CN101059430A - 一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法 - Google Patents

一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101059430A
CN101059430A CNA2007100282563A CN200710028256A CN101059430A CN 101059430 A CN101059430 A CN 101059430A CN A2007100282563 A CNA2007100282563 A CN A2007100282563A CN 200710028256 A CN200710028256 A CN 200710028256A CN 101059430 A CN101059430 A CN 101059430A
Authority
CN
China
Prior art keywords
spore oil
ganoderma lucidum
content
lucidum spore
test liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2007100282563A
Other languages
English (en)
Inventor
徐学平
章卫民
钟韩
陶美华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Institute of Microbiology
Original Assignee
Guangdong Institute of Microbiology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Institute of Microbiology filed Critical Guangdong Institute of Microbiology
Priority to CNA2007100282563A priority Critical patent/CN101059430A/zh
Publication of CN101059430A publication Critical patent/CN101059430A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

本发明涉及一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法，是将灵芝孢子油用乙醇在60～70℃热水浴加热至溶解，把灵芝孢子油中三萜类物质提取出来，然后在高氯酸作用下，在冰醋酸中使之与香草醛显色反应，以齐墩果酸为对照品，用比色法在波长为549nm处测定其含量。本发明方法能检测灵芝孢子油中三萜类物质的含量，反应特异性强，方法稳定，复现性好，方法灵敏度为0.0087/μg，最低检出限为2μg，加标回收率为98.15％。

Description

一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法
技术领域
本发明涉及一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法，具体来说涉及一种以香草醛为显色剂，用比色法间接测定灵芝产品中三萜类物质含量的方法。
背景技术
灵芝产品包括灵芝子实体，灵芝菌丝体，灵芝孢子粉和灵芝孢子油，其有效成分主要是三萜类物质。目前以香草醛为显色剂，用比色法简接测定灵芝产品中三萜类物质含量的方法有一些，例如于村等的方法(见参考文献：于村，俞莎，韩见龙等.灵芝类保健食品中三萜类化合物测定方法研究.浙江预防医学，2006，18(8)：74-75.)硫酸作用下以香草醛为显色剂，用比色法间接测定灵芝产品中三萜类物质含量，灵芝孢子油中三萜类物质的提取采用氯仿回流，而且对照品和供试液都用氯仿定容，因氯仿有毒，可能对人体造成损害，且氯仿极易挥发，吸取供试液时，体积误差很大，从而导致结果不准确。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的缺陷，开发出一种新的测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法。
我们在用乙醇并热水浴加热溶解提取出灵芝孢子油中三萜类物质，在高氯酸作用下，在冰醋酸中使之与香草醛显色反应，以齐墩果酸为对照品，用比色法定量测定，方法稳定，复现性好，测定结果准确，从而实现了本发明的目的。
本发明的测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法，是将灵芝孢子油中三萜类物质提取出来，然后以香草醛为显色剂，用比色法测定其含量，其特征在于所述的灵芝孢子油中三萜类物质的提取方法是灵芝孢子油用乙醇在60～70℃热水浴加热至溶解，得供试液。
灵芝孢子油中三萜类物质以香草醛为显色剂的反应可以采用现有的方法，最好是采用香草醛冰醋酸-高氯酸溶液体系，该体系最好是：准确称取香草醛0.20g于棕色瓶中，加冰醋酸4.0mL，冷藏，加入高氯酸16.0mL，摇匀。
本发明比色测定方法可以采用现有的方法，最好以齐墩果酸为对照品，最大吸收波长为549nm；包括如下步骤：精密吸取供试液于比色管中，水浴加热挥干溶剂，加入与供试液等体积的香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释，摇匀；用紫外可见分光光度计在549nm处测吸光度值；以测得的吸光度值Y通过线性回归方程算得试样液中三萜的含量X。
本发明方法能检测灵芝孢子油中三萜类物质的含量，反应特异性强，方法稳定，复现性好，方法灵敏度为0.0087/μg，最低检出限为2μg，加标回收率98.15％。
附图说明
图1：齐墩果酸与香草醛化合物的吸收曲线
图2：齐墩果酸标准曲线
图3：齐墩果酸含量与吸光度关系曲线
具体实施方法：
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
以下实施例所采用的试剂均为分析纯，仪器为UV755B紫外可见分光光度计，香草醛-冰醋酸高氯酸溶液：准确称取香草醛0.20g于棕色瓶中，加冰醋酸4.0mL，冷藏，加入高氯酸16.0mL，摇匀；空白对照条件：加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1mL于比色管中，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释。
实施例1：最大吸收波长测定
精密吸取齐墩果酸溶液液1mL于比色管中(同时做一空白)，水浴加热挥干溶剂，加入(香草醛-冰醋酸-高氯酸)溶液1.0mL，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释，摇匀，用紫外可见分光光度计在500～600nm范围扫描，在549nm处测得最大吸光度值，吸收曲线见附图1。
实施例2：齐墩果酸标准曲线制备
标准溶液配制：精密称取齐墩果酸对照品10mg，用乙醇溶解定容至100mL。
精密吸取标准溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL于比色管中(同时做一空白)，水浴加热挥干溶剂，加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释，摇匀，用紫外可见分光光度计在549nm处测吸光度值Y，齐墩果酸标准曲线见附图2，计算得线性回归方程为：Y＝8.6018X-0.0011及相关系数为R2＝0.9992。
实施例3：灵芝孢子油样品测定
精密称取灵芝孢子油1滴0.0302g，加入乙醇，摇动，60～70℃热水浴加热，同时摇动使其溶解，定容至50mL，得供试液。按实施例3测定，以测得的吸光度值Y通过线性回归方程，用式(1)算得结果为质量分数14.6％。
精密吸取供试液1mL于比色管中，水浴加热挥干溶剂(同时做一空白)，加入香草醛冰醋酸高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释，摇匀，用紫外可见分光光度计在549nm处测吸光度值。以测得的吸光度值Y(A)通过线性回归方程，用下述式(1)算得试样液中三萜的含量X，结果为质量分数0.56％。
X = x m × V 0 V × 1000 × 100 式(1)
式(1)中：
X为试样中三萜类物质的含量，单位为g/100g；
x为从标准曲线上算得的测定液中三萜的含量，单位为mg；
m为试样的质量，单位为g；
V为供试液定容的体积，单位为mL；
V0为取测定液的体积，单位为mL。
计算结果保留三位有效数字。
实施例4：回收率试验
精密称取孢子油1滴0.0340g，精密加入齐墩果酸(0.5mg/mL)8ml，加入乙醇，60～70℃热水浴加热，同时摇动使其溶解，定容至50mL，得供试液。
精密吸取供试液1.0mL于比色管中(同时做一空白)，水浴加热挥干溶剂，加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释、摇匀，用紫外可见分光光度计在549nm处测吸光度值Y，见表1。
表1  回收率试验结果
  取样量(mg)   取样量相当于齐墩果酸量(mg)   加入齐墩果酸量(mg)   吸光度(Y)   三萜含量(mg)   总三萜含量(mg)   齐墩果酸量(mg) 回收率％ 平均％ RSD％
  34.0   4.25   4.0   0.570   0.0814   8.14   3.89   97.25   98.15   0.84
  32.5   4.06   4.0   0.560   0.0801   7.99   3.93   98.25
  32.0   4.00   4.0   0.558   0.0798   7.98   3.98   99.50
  32.8   4.10   4.0   0.561   0.0802   8.02   3.92   98.00
  33.5   4.19   4.0   0.567   0.0810   8.10   3.91   97.75
实施例5：线性范围试验
精密吸取齐墩果酸对照品溶液2～300μg/mL于比色管中(同时做一空白)，水浴加热挥干溶剂，加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释，摇匀，用紫外可见分光光度计在549nm处测吸光度值Y，测定结果见附图3。由图3可知：在1～200μg/mL范围内线性关系良好。
实施例6：灵敏度试验
一个方法的灵敏度是指该方法对单位浓度或单位量的待测物质的变化所引起的响应值变化的程度。因此，它可以用仪器的响应值或其他指示量与对应的待测物质的浓度或量之比来描述。
实际工作中，灵敏度通常以标准曲线的斜率表示。
由图3计算的灵敏度即曲线的斜率为0.0087/μg。
实施例7：检出限试验
检出限是指分析方法在适当的置信水平内，能从样品中检测出被测组分的最小量或最小浓度。即断定样品中被测组分的量或浓度确实高于空白中被测组分的最低量。
国际理论与应用化学联合会(IUPAC)对检出限的规定：
对于各种光学分析方法，可测量的最小分析响应值以下式表示：
                        XL＝ Xb-K×sb  式(2)
式(2)中XL为最小响应值； Xb为多次测量空白值的平均值；sb为多次测量空白值的标准差；
K为根据一定的置信水平确定的系数(一般当置信水平为95％，空白测量次数n＜20时，K＝3；置信水平95％，空白测定次数n＞20时，K＝4.65)。
Figure A20071002825600061
式(3)
式(3)中m为灵敏度(以标准曲线斜率代入)。
本发明香草醛比色法测定三萜的方法中，以水为参比，测量空白值10次，测量结果见表2。
表2  10次空白测定结果
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   10
  吸光度   0.073   0.083   0.071   0.068   0.081   0.078   0.085   0.079   0.073   0.070
多次测量空白值的标准差sb＝0.0058；
从实施例5～7以香草醛为显色剂，齐墩果酸为对照品，比色法测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法，具有灵敏度高、检出限低、线性关系良好以及显色稳定的优点。

Claims (3)

1.一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法，是将灵芝孢子油中三萜类物质提取出来，然后以香草醛为显色剂，用比色法测定其含量，其特征在于所述的灵芝孢子油中三萜类物质的提取方法是灵芝孢子油用乙醇在60～70℃热水浴加热至溶解，得供试液。
2.根据权利要求1的一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法，其特征是比色测定以齐墩果酸为对照品，最大吸收波长为549nm。
3.根据权利要求1或2的一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法，其特征是比色测定方法包括如下步骤：精密吸取供试液于比色管中，水浴加热挥干溶剂，加入与供试液等体积的香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液，70℃水浴加热15分钟，取出冰水冷却10分钟，加冰醋酸5mL稀释，摇匀；用紫外可见分光光度计在549nm处测吸光度值；以测得的吸光度值Y通过线性回归方程算得试样液中三萜的含量。
CNA2007100282563A 2007-05-28 2007-05-28 一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法 Pending CN101059430A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2007100282563A CN101059430A (zh) 2007-05-28 2007-05-28 一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2007100282563A CN101059430A (zh) 2007-05-28 2007-05-28 一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101059430A true CN101059430A (zh) 2007-10-24

Family

ID=38865649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2007100282563A Pending CN101059430A (zh) 2007-05-28 2007-05-28 一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101059430A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101485694B (zh) * 2009-03-03 2011-05-11 南京中科集团股份有限公司 一种灵芝三萜类成分的提取方法
CN108061720A (zh) * 2017-12-26 2018-05-22 广州广电计量检测股份有限公司 一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法
CN111929293A (zh) * 2020-07-08 2020-11-13 吉林省农业科学院 食药用真菌中总三萜含量的测定方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101485694B (zh) * 2009-03-03 2011-05-11 南京中科集团股份有限公司 一种灵芝三萜类成分的提取方法
CN108061720A (zh) * 2017-12-26 2018-05-22 广州广电计量检测股份有限公司 一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法
CN111929293A (zh) * 2020-07-08 2020-11-13 吉林省农业科学院 食药用真菌中总三萜含量的测定方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102175778A (zh) 一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法
CN101876650A (zh) 一种烟用水基胶中甲醛含量的测定方法
CN101059430A (zh) 一种测定灵芝孢子油中三萜类物质含量的方法
CN101718690B (zh) 一种测定树莓中鞣花酸物质含量的方法
CN101093214B (zh) 一种测定抗癫痫药物血药浓度的方法
CN103743843A (zh) 一种工作场所空气中氯乙酸的检测方法
CN104931519B (zh) 一种丹参多酚酸注射液的含量检测方法
Korany et al. Determination of etofibrate, fenofibrate, and atorvastatin in pharmaceutical preparations and plasma using differential pulse polarographic and square wave voltammetric techniques
CN104698093B (zh) 基于毛细管虹吸效应与苯硼酸识别原理的多羟基化合物快速检测方法
CN107966502B (zh) 测定丹参多糖水解产物-半乳糖醛酸的方法
CN105572063A (zh) 一种基于氯化血红素可控聚集的水胺硫磷便捷检测方法
CN101769872B (zh) 一种虫草制品中虫草酸含量的检测方法
CN101042351A (zh) 一种水中聚乙二醇含量的测定方法
CN117191974A (zh) 一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法
CN116381075B (zh) 一种基于gc-ms检测d5中c0的方法
CN103197013A (zh) 一种四乙基溴化铵溶液中三乙胺的测定方法
CN115902036A (zh) 一种尿囊素铝中尿素含量的测定方法
CN114113395B (zh) 一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法
CN1202423C (zh) 一种测定胆碱浓度的方法
CN113686999B (zh) 一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法
CN104865324A (zh) 一种5,6-二甲基苯并咪唑含量检测方法
CN1598540A (zh) 一种测定盐酸普鲁卡因溶液含量的新方法
CN110849995B (zh) 吲达帕胺原料药中dcu的检测方法
CN117871752A (zh) 一种生物药原液中聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚残留的定量检测方法
CN101038202A (zh) 用铕原子标记法对移液器容量精确度进行比对与校准的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication