CN107238671B - 一种贞芪扶正制剂中多种成分的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及了一种贞芪扶正制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素四种有效成分的含量测定方法。它以红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素为对照品，以甲醇：水/0.01％～5％磷酸水溶液/0.01％～5％甲酸水溶液/0.01％～5％冰醋酸水溶液＝5～100：95～0或者乙腈：水/0.01％～5％磷酸水溶液/0.01％～5％甲酸水溶液/0.01％～5％冰醋酸水溶液＝5～100：95～0为流动相的高效液相色谱法。与现有技术相比，本所述方法的同时测定四种有效成分含量，质量表征全面，专属性强，稳定性高，测量结果准确，达到了有效控制改制剂质量的目的，确保了该制剂相关产品质量的稳定及临床用药的安全。

Description

一种贞芪扶正制剂中多种成分的含量测定方法
技术领域
本发明涉及了一种贞芪扶正制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素四种有效成分的含量测定方法，属于中药质量检测技术领域。
背景技术
贞芪扶正制剂处方有女贞子、黄芪两味中药材组成，具有扶正固本、补气养阴的功效，经临床应用并证明，为目前良好的免疫功能增强剂，具有提高人体免疫功能，保护骨髓，肾上腺皮质和肝脏功能，适用于各种疾病引起的虚损、久病(肝硬化、慢性萎缩性胃炎、糖尿病、结核病等)、术后、产后患者的恢复；对癌症病人放、化疗期间有辅助治疗作用，能明显提高病人的远期疗效，促进正常功能的恢复。目前已有的相关剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂等。
本制剂由女贞子及黄芪两味药材组成，在现行质量标准中鉴别项和含量测定项仅控制黄芪药材的质量，质量控制体系单一。现代药理学表明，女贞子中红景天苷及特女贞干具有免疫调节和抗氧化的作用，黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素及黄芪甲苷也有提高免疫的药理作用。因此在现有质量标准的基础上，增加多指标有效成分的含量测定，有利于该制剂的质量及临床应用的稳定性。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种贞芪扶正制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素四种有效成分的含量测定方法，以期能够对制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的含量进行快速、准确、高重现率、高回收率的测定。
本发明完成前为发现对该制剂进行红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素四种成分同时测定的报道。
本发明所述的的贞芪扶正制剂：黄芪药材、女贞子药材以2：1的重量比例加水煎煮三次，合并煎液，滤过，滤液浓缩，喷雾干燥，加适量辅料，制成各种剂型。
本发明采用如下的技术方案：
一种贞芪扶正制剂中多种有效成分的含量测定方法，以红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素为对照，以甲醇：水/0.01％～5％磷酸水溶液/0.01％～5％甲酸水溶液/0.01％～5％冰醋酸水溶液＝5～100：95～0或者乙腈：水/0.01％～5％磷酸水溶液/0.01％～5％甲酸水溶液/0.01％～5％冰醋酸水溶液＝5～100：95～0为流动相的高效液相色谱法。
对制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的含量测定按照如下步骤进行：
(1)色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂；以甲醇：水/0.01％～5％磷酸水溶液/0.01％～5％甲酸水溶液/0.01％～5％冰醋酸水溶液＝5～100：95～0或者乙腈：水/0.01％～5％磷酸水溶液/0.01％～5％甲酸水溶液/0.01％～5％冰醋酸水溶液＝5～100：95～0为流动相；柱温20～40℃；检测波长为210～275nm；流速为0.8～1.2mL/min；理论塔板数以红景天苷计不得少于3000。
(2)对照品溶液的制备：取红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素对照品适量，加甲醇制成浓度分别含红景天苷0.13mg/mL、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.14mg/mL、特女贞苷0.20mg/mL、芒柄花素0.015mg/mL的溶液，即得。
(3)供试品溶液的制备：取贞芪扶正制剂5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得。
(4)测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明所述的贞芪扶正制剂中红景天苷(C14H20O7)含量不得少于0.16mg/g，特女贞苷(C31H42O17)含量不得少于0.8mg/g，毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)含量不得少于35μg/g，芒柄花素(C16H12O4)含量不得少于4μg/g。
为确保本发明含量测定方法的科学性及合理性，申请人进行了一系列试验研究和考察。
一仪器与试药(见表1)
表1仪器与试药
Figure BDA0001373620310000021
Figure BDA0001373620310000031
二方法与结果
1、色谱条件的选择
1.1柱温的选择
对不同柱温对各成分的分离情况进行考察，确定最佳柱温，结果见表2
表2不同柱温对成分分离的影响
柱温(℃) 25℃ 30℃ 35℃
分离效果 有色谱峰未分开 分离效果较好 有色谱峰未分开
由表2的结果可知，柱温30℃时分离效果最好。
1.2流速的选择
对不同流速对各成分的分离情况进行考察，确定最佳流速，结果见表3
表3不同流速对成分分离的影响
Figure BDA0001373620310000032
由表3的结果可知，将流速设置为1ml/min可达到较好的分离效果。
1.3流动相的选择
对不同流动相系统的分离效果进行考察，结果见表4
表4不同流动相系统的分离效果
Figure BDA0001373620310000033
Figure BDA0001373620310000041
由表4可知，采用乙腈-水流动相体系，所得到的色谱峰效果最好。
2对照品溶液的制备
取红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素对照品适量，加甲醇制成浓度分别含红景天苷0.13mg/mL、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.14mg/mL、特女贞苷0.20mg/mL、芒柄花素0.015mg/mL的溶液，即得。
3供试品溶液的制备
取贞芪扶正制剂5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得。
通过对比超声和回流两种方法所得的成分含量结果表明，在相同条件下，二者成分的提出率相近，考虑超声操作简便的优点，选定超声为提取方式。
4检测波长的选择
用二极管阵列检测器(DAD)以200～400nm波长进行扫描的对比各波长下红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的色谱图，结果发现在检测波长220nm时上述4个成分检出效果较好，
5标准曲线的制备红景天苷
精密取分别含红景天苷0.2576mg/ml、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.2865mg/ml、特女贞苷0.5129mg/ml、芒柄花素30μg/ml的混合对照品溶液1、2、3、4、5ml于10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，进样10μL，以所含对照品的量为X轴，峰面积为Y轴，绘制回归方程，结果见表5.
表5回归方程
对照品 方程 R<sup>2</sup>
红景天苷 y＝21.621x-10.436 1
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 y＝6.8725x-42.55 1
特女贞苷 y＝0.0321x+0.0327 0.9998
芒柄花素 y＝32.132x+0.0327 0.9998
6精密度试验
取上述对照品溶液10μL，重复进样6次，计算红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的峰面积RSD值，结果红景天苷RSD值为0.59％，毛蕊异黄酮葡萄糖苷RSD值为0.67％，特女贞苷RSD值为0.32％，芒柄花素苷RSD值为0.97％，表明该方法精密度良好。
7稳定性试验
按照供试品制备方式制备样品，吸取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、18、24h内进样，计算得到各成分峰面积的RSD值为红景天苷0.73％，毛蕊异黄酮葡萄糖苷46％，特女贞苷83％，芒柄花素苷1.03％，表明样品溶液在24h内稳定性良好。
8重复性试验
按照供试品制备方式平行制备6份样品，各进样10μL，记录峰面积，计算各成分的含量及RSD值，结果得到红景天苷含量为0.20mg/g，RSD为0.68％，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为0.042mg/g，RSD为0.95％，特女贞苷含量为1.01mg/g，RSD为1.02％，芒柄花素苷含量为53μg/g，RSD为0.76％，表明重复性良好。
9加样回收率试验
取已知含量的贞芪扶正制剂6份，分别精密加入红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素对照品，按供试品制备方式进行样品溶液的制备，进行测定，计算各成分的平均回收率，结果见表6.
表6加样回收率试验结果
Figure BDA0001373620310000051
Figure BDA0001373620310000061
由表5可知，各成分的平均回收率均在95％～105～之间，RSD值均小于2％，说明本方法可行。
10样品的含量测定
取10批贞芪扶正颗粒适量，精密称定，分别按照供试品制备方式进行制备，按照所述色谱条件进行测定，计算10批制剂的红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的含量。结果见表7.
表7 10批制剂的含量测定结果
Figure BDA0001373620310000062
本发明与现有技术相比，通过采用高效液相色谱法对贞芪扶正制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的同步含量进行测定，所述的质量表征较全面，方法专属性强，精密度高，重复性好，回收率高，稳定性高，测量结果精确，可有效的控制制剂的质量，确保了相关制剂产品质量的稳定性及临床的应用安全。
具体实施方式
本发明实施例1：贞芪扶正颗粒中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的含量测定方法：
(1)色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂；以乙腈(A)-水(B)为流动相，梯度洗脱：0～10min，95％(A)～90％(A)，10～30min，90％(A)～78％(A)，30～40min，78％(A)～73％(A)，40～55min，73％(A)～45％(A)；柱温35℃；检测波长为220nm；流速为0.8mL/min；理论塔板数以红景天苷计不得少于3000。
(2)对照品溶液的制备：取红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素对照品适量，加甲醇制成浓度分别含红景天苷0.13mg/mL、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.35mg/mL、特女贞苷0.2mg/mL、芒柄花素0.015mg/mL的溶液，即得。
(3)供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取贞芪扶正制剂5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得。
(4)测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明实施例2：贞芪扶正胶囊中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素的含量测定方法：
(1)色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂；以乙腈(A)-0.02％甲酸水溶液(B)为流动相，梯度洗脱：0～10min，95％(A)～90％(A)，10～30min，90％(A)～78％(A)，30～40min，78％(A)～73％(A)，40～55min，73％(A)～45％(A)。；30℃；检测波长220nmnm；流速为1mL/min；理论塔板数以红景天苷计不得少于3000。
(2)对照品溶液的制备：取红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素对照品适量，加甲醇制成浓度分别含红景天苷0.13mg/mL、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.35mg/mL、特女贞苷0.2mg/mL、芒柄花素0.015mg/mL的溶液，即得。
(3)供试品溶液的制备：取贞芪扶正胶囊内容物5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得。
(4)测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
上述实例中的所有条件参数的任意组合，均可得到一致的含量测定结果。本发明所述的贞芪扶正制剂中红景天苷(C14H20O7)含量不得少于0.16mg/g，特女贞苷(C31H42O17)含量不得少于0.8mg/g，毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)含量不得少于35μg/g，芒柄花素(C16H12O4)含量不得少于4μg/g。

Claims (3)

1.一种贞芪扶正制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素四种有效成分的含量测定方法，其特征在于：以红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素为对照品，以乙腈：水为流动相的高效液相色谱法，照高效液相色谱法，按照下述步骤进行测定：
(1)色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水为流动相；柱温20～40℃；检测波长为210～275nm；流速为0.8～1.2mL/min；理论塔板数以红景天苷计不得少于3000；
(2)对照品溶液的制备：取红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素对照品适量，加甲醇制成浓度分别含红景天苷0.13mg/mL、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.14mg/mL、特女贞苷0.20mg/mL、芒柄花素0.015mg/mL的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取贞芪扶正制剂5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5mL量瓶中，滤过，取续滤液，即得；
(4)测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得；
所述高效液相色谱法的流动相体系为乙腈-水：
0～10min：乙腈95％～90％；
10～30min：乙腈90％～78％；
30～40min：乙腈78％～73％；
40～55min：乙腈73％～45％。
2.根据权利要求1所述的贞芪扶正制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素四种有效成分的含量测定方法，其特征在于：检测波长为220nm；流速为1.0mL/min；柱温30℃。
3.根据权利要求1所述的贞芪扶正制剂中红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷及芒柄花素四种有效成分的含量测定方法，其特征在于：供试品制备方法中，超声处理30min。
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