CN108061720A - 一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明建立了一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法。所述方法包括如下步骤:S1.测定齐墩果酸的紫外吸收系数;S2.使用紫外可见分光光度计测定待测样品的吸光度,利用吸光度和齐墩果酸的紫外吸收系数来计算样品中灵芝三萜的含量,所述灵芝三萜含量的计算公式为X=100%×A×V×f/(E×L×m×1000),其中,X为质量百分比含量,A为吸光度,V为定容体积,f为稀释倍数,E为齐墩果酸的吸光系数,m为称样量,L为光程长度。该方法使用紫外吸收系数测定灵芝制品中总三萜,无需标准物质,不仅节省大量标准物质购买经费而且避免了标准物质对检测结果偏差的影响,方法检出限低,精密度好,回收率高,稳定可靠,具有很好的重现性。
Description
技术领域
本发明涉及灵芝三萜含量领域,更具体地,涉及一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法。
背景技术
灵芝为多孔菌科真菌灵芝的子实体。具有补气安神、止咳平喘的功效。灵芝三萜是灵芝中发现的一类三萜类物质,目前已分离出超过350种化学物质。灵芝三萜是灵芝制品中的主要化学和药效成分之一。灵芝中所含三萜类化合物具有特别显著的生理活性:三萜类化合物中的不少化学成分在抗肿瘤、保肝、降血糖、降血脂、增强单核吞噬细胞系与NK细胞功能、增强体液免疫功能、抗放射、镇痛、镇静、抗衰老等方面显示出了较强的活性。目前,灵芝三萜的检测没有现行有效的国家、行业、地方标准可依据。
目前,灵芝制品中灵芝三萜的检测方法主要为紫外分光光度法检测以齐墩果酸或熊果酸为标准物质,用紫外分光光度法绘制标准曲线外标法测定灵芝三萜的含量。但该方法有一个较大的缺点:由于齐墩果酸和熊果酸都属于抗氧化剂,极易分解,导致了标准物质的含量极易发生变化,实验的重现性较差,标准物质放置时间越久,所得到样品中灵芝三萜含量越高,同一样品含量测定可能会出现百分之几百的偏差。因此,一个准确可靠的灵芝三萜含量检测方法具有重要意义。发明内容
本发明旨在克服上述现有灵芝三萜检测方法重现性差的问题,建立一种重现性良好准确可靠的灵芝三萜的检测方法。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:
一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,包括如下步骤:
S1.测定齐墩果酸的紫外吸收系数;
S2.使用紫外可见分光光度计测定待测样品的吸光度,利用吸光度和齐墩果酸的紫外吸收系数来计算样品中灵芝三萜的含量,
所述灵芝三萜含量的计算公式为X=100%×A×V×f/(E×L×m×1000),其中,X为质量百分比含量,A为吸光度,V为定容体积,f为稀释倍数,E为齐墩果酸的吸光系数,m为称样量,L为光程长度。
本方法先测定齐墩果酸的紫外吸收系数,通过紫外吸收系数法来测定灵芝三萜的含量,不受标准物质含量的影响,测定结果不会因为标准物质的改变而偏差巨大,结果更加准确,重现性好。且本方法不需要使用昂贵的标准物质,成本低。
优选地,所述齐墩果酸的紫外吸收系数的测定方法为:称取齐墩果酸标准物质,用无水乙醇稀释到0.1g/L,测定其吸光度,计算紫外吸收系数。采用无水乙醇作为溶剂不仅经济性好,而且对齐墩果酸标准物质的溶解性好,有利于准确测定紫外吸收系数。
优选地,所述齐墩果酸的紫外吸收系数通过平行测定大于等于20次后取平均值。在灵芝三萜含量的计算公式中,齐墩果酸的紫外吸收系数是关键的计算参数,齐墩果酸系数的测定关系到整个检测方法的准确性。多次平行测定可以降低误差,保证齐墩果酸吸收系数的准确性,进而提高检测数据的真实性和可靠性。
优选地,所述过滤采用直径≤0.45 μm的微孔滤膜过滤。
所述待测样品溶液的制备方法为:称取1g样品,加入40mL氯仿,超声震荡30min,定容至50mL过滤后取1mL到10mL比色管中,于60℃挥干溶剂,加入0.2mL5%香兰素-冰乙酸溶液,0.8mL高氯酸,置于70℃加热20min,冷却至室温,加入冰乙酸定容至10mL,得到待测样品。
所述待测样品在制备完成后30分钟内完成吸光度测定。样品测定的吸收波长为545nm。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明建立了紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,该方法使用紫外吸收系数测定灵芝制品中总三萜,无需标准物质,不仅节省大量标准物质购买经费而且避免了标准物质对检测结果偏差的影响,方法检出限低,精密度好,回收率高,稳定可靠,具有很好的重现性。
附图说明
图1为检测方法的线性相关性。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明,本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。
仪器与试药:
紫外分光光度计:岛津UV-1800。
标准物质齐墩果酸,CAS号:508-0201购自于ChromaDex。
香草醛(国药集团化学试剂有限公司)、氯仿、冰乙酸、无水乙醇均为广州化学试剂厂、高氯酸购买自天津市科密欧化学试剂有限公司,均为分析纯,。
实施例1
一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,包括如下步骤:
S1.测定齐墩果酸的紫外吸收系数
(1)配制标准储备液:称取50℃真空干燥2小时的齐墩果酸标准物质10mg,用无水乙醇溶解并定容至100mL,浓度为0.1mg/mL。
(2)标准使用液:取储备液用水稀释成浓度约10µg/mL的标准使用液。
(3)紫外吸收系数E的测定
平行配制20份标准工作液,连续测定其吸光值,计算吸收系数,紫外吸收系数K的计算如下:
E=A/(c×L)
其中,
E为吸收系数;
c为浓度, g/100mL;
A为吸光度;
L为液层厚度,cm。
S2.使用紫外可见分光光度计测定样品的吸光度,利用吸光度和齐墩果酸的紫外吸收系数来计算样品中灵芝三萜的含量。
(1)样品溶液的制备
称取1g样品到50mL容量瓶中,加入40mL氯仿,超声震荡30min,定容至50mL过滤后取1mL到10mL比色管中,于60℃水浴挥干溶剂。加入0.2mL临用新配的5%香兰素-冰乙酸溶液,0.8mL高氯酸,置于70摄氏度水浴20min,冰水浴冷却10min,冷却至室温,加入冰乙酸定容至10mL,于545nm下测定吸光度。吸光度测试必须样品处理好后30分钟内完成。
(2)样品溶液浓度的计算
样品中灵芝三萜含量按下式计算:
X%=100%×A×V×f/(E×L×m×1000)
其中,X%为质量百分比含量;
A为吸光度;
V为定容体积;
f为稀释倍数;
E为吸光系数 ;
m为称样量;
L为光程长度,cm。
实施例2 检测结果
(1)齐墩果酸紫外吸收系数E
根据平行测定20次的齐墩果酸标准物质的吸光度值,取平均值为其吸收系数。经过二十次平行实验,计算得到齐墩果酸在无水乙醇溶液中的紫外吸收系数为4.2538 g/cm。
(2)检出限和定量限
取样品溶液逐级稀释到接近空白溶液进行测试,平行测定12份空白溶液,记录结果,以结果之间三倍标准差为检出限,十倍标准差为定量限。具体检测结果见表1,方法检出限为2.19mg/L,定量限为7.29mg/L。称样量为1g,定容至10mL检测,检出限为21.9mg/kg,定量限为72.9mg/kg,可满足实际检测的需要。
表1
(3)线性范围
配制一系列标准溶液,按方法进行测试,检测结果见表2和图1。从表2中看出方法的线性相关系数为R20.9993,方法在10µg/mL-100µg/mL的线性范围内,线性良好。
表2
(4)精密度
取灵芝制品样品(样品名称为三顺灵芝胶囊,长春普华制药厂生产),分别测试六份平行样,计算结果之间的相对标准偏差。
称取1g样品到50mL容量瓶中,加入40mL氯仿,超声震荡30min,定容至50mL过滤后取1mL到10mL比色管中,于60℃水浴挥干溶剂。加入0.2mL临用新配的5%香兰素-冰乙酸溶液,0.8mL高氯酸,置于70摄氏度水浴20min,冰水浴冷却10min,冷却至室温,加入冰乙酸定容至10mL,于545nm下测定吸光度。表3为检测结果,可以看出平行测试六份样品溶液的结果之间的相对标准偏差为2.0%,精密度良好。
表3
(5)准确度
各取三份混合均匀的样品,按照下表加入标准溶液,分别进行测试,计算回收率。取样品一份,预处理后取1mL到9个比色管中,分别加入浓度为1mg/mL齐墩果酸标液1mL、2mL、3mL,每个浓度平行三份,测试结果,具体结果见表4。
表4
(6)稳定性(样品)
取一份样品溶液,预处理配置成样品溶液,分别于0、10、20、30、60、120 min测试结果,结果如表5。溶液120分钟内稳定,无明显变化。
表5
实施例2
与实施例1的检测方法相同,测定了检测了粤芝坊牌灵芝孢子粉(厂家:抚松县粤芝坊特产商行)的灵芝三萜含量。检测结果见表6。
实施例3
与实施例1的检测方法相同,测定了检测了雅博牌灵芝孢子油(厂家:广州雅博生物科技有限公司)的灵芝三萜含量。检测结果见表6。
实施例4
与实施例1的检测方法相同,测定了检测了三顺牌灵芝胶囊的灵芝三萜含量。检测结果见表6。
表6
Claims (7)
1.一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,其特征在于,
S1.测定齐墩果酸的紫外吸收系数;
S2.使用紫外可见分光光度计测定待测样品的吸光度,利用吸光度和齐墩果酸的紫外吸收系数来计算样品中灵芝三萜的含量,
所述灵芝三萜含量的计算公式为X=100%×A×V×f/(E×L×m×1000),其中,X为质量百分比含量,A为吸光度,V为定容体积,f为稀释倍数,E为齐墩果酸的吸光系数,m为称样量,L为光程长度。
2.如权1所述紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,其特征在于,所述齐墩果酸的紫外吸收系数的测定方法为:称取齐墩果酸标准物质,用无水乙醇稀释到0.1g/L,测定其吸光度,计算齐墩果酸的吸收系数。
3.如权1所述紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,其特征在于,所述齐墩果酸的紫外吸收系数通过平行测定大于等于20次后取平均值。
4.如权1所述紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,其特征在于,待测样品溶液的制备方法为:称取1g样品,加入40mL氯仿,超声震荡30min,定容至50mL过滤后取1mL到10mL比色管中,于60℃挥干溶剂,加入0.2mL5%香兰素-冰乙酸溶液,0.8mL高氯酸,置于70℃加热20min,冷却至室温,加入冰乙酸定容至10mL,得到待测样品。
5. 如权利要求4所述紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,其特征在于,所述过滤采用直径≤0.45 μm的微孔滤膜过滤。
6.如权利要求4所述紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,其特征在于,所述待测样品在制备完成后30分钟内完成吸光度测定。
7.如权利要求1所述紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法,其特征在于,
样品测定的吸收波长为545nm。
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