Tissue Culture Manual，Fundamentals and Applications)，K.Lindsey(编)，Kluwer，B6卷：1-9]。简要说，用次氯酸盐消毒番茄种子，在日光下用含有Gamborg合成培养基[Gamborg等，(1968)Exp.Cell Res.50：151-158]的品红罐中培养7天，直到子叶完全展开。在无菌条件下去除子叶，在MSO培养基(MS盐、3％蔗糖、Gamborg B5维生素、pH 5.8)中用刀片切除近端和远端，使其受伤。在滤纸上孵育受伤的子叶1-2天，近轴侧朝上，滤纸放在由D1培养基(MS盐、3％葡萄糖、Gamborg B5维生素、1mg/L玉米素、0.8％Gel-rite琼脂)制成的150mm²平板上。此孵育期过后，将子叶与发根土壤杆菌悬液共培养，以开始转化。

发根土壤杆菌培养物制备：用发根土壤杆菌A4在甘油中的原种在MGL培养基上划线[McCormick(1991)《用根癌土壤杆菌转化番茄》(Transformation of tomato withAgrobacterium tumefaciens)，《植物组织培养手册，基础和应用》(Plant Tissue CultureManual，Fundamentals and Applications)，K.Lindsey(编)，Kluwer，B6卷：1-9]，29℃培养，直到出现单个菌落。用单个菌落接种15mL MGL培养基的培养物，在振荡恒温箱中以29℃、100rpm培养一天。第二天，3800×g离心10分钟以收获细菌。用15mL MSO培养基将得到的沉淀洗涤两次，而不破坏沉淀，3800×g离心5分钟。将最终沉淀重悬于15mL MSO培养基，测定培养物在550nm处的光密度。用MSO培养基将该密度调整到0.4。加入50μl 0.074M乙酰丁香酮后，将10mL此培养物用于共培育。在加入乙酰丁香酮1小时内进行共培育。

番茄子叶和发根土壤杆菌的共培育：用无菌技术将5mL发根土壤杆菌培养物加到各子叶平板的预孵育子叶上。在室温下孵育该平板10分钟，在此期间偶尔涡旋振荡平板。然后用无菌移液器去除细菌悬液。用刮刀或刀片温和地将子叶转移到D1培养基上盖有Whatman滤纸盘的新100×20mm Petri平板上，近轴侧朝上。用微孔带密封平板，在朝南窗口附近室温孵育2天。

转基因根的选择：共培育后，将子叶转移到含有200mg/L头孢噻肟的Gamborg培养基上，近轴侧朝上，密度为每平板20-30个子叶。用微孔带密封平板，在室温下避光孵育10天。在第10天，将子叶转移到新鲜的选择性培养基平板上。再孵育10天后，用无菌刀片去除子叶的起始须根，在选择性培养基上孵育，10天后转移到新鲜平板上。为了评价是否治愈了须根的发根土壤杆菌感染，将根转移到不含头孢噻肟的Gamborg培养基，并使其生长10天。丢弃根周围显示出细菌生长的任何平板。

用Gamborg培养基维持根培养物，但并不每20-30天连续转移的选择。

番茄须根提取物的脂肪酸分析

将约0.25g根组织放置在1.5mL eppendorf管中，在干冰上冷冻，然后用研棒研磨。然后用(500μL 1％甲醇钠的甲醇溶液)甲基化研磨过的根组织，用己烷抽提，并进行三甲基甲硅烷基化(100μL BSTAFA-TMCS，Supelco，90℃45分钟)。用Agilent6890GC-5973质量选择检测器(GC/MS)和Agilent DB-23毛细管柱(0.25mm×30m×0.25μm)分析样品。将注射器维持在250℃，炉温是235℃，将氦流速维持在1.0mL/分钟。

          表15：携带蓖麻羟化酶的番茄根的脂肪酸分析

构建物	品系	％R	％L	％O	温度	栽培变体
							4203	7	1.637	50.54	0.94	23	MoneyMaker
4203	7	1.17	50.48	1.20	23	MoneyMaker
							4203	16	1.29	55.67	0.00	23	MoneyMaker
4203	16	1.07	52.04	1.89	23	MoneyMaker
							4203	15	1.21	53.66	1.25	23	MoneyMaker
4203	15	0.91	51.57	1.63	23	MoneyMaker
							3677	19	0	47.06	0.00	23	MoneyMaker

这些GC/MS数据表明，在番茄须根组织中表达时蓖麻(4203)羟化酶是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数(％R)是总脂肪酸的百分数。用不含插入物的载体(3677)转化的番茄须根不累积蓖麻油酸(R)。亚油酸和油酸的百分数分别列于％L和％O列下。

        表16：携带嵌合fad2/蓖麻羟化酶的番茄根的脂肪酸分析

构建物	品系	％R	％L	％O	温度	栽培变体
							3927	7	2.81	49.02	2.05	23	Rutgers
3927	7	1.97	51.78	2.22	23	Rutgers
							3927	7	1.67	55	2.17	23	Rutgers
3927	20	1.03	52.38	1.04	15	Rutgers
							3927	20	0.98	51.08	1.59	15	Rutgers
3927	20	0.75	50.89	1.14	23	Rutgers
							3938*	14	1.02	47.92	1.25	23	Rutgers
3938*	14	0.973	48.57	2.25	23	Rutgers
							3938*	18	0.49	49.45	1.45	23	Rutgers
3938*	18	0.86	47.98	2.16	23	Rutgers
							3677		0	52.05	2.51	23	Rutgers

^*指N末端上有HA

这些GC/MS数据表明，在番茄须根中表达时，嵌合fad2/蓖麻羟化酶(3927或3938^*)是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数(％R)是总脂肪酸的百分数。用不含插入物的载体(3677)转化的番茄须根不累积蓖麻油酸(R)。亚油酸和油酸的百分数分别列于％L和％O列下。

       表17：含有5’和3’fad2 UTR的嵌合fad2/蓖麻羟化酶

构建物	品系	％R	％L	％O	温度	栽培变体
							4062	19	1.26	48.04	6.99	23	Rutgers
4062	19	2.25	48.22	4.59	23	Rutgers
							4062	19	1.97	50.19	3.60	23	Rutgers
4028*	12	2.38	50.54	2.43	15	Rutgers
							4028*	12	2.36	52.64	2.70	15	Rutgers
4028*	12	1.13	51.34	4.19	23	Rutgers
							3677	2	0	53.32	0.84	RT	Rutgers
4028*	5	0.95	53.15	2.49	RT	MountainSpring
							4028*	5	1.3	54.8	1.55	RT	MountainSpring
4028*	5	0.58	47.61	2.56	RT	MountainSpring
							3677	2	0	57.94	0.87	RT	MountainSpring

*指N末端有HA。RT＝室温

这些GC/MS数据表明，在番茄须根中表达时，操作性连接于5’和3’fad2 UTR的嵌合Fad2/蓖麻羟化酶(4062或4028^*)是有功能的。该表中所列蓖麻油酸百分数是总脂肪酸的百分数。用不含插入物的载体(3677)转化的番茄须根不累积蓖麻油酸(R)。

大豆的须根转化方案

种子杀菌：将约250粒种子置入100×25mm平板中，并放入通风橱中的干燥器中。用350mL烧杯，将2mL浓HCl小心加入200mL 100％漂白剂中，将烧杯放入干燥器中，以使种子接触杀菌气体。24小时后，重复该方法。将此方法进行3次，共进行3次杀菌。为了测试无菌性，将10粒种子放入LB，放入37℃摇床孵育24小时。如果LB透明，则表明没有细菌生长，用皮氏培养皿密封种子，在较晚时发芽。如果有细菌生长，再进行杀菌程序。

种子发芽：将9粒种子放在0.25X固体MS平板上，用石蜡膜封口，保持室温7天。

发根土壤杆菌培养物的制备：用发根土壤杆菌A4的甘油原种在MGL培养基上划线[McCormick(1991)《用根癌土壤杆菌转化番茄》(Transformation of tomato withAgrobacterium tumefaciens)，《植物组织培养手册，基础和应用》(Plant Tissue CultureManual，Fundamentals and Applications)，K.Lindsey(编)，Kluwer，B6卷：1-9]，29℃培养，直到出现单个菌落。用单个菌落接种15mL LB+卡那霉素培养基的培养物，在振荡恒温箱中以29℃、100rpm培养一天。第二天，3800×g离心10分钟以收获细菌。将得到的沉淀重悬于MSO，至最终光密度为0.2-0.3。然后加入乙酰丁香酮至终浓度为375μm。加入乙酰丁香酮1小时内进行共培育。

外植体切除：切下主轴上的子叶，确保去除了腋芽。

大豆子叶和发根土壤杆菌的共培育：用无菌技术将大豆子叶加入培养物。然后真空抽滤该培养物2分钟，室温孵育20分钟。然后用无菌移液器去除细菌悬液。用镊子将子叶温和地转移到盖有浸入MSO的Whatman滤纸盘的100×20mm Petri平板上，近轴侧朝上。用微孔带密封平板，在朝南窗口附近室温孵育2天。

转基因根的选择：共培育后，将子叶转移到含有500mg/L羧苄青霉素的MS固体培养基上近轴侧朝上，密度为每平板10个子叶。用微孔带密封平板，在室温下孵育。接种约28天时，用无菌刀片去除子叶的须根，在Gamborgs培养基上孵育并进行选择。

拟南芥的须根转化方案

种子杀菌：将约200粒种子放入eppendorf管中。加入1mL 20％漂白剂的乙醇溶液，使该管在室温下静置15分钟。然后用100％乙醇洗涤种子两次，打开管盖，放入层流净化罩干燥过夜。

种子发芽：将约50粒种子放在0.5X MS平板上，用石蜡膜封口，保持在室温下直到发芽。

发根土壤杆菌培养物的制备：用发根土壤杆菌A4的甘油储液在MGL培养基上划线[McCormick(1991)《用根癌土壤杆菌转化番茄》(Transformation of tomato withAgrobacterium tumefaciens)，《植物组织培养手册，基础和应用》(Plant Tissue CultureManual，Fundamentals and Applications)，K.Lindsey(编)，Kluwer，B6卷：1-9]，29℃培养，直到出现单个菌落。用单个菌落接种15mL LB+卡那霉素培养基的培养物，在振荡恒温箱中以29℃、100rpm培养一天。第二天，3800×g离心10分钟以收获细菌。将得到的沉淀重悬于MSO，至最终光密度为0.2-0.3。然后加入乙酰丁香酮至终浓度为375μm。加入乙酰丁香酮1小时内进行共培育。

外植体切除：在无菌条件下去除拟南芥子叶，在MSO培养基(MS盐、3％蔗糖、Gamborg B5维生素、pH 5.8)中用刀片切除近端和远端，使其受伤。在滤纸上孵育受伤的子叶1-2天，近轴侧朝上，滤纸放在由D1培养基(MS盐、3％葡萄糖、GamborgB5维生素、1mg/L玉米素、0.8％Gel-rite琼脂)制成的150mm²平板上。此孵育期过后，将子叶与发根土壤杆菌悬液共培养，以开始转化。

拟南芥子叶和发根土壤杆菌的共培育：用无菌技术将拟南芥子叶加到发根土壤杆菌培养物中，在室温下静置10分钟。然后用无菌移液器去除细菌悬液。用无菌刮刀将子叶温和地转移到100×20mm Petri平板中的Whatman滤纸盘上，近轴侧朝上，所述平板含有固体Gamborgs培养基和500mg/L羧苄青霉素。用微孔带密封平板，在朝南窗口附近室温孵育。

转基因根的选择：接种约10天后，用无菌刀片去除子叶的须根，并放在Gamborgs培养基上进行选择。

愈伤组织转化方案

植物体制备：可用此方案产生转基因番茄愈伤组织。进行的所有转化采用了根癌土壤杆菌菌株LB4404以及番茄栽培变体Rutgers、Money Maker或MountainSpring。如须根转化部分所述培养番茄子叶。

根癌土壤杆菌培养物制备：用根癌土壤杆菌LB4404的甘油原种在LB培养基(利福平10mg/L，链霉素150mg/L，卡那霉素50mg/L)上划线(McCormick，1991)，29℃培养，直到出现单个菌落。用单个菌落接种15mL LB培养基的培养物，在振荡恒温箱中以29℃、100rpm培养一天。第二天，3800×g离心10分钟以收获细菌。用15mLMSO培养基将得到的沉淀洗涤两次，而不破坏沉淀，3800×g离心5分钟。将最终沉淀重悬于15mL MSO培养基，测定培养物在550nm处的光密度。用MSO培养基将该密度调整到0.4。加入50μl 0.074M乙酰丁香酮后，将10mL此培养物用于共培育。在加入乙酰丁香酮1小时内进行共培育。

番茄子叶和根癌土壤杆菌的共培育：如须根转化部分所述进行共培育，除了采用根癌土壤杆菌。

转基因愈伤组织的选择：共培育后，将子叶转移到含有200mg/L头孢噻肟和100mg/L卡那霉素的2Z培养基(4.3g MS盐/L、20％蔗糖、1mg玉米素/L、100mg/L肌醇、1XNitsch维生素、1X叶酸、8g/L组织培养琼脂)上，近轴侧朝上，密度为每平板20-30个子叶。用微孔带密封平板，在室温下避光孵育10天。每10天，将子叶转移到新鲜的选择性培养基平板上。在两周至三周后外植体开始长出绿色或白色的愈伤组织。去除即将死亡(变成褐色)的外植体。切下含有即将死亡组织的外植体上的愈伤组织。用Gamborg培养基维持愈伤组织。

大豆的复合植物方案：

用含有合适抗生素的Luria肉汤在30℃培养发根土壤杆菌A4培养物。4,000g离心培养物10分钟。用¹/₄MS悬浮细胞，至最终O.D._600mm为0.2-0.5。

将无菌的大豆种子(氯气处理的种子)种植在土壤中。在节间区中间切下没有任何花序的嫩芽。将芽移植到1cm²FibrGro_立方体中。用4mL发根土壤杆菌悬液接种各移植物，水平放置，盖上干净的盖子，在超净台上静置1天以适应环境。第二天，打开盖子，让该立方体干燥。然后给移植物加水并加盖。2-4周间出现根。可用可见标记物标识转化根。应该剪切掉未转化的根。数周后，可将芽移植到用于线虫感染试验的沙土中。

实施例18

本实施例描述了测定转基因植物的驱虫活性的试验。

须根的感染：将一个长1-2cm的须根生长锥从储存根的平板上转移到100×15cm皮氏培养皿中，从而制备试验用平板，所述培养皿中含有30mL用3.0％Phytagel替代Gel-rite琼脂的Gamborg培养基(Sigma目录号P-8169)。每个试验每个转基因品系至少采用两个平板。作为对照，我们采用用发根土壤杆菌产生的须根品系，所述发根土壤杆菌是用启动子后不携带任何编码序列的植物转化质粒转化的。用微孔带密封试验平板，在28℃孵育4-7天，然后用南方根结线虫卵感染。

南方根结线虫接种体的制备：从温室中培养的番茄植株(番茄栽培变体MountainSpring)收获南方根结线虫卵，所述番茄植株是事先用先前所述方案[Hussey和Barker(1973)Plant Disease Reporter 57：1025-1028]以5000个南方根结线虫卵感染了28-42天的植株。去除番茄植株的地上组织(aerial tissue)，在充满自来水的桶中温和振荡，从而分离出土壤中的根群。将根群转移到家用混合器中，加入500mL 10％漂白剂溶液(Clorox漂白剂的自来水溶液)，用菜泥设定将其切成碎片。将此根浆液转移到安置在500目筛上方的200目筛(VWR目录号分别为57334-492和57334-480)中，通过自来水的剧烈冲洗在500目筛上收集卵。进一步清洁卵，并进行蔗糖密度离心。将卵收集到约30mL水中，用移液器加到50mL离心管中的30mL 30％蔗糖溶液上，在吊桶式转头中以1000×g离心10分钟，以区分条带。用巴氏吸管收集卵，在500目筛上用自来水粗略地冲洗以去除蔗糖。将卵收集在少量水中，储存于4℃待用。

接种体的杀菌：将约100,000个储存的南方根结线虫卵放入15mL离心管中，用10％漂白剂溶液将体积调整到10mL。振荡该管5分钟，如上所述通过离心收集卵。去除上清，用无菌水冲洗卵3次。将卵重悬于1mL水中，并用McMaster虫卵计数室计数。仅计数含有蠕虫状幼虫的卵。

或者，如果打算将孵化的J2幼虫用作接种体，则用标准方案孵化卵。如上所述通过离心收集幼虫，如Atkins，1996[Atkinson等，(1996)J.Nematol.28：209-215]所述(在青霉素、硫酸链霉素和氯己定溶液中连续孵育，然后用无菌水洗涤)进行灭菌。

接种和试验监测：通过无菌技术在每块平板中加入300个卵或100个J2幼虫(10μL)开始须根感染。加入接种体后用石蜡膜再密封平板，并在第2、7、14、21、28和35天监测。丢弃显示细菌或真菌污染的平板。第7天在低倍镜下可以观察到线虫诱导的感染虫瘿，25-30天可以观察到雌性成虫。

感染试验的评分

虫瘿数：30-35天后在低倍镜下计数以测定每块平板的虫瘿数。记录虫瘿总数以及成年和妊娠雌性的数量。或者，通过根的品红染色测定所有阶段的南方根结线虫总数[Eisenback(2000)测定线虫发育和产卵的技术(Techniques for measuringnematode development and egg production)，《线虫生态学的实验室技术》(LaboratoryTechniques in Nematode Ecology)。Wheeler等编，Society of Nematologists：Hyattsville，MD.1-4页]。

产卵量：切下各单独试验平板上的妊娠雌性，并放入微量离心管中。将1mL 10％漂白剂加入各管，振荡3分钟。通过微量离心(1000×g，2分钟)收集游离卵，用无菌水洗涤三次，如上所述进行计数。产卵量记为卵/雌性。

产卵活力：计数后，将单个平板的卵转移到24孔板孔中的500μL水中，室温避光孵育7天。测定并记录此时期后可见的新孵化的J2幼虫数。如上所述用卵或J2幼虫接种对照根，从而测定卵或幼虫再感染须根的能力。

根据根虫瘿形成的评分系统：在难以通过上述方法对平板数进行评分时，可采用通量相对较高的评分系统。下表是根据对根结线虫所引起根损伤的目测评估的评级系统的例子：

损伤评分    描述

0           无虫瘿

1           1-2个小虫瘿

3           3-5个小虫瘿

5           ＞5个小虫瘿，但没有多虫瘿

10          几个小虫瘿和至少一个多虫瘿

25          约25％的根具有多虫瘿；许多小虫瘿

50          约50％的根具有多虫瘿

75          约75％的根具有多虫瘿

90          整个根系被虫瘿化并且发育障碍

大豆孢囊线虫的罐试验

用本试验评价大豆植株对大豆孢囊线虫(大豆异皮线虫)对根的感染及其繁殖的抗性。用干净的沙土充满直径3或4英寸的方罐，加满水。将大豆种子或任何生根植物部分种在罐的中心，每罐一个，加水以去除气穴。在20℃-30℃的温室或生长室中孵育该罐，直到植株达到合适的接种时间。一般在种植2-3周后接种由种子开始长出的大豆，而在种植1-3天后接种移植物。测试接种体由成熟的大豆异皮线虫孢囊中的卵组成，所述孢囊是从土壤和受感染大豆植株的根收集的。用250微米筛收集胞囊，然后用Tenbroeck玻璃组织匀浆器碾碎胞囊释放卵。通过筛分和40％蔗糖溶液4000RPM离心5分钟进一步纯化卵。实验接种体由每ml含有含有500蠕虫状卵的水组成。用移液器将5mL卵悬液加在含有测试植物的沙土表面上，使卵轻微进水。然后将测试植物移回温室或生长室，孵育3-4周以进行根感染和胞囊形成。然后通过温和地去除罐和沙土并用水洗涤收获根。通过计数固着于根系的白色线虫胞囊数测定线虫感染的严重程度。或者，可用水稀释沙土和根，并通过250微米筛，以收集和浓缩胞囊，用于贮存或计数。

番茄须根用于胞囊线虫感染的试验：也可用上述试验以胞囊线虫品系TN2测定胞囊线虫感染番茄根的能力。

实施例19

             表18：羟化酶和环加氧酶基因的序列ID号

构建物	cDNA	氨基酸
			蓖麻	SEQ ID NO：1	SEQ ID NO：13
Lesquerella fendleri	SEQ ID NO：2	SEQ ID NO：14
			Lesquerella lindheimeri	SEQ ID NO：3	SEQ ID NO：15
Lesquerella gracilis A	SEQ ID NO：4	SEQ ID NO：16
			Lesquerella gracilis B	SEQ ID NO：5	SEQ ID NO：17
粗糙还阳参	SEQ ID NO：6	SEQ ID NO：18
			fad2/蓖麻	SEQ ID NO：7	SEQ ID NO：19
fad2/L.fendleri	SEQ ID NO：8	SEQ ID NO：20
			fad2/L.lindheimeri	SEQ ID NO：9	SEQ ID NO：21
fad2/L.gracilis A	SEQ ID NO：10	SEQ ID NO：22
			fad2/L.gracilis B	SEQ ID NO：11	SEQ ID NO：23
fad2/粗糙还阳参	SEQ ID NO：12	SEQ ID NO：24
			蓖麻ΔKKGG	SEQ ID NO：25	SEQ ID NO：34
L.gracilis BΔT	SEQ ID NO：26	SEQ ID NO：35
			琉璃菊	SEQ ID NO：27	SEQ ID NO：36
蓖麻优化2	SEQ ID NO：28	SEQ ID NO：37
			琉璃菊A优化2	SEQ ID NO：29	SEQ ID NO：38
蓖麻优化1	SEQ ID NO：30	SEQ ID NO：39
			L.gracilis B优化1	SEQ ID NO：31	SEQ ID NO：40
粗糙还阳参优化1	SEQ ID NO：32	SEQ ID NO：41
			琉璃菊A优化1	SEQ ID NO：33	SEQ ID NO：42
HA蓖麻优化	SEQ ID NO：129	SEQ ID NO：134
			角力还阳参优化	SEQ ID NO：130	SEQ ID NO：135
琉璃菊B优化	SEQ ID NO：131	SEQ ID NO：136
			粗糙还阳参优化2	SEQ ID NO：132	SEQ ID NO：137
L.gracilis B优化2	SEQ ID NO：133	SEQ ID NO：138

拟南芥FAD2 5’-非翻译区(SEQ ID NO：43和44)和拟南芥FAD2 3’-非翻译区(SEQ ID NO：45)。

实施例20

本实施例描述了表达各种密码子优化的蓖麻构建物的番茄须根和拟南芥种子的脂肪酸分析结果。

用碱性衍生法进行番茄须根的脂肪酸分析。表达SID 129基因(HA-标记的蓖麻序列-SEQ ID NO：129)的番茄须根的分析结果见表19。表达SID 30基因(蓖麻-SEQ IDNO：30)或SID 28基因(蓖麻-SEQ ID NO：28)的番茄须根的分析结果见表20。在光照和温度循环的条件(12小时23℃光照与12小时20℃避光交替)下培养用于分析的根。所用碱性衍生法基本上如Cahoon等，(Plant Physiol.2002，128：615-624)所述。用500μL 1％甲醇钠的甲醇溶液甲基化研磨过的根组织，用己烷抽提，并进行三甲基甲硅烷基化(100μL BSTAFA-TMCS，Supelco，90℃45分钟)。用Agilent 6890GC-5973质量选择检测器(GC/MS)和Agilent DB-23毛细管柱(0.25mm×30m×0.25μm)分析样品。将注射器维持在250℃，炉温是235℃，将氦流速维持在1.0mL/分钟。

用碱性或酸性衍生法进行拟南芥种子的脂肪酸分析。表达SID 129基因(HA-标记的蓖麻序列-SEQ ID NO：129)的拟南芥种子的分析结果见表21。3-英寸罐中培养拟南芥植株，生长室中环境可控。将温度维持在23℃，并保持12小时光照：12小时避光循环。每天用自来水为植物浇水，每周施肥一次。所用碱性衍生法基本上如Cahoon等，(Plant Physiol.2002，128：615-624)所述。酸性衍生法方案与碱性衍生法相同，除了用500μL 2.5％硫酸的甲醇溶液代替甲醇钠的甲醇溶液。

                    表19：番茄须根的脂肪酸分析

基因	品系	18:1-OH	18:2	18:1	16:0	18:0	18:3
								SID 129	A	.91	52.81	1.04	15.30	1.47	21.88
SID 129	A	1.29	54.23	1.28	16.35	3.34	16.19
								SID 129	B	0.92	54.00	4.62	14.05	2.62	18.28
SID 129	B	1.71	53.76	4.35	12.87	1.24	17.83
								SID 129	C	1.24	48.96	1.53	15.75	2.98	22.07
SID 129	C	2.5	54.69	2.2	15.11	2.51	17.60
								SID 129	D	3.03	51.41	1.74	14.90	4.46	15.96
SID 129	E	0.79	53.30	1.18	13.82	2.79	22.46
								SID 129	F	0.93	57.49	2.3	14.22	2.42	18.51
EV	G	0	58.01	1.16	14.85	2.48	18.14
								EV	H	0	58.29	.60	15.81	2.35	18.03

SID 129：HA-标记的蓖麻(SEQ ID NO：129)碱性衍生法；EV：空载体；18:1-OH-蓖麻油酸，18:2-亚油酸；18:1-油酸；16:0-棕榈酸；18:0-硬脂酸；18:3-α亚麻酸。

                       表20：番茄须根的脂肪酸分析

基因	品系	18:1-OH	18:2	18:1	16:0	18:0	18:3
								SID 30	A	2.76	50.95	5.10	16.17	3.06	14.39
SID 30	B	1.34	54.78	4.53	14.26	1.25	14.99
								SID 30	C	3.21	51.75	3.89	14.03	2.07	16.41
SID 30	C	2.215	50.24	3.45	15.51	2.86	15.81
								SID 30	D	3.04	51.71	8.89	14.26	2.33	11.71
SID 28	A	3.23	48.70	1.70	12.92	3.40	17.22
								SID 28	A	3.65	51.59	2.79	11.23	1.48	21.54
SID 28	B	2.98	51.38	2.97	12.89	2.97	19.48
								SID 28	B	1.56	51.37	1.96	14.33	2.78	19.95
SID 28	C	2.48	54.40	4.36	14.20	1.19	17.22
								SID 28	D	4.73	54.69	2.22	10.05	2.83	18.04
SID 28	D	3.32	55.17	2.49	12.89	3.29	16.07
								SID 28	E	2.847	52.46	2.25	12.05	2.61	19.06
SID 28	F	1.96	55.91	2.55	14.50	2.88	15.81
								EV	G	0	56.31	0.964	15.94	1.61	19.48
EV	G	0	56.3	1.6	15.96	1.61	19.45

SID 30：蓖麻(SEQ ID NO：30)碱性衍生法；SID 28：蓖麻(SEQ ID NO：28)碱性衍生法

                   表21：拟南芥种子的脂肪酸分析

基因	18:1	18:2	16:0	18:0	18:3	20:0	18:1-OH	18:2-OH	20:1-OH
										SID 129A	21.19	20.04	7.99	4.2	12.01	4.39	3.78	1.15	1.02
SID 129A	21.16	21.97	9.15	3.79	13.81	2.47	2.29	1.42	0.81
										EV A	20.95	27.25	6.41	3.53	14.56	1.89	0	0	0
SID 129B	21.45	20.82	9.68	3.76	13.2	2.64	2.64	1.7	0.84
										SID 129B	20.51	22.97	7.62	3.01	14.05	1.67	1.75	1.65	0.66
SID 129B	20.43	23.07	7.78	2.99	13.97	1.66	1.6	1.64	0.62
										EV B	22.67	28.43	6.13	2.61	14.56	1.9	0	0	0

SID 129A或B分别为HA-标记的蓖麻(SEQ ID NO：129)酸性或碱性衍生法；EV A或B分别为空载体酸性或碱性衍生法；18:1-油酸，18:2-亚油酸，16:0-棕榈酸，18:0-硬脂酸，18:3-α亚麻酸；20:0-花生酸，18:1-OH-蓖麻油酸，18:2-OH-densipolic acid，20:0-OH-lesquerolic acid。

表19和20显示出，与空载体转化的植物中没有累积蓖麻油酸(18:1-OH)相比，蓖麻基因的密码子优化能够在表达这种基因的植物营养组织中累积蓖麻油酸(18:1-OH)。表21显示出，在拟南芥种子中检测到蓖麻油酸累积，尽管CaMV 35S启动子不是种子特异性启动子。总之，这些结果和上述试验的结果表明，转基因植物中新脂肪酸的累积增加可用于线虫控制和非杀虫剂工业应用(如油料籽工程改造)。

其它实施方式

应理解，与本发明详述一起描述本发明时，上述说明书旨在说明而非限制本发明范围，此范围是由所附权利要求书的范围决定的。其它方面、优点和修改在所附权利要求书的范围内。

                              序列表

<110>戴弗根斯公司(Divergence，Inc.)

<120>编码驱虫剂的核酸和由其制备的植物

<130>12557-023WO1

<150>10/912,534

<151>2004-08-04

<150>US 10/772,227

<151>2004-02-04

<160>140

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>1164

<212>DNA

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1161)

<400>1

atg gga ggt ggt ggt cgc atg tct act gtc ata acc agc aac aac agt     48

Met Gly Gly Gly Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                   10                  15

gag aag aaa gga gga agc agc cac ctt aag cga gcg ccg cac acg aag     96

Glu Lys Lys Gly Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys

             20                  25                  30

cct cct ttc aca ctt ggt gac ctc aag aga gcc atc cca ccc cat tgc    144

Pro Pro Phe Thr Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys

         35                  40                  45

ttt gaa cgc tct ttt gtg cgc tca ttc tcc tat gtt gcc tat gat gtc    192

Phe Glu Arg Ser Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val

     50                  55                  60

tgc tta agt ttt ctt ttc tac tcg atc gcc acc aac ttc ttc cct tac    240

Cys Leu Ser Phe Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr

 65                  70                  75                  80

atc tct tct ccg ctc tcg tat gtc gct tgg ctg gtt tac tgg ctc ttc    288

Ile Ser Ser Pro Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe

                 85                  90                  95

caa ggc tgc att ctc act ggt ctt tgg gtc atc ggc cat gaa tgt ggc    336

Gln Gly Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly

            100                 105                 110

cat cat gct ttt agt gag tat cag ctg gct gat gac att gtt ggc cta    384

His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu

        115                 120                 125

att gtc cat tct gca ctt ctg gtt cca tat ttt tca tgg aaa tat agc    432

Ile Val His Ser Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser

    130                 135                 140

cat cgc cgc cac cat tct aac ata gga tct ctc gag cga gac gaa gtg     480

His Arg Arg His His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val

145                 150                 155                 160

ttc gtc ccg aaa tca aag tcg aaa att tca tgg tat tct aag tac tta     528

Phe Val Pro Lys Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu

                165                 170                 175

aac aac ccg cca ggt cga gtt ttg aca ctt gct gcc acg ctc ctc ctt     576

Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu

            180                 185                 190

ggc tgg cct tta tac tta gct ttc aat gtc tct ggt aga cct tac gat     624

Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp

        195                 200                 205

cgc ttt gct tgc cat tat gat ccc tat ggc cca ata ttt tcc gaa aga     672

Arg Phe Ala Cys His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg

    210                 215                 220

gaa agg ctt cag att tac att gct gac ctc gga atc ttt gcc aca acg     720

Glu Arg Leu Gln Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr

225                 230                 235                 240

ttt gtg ctt tat cag gct aca atg gca aaa ggg ttg gct tgg gta atg     768

Phe Val Leu Tyr Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met

                245                 250                 255

cgt atc tat ggg gtg cca ttg ctt att gtt aac tgt ttc ctt gtt atg     816

Arg Ile Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met

            260                 265                 270

atc aca tac ttg cag cac act cac cca gct att cca cgc tat ggc tca     864

Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser

        275                 280                 285

tcg gaa tgg gat tgg ctc cgg gga gca atg gtg act gtc gat aga gat     912

Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp

    290                 295                 300

tat ggg gtg ttg aat aaa gta ttc cat aac att gca gac act cat gta     960

Tyr Gly Val Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val

305                 310                 315                 320

gct cat cat ctc ttt gct aca gtg cca cat tac cat gca atg gag gcc    1008

Ala His His Leu Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala

                325                 330                 335

act aaa gca atc aag cct ata atg ggt gag tat tac cgg tat gat ggt    1056

Thr Lys Ala Ile Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly

            340                 345                 350

acc cca ttt tac aag gca ttg tgg agg gag gca aag gag tgc ttg ttc    1104

Thr Pro Phe Tyr Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe

        355                 360                 365

gtc gag cca gat gaa gga gct cct aca caa ggc gtt ttc tgg tac cgg    1152

Val Glu Pro Asp Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg

    370                 375                 380

aac aag tat taa                                                    1164

Asn Lys Tyr

385

<210>2

<211>1155

<212>DNA

<213>Lesquerella fendleri

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>2

atg ggt gct ggt gga aga ata atg gtt acc ccc tct tcc aag aaa tca     48

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

gaa act gaa gcc cta aaa cgt gga cca tgt gag aaa cca cca ttc act     96

Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

             20                  25                  30

gtt aaa gat ctg aag aaa gca atc cca cag cat tgt ttt cag cgc tct    144

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

         35                  40                  45

atc cct cgt tct ttc tcc tac ctt ctc aca gat atc act tta gtt tct    192

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

     50                  55                  60

tgc ttc tac tac gtt gcc aca aat tac ttc tct ctt ctt cct cag cct    240

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

 65                  70                  75                  80

ctc tct act tac cta gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

gtc tta aca ggt atc tgg gtc att ggc cat gaa tgt ggt cac cat gca    336

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

ttc agt gac tat caa tgg gta gat gac act gtt ggt ttt atc ttc cat    384

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

tcc ttc ctt ctc gtc cct tac ttc tcc tgg aaa tac agt cat cgt cgt    432

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

cac cat tcc aac aat gga tct ctc gag aaa gat gaa gtc ttt gtc cca    480

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

ccg aaa aaa gct gca gtc aaa tgg tat gtt aaa tac ctc aac aac cct    528

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

ctt gga cgc att ctg gtg tta aca gtt cag ttt atc ctc ggg tgg cct    576

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Gln Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ttg tat cta ccc ttt aat gta tca ggt aga cct tat gat ggt ttc gct    624

Leu Tyr Leu Pro Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

tca cat ttc ttc cct cat gca cct atc ttt aaa gac cgc gaa cgt ctc    672

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

cag ata tac atc tca gat gct ggt att cta gct gtc tgt tat ggt ctt    720

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

tac cgt tac gct gct tca caa gga ttg act gct atg atc tgc gtc tat    768

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

gga gta ccg ctt ttg ata gtg aac ttt ttc ctt gtc ttg gta act ttc    816

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

ttg cag cac act cat cct tcg tta cct cac tat gat tca acc gag tgg    864

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

gaa tgg att aga gga gct ttg gtt acg gta gac aga gac tat gga atc    912

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ttg aac aag gtg ttt cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat    960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

ctc ttt gca act ata ccg cat tat aac gca atg gaa gct aca gag gcg    1008

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

ata aag cca ata ctt ggt gat tac tac cac ttc gat gga aca ccg tgg    1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gcc atg tat agg gaa gca aag gag tgt ctc tat gta gaa ccg    1104

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

gat acg gaa cgt ggg aag aaa ggt gtg tac tat tac aac aat aag tta    1152

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

tga                                                                1155

<210>3

<211>1152

<212>DNA

<213>Lesquerella lindheimeri

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1149)

<400>3

atg ggt gct ggt gga aga ata atg gtt acc ccc tct tcc aag aaa tcg    48

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

aaa cct gaa gcc cta aga cgt ggg cca ggt gag aaa cca cca ttc act     96

Lys Pro Glu Ala Leu Arg Arg Gly Pro Gly Glu Lys Pro Pro Phe Thr

             20                  25                  30

gtt caa gat cta agg aaa gca atc cca cgg cat tgt ttc aaa cgc tct    144

Val Gln Asp Leu Arg Lys Ala Ile Pro Arg His Cys Phe Lys Arg Ser

         35                  40                  45

atc cct cgt tct ttc tcc tat ctt ctc aca gat atc att tta gct tct    192

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Ile Leu Ala Ser

     50                  55                  60

tgc ttc tac tac gtg gcc acc aat tac ttc tca ctt ctt cca cag cct    240

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

 65                  70                  75                  80

ctc tct act tac ttt gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Phe Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

gtc tta acc ggt gtt tgg gtc ctt ggc cat gaa tgt ggt cac caa gca    336

Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His Gln Ala

            100                 105                 110

ttt agt gac tat caa tgg gta gat gac act gtt ggt ttt atc atc cat    384

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

acc ttc ctc ctc atc cct tac ttc tcc tgg aag tat agt cat cgt cgt    432

Thr Phe Leu Leu Ile Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

cac cat gcc aat aat gga tca ctc gag aga gat gaa gtc ttt gtc cca    480

His His Ala Asn Asn Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

ccg aag aaa gct gca gtc aaa tgg tat gtc aaa tac ctc aac aac cct    528

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

ctt gga cgc act gtg gtg tta ata gtc cag ttt gtc ctc gga tgg ccc    576

Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ttg tac cta gcc ttt aac gta tca ggt aga tcc tat gat ggt ttc gct    624

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Ser Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

tca cat ttc ttc cca cat gca ccc atc ttc aag gac cga gaa cgt ctc    672

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

cat ata tac atc aca gat gct ggt att cta gct gtc tgt tat ggt ctt    720

His Ile Tyr Ile Thr Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

tac cgt tac gca gct aca aaa gga ttg acc gct atg atc tgc gtc tat    768

Tyr Arg Tyr Ala Ala Thr Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

ggg gta cct cct ctg gtt gta aac ttt ttc ctt gtc ttg gtc act ttc    816

Gly Val Pro Pro Leu Val Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

ttg cag cac act cat cct tca tta cct cac tat gat tca acc gag tgg    864

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

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Asp Trp Ile Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ttg aac aag gtg ttc cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat    960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

ctt ttc gca aca ata ccg cat tat aat gca atg gaa gct aca gag gcg    1008

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

ata aag cca ata ctc gga gac tac tac cat ttc gat gga aca ccc tgg    1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

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Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Gln Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

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Asp Thr Glu Lys Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

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<210>4

<211>1155

<212>DNA

<213>Lesquerella gracilis A

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>4

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 1               5                   10                  15

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Lys Pro Gln Ala Leu Arg Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

             20                  25                  30

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Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser

         35                  40                  45

atc cct cgc tct ttc tct tac ctt ctc aca gat ttc att cta gct tct    192

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Phe Ile Leu Ala Ser

     50                  55                  60

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Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

 65                  70                  75                  80

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Val Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ile Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

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Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

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Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

tcc ttc ctc ctt gtc cct tac ttc tcc tgg aag tac agt cat cgt cgt    432

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

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His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

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Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

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Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

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Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

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Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Arg Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

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225                 230                 235                 240

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Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

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Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

ttg cag cac act cat cct tca tta cct cac tat gat tca acc gag tgg    864

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

gaa tgg att aga gga gcc ttg gtt aca gta gac aga gac tat gga atc    912

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ttg aac aag gtg ttc cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat    960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

att ttc gca aca ata ccg cat tat aat gca atg gaa gct aca gag gcg   1008

Ile Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

ata aag cca ata ctc gga gac tac tac cat ttc gat gga aca ccg tgg   1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gcc atg tac agg gaa gca aag gag tgt ctc tat gta gaa cag    1104

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

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Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

tga                                                                1155

<210>5

<211>1155

<212>DNA

<213>Lesquerella gracilis B

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>5

atg ggt gct ggt gga aga ata atg gtt acc cct tct tcc aag aaa tca     48

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

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Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

             20                  25                  30

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         35                  40                  45

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Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

     50                  55                  60

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Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

 65                  70                  75                  80

ctc tct act tac cta gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

gtc cta aca ggt atc tgg gtc ctt ggc cat gaa tgt ggt cac cat gca    336

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

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Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

tcc tta ctt ctc gtc cct tac ttc tcc tgg aaa tac agt cat cgt cgt    432

Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

cac cat tcc aac aat gga tct ctc gag aaa gat gaa gtc ttt gtc cca    480

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

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                165                 170                 175

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Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

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Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

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Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

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225                 230                 235                 240

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Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

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Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

ttg cag cac act cat cct tcg tta cct cac tat gat tca acc gag tgg     864

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

gaa tgg att aga gga gct ttg gtt acg gta gac aga gac tac gga atc     912

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ttg aac aag gtg ttt cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat     960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

ctt ttc gca act ata ccg cat tat aac gca atg gaa gct aca gag gcg    1008

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

ata aag cca ata ctt ggt gat tac tac cat ttc gat gga aca ccg tgg    1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

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Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

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Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

tga                                                                1155

<210>6

<211>1125

<212>DNA

<213>粗糙还阳参(Crepis biennis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1122)

<400>6

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Met Gly Ala His Gly His Gly Arg Thr Ser Lys Lys Ser Val Met Glu

 1               5                   10                  15

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             20                  25                  30

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Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

         35                  40                  45

tat gta gtt cac gat ctc att att gcc tac atc ttc tac ttc ctt gcc    192

Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

     50                  55                  60

gat aaa tat att ccg att ctc cct gct cct cta gcc tac tta gct tgg    240

Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

 65                  70                  75                  80

ccc ctt tac tgg ttc tgt caa gct agc atc ctc act ggt tta tgg atc    288

Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                 85                  90                  95

ctc ggt cat gaa tgc ggt cac cat gcc ttt agc gag tac caa tgg gtt    336

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp Val

            100                 105                 110

gac gac act gtg ggc ttc atg gtc cac tca ttt ctc ctc acc ccg tat    384

Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

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Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

atc gat aac gat gaa gtt tac att ccg aaa agc aag tcc aaa ctc gcg    480

Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

ctt acc tat aaa ctt ctt aac aac ccg cct ggt cga ctg tta gtt atg    528

Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Met

                165                 170                 175

gtt atc atg ttc acc cta gga ttt cct tta tac ctc ttg aca aat att    576

Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

tcc ggc aag aag tac gac agg ttt gcc aac cac ttc gac ccc atg agt    624

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

cca att ttc aag gaa cgt gag cgg ttt cag gtc ttg ctt tcg gat ctt    672

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Leu Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

ggc ctt ctt gct gtg ttt tat gga att aaa gtt gct gta gca aag aaa    720

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Lys Lys

225                 230                 235                 240

gga gct gcg tgg gtg gcg tgt atg tat gga gtt ccg atg cta ggc gta    768

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Met Leu Gly Val

                245                 250                 255

ttt acc ctt ttc gat atc atc acg tac ttg cac cac acc cat cag tcg    816

Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

tct cct cat tat gac tca act gaa tgg aac tgg atc aga ggg gcg ttg    864

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

tca gca atc gat agg gac ttt ggg ttc atg aat agt gtt ttc cat gat    912

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

gtt aca cac act cac gtc atg cat cat atg ttt tca tac att cca cac    960

Val Thr His Thr His Val Met His His Met Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

tat cat gcg aaa gag gca agg gat gca atc aat aca atc ata ggc gac    1008

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Asn Thr Ile Ile Gly Asp

                325                 330                 335

tat tat atg atc gat agg act cca att ttg aaa gca ctg tgg aga gag    1056

Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Leu Trp Arg Glu

            340                 345                 350

gcc aag gaa tgc atg tac atc gag cct gat agc aag cgc aaa ggt gta    1104

Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Arg Lys Gly Val

        355                 360                 365

tat tgg tac cat aaa ttg tga                                        1125

Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370

<210>7

<211>1152

<212>DNA

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1149)

<400>7

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Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

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Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

             20                  25                  30

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Val Gly Asp Leu Lys  Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Glu Arg Ser

         35                  40                  45

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Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val Cys Leu Ser Phe

     50                  55                  60

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Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr Ile Ser Ser Pro

 65                  70                  75                  80

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Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe Gln Gly Cys Ile

                 85                  90                  95

ctc act ggt ctt tgg gtc atc ggc cat gaa tgt ggc cat cat gct ttt    336

Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

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Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu Ile Val His Ser

        115                 120                 125

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    130                 135                 140

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145                 150                 155                 160

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Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro

                165                 170                 175

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Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

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Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys

        195                 200                 205

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His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

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Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr Phe Val Leu Tyr

225                 230                 235                 240

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Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met Arg Ile Tyr Gly

                245                 250                 255

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Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met Ile Thr Tyr Leu

            260                 265                 270

cag cac act cac cca gct att cca cgc tat ggc tca tcg gaa tgg gat    864

Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser Ser Glu Trp Asp

        275                 280                 285

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    290                 295                 300

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Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

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Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

                325                 330                 335

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Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Thr Pro Phe Tyr

            340                 345                 350

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Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

gaa gga gct cct aca caa ggc gtt ttc tgg tac cgg aac aag tat        1149

Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg Asn Lys Tyr

    370                 375                 380

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<210>8

<211>1155

<212>DNA

<213>Lesquerella fendleri

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>8

atg ggt gca ggt gga aga atg ccg gtt cct act tct tcc aag aaa tcg     48

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

gaa acc gac acc aca aag cgt gtg ccg tgc gag aaa ccg cct ttc tcg     96

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

             20                  25                  30

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         35                  40                  45

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     50                  55                  60

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 65                  70                  75                  80

ctc tct act tac cta gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

gtc tta aca ggt atc tgg gtc att ggc cat gaa tgt ggt cac cat gca    336

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

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Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

tcc ttc ctt ctc gtc cct tac ttc tcc tgg aaa tac agt cat cgt cgt     432

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

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145                 150                 155                 160

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Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Gln Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ttg tat cta ccc ttt aat gta tca ggt aga cct tat gat ggt ttc gct     624

Leu Tyr Leu Pro Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

tca cat ttc ttc cct cat gca cct atc ttt aaa gac cgc gaa cgt ctc     672

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

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Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

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Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

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            260                 265                 270

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Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

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Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

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Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

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Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

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Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gcc atg tat agg gaa gca sag gag tgt ctc tat gta gaa ccg    1104

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        355                 360                 365

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<210>9

<211>1152

<212>DNA

<213>Lesquerella lindheimeri

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1149)

<400>9

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Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

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             20                  25                  30

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         35                  40                  45

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 65                  70                  75                  80

ctc tct act tac ttt gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Phe Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

gtc tta acc ggt gtt tgg gtc ctt ggc cat gaa tgt ggt cac caa gca    336

Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His Gln Ala

            100                 105                 110

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Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

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    130                 135                 140

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Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ttg tac cta gcc ttt aac gta tca ggt aga tcc tat gat ggt ttc gct    624

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Ser Tyr Asp Gly Phe Ala

         195                 200                 205

tca cat ttc ttc cca cat gca ccc atc ttc aag gac cga gaa cgt ctc     672

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

cat ata tac atc aca gat gct ggt att cta gct gtc tgt tat ggt ctt     720

His Ile Tyr Ile Thr Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

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Tyr Arg Tyr Ala Ala Thr Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

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            260                 265                 270

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Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

gac tgg att aga gga gcc atg gtt aca gta gac aga gac tat ggg atc     912

Asp Trp Ile Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ttg aac aag gtg ttc cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat     960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

ctt ttc gca aca ata ccg cat tat aat gca atg gaa gct aca gag gcg    1008

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

ata aag cca ata ctc gga gac tac tac cat ttc gat gga aca ccc tgg    1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gct atg tat agg gaa gca aag cag tgt ctc tat gta gaa cag    1104

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Gln Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

gat aca gaa aag aag aaa ggt gtc tac tat tac aac aat aag tta        1149

Asp Thr Glu Lys Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

tga                                                                1152

<210>10

<211>1155

<212>DNA

<213>Lesquerella gracilis A

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>10

atg ggt gca ggt gga aga atg ccg gtt cct act tct tcc aag aaa tcg    48

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

gaa acc gac acc aca aag cgt gtg ccg tgc gag aaa ccg cct ttc tcg    96

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

             20                  25                  30

gtg gga gat ctg aag aaa gca atc cca ccg cat tgt ttc aaa cgc tct    144

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser

         35                  40                  45

atc cct cgc tct ttc tct tac ctt ctc aca gat ttc att cta gct tct    192

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Phe Ile Leu Ala Ser

     50                  55                  60

tgc ttc tac tac gtg gct aca aat tac ttc tct ctt ctc cca cag cct    240

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

 65                  70                  75                  80

gtc tct aat tac ctg gct tgg cct ctc tat tgg ata tgt caa ggc tgt    288

Val Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ile Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

gtc tta acc ggt gtt tgg gtc ctt ggc cat gaa tgt ggt cac cat gca    336

Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

ttc agt gac tat caa tgg gta gat gac act gtt ggt ttt atc atc cat    384

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

tcc ttc ctc ctt gtc cct tac ttc tcc tgg aag tac agt cat cgt cgt    432

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

cac cat tcc aac aat gga tcc ctc gag aaa gat gaa gtc ttt gtt cca    480

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

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Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

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Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ttg tat cta gcc ttt aac gta tca ggt aga ccc tat gat ggg ttc gct    624

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

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Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Arg Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

cat ata tac atc aca gat gct ggt att cta gct gtc tgt tat ggt ctt    720

His Ile Tyr Ile Thr Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

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Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

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Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

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Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

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Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

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Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

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Ile Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

ata aag cca ata ctc gga gac tac tac cat ttc gat gga aca ccg tgg    1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gcc atg tac agg gaa gca aag gag tgt ctc tat gta gaa cag    1104

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

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Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

tga                                                                1155

<210>11

<211>1155

<212>DNA

<213>Lesquerella gracilis B

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>11

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Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

gaa acc gac acc aca aag cgt gtg ccg tgc gag aaa ccg cct ttc tcg     96

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

             20                  25                  30

gtg gga gat ctg aag aaa gca atc cca cag cat tgt ttt caa cgc tct    144

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

         35                  40                  45

atc cct cgt tct ttc tcc tac ctt ctc aca gat atc act tta gtt tct    192

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

     50                  55                  60

tgc ttc tac tac gtt gcc aca aat tac ttc tct ctt ctt cct cag cct    240

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

 65                  70                  75                  80

ctc tct act tac cta gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                 85                  90                  95

gtc cta aca ggt atc tgg gtc ctt ggc cat gaa tgt ggt cac cat gca     336

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

ttc agt gac tat caa tgg cta gat gac act gtt ggt ttt atc ttc cat     384

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

tcc tta ctt ctc gtc cct tac ttc tcc tgg aaa tac agt cat cgt cgt     432

Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

cac cat tcc aac aat gga tct ctc gag aaa gat gaa gtc ttt gtc cca     480

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

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Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

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Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ttg tat cta gcc ttt aat gta tca ggt aga cct tat gat ggt ttc gct     624

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

tca cat ttc ttc cct cat gca cct atc ttt aaa gac cgc gaa cgt ctc     672

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

cag ata tac atc tca gat gct ggt att cta gct gtc tgt tat ggt ctt     720

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

tac cgt tac gct gct tca caa gga ttg acc gct atg atc tgc gtc tat     768

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

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Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

ttg cag cac act cat cct tcg tta cct cac tat gat tca acc gag tgg     864

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

gaa tgg att aga gga gct ttg gtt acg gta gac aga gac tac gga atc     912

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ttg aac aag gtg ttt cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat     960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

ctt ttc gca act ata ccg cat tat aac gca atg gaa gct aca gag gcg    1008

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

ata aag cca ata ctt ggt gat tac tac cat ttc gat gga aca ccg tgg    1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gct atg tat agg gaa gca aag gag tgt ctc tat gta gaa ccg    1104

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Lau Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

gat acg gaa cgt ggg aag aaa ggt gtc tac tat tac aac aat aag tta    1152

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

tga                                                                1155

<210>12

<211>1143

<212>DNA

<213>粗糙还阳参(crepis biennis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1140)

<400>12

atg ggt gca ggt gga aga atg ccg gtt cct act tct tcc aag aaa tcg     48

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

gaa acc gac acc aca aag cgt gtg ccg tgc gag aaa ccg cct ttc tcg     96

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

             20                  25                  30

gtg gga gat ctg aag aaa gca atc cct ccc cat tgc ttc cag cga tct    144

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser

         35                  40                  45

gta atc cgt tca tct tac tat gta gtt cac gat ctc att att gcc tac    192

Val Ile Arg Ser Ser Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr

     50                  55                  60

atc ttc tac ttc ctt gcc gat aaa tat att ccg att ctc cct gct cct    240

Ile Phe Tyr Phe Lau Ala Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro

 65                  70                  75                  80

cta gcc tac tta gct tgg ccc ctt tac tgg ttc tgt caa gct agc atc    288

Leu Ala Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile

                 85                  90                  95

ctc act ggt tta tgg atc ctc ggt cat gaa tgc ggt cac cat gcc ttt    336

Leu Thr Gly Leu Trp Ile Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

agc gag cac caa tgg gtt gac gac act gtg ggc ttc atg gtc cac tca    384

Ser Glu His Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser

        115                 120                 125

ttt ctc ctc acc ccg tat ttc tcg tgg aaa tac agt cac cgg aat cac    432

Phe Leu Leu Thr Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His

    130                 135                 140

cat gcc aac aca agt tcc att gat aac gat gaa gtt tac att ccg aaa    480

His Ala Asn Thr Ser Ser Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys

145                 150                 155                 160

agc aag tcc aaa ctc gcg ctt acc tat aaa ctt ctt aac aac ccg cct    528

Ser Lys Ser Lys Leu Ala Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro

                165                 170                 175

ggt cga ctg tta gtt atg gtt atc atg ttc acc cta gga ttt cct tta     576

Gly Arg Leu Leu Val Met Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu

            180                 185                 190

tac ctc ttg aca aat att tcc ggc aag aag tac gac agg ttt gcc aac     624

Tyr Leu Leu Thr Asn Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn

        195                 200                 205

cac ttc gac ccc atg agt cca att ttc aag gaa cgt gag cgg ttt cag     672

His Phe Asp Pro Met Ser Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln

    210                 215                 220

gtc ttg ctt tcg gat ctt ggc ctt ctt gct gtg ttt tat gga att aaa     720

Val Leu Leu Ser Asp Leu Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys

225                 230                 235                 240

gtt gct gta gca aag aaa gga gct gcg tgg gtg gcg tgt atg tat gga     768

Val Ala Val Ala Lys Lys Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly

                245                 250                 255

gtt ccg atg cta ggc gta ttt acc ctt ttc gat atc atc acg tac ttg     816

Val Pro Met Leu Gly Val Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu

            260                 265                 270

cac cac acc cat cag tcg tct cct cat tat gac tca act gaa tgg aac     864

His His Thr His Gln Ser Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn

        275                 280                 285

tgg atc aga ggg gcg ttg tca gca atc gat agg gac ttt ggg ttc atg     912

Trp Ile Arg Gly Ala Leu Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met

    290                 295                 300

aat agt gtt ttc cat gat gtt aca cac act cac gtc atg cat cat atg     960

Asn Ser Val Phe His Asp Val Thr His Thr His Val Met His His Met

305                 310                 315                 320

ttt tca tac att cca cac tat cat gcg aaa gag gca agg gat gca atc    1008

Phe Ser Tyr Ile Pro His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile

                325                 330                 335

aat aca atc ata ggc gac tat tat atg atc gat agg act cca att ttg    1056

Asn Thr Ile Ile Gly Asp Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu

            340                 345                 350

aaa gca ctg tgg aga gag gcc aag gaa tgc atg tac atc gag cct gat    1104

Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp

        355                 360                 365

agc aag cgc aaa ggt gtt tat tgg tat cat aaa ttg tga                1143

Ser Lys Arg Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370                 375                 380

<210>13

<211>387

<212>PRT

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<400>13

Met Gly Gly Gly Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                   10                  15

Glu Lys Lys Gly Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys

            20                  25                  30

Pro Pro Phe Thr Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys

        35                  40                  45

Phe Glu Arg Ser Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val

    50                  55                  60

Cys Leu Ser Phe Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr

65                  70                  75                  80

Ile Ser Ser Pro Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe

                85                  90                  95

Gln Gly Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly

            100                 105                 110

His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu

        115                 120                 125

Ile Val His Ser Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser

    130                 135                 140

His Arg Arg His His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val

145                 150                 155                 160

Phe Val Pro Lys Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu

                165                 170                 175

Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu

            180                 185                 190

Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp

        195                 200                 205

Arg Phe Ala Cys His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg

    210                 215                 220

Glu Arg Leu Gln Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr

225                 230                 235                 240

Phe Val Leu Tyr Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met

                245                 250                 255

Arg Ile Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met

            260                 265                 270

Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser

        275                 280                 285

Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp

    290                 295                 300

Tyr Gly Val Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val

305                 310                 315                 320

Ala His His Leu Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala

                325                 330                 335

Thr Lys Ala Ile Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly

            340                 345                 350

Thr Pro Phe Tyr Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe

        355                 360                 365

Val Glu Pro Asp Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg

    370                 375                 380

Asn Lys Tyr

385

<210>14

<211>384

<212>PRT

<213>Lesquerella fendleri

<400>14

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Gln Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Pro Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>15

<211>383

<212>PRT

<213>Lesquerella lindheimeri

<400>15

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Lys Pro Glu Ala Leu Arg Arg Gly Pro Gly Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Gln Asp Leu Arg Lys Ala Ile Pro Arg His Cys Phe Lys Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Ile Leu Ala Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Phe Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His Gln Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

Thr Phe Leu Leu Ile Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ala Asn Asn Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Ser Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

His Ile Tyr Ile Thr Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Thr Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Pro Leu Val Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Asp Trp Ile Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Gln Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Lys Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>16

<211>384

<212>PRT

<213>Lesquerella gracilis A

<400>16

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Lys Pro Gln Ala Leu Arg Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Phe Ile Leu Ala Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Val Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ile Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Arg Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

His Ile Tyr Ile Thr Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Ile Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>17

<211>384

<212>PRT

<213>Lesquerella gracilis B

<400>17

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                   10                  15

Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>18

<211>374

<212>PRT

<213>粗糙还阳参(Crepis biennis)

<400>18

Met Gly Ala His Gly His Gly Arg Thr Ser Lys Lys Ser Val Met Glu

 1               5                  10                  15

Arg Val Ser Val Asp Pro Val Pro Phe Ser Leu Ser Asp Leu Lys Gln

            20                  25                  30

Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

        35                  40                  45

Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

    50                  55                  60

Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                85                  90                  95

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp Val

            100                 105                 110

Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Met

                165                 170                 175

Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Leu Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Lys Lys

225                 230                 235                 240

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Met Leu Gly Val

                245                 250                 255

Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

Val Thr His Thr His Val Met His His Met Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Asn Thr Ile Ile Gly Asp

                325                 330                 335

Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Leu Trp Arg Glu

            340                 345                 350

Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Arg Lys Gly Val

        355                 360                 365

Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370

<210>19

<211>383

<212>PRT

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<400>19

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

            20                  25                  30

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Glu Arg Ser

        35                  40                  45

Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val Cys Leu Ser Phe

    50                  55                  60

Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr Ile Ser Ser Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe Gln Gly Cys Ile

                85                  90                  95

Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu Ile Val His Ser

        115                 120                 125

Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

145                 150                 155                 160

Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro

                165                 170                 175

Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys

        195                 200                 205

His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr Phe Val Leu Tyr

225                 230                 235                 240

Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met Arg Ile Tyr Gly

                245                 250                 255

Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met Ile Thr Tyr Leu

            260                 265                 270

Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser Ser Glu Trp Asp

        275                 280                 285

Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Val Leu

    290                 295                 300

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

                325                 330                 335

Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Thr Pro Phe Tyr

            340                 345                 350

Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg Asn Lys Tyr

   370                 375                 380

<210>20

<211>384

<212>PRT

<213>Lesquerella fendleri

<400>20

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

            20                  25                  30

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

     50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Gln Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Pro Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Ash Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>21

<211>383

<212>PRT

<213>Lesquerella lindheimeri

<400>21

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

            20                  25                  30

Val Gly Asp Leu Arg Lys Ala Ile Pro Arg His Cys Phe Lys Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Ile Leu Ala Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Phe Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His Gln Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

Thr Phe Leu Leu Ile Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ala Asn Asn Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Ser Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

His Ile Tyr Ile Thr Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Thr Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Pro Leu Val Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Asp Trp Ile Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Gln Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Lys Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>22

<211>384

<212>PRT

<213>Lesquerella gracilis A

<400>22

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

            20                  25                  30

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Phe Ile Leu Ala Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Val Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ile Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Val Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Ile His

        115                 120                 125

Ser Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Thr Val Val Leu Ile Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Arg Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

His Ile Tyr Ile Thr Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Lys Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Ile Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Gln

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>23

<211>384

<212>PRT

<213>Lesquerella gracilis B

<400>23

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

            20                  25                  30

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>24

<211>380

<212>PRT

<213>粗糙还阳参(Crepis biennis)

<400>24

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

            20                  25                  30

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Val Ile Arg Ser Ser Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr

    50                  55                  60

Ile Phe Tyr Phe Leu Ala Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ala Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile

                85                  90                  95

Leu Thr Gly Leu Trp Ile Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Glu His Gln Trp Val Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser

        115                 120                 125

Phe Leu Leu Thr Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His

    130                 135                 140

His Ala Asn Thr Ser Ser Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys

145                 150                 155                 160

Ser Lys Ser Lys Leu Ala Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro

                165                 170                 175

Gly Arg Leu Leu Val Met Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Leu Thr Asn Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn

        195                 200                 205

His Phe Asp Pro Met Ser Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln

    210                 215                 220

Val Leu Leu Ser Asp Leu Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys

225                 230                 235                 240

Val Ala Val Ala Lys Lys Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly

                245                 250                 255

Val Pro Met Leu Gly Val Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu

            260                 265                 270

His His Thr His Gln Ser Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn

        275                 280                 285

Trp Ile Arg Gly Ala Leu Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met

    290                 295                 300

Asn Ser Val Phe His Asp Val Thr His Thr His Val Met His His Met

305                 310                 315                 320

Phe Ser Tyr Ile Pro His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile

                325                 330                 335

Asn Thr Ile Ile Gly Asp Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu

            340                 345                 350

Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp

        355                 360                 365

Ser Lys Arg Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370                 375                 380

<210>25

<211>1152

<212>DNA

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1149)

<400>25

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Met Gly Gly Gly Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                   10                  15

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             20                  25                  30

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Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Glu Arg Ser

         35                  40                  45

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Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val Cys Leu Ser Phe

     50                  55                  60

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Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr Ile Ser Ser Pro

 65                  70                  75                  80

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Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe Gln Gly Cys Ile

                 85                  90                  95

ctc act ggt ctt tgg gtc atc ggc cat gaa tgt ggc cat cat gct ttt    336

Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

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        115                 120                 125

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    130                 135                 140

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145                 150                 155                 160

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Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro

                165                 170                 175

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Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

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        195                 200                 205

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His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

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Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr Phe Val Leu Tyr

225                 230                 235                 240

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                245                 250                 255

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            260                 265                 270

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Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser Ser Glu Trp Asp

        275                 280                 285

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Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Val Leu

    290                 295                 300

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Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

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Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

                325                 330                 335

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Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Thr Pro Phe Tyr

            340                 345                 350

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Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

gaa gga gct cct aca caa ggc gtt ttc tgg tac cgg aac aag tat    1149

Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg Asn Lys Tyr

    370                 375                 380

taa                                                            1152

<210>26

<211>1152

<212>DNA

<213>Lesquerella gracilis B

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1149)

<400>26

atg ggt gct ggt gga aga ata atg gtt acc cct tct tcc aag aaa tca     48

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 1               5                   10                  15

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             20                  25                  30

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         35                  40                  45

atc cct cgt tct ttc tcc tac ctt ctc aca gat atc act tta gtt tct    192

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     50                  55                  60

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 65                  70                  75                  80

ctc tct tac cta gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt gtc    288

Leu Ser Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys Val

                 85                  90                  95

cta aca ggt atc tgg gtc ctt ggc cat gaa tgt ggt cac cat gca ttc    336

Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala  Phe

            100                 105                 110

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        115                 120                 125

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Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

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                165                 170                 175

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Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

tat cta gcc ttt aat gta tca ggt aga cct tat gat ggt ttc gct tca     624

Tyr Leu Ala  Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala Ser

        195                  200                 205

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His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

ata tac atc tca gat gct ggt att cta gct gtc tgt tat ggt ctt tac     720

Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu Tyr

225                 230                 235                 240

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                245                 250                 255

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Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe Leu

            260                 265                 270

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Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Glu

        275                 280                 285

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Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu

    290                 295                 300

aac aag gtg ttt cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat ctt     960

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

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Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala Ile

                325                 330                 335

aag cca ata ctt ggt gat tac tac cat ttc gat gga aca ccg tgg tat    1056

Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp Tyr

            340                 345                 350

gtg gct atg tat agg gaa gca aag gag tgt ctc tat gta gaa ccg gat    1104

Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

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Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

tga                                                                1152

<210>27

<211>1134

<212>DNA

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1131)

<400>27

atg ggt gca ggt ggt cgg atg tcg gat cta tct gac gga aaa aat ctc    48

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Ser Asp Leu Ser Asp Gly Lys Asn Leu

 1               5                   10                  15

ctc aaa cgt gtg cca gtt gat cca cct ttc aca tta agt gat ata aag     96

Leu Lys Arg Val Pro Val Asp Pro Pro Phe Thr Leu Ser Asp Ile Lys

             20                  25                  30

aaa gca atc cct ccc cat tgc ttc aaa cga tct gtc ata cgt tcg tcc    144

Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser

         35                  40                  45

tac tat gtt gtt cat gat ctc atc gtc tcc tac gtc ttc ttc ttc ctc    192

Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Val Ser Tyr Val Phe Phe Phe Leu

     50                  55                  60

gca acg aca tat att act gtt ctt cct gct cct ctt gct tac ata gcg    240

Ala Thr Thr Tyr Ile Thr Val Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Ile Ala

 65                  70                  75                  80

tgg cca gtt tac tgg ttt tgc caa gca agt att ctc act ggg ttg tgg    288

Trp Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp

                 85                  90                  95

gtt atc ggc cat gaa tgt ggt cac cat gcc ttt agt gaa tac cag tgg    336

Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp

            100                 105                 110

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Ile Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro

        115                 120                 125

tac ttc tct tgg aaa tat agc cat cga aat cac cat gcg aac aca aat    432

Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Asn

    130                 135                 140

tca ctc gac aac gac gaa gtt tac att cct aag cgc aag tcc aaa gtc    480

Ser Leu Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Arg Lys Ser Lys Val

145                 150                 155                 160

aag att tac tcc aaa atc cta aac aac cca cct gga cga gtg ttc act    528

Lys Ile Tyr Ser Lys Ile Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Phe Thr

                165                 170                 175

ttg gtt ttc agg ttg acg cta ggg ttt cct ttg tac ctg tta act aat    576

Leu Val Phe Arg Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn

            180                 185                 190

atc tct gga aag aaa tac caa cgg ttt gcc aac cac ttt gat cca ttg    624

Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Gln Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Leu

        195                 200                 205

agt ccc atc ttc acc gag cgt gaa cga att cag gtt ctt gta tca gat    672

Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Leu Val Ser Asp

    210                 215                 220

ctt ggt ctt cta gct gta atc tac gca atc aag ctt ctt gtt gct gca    720

Leu Gly Leu Leu Ala Val Ile Tyr Ala Ile Lys Leu Leu Val Ala Ala

225                 230                 235                 240

aaa gga gct gtc tgg gtg aca tgc atc tat gga gtt cca gtc cta ggt    768

Lys Gly Ala Val Trp Val Thr Cys Ile Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly

                 245                 250                 255

gta agc gtg ttc ttc gtt ttg atc acg tat tta cac cac acc cat ctc     816

Val Ser Val Phe Phe Val Leu Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Leu

            260                 265                 270

tcc tta cct cat tac gat tcg act gag tgg aac tgg atc aga ggg gca     864

Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala

        275                 280                 285

ttg tca acc atc gat agg gat ttt ggg ttc cta aat agg gtt ttc cat     912

Leu Ser Thr Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Arg Val Phe His

    290                 295                 300

gac gtt aca cac act cat gta ttg cat cat ttg atc tct tac att cca     960

Asp Val Thr His Thr His Val Leu His His Leu Ile Ser Tyr Ile Pro

305                 310                 315                 320

cac tat cat gca aag gag gca aga gat gca atc aaa cca gtt ttg ggt    1008

His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Val Leu Gly

                325                 330                 335

gat tat tat aag att gat agg act ccg ata ttc aaa gca atg tgg aga    1056

Asp Tyr Tyr Lys Ile Asp Arg Thr Pro Ile Phe Lys Ala Met Trp Arg

            340                 345                 350

gag gcc aag gaa tgc atc tat atc gag cca gat gaa gat act gaa cac    1104

Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Pro Asp Glu Asp Thr Glu His

        355                 360                 365

aag ggt gtt tac tgg tac cat aaa atg tga                            1134

Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>28

<211>1164

<212>DNA

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1161)

<400>28

atg gct tcc tcc gga aga atg tct act gtg att act tct aac aac tct     48

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                   10                  15

gag aag aag gga ggt tct tct cat ctt aag aga gct cca cat act aag     96

Glu Lys Lys Gly Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys

    20                  25                  30

cca cct ttc act ctt gga gac ctt aag aga gct att cca cct cat tgt    144

Pro Pro Phe Thr Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys

         35                  40                  45

ttc gag aga tct ttc gtg aga tct ttc tct tat gtg gct tat gac gtg    192

Phe Glu Arg Ser Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val

     50                  55                  60

tgt ctt tct ttc ctt ttc tat tct att gct act aac ttc ttc cca tat    240

Cys Leu Ser Phe Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr

 65                  70                  75                  80

att tct tct cca ctt tct tat gtg gct tgg ctt gtg tat tgg ctt ttc    288

Ile Ser Ser Pro Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe

                 85                  90                  95

caa gga tgt att ctt act gga ctt tgg gtt att ggt cat gag tgt ggt    336

Gln Gly Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly

            100                 105                 110

cat cat gca ttt tct gaa tat caa ctt gct gac gac att gtg gga ctt    384

His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu

        115                 120                 125

att gtg cat tct gct ctt ttg gtg cca tat ttc tct tgg aag tat tct    432

Ile Val His Ser Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser

    130                 135                 140

cat aga aga cat cat tct aac att gga tct ctt gag aga gac gag gtg    480

His Arg Arg His His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val

145                 150                 155                 160

ttt gtg cct aag tct aag tct aag att tct tgg tat tct aag tat ctt    528

Phe Val Pro Lys Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu

                165                 170                 175

aac aac cca cct gga aga gtg ctt act ctt gct gca act ctt ttg ctt    576

Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu

            180                 185                 190

gga tgg cca ctt tat ctt gct ttc aac gtg tct gga aga cca tat gac    624

Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp

        195                 200                 205

aga ttc gct tgt cat tat gac cca tat gga cca att ttc tct gag aga    672

Arg Phe Ala Cys His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg

    210                 215                 220

gag aga ctt caa atc tat att gct gac ctt gga att ttc gct act act    720

Glu Arg Leu Gln Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr

225                 230                 235                 240

ttc gtg ctt tat caa gct act atg gct aag gga ctt gct tgg gtt atg    768

Phe Val Leu Tyr Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met

                 245                250                 255

aga atc tat gga gtg cca ctt ttg att gtg aac tgt ttc ctt gtg atg    816

Arg Ile Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met

            260                 265                 270

att act tat ctt caa cat act cat cca gct att cca aga tat gga tct    864

Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser

        275                 280                 285

tct gaa tgg gat tgg ctt aga gga gct atg gtg act gtg gac aga gac    912

Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp

    290                 295                 300

tat gga gtg ctt aac aag gtg ttc cat aac att gct gac act cat gtg    960

Tyr Gly Val Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val

305                 310                 315                 320

gct cat cat ctt ttc gct act gtg cca cat tat cat gct atg gag gct   1008

Ala His His Leu Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala

                325                 330                 335

act aag gct att aag cca att atg gga gag tat tat aga tat gac gga    1056

Thr Lys Ala Ile Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly

            340                 345                 350

act cca ttc tat aag gct ctt tgg aga gag gct aag gag tgt ctt ttc    1104

Thr Pro Phe Tyr Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe

        355                 360                 365

gtt gaa cca gat gaa gga gct cca act caa gga gtg ttc tgg tat aga    1152

Val Glu Pro Asp Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg

    370                 375                 380

aac aag tat taa                                                    1164

Asn Lys Tyr

385

<210>29

<211>1134

<212>DNA

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1131)

<400>29

atg gct tcc tcc gga aga atg tct gac ctt tct gac gga aag aac ctt     48

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Asp Leu Ser Asp Gly Lys Asn Leu

 1               5                  10                  15

ttg aag aga gtg cca gtg gac cca cct ttc act ctt tct gac att aag     96

Leu Lys Arg Val Pro Val Asp Pro Pro Phe Thr Leu Ser Asp Ile Lys

            20                  25                  30

aag gct att cca cct cat tgt ttc aag aga tct gtg att aga tct tct    144

Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser

        35                  40                  45

tat tat gtg gtg cat gac ctt att gtg tct tat gtg ttc ttc ttc ctt    192

Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Val Ser Tyr Val Phe Phe Phe Leu

    50                  55                  60

gct act act tat att act gtg ctt cca gct cca ctt gct tat att gct    240

Ala Thr Thr Tyr Ile Thr Val Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Ile Ala

65                  70                  75                  80

tgg cca gtg tat tgg ttc tgt caa gct tct att ctt act gga ctt tgg    288

Trp Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp

                85                  90                  95

gtt att gga cat gag tgt gga cat cat gct ttc tct gag tat caa tgg    336

Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp

            100                 105                 110

att gac gac act gtg gga ttc att ctt cat tct gct ctt ttg act cca    384

Ile Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro

        115                 120                 125

tat ttc tct tgg aag tat tct cat aga aac cat cat gct aac act aac    432

Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Asn

    130                 135                 140

tct ctt gac aac gac gag gtg tat att cca aag aga aag tct aag gtg    480

Ser Leu Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Arg Lys Ser Lys Val

145                 150                 155                 160

aag atc tat tct aag att ctt aac aac cca cct gga aga gtg ttc act    528

Lys Ile Tyr Ser Lys Ile Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Phe Thr

                165                 170                 175

ctt gtg ttc aga ctt act ctt gga ttc cca ctt tat ctt ttg act aac    576

Leu Val Phe Arg Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn

            180                 185                 190

att tct gga aag aag tat caa aga ttc gct aac cat ttc gac cca ctt    624

Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Gln Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Leu

        195                 200                 205

tct cca att ttc act gag aga gag aga att caa gtg ctt gtg tct gac    672

Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Leu Val Ser Asp

    210                 215                 220

ctt gga ctt ttg gct gtg atc tat gct att aag ctt ttg gtt gct gca    720

Leu Gly Leu Leu Ala Val Ile Tyr Ala Ile Lys Leu Leu Val Ala Ala

225                 230                 235                 240

aag gga gct gtg tgg gtg act tgt atc tat gga gtt cca gtt ctt gga    768

Lys Gly Ala Val Trp Val Thr Cys Ile Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly

                245                 250                 255

gtg tct gtg ttc ttc gtg ctt att act tat ctt cat cat act cat ctt    816

Val Ser Val Phe Phe Val Leu Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Leu

            260                 265                 270

tct ctt cca cat tat gac tct act gag tgg aac tgg att aga gga gct    864

Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala

        275                 280                 285

ctt tct act att gac aga gac ttc gga ttc ctt aac aga gtg ttc cat    912

Leu Ser Thr Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Arg Val Phe His

    290                 295                 300

gac gtg act cat act cat gtg ctt cat cat ctt att tct tat att cca    960

Asp Val Thr His Thr His Val Leu His His Leu Ile Ser Tyr Ile Pro

305                 310                 315                 320

cat tat cat gct aag gag gct aga gac gct att aag cca gtg ctt gga   1008

His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Val Leu Gly

                325                 330                 335

gac tat tat aag att gac aga act cca atc ttt aag gct atg tgg aga   1056

Asp Tyr Tyr Lys Ile Asp Arg Thr Pro Ile Phe Lys Ala Met Trp Arg

            340                 345                 350

gag gct aag gag tgt atc tat att gaa cca gac gaa gac act gag cat   1104

Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Pro Asp Glu Asp Thr Glu His

        355                 360                 365

aag gga gtg tat tgg tat cat aag atg taa                           1134

Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>30

<211>1164

<212>DNA

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1161)

<400>30

atg gct tcc tcc ggt agg atg tct act gtc ata acc agc aac aac agt     48

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                  10                  15

gag aag aaa gga gga agc agt cac ctt aag agg gct cca cac act aag     96

Glu Lys Lys Gly Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys

            20                  25                  30

cct cct ttc aca ctt ggt gac ctc aag aga gcc atc cca ccc cat tgc    144

Pro Pro Phe Thr Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys

        35                  40                  45

ttt gaa agg tct ttt gtg aga tca ttc tcc tat gtt gcc tat gat gtc    192

Phe Glu Arg Ser Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val

    50                  55                  60

tgc tta agt ttt ctt ttc tac tct atc gcc acc aac ttc ttc cct tac    240

Cys Leu Ser Phe Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr

65                  70                  75                  80

atc tct tct cca ctc tct tat gtc gct tgg ctg gtt tac tgg ctc ttc    288

Ile Ser Ser Pro Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe

                85                  90                  95

caa ggc tgc att ctc act ggt ctt tgg gtc atc ggc cat gaa tgt ggc    336

Gln Gly Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly

            100                 105                 110

cat cat gct ttt agt gag tat cag ctg gct gat gac att gtt ggc cta    384

His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu

        115                 120                 125

att gtc cat tct gca ctt ctg gtt cca tac ttc tca tgg aaa tat agc    432

Ile Val His Ser Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser

    130                 135                 140

cat aga agg cac cat tct aac ata gga tct ctc gag agg gac gaa gtg    480

His Arg Arg His His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val

145                 150                 155                 160

ttc gtc cca aaa tca aag tct aaa att tca tgg tat tct aag tac tta    528

Phe Val Pro Lys Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu

                165                 170                 175

aac aac cct cca ggt agg gtt ttg aca ctt gct gcc act ctt ctc ctt    576

Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu

            180                 185                 190

ggc tgg cct tta tac tta gct ttc aat gtc tct ggt aga cct tac gat    624

Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp

        195                 200                 205

agg ttt gct tgc cat tat gat ccc tat ggc cca ata ttt tcc gaa aga    672

Arg Phe Ala Cys His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg

    2l0                 215                 220

gaa agg ctt cag atc tac att gct gac ctc gga atc ttt gcc aca act    720

Glu Arg Leu Gln Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr

225                 230                 235                 240

ttt gtg ctt tat cag gct aca atg gca aaa ggg ttg gct tgg gta atg    768

Phe Val Leu Tyr Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met

                245                 250                 255

agg atc tat ggg gtg cca ttg ctt att gtt aac tgt ttc ctt gtt atg    816

Arg Ile Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met

            260                 265                 270

atc aca tac ttg cag cac act cac cca gct att cca agg tat ggc tca    864

Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser

        275                 280                 285

tct gaa tgg gat tgg ctc agg gga gca atg gtg act gtc gat aga gat    912

Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp

    290                 295                 300

tat ggg gtg ttg aac aag gta ttc cat aac att gca gac act cat gta    960

Tyr Gly Val Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val

305                 310                 315                 320

gct cat cat ctc ttt gct aca gtg cca cat tac cat gca atg gag gcc   1008

Ala His His Leu Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala

                325                 330                 335

act aaa gca atc aag cct ata atg gga gag tat tac agg tat gat ggt   1056

Thr Lys Ala Ile Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly

            340                 345                 350

acc cca ttt tac aag gca ttg tgg agg gag gca aag gag tgc ttg ttc   1104

Thr Pro Phe Tyr Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe

        355                 360                 365

gtc gag cca gat gaa gga gct cct aca caa ggc gtt ttc tgg tac agg   1152

Val Glu Pro Asp Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg

    370                 375                 380

aac aag tat taa                                                   1164

Asn Lys Tyr

385

<210>31

<211>1155

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>假拟序列

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>31

atg gct tcc tcc gga aga atc atg gtt act cct tct tcc aag aag tca     48

Met Ala Ser Ser Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

gaa act gaa gcc cta aag cgt gga cca tgt gag aaa cca cca ttc act     96

Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

gtt aaa gat ctg aag aag gca atc cca cag cat tgt ttc caa aga tct    144

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

atc cct cgt tct ttc tcc tac ctt ctc aca gat atc act tta gtt tct    192

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

tgc ttc tac tac gtt gcc aca aat tac ttc tct ctt ctt cct cag cct    240

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asr Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

ctc tct act tac cta gct tgg cct ctc tat tgg gta tgt caa ggc tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

gtc cta aca ggt atc tgg gtc ctt ggc cat gaa tgt ggt cac cat gca    336

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

ttc agt gac tat caa tgg cta gat gac act gtt ggt ttc atc ttc cat    384

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

tcc tta ctt ctc gtc cct tac ttc tcc tgg aaa tac agt cat cgt cgt    432

Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

cac cat tcc aac aat gga tct ctc gag aaa gat gaa gtc ttt gtc cca    480

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

cca aag aag gct gca gtc aaa tgg tat gtt aaa tac ctc aac aac cct    528

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

ctt gga agg att ctg gtg tta aca gtt agg ttt atc ctc ggg tgg cct    576

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ttg tat cta gcc ttt aat gta tca ggt aga cct tat gat ggt ttc gct    624

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

tca cat ttc ttc cct cat gca cct atc ttt aaa gac agg gaa cgt ctc    672

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

cag ata tac atc tca gat gct ggt att cta gct gtc tgt tat ggt ctt    720

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

tac cgt tac gct gct tca caa gga ttg acc gct atg atc tgc gtc tat    768

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

gga gta cct ctt ttg ata gtg aac ttc ttc ctt gtc ttg gta act ttc    816

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

ttg cag cac act cat cct tct tta cct cac tat gat tca acc gag tgg    864

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

gaa tgg att aga gga gct ttg gtt act gta gac aga gac tac gga atc    912

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ttg aac aag gtg ttt cac aac ata aca gac aca cat gtg gct cat cat    960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

ttg ttc gca act ata cct cat tat aac gca atg gaa gct aca gag gct   1008

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

atc aag cca ata ctt ggt gat tac tac cat ttc gat gga aca cct tgg   1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gct atg tat agg gaa gca aag gag tgt ctc tat gta gaa cct   1104

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

gat act gaa cgt ggg aag aag ggt gtc tac tat tac aac aat aag tta   1152

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

taa                                                               1155

<210>32

<211>1125

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>假拟序列

<221>CDS

<222>(1)...(1122)

<400>32

atg gct tcc tcc ggc cat agt cga aca tct aag aag tct gtc atg gaa     48

Met Ala Ser Ser Gly His Ser Arg Thr Ser Lys Lys Ser Val Met Glu

 1               5                  10                  15

cgt gtc tct gtt gat cca gta ccc ttc tct cta agt gat ttg aag caa     96

Arg Val Ser Val Asp Pro Val Pro Phe Ser Leu Ser Asp Leu Lys Gln

            20                  25                  30

gca atc cct ccc cat tgc ttc cag cga tct gtc atc cgt tca tct tac    144

Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

        35                  40                  45

tat gta gtt cac gat ctc att att gcc tac atc ttc tac ttc ctt gcc    192

Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

    50                  55                  60

gac aaa tac att cca att ctc cct gct cct cta gcc tac tta gct tgg    240

Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

ccc ctt tac tgg ttc tgt caa gct agc atc ctc act ggt tta tgg atc    288

Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                85                  90                  95

ctc ggt cat gaa tgc ggt cac cat gcc ttt agc gag tac caa tgg gtt    336

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp Val

            100                 105                 110

gac gac act gtg ggc ttc atg gtc cac tca ttt ctt ctc act cct tac    384

Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

ttc tct tgg aaa tac agt cac agg aat cac cat gcc aac aca agt tcc    432

Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

att gat aac gat gaa gtt tac att cct aag agc aag tcc aaa ctc gct    480

Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

ctt acc tat aag ctt ctt aac aac cct cca gga agg ctg tta gtt atg    528

Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Met

                165                 170                 175

gtt atc atg ttc acc cta gga ttt cct tta tac ctc ttg aca aat att    576

Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

tcc ggc aag aag tac gac agg ttt gcc aac cac ttc gac ccc atg agt    624

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

cca att ttc aag gaa cgt gag agg ttt cag gtc ttg ctt tct gat ctt    672

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Leu Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

ggc ctt ctt gct gtg ttt tat gga atc aaa gtt gct gta gca aag aag    720

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Lys Lys

225                 230                 235                 240

gga gct gct tgg gtg gct tgt atg tat gga gtt cca atg cta ggc gta    768

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Met Leu Gly Val

                245                 250                 255

ttc acc ctt ttc gat atc atc act tac ttg cac cac acc cat cag tca    816

Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

tct cct cat tat gac tca act gaa tgg aac tgg atc aga gga gct ttg    864

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

tca gca atc gat agg gac ttt ggg ttc atg aat agt gtc ttc cat gat    912

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

gtt aca cac act cac gtc atg cat cat atg ttc tca tac att cca cac    960

Val Thr His Thr His Val Met His His Met Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

tat cat gct aag gag gca agg gat gca atc aat aca atc ata ggc gac   1008

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Asn Thr Ile Ile Gly Asp

                325                 330                 335

tat tat atg atc gat agg act cca att ttg aaa gca ctg tgg aga gag  1056

Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Leu Trp Arg Glu

            340                 345                 350

gcc aag gaa tgc atg tac atc gag cct gat agc aag agg aag ggt gta  1104

Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Arg Lys Gly Val

        355                 360                 365

tat tgg tac cat aaa ttg taa                                      1125

Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370

<210>33

<211>1134

<212>DNA

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1131)

<400>33

atg gct tcc tcc ggt agg atg tct gat ctt tct gac ggt aag aat ctt     48

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Asp Leu Ser Asp Gly Lys Asn Leu

 1               5                  10                  15

ctc aaa agg gtg cca gtt gat cca cct ttc aca tta agt gat ata aag     96

Leu Lys Arg Val Pro Val Asp Pro Pro Phe Thr Leu Ser Asp Ile Lys

            20                  25                  30

aaa gca atc cct ccc cat tgc ttc aaa agg tct gtc ata agg tct tca    144

Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser

        35                  40                  45

tac tat gtt gtt cat gat ctc atc gtc tcc tac gtc ttc ttc ttc ctc    192

Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Val Ser Tyr Val Phe Phe Phe Leu

    50                  55                  60

gca act aca tat att act gtt ctt cct gct cct ctt gct tac ata gct    240

Ala Thr Thr Tyr Ile Thr Val Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Ile Ala

65                  70                  75                  80

tgg cca gtt tac tgg ttt tgc caa gca agt att ctc act ggg ttg tgg    288

Trp Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp

                85                  90                  95

gtt atc ggc cat gaa tgt ggt cac cat gcc ttt agt gaa tac cag tgg    336

Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp

            100                 105                 110

att gat gac aca gtt ggg ttc atc ctc cac tct gct ctt ctc acc cct    384

Ile Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro

        115                 120                 125

tac ttc tct tgg aaa tat agc cat agg aat cac cat gct aac aca aat    432

Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Asn

    130                 135                 140

tca ctc gac aac gac gaa gtt tac att cct aag agg aag tcc aaa gtc    480

Ser Leu Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Arg Lys Ser Lys Val

145                 150                 155                 160

aag atc tac tcc aaa atc cta aac aac cca cct gga agg gtg ttc act    528

Lys Ile Tyr Ser Lys Ile Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Phe Thr

                165                 170                 175

ttg gtt ttc agg ttg act cta ggg ttt cct ttg tac ctg tta act aat    576

Leu Val Phe Arg Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn

            180                 185                 190

atc tct gga aag aaa tac caa agg ttt gcc aac cac ttt gat cca ttg    624

Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Gln Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Leu

        195                 200                 205

agt ccc atc ttc acc gag agg gaa agg att cag gtt ctt gta tca gat    672

Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Leu Val Ser Asp

    210                 215                 220

ctt ggt ctt cta gct gta atc tac gca atc aag ctt ctt gtt gct gca    720

Leu Gly Leu Leu Ala Val Ile Tyr Ala Ile Lys Leu Leu Val Ala Ala

225                 230                 235                 240

aaa gga gct gtc tgg gtg aca tgc atc tat gga gtt cca gtc cta ggt    768

Lys Gly Ala Val Trp Val Thr Cys Ile Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly

                245                 250                 255

gta agc gtg ttc ttc gtt ttg atc act tac ttg cac cac acc cat ctt    816

Val Ser Val Phe Phe Val Leu Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Leu

            260                 265                 270

tcc ttg cct cat tac gat tct act gag tgg aac tgg atc aga ggg gca    864

Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala

        275                 280                 285

ttg tca acc atc gat agg gat ttt ggg ttc cta aat agg gtt ttc cat    912

Leu Ser Thr Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Arg Val Phe His

    290                 295                 300

gac gtt aca cac act cat gta ttg cat cat ttg atc tct tac att cca    960

Asp Val Thr His Thr His Val Leu His His Leu Ile Ser Tyr Ile Pro

305                 310                 315                 320

cac tat cat gca aag gag gca aga gat gca atc aaa cca gtt ttg ggt   1008

His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Val Leu Gly

                325                 330                 335

gat tat tat aag att gat agg act cct ata ttc aaa gca atg tgg aga   1056

Asp Tyr Tyr Lys Ile Asp Arg Thr Pro Ile Phe Lys Ala Met Trp Arg

            340                 345                 350

gag gcc aag gaa tgc atc tat atc gag cca gat gaa gat act gaa cac   1104

Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Pro Asp Glu Asp Thr Glu His

        355                 360                 365

aag ggt gtt tac tgg tac cat aaa atg taa                           1134

Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>34

<211>383

<212>PRT

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<400>34

Met Gly Gly Gly Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                  10                  15

Glu Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Glu Arg Ser

        35                  40                  45

Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val Cys Leu Ser Phe

    50                  55                  60

Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr Ile Ser Ser Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe Gln Gly Cys Ile

                85                  90                  95

Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu Ile Val His Ser

        115                 120                 125

Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

145                 150                 155                 160

Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro

                165                 170                 175

Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys

        195                 200                 205

His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr Phe Val Leu Tyr

225                 230                 235                 240

Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met Arg Ile Tyr Gly

                245                 250                 255

Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met Ile Thr Tyr Leu

            260                 265                 270

Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser Ser Glu Trp Asp

        275                 280                 285

Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Val Leu

    290                 295                 300

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

                325                 330                 335

Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Thr Pro Phe Tyr

            340                 345                 350

Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg Asn Lys Tyr

    370                 375                 380

<210>35

<211>383

<212>PRT

<213>Lesquerella gracilis B

<400>35

Met Gly Ala Gly Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys Val

                85                  90                  95

Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His Ser

        115                 120                 125

Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro Pro

145                 150                 155                 160

Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Leu

                165                 170                 175

Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala Ser

        195                 200                 205

His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu Tyr

225                 230                 235                 240

Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr Gly

                245                 250                 255

Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe Leu

            260                 265                 270

Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Glu

        275                 280                 285

Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu

    290                 295                 300

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala Ile

                325                 330                 335

Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp Tyr

            340                 345                 350

Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>36

<211>377

<212>PRT

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)

<400>36

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Ser Asp Leu Ser Asp Gly Lys Asn Leu

 1               5                  10                  15

Leu Lys Arg Val Pro Val Asp Pro Pro Phe Thr Leu Ser Asp Ile Lys

            20                  25                  30

Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser

        35                  40                  45

Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Val Ser Tyr Val Phe Phe Phe Leu

    50                  55                  60

Ala Thr Thr Tyr Ile Thr Val Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Ile Ala

65                  70                  75                  80

Trp Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp

                85                  90                  95

Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp

            100                 105                 110

Ile Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro

        115                 120                 125

Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Asn

    130                 135                 140

Ser Leu Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Arg Lys Ser Lys Val

145                 150                 155                 160

Lys Ile Tyr Ser Lys Ile Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Phe Thr

                165                 170                 175

Leu Val Phe Arg Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn

            180                 185                 190

Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Gln Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Leu

        195                 200                 205

Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Leu Val Ser Asp

    210                 215                 220

Leu Gly Leu Leu Ala Val Ile Tyr Ala Ile Lys Leu Leu Val Ala Ala

225                 230                 235                 240

Lys Gly Ala Val Trp Val Thr Cys Ile Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly

                245                 250                 255

Val Ser Val Phe Phe Val Leu Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Leu

            260                 265                 270

Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala

        275                 280                 285

Leu Ser Thr Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Arg Val Phe His

    290                 295                 300

Asp Val Thr His Thr His Val Leu His His Leu Ile Ser Tyr Ile Pro

305                 310                 315                 320

His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Val Leu Gly

                325                 330                 335

Asp Tyr Tyr Lys Ile Asp Arg Thr Pro Ile Phe Lys Ala Met Trp Arg

            340                 345                 350

Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Pro Asp Glu Asp Thr Glu His

        355                 360                 365

Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>37

<211>387

<212>PRT

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<400>37

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                  10                  15

Glu Lys Lys Gly Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys

            20                  25                  30

Pro Pro Phe Thr Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys

        35                  40                  45

Phe Glu Arg Ser Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val

    50                  55                  60

Cys Leu Ser Phe Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr

65                  70                  75                  80

Ile Ser Ser Pro Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe

                85                  90                  95

Gln Gly Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly

            100                 105                 110

His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu

        115                 120                 125

Ile Val His Ser Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser

    130                 135                 140

His Arg Arg His His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val

145                 150                 155                 160

Phe Val Pro Lys Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu

                165                 170                 175

Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu

            180                 185                 190

Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp

        195                 200                 205

Arg Phe Ala Cys His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg

    210                 215                 220

Glu Arg Leu Gln Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr

225                 230                 235                 240

Phe Val Leu Tyr Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met

                245                 250                 255

Arg Ile Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met

            260                 265                 270

Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser

        275                 280                 285

Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp

    290                 295                 300

Tyr Gly Val Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val

305                 310                 315                 320

Ala His His Leu Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala

                325                 330                 335

Thr Lys Ala Ile Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly

            340                 345                 350

Thr Pro Phe Tyr Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe

        355                 360                 365

Val Glu Pro Asp Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg

    370                 375                 380

Asn Lys Tyr

385

<210>38

<211>377

<212>PRT

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)

<400>38

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Asp Leu Ser Asp Gly Lys Asn Leu

 1               5                  10                  15

Leu Lys Arg Val Pro Val Asp Pro Pro Phe Thr Leu Ser Asp Ile Lys

            20                  25                  30

Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser

        35                  40                  45

Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Val Ser Tyr Val Phe Phe Phe Leu

    50                  55                  60

Ala Thr Thr Tyr Ile Thr Val Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Ile Ala

65                  70                  75                  80

Trp Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp

                85                  90                  95

Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp

            100                 105                 1l0

Ile Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro

        115                 120                 125

Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Asn

    130                 135                 140

Ser Leu Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Arg Lys Ser Lys Val

145                 150                 155                 160

Lys Ile Tyr Ser Lys Ile Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Phe Thr

                165                 170                 175

Leu Val Phe Arg Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn

            180                 185                 190

Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Gln Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Leu

        195                 200                 205

Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Leu Val Ser Asp

    210                 215                 220

Leu Gly Leu Leu Ala Val Ile Tyr Ala Ile Lys Leu Leu Val Ala Ala

225                 230                 235                 240

Lys Gly Ala Val Trp Val Thr Cys Ile Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly

                245                 250                 255

Val Ser Val Phe Phe Val Leu Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Leu

            260                 265                 270

Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala

        275                 280                 285

Leu Ser Thr Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Arg Val Phe His

    290                 295                 300

Asp Val Thr His Thr His Val Leu His His Leu Ile Ser Tyr Ile Pro

305                 310                 315                 320

His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Val Leu Gly

                325                 330                 335

Asp Tyr Tyr Lys Ile Asp Arg Thr Pro Ile Phe Lys Ala Met Trp Arg

            340                 345                 350

Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Pro Asp Glu Asp Thr Glu His

        355                 360                 365

Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>39

<211>387

<212>PRT

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<400>39

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser

 1               5                  10                  15

Glu Lys Lys Gly Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys

            20                  25                  30

Pro Pro Phe Thr Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys

        35                  40                  45

Phe Glu Arg Ser Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val

    50                  55                  60

Cys Leu Ser Phe Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr

65                  70                  75                  80

Ile Ser Ser Pro Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe

                85                  90                  95

Gln Gly Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly

            100                 105                 110

His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu

        115                 120                 125

Ile Val His Ser Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser

    130                 135                 140

His Arg Arg His His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val

145                 150                 155                 160

Phe Val Pro Lys Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu

                165                 170                 175

Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu

            180                 185                 190

Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp

        195                 200                 205

Arg Phe Ala Cys His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg

    210                 215                 220

Glu Arg Leu Gln Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr

225                 230                 235                 240

Phe Val Leu Tyr Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met

                245                 250                 255

Arg Ile Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met

            260                 265                 270

Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser

        275                 280                 285

Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp

    290                 295                 300

Tyr Gly Val Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val

305                 310                 315                 320

Ala His His Leu Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala

                325                 330                 335

Thr Lys Ala Ile Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly

            340                 345                 350

Thr Pro Phe Tyr Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe

        355                 360                 365

Val Glu Pro Asp Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg

    370                 375                 380

Asn Lys Tyr

385

<210>40

<211>384

<212>PRT

<213>人造序列

<220>

<223>假拟序列

<400>40

Met Ala Ser Ser Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>41

<211>374

<212>PRT

<213>人造序列

<220>

<223>假拟序列

<400>41

Met Ala Ser Ser Gly His Ser Arg Thr Ser Lys Lys Ser Val Met Glu

 1               5                  10                  15

Arg Val Ser Val Asp Pro Val Pro Phe Ser Leu Ser Asp Leu Lys Gln

            20                  25                  30

Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

        35                  40                  45

Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

    50                  55                  60

Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                85                  90                  95

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp Val

            100                 105                 110

Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Met

                165                 170                 175

Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Leu Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Lys Lys

225                 230                 235                 240

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Met Leu Gly Val

                245                 250                 255

Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

Val Thr His Thr His Val Met His His Met Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Asn Thr Ile Ile Gly Asp

                325                 330                 335

Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Leu Trp Arg Glu

            340                 345                 350

Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Arg Lys Gly Val

        355                 360                 365

Tyr Trp Tyr His Lys Leu

370

<210>42

<211>377

<212>PRT

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)

<400>42

Met Ala Ser Ser Gly Arg Met Ser Asp Leu Ser Asp Gly Lys Asn Leu

 1               5                  10                  15

Leu Lys Arg Val Pro Val Asp Pro Pro Phe Thr Leu Ser Asp Ile Lys

            20                  25                  30

Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser

        35                  40                  45

Tyr Tyr Val Val His Asp Leu Ile Val Ser Tyr Val Phe Phe Phe Leu

    50                  55                  60

Ala Thr Thr Tyr Ile Thr Val Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Ile Ala

65                  70                  75                  80

Trp Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp

                85                  90                  95

Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp

            100                 105                 110

Ile Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro

        115                 120                 125

Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Asn

    130                 135                 140

Ser Leu Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Arg Lys Ser Lys Val

145                 150                 155                 160

Lys Ile Tyr Ser Lys Ile Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Val Phe Thr

                165                 170                 175

Leu Val Phe Arg Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn

            180                 185                 190

Ile Ser Gly Lys Lys Tyr Gln Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Leu

        195                 200                 205

Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Leu Val Ser Asp

    210                 215                 220

Leu Gly Leu Leu Ala Val Ile Tyr Ala Ile Lys Leu Leu Val Ala Ala

225                 230                 235                 240

Lys Gly Ala Val Trp Val Thr Cys Ile Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly

                245                 250                 255

Val Ser Val Phe Phe Val Leu Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Leu

            260                 265                 270

Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala

        275                 280                 285

Leu Ser Thr Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Arg Val Phe His

    290                 295                 300

Asp Val Thr His Thr His Val Leu His His Leu Ile Ser Tyr Ile Pro

305                 310                 315                 320

His Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Val Leu Gly

                325                 330                 335

Asp Tyr Tyr Lys Ile Asp Arg Thr Pro Ile Phe Lys Ala Met Trp Arg

            340                 345                 350

Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Pro Asp Glu Asp Thr Glu His

        355                 360                 365

Lys Gly Val Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>43

<211>92

<212>DNA

<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400>43

agagagagag attctgcgga ggagcttctt cttcgtaggg tgttcatcgt tattaacgtt    60

atcgccccta cgtcagctcc atctccagaa ac                                  92

<210>44

<21l>1222

<212>DNA

<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400>44

agagagagag attctgcgga ggagcttctt cttcgtaggg tgttcatcgt tattaacgtt    60

atcgccccta cgtcagctcc atctccaggt ccgtcgcttc tcttccattt cttctcattt   120

tcgattttga ttcttatttc tttccagtag ctcctgctct gtgaatttct ccgctcacga   180

tagatctgct tatactcctt acattcaacc ttagatctgg tctcgattct ctgtttctct   240

gtttttttct tttggtcgag aatctgatgt ttgtttatgt tctgtcacca ttaataataa   300

tgaactctct cattcataca atgattagtt tctctcgtct acaaaacgat atgttgcatt   360

ttcacttttc ttcttttttt ctaagatgat ttgctttgac caatttgttt agatctttat   420

tctattttat tttctggtgg gttggtggaa attgaaaaaa aaaaaacagc ataaattgtt   480

atttgttaat gtattcattt tttggctatt tgttctgggt aaaaatctgc ttctactatt   540

gaatctttcc tggatttttt actcctattg ggtttttata gtaaaaatac ataataaaag   600

gaaaacaaaa gttttataga ttctcttaaa ccccttacga taaaagttgg aatcaaaata   660

attcaggatc agatgctctt tgattgattc agatgcgatt acagttgcat ggcaaatttt   720

ctagatccgt cgtcacattt tattttctgt ttaaatatct aaatctgata tatgatgtcg   780

acaaattctg gtggcttata catcacttca actgttttct tttggctttg tttgtcaact   840

tggttttcaa tacgatttgt gatttcgatc gctgaatttt taatacaagc aaactgatgt   900

taaccacaag caagagatgt gacctgcctt attaacatcg tattacttac tactagtcgt   960

attctcaacg caatcgtttt tgtatttctc acattatgcc gcttctctac tctttattcc  1020

ttttggtcca cgcattttct atttgtggca atccctttca caacctgatt tcccactttg  1080

gatcatttgt ctgaagactc tcttgaatcg ttaccacttg tttcttgtgc atgctctgtt  1140

ttttagaatt aatgataaaa ctattccata gtcttgagtt ttcagcttgt tgattctttt  1200

gcttttggtt ttctgcagaa ac                                           1222

<210>45

<211>222

<212>DNA

<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400>45

ggatgatggt gaagaaattg tcgacctttc tcttgtctgt ttgtcttttg ttaaagaagc    60

tatgcttcgt tttaataatc ttattgtcca ttttgttgtg ttatgacatt ttggctgctc   120

attatgttat gtgggaagtt agtgttcaaa tgttttgtgt cggtattgtt cttctcatcg   180

ctgttttgtt gggatcgtag aaatgtgacc ttcggacagt aa                      222

<210>46

<211>21

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>46

atgggaggtg gtggtcgcat g                                              21

<210>47

<211>21

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>47

ttaatacttg ttccggtacc a                                              21

<210>48

<211>24

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>48

atgggtgctg gtggaagaat aatg                                           24

<210>49

<211>33

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>49

tcataactta ttgaagtaat agtagacacc ttt                                 33

<210>50

<211>21

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>50

tcataactta ttgttgtaat a                                              21

<210>51

<211>17

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>51

gcaatccctc cccattg                                                   17

<210>52

<211>27

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>52

tcacaattta tcataccaat aaacacc                                        27

<210>53

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>53

atacaaaagc ttagagagag agattctgcg ga                                  32

<210>54

<211>33

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>54

attcaatgca tgcaacataa tgagcagcca aaa                                 33

<210>55

<211>33

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>55

attcaataag cttatgggtg caggtggaag aat                                 33

<210>56

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>56

atacaagcat gctcataact tattgttgta cc                                  32

<210>57

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>57

aagcaatggg gtgggatggc tttcttcaga tctcccaccg                          40

<210>58

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>58

cggtgggaga tctgaagaaa gccatcccac cccattgctt                          40

<210>59

<211>26

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>59

gtcgacatac ttgttccggt accaga                                         26

<210>60

<211>39

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>60

cgattgcttt cttcagatct cccaccgaga aaggcggtt                           39

<210>61

<211>39

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>61

aaccgccttt ctcggtggga gatctgaaga aagcaatcc                           39

<210>62

<211>26

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>62

gtcgactaac ttattgttgt aatagt                                         26

<210>63

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>63

gggattgctt tccttagatc tcccaccgag aaaggcggtt                          40

<210>64

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>64

aaccgccttt ctcggtggga gatctaagga aagcaatccc                          40

<210>65

<211>26

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>65

gtcgactaac ttattgttgt aatagt                                         26

<210>66

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>66

aaccgccttt ctcggtggga gatctgaaga aagcaatccc                          40

<210>67

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>67

gggattgctt tcttcagatc tcccaccgag aaaggcggtt                          40

<210>68

<211>26

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>68

gtcgactcat aacttattgt tgtaat                                         26

<210>69

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>69

cggtgggaga tctgaagaaa gcaatccctc cccattgctt                          40

<210>70

<211>40

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>70

aagcaatggg gagggattgc tttcttcaga tctcccaccg                          40

<210>71

<211>26

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>71

gtcgaccaat ttatgatacc aataaa                                         26

<210>72

<211>35

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>72

atacaaaagc ttataatggg aggtggtggt cgcat                               35

<210>73

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>73

atacaaggat ccttaatact tgttccggta cc                                  32

<210>74

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>74

atacaagcgg ccgcagcgta atctggaaca tcgt                                34

<210>75

<211>35

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>75

atacaaaagc ttataatggg tgctggtgga agaat                               35

<210>76

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>76

atacaaggat cctcataact tattgttgta at                                  32

<210>77

<211>35

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>77

atacaaaagc ttataatgta cccatacgat gttcc                               35

<210>78

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>78

atgagagctc gtttaaacga ttttaatgtt tagc                                34

<210>79

<211>30

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>79

atgagaattc ggccggccaa tagtctcgac                                     30

<210>80

<211>31

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>80

tcatgaggcg cgccaaagca catacttatc g                                   31

<210>81

<211>33

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>81

atgagcatgc aagcttcttc gcctggagga gag                                 33

<210>82

<211>35

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>82

agctatgtac ccatacgatg ttccagatta cgctg                               35

<210>83

<211>35

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>83

tcgacagcgt aatctggaac atcgtatggg tacat                               35

<210>84

<211>47

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>84

gatccatgta cccaatacga tgttccagat tacgctctcg aggagct                  47

<210>85

<211>37

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>85

ctcgagagcg taatctggaa catcgtatgg gtacatg                             37

<210>86

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>86

atgaggcgcg ccctttctct gacttttaac atcc                                34

<210>87

<211>36

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>87

actggcatgc gtattgagat tgttttataa tatatg                              36

<210>88

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>88

atacaaaagc ttatgggagg tggtggtcgc at                                  32

<210>89

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>89

atacaaggat ccatacttgt tccggtacca ga                                  32

<210>90

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>90

atacaaaagc ttatgggtgc tggtggaaga at                                  32

<210>91

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>91

atacaaggat cctaacttat tgttgtaata gt                                  32

<210>92

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>92

atacaagtcg acatgggagg tggtggtcgc at                                  32

<210>93

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>93

atacaaggat ccatacttgt tccggtacca ga                                  32

<210>94

<211>41

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>94

ataaccagca acaacagtga gagcagccac cttaagcgag c                        41

<210>95

<211>41

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>95

gctcgcttaa ggtggctgct ctcactgttg ttgctggtta t                        41

<210>96

<211>41

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>96

ttcttcctca gcctctctct tacctagctt ggcctctcta t                        41

<210>97

<211>41

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>97

atagagaggc caagctaggt aagagagagg ctgaggaaga  a                         41

<210>98

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>98

caattgtcta gattaatact tgttccggta ccag                                  34

<210>99

<211>26

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>99

aagcttacca tgggaggtgg tggtcg                                           26

<210>100

<211>18

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>100

gaaacagcta tgaccatg                                                    18

<210>101

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>101

caattgtcta gatcataact tattgttgta atag                                  34

<210>102

<211>29

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>102

aagcttacca tgggtgctgg tggaagaat                                        29

<210>103

<211>35

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>103

caattgtcta gatcacaatt tatgatacca ataaa                                 35

<210>104

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>104

atacaaggat ccaaatggga ggtggtggtc gcat                                  34

<210>105

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>105

atacaaggat ccaaatgggt gctggtggaa gaat                                  34

<210>106

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>106

aggatcccta ccatgggtgc aggtggtcgg at                                    32

<210>107

<211>29

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>107

tctagattac attttatggt accagtaaa                                        29

<210>108

<211>31

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>108

agatctctac catgggtgcc cacggccatg g                                     31

<210>109

<211>49

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>109

agcttctcga gaccatggcg tacccgtacg acgtgcccga ctacgccag                  49

<210>110

<211>49

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>110

gatcctggcg tagtcgggca cgtcgtacgg gtacgccatg gtctcgaga                  49

<210>111

<211>31

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>111

atcctcgaga gagattctgc ggaggagctt c                                     31

<210>112

<211>34

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>112

atcggatcca tggttctgca gaaaaccaaa agca                                  34

<210>113

<211>32

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>113

atctctagat gaggatgatg gtgaagaaat tg                                    32

<210>114

<211>30

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>114

atcaagctta ctgtccgaag gtcacatttc                                       30

<210>115

<211>21

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>115

ggaatgcatg tacatcgagc c                                                21

<210>116

<211>21

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

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ggaacttgtg ttggcatggt g                                                21

<210>117

<211>20

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<221>misc_feature

<222>6，9

<223>n＝A，T，C或G

<400>117

tggccngtnt aytggttytg                                                  20

<210>118

<211>20

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<221>misc_feature

<222>6

<223>n＝A，T，C或G

<400>118

tcyttngcyt cyctccacat                                                  20

<210>119

<211>21

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>119

atgggtgctg gtggtcggat g                                                21

<210>120

<211>21

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>120

gaacacgctt acacctagga c                                                21

<210>121

<211>20

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>121

atcaatccac tggtattcac                                                  20

<210>122

<211>18

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>122

gtcctaggtg taagcgtg                                                    18

<210>123

<211>29

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>123

aagcttacca tgggtgccca cggccatgg                                        29

<210>124

<211>31

<212>DNA

<213>人造序列

<220>

<223>引物

<400>124

ggcgcgccac catgggtgcc cacggccatg g                                     31

<210>125

<211>383

<212>PRT

<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)

<400>125

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Thr Lys Arg Val Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Ser

            20                  25                  30

Val Gly Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Ile Ser Asp Ile Ile Ile Ala Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ala Cys Gln Gly Cys Val

                85                  90                  95

Leu Thr Gly Ile Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Ile Phe His Ser

        115                 120                 125

Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

145                 150                 155                 160

Gln Lys Ser Ala Ile Lys Trp Tyr Gly Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Leu

                165                 170                 175

Gly Arg Ile Met Met Leu Thr Val Gln Phe Val Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala Cys

        195                 200                 205

His Phe Phe Pro Asn Ala Pro Ile Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

Ile Tyr Leu Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Phe Gly Leu Tyr

225                 230                 235                 240

Arg Tyr Ala Ala Ala Gln Gly Met Ala Ser Met Ile Cys Leu Tyr Gly

                245                 250                 255

Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Ala Phe Leu Val Leu Ile Thr Tyr Leu

            260                 265                 270

Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp Asp

        275                 280                 285

Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu

    290                 295                 300

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

Phe Ser Thr Met Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

                325                 330                 335

Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Pro Trp Tyr

            340                 345                 350

Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

Arg Glu Gly Asp Lys Lys Gly Val Tyr Trp Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>126

<211>384

<212>PRT

<213>甘蓝型油菜(Brassica napus)

<400>126

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Gln Val Ser Pro Pro Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Asp Thr Ile Lys Arg Val Pro Cys Glu Thr Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Gly Glu Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Ile Trp Asp Ile Ile Ile Ala Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Thr Tyr Phe Pro Leu Leu Pro His Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Tyr Phe Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ala Cys Gln Gly Cys Val

                85                  90                  95

Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Ile Phe His Ser

        115                 120                 125

Phe Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

145                 150                 155                 160

Lys Lys Ser Asp Ile Lys Trp Tyr Gly Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Leu

                165                 170                 175

Gly Arg Thr Val Met Leu Thr Val Gln Phe Thr Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Cys His Phe His Pro Asn Ala Pro Ile Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Phe Arg Tyr Ala Ala Ala Gln Gly Val Ala Ser Met Val Cys Phe Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Gly Leu Leu Val Leu Ile Thr Tyr

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp

        275                 280                 285

Asp Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Glu Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Pro Val

            340                 345                 350

Val Lys Ala Met Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

Asp Arg Gln Gly Glu Lys Lys Gly Val Phe Trp Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>127

<211>383

<212>PRT

<213>大豆(Glycine max)

<400>127

Met Gly Ala Gly Gly Arg Thr Asp Val Pro Pro Ala Asn Arg Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Val Asp Pro Leu Lys Arg Val Pro Phe Glu Lys Pro Gln Phe Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Gln Ile Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Val Leu Arg Ser Phe Ser Tyr Val Val Tyr Asp Leu Thr Ile Ala Phe

    50                  55                  60

Cys Leu Tyr Tyr Val Ala Thr His Tyr Phe His Leu Leu Pro Gly Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Phe Arg Gly Met Ala Ile Tyr Trp Ala Val Gln Gly Cys Ile

                85                  90                  95

Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Asp Tyr Gln Leu Leu Asp Asp Ile Val Gly Leu Ile Leu His Ser

        115                 120                 125

Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

145                 150                 155                 160

Gln Lys Ser Cys Ile Lys Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro

                165                 170                 175

Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Val Thr Leu Thr Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Ala Leu Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys

        195                 200                 205

His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Tyr Ser Asp Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Val Leu Ala Val Val Tyr Gly Leu Phe

225                 230                 235                 240

Arg Leu Ala Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Val Cys Val Tyr Gly

                245                 250                 255

Val Pro Leu Leu Val Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Phe Leu

            260                 265                 270

Gln His Thr His Pro Ala Leu Pro His Tyr Thr Ser Ser Glu Trp Asp

        275                 280                 285

Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu

    290                 295                 300

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His Leu

305                 310                 315                 320

Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

                325                 330                 335

Lys Pro Ile Leu Gly Glu Tyr Tyr Arg Phe Asp Glu Thr Pro Phe Val

            340                 345                 350

Lys Ala Met Trp Arg Glu Ala Arg Glu Cys Ile Tyr Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

Gln Ser Thr Glu Ser Lys Gly Val Phe Trp Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>128

<211>383

<212>PRT

<213>栽培芝麻(Sesamum indicum)

<400>128

Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Ser Asp Pro Thr Thr Lys Asp Glu Gln

 1               5                  10                  15

Lys Lys Asn Pro Leu Gln Arg Val Pro Tyr Ala Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Leu Gly Asp Ile Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Glu Arg Ser

        35                  40                  45

Val Ser Arg Ser Phe Ser Tyr Val Val Tyr Asp Leu Val Ile Val Phe

    50                  55                  60

Leu Leu Tyr Tyr Ile Ala Thr Ser Tyr Phe His Leu Leu Pro Ser Pro

65                  70                  75                  80

Tyr Cys Tyr Leu Ala Trp Pro Ile Tyr Trp Ala Val Gln Gly Cys Val

                85                  90                  95

Cys Thr Gly Ile Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe

            100                 105                 110

Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Ile Leu His Ser

        115                 120                 125

Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

    130                 135                 140

His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

145                 150                 155                 160

Pro Lys Ser Arg Val Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Leu

                165                 170                 175

Gly Arg Val Ile Thr Leu Val Val Thr Leu Thr Leu Gly Trp Pro Leu

            180                 185                 190

Tyr Leu Leu Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asn Arg Phe Ala Cys

        195                 200                 205

His Phe Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Leu Gln

    210                 215                 220

Ile Phe Ile Ser Asp Ala Gly Ile Ile Ala Ala Val Cys Val Leu Tyr

225                 230                 235                 240

Arg Val Ala Leu Val Lys Gly Leu Ala Trp Leu Val Cys Val Tyr Gly

                245                 250                 255

Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Phe Leu

            260                 265                 270

Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp Asp

        275                 280                 285

Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Val Leu

    290                 295                 300

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Thr His His Leu

305                 310                 315                 320

Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

                325                 330                 335

Lys Pro Ile Leu Gly Gln Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Pro Phe Tyr

            340                 345                 350

Lys Ala Met Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro Asp

        355                 360                 365

Glu Ser Thr Pro Asp Lys Gly Val Phe Trp Tyr Lys Asn Lys Phe

    370                 375                 380

<210>129

<211>1200

<212>DNA

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1197)

<400>129

atg gct tcc tcc tac cca tac gat gtt cca gat tac gct gga ggt ggt     48

Met Ala Ser Ser Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Gly Gly Gly

 1               5                  10                  15

ggt agg atg tct act gtc ata acc agc aac aac agt gag aag aaa gga     96

Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser Glu Lys Lys Gly

            20                  25                  30

gga agc agt cac ctt aag agg gct cca cac act aag cct cct ttc aca    144

Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys Pro Pro Phe Thr

        35                  40                  45

ctt ggt gac ctc aag aga gcc atc cca ccc cat tgc ttt gaa agg tct    192

Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Glu Arg Ser

    50                  55                  60

ttt gtg aga tca ttc tcc tat gtt gcc tat gat gtc tgc tta agt ttt    240

Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val Cys Leu Ser Phe

65                  70                  75                  80

ctt ttc tac tct atc gcc acc aac ttc ttc cct tac atc tct tct cca    288

Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr Ile Ser Ser Pro

                85                  90                  95

ctc tct tat gtc gct tgg ctg gtt tac tgg ctc ttc caa ggc tgc att    336

Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe Gln Gly Cys Ile

            100                 105                 110

ctc act ggt ctt tgg gtc atc ggc cat gaa tgt ggc cat cat gct ttt    384

Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

        115                 120                 125

agt gag tat cag ctg gct gat gac att gtt ggc cta att gtc cat tct    432

Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu Ile Val His Ser

    130                 135                 140

gca ctt ctg gtt cca tac ttc tca tgg aaa tat agc cat aga agg cac    480

Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

145                 150                 155                 160

cat tct aac ata gga tct ctc gag agg gac gaa gtg ttc gtc cca aaa    528

His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

                165                 170                 175

tca aag tct aaa att tca tgg tat tct aag tac tta aac aac cct cca    576

Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro

            180                 185                 190

ggt agg gtt ttg aca ctt gct gcc act ctt ctc ctt ggc tgg cct tta    624

Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu Gly Trp Pro Leu

        195                 200                 205

tac tta gct ttc aat gtc tct ggt aga cct tac gat agg ttt gct tgc    672

Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys

    210                 215                 220

cat tat gat ccc tat ggc cca ata ttt tcc gaa aga gaa agg ctt cag    720

His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg Glu Arg Leu Gln

225                 230                 235                 240

atc tac att gct gac ctc gga atc ttt gcc aca act ttt gtg ctt tat    768

Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr Phe Val Leu Tyr

                245                 250                 255

cag gct aca atg gca aaa ggg ttg gct tgg gta atg agg atc tat ggg    816

Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met Arg Ile Tyr Gly

            260                 265                 270

gtg cca ttg ctt att gtt aac tgt ttc ctt gtt atg atc aca tac ttg    864

Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met Ile Thr Tyr Leu

        275                 280                 285

cag cac act cac cca gct att cca agg tat ggc tca tct gaa tgg gat    912

Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser Ser Glu Trp Asp

    290                 295                 300

tgg ctc agg gga gca atg gtg act gtc gat aga gat tat ggg gtg ttg    960

Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Val Leu

305                 310                 315                 320

aac aag gta ttc cat aac att gca gac act cat gta gct cat cat ctc   1008

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val Ala His His Leu

                325                 330                 335

ttt gct aca gtg cca cat tac cat gca atg gag gcc act aaa gca atc   1056

Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

            340                 345                 350

aag cct ata atg gga gag tat tac agg tat gat ggt acc cca ttt tac   1104

Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Thr Pro Phe Tyr

        355                 360                 365

aag gca ttg tgg agg gag gca aag gag tgc ttg ttc gtc gag cca gat   1152

Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe Val Glu Pro Asp

    370                 375                 380

gaa gga gct cct aca caa ggc gtt ttc tgg tac agg aac aag tat       1197

Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg Asn Lys Tyr

385                 390                 395

taa                                                               1200

<210>130

<211>1125

<212>DNA

<213>角力还阳参(Crepis palaestina)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1122)

<400>130

atg gct tcc tcc gga aga gga aga act tct gag aag tct gtt atg gag     48

Met Ala Ser Ser Gly Arg Gly Arg Thr Ser Glu Lys Ser Val Met Glu

 1               5                  10                  15

aga gtg tct gtg gac cca gtg act ttc tct ctt tct gaa ctt aag caa     96

Arg Val Ser Val Asp Pro Val Thr Phe Ser Leu Ser Glu Leu Lys Gln

            20                  25                  30

gct att cca cct cat tgc ttc caa aga tct gtg att aga tct tct tat    144

Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

        35                  40                  45

tat gtg gtg caa gac ctt att att gct tat att ttc tat ttc ctt gct    192

Tyr Val Val Gln Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

    50                  55                  60

aac act tat att cca act ctt cca act tct ctt gct tat ctt gct tgg    240

Asn Thr Tyr Ile Pro Thr Leu Pro Thr Ser Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

cca gtg tat tgg ttt tgc caa gct tct gtt ctt act gga ctt tgg att    288

Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Val Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                85                  90                  95

ctt gga cat gaa tgc gga cat cat gct ttc tct aac tat act tgg ttc    336

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Asn Tyr Thr Trp Phe

            100                 105                 110

gat gac act gtg ggt ttc att ctt cat tct ttc ctt ttg act cca tat    384

Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

ttc tct tgg aag ttc tct cat aga aac cat cat tct aac act tct tct    432

Phe Ser Trp Lys Phe Ser His Arg Asn His His Ser Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

att gac sac gac gag gtg tat att cca aag tct aag tct aag ctt gct    480

Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

aga atc tat aag ctt ttg aac aat cca cct gga aga ctt ttg gtg ctt    528

Arg Ile Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Leu

                165                 170                 175

att att atg ttc act ctt gga ttc cca ctt tat ctt ttg act aac att    576

Ile Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

tct gga aag aag tat gac aga ttc gct aac cat ttc gat cca atg tct    624

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

cca att ttc aag gag aga gag aga ttc caa gtg ttt ctt tct gat ctt    672

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Phe Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

gga ctt ttg gct gtg ttc tat gga att aag gtt gct gtt gct aac aag    720

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Asn Lys

225                 230                 235                 240

gga gct gca tgg gtt gct tgc atg tat gga gtt cca gtt ctt gga gtg    768

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly Val

                245                 250                 255

ttc act ttc ttc gac gtg att act ttc ctt cat cat act cat caa tct    816

Phe Thr Phe Phe Asp Val Ile Thr Phe Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

tct cca cat tat gat tct act gaa tgg aac tgg att aga gga gct ctt    864

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

tct gct att gat aga gac ttc gga ttc ctt aac tct gtg ttc cat gac    912

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

gtg act cat act cat gtg atg cat cat ttg ttc tct tat att cca cat    960

Val Thr His Thr His Val Met His His Leu Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

tat cat gct aag gag gct aga gat gct att aag cca att ctt gga gac   1008

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp

                325                 330                 335

ttc tat atg att gat aga act cca att ctt aag gct atg tgg aga gaa   1056

Phe Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Met Trp Arg Glu

            340                 345                 350

gga aga gag tgc atg tat att gaa cca gac tct aag ctt aag gga gtg   1104

Gly Arg Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Leu Lys Gly Val

        355                 360                 365

tat tgg tat cat aag ctt taa                                       1125

Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370

<210>131

<211>1137

<212>DNA

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)B

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1134)

<400>131

atg gct tcc tcc tat gac gac aga atg aag gac cat gat atg gat gaa     48

Met Ala Ser Ser Tyr Asp Asp Arg Met Lys Asp His Asp Met Asp Glu

 1               5                  10                  15

aga gca cca att gac cct gct cct ttt tct ctt tct gat ctt aag aag     96

Arg Ala Pro Ile Asp Pro Ala Pro Phe Ser Leu Ser Asp Leu Lys Lys

            20                  25                  30

gct att cca gct cat tgc ttt aga aga tct gct gtt tgg tct tct tgc    144

Ala Ile Pro Ala His Cys Phe Arg Arg Ser Ala Val Trp Ser Ser Cys

        35                  40                  45

tat gtg gtg caa gac ctt att att act ttc ctt ttg tat act gtg gct    192

Tyr Val Val Gln Asp Leu Ile Ile Thr Phe Leu Leu Tyr Thr Val Ala

    50                  55                  60

aac act tat att cca cat ctt cca cct cca ctt gtt tat ctt gct tgg    240

Asn Thr Tyr Ile Pro His Leu Pro Pro Pro Leu Val Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

cca gtg tat tgg ttc tgc caa tct tgc att ctt act gga ctt tgg gtt    288

Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ser Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val

                85                  90                  95

ctt gga cat gaa tgc gga cat cat gct ttc tct gag tat caa tgg att    336

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp Ile

            100                 105                 110

gac aac gct gtg gga ttc gtg ctt cat tct gct ctt ttg act cca tat    384

Asp Asn Ala Val Gly Phe Val Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

ttc tct tgg aag tat tct cat aga aag cat cat gct aac act aac tct    432

Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Lys His His Ala Asn Thr Asn Ser

    130                 135                 140

ctt gag aac gag gag gtg tat att cca aga act caa tct caa ctt aga    480

Leu Glu Asn Glu Glu Val Tyr Ile Pro Arg Thr Gln Ser Gln Leu Arg

145                 150                 155                 160

act tat tct act tat gag ttc ctt gac aac act cca gga aga att ctt    528

Thr Tyr Ser Thr Tyr Glu Phe Leu Asp Asn Thr Pro Gly Arg Ile Leu

                165                 170                 175

att ctt gtg att atg ctt act ctt gga ttc cca ctt tat ctt ttg act    576

Ile Leu Val Ile Met Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr

            180                 185                 190

aac gtg tct gga aag aag tat gac aga ttc act aac cat ttc gac cca    624

Asn Val Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Thr Asn His Phe Asp Pro

        195                 200                 205

ctt tct cca att ttc act gag aga gag aga att caa gtt gct ctt tct    672

Leu Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Ala Leu Ser

    210                 215                 220

gat ctt gga att gtg gct gtg ttc tat gga ctt aag ttc ctt gtt caa    720

Asp Leu Gly Ile Val Ala Val Phe Tyr Gly Leu Lys Phe Leu Val Gln

225                 230                 235                 240

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Thr Lys Gly Phe Gly Trp Val Met Cys Met Tyr Gly Val Pro Val Ile

                245                 250                 255

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Gly Leu Asn Ser Phe Ile Ile Val Ile Thr Tyr Leu His His Thr His

            260                 265                 270

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Leu Ser Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Lys Gly

        275                 280                 285

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    290                 295                 300

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305                 310                 315                 320

cca cat tat cat gct aag gag gct tct gag gct att aag cca att ctt   1008

Pro His Tyr His Ala Lys Glu Ala Ser Glu Ala Ile Lys Pro Ile Leu

                325                 330                 335

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Gly Asp Tyr Arg Met Ile Asp Arg Thr Pro Phe Phe Lys Ala Met Trp

            340                 345                 350

aga gag gct aag gag tgc atc tat att gaa caa gat gct gac tct aag   1104

Arg Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Gln Asp Ala Asp Ser Lys

        355                 360                 365

cat aag gga act tat tgg tat cat aag atg taa                       1137

His Lys Gly Thr Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>132

<211>1125

<212>DNA

<213>粗糙还阳参(Crepis biennis)

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1122)

<400>132

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 1               5                  10                  15

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Arg Val Ser Val Asp Pro Val Pro Phe Ser Leu Ser Asp Leu Lys Gln

            20                  25                  30

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Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

        35                  40                  45

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Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

    50                  55                  60

gac aag tat att cca att ctt cca gct cca ctt gct tat ctt gct tgg    240

Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

cca ctt tat tgg ttc tgt caa gct tct att ctt act gga ctt tgg att    288

Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                85                  90                  95

ctt gga cat gag tgt gga cat cat gct ttc tct gaa cat caa tgg gtt    336

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu His Gln Trp Val

            100                 105                 110

gat gac act gtg ggt ttc atg gtg cat tct ttc ctt ttg act cca tat    384

Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

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Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

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Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

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Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Met

                165                 170                 175

gtt att atg ttc act ctt gga ttc cca ctt tat ctt ttg act aac att    576

Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

tct gga aag aag tat gac aga ttt gct aac cat ttc gat cca atg tct    624

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

cca att ttc aag gag aga gag aga ttc caa gtt ctt ttg tct gat ctt    672

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Leu Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

gga ctt ttg gct gtg ttc tat gga att aag gtt gct gtt gct aag aaa    720

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Lys Lys

225                 230                 235                 240

gga gct gca tgg gtt gct tgt atg tat gga gtt cca atg ctt gga gtg    768

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Met Leu Gly Val

                245                 250                 255

ttc act ctt ttc gac att att act tat ctt cat cat act cat caa tct    816

Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

tct cca cat tat gat tct act gag tgg aac tgg att aga ggt gca ttg    864

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

tct gct att gat aga gac ttc ggt ttc atg aac tct gtg ttc cat gac    912

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

gtg act cat act cat gtg atg cat cat atg ttc tct tat att cca cat    960

Val Thr His Thr His Val Met His His Met Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

tat cat gct aag gag gct aga gac gct att aac act att att gga gac   1008

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Asn Thr Ile Ile Gly Asp

                325                 330                 335

tat tat atg att gat aga act cca att ctt aag gct ctt tgg aga gag   1056

Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Leu Trp Arg Glu

            340                 345                 350

gct aag gag tgt atg tat att gaa cca gac tct aag aga aag gga gtg   1104

Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Arg Lys Gly Val

        355                 360                 365

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Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370

<210>133

<211>1155

<212>DNA

<213>Lesquerella gracilis B

<220>

<221>CDS

<222>(1)...(1152)

<400>133

atg gct tcc tcc gga aga att atg gtg act cca tct tct aag aag tct     48

Met Ala Ser Ser Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

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Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

gtg aag gac ctt aag aag gct att cca caa cat tgt ttc caa aga tct    144

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

att cca aga tct ttc tct tat ctt ttg act gac att act ctt gtg tct    192

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

tgt ttc tat tat gtg gct act aac tat ttc tct ctt ttg cca caa cca    240

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

ctt tct act tat ctt gct tgg cca ctt tat tgg gtg tgt caa gga tgt    288

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

gtt ctt act gga att tgg gtt ctt gga cat gag tgt gga cat cat gct    336

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

ttc tct gat tat caa tgg ctt gat gac act gtg ggt ttc att ttc cat    384

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

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Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

cat cat tct aac aac gga tct ctt gag aag gac gaa gtt ttt gtt cca    480

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

cct aag aaa gct gca gtg aag tgg tat gtg aag tat ctt aac aac cca    528

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

ctt gga aga att ctt gtg ctt act gtg aga ttc att ctt gga tgg cca    576

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

ctt tat ctt gct ttc aac gtt tct gga aga cca tat gat gga ttt gct    624

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

tct cat ttc ttc cca cat gct cca att ttc aag gac aga gag aga ctt    672

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

caa atc tat att tct gat gct gga att ctt gct gtg tgt tat gga ctt    720

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

tat aga tat gct gca tct caa gga ctt act gct atg att tgt gtg tat    768

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

gga gtg cca ctt ttg att gtg aac ttc ttc ctt gtg ctt gtg act ttc    816

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

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Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

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Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

ctt aac aag gtg ttc cat aac att act gat act cat gtt gct cat cat    960

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

ctt ttc gct act att cca cat tat aac gct atg gaa gct act gag gct   1008

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

att aag cca att ctt gga gac tat tat cat ttt gat gga act cct tgg   1056

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

tat gtg gct atg tat aga gag gct aag gag tgt ctt tat gtt gaa cca   1104

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

gat act gag aga gga aag aag gga gtg tat tat tat aac aac aag ctt   1152

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

taa                                                               1155

<210>134

<211>399

<212>PRT

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<400>134

Met Ala Ser Ser Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Gly Gly Gly

 1               5                  10                  15

Gly Arg Met Ser Thr Val Ile Thr Ser Asn Asn Ser Glu Lys Lys Gly

            20                  25                  30

Gly Ser Ser His Leu Lys Arg Ala Pro His Thr Lys Pro Pro Phe Thr

        35                  40                  45

Leu Gly Asp Leu Lys Arg Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Glu Arg Ser

    50                  55                  60

Phe Val Arg Ser Phe Ser Tyr Val Ala Tyr Asp Val Cys Leu Ser Phe

65                  70                  75                  80

Leu Phe Tyr Ser Ile Ala Thr Asn Phe Phe Pro Tyr Ile Ser Ser Pro

                85                  90                  95

Leu Ser Tyr Val Ala Trp Leu Val Tyr Trp Leu Phe Gln Gly Cys Ile

            100                 105                 110

Leu Thr Gly Leu Trp Val Ile Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe

        115                 120                 125

Ser Glu Tyr Gln Leu Ala Asp Asp Ile Val Gly Leu Ile Val His Ser

    130                 135                 140

Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His

145                 150                 155                 160

His Ser Asn Ile Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys

                165                 170                 175

Ser Lys Ser Lys Ile Ser Trp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro

            180                 185                 190

Gly Arg Val Leu Thr Leu Ala Ala Thr Leu Leu Leu Gly Trp Pro Leu

        195                 200                 205

Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys

    210                 215                 220

His Tyr Asp Pro Tyr Gly Pro Ile Phe Ser Glu Arg Glu Arg Leu Gln

225                 230                 235                 240

Ile Tyr Ile Ala Asp Leu Gly Ile Phe Ala Thr Thr Phe Val Leu Tyr

                245                 250                 255

Gln Ala Thr Met Ala Lys Gly Leu Ala Trp Val Met Arg Ile Tyr Gly

            260                 265                 270

Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Met Ile Thr Tyr Leu

        275                 280                 285

Gln His Thr His Pro Ala Ile Pro Arg Tyr Gly Ser Ser Glu Trp Asp

    290                 295                 300

Trp Leu Arg Gly Ala Met Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Val Leu

305                 310                 315                 320

Asn Lys Val Phe His Asn Ile Ala Asp Thr His Val Ala His His Leu

                325                 330                 335

Phe Ala Thr Val Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile

            340                 345                 350

Lys Pro Ile Met Gly Glu Tyr Tyr Arg Tyr Asp Gly Thr Pro Phe Tyr

        355                 360                 365

Lys Ala Leu Trp Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Phe Val Glu Pro Asp

    370                 375                 380

Glu Gly Ala Pro Thr Gln Gly Val Phe Trp Tyr Arg Asn Lys Tyr

    385                 390                 395

<210>135

<211>374

<212>PRT

<213>角力还阳参(Crepis palaestina)

<400>135

Met Ala Ser Ser Gly Arg Gly Arg Thr Ser Glu Lys Ser Val Met Glu

 1               5                  10                  15

Arg Val Ser Val Asp Pro Val Thr Phe Ser Leu Ser Glu Leu Lys Gln

            20                  25                  30

Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

        35                  40                  45

Tyr Val Val Gln Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

    50                  55                  60

Asn Thr Tyr Ile Pro Thr Leu Pro Thr Ser Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Val Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                85                  90                  95

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Asn Tyr Thr Trp Phe

            100                 105                 110

Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Leu His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

Phe Ser Trp Lys Phe Ser His Arg Asn His His Ser Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

Arg Ile Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Leu

                165                 170                 175

Ile Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Phe Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Asn Lys

225                 230                 235                 240

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Val Leu Gly Val

                245                 250                 255

Phe Thr Phe Phe Asp Val Ile Thr Phe Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Leu Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

Val Thr His Thr His Val Met His His Leu Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp

                325                 330                 335

Phe Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Met Trp Arg Glu

            340                 345                 350

Gly Arg Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Leu Lys Gly Val

        355                 360                 365

Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370

<210>136

<211>378

<212>PRT

<213>琉璃菊(Stokesia laevis)B

<400>136

Met Ala Ser Ser Tyr Asp Asp Arg Met Lys Asp His Asp Met Asp Glu

 1               5                  10                  15

Arg Ala Pro Ile Asp Pro Ala Pro Phe Ser Leu Ser Asp Leu Lys Lys

            20                  25                  30

Ala Ile Pro Ala His Cys Phe Arg Arg Ser Ala Val Trp Ser Ser Cys

        35                  40                  45

Tyr Val Val Gln Asp Leu Ile Ile Thr Phe Leu Leu Tyr Thr Val Ala

    50                  55                  60

Asn Thr Tyr Ile Pro His Leu Pro Pro Pro Leu Val Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

Pro Val Tyr Trp Phe Cys Gln Ser Cys Ile Leu Thr Gly Leu Trp Val

                85                  90                  95

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu Tyr Gln Trp Ile

            100                 105                 110

Asp Asn Ala Val Gly Phe Val Leu His Ser Ala Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Lys His His Ala Asn Thr Asn Ser

    130                 135                 140

Leu Glu Asn Glu Glu Val Tyr Ile Pro Arg Thr Gln Ser Gln Leu Arg

145                 150                 155                 160

Thr Tyr Ser Thr Tyr Glu Phe Leu Asp Asn Thr Pro Gly Arg Ile Leu

                165                 170                 175

Ile Leu Val Ile Met Leu Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr

            180                 185                 190

Asn Val Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Thr Asn His Phe Asp Pro

        195                 200                 205

Leu Ser Pro Ile Phe Thr Glu Arg Glu Arg Ile Gln Val Ala Leu Ser

    210                 215                 220

Asp Leu Gly Ile Val Ala Val Phe Tyr Gly Leu Lys Phe Leu Val Gln

225                 230                 235                 240

Thr Lys Gly Phe Gly Trp Val Met Cys Met Tyr Gly Val Pro Val Ile

                245                 250                 255

Gly Leu Asn Ser Phe Ile Ile Val Ile Thr Tyr Leu His His Thr His

            260                 265                 270

Leu Ser Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Lys Gly

        275                 280                 285

Ala Leu Thr Thr Ile Asp Arg Asp Phe Gly Leu Leu Asn Arg Val Phe

    290                 295                 300

His Asp Val Thr His Thr His Val Leu His His Leu Phe Pro Tyr Ile

305                 310                 315                 320

Pro His Tyr His Ala Lys Glu Ala Ser Glu Ala Ile Lys Pro Ile Leu

                325                 330                 335

Gly Asp Tyr Arg Met Ile Asp Arg Thr Pro Phe Phe Lys Ala Met Trp

            340                 345                 350

Arg Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Ile Glu Gln Asp Ala Asp Ser Lys

        355                 360                 365

His Lys Gly Thr Tyr Trp Tyr His Lys Met

    370                 375

<210>137

<211>374

<212>PRT

<213>粗糙还阳参(Crepis biennis)

<400>137

Met Ala Ser Ser Gly His Ser Arg Thr Ser Lys Lys Ser Val Met Glu

 1               5                  10                  15

Arg Val Ser Val Asp Pro Val Pro Phe Ser Leu Ser Asp Leu Lys Gln

            20                  25                  30

Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Arg Ser Ser Tyr

        35                  40                  45

Tyr Val Val His Asp Leu Ile Ile Ala Tyr Ile Phe Tyr Phe Leu Ala

    50                  55                  60

Asp Lys Tyr Ile Pro Ile Leu Pro Ala Pro Leu Ala Tyr Leu Ala Trp

65                  70                  75                  80

Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Ala Ser Ile Leu Thr Gly Leu Trp Ile

                85                  90                  95

Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Glu His Gln Trp Val

            100                 105                 110

Asp Asp Thr Val Gly Phe Met Val His Ser Phe Leu Leu Thr Pro Tyr

        115                 120                 125

Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Asn His His Ala Asn Thr Ser Ser

    130                 135                 140

Ile Asp Asn Asp Glu Val Tyr Ile Pro Lys Ser Lys Ser Lys Leu Ala

145                 150                 155                 160

Leu Thr Tyr Lys Leu Leu Asn Asn Pro Pro Gly Arg Leu Leu Val Met

                165                 170                 175

Val Ile Met Phe Thr Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Thr Asn Ile

            180                 185                 190

Ser Gly Lys Lys Tyr Asp Arg Phe Ala Asn His Phe Asp Pro Met Ser

        195                 200                 205

Pro Ile Phe Lys Glu Arg Glu Arg Phe Gln Val Leu Leu Ser Asp Leu

    210                 215                 220

Gly Leu Leu Ala Val Phe Tyr Gly Ile Lys Val Ala Val Ala Lys Lys

225                 230                 235                 240

Gly Ala Ala Trp Val Ala Cys Met Tyr Gly Val Pro Met Leu Gly Val

                245                 250                 255

Phe Thr Leu Phe Asp Ile Ile Thr Tyr Leu His His Thr His Gln Ser

            260                 265                 270

Ser Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asn Trp Ile Arg Gly Ala Leu

        275                 280                 285

Ser Ala Ile Asp Arg Asp Phe Gly Phe Met Asn Ser Val Phe His Asp

    290                 295                 300

Val Thr His Thr His Val Met His His Met Phe Ser Tyr Ile Pro His

305                 310                 315                 320

Tyr His Ala Lys Glu Ala Arg Asp Ala Ile Asn Thr Ile Ile Gly Asp

                325                 330                 335

Tyr Tyr Met Ile Asp Arg Thr Pro Ile Leu Lys Ala Leu Trp Arg Glu

            340                 345                 350

Ala Lys Glu Cys Met Tyr Ile Glu Pro Asp Ser Lys Arg Lys Gly Val

        355                 360                 365

Tyr Trp Tyr His Lys Leu

    370

<210>138

<211>384

<212>PRT

<213>Lesquerella gracilis B

<400>138

Met Ala Ser Ser Gly Arg Ile Met Val Thr Pro Ser Ser Lys Lys Ser

 1               5                  10                  15

Glu Thr Glu Ala Leu Lys Arg Gly Pro Cys Glu Lys Pro Pro Phe Thr

            20                  25                  30

Val Lys Asp Leu Lys Lys Ala Ile Pro Gln His Cys Phe Gln Arg Ser

        35                  40                  45

Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Leu Thr Asp Ile Thr Leu Val Ser

    50                  55                  60

Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Asn Tyr Phe Ser Leu Leu Pro Gln Pro

65                  70                  75                  80

Leu Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Val Cys Gln Gly Cys

                85                  90                  95

Val Leu Thr Gly Ile Trp Val Leu Gly His Glu Cys Gly His His Ala

            100                 105                 110

Phe Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Phe Ile Phe His

        115                 120                 125

Ser Leu Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg

    130                 135                 140

His His Ser Asn Asn Gly Ser Leu Glu Lys Asp Glu Val Phe Val Pro

145                 150                 155                 160

Pro Lys Lys Ala Ala Val Lys Trp Tyr Val Lys Tyr Leu Asn Asn Pro

                165                 170                 175

Leu Gly Arg Ile Leu Val Leu Thr Val Arg Phe Ile Leu Gly Trp Pro

            180                 185                 190

Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Gly Phe Ala

        195                 200                 205

Ser His Phe Phe Pro His Ala Pro Ile Phe Lys Asp Arg Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Ala Val Cys Tyr Gly Leu

225                 230                 235                 240

Tyr Arg Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Thr Ala Met Ile Cys Val Tyr

                245                 250                 255

Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Phe Phe Leu Val Leu Val Thr Phe

            260                 265                 270

Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp

        275                 280                 285

Glu Trp Ile Arg Gly Ala Leu Val Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile

    290                 295                 300

Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His

305                 310                 315                 320

Leu Phe Ala Thr Ile Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Glu Ala

                325                 330                 335

Ile Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr His Phe Asp Gly Thr Pro Trp

            340                 345                 350

Tyr Val Ala Met Tyr Arg Glu Ala Lys Glu Cys Leu Tyr Val Glu Pro

        355                 360                 365

Asp Thr Glu Arg Gly Lys Lys Gly Val Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Leu

    370                 375                 380

<210>139

<211>9

<212>PRT

<213>人流感病毒

<400>139

Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala

 1               5

<210>140

<211>12

<212>DNA

<213>蓖麻(Ricinus communis)

<400>140

agaaaggagg aa                                                    12

Claims (118)

1.一种转基因植物，其至少含有一种DNA构建物，所述构建物包含：

(a)一种核酸，其编码能有效催化底物转化为C16、C18或C20单不饱和脂肪酸产物的多肽，所述脂肪酸产物选自：

i)

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，其中R₁和R₂都是羟基，R₁和R₂中一个是羟基、另一个是是氢，或者R₁和R₂中一个是酮、另一个是氢，R₃是C2、C4或C6烷基；和

ii)

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，R₃是C2、C4或C6烷基；和

(b)调控元件，其操作性连接于编码所述多肽的所述核酸，其中所述调控元件在所述植物的营养组织中产生表达。

2.如权利要求1所述的植物，其特征在于，第9和第10个碳之间的双键是顺式。

3.如权利要求1所述的植物，其特征在于，第9和第10个碳之间的双键是反式。

4.如权利要求1所述的植物，其特征在于，所述调控元件是5’-调控元件。

5.如权利要求4所述的植物，其特征在于，所述5’-调控元件在根组织中产生表达。

6.如权利要求5所述的植物，相对于缺少所述DNA构建物的相应植物，所述植物根中羟基-脂肪酸的含量显著增加。

7.如权利要求6所述的植物，其特征在于，所述羟基-脂肪酸是蓖麻油酸。

8.如权利要求7所述的植物，其特征在于，所述蓖麻油酸约占所述根的总脂肪酸含量的0.1％-25％。

9.如权利要求5所述的植物，相对于缺少所述DNA构建物的相应植物，所述植物根中环氧-脂肪酸的含量显著增加。

10.如权利要求9所述的植物，其特征在于，所述环氧-脂肪酸是斑鸠菊酸。

11.如权利要求10所述的植物，其特征在于，所述斑鸠菊酸约占所述根的总脂肪酸含量的0.1％-25％。

12.如权利要求4所述的植物，其特征在于，所述5’-调控元件选自CaMV35S启动子、马铃薯核糖体蛋白S27a Ubi3启动子、RB7启动子、苜蓿组蛋白H3.2启动子、IRT2启动子、拟南芥FAD25’-UTR、拟南芥FAD35’-UTR、Ubi35’-UTR、苜蓿组蛋白H3.25’-UTR或CaMV35S 5’-UTR。

13.如权利要求1所述的植物，其特征在于，所述调控元件包含第一个5’-调控元件，其操作性连接于第二个5’-调控元件，其中所述第一个5’-调控元件是Ubi3启动子，所述第二个5’-调控元件选自拟南芥FAD25’-UTR、拟南芥FAD35’-UTR、马铃薯核糖体蛋白S27a 5’-UTR、Ubi35’-UTR或CaMV35S 5’-UTR。

14.如权利要求4所述的植物，其特征在于，所述DNA构建物还包含3’-调控元件。

15.如权利要求14所述的植物，其特征在于，所述3’-调控元件包含Ubi3终止子或E9豌豆终止子。

16.如权利要求14所述的植物，其特征在于，所述5’-调控元件选自拟南芥FAD25’-UTR或拟南芥FAD35’-UTR，所述3’-调控元件选自拟南芥FAD23’-UTR或拟南芥FAD33’-UTR。

17.如权利要求16所述的植物，其特征在于，所述5’-调控元件包含SEQ ID NO：43或44，所述3’-调控元件包含SEQ ID NO：45。

18.如权利要求1所述的植物，其特征在于，所述至少一种DNA构建物还包含操作性连接于编码PDAT或DAGAT多肽的核酸的至少一个调控元件，所述调控元件能在植物营养组织中产生表达。

19.如权利要求1所述的植物，所述植物还包含第二种DNA构建物，所述第二种DNA构建物包含操作性连接于编码PDAT或DAGAT多肽的核酸的至少一个调控元件，所述调控元件能在植物营养组织中产生表达。

20.如权利要求1所述的植物，其特征在于，R₃是C2烷基或C4烷基。

21.如权利要求1所述的植物，其特征在于，所述多肽选自：SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ IDNO：23、SEQ ID NO：24、角力还阳参环加氧酶GenBank_No.CAA76156、SEQ IDNO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137或SEQ ID NO：138。

22.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：37。

23.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：38。

24.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：14。

25.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：15。

26.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：16。

27.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：40。

28.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：41。

29.如权利要求21所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸包含GenBank_登录号CAA76156。

30.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：34。

31.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：35。

32.如权利要求22所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：28。

33.如权利要求23所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：29。

34.如权利要求24所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：2。

35.如权利要求25所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：3。

36.如权利要求26所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：4。

37.如权利要求27所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：31。

38.如权利要求28所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：32。

39.如权利要求30所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：25。

40.如权利要求31所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：26。

41.如权利要求1所述的植物，其特征在于，所述多肽选自：SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和角力还阳参环加氧酶嵌合体。

42.如权利要求41所述的植物，其特征在于，所述多肽是SEQ ID NO：19。

43.如权利要求41所述的植物，其特征在于，所述多肽是SEQ ID NO：20。

44.如权利要求41所述的植物，其特征在于，所述多肽是SEQ ID NO：21。

45.如权利要求41所述的植物，其特征在于，所述多肽是SEQ ID NO：22。

46.如权利要求41所述的植物，其特征在于，所述多肽是SEQ ID NO：23。

47.如权利要求41所述的植物，其特征在于，所述多肽是SEQ ID NO：24。

48.如权利要求42所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：7。

49.如权利要求43所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：8。

50.如权利要求44所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：9。

51.如权利要求45所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：10。

52.如权利要求46所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：11。

53.如权利要求47所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：12。

54.如权利要求1所述的植物，其特征在于，所述植物选自烟草、番茄、大豆、玉米、棉花、水稻、小麦、香蕉、胡萝卜、马铃薯、草莓或草坪草。

55.一种制备转基因植物的方法，所述方法包括将权利要求1所述的构建物引入植物。

56.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述构建物的所述调控元件是5’-调控元件。

57.如权利要求56所述的方法，其特征在于，所述5’-调控元件包含CaMV35S启动子、马铃薯核糖体蛋白S27a Ubi3启动子、RB7启动子、苜蓿组蛋白H3.2启动子、IRT2启动子、拟南芥FAD25’-UTR、拟南芥FAD35’-UTR、Ubi35’-UTR、苜蓿组蛋白H3.25’-UTR和CaMV35S 5’-UTR。

58.如权利要求56所述的方法，其特征在于，所述调控元件包含第一个5’-调控元件，其操作性连接于第二个5’-调控元件，其中所述第一个5’-调控元件是Ubi3启动子，所述第二个5’-调控元件选自拟南芥FAD25’-UTR、拟南芥FAD35’-UTR、马铃薯核糖体蛋白S27a 5’-UTR、Ubi35’-UTR或CaMV35S 5’-UTR。

59.如权利要求56所述的方法，其特征在于，所述DNA构建物还包含3’-调控元件。

60.如权利要求59所述的方法，其特征在于，所述5’-调控元件包含SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：44，所述3’-UTR包含SEQ ID NO：45。

61.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述DNA构建物的所述核酸编码了选自下组的多肽：SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ IDNO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、角力还阳参环加氧酶GenBank_No.CAA76156、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137和SEQ ID NO：138。

62.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：13。

63.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：19。

64.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：20。

65.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：21。

66.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：22。

67.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：23。

68.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：24。

69.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：36。

70.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：37。

71.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：38。

72.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：40。

73.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：41。

74.一种分离核酸，其包含SEQ ID NO：3-12或25-33或129-133中任一项所列的核苷酸序列。

75.如权利要求74所述的分离核酸，其特征在于，所述核苷酸序列是SEQ IDNO：3。

76.如权利要求74所述的分离核酸，其特征在于，所述核苷酸序列是SEQ IDNO：4。

77.如权利要求74所述的分离核酸，其特征在于，所述核苷酸序列是SEQ IDNO：5。

78.如权利要求74所述的分离核酸，其特征在于，所述核苷酸序列是SEQ IDNO：28。

79.一种重组核酸构建物，其包含在植物营养组织中产生表达的至少一个调控元件，所述调控元件操作性连接于具有SEQ ID NO：3-12或25-33或129-133中任一项所列的核苷酸序列的核酸。

80.如权利要求79所述的核酸构建物，其特征在于，所述至少一种调控元件包含具有SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：44所列核苷酸序列的5’-调控元件。

81.如权利要求80所述的核酸构建物，其特征在于，所述构建物还包含具有SEQ ID NO：45所列核苷酸序列的3’-调控元件。

82.一种筛选转基因植物的驱虫活性的方法，所述方法包括在有效测定所述植物是否具有驱虫活性的条件下将权利要求1所述的转基因植物与许多线虫相接触。

83.如权利要求82所述的方法，其特征在于，将所述线虫与所述转基因植物的一条或多条根接触。

84.一种筛选转基因植物的驱虫活性的方法，所述方法包括在有效测定所述植物组织是否具有驱虫活性的条件下将权利要求1所述的转基因植物的组织与许多线虫相接触。

85.如权利要求84所述的方法，其特征在于，所述组织是根组织。

86.一种携带某DNA构建物的转基因植物，所述DNA构建物包含编码操作性连接于调控元件的脂肪酸环加氧酶多肽或脂肪酸羟化酶多肽的核酸，所述调控元件在所述植物的营养组织中能使所述多肽表达。

87.如权利要求86所述的植物，其特征在于，所述多肽包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、角力还阳参环加氧酶(GenBank_No.CAA76156)、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137和SEQ ID NO：138。

88.如权利要求86所述的植物，其特征在于，相对于缺少所述DNA构建物的相应植物，所述植物的根中羟基-脂肪酸含量显著增加。

89.如权利要求88所述的植物，其特征在于，所述羟基-脂肪酸是蓖麻油酸。

90.如权利要求89所述的植物，其特征在于，所述蓖麻油酸约占所述根的总脂肪酸含量的0.1％-25％。

91.如权利要求86所述的植物，其特征在于，相对于缺少所述DNA构建物的相应植物，所述植物的根中环氧-脂肪酸含量显著增加。

92.如权利要求91所述的植物，其特征在于，所述环氧-脂肪酸是斑鸠菊酸。

93.如权利要求92所述的植物，其特征在于，所述斑鸠菊酸约占所述根的总脂肪酸含量的0.1％-25％。

94.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：42。

95.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：134。

96.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：135。

97.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：136。

98.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：137。

99.如权利要求21所述的植物，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：138。

100.如权利要求94所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：33。

101.如权利要求95所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：129。

102.如权利要求96所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：130。

103.如权利要求97所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：131。

104.如权利要求98所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：132。

105.如权利要求99所述的植物，其特征在于，编码所述多肽的所述核酸是SEQID NO：133。

106.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：42。

107.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：134。

108.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：135。

109.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：136。

110.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：137。

111.如权利要求55所述的方法，其特征在于，所述多肽包含SEQ ID NO：138。

112.一种转基因植物，其含有至少一种DNA构建物，所述构建物包含：

a)一种核酸，其编码能有效催化底物转化为C16、C18或C20单不饱和脂肪酸产物的多肽，所述脂肪酸产物选自：

i)

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，其中R₁和R₂都是羟基，R₁和R₂中一个是羟基、另一个是氢；或者R1和R2中一个是酮、另一个是氢，R₃是C2、C4或C6烷基；和

ii)

式中X是氢、CoA、甘油、单酸甘油酯、甘油二酯、ACP、甲基、Na+、磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，R₃是C2、C4或C6烷基；和

(b)调控元件，其操作性连接于编码所述多肽的所述核酸，其中所述调控元件在所述植物种子的至少一种组织中产生表达。

113.如权利要求112所述的植物，其特征在于，所述调控元件是5’-调控元件。

114.如权利要求113所述的植物，其特征在于，相对于缺少所述DNA构建物的相应植物，所述植物种子的至少一种组织中羟基-脂肪酸含量显著增加。

115.如权利要求114所述的植物，其特征在于，所述羟基-脂肪酸是蓖麻油酸。

116.如权利要求113所述的植物，相对于缺少所述DNA构建物的相应植物，所述植物种子的至少一种组织中环氧-脂肪酸含量显著增加。

117.如权利要求116所述的植物，其特征在于，所述环氧-脂肪酸是斑鸠菊酸。

118.一种制备转基因植物的方法，所述方法包括将权利要求112所述的构建物引入植物。

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