CN117191974A - 一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，包括S1预处理阶段：将血浆样品内加入内标物和蛋白沉淀剂，并对其进行混合，S2分离阶段：采用通用型C18液相色谱柱。该可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，S4基质效应去除阶段通过通过两种基质效应去除方式即相对响应值法Matrix Effect(％)＝B/A×100公式计算得出响应值，然后结合响应值对血液中布洛芬浓度进行分析，同时S4基质效应去除阶段中的校正曲线可对利用蛋白沉淀方式测定的血液中布洛芬浓度进行对比，即本申请通过两种方式去除基质效应，从而保证测定的血液中布洛芬浓度的准确性，与现有的测定方式相较数据更为准确。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，具体为一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法。
背景技术
布洛芬为解热镇痛类,非甾体抗炎药，该品通过抑制环氧化酶,减少前列腺素的合成,产生镇痛、抗炎作用，通过下丘脑体温调节中枢而起解热作用，而在对血液进行检测时需要对血浆中布洛芬浓度的测定。经检索，发现现有技术中的血药含量测定方法典型的如公开号CN102175778A一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，该方法为对待测样品经过预处理后，在分析色谱柱分离，然后用质谱检测器进行检测。其主要特点是样品取样少，前处理过程简单，分析周期短，检测灵敏度高，能同时测定多种抗抑郁药的血药浓度，适用面广，成本低，适合于临床常规血药浓度的监测。
典型的如公开号CN115436523A一种咪达唑仑血药浓度检测方法，采用二维液相色谱仪系统，包括以下步骤：S1制备溶液，溶液包括空白血清溶液、标准溶液、系统适用性溶液和供试品溶液；S2设置色谱参数，一维柱色谱条件的参数为：填充剂为亲水性的固相萃取柱；一维洗脱液包括甲醇和水，一维洗脱方式为梯度洗脱；二维柱色谱条件的参数为：二维柱是色谱柱，二维洗脱液包括乙腈和水，二维洗脱方式为等度洗脱；S3实施检测，将标准溶液和供试品溶液注入二维液相色谱仪系统并记录典型谱图；S4定量分析，绘制咪达唑仑的标准曲线，计算得到供试品溶液中咪达唑仑的含量。本发明具有操作简单、专属性强高等优点。
综上所述，现有的血药测定方法主要是通过蛋白沉淀、液-液萃取、固相萃取、超临界流体萃取、微透析等方式进行测定，而上述方式测得的浓度数据均会受到基质效应干扰，基质是由生物大分子构成的无定形胶状物，无色透明具有一定黏性，孔隙中有组织液，细胞外基质的物理性质主要受细胞外基质中蛋白聚糖所携带的多糖基团的影响，蛋白聚糖是由糖胺聚糖以共价的形式同线性多肽连接而成的多糖和蛋白复合物，基质效应是指化学分析中样品中被分析物以外的组分，基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响分析结果的准确性，进而使得测得数据不准确，针对上述问题，需要对现有设备进行改进。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，以解决上述背景技术中提出的现有的现有的血药测定方法主要是通过蛋白沉淀、液-液萃取、固相萃取、超临界流体萃取、微透析等方式进行测定，而上述方式测得的浓度数据均会受到基质效应干扰，进而使得测得数据不准确的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，，包括以下具体步骤：
S1预处理阶段：
将血浆样品内加入内标物和蛋白沉淀剂，并对其进行混合，混合之后对其进行离心处理；
S2分离阶段：
采用通用型C18液相色谱柱，高效液相系统采用通用型的二极管阵列检测器及高压泵，酸性流动相使用离子对试剂混合液对S1预处理阶段获取的离心上清液进行等度洗脱；
S3检测阶段：
利用S2分离阶段中的二极管阵列检测器对波长以及测峰面积进行记录，并对其换算浓度；
S4基质效应去除阶段：
采用测量响应值的方式对其进行计算，以及建立校正曲线的方式和其进行对比；
S5获取阶段：
将S3检测阶段得到的数据与S4基质效应去除阶段得到的数据进行综合处理，得到排除基质效应干扰的后的血浆中布洛芬的浓度数据。
优选的，所述S1预处理阶段中的内标物为羟基布洛芬-D3的水溶液，且S1预处理阶段中的蛋白沉淀剂为乙腈和甲醇。
优选的，所述S1预处理阶段中的混合时间为1min，且S1预处理阶段中的离心时间为3min，同时3000转/min。
优选的，所述S1预处理阶段按照1∶2(v/v)比例加入蛋白沉淀剂，同时蛋白沉淀剂中乙腈和甲醇的比例为1∶1。
优选的，所述S4基质效应去除阶段的响应值的公式为：
Matrix Effect(％)＝B/A×100。
其中，A为在纯溶剂中布洛芬的响应值，B为样品基质中添加的相同含量布洛芬的响应值，Matrix Effect为基质效应。
优选的，所述响应值测量过程中采用标准添加法添加溶液进行测量和记录响应值，且每次的添加量一致。
优选的，所述S4基质效应去除阶段的建立校正曲线的步骤为，首先需要配制3组标准曲线，第1组用有机溶剂配制成含系列浓度待测组分和内标的标准曲线，做5个重复；第2组标准曲线是将5种不同来源或不同品种的的空白样品经提取后加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后制得。第3组标准曲线采用与第2组相同的空白样品在提取前加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后再经提取后制得；通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。
优选的，所述将第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响，且通过第1组测定结果评价整个系统的重复性，第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应和提取回收率因样品来源不同而产生的共同影响，综上以三组标准曲线作为基质效应去除校正曲线。
优选的，所述S1预处理阶段和S2分离阶段采用同一来源的空白生物样品配制系列标准样品和检测样品。
优选的，所述S2分离阶段采用合适的色谱分离即可降低基质效应，即采用柱后法确定基质效应的出现时间，即可调整色谱条件，使分析物避免在此段时间内出峰，并以此降低基质效应。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，
本发明通过S4基质效应去除阶段的配合使用可有效解决现有的血药测定方法主要是通过蛋白沉淀、液-液萃取、固相萃取、超临界流体萃取、微透析等方式进行测定，而上述方式测得的浓度数据均会受到基质效应干扰，进而使得测得数据不准确的问题，S4基质效应去除阶段通过通过两种基质效应去除方式即相对响应值法Matrix Effect(％)＝B/A×100公式计算得出响应值，然后结合响应值对血液中布洛芬浓度进行分析，同时S4基质效应去除阶段中的校正曲线可对利用蛋白沉淀方式测定的血液中布洛芬浓度进行提供对比，即本申请通过两种方式去除基质效应，从而保证测定的血液中布洛芬浓度的准确性，与现有的测定方式相较，测定数据更为准确。
附图说明
图1为本发明S1和S5之间的控制关系工作流程示意图；
图2为本发明S1内部的控制关系工作流程示意图；
图3为本发明S3内部的控制关系工作流程示意图；
图4为本发明S4、S41和S42之间的控制关系工作流程示意图；
图5为本发明布洛芬化学式结构示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-5，本发明提供一种技术方案：一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，
S1预处理阶段：
将血浆样品内加入内标物和蛋白沉淀剂，并对其进行混合，混合之后对其进行离心处理；
S1预处理阶段中的内标物为羟基布洛芬-D3的水溶液，且S1预处理阶段中的蛋白沉淀剂为乙腈和甲醇。
S1预处理阶段中的混合时间为1min，且S1预处理阶段中的离心时间为3min，同时3000转/min。
S1预处理阶段按照1∶2(v/v)比例加入蛋白沉淀剂，同时蛋白沉淀剂中乙腈和甲醇的比例为1∶1。
S2分离阶段：
采用通用型C18液相色谱柱，高效液相系统采用通用型的二极管阵列检测器及高压泵，酸性流动相使用离子对试剂混合液对S1预处理阶段获取的离心上清液进行等度洗脱；
S3检测阶段：
利用S2分离阶段中的二极管阵列检测器对波长以及测峰面积进行记录，并对其换算浓度；
S4基质效应去除阶段：
采用测量响应值的方式对其进行计算，以及建立校正曲线的方式和其进行对比；
S5获取阶段：
将S3检测阶段得到的数据与S4基质效应去除阶段得到的数据进行综合处理，得到排除基质效应干扰的后的血浆中布洛芬的浓度数据。
S4基质效应去除阶段的响应值的公式为：
Matrix Effect(％)＝B/A×100。
其中，A为在纯溶剂中布洛芬的响应值，B为样品基质中添加的相同含量布洛芬的响应值，Matrix Effect为基质效应。
响应值测量过程中采用标准添加法添加溶液进行测量和记录响应值，且每次的添加量一致。
具体的，使用的标准样品的体积应该尽可能小，尽量降低过程中对基质的影响。
S4基质效应去除阶段的建立校正曲线的步骤为，首先需要配制3组标准曲线，第1组用有机溶剂配制成含系列浓度待测组分和内标的标准曲线，做5个重复；第2组标准曲线是将5种不同来源或不同品种的的空白样品经提取后加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后制得。第3组标准曲线采用与第2组相同的空白样品在提取前加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后再经提取后制得；通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。
将第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响，且通过第1组测定结果评价整个系统的重复性，第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应和提取回收率因样品来源不同而产生的共同影响，综上以三组标准曲线作为基质效应去除校正曲线。
具体的，稀释样品时要考虑到实际情况,稀释必须在适当的基质中进行,对于大多数测定而言,适当的基质就是零校准品,如果分析物稀释基质效应中所含成分浓度不正确,稀释回收率就不能对它们进行准确的测定,因为它们稀释后会与Bing agent形成新的平衡。
优选的，所述S1预处理阶段和S2分离阶段采用同一来源的空白生物样品配制系列标准样品和检测样品。
优选的，所述S2分离阶段采用合适的色谱分离即可降低基质效应，即采用柱后法确定基质效应的出现时间，即可调整色谱条件，使分析物避免在此段时间内出峰，并以此降低基质效应。
一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法的使用方式为；首先在向血浆样品中加入内标物和蛋白沉淀剂，然后对其座混合以及离心取上清液，接着利用离子对试剂混合液和液相色谱柱配合对上清液进行等度洗脱，并利用二极管阵列检测器对波长以及测峰面积进行记录和测算，从而即可得到血浆中布洛芬的浓值度，紧接着利用测量响应值的方式以及建立校正曲面的方式得到基质效应，最后将得到基质效应与上述测定的浓度进行结合，从而即可使测定的浓度排除基质效应的干扰，进而保证测定数据的准确性。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，包括以下具体步骤，其特征在于：
S1预处理阶段：
将血浆样品内加入内标物和蛋白沉淀剂，并对其进行混合，混合之后对其进行离心处理；
S2分离阶段：
采用通用型C18液相色谱柱，高效液相系统采用通用型的二极管阵列检测器及高压泵，酸性流动相使用离子对试剂混合液对S1预处理阶段获取的离心上清液进行等度洗脱；
S3检测阶段：
利用S2分离阶段中的二极管阵列检测器对波长以及测峰面积进行记录，并对其换算浓度；
S4基质效应去除阶段：
采用测量响应值的方式对其进行计算，以及建立校正曲线的方式和其进行对比；
S5获取阶段：
将S3检测阶段得到的数据与S4基质效应去除阶段得到的数据进行综合处理，得到排除基质效应干扰的后的血浆中布洛芬的浓度数据。
2.根据权利要求1所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述S1预处理阶段中的内标物为羟基布洛芬-D3的水溶液，且S1预处理阶段中的蛋白沉淀剂为乙腈和甲醇。
3.根据权利要求1所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述S1预处理阶段中的混合时间为1min，且S1预处理阶段中的离心时间为3min，同时3000转/min。
4.根据权利要求1所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述S1预处理阶段按照1∶2(v/v)比例加入蛋白沉淀剂，同时蛋白沉淀剂中乙腈和甲醇的比例为1∶1。
5.根据权利要求1所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述S4基质效应去除阶段的响应值的公式为：
Matrix Effect(％)＝B/A×100。
其中，A为在纯溶剂中布洛芬的响应值，B为样品基质中添加的相同含量布洛芬的响应值，Matrix Effect为基质效应。
6.根据权利要求5所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述响应值测量过程中采用标准添加法添加溶液进行测量和记录响应值，且每次的添加量一致。
7.根据权利要求1所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述S4基质效应去除阶段的建立校正曲线的步骤为，首先需要配制3组标准曲线，第1组用有机溶剂配制成含系列浓度待测组分和内标的标准曲线，做5个重复；第2组标准曲线是将5种不同来源或不同品种的的空白样品经提取后加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后制得。第3组标准曲线采用与第2组相同的空白样品在提取前加入与第1组相同系列浓度的待测组分和内标后再经提取后制得；通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。
8.根据权利要求7所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述将第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响，且通过第1组测定结果评价整个系统的重复性，第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应和提取回收率因样品来源不同而产生的共同影响，综上以三组标准曲线作为基质效应去除校正曲线。
9.根据权利要求1所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述S1预处理阶段和S2分离阶段采用同一来源的空白生物样品配制系列标准样品和检测样品。
10.根据权利要求1所述的一种可排除基质效应干扰的测定血浆中布洛芬的浓度的方法，其特征在于：所述S2分离阶段采用合适的色谱分离即可降低基质效应，即采用柱后法确定基质效应的出现时间，即可调整色谱条件，使分析物避免在此段时间内出峰，并以此降低基质效应。
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