CN101013080B - 粒子分析仪用鞘液、鞘液制备方法及用鞘液分析粒子方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种不易出现沉淀物且不易腐蚀仪器的金属部分的粒子分析仪用鞘液。此粒子分析仪用鞘液的特征在于：其含有由甘油类及/或硫酸盐组成的折射率调整剂和水。本发明还提供一种制备用于使用流式细胞计的粒子分析仪的鞘液的方法，包括准备由甘油类物质及/或硫酸盐组成的折射率调整剂和水的步骤及混合折射率调整剂和水的步骤。本发明同时提供一种用流式细胞计分析试样中的粒子的方法，包括：用含有由甘油类和/或硫酸盐构成的折射率调整剂和水的鞘液包裹试样的步骤，及让被鞘液包裹的试样从流式细胞计的流动室通过的步骤。

Description

粒子分析仪用鞘液、鞘液制备方法及用鞘液分析粒子方法

技术领域：

本发明涉及用于分析试样所含粒子的粒子分析仪的鞘液、鞘液的制备方法及用鞘液分析粒子的方法。 

背景技术：

分析尿液和血液等生物试样中的粒子一般使用采用流式细胞术的粒子分析仪。根据流式细胞术，让试样在鞘液流包裹下通过流动室。试样通过时，流动室中的检测器会检测其电子或光学信息，根据检测出的电子或光学信息分析试样中所含的粒子。 

流式细胞术中使用的鞘液已知有日本专利申请公告号2004-3978(美国专利号6,750,060)公开的鞘液。这种鞘液含有大量氯化钠，用以调整鞘液的折射率。使用此种鞘液，即使以象尿液这种折射率高的试样作为检体，也可以进行正确的粒子分析。 

然而，适用日本专利申请公告号2004-3978(美国专利号6,750,060)的鞘液的装置一定时间内不使用，鞘液就会蒸发，装置内部很可能积蓄沉淀物。一旦有沉淀物积蓄，就要拆解装置，去除沉淀物。而且，装置中与鞘液接触的金属部分必须用耐腐蚀的材料，还要定期更换零部件，增加了成本。 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种难以产生沉淀物且不易腐蚀仪器内金属部件的鞘液。本发明的目的还在于提供制备一种难以产生沉淀物且不易腐蚀仪器内金属部件的鞘液的方法。本发明另一个目的在于提供一种使用难以产生沉淀物且不易腐蚀仪器内金属部件的鞘液对粒子进行分析的方法。 

本发明提供一种用流式细胞计分析尿液中所含粒子的装置的粒子分析仪用鞘液，该鞘液包括：由甘油类物质组成的折射率调整剂和水、小于20g/L的氯化钠、缓冲剂。 

所述甘油类物质选自甘油、硫甘油和聚甘油。所述鞘液在25℃钠D线(λ＝589.3nm)波长中的折射率为1.338-1.345。所述鞘液在25℃下的电传导度为40mS以下。 

所述鞘液中还含有小于20g/L氯化钠。所述鞘液中还含有硫酸盐。所述缓冲剂由三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-盐酸及/或三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-马来酸组成。 

所述鞘液中还含有表面活性剂、螯合剂、防霉剂或抗菌剂中的至少一种。 

本发明提供一种制备用于使用流式细胞计分析尿液中所含粒子的粒子分析仪的鞘液的方法，包括：准备由甘油类物质组成的折射率调整剂、水、小于20g/L的氯化钠、缓冲剂的准备步骤及混合所述折射率调整剂和水、小于20g/L的氯化钠、缓冲剂的混合步骤。 

所述甘油类物质选自甘油、硫甘油和聚甘油。 

所述混合步骤将折射率调整剂和水、小于20g/L的氯化钠、缓冲剂混合，使所得混合液在25℃的钠D线(λ＝589.3nm)波长中的折射率为1.338-1.345。 

所述混合步骤将折射率调整剂、水、所述小于20g/L的氯化钠、所述缓冲剂混合，使所得混合液在25℃的电传导度为40mS以下。 

所述准备步骤还包括准备硫酸盐，所述混合步骤将折射率调整剂、水、小于20g/L的氯化钠和硫酸盐混合在一起。 

所述缓冲剂由三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-盐酸及/或三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-马来酸组成。 

所述准备步骤还包括准备表面活性剂、螯合剂、防霉剂或抗菌剂中的至 少一种，所述混合步骤将折射率调整剂、水、小于20g/L的氯化钠、缓冲剂和所述准备步骤中所准备的表面活性剂、螯合剂、防霉剂或抗菌剂中的至少一种混合在一起。 

一种用流式细胞计分析尿液中的粒子的方法，包括：用含有由甘油类物质构成的折射率调整剂、水、小于20g/L的氯化钠、缓冲剂的鞘液包裹尿液的步骤，及让被鞘液包裹的尿液从流式细胞计的流动室通过的步骤。还包括从通过流动室的尿液粒子中检测光学信息的步骤及根据光学信息分析粒子的步骤。所述光学信息包括散射光及/或荧光。 

附图说明：

图1为使用本实施方式鞘液的粒子分析仪的流式细胞计略图。 

图2为滴注鞘液D干燥后的载玻片(载玻片a)和滴注鞘液A干燥后的载玻片(载玻片b)的示图。 

图3为蒸发鞘液B后的培养瓶(培养瓶a)侧面示图和蒸发鞘液D后的培养瓶(培养瓶b)侧面示图。 

图4为图3培养瓶a的侧面示图和培养瓶b的侧面示图。 

图5为用鞘液B计数疑似细菌时使用的二维分布图。 

图6为用鞘液B计数疑似白血球时使用的二维分布图。 

图7为用细菌(Bact)鞘液计数疑似细菌时使用的二维分布图。 

图8为用细菌(Bact)鞘液计数疑似白血球时使用的二维分布图。 

图9为用鞘液B测定的细菌数与用细菌鞘液测定的细菌数的相关图。 

图10为用鞘液B测定的白血球数与用细菌鞘液测定的白血球数的相关图。 

具体实施方式：

本实施方式的鞘液用于采用流式细胞术的粒子分析仪。采用流式细胞术的粒子分析仪具有流动室。用此仪器，试样在鞘液包裹下通过流动室，试样通过时，流动室中的检测器检测出电子或光学信息，根据此信息分析试样所含粒子。使用此仪器可以对试样所含细胞等粒子进行分类和计数。鞘液可以通过将调整折射率的物质(以下称折射率调整剂)溶解到水里来配制。 

对于鞘液的折射率没有特别的限定，只要不影响粒子分析即可。鞘液的折射率以与待测定试样的折射率近似为宜。在此，所谓近似值指试样的折射率的±0.5％，最好±0.3％范围内。如果试样为尿液，则鞘液在25℃钠D线(λ＝589.3Nm)波长中的折射率以1.338～1.345为宜。 

鞘液里含有作为折射率调整剂的硫酸盐和/或甘油类。使用硫酸盐和/或甘油类物质作为折射率调整剂，可以提供难以产生沉淀物且不易腐蚀粒子分析仪的金属部分的鞘液。折射率调整剂应适当配制和添加，以鞘液折射率达到所期望的范围为宜。鞘液所含折射率调整剂主要成份为硫酸盐和/或甘油类，作为折射率微调等辅助手段，也可含有氯化钠、氯化钾、尿素、碳酸钠、蔗糖、柠檬酸盐、醋酸盐、D-山梨(糖)醇、碳酸氢盐和三乙醇胺等折射率调整剂。如果在鞘液里添加氯化钠，其氯化钠浓度应以不呈固体析出以免引起管堵塞为宜。如在鞘液里添加氯化钠和氯化钾，其浓度以不腐蚀仪器的金属部分为宜。使用氯化钠时，以20g/L为宜，最好在10g/L以下。 

本说明书中所述“甘油类物质”包括甘油和甘油的衍生物(以下称为甘油衍生物)。甘油衍生物比如有硫甘油和聚甘油等。聚甘油比如可以使用一缩二甘油、聚甘油#310(坂本制药工业)、聚甘油#750(坂本制药工业)、聚甘油#500(坂本制药工业)等。 

硫酸盐比如可以使用硫酸钠、硫酸钾和硫酸钙等。 

用粒子分析仪分析试样中的粒子时，有时要测定试样的电传导度。比如，人们都知道尿液的电传导度与尿的渗透压和比重有关，而尿的渗透压和比重是各种疾病的指标。例如，低比重尿液(1.010以下)和低渗透压尿 (200mOSm/Kg·H₂O以下)往往被认为是尿崩症等尿浓缩障碍和心因性多饮症等，高比重尿液(1.030以上)和高渗透压尿液(850mOSm/Kg·H₂O以上)往往被认为是脱水或肾前性肾功能衰竭等症。 

鞘液的电传导度过高会影响下一个检体的测定(出现残留值(carryover))，因此，鞘液的电传导度应尽可能低。尿液的电传导度在25℃下多在5～30mS之间，因此，鞘液的电传导度最好在25℃时低于40mS。这样才能控制在测定试样的电传导度时出现残留值。 

鞘液的PH值为6.0～8.5，最好在7.0～8.0之间。要调整鞘液的PH值，可让鞘液中含有缓冲剂。对于缓冲剂的种类无特别要求，只要能够将PH值调整到适当的范围即可，诸如GOOD缓冲剂(具体而言，有三羟甲基氨基甲烷缓冲剂、2-码啉乙磺酸(MES)、二(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷(BIS-TrIS)、N-(2-乙酰胺)亚氨基二乙酸(ADA)、哌嗪-1，4-二乙磺酸(PIPES)、N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸(ACES)、3-(N-码啉基)-2-羟基丙磺酸钠(MOPSO)、N-N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、3-吗啉丙磺酸(MOPS)、N-(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、3-[N，N-二(羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸(DIPSO)、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸(TAPSO)、哌嗪-N-N-双(2-羟基乙烷磺酸)(POPSO)、3-(羟乙基哌嗪)-2-羟基丙磺酸(HEPPSO)、4-羟乙基哌嗪丙磺酸(EPPS)、三(羟甲基)甲基甘氨酸(TrICINe)、N，N-二羟乙基甘氨酸(BICINe)、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)等)、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、佛罗那钠-盐酸、可力丁-盐酸、三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-马来酸、三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-盐酸等等，这些可单独使用，也可组合在一起使用。上述当中，尤以三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-盐酸或三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-马来酸为宜。 

鞘液注入仪器的流动室会发生气泡，可能给测定带来不良影响。为了消除这些气泡的发生，还可以在鞘液添加表面活性剂。对表面活性剂的种 类没有特别限定，只要能抑制气泡发生即可，阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂和两性表面活性剂哪种都可以。具体而言，可以使用聚氧乙烯烷基醚型表面活性剂、烷基酚聚氧乙烯醚型表面活性剂(如NISSANNONIONNS-240(日本油脂注册商标))、聚氧乙烯山梨聚糖烷基酯型表面活性剂(如RHEODOLTW-0120(花王、注册商标))，多元醇共聚物(如普流尼克P-105，P-84，P-85，P-87，P-75等(巴斯夫(BASF)、注册商标))、N一甲基葡糖酰胺(MEGA)-8、蔗糖单月桂酸酯(sucrosemonolaurate)、脱氧-BIGCHAP、辛基硫代葡萄糖苷、正壬-β-D-麦芽糖、正庚硫代葡萄糖苷、3-[3-(胆酰氨丙基)二甲铵基]丙磺酸内盐、CHAPSO等。鞘液中的表面活性剂的浓度以抑制气泡发生，不影响试样中的细胞粒子为宜。具体而言，可以是5～5000mg/L之间，最好在100～3000mg/L之间。 

用粒子分析仪分析试样中所含粒子时，试样中有时会有无机盐类(比如磷酸铵、磷酸镁、碳酸钙等)析出。要溶解这些无机盐类可以在鞘液中添加螯合剂，这样不仅能够溶解无机盐，还能够抑制鞘液氧化。作为螯合剂可以使用乙二氨四乙酸盐、环己二胺四乙酸、N二(羟乙基)氨基乙酸(DHEG)、DPTA-OH、乙二胺-N，N′-二乙酸(EDDA)、EDDP、乙二醇二乙醚二胺四乙酸(GEDTA)、HDTA、一(2.6二甲基苯胺甲酰甲基)亚氨二乙酸(HIDA)、MeTHy1-EDTA、氨基三乙酸、多聚磷酸盐、NTPO、EDDPO等。鞘液中螯合剂的浓度以0.05～5g/L为宜。 

鞘液一旦有细菌和真菌等微生物繁殖就会影响对试样粒子的分析，为了抑制细菌和真菌繁殖还可在鞘液中添加具有防霉作用的物质(防霉剂)及/或有防菌作用的物质(抗菌剂)。作为防霉剂和抗菌剂，使用市场上出售的东西即可，比如：三嗪类抗菌剂、噻唑类抗菌剂(比如苯酰异噻唑等)、吡啶硫酮、吡啶类抗菌剂(如：1-羟吡啶-2-硫代钠等)、2-苯氧基乙酸乙醇等等。具体而言，可以使用ProxelGXL(艾维斯(Avecia)公司制)、奥麦丁钠(API股份 有限公司制)等。 

使用本实施方式鞘液的粒子分析仪对其分析的试样没有特别限制，可以是从生物收集的试样(生物试样)或生物经过稀释、精制、染色等处理的试样。具体而言，可以是尿液、血液、精液和髓液等。本实施方式的鞘液非常适用于分析尿液中的粒子(红血球、白血球、细菌等)。 

为了用本实施方式的鞘液分析试样中的粒子，可以使用图1所示流式细胞计。 

供试样流动的流动室42是激光照射的部分。流动室42有： 

●内流路很细的锐孔43 

●向上方锐孔喷射待测试样的喷嘴44 

●鞘液供应口45 

●废液口46。 

此流式细胞计41有： 

●将激光光源47照射出来的激光聚光到流动室42的聚光镜48 

●接收试样中的粒子在激光照射下发出的前向散射光、并将其转换为电信号的发光二极管49 

●将前向散射光聚光到发光二极管49的集光镜50和针孔51 

●接收试样中的粒子在激光照射下发出的荧光、将其转换为电信号的光电倍增管52 

●将荧光聚光到光电倍增管52的集光镜53、滤光器54、针孔55 

●用于放大发光二极管49和光电倍增管52输出的电信号、作为前向散射光信号和荧光信号输出到分析器56的放大器57和放大器58。 

当试样流入流动室42时，每当试样中所含粒子横穿激光光源47的激光照射区，就发出荧光和散射光。光电倍增管52和发光二极管49分别接收侧向荧光和前向散射光，并进行光电转换，作为侧向荧光信号和前向散 射光信号等光检测信号输出到分析器56。 

分析器56由以下两部分构成：放大流式细胞计41检测出的每个粒子的光检测信号并除去噪声的电路和由CPU、ROM、RAM组成的微机。分析器56分析流式细胞计41检测出的每个粒子的光检测信号，绘制成二维分布图，对试样中所含粒子进行计数。分析器56从前向散射光信号计算出前向散射光强度和前向散射光宽度，从侧向荧光信号计算荧光强度。将这些参数组合在一起绘制成二维分布图，分析试样中的各粒子的种类和数量。 

(实施例1) 

在1kg蒸馏水中溶解以下物质，配制出鞘液。 

三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷 1.51g 

盐酸 6mol 

EDTA-2K 0.2g 

RHEODOLTW-0120 0.75g 

奥麦丁钠 0.2g 

ProxelGXL 0.2g 

在上述鞘液中添加各种折射率调整剂，并就添加多少折射率调整剂才能将鞘液折射率调整为1.342进行了测试。测定折射率使用的是数字折射仪RX-5000α(爱宕(ATAGO)公司产品)，折射率测定温度为25℃。 

测试结果得知，当使用甘油作为折射率调整剂时，若其加入鞘液的浓度为79g/L，则折射率调整为1.342。 

当使用硫甘油作为折射率调整剂时，以57g/L的浓度加入鞘液即可。 

当使用甘油二酸酯作为折射率调整剂时，其加入鞘液的浓度为69g/L，则折射率调整为1.342。 

当使用聚甘油#310作为折射率调整剂时，其浓度为71g/L，则折射率调整为1.342。

当使用聚甘油#750作为折射率调整剂时，其在鞘液中的浓度为73g/L，则折射率调整为1.342。 

当使用聚甘油#500作为折射率调整剂时，其在鞘液中的浓度为75g/L，则折射率调整为1.342。 

当使用硫酸钠作为折射率调整剂时，其浓度为62g/L，则折射率调整为1.342。 

当使用氯化钠和甘油作为折射率调整剂时，氯化钠和甘油的添加浓度分别为7.1g/L和69.1g/L，即可将折射率调整为1.342。 

当使用氯化钠和硫酸钠作为折射率调整剂时，分别以7.1g/L和54.44g/L的浓度添加氯化钠和硫酸钠，即可将折射率调整为1.342。 

当使用氯化钠、硫酸钠和甘油作为折射率调整剂时，氯化钠、硫酸钠和甘油的添加浓度分别为7.1g/L、28.45g/L和34g/L的话，则折射率调整为1.342。 

(实施例2) 

在实施例1的鞘液中添加各种折射率调整剂，将鞘液折射率调整为1.342，测定其电传导度。测定电传导度使用的是电传导度仪DS-8F(堀场制作所产品)。 

在上述鞘液中添加折射率调整剂氯化钠7.1g/L和甘油69.1g/L，配制鞘液A。鞘液A的电传导度为11mS。 

在上述鞘液中添加折射率调整剂氯化钠7.1g/L、硫酸钠28.45g/L和甘油34g/L，配制鞘液B。鞘液B的电传导度为35mS。 

在上述鞘液中添加折射率调整剂甘油79g/L，配制鞘液C。鞘液C的电传导度为1.1mS。 

从上述结果可以认为，鞘液A～C折射率均为1.342、电传导度均为40mS以下，因此，不易发生测定的残留值。

(实施例3) 

使用实施例2中配制的鞘液A，测试是否有盐分析出。作为对比，在实施例1的鞘液中添加折射率调整剂氯化钠55g/L，配制出鞘液D。 

分别将100μL鞘液A和100μL鞘液D滴到载玻片上，让其在25℃温度下干燥。 

图2为干燥后的载玻片示图。滴有鞘液D的载玻片为a，滴有鞘液A的载玻片为B。如图2所示，鞘液D干燥后有盐分析出，而鞘液A即使干燥后也几乎看不到有沉淀物。由此可以判断，在粒子分析仪中使用鞘液A，不易发生因盐分折出而堵塞细管的现象。 

(实施例4) 

使用实施例2中配制的鞘液B，看是否有盐分析出。作为对比，使用了实施例3中配制的鞘液D。 

分别将100ml鞘液B和100ml鞘液D放入培养瓶，在60℃温度中干燥，直至全部水分蒸发。 

图3和图4为干燥后的培养瓶示图。图3为鞘液B蒸发后的培养瓶(培养瓶a)侧面示图和鞘液D蒸发后的培养瓶(培养瓶b)侧面示图。图4(a)为图3培养瓶a的内部示图，图4(b)为图3培养瓶b的内部示图。从图3和图4可以看出，鞘液B干燥后也仅有少量盐分析出，而鞘液D干燥后有大量盐分析出。从上可以认为，粒子分析仪使用鞘液B不易发生因盐分折出而堵塞细管的现象。 

(实施例5) 

将实施例2中配制的鞘液B用于细菌分析仪BACSYS-40i(希森美康公司(SYSMEX))，以质控物质BACTCHECK(希森美康公司制)为试样，测定试样中相当于细菌的疑似粒子(以下称疑似细菌)和相当于白血球的疑似粒子(以下称疑似白血球)。

将50μLBACTCHECK与细菌分析仪中使用的测定试剂“BACTCATCH”的染色液10μL以及稀释液340μL混合，将混合液注入粒子分析仪流式细胞计，获得试样中所含粒子的侧向荧光信号和前向散射光信号。从侧向荧光信号算出荧光强度，从前向散射光信号算出前向散射光强度1和前向散射光强度2以及前向散射光宽度。前向散射光强度1与前向散射光强度2信号放大程度不同，前向散射光强度1被用于疑似细菌的测定，前向散射光强度2被用于疑似白血球的测定。 

以所获得的前向散射光宽度和前向散射光强度1为轴，绘制二维分布图，统计疑似细菌数。图5即该二维分布图。以荧光强度和前向散射光强度2为轴，绘制二维分布图，统计疑似白血球数。图6即该二维分布图。这种测定进行8次，其测定结果如表1所示。 

[表1] 

作为对照，用上述仪器使用的鞘液--细菌鞘液(BACTSHEATH，希森美 康公司制)按上述同样方法对疑似细菌数和疑似白血球进行计数。以前向散射光宽度和前向散射光强度1为轴，绘制二维分布图，如图7。以荧光强度和前向散射光强度2为轴绘制二维分布图如图8。此测定也进行8次，测定结果如表2所示。 

[表2] 

从表1和表2可以看出，无论使用鞘液B和细菌鞘液哪一种，8次测定的疑似细菌数、疑似白血球数、信号强度和信号宽度的CV(coefficient ofvariation：变动系数)都显示出非常低的值。用细菌鞘液测定的疑似细菌数、疑似白血球数与用鞘液B测定的疑似细菌数、疑似白血球数非常近似。由此可以确认，用鞘液B可以与过去使用的鞘液同样准确地、再现性很好地检测检体中的粒子。 

(实施例6) 

用鞘液B与实施例5同样地对尿样116检体(检体号1～116)的细菌数和白血球数进行测定。作为对照，再用细菌鞘液测定116检体的细菌数和 白血球数。 

用鞘液B测定的细菌数和用细菌鞘液测定的细菌数的相关图如图9所示。用鞘液B测定的白血球数和用细菌鞘液测定的白血球数的相关图如图10所示。 

从图9可以看出，用鞘液B测定的细菌数和用细菌鞘液测定的细菌数具有非常好的相关性。从图10可以看出，用鞘液B测定的白血球数和用细菌鞘液测定的白血球数具有非常好的相关性。由此可以确认，用鞘液B可以与过去使用的鞘液一样准确地测定检体中的粒子。

Claims (9)

1.一种用流式细胞计分析尿液中所含粒子的粒子分析仪用鞘液，其特征在于，所述鞘液包括：由甘油类物质、氯化钠、硫酸盐组成的折射率调整剂、水、缓冲剂，其中所述粒子分析仪用鞘液中氯化钠的浓度小于20g/L；

所述鞘液在25℃波长为589.3nm的钠D线波长中的折射率为1.338～1.345；

所述鞘液在25℃下的电传导度为40mS以下。

2.根据权利要求1所述的粒子分析仪用鞘液，其特征在于：所述甘油类物质选自甘油、硫甘油和聚甘油。

3.根据权利要求1所述的粒子分析仪用鞘液，其特征在于：所述缓冲剂由三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-盐酸及/或三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-马来酸组成。

4.根据权利要求1所述的粒子分析仪用鞘液，其特征在于：所述鞘液中还含有表面活性剂、螯合剂、防霉剂或抗菌剂中的至少一种。

5.一种制备用于使用流式细胞计分析尿液中所含粒子的粒子分析仪的鞘液的方法，包括：准备由甘油类物质、氯化钠、硫酸盐组成的折射率调整剂、水、缓冲剂的准备步骤；及

混合所述折射率调整剂、所述水、所述缓冲剂，使得氯化钠的浓度小于20g/L并且使所得混合液在25℃波长为589.3nm的钠D线波长中的折射率为1.338～1.345和在25℃的电传导度为40mS以下的混合步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述甘油类物质选自甘油、硫甘油和聚甘油。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于：所述缓冲剂由三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-盐酸及/或三羟甲基(羟甲基)氨基甲烷-马来酸组成。

8.根据权利要求5所述方法，其特征在于：所述准备步骤还包括准备表面活性剂、螯合剂、防霉剂或抗菌剂中的至少一种，所述混合步骤将所述折射率调整剂、所述水、所述缓冲剂和所述准备步骤中所准备的表面活性剂、螯合剂、防霉剂或抗菌剂中的至少一种混合在一起。

9.一种用流式细胞计分析尿液中的粒子的方法，包括：

用含有由甘油类物质、氯化钠、硫酸盐构成的折射率调整剂、水、缓冲剂、且氯化钠的浓度小于20g/L并且使所得混合液在25℃波长为589.3nm的钠D线波长中的折射率为1.338～1.345和在25℃的电传导度为40mS以下的鞘液包裹尿液的步骤；及

让被所述鞘液包裹的所述尿液从所述流式细胞计的流动室通过的步骤。

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