CN102145041B - 一种具有治疗多囊卵巢综合症作用的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有治疗多囊卵巢综合症作用的药物组合物及其制备方法和质量检测方法。本发明药物组合物制剂以黄芪、淫羊藿、苍术、茯苓和丹参为原料药，经过特殊制备方法制成各种剂型。药效学实验表明，本发明药物组合物可以降低血糖和胰岛素，降低血清睾酮的含量，在治疗多囊卵巢综合症方面具有重要意义。本发明经过处方筛选实验表明，在对多囊卵巢综合症治疗中最佳配伍比例为：黄芪50g、苍术30g、茯苓30g、淫羊藿30g、丹参10g。

Description

一种具有治疗多囊卵巢综合症作用的药物组合物

发明领域

本发明公开了一种药物组合物及其制备方法和质量检测方法，特别涉及一种具有治疗多囊卵巢综合症作用的药物组合物及其制备方法和质量检测方法。

背景技术

具有月经紊乱，闭经，无排卵，多毛，肥胖，不孕合并双侧卵巢增大呈囊性改变，称为多囊卵巢综合症。患者可具备以上典型症状，也可以只有部分症状，但因排卵障碍而致不孕则是多囊卵巢综合征的主要临床表现。

多囊卵巢综合征的确切病因不详，目前认为是卵巢产生过多雄激素，而雄激素的过量产生是由于体内多种内分泌系统功能异常协同作用的结果。多囊卵巢综合症是以慢性无排卵、闭经或月经稀发、不孕、肥胖、多毛和卵巢多囊性增大为临床特征的综合症候群。多囊卵巢综合征，是多内分泌轴功能紊乱所引起的疾病的终期卵巢病理改变，其最初的神经内分泌变化，是GnRH-GnH释放频率和脉冲振幅增加，LH/FSH比值增高。

多囊卵巢综合症的病因至今尚未定论，一些研究认为与以下几个方面有关：下丘脑垂体功能障碍；肾上腺皮质机能异常；胰岛素抵抗；卵巢局部自分泌旁分泌调控机制异常；遗传因；高泌乳素等。

多囊卵巢综合征最显著的特征是无排卵。由于没有排卵，所以卵巢只分泌雌激素和雄激素，而不分泌孕激素。雌激素刺激子宫内膜增生。而孕激素使子宫内膜发生分泌反应。如果子宫内膜长期受雌激素的作用而无孕激素的作用，就会发生子宫内膜增生过长和子宫内膜癌。另外，也是因为多囊卵巢综合征患者不能排卵，所以她们无法自然怀孕，多囊卵巢综合征患者是最常见的不孕症患者。近年还发现许多多囊卵巢综合征患者有高胰岛素血症，高胰岛素血症患者容易出现糖尿病及心脑血管疾病，因此多囊卵巢综合征也是糖尿病及心脑血管疾病的高危因素。

目前，治疗多囊卵巢综合症的西医药可以临时控制病情，但是难以根治。建议患者采用中药进行治疗，中医治疗需要结合具体脉象进行辩证，从根本上入手，对证用药，可达到正常排卵。

发明内容

本发明的目的在于公开一种具有治疗多囊卵巢综合症作用的药物组合物，本发明的目的还在于公开该药物组合物的制备方法，本发明的目的还在于公开该药物组合物的质量检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的。

本发明药物组合物的原料药组成为：

黄芪20-80重量份      茯苓10-50重量份    苍术10-50重量份

淫羊藿10-50重量份    丹参5-20重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：

黄芪50重量份    茯苓30重量份    苍术30重量份

淫羊藿30重量份  丹参10重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：

黄芪70重量份    茯苓15重量份    苍术15重量份

淫羊藿45重量份  丹参15重量份。

本发明药物组合物的原料药组成优选为：

黄芪30重量份      茯苓45重量份    苍术45重量份

淫羊藿15重量份    丹参8重量份。

取上述原料，加入常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的剂型：片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂。

本发明药物组合物的制备方法包括如下步骤：

取上述原料药，丹参用4-8重量倍80-95％乙醇加热回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加5-12重量倍水浸泡0.5-1.5小时后，煎煮1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规方法制成临床接受的剂型：片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂。

本发明药物组合物的制备方法优选包括如下步骤：

取上述原料药，丹参用6重量倍90％乙醇加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加8重量倍水浸泡1小时后，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规方法制成临床接受的剂型：片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂。

其中，上述苍术优选炒苍术。

本发明药物组合物的质量检测方法包括如下鉴别和含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

A.取本发明药物组合物制剂日服用量的3/5-6/5，加乙醇5-15体积份溶解，超声处理20-40分钟，过滤，滤液蒸干，加乙醇0.5-1.5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷加乙醇制成每1体积份含0.001-0.003重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5-15∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B.取本发明药物组合物制剂日服用量的5/7-10/7，加乙醚5-15体积份，振摇提取20-40分钟，滤过，滤液蒸干，参照加乙酸乙酯0.5-1.5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1体积份含0.001-0.003重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯＝15-25∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝25-40∶60-75为流动相；柱温20-40℃；流速0.5-1.5ml/分钟；蒸发光散射检测器：高纯氮气流速2-3L/分钟；漂移管温度100-110℃；理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.0001-0.0005重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂日服用量的7/10-14/10，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40-80体积份，冷浸过夜，加热回流提取至回流液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水5-15体积份微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取2-6次，每次30-50体积份，合并正丁醇液，用氨试液洗1-3次，每次30-50体积份，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5-15体积份量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液15μl、30μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得；

本发明药物组合物日用制剂量含黄芪按黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计不得低于1.26-2.52mg。

本发明药物组合物的质量检测方法优选包括如下鉴别和含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

A.取本发明药物组合物制剂日服用量的3/5-6/5，加乙醇10体积份溶解，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，加乙醇1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷加乙醇制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B.取本发明药物组合物制剂日服用量的5/7-10/7，加乙醚10体积份，振摇提取30分钟，滤过，滤液蒸干，参照加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝32∶68为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/分钟；蒸发光散射检测器：高纯氮气流速2.5L/分钟；漂移管温度105℃；理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.0003重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂日服用量的7/10-14/10，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60体积份，冷浸过夜，加热回流提取至回流液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10体积份微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40体积份，合并正丁醇液，用氨试液洗2次，每次40体积份，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10体积份量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液15μl、30μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得；

本发明药物组合物日用制剂量含黄芪按黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计不得低于1.26-2.52mg。

本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。本发明药物组合物质量控制方法可以应用于组合物的各种剂型，如片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂等临床可接受的剂型，由于不同剂型的制剂其中所含的相当生药量是相同的，因此各个剂型在进行质量控制时，所选用样品量可统一折算为相当生药量，本质量控制方法中药物组合物制剂可以为每片、每粒、每支或每丸等。

附图说明

图1：专属性考察色谱图；

图2：检测限考察色谱图；

图3：定量限考察色谱图；

图4：色谱柱选择色谱图；

图5：流动相选择色谱图；

图6：柱温考察色谱图；

图7：流速考察色谱图。

本发明药物组合物制剂以黄芪、淫羊藿、苍术、茯苓和丹参为原料药，经过特殊制备方法制成各种剂型。药效学实验表明，本发明药物组合物可以降低血糖和胰岛素，降低血清睾酮的含量，在治疗多囊卵巢综合症方面具有重要意义。本发明经过处方筛选实验表明，在对多囊卵巢综合症治疗中最佳配伍比例为：黄芪50g、苍术30g、茯苓30g、淫羊藿30g、丹参10g。

下述实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。

实验例1本发明药物组合物中丹参提取工艺比较研究

1、处方：黄芪50g  淫羊藿30g  苍术30g    茯苓30g  丹参10g

2、实验材料

(1)实验动物：Wistar健康成年大鼠，雌性70只，体重250±20g；雄性25只，体重300±20g。由沈阳药物研究所提供。

(2)药物及试剂：醇提组：本发明实施例1制备的药物组合物胶囊剂，水提组：将本发明实施例1所述方法中丹参的溶剂换为水，同法制备的药物组合物胶囊剂；睾酮；中性茶油(香油)；睾酮试剂盒(批号：20081201，北京市福星生物工程有限公司)。血糖试纸及血糖仪。

(3)器材：1mm采血管；1ml及5ml注射器；1.5ml离心管；AL204电子分析天平(每特勒-托利多仪器上海有限公司)；DTT-600电子天平(江苏常熟长青仪器仪表厂)。DFM-96型多管放射免疫计数器(合肥众成机电技术公司)。

3、实验方法

(1)模型制备：将健康成年Wistar大鼠按雌雄比例3∶1合笼，夜晚将雌鼠放入雄鼠笼中，次日晨取出，并阴道涂片查找精子，找到精子则视为孕0天。未孕者仍与雄鼠合笼，直到受孕。对达到孕16天的雌鼠随机分别颈背部皮下注射丙酸睾丸酮2.5mg/只及中性茶油对照。连续注射3天。观察产仔情况，最后取所产下的雌鼠，生长至成年，连续2个周期阴道涂片无明显动情周期者则为实验对象。

(2)分组及给药：将20只模型大鼠随机分为2组，即水提组和醇提组，10只/组。水提组按照3.92g/kg、醇提组按照4.02g/kg分别给大鼠灌胃，连续灌胃20天后，给空腹12小时大鼠尾部取血用血糖仪测空腹血糖，然后眶静脉毛细玻管采血1ml，3000转/分离心取血清，用放免法测空腹血清睾酮，操作严格按照试剂盒要求进行。最后给大鼠按照3g/kg灌胃50％葡萄糖，分别测灌糖后0.5h、1h、2h血中葡萄糖含量。结果见表1-表3。

4、实验结果

表1水提组OGTT血糖水平(mmol/L)测定结果(n＝6)

实验结果显示：丹参水提对OGTT血糖水平影响疗前与疗后比较无统计学意义p＞0.05。

表2醇提组OGTT血糖水平(mmol/L)测定结果(n＝7)

实验结果显示：丹参醇提对OGTT血糖水平影响，疗前与疗后比较无统计学意义p＞0.05。

表3丹参醇提与水提组血清睾酮测定结果(ng/ml)

结果显示：水提组治疗后血清睾酮含量较治疗前有所降低，但统计学上无显著性差异。醇提组治疗后血清睾酮含量较治疗前明显降低，统计学上有显著性差异p＜0.05。根据实验结果，丹参采用醇提，可增强原方的治疗效果。

实验例2本发明药物组合物制备工艺研究实验

1.正交法优选水煎煮提取工艺

(1)试验设计

考察浸泡时间、煎煮次数、加水量、煎煮时间四个因素，分别设定三个水平，采用L₉(3⁴)正交表进行试验，以黄芪甲苷提取量和出膏率为评价指标，优化提取参数。因素水平见表4，正交设计见表5。

表4因素水平表

表5正交设计表

(2)试验步骤

称取黄芪100g、炒苍术60g、茯苓60g、淫羊藿60g，按正交表中的试验序列分别进行试验，即用C倍量水浸泡A小时后煎煮B次，每次D小时，过滤，合并滤液，浓缩至稠膏状，转移至鼓风干燥箱中干燥至恒重，称重，计算出膏率，并测定干膏中黄芪甲苷的含量，计算黄芪甲苷的提取量，综合直观分析和方差分析，确定最优提取工艺。

(3)出膏率的测定

取正交设计的9次试验所得干膏，称取重量，计算出膏率，结果见表6。

(4)干膏中黄芪甲苷含量测定

色谱条件：

仪器：Waters2695型高效液相色谱仪，Alltech2000型蒸发光散射检测器。

色谱柱：Waters Symmetry^TM RP18柱(150mm×4.5mm，5μm)。

流动相：乙腈-水(32∶68)。

流速：1.0ml/min    柱温：30℃。

蒸发光散射检测：漂移管温度105℃，氮气流速：2.5ml/min。

供试品溶液制备：

取干膏粗粉2.0g，精密称定，置于锥形瓶中，加入甲醇30ml，密封，超声提取30min，过滤，锥形瓶和残渣用20ml甲醇分两次洗涤，过滤，合并滤液，水浴挥干，残渣用水10ml微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，弃去氨试液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用甲醇少量多次溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

标准曲线制备：

取黄芪甲苷对照品适量，用甲醇制成浓度为0.31mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液。取黄芪甲苷对照品溶液，分别吸取5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，进样分析，记录黄芪甲苷峰面积，以峰面积的对数(Y)为纵坐标，进样量(μg)的对数(X)为横坐标，计算线性回归方程为：Y＝1.5776X+11.0671，相关系数为0.9993，表明黄芪甲苷在1.55～7.75μg的进样量范围内对数线性关系良好。

含量测定：

取正交设计中9次试验所得干膏，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，进样10μl，记录黄芪甲苷峰面积，代入回归方程，计算干膏中黄芪甲苷的含量，进而计算提取量，结果见表6。

(5)正交试验数据处理

对正交试验数据进行直观分析(表6)和方差分析(表7和表8)。方差分析结果表明，影响出膏率和黄芪甲苷提取量的因素大小均为B＞D＞A＞C，其中B和D对出膏率有显著影响，B对黄芪甲苷提取量有极显著影响，D对黄芪甲苷提取量有显著影响。从直观分析看B对出膏率和黄芪甲苷提取量的影响大小均依次为B₃＞B₂＞B₁，但B₂和B₃水平对黄芪甲苷提取量的影响差异很小，考虑到以有效成分为主要评价指标以及保证有效成分溶出的前提下尽量减少出膏率，故选择B₂水平。同样道理，D因素宜选择D₂水平。A和C对两个指标的影响都没有显著差异，为减少能耗，选择最低水平，即A₁、C₁。综上，确定最佳提取工艺为A₁B₂C₁D₂，即用8倍量水浸泡1小时后煎煮2次，每次2小时。

表6正交试验设计测定结果

表7出膏率方差分析表

F_0.05(2.2)＝19.00，F_0.01(2.2)＝99.00

表8黄芪甲苷提取量方差分析表

F_0.05(2.2)＝19.00，F_0.01(2.2)＝99.00

2、正交法优选丹参醇提工艺

(1)试验设计

考察乙醇浓度、提取次数、提取时间、乙醇用量四个因素，分别设定三个水平，采用L9(3⁴)正交表进行试验，以丹参酮II A含量和出膏率为评价指标，优化提取参数。因素水平表见表9，正交设计表见表10。

表9因素水平表

表10正交设计表

(2)试验步骤

称取丹参药材150g，先浸泡1小时，然后按正交表中的试验序列分别进行试验，即用D倍量A浓度醇回流提取B次，每次C小时，过滤，合并滤液，称量提取后体积，并取体积的1/300备测定含量用，其余滤液60℃减压回收乙醇[1]，浓缩至稠膏状，转移至鼓风干燥箱中60℃干燥，称重，计算出膏率，并测定所提溶液中丹参酮IIA的含量，综合直观分析和方差分析，确定最优提取工艺。

(3)出膏率的测定

取正交设计的9次试验所得干膏，称取重量，计算出膏率，结果见表12。

(4)丹参醇提中丹参酮IIA含量测定

色谱条件：

仪器：Waters2695型高效液相色谱仪

色谱柱：Waters Symmetry^TM RP18柱(1504.5mm，5μm)。

流动相：甲醇-水(75∶25)。

流速：1.0ml/min    检测波长：270nm    柱温：30℃

对照品溶液的制备：

精密称取丹参酮IIA对照品10mg，置50ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。(每1ml中含丹参酮IIA17.376μg)

供试品溶液制备：

取上述(2)中备用溶液分别加相对应浓度乙醇定容置25ml棕色容量瓶中，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

标准曲线制备：

丹参酮II A对照品系中国药品生物制品检定所提供，为供含量测定用，批号：110766-200417，纯度为98.02％，符合规定。

分别精密吸取2、4、6、8、10、12μl，按上述流动相条件，分别注入液相色谱仪，测得结果见表11。

表11标准曲线数据表

将上述数据以进样量微克数为横坐标，吸收峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：y＝5.3671E+06x-50507(r＝0.9998)具有良好的线性关系。结果表明：丹参酮II A在0.0347μg～0.2085μg之间有良好的线性关系。

含量测定：

取正交设计中9次试验所得供试品溶液，进样10μl，记录丹参酮IIA峰面积，计算干膏中丹参酮IIA的含量，结果见表12。

表12正交试验设计测定结果

表13出膏率方差分析表

F 0.05(2.2)＝19.00，F 0.1(2.2)＝9.00

表14丹参酮IIA含量方差分析表

F 0.05(2.2)＝19.00，F 0.1(2.2)＝9.00

(5)正交试验数据处理

对正交试验数据进行直观分析(表12)和方差分析(表13、14)。从直观分析结果可见，四个因素对脂溶性成分丹参酮IIA含量影响大小的顺序为A＞C＞B＞D，说明乙醇浓度是控制丹参提取工艺的最关键因素，乙醇用量对丹参提取工艺影响最小。提取丹参酮II A的最佳方案应为A₃B₂C₁D₂，从方差分析表15、16可见，D因素无显著性差异，为适应工业大生产，节约成本，D因素选择水平3。即溶剂用量为6倍量。因此丹参醇提最佳工艺为A₃B₂C₁D₃，即加90％乙醇6倍量，回流提取2次，每次1小时。

3、本发明药物组合物提取工艺

取实施例1所述原料药中的丹参，用6倍量90％乙醇加热回流提取二次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用。取其余黄芪等四味药加8倍量水浸泡1小时后，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成稠膏，干燥，得本发明药物组合物提取物。

(1)成型工艺研究

本发明药物组合物提取物种含有丹参醇提物，易于吸潮，故加入适量淀粉，增加流动性。因此，按照胶囊剂的基本工艺制法，取本发明药物组合物提取物和适量淀粉，粉碎成细粉，结果显示粉末均匀整齐，流动性好，无引湿现象，适合装囊。

取处方量药材进行工艺小试，提取物干燥并加淀粉粉碎后共得615g粉，出粉率为99.2％。经预试验，胶囊装量平均为0.35g/粒。

(2)中试研究

按处方量扩大30倍，进行三批中试，数据与产量见表15。

表15中试数据表

数据表明，中试三批均能重复所研究之工艺，产量基本无出入，故工艺设计是合理的，是切实可行的。

实验例3本发明药物组合物质量检测方法研究实验

1、色谱条件

仪器：Waters 2695型高效液相色谱仪

Alltech ELSD 2000型蒸发光散射检测器

Empower pro色谱工作站

色谱柱：Waters Symmetry C₁₈柱(4.6×150mm，5μm)，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

流动相：乙腈-水(32∶68)

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

高纯氮气体流速：2.5L/min

漂移管温度：105℃

2、供试品溶液制备

取本发明实施例1制备的药物组合物胶囊剂内容物约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60ml，冷浸过夜，加热回流提取至提取液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液洗2次，每次40ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3、阴性对照液的制备

按处方和制法制备不含黄芪的样品，按“供试品溶液制备”方法制备阴性对照液。

4、对照品溶液制备

精密称取黄芪甲苷对照品3.14mg，加甲醇使溶解，定容于10ml容量瓶中，即得。

5、供试品溶液制备方法考察

(1)回流提取时间考察：称取本发明实施例1制备的药物组合物胶囊剂内容物3份，每份约4g，精密称定，按“供试品溶液制备”项下拟定的流程操作，分别回流提取2小时、3小时和提取至回流溶液无色，制得3份供试品溶液，测定黄芪甲苷的峰面积，采用外标两点法计算黄芪甲苷的含量，结果见表6。表明提取至回流溶液无色时，测定黄芪甲苷的含量最大，因此确定甲醇回流提取至无色，以保证黄芪甲苷提取完全。

表16不同回流提取时间测得黄芪甲苷的含量

(2)萃取次数考察：称取本发明实施例1制备的药物组合物胶囊剂内容物3份，每份约4g，精密称定，按“供试品溶液制备”项下拟定的流程操作，正丁醇萃取次数分别为3、4、5次，制得3份供试品溶液，测定黄芪甲苷的峰面积，采用外标两点法计算黄芪甲苷的含量，结果见表17。表明正丁醇萃取4次时黄芪甲苷含量已无显著增加，故确定萃取次数为4次。

表17正丁醇萃取不同次数测得黄芪甲苷的含量

6、系统适用性试验

按上述设定的色谱条件，分别采集供试品溶液、黄芪阴性液和黄芪甲苷对照品溶液的色谱图，见附图1。结果阴性液色谱中在黄芪甲苷峰位置处无干扰，理论板数按黄芪甲苷峰计不少于2000。

7、方法学考察

(1)标准曲线制备及线性范围考察

黄芪甲苷对照品系中国药品生物制品检定所提供，系供含量测定用，批号：0781-200109。

精密称取黄芪甲苷对照品14.45mg，加甲醇使溶解，定容于25ml容量瓶中，制成浓度为0.578mg/ml的溶液，作为对照品储备液。分别精密吸取1、2、3、4ml，用甲醇稀释至5ml容量瓶中，分别制得浓度为0，1156、0.2312、0.3468、0.4624mg/ml的对照品溶液。取上述对照品溶液和储备液，分别进样20μl，测定黄芪甲苷峰面积。以峰面积对数为纵坐标，以进样量(μg)对数为横坐标，计算线性回归方程，结果见表18。表明黄芪甲苷在2.312-11.56μg进样量范围内对数线性关系良好。

表18黄芪甲苷标准曲线数据及结果

(2)精密度考察

取对照品溶液，按设定的色谱条件进行测定，连续进样测定5次，各进20μl，结果见表19。

表19精密度数据及结果

从表中看出，对照品面积积分值相对偏差为2.8％，说明精密度良好，测定可靠。

(3)稳定性考察

称取本发明实施例1制备的药物组合物胶囊剂内容物约4g，精密称定，按“供试品溶液制备”方法制备供试品溶液，自制备后0、2、4、8、12、24小时进样分析，每次进样20μ1，记录黄芪甲苷峰面积，结果见表20。

表20稳定性测定数据及结果

从表中看出，供试品溶液在制备后24小时内稳定，此期间测定是准确的。

(4)重复性考察

取同一批号供试品，称取6份，每份约4g，精密称定，按“供试品溶液制备”方法分别制备供试品溶液，按设定的色谱条件进行测定，结果见表21，表明本方法重复性良好。

表21重复性测定数据及结果

(5)加样回收率考察

取已知含量的样品，取内容物混匀，称取6份，每份约2g，精密称定，分别加入一定量的黄芪甲苷，按“供试品溶液制备”方法制备，按设定色谱条件进行分析，测定黄芪甲苷含量，计算加样回收率，

结果见表22，表明本方法回收率良好，测定准确。

表22回收率测定数据及结果

(6)检测限和定量限考察

取0.314mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液，逐次稀释，按设定色谱条件进样分析，记录黄芪甲苷和噪音的峰高比为10∶1时黄芪甲苷对照品的进样量，即为定量限，为0.628μg。记录黄芪甲苷和噪音的峰高比为3∶1时黄芪甲苷对照品的进样量，即为检测限，为0.314μg。见附图2和3。

8、耐用性

(1)色谱柱考察

选择不同规格的同类型色谱柱进行比较，即Waters Symmetry C₁₈柱(4.6×150mm，5μm)和Dimonsil C₁₈柱(4.6×150mm，5μm)，确定色谱柱的规格，采集色谱图，见附图4。结果两个品牌同规格的色谱柱黄芪甲苷保留时间无较大差异。

(2)流动相比例考察

拟定了3个流动相比例进行比较，即乙腈-水(30∶70)、乙腈-水(32∶68)、乙腈-水(35∶65)，采集色谱图，见附图5。结果表明流动相比例有小的变动时黄芪甲苷保留时间无较大变化，乙腈-水比例为32∶68时较适中。

(3)柱温考察

拟定了三个温度进行柱温考察，即25℃、30℃、35℃，采集色谱图，见附图6。结果柱温有较小变动时，黄芪甲苷保留时间无较大变化，30℃时黄芪甲苷保留时间较适中。

(4)流速考察

拟定了三个流速进行考察，即0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min，采集色谱图，见附图7。结果表明流速有小的变动时黄芪甲苷保留时间无较大变化，流速为1.0ml/min时黄芪甲苷保留时间适中。

9、供试品含量测定

取本发明实施例1制备的药物组合物胶囊剂内容物3批，按“供试品溶液制备”方法分别制备供试品溶液，按确定的色谱条件进行分析，采用对数方程外标两点法计算黄芪甲苷的含量，结果见表23。

表23  3批样品含量测定结果

取3批样品测定平均值按降幅20％计为本品含量限定值，则其含量应不低于0.60mg/g。按每粒重0.35g计算，则每粒本发明药物组合物胶囊剂内容物中含黄芪甲苷的量应不低于0.21mg。

实验例4本发明药物组合物配伍比例研究

1、实验材料

(1)实验动物：同实验例1。

(2)药物及试剂：表25所述的实验药品，由黑龙江中医药大学中医药研究院提供；其余同实验例1。

(3)器材：同实验例1。

2、实验方法

(1)模型制备：同实验例1。

(2)分组及给药：实验采用正交设计，正交表L₉(3⁴)

表24原料药配比因素

表25实验药物表格

各组分别按临床等效量(模型组和空白组给等体积蒸馏水)连续灌胃20天后，将空腹12小时大鼠尾部取血用血糖仪测空腹血糖，然后眶静脉毛细玻璃管采血1ml，3000转/分离心取血清，用放免法测空腹血清睾酮及胰岛素含量，操作严格按照试剂盒要求进行。最后给大鼠按照3g/kg灌胃50％葡萄糖，分别测灌糖后0.5h、1h、2h血中葡萄糖含量及灌糖后0.5h血清中胰岛素含量。结果见表26。

表26  模型组与空白组结果比较

结果显示：造模是成功的。

表27  OGTT空腹血糖方差分析结果

结果显示：原方中各单味药剂量大小对模型大鼠葡萄糖曲线下面积没有显著影响。

表28  OGTT空腹血糖直观分析结果

结果显示：降低空腹血糖最佳配伍关系为：

淫羊藿20g、苍术20g、茯苓30g、丹参30g

表29  OGTT0.5小时血糖方差分析结果

结果显示：方中苍术、茯苓剂量大小对模型大鼠OGTT0.5小时血糖含量有显著影响p＜0.05。

表30  OGTT0.5小时血糖直观分析结果

结果显示：原方降低OGTT0.5小时血糖最佳配伍关系为：

淫羊藿20g、苍术30g、茯苓30g、丹参30g

表31  OGTT1小时血糖方差分析结果

结果显示：原方中各单味药剂量大小对模型大鼠OGTT1小时血糖没有显著影响。

表32  OGTT1小时血糖直观分析结果

结果显示：原方降低OGTT1小时血糖最佳配伍关系为：

淫羊藿20g、苍术30g、茯苓30g、丹参30g

表33OGTT2小时血糖方差分析结果

结果显示：原方中各单味药剂量大小对模型大鼠OGTT2小时血糖没有显著影响。

表34OGTT2小时血糖直观分析结果

结果显示：原方降低OGTT2小时血糖最佳配伍关系为：

淫羊藿20g、苍术10g、茯苓30g、丹参30g

表35葡萄糖曲线下面积方差分析结果

结果显示：原方中各单味药剂量大小对模型大鼠葡萄糖曲线下面积没有显著影响。

表36葡萄糖曲线下面积直观分析结果

结果显示：原方降低葡萄糖曲线下面积最佳配伍关系为：

淫羊藿20g、苍术30g、茯苓30g、丹参30g

表37空腹胰岛素方差分析结果

结果显示：方中淫羊藿、丹参剂量大小对模型大鼠空腹胰岛素有显著影响p＜0.05。

表38空腹胰岛素直观分析结果

结果显示：原方降低模型大鼠空腹胰岛素最佳配伍关系为：

淫羊藿30g、苍术10g、茯苓50g、丹参10g

表390.5小时胰岛素方差分析结果

结果显示：原方中各单味药剂量大小对模型大鼠0.5小时胰岛素含量没有显著影响。

表400.5小时胰岛素直观分析结果

结果显示：原方降低0.5小时胰岛素最佳配伍关系为：

淫羊藿30g、苍术30g、茯苓50g、丹参20g

表41胰岛素抵抗指数方差分析结果

结果显示：原方中各单味药剂量大小对模型大鼠胰岛素抵抗指数没有显著影响。

表42胰岛素抵抗指数直观分析结果

结果显示：原方降低胰岛素抵抗指数最佳配伍关系为：

淫羊藿30g、苍术10g、茯苓50g、丹参10g

表43睾酮方差分析结果

结果显示：原方中各单味药剂量大小对模型大鼠空腹血清睾酮没有显著影响。

表44睾酮直观分析结果

结果显示：原方降低空腹血清睾酮最佳配伍关系为：

淫羊藿30g、苍术10g、茯苓30g、丹参30g

实验结论：对以上表27-44多指标进行综合平衡分析，①在对模型大鼠OGTT0.5小时血糖影响的实验中，方中苍术、茯苓剂量大小对此指标的影响有显著的不同p＜0.05，即苍术30g、茯苓30g对降OGTT0.5小时血糖作用分别显著大于其它两个剂量。②在对模型大鼠空腹胰岛素影响的实验中，方中淫羊藿、丹参剂量大小对此指标的影响有显著的不同p＜0.05，淫羊藿30g、丹参10g对降空腹胰岛素的作用分别显著大于其它两个剂量。③在对其它指标影响的实验中各单味药剂量大小对指标影响不大。综合以上结果，原方在对多囊卵巢综合症治疗中最佳配伍比例为：黄芪50g、苍术30g、茯苓30g、淫羊藿30g、丹参10g。

下述实施例均能实现上述实验例所述效果。

具体实施方式

实施例1：本发明药物组合物胶囊剂

黄芪500g      茯苓300g  苍术300g

淫羊藿300g    丹参100g。

取上述原料药，丹参用6重量倍90％乙醇加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加8重量倍水浸泡1小时后，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，制成胶囊剂1000粒，每粒0.35g，口服每天2-3次，每次2-4粒。

实施例2：本发明药物组合物片剂

黄芪700g      茯苓150g  炒苍术150g

淫羊藿450g    丹参150g。

取上述原料，加入常规辅料，按照常规工艺制成本发明药物组合物片剂。

实施例3：本发明药物组合物颗粒剂

黄芪300g      茯苓450g  苍术450g

淫羊藿150g    丹参80g。

取上述原料药，丹参用6重量倍90％乙醇加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加8重量倍水浸泡1小时后，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规方法制成本发明药物组合物颗粒剂。

实施例4：本发明药物组合物口服液

黄芪500g      茯苓300g  苍术300g

淫羊藿300g    丹参100g。

取上述原料，加入常规辅料，按照常规工艺制成本发明药物组合物口服液。

实施例5：本发明药物组合物缓释剂

黄芪500g      茯苓300g  炒苍术300g

淫羊藿300g    丹参100g。

取上述原料，加入常规辅料，按照常规工艺制成本发明药物组合物缓释剂。

实施例6：实施例1所述本发明药物组合物胶囊剂的检测方法

鉴别：

A.取本发明药物组合物胶囊剂内容物粉末2.5g，加乙醇10体积份溶解，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，加乙醇1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷加乙醇制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B.取本发明药物组合物胶囊剂内容物粉末3g，加乙醚10体积份，振摇提取30分钟，滤过，滤液蒸干，参照加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮II A对照品，加乙酸乙酯制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝32∶68为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/分钟；蒸发光散射检测器：高纯氮气流速2.5L/分钟；漂移管温度105℃；理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.0003重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物胶囊剂内容物粉末4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60体积份，冷浸过夜，加热回流提取至回流液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10体积份微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40体积份，合并正丁醇液，用氨试液洗2次，每次40体积份，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10体积份量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液15μl、30μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得；

本发明药物组合物胶囊剂每粒含黄芪按黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计不得低于0.21mg。

实施例7：实施例2所述本发明药物组合物片剂的检测方法

鉴别：

取本发明药物组合物片剂日服用量的3/5-6/5，加乙醇10体积份溶解，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，加乙醇1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷加乙醇制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝32∶68为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/分钟；蒸发光散射检测器：高纯氮气流速2.5L/分钟；漂移管温度105℃；理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.0003重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物片剂日服用量的7/10-14/10，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60体积份，冷浸过夜，加热回流提取至回流液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10体积份微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40体积份，合并正丁醇液，用氨试液洗2次，每次40体积份，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10体积份量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液15μl、30μl，供试品溶液20μ1，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得；

本发明药物组合物日用制剂量含黄芪按黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计不得低于1.26-2.52mg。

实施例8：实施例3所述本发明药物组合物颗粒剂的检测方法

含量测定：照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝32∶68为流动相；柱温30℃；流速1.0mml/分钟；蒸发光散射检测器：高纯氮气流速2.5L/分钟；漂移管温度105℃；理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.0003重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂日服用量的7/10-14/10，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60体积份，冷浸过夜，加热回流提取至回流液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10体积份微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40体积份，合并正丁醇液，用氨试液洗2次，每次40体积份，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10体积份量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液15μl、30μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得；

本发明药物组合物日用制剂量含黄芪按黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计不得低于1.26-2.52mg。

实施例9：实施例4所述本发明药物组合物口服液的检测方法

鉴别：

A.取本发明药物组合物制剂日服用量的3/5-6/5，加乙醇10体积份溶解，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，加乙醇1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷加乙醇制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B.取本发明药物组合物制剂日服用量的5/7-10/7，加乙醚10体积份，振摇提取30分钟，滤过，滤液蒸干，参照加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮II A对照品，加乙酸乙酯制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

Claims (10)

1.一种具有治疗多囊卵巢综合症作用的药物组合物，其特征在于该药物组合物由如下方法制成：该药物组合物的原料药组成为：

黄芪20-80重量份    茯苓10-50重量份  苍术或炒苍术10-50重量份

淫羊藿10-50重量份  丹参5-20重量份；

取原料药，丹参用4-8重量倍80-95％乙醇加热回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加5-12重量倍水浸泡0.5-1.5小时后，煎煮1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规方法制成临床接受的剂型：片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

黄芪50重量份    茯苓30重量份  苍术或炒苍术30重量份

淫羊藿30重量份  丹参10重量份。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

黄芪70重量份    茯苓15重量份  苍术或炒苍术15重量份

淫羊藿45重量份  丹参15重量份。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为：

黄芪30重量份    茯苓45重量份  苍术或炒苍术45重量份

淫羊藿15重量份  丹参8重量份。

5.如权利要求1-4任一所述的药物组合物，其特征在于取该药物组合物由如下方法制成：

取原料药，丹参用6重量倍90％乙醇加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加8重量倍水浸泡1小时后，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规方法制成临床接受的剂型：片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂。

6.如权利要求1-4任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

取原料药，丹参用4-8重量倍80-95％乙醇加热回流提取1-3次，每次0.5-1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加5-12重量倍水浸泡0.5-1.5小时后，煎煮1-3次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规方法制成临床接受的剂型：片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂。

7.如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

取原料药，丹参用6重量倍90％乙醇加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，备用；其余黄芪、茯苓、淫羊藿和苍术四味药加8重量倍水浸泡1小时后，煎煮2次，每次2小时，过滤，合并滤液，与上述备用液合并，浓缩成常温下密度为1.2-1.5的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加入常规辅料，按照常规方法制成临床接受的剂型：片剂、颗粒剂、口服液体制剂、丸剂、胶囊剂、缓释制剂或注射剂。

8.如权利要求1-4任一所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法为：

鉴别：

A.取本发明药物组合物制剂日服用量的3/5-6/5，加乙醇5-15体积份溶解，超声处理20-40分钟，过滤，滤液蒸干，加乙醇0.5-1.5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷加乙醇制成每1体积份含0.001-0.003重量份的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝5-15∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B.取本发明药物组合物制剂日服用量的5/7-10/7，加乙醚5-15体积份，振摇提取20-40分钟，滤过，滤液蒸干，参照加乙酸乙酯0.5-1.5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮II A对照品，加乙酸乙酯制成每1体积份含0.001-0.003重量份的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯＝15-25∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝25-40∶60-75为流动相；柱温20-40℃；流速0.5-1.5ml/分钟；蒸发光散射检测器：高纯氮气流速2-3L/分钟；漂移管温度100-110℃；理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.0001-0.0005重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂日服用量的7/10-14/10，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40-80体积份，冷浸过夜，加热回流提取至回流液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水5-15体积份微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取2-6次，每次30-50体积份，合并正丁醇液，用氨试液洗1-3次，每次30-50体积份，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5-15体积份量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液15μl、30μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得；

本发明药物组合物日用制剂量含黄芪按黄芪甲苷计不得低于1.26-2.52mg。

9.如权利要求8所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法为：

鉴别：

A.取本发明药物组合物制剂日服用量的3/5-6/5，加乙醇10体积份溶解，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，加乙醇1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷加乙醇制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝10∶1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B.取本发明药物组合物制剂日服用量的5/7-10/7，加乙醚10体积份，振摇提取30分钟，滤过，滤液蒸干，参照加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制成每1体积份含0.002重量份的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2005年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯＝19∶1为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照高效液相色谱法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水＝32∶68为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/分钟；蒸发光散射检测器：高纯氮气流速2.5L/分钟；漂移管温度105℃；理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.0003重量份的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂日服用量的7/10-14/10，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇60体积份，冷浸过夜，加热回流提取至回流液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10体积份微热使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40体积份，合并正丁醇液，用氨试液洗2次，每次40体积份，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10体积份量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液15μl、30μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点对数方程计算，即得；

本发明药物组合物日用制剂量含黄芪按黄芪甲苷计不得低于1.26-2.52mg。

10.如权利要求1-5任一所述的药物组合物在制备具有治疗多囊卵巢综合症作用的药物中的应用。

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