CN109115910A - 一种同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法,取红景天苷、女贞苷、特女贞苷加入甲醇配制成混合对照品溶液;取女贞子药材加入甲醇后依次经浸泡、超声、过滤获得续滤液即待测样品溶液;准确移取不同体积梯度的混合对照品溶液分别上高效液相色谱仪进行含量测定,进行线性回归得到峰面积与含量的标准曲线;取待测样品溶液上高效液相色谱仪进行含量测定,获得红景天苷、女贞苷、特女贞苷的峰面积,然后根据红景天苷、女贞苷、特女贞苷的标准曲线获得待测样品中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的含量。本发明对不同产地女贞子进行红景天苷、女贞苷、特女贞苷含量测定,简便快捷。
Description
技术领域
本发明属于女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的分析检测技术领域,具体涉及一种同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法。
背景技术
女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实,是一味补肾滋阴、养肝明目的中药,可用于肝肾不足、头晕耳鸣、头发早白及两目昏糊等病症。主要化学成分有三萜类、环烯醚萜类、苯乙醇类、黄酮类、梓醇、醌类、挥发油、脂肪酸、磷脂等,现代药理研究发现女贞子具有抗骨质疏松、抗肿瘤、保肝、降血糖、降血脂、调节免疫等功效。女贞子主要产于我国的河南、陕西、江苏、长江流域等地,在各地也有种植。当前药材市场上的女贞子存在以次充好的现象,危害大众的健康,需要对女贞子药材进行质量控制,以保障临床用药的安全性。
随着中药用药有效性、安全性问题日益得到重视,建立高品质的评价标准以保证药材的质量是一项长期而艰巨的任务。红景天苷是具有苯乙醇结构的苷类成分,研究结果表明其具有保肝、抗肿瘤、增强免疫等多种药理作用。女贞苷、特女贞苷为裂环环烯醚萜苷类成分,是女贞子的特征成分。
发明内容
本发明解决的技术问题提供了一种操作简单且检测方便的同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法。
本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案,一种同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法,其特征在于具体步骤为:
(1)对照品溶液的制备:取红景天苷、女贞苷、特女贞苷加入甲醇配制成混合对照品溶液;
(2)待测样品溶液的制备:取女贞子药材加入甲醇后依次经浸泡、超声、过滤获得续滤液即待测样品溶液;
(3)标准曲线的绘制:准确移取不同体积梯度的混合对照品溶液分别上高效液相色谱仪进行含量测定,记录各体积下的色谱峰面积,以含量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归得到标准曲线;
(4)待测样品溶液的测定:取待测样品溶液上高效液相色谱仪进行含量测定,获得红景天苷、女贞苷、特女贞苷的峰面积,然后根据红景天苷、女贞苷、特女贞苷的标准曲线获得待测样品中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的含量;
高效液相色谱仪测定过程中的色谱测定条件为:Aglient Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相水-乙腈混合体系,梯度洗脱:0~2min,体积分数5%乙腈;2~40min,体积分数5%~30%乙腈;40~45min,体积分数30%乙腈;45~50min,体积分数30%~5%乙腈,体积流量1.0mL/min,检测波长282nm,柱温25℃,进样量20μL。
优选的,步骤(1)的具体过程为:准确称取红景天苷、女贞苷、特女贞苷对照品,加入甲醇配成对应浓度分别为0.152mg/mL、1.00mg/mL、1.00mg/mL的混合对照品溶液,摇匀,过0.22μm微孔滤膜,接取续滤液,备用。
优选的,步骤(2)的具体过程为:准确称取过筛的女贞子粉末1.0g,置于具塞锥形瓶中,加入体积分数为95%的甲醇溶液25.0mL,称定重量,超声30min,室温放置10min,再称定重量,并用体积分数为95%的甲醇溶液补足减失的重量,静置20min,取上清液,过0.22μm微孔滤膜,接取续滤液即得待测样品溶液。
优选的,步骤(3)的具体过程为:准确移取混合对照品溶液5μL、10μL、12.5μL、15μL、20μL分别上高效液相色谱仪进行含量测定,记录各体积下的色谱峰面积,以含量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,其中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的线性回归方程分别为:Y=21899X–22883,r=0.9999;Y=66272X–24395,r=0.9991;Y=93479X+23418,r=0.9999;红景天苷、女贞苷、特女贞苷分别在进样量0.76~3.04μg、5.00~20.00μg、5.00~20.00μg的范围内线性关系良好。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1、本发明采用超声法提取女贞子药材,操作简单,提取效率高;
2、本发明使用水-乙腈流动相,梯度洗脱:0~2min,体积分数5%乙腈;2~40min,体积分数5%~30%乙腈;40~45min,体积分数30%乙腈;45~50min,体积分数30%~5%乙腈,分析时间仅为50min,分析效率高;
3、本发明对不同产地女贞子进行红景天苷、女贞苷、特女贞苷含量测定,简便快捷。
附图说明
图1是对照品(A)及女贞子样品(B)的高效液相色谱图。
图中:1-红景天苷,2-女贞苷,3-特女贞苷。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明,但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例,凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
实施例
(1)制备对照品溶液:准确称取红景天苷、女贞苷、特女贞苷对照品适量,加入甲醇配制成对应浓度分别为0.152mg/mL、1.00mg/mL、1.00mg/mL的混合对照品溶液,摇匀,过0.22μm微孔滤膜,接取续滤液,备用。
(2)制备待测样品溶液:准确称取过4号筛的女贞子粉末1.0g,置于具塞锥形瓶中,精密加入体积分数为95%的甲醇溶液25.0mL,称定重量,超声30min,室温放置10min,再称定重量,并用95%的甲醇溶液补足减失的重量,静置20min,取上清液,过0.22μm微孔滤膜,接取续滤液,即得。
(3)制定标准曲线:精密吸取对照品溶液5、10、12.5、15、20μL分别上高效液相色谱仪进行含量测定,记录各体积下的色谱峰面积,以含量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,红景天苷、女贞苷、特女贞苷的线性回归方程分别为:Y=21899X–22883,r=0.9999;Y=66272X–24395,r=0.9991;Y=93479X+23418,r=0.9999;红景天苷、女贞苷、特女贞苷分别在进样量0.76~3.04μg、5.00~20.00μg、5.00~20.00μg范围内线性关系良好。
高效液相色谱仪测定过程中的色谱测定条件为:Aglient Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相水-乙腈,梯度洗脱:0~2min,体积分数5%乙腈;2~40min,体积分数5%~30%乙腈;40~45min,体积分数30%乙腈;45~50min,体积分数30%~5%乙腈,体积流量1.0mL/min,检测波长282nm,柱温25℃,进样量20μL。
(4)测定待测样品溶液:取待测样品溶液上高效液相色谱仪进行含量测定,色谱条件与步骤(3)相同,获得红景天苷、女贞苷、特女贞苷的峰面积,然后根据红景天苷、女贞苷、特女贞苷的标准曲线获得待测样品中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的含量。
(5)精密度:取对照品溶液连续进样5次,记录色谱峰面积,红景天苷、女贞苷、特女贞苷峰面积的RSD值分别为0.55%、0.48%、0.85%,表明仪器精密度良好。
(6)重复性试验:取女贞子供试品溶液5份,按步骤(3)色谱条件进行测定,结果红景天苷、女贞苷、特女贞苷峰面积的RSD值分别为1.02%、2.11%、0.98%,表明方法的重复性良好。
(7)稳定性试验:取女贞子供试品溶液,室温下放置,分别在0、1、2、4、6h测定,记录色谱峰面积,结果红景天苷、女贞苷、特女贞苷峰面积的RSD值分别为2.51%、3.05%、2.11%,表明供试品在常温条件下放置6h稳定性良好。
(8)加样回收率试验:取已知对照品含量的女贞子供试品5份,每份0.5g,分别加入红景天苷、女贞苷、特女贞苷对照品适量,按步骤(3)色谱测定条件进行测定,记录各对照品色谱峰面积,计算回收率。结果见下表。
表1加样回收率试验结果
(9)样品测定:取10批不同产地的女贞子药材,按步骤(2)制备待测样品溶液,按步骤(3)色谱条件进行检测,结果如下表。
表2不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷含量测定结果
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点,本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明原理的范围下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。
Claims (4)
1.一种同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法,其特征在于具体步骤为:
(1)对照品溶液的制备:取红景天苷、女贞苷、特女贞苷加入甲醇配制成混合对照品溶液;
(2)待测样品溶液的制备:取女贞子药材加入甲醇后依次经浸泡、超声、过滤获得续滤液即待测样品溶液;
(3)标准曲线的绘制:准确移取不同体积梯度的混合对照品溶液分别上高效液相色谱仪进行含量测定,记录各体积下的色谱峰面积,以含量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归得到标准曲线;
(4)待测样品溶液的测定:取待测样品溶液上高效液相色谱仪进行含量测定,获得红景天苷、女贞苷、特女贞苷的峰面积,然后根据红景天苷、女贞苷、特女贞苷的标准曲线获得待测样品中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的含量;
高效液相色谱仪测定过程中的色谱测定条件为:Aglient Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相水-乙腈混合体系,梯度洗脱:0~2min,体积分数5%乙腈;2~40min,体积分数5%~30%乙腈;40~45min,体积分数30%乙腈;45~50min,体积分数30%~5%乙腈,体积流量1.0mL/min,检测波长282nm,柱温25℃,进样量20μL。
2.根据权利要求1所述的同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法,其特征在于:步骤(1)的具体过程为:准确称取红景天苷、女贞苷、特女贞苷对照品,加入甲醇配成对应浓度分别为0.152mg/mL、1.00mg/mL、1.00mg/mL的混合对照品溶液,摇匀,过0.22μm微孔滤膜,接取续滤液,备用。
3.根据权利要求1所述的同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法,其特征在于:步骤(2)的具体过程为:准确称取过筛的女贞子粉末1.0g,置于具塞锥形瓶中,加入体积分数为95%的甲醇溶液25.0mL,称定重量,超声30min,室温放置10min,再称定重量,并用体积分数为95%的甲醇溶液补足减失的重量,静置20min,取上清液,过0.22μm微孔滤膜,接取续滤液即得待测样品溶液。
4.根据权利要求1所述的同时测定不同产地女贞子中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的方法,其特征在于:步骤(3)的具体过程为:准确移取混合对照品溶液5μL、10μL、12.5μL、15μL、20μL分别上高效液相色谱仪进行含量测定,记录各体积下的色谱峰面积,以含量为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,其中红景天苷、女贞苷、特女贞苷的线性回归方程分别为:Y=21899X–22883,r=0.9999;Y=66272X–24395,r=0.9991;Y=93479X+23418,r=0.9999;红景天苷、女贞苷、特女贞苷分别在进样量0.76~3.04μg、5.00~20.00μg、5.00~20.00μg的范围内线性关系良好。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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