CN101718690B - 一种测定树莓中鞣花酸物质含量的方法 - Google Patents

Abstract

一种树莓鞣花酸的测定方法，采用紫外光谱扫描鞣花酸标准品溶液，确定鞣花酸的最大吸收峰及测定溶剂甲醇，确定并验证在一定浓度范围内鞣花酸含量与吸光度之间的线性关系；然后利用有机溶剂乙酸乙酯将树莓中的鞣花酸成分提取出来，采用紫外吸收法测定鞣花酸的含量。该方法所测定鞣花酸的浓度范围在0ug/ml～18ug/ml，检测限≈0.25ug，实现了操作简捷，数据可靠，快速高效，低成本的测定。

Description

一种测定树莓中鞣花酸物质含量的方法

技术领域：本发明涉及一种树莓中鞣花酸物质含量的测定方法，具体的讲就是利用紫外吸收光谱扫描，确定鞣花酸物质的最大吸收峰，然后根据鞣花酸浓度与吸光度之间的线性关系来计算树莓中鞣花酸物质的含量。

背景技术：鞣花酸是广泛存在于各种水果、坚果等植物组织中的一种带苯环的天然酚类化合物，是没食子酸的二聚衍生物，它不仅以游离的形式存在，而且更多的是以缩合形式(以鞣花单宁或苷等)存在于自然界。据资料显示，红树莓——“第三代水果”是当今发现的天然鞣花酸含量最高的食物，远远超过了核桃和越橘等，并且美国明尼苏达大学和南卡罗来纳医科大学贺岭斯癌症中心研究证实，红树莓中含有大量的鞣花酸，可有效抵抗致癌症物质和致有机突变的物质。

鞣花酸的测定方法很多，主要有纸色谱分析，高效液相色谱分析(HPLC)，质谱分析等，其中，纸色谱分析方法操作简单，方便，但数据不够精确、稳定；HPLC法和质谱分析法虽数据可靠，但测定耗费昂贵，普及率不高。因此，在食品加工中，采用光学分析法来测定鞣花酸物质的含量，不仅方法便捷，数据可靠，而且容易普及。

发明内容：本发明所要解决的问题是提供一种树莓中鞣花酸物质含量的测定方法，这种方法准确性高，操作性强，易推广普及。

本发明提供的技术方案：是将树莓中鞣花酸物质提取出来得鞣花酸提取物，然后比色法测定其含量。其特征在于常温萃取，经浓缩，得供试液。所述的树莓中鞣花酸物质的提取方法是用有机溶剂分三次萃取，合并萃取相。

本发明的特征在于以甲醇为显色剂，取供试液1ml以甲醇定容稀释，摇匀。

本发明的特征在于经230nm-380nm紫外吸收光谱扫描得鞣花酸物质的最大吸收波长为254nm。

本发明能检测树莓中鞣花酸物质的含量，方法稳定，重现性好，方法灵敏度为0.121/ug，最低检测限为0.25ug，加样回收率为99.3％。

附图说明：图1.鞣花酸和甲醇混合液的吸收曲线

图2.鞣花酸标准曲线

图3.鞣花酸物质含量与吸光度关系曲线

具体实施方法：

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

以下实施例所采用的试剂为分析纯，仪器为UV762-紫外可见分光光度计。鞣花酸-甲醇测定溶液：准确吸取鞣花酸浓缩液1ml，于甲醇中摇匀得供试液；以无水甲醇作为空白对照。

实施例1：最大吸收波长的测定

标准溶液配制：精密称取鞣花酸对照品0.0068g，用无水甲醇溶解定容至25ml。

精确吸取鞣花酸的标准溶液1ml，于甲醇中定容至50ml，以无水甲醇作为空白对照，于紫外光谱230nm～380nm范围扫描，在254nm测得最大吸收光度值，吸收曲线见附图1。

实施例2：鞣花酸标准曲线制作

精密吸取标准溶液0、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml于50ml容量瓶内，以无水甲醇稀释定容。用紫外可见分光光度计于254nm处分别测吸光度值A。鞣花酸标准曲线见附图2，计算得线性回归方程为：y＝120.96x-0.0203及相关系数R²＝0.9994。

实施例3：树莓样品测定

精密称取树莓汁20ml，用等量的乙酸乙酯常温下萃取三次，合并溶剂相，经薄膜蒸发器浓缩得供试液。精密吸取浓缩液1ml，以无水甲醇稀释定容至250ml，摇匀；以无水甲醇为空白对照，用紫外可见分光光度计254nm处测得吸光度值A。通过线性回归方程，用下述式(1)算得试样中鞣花酸物质的含量X。结果为：

$X=\frac{C\×250\×{10}^{-3}}{V}\×100$ 式1

式1)中X——试样中鞣花酸物质的含量(mg/100ml)；

      C——经回归方程计算的试样浓度(ug/ml)；

V——试样体积(ml)。

实施例4：回收率试验

精密吸取树莓20g，精密加入鞣花酸标准溶液0.8mg，以乙酸乙酯等量常温萃取三次，合并溶剂相，经旋转薄膜蒸发器浓缩。

精密称取1ml浓缩液作为供试液，加无水甲醇定容至250ml，摇匀，以无水甲醇为空白对照，用紫外可见分光光度计在254nm处测吸光度值A，见表1。

表1.回收率试验结果

注：平均回收率＝99.03％；RSD＝0.53％。

实施例5：线性范围试验

精密吸取鞣花酸标准溶液0.1ml～3.0ml于50ml容量瓶中，无水甲醇定容摇匀，同时作一空白。用紫外可见分光光度计254nm处测吸光度值A，测定结果见附图3。由附图3可知，在浓度0.5ug/ml～13ug/ml范围内线性关系良好。

实施例6：灵敏度试验

实际工作中，灵敏度常以标准曲线的斜率表示。由附图3计算得灵敏度即曲线的斜率为0.121/ug。

实施例7：检出限试验

本发明以无水甲醇为参比，测量空白值10次，测量结果见表2。多次测量空白值的标准差S_b＝0.0101，检出限≈0.25ug。

表2.10次空白测定结果

从实施例5～7以甲醇为显色剂，标准鞣花酸为对照品，比色法测定树莓中鞣花酸物质含量的方法，具有灵敏度高，检出限低，线性关系良好和显色稳定的优点。

Claims (2)

1.一种树莓鞣花酸的测定方法，其特征在于包括鞣花酸标准曲线的制作、树莓中鞣花酸的萃取和吸光度值的测定、试样中鞣花酸物质含量的计算等3个步骤，具体讲①鞣花酸标准曲线的制作方法是：精密吸取标准溶液0、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml于50ml容量瓶内，以无水甲醇稀释定容，用紫外可见分光光度计于254nm处分别测吸光度值A，制作鞣花酸标准曲线得线性回归方程为：y＝120.96x-0.0203及相关系数R²＝0.9994；②树莓中鞣花酸的萃取和吸光度值的测定方法是：精密称取树莓汁20ml，用等量的乙酸乙酯常温下萃取三次，合并溶剂相，经薄膜蒸发器浓缩得供试液；精密吸取供试液1ml，以无水甲醇稀释定容至250ml，摇匀；以无水甲醇为空白对照，用紫外可见分光光度计于254nm处测得吸光度值A；③试样中鞣花酸物质含量的计算方法是：通过线性回归方程计算试样浓度C，然后以计算公式X＝{[C×250×10^-3]÷V}×100算得试样中鞣花酸物质的含量，式中X为试样中鞣花酸物质的含量(mg/100ml)；C为经回归方程计算的试样浓度(ug/ml)；V为试样体积(ml)。

2.根据权利要求书1所述一种树莓鞣花酸的测定方法，其特征是：用甲醇溶解鞣花酸标准品，于254nm波长下测定吸光度值，鞣花酸标准品与其相对应的吸光度值的线性关系图的适用浓度范围在0ug/ml～18ug/ml，吸光度值范围在0～2.5。

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