CN100408051C - 一种中药组合物的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药组合物，该组合物是由一定比例的发酵虫草菌粉和西洋参粉混合制成的，属中药领域。该中药组合物对于改善肺肾两虚、气阴不足所致的咳嗽，气短，腰膝酸痛，神疲乏力，潮热，烦渴等症状有良好的疗效。本发明同时还公开了该中药组合物的制备方法和质量控制方法。
Description
发明领域
本发明涉及一种中药组合物的质量控制方法。属于中药领域。
背景技术
肺肾两虚、气阴不足是中医临床上的常见病，在现代医学没有明确的定位，因而也无药可治。而中医中药恰恰抓住了本病的根本所在，选取具有补益功效的药物，调补肺肾。
本发明目的旨在填补现有药物的空白，提供一种有效改善肺肾两虚、气阴不足的中药组合物，同时还提供其制备方法和质量控制方法。
发明内容
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明所述的药物组合物是由10～20重量份的发酵虫草菌粉和10～20重量份的西洋参组成的。
经优选后的两味基本药物的比例为：发酵虫草菌粉15～20份，西洋参10～15份。
经实验进一步优选后，确实最优配比为：发酵虫草菌粉18份，西洋参12份。
这两味药粉成细粉，混匀，可以根据需要加入适宜的辅料，制成所需剂型，如胶囊剂、片剂、软胶囊剂、丸剂等。
为了有效控制本发明产品的质量，发明人还制定了其质量控制方法，包括含量测定部分和定性鉴别部分。
含量测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；30∶70比例的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1～0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本发明0.5～1g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，静置1小时后，加热回流3小时，放冷，用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
定性鉴别方法可以包含以下中的一种或者几种：
(1)取本发明制剂1～2g，加乙醇10～20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取发酵虫草菌粉对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2∶1比例的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本发明制剂1～2g，加乙醇10～20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取腺嘌呤对照品、腺苷对照品和尿苷对照品，加稀乙醇制成每1ml各含0.5mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以8∶2∶6∶0.3∶0.2比例的氯仿-醋酸乙酯-异丙醇-水-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本发明制剂2～6g，加水饱和的正丁醇15～20ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液加氨试液，振摇，放置分层，取上层溶液置水浴上蒸干，残渣加水5～10ml使溶解，转移至经预处理的混合大孔树脂柱上，DA101型与DA201型比例为1∶0.8～1∶1.5，以每分钟0.5～1ml的速度先后用水25～50ml及15％乙醇25～50ml洗涤，洗液弃去，再用75％乙醇25～50ml同上速度洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取西洋参对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1和拟人参皂苷F11对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶40∶20∶10比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，置缸中饱和15分钟后，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，立即于105℃加热数分钟，置日光及365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
(4)取本发明制剂2～6g，加甲醇25～50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水使溶解，以水饱和正丁醇提取三次，每次15ml，合并正丁醇液，以氨试液洗涤二次，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取西洋参对照药材0.4g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1和拟人参皂苷F11对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各5μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶40∶20∶10比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，置缸中饱和15分钟后，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，立即于105℃加热数分钟，置日光及365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
经发明人证明，以上质量控制方法可以应用于本发明技术方案能够制成的各种剂型。
本发明药物组合物具有补肺益肾、益气养阴之功效，为证明其药效，发明人做了动物药效学实验，其中虫草洋参胶囊系按本发明最优方案制成的制剂，同时用发酵虫草菌粉和西洋参粉单独作为药效对照，试验如下。
1材料
药物：虫草洋参胶囊，发酵虫草菌粉和西洋参粉，临用前均用05％羧甲基纤维素钠配成所需浓度。
动物：本实验动物为NIH小鼠，由云南省天然药物药理重点实验室提供(云卫动管第A12号).
2方法与结果选用18～20gNIH小鼠，随机分为5组，分别为空白对照组(05％羧甲基纤维素钠25mL/kg)、虫草菌粉组(3g/kg)、西洋参组(3g/kg)虫草洋参胶囊组(3g/kg)。灌胃给药，连续9d。
实验例1：对正常小鼠免疫器官重量的影响
于末次给药后第2d，处死小鼠，摘取胸腺、脾脏，称湿重，并计算器官系数(g/10g体重)。结果见表1。
表1虫草洋参胶囊对正常小鼠免疫器官的影响
P＜0.01，与空白对照组比较。
上表结果显示，虫草洋参胶囊对正常小鼠胸腺有明显的抑制作用，效果明显优于其他两个给药组。
实验例2：对2，4二硝基氯苯所致小鼠的迟发型超敏反应
用1.25％二硝基氯苯丙酮在小鼠背部皮下注射0.02ml/只致敏，第2d开始给药，第10d以0.25％二硝基氯苯丙酮皮下注射小鼠右足垫中间，0.02ml/只，对侧足注射相同容积的丙酮液作对照，38h后处死小鼠，从踝关节处剪下二足，以两足的重量差为肿胀度，进行统计学处理，结果见表2。
表2虫草洋参胶囊对二硝基氯苯所致小鼠迟发型超敏反应的影响
P＜0.05，与空白对照组比较。
上表结果显示，虫草洋参胶囊对二硝基氯苯所致小鼠的迟发型超敏反应有显著的抑制作用，效果明显优于虫草菌粉组和西洋参组。
实验例3：碳粒廓清试验
于给药后30min，从小鼠尾静脉注入印度墨水0.1ml/10g体重，于第2和10min时，分别眼眶静脉取血20μl，放入3ml蒸馏水中，于680nm处测吸光度，同时解剖肝、脾，称重。按下式计算廓清指数(k)、吞噬指数α。结果见表3。
表3虫草洋参胶囊对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响
k＝(logA2-logA10)/(t10-t2)；α＝3k×体重/(肝重+脾重)
上结果显示，虫草洋参胶囊能显著提高小鼠廓清指数和吞噬指数，效果明显优于其他两组。
具体实施方式：
以下通过实施例来详细说明本发明的技术方案：
实施例1：
处方：发酵虫草菌粉100g 西洋参200g
制法：以上二味，西洋参粉碎成细粉，与发酵虫草菌粉混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
鉴别：1)取本品内容物1g，加乙醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取发酵虫草菌粉对照药材0.6g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品内容物1g，加水饱和的正丁醇15ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液加氨试液15ml，振摇，放置分层，取上层溶液置水浴上蒸干，残渣加水5ml使溶解，转移至经预处理的混合大孔树脂柱(DA101与DA201为1∶1，柱内径0.9cm，长9cm)上，以每分钟0.5～1ml的速度先后用水25ml及15％乙醇25ml洗涤，洗液弃去，再用75％乙醇25ml同上速度洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取西洋参对照药材0.4g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1和拟人参皂苷F11对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各4μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶20∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，置缸中饱和15分钟后，展开(10～25℃，相对湿度小于60％，展距12～14cm)，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，立即于105℃加热数分钟，置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
含量测定：照高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下内容物，混匀，取本品约0.75g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，静置1小时后，加热回流3小时，放冷，用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含人参皂苷Rb1不得少于1.10mg。
实施例2：
处方：发酵虫草菌粉400g 西洋参200g
制法：以上二味，西洋参粉碎成细粉，与发酵虫草菌粉混匀，加微晶纤维素100g，加淀粉至总量1000g，混合均匀，以水制软材，以机制法制成丸粒，干燥，分装，即得。
鉴别：(1)取本品，粉碎成细粉，称取2g，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取腺嘌呤对照品、腺苷对照品和尿苷对照品，加稀乙醇制成每1ml各含0.5mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-异丙醇-水-浓氨试液(8∶2∶6∶0.3∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品，粉碎成细粉，称取4g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇提取三次，每次15ml，合并正丁醇液，以氨试液洗涤二次，每次30ml，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取西洋参对照药材0.4g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1、拟人参皂苷F11对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各4μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶20∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，置缸中饱和15分钟后，展开(10～25℃，相对湿度小于60％，展距12～14cm)，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，立即于105℃加热数分钟，置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
【检查】人参取人参对照药材0.4g，按鉴别(2)供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取鉴别(2)项下的供试品溶液、上述对照药材溶液各4μl及鉴别(2)项下人参皂苷对照品溶液2μl(各二份)，分别点于相同的二块硅胶G薄层板上，一块按鉴别(2)项下的展开剂展开，另一块以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10，5～10℃放置12小时)的下层液为展开剂，展开(10～25℃，相对湿度40～60％，层析缸预饱和15分钟)，展距10cm，照鉴别(2)项下的规定显色后检视，供试品溶液不得显与对照药材完全相一致的斑点。
含量测定：照高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备将本品研细，混匀，取1g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，静置1小时后，加热回流3小时，放冷，用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含西洋参以人参皂苷Rb1计，不得少于3.30mg。
规格：每袋装2g
Claims (2)
1. 一种中药组合物的质量控制方法，其中所述中药组合物组成为：发酵虫草菌粉10～20份，西洋参10～20份；其特征在于该方法中包含如下含量测定方法：
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；30∶70的乙腈-水为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1～0.5mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本发明制剂0.5～1g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，静置1小时后，加热回流3小时，放冷，用甲醇补足损失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2. 根据权利要求1所述中药组合物的质量控制方法，其特征在于其中的鉴别方法包含如下的一种或几种：
(1)取本发明制剂1～2g，加乙醇10～20ml，超声处理20～30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取发酵虫草菌粉对照药材0.5～1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2∶1比例的环己烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本发明制剂1～2g，加乙醇10～20ml，超声处理20～30分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取腺嘌呤对照品、腺苷对照品和尿苷对照品，加稀乙醇制成每1ml各含0.5～1mg的对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以8∶2∶6∶0.3∶0.2比例的氯仿-醋酸乙酯-异丙醇-水-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取本发明制剂2～6g，加水饱和的正丁醇15～20ml，超声处理20～30分钟，滤过，取滤液加氨试液，振摇，放置分层，取上层溶液置水浴上蒸干，残渣加水5～10ml使溶解，转移至经预处理的混合大孔树脂柱上，DA101型与DA201型比例为1∶0.8～1∶1.5，以每分钟0.5～1ml的速度先后用水25～50ml及15％乙醇25～50ml洗涤，洗液弃去，再用75％乙醇25～50ml同上速度洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取西洋参对照药材0.2～0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1和拟人参皂苷F11对照品，加甲醇制成每1ml各含1～2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各4～8μl、对照品溶液2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶40∶20∶10比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，置缸中饱和15分钟后，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，立即于105℃加热数分钟，置日光及365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
(4)取本发明制剂2～6g，加甲醇25～50ml，超声处理20～30分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水使溶解，以水饱和正丁醇提取三次，每次15ml，合并正丁醇液，以氨试液洗涤二次，弃去氨液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取西洋参对照药材0.2～0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、Re、Rg1和拟人参皂苷F11对照品，加甲醇制成每1ml各含1～2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各4～8μl、对照品溶液2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶40∶20∶10比例的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，置缸中饱和15分钟后，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，立即于105℃加热数分钟，置日光及365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
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