CN100340653C - 细胞趋化性检测装置 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的是提供一种细胞趋化性检测装置，该装置采用微量细胞，可更简单地控制细胞的注入和细胞位置的调整，且能确保防止设定于孔内特定位置的细胞或注入后的样本试料发生意外移动，两个孔经对细胞通过有阻力的流路互相连通，每个孔配有用于细胞或样本试料注入的开口部分，其特征在于，(1)配有使液体移动的手段和在液体注入或吸出后使该移动停止的手段；和(2)配有闭塞细胞注入端或样本试料注入端任何一方或双方开口部分的手段。

Description

细胞趋化性检测装置
技术领域
本发明涉及细胞趋化性检测装置。更详细地说，是指能用微量的细胞检测细胞趋化性的装置，该细胞趋化性检测装置具有下述构造，能在微小的孔(well)内容易地调节细胞位置设定，且能稳定地保持趋化因子等样本试料在流路中形成的浓度梯度。
背景技术
用微量的细胞能检测细胞趋化性的装置，分别在一个孔内装入细胞悬浊液，在另一个孔内装入样本试料，开通孔间设定的流路，检测细胞是否向装有样本试料的孔移动的细胞趋化性检测装置，本发明人等针对此装置提出了后面的几项提案。用于检测细胞趋化性的装置应该既能在1个细胞水平实现观察甚至检测，又能对10个乃至100个左右的细胞进行测定，且具有在容易地检测少量细胞的同时，可定量分析研究细胞反应的优点。可是，在通过流路相互连通的各孔上设有细胞注入口和样本试料注入口的结构中，因借助流路使孔相互形成连通管，所以特别容易引起流路内液体移动。即，向孔内注入细胞等试料时，容易产生注入导致的升压的影响，因此容易引起细胞或样本试料的意外移动。而且注入后无法完全维持孔的水平时或由于振动等造成液面轻微变动时，也会增加流路中的液体流动，容易引起细胞或样本试料的移动。细胞或样本试料的意外移动是使判断样本试料是否是趋化性因子变得混乱的原因。所以，为了正确检测出细胞感受到样本试料的扩散浓度梯度而向装有样本试料的孔移动，需要严格防止包括流路在内的孔内液体的意外移动。而且为了更正确地把握细胞的趋化性，优选孔内细胞开始时相对于流路保持同一状态，即，排成一列。
本发明人等首先，在用微量移液器等向配有注入或吸出细胞或趋化因子等试料的管的孔中注入或吸出试料时，为了缓和孔内压力的急剧变化，防止孔内试料的意外移动，提出了配备和用于试料注入或吸出的管有连通关系的管的方案(特开2002-159287号)。这是采用通过连通管使试料注入或吸出时的压力分散的结构。
而且，本发明人等提出了微量试料处理装置，在多个孔通过对流体有阻力性的部分相互连通，并且各个孔配有用于注入、吸出试料的管以及根据需要用于缓和注入、吸出时压力变化的管的结构，在上述等多个管的上部共有可装液体的空间。例如：细胞趋化性检测装置(WO02/46356)。通过采用在各个孔配有的总管的上部共有可装液体的空间的结构，可防止试料注入时或之后的液体移动。而且，该装置可移动注入的细胞在孔内位置，还可以使细胞排列到流路一端的初始线上，为此配备了精密地控制孔内液体注入、排出的手段。
可是，为了使注入孔内的细胞排列到流路一端的初始线上，需要移动孔内的液体。为此，需要精细的控制，此外，为防止之后的在流路中的液体移动，有必要再次将液体返回到管的顶部的空间中等，复杂而精密地控制操作。
除了本发明人等的上述提案外，已知还有用流路连接收纳细胞或样本的孔，根据需要，相应的配有使孔上配有的细胞或样本的注入口闭塞的手段的细胞趋化性检测装置(USP5744366)。可是，因为该装置不能调节孔内细胞的位置，所以不能调节初始时细胞的条件。
本发明进一步改良相应装置，目的在于提供一种用微量细胞，可以更正确检测其趋化性的构造，即，目的在于提供一种细胞趋化性检测装置，其特征是：可容易地注入细胞或样本，更简单地进行注入后细胞位置调整的控制，且由于能切实防止设置在孔内特定位置的细胞或注入的样本试料的意外移动，稳定地维持试验样本由于扩散形成的浓度梯度，而且更便于自动化地操作、控制。
相关文献
1.特开2002-159287
2.WO 02/46356
3.USP5744366
发明内容
本发明是下述细胞趋化性检测装置。(1)在两个孔用流路相互连通，各孔分别设有注入细胞或样本试料的开口部分的构造中，配有为调节孔内浮游细胞位置而使液体移动的手段以及在液体注入或吸出后停止该移动的手段，并且，配有使细胞注入端和样本试料注入端任何一方或双方的开口部闭塞的手段。
此处，(2)作为同时配有使液体移动的手段和在液体注入或吸出后停止该移动的手段的装置的优选例，可以举出例如：脉冲式泵或注射器。
另外，(3)作为使该开口部闭塞的手段的优选例，可以举出例如：柔软的密闭栓、滑动式开关部件(slide-type switching member)、螺塞、阀等任何一种或它们等的组合。
作为本发明的一种实施方案可以举出下述细胞趋化性检测装置，该装置由基板和与之密合的玻璃基板组成，在基板上设有堤(bank)和孔，两个孔在堤的两端，在堤和玻璃基板之间形成对浮游细胞通过有阻力的流路。这里，在该基板或该基板和玻璃基板之间设置用于使液体移动的开口部，在该开口部，设置通过注入或吸出使液体移动、然后使液体停止移动的手段/装置，且在基板上设置的任何一个孔上设置细胞注入口，在另外一个孔上设置样本试料注入口，并设置使上述注入口中的任何一方或双方闭塞的的手段/装置。
这里，在基板上设置的堤和玻璃基板之间形成对浮游细胞通过有阻力的流路，可以在堤的上部设置阶梯(terrace)，该阶梯和玻璃基板之间可以形成和细胞的直径或其变形能力相吻合的缝隙。或在流路上，在堤上部的阶梯上，设置和细胞的直径或其变形能力相吻合宽度的1个到多个沟组成的屏障，根据需要，该屏障和玻璃基板之间也可以形成和细胞的直径或其变形能力相吻合的缝隙。而且在流路上，也可以在阶梯上的2个位置形成构成沟的屏障列。此外，还可以在设置在流路上的堤上，可形成和玻璃基板间不同深度的缝隙，也可形成多段的梯。
作为本发明的其它实施方案，可以举出基板和玻璃基板一体化的结构，或至少一方的一面是透明的结构。
本发明包括以上述细胞趋化性检测装置为单位元件，使多个相同或不同元件集成，由集成元件组成的集成型细胞趋化性检测装置，此外还包括以该集成元件为单位元件，使多个同种或不同种元件集成得到的集成型细胞趋化性检测装置。
附图说明
图1表示通过从细胞注入口侧的液体的输送，将细胞聚集在堤端类型的细胞趋化性检测装置的一个例子的模式图。箭头表示充满装置的液体的移动方向。
图2是用注射器代替图1的脉冲泵时的模式图。
图3表示采用阀作为闭塞手段的示例的模式图。箭头表示充满装置的液体的流动方向。
图4表示采用滑动式开关部件作为闭塞手段时的模式图。
图5是补充图4的结构，样本试料注入口也进行开关的结构的模式图。
图6是采用柔软的密闭栓作为闭塞手段时的模式图。
图7是表示通过从检测样品注入口端的液体的吸出将细胞收集到堤端类型的细胞趋化性检测装置的一个示例的模式图。箭头表示充满装置的液体移动的方向。
图8表示在图7类型中，使液体循环的结构模式图。箭头表示充满装置液体的移动方向。
图9表示在图8类型中闭塞细胞注入口的结构模式图。(1)和(3)分别是截面图，(2)和(4)分别是俯视图。箭头表示充满装置液体的移动方向。
图10是闭塞细胞注入口和样本试料注入口双方的结构模式图。
图11是集成多个图6类型的单位元件时的模式图。
图12是集成多个图10类型的单位元件时的模式图。
图13表示堤和流路结构的一个示例的截面图。
图14表示在流路上设置屏障和沟时的一个例子。
图15表示在堤上设置的阶梯的两侧，在两个位置形成屏障阵列的例子。(1)是俯视图，(2)是截面图。
符号的说明
1：基板
2：堤
3：装细胞的孔
4：装样本试料的孔
5：细胞注入口
6：样本试料注入口
7：脉冲泵
8：注入管
9：对细胞通过有阻力的流路
10：玻璃基板
11：检测器
12：细胞
13：注射器
14：液体注入手段
15：细胞悬浊液贮藏槽
16：阀
17：滑动式开关部件
18：液体注入口
19：柔软的密闭栓
20：细胞注入器
21：吸出管
22：样本试料注入器
23：阶梯
24：屏障
25：沿着流路朝向相对的两孔方向的沟
26：判断画面位置的标记
具体实施方式
本发明所涉及的细胞趋化性检测装置是下述装置：两个孔用对细胞通过有阻力的流路相互连通，一个孔装入细胞悬浊液后，将细胞排列到流路的一端，另外一个孔中加入样本试料，观察感受到样本试料的浓度梯度的细胞向装样本试料的孔的方向通过流路的状态，或者计数正在通过的或已通过的细胞数。
如上所述，所说的对细胞通过有阻力的流路是具有下述缝隙的通路，细胞以非吸着状态这样的形态(通常为球形)不能通过，但通过细胞具有的变形能力，形态变成扁平时能通过的缝隙。这里，细胞的变形能力指的是细胞具有弹性时，因为上述弹性而容易变形，变成扁平状或带状等形态后，通常能够通过比细胞在自由空间中的形状(球形)的直径更窄间隔的沟和缝隙。
本发明涉及的细胞趋化性检测装置的特征除了上述的基本结构外，配有为了调节孔内细胞位置的液体注入或吸出手段和液体注入或吸出后停止液体移动的手段。并且，配有向孔内注入细胞后，使细胞注入端以及样本试料注入端任何一方或双方开口部闭塞的手段。配置通过注入或吸出液体使细胞移动的手段，据此，容易将细胞排列到流路一端的初始线上。此外，通过使细胞注入端和样本试料注入端任何一方或双方的开口部闭塞，使通过流路构成连通管的孔的液面不移动，在流路中的液体也不移动。即，即使装置受到振动，也能抑制细胞的意外的移动或在流路中形成的样本试料的浓度梯度的变动。为了完全地封闭开口部，在液体注入或吸出后使其移动停止的手段是必要的。
该构造通过图1(1)和(2)的模式图进行说明，在基板1上设置突起状的堤2，在堤2和玻璃基板10之间形成对细胞通过有阻力的流路9。首先，细胞悬浊液由液体注入手段(在图1中、7所示的脉冲泵)经注入管8，从细胞注入口5送入到装细胞的孔3中。细胞通过液体的流动，聚集到对细胞通过有阻力的流路9的一端，剩余的液体从样本试料注入口6排出(参见(2)的12)。因为来到流路9的一端的细胞堵塞(block)液体流动，所以液流通过没有细胞的地方。其结果，其它的细胞沉积在该空间，这样细胞在流路9的一端排成列。细胞悬浊液的注入速度没有必要进行特别严密的设定，例如：嗜中性细胞或嗜酸性细胞的情况下，流路缝隙为5μm时，优选30～40μm/秒左右的移动速度。然后，在停止通过脉冲泵7输送液体的同时，通过使注入管8闭塞，闭塞细胞注入口。之后，从样本试料注入口6注入趋化性因子。此时，因为已闭塞细胞注入口，所以能防止液体逆流，不会扰乱聚集在流路9端的细胞列，此外，也不会引起在流路中的液体的意外移动。这样，使细胞感受到在流路9中稳定地形成的趋化因子等检测样本的浓度梯度，向着装样本试料的孔侧移动，变形、通过流路9。透过玻璃基板10用检测器11观察其通过状态。
作为用脉冲泵作为液体注入手段的一例，可举出利用通过空气压变化产生的脉冲，通过液体输送管输送少量的液体的装置。这可以用1μl甚至1/10μl的供样器(order)定量地输送液体。此外，可以闭塞输送管。例如：已知Fluidigm Corporation(South San Francisco，CA)制的MSL Active Microfluidic Chip Control Hardware(商品名)。此外作为利用脉冲的液体输送手段，除了上述的之外，还已知利用压电元件的振动的装置。本发明的液体注入手段可以使用这些中的任何一种。并且，利用压电元件振动的装置输送流体后，因为不能闭塞管，需要另外设置闭塞手段。
液体注入手段还可采用脉冲泵以外的各种手段，例如：可采用图2的13所示的注射器。注射器通过用步进电机(也称为脉冲式发动机)驱动，可定量地输送液体。此外，如果用注射器，液体输送停止后保持原状即可闭塞注入口5，因为不会产生液体的逆流，是优选的手段。
如图3(1)、(2)所示，也可以用阀闭塞注入口。(1)是在注入管8设置阀16时的例子；(2)是在细胞悬浊液贮藏槽15和注入管8之间设置阀16时的例子。需说明的是图3的14，是用脉冲泵、注射器等液体注入手段。也可以用和阀具有同样功能的设备代替阀16。例如：也可以通过压力使柔软的、有弹力的材质制成的管变形，停止液体流动。
使基板上设置的细胞注入口或样本试料注入口闭塞的手段有很对种。例如：也可以采用如图4的17所示的滑动式开关部件。(1)表示为了注入细胞，细胞注入口5打开的状态。从细胞注入口5注入细胞后，如(2)所示，使滑动式开关部件17滑动，闭塞细胞注入口5。然后，注入的细胞由液体注入手段14通过注入管8，顺着输送液体(如：缓冲液)的流动运到流路9的一端。细胞移动后闭塞管8，其手段从上述手段中加以适当选择。滑动式开关部件17的开关操作，如：用能控制转数的步进电机容易做到。
图5，是图4构造的变形例，例示了下述构造，(1)：滑动式开关部件17，在打开细胞注入口5的状态时，关闭样本试料的注入口6；(2)：关闭细胞注入口5时，样本试料注入口6打开。
图6表示用柔软的密闭栓19闭塞细胞注入口5的例示。例如：用弹力丰富的膜状硅橡胶、聚氨酯、聚乙烯、生橡胶等密塞细胞注入口5(图6(1))。用贯通密闭栓19的细胞注入器20进行细胞注入(图6(2))。细胞注入后，如果拔出注入器20，密闭栓19通过本身的弹性闭塞贯通口。细胞12被从液体注入口18输送的液体聚集到流路9的一端(图6(3))。并且，也可以采用通常轻微闭合的、容易地贯通注入器的螺塞等代替密闭栓。
代替图1～6的结构，例如：如图7所示，也可以采用通过从被堤2隔开的与装细胞的孔3相反的位置上的装样本试料的孔4侧吸出液体，将细胞12聚集到装细胞的孔3的流路9的一端的结构。并且，图7表示用注射器13进行液体吸取时，也可以用具有同样功能的其他手段，如：脉动泵等替代。
本发明的装置可是使液体(细胞悬浊液的介质)循环的类型。图8(1)～(4)表示其模式图。图8(1)表示分别在装细胞的孔3上设置注入管8，在装样本试料的孔4上设置吸出管21。用柔软的密闭栓19使样本试料注入口6闭塞的情况。液体循环如(4)所示，使液体向一个方向移动的手段，例如：用脉动泵7。(1)和(2)表示从细胞注入口5注入细胞后的状态。(3)和(4)表示使液体朝着箭头的方向移动，其结果将细胞聚集在流路9的一端的状态。此时，因子从样本试料注入口6贯通密闭栓19被注入。另外，闭塞样本试料注入口6也可以用密闭栓以外的手段，如：滑动式开关部件、阀、螺塞等。
图9代替图8的结构，例示使细胞注入口5闭塞的情况。细胞注入口5的闭塞，如图9所示，可以用柔软的密闭栓19，也可以用滑动式开关部件、阀、螺塞等。
图10表示本发明装置的其它变形例，是同时使细胞注入口5和样本试料注入口6闭塞时的模式图。图10例示分别用密闭栓19使各注入口5、6闭塞的情况，细胞和因子贯通各密闭栓被注入。为了将细胞集中到流路9的一端，例如：如图示所示，装细胞的孔3侧和装样本试料的孔4侧双方设有液体输送手段，该液体输送手段配备例如：注射器13这样的在液体输送后停止液体移动的手段。通过其运动，将液体从装细胞的孔3端移动到装样本试料的孔4端。注入口的闭塞手段也可以采用密闭栓以外的手段，如：滑动式开关部件等。
在上述的本发明的装置中，可以将基板和玻璃基板一体化，可将至少一方的一面采用透光的，即透明的结构。
本发明还包括用以上说明的装置为单位元件，将多个上述元件等集成的装置。例如：如图11中所示的其模式图，用注入管8连接使细胞注入口5闭塞的元件，组装成将装细胞的孔中存在的细胞同时聚集到堤端的装置。图11时，为了切实地闭塞细胞注入口5端，优选用阀16等闭塞各元件的每个注入管8。样本试料注入口和管的闭塞手段可以从迄今为止记述的多种手段中适当选择，加以采用。
图12，是使图10类型的元件集成时的模式图。可以用其它手段取代图的密闭栓19。用该装置可以一次调查多种样本试料对一种细胞的影响。而且，在图12的装置中，细胞注入口5和样本试料注入口6的位置相反也可以。据此，可以一次调查多种细胞对一种样本试料的反应。
此外，本发明还包括将多个集成元件再集成的类型、多个不同种集成元件再集成的类型的装置。
根据本发明，可将所述装置全体小型化，可微量地进行试料处理，并且，可通过将各元件多个集成，同时进行多个样本试料的处理。此外，容易进行液体的吸取、注入量的程序性控制，适于自动化装置的组装。
下面，针对本发明的装置部分，举出具体例加以说明，这些是用于说明的例示，根据本发明的技术思想，可以适当变更，本发明不限定于此。
1)元件的结构
如图1和其它图所示，优选堤2和孔3、4在基板1上一体化构筑的结构。在基板1下面压合光学打磨后的玻璃基板10，并且，也可以通过热处理结合基板1和玻璃基板10。
2)孔
孔3、4能装细胞悬浊液或含趋化性因子的溶液、含同种抑制剂的溶液等样本试料，容积没有特别限制，只要能装所需的最小限量的液体量即可。如：深0.05～0.1mm左右、宽、长分别为1.2mm左右已足够。
3)流路
流路9(参见图1)结构的例子之一用图13进行说明，如下：流路9由隔开两端的孔3和孔4的堤2(在基板1上的突出部分)和玻璃基板10构成。在堤的下面，设置了平面的阶梯23。堤2的尺寸没有特定的限制，例如：高，即从玻璃基板10到阶梯23的距离为0.003～0.03mm左右，朝向相对孔的方向的长为0.1～0.5mm左右，朝向垂直相对孔的方向上的长为1.2mm左右即可。并且，该尺寸对应于作为对象的细胞而不同，可以根据目的适当变动。
并且，阶梯23和玻璃基板10的距离，可根据所对应的处理细胞适当设定，通常从3～30μm中选择。嗜中性细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、单细胞/巨噬细胞、T细胞、B细胞等时，从3～8μm中选择。如：从4、5或8μm中选择。而癌细胞或组织中存在的细胞时，从6～20μm中选择。
此处，为了将细胞容易地聚集到流路9的一端，可以多段式地形成阶梯23。
优选的实施方案之一是在堤2的下面(阶梯23)，设置如图14(1)、(2)所例示的多个屏障24，形成通过细胞的沟25。此处，(1)是设置了屏障24的堤2的横截面图，(2)是表示阶梯23和屏障24以及沟25的俯视图。
阶梯23上设置屏障24时，由屏障24构成的沟25的横截面可以是V字型横截面、凹型横截面、半圆形横截面等任意形状。沟25的宽和深设定成和细胞的直径或其变形能力相适合的宽度。
并且，图14(3)是表示沟25为V字型时的横截面图。
沟25的宽通常从3～50μm中选择，选择和细胞的种类相适合的适当宽度。嗜中性细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、单细胞/巨噬细胞、T细胞、B细胞等时，从3～20μm中选择，例如：4、8或10μm，癌细胞或组织中存在的细胞时，从8～20μm的宽度中选择，沟25的个数取决于相对于通路9宽度的屏障24的宽度和沟25的宽度。例如：流路9的宽度1mm，屏障24的宽度10μm，沟25的宽度为5μm时，沟25的最大数量是66个。
在堤2上设置的阶梯23的两侧，可在2个位置形成屏障24的列(参见图15(1)、(2))。根据设定成所说的构造，能容易地进行通过沟的细胞的观察和计数。此外，在中央的阶梯23的适当位置设置标记26，据此，能容易地决定相机或显微镜的位置(图15中的26)。另外，希望中央阶梯的大小是显微镜视野可覆盖的大小。在图15中(1)是俯视图，(2)是横截面图。
4)孔和流路的制作
基板1的材质优选容易细微加工的对细胞比较惰性的材质。例如：单晶硅。适当选择制备集成流路时使用的光刻或蚀刻如：湿蚀刻或干蚀刻等处理单晶硅，能容易地制造屏障24与沟25。孔3、4与屏障24或沟25相比，因为比较大，可以采用各种已知的工艺技术进行制作。例如：可采用沙爆破(sand blasting)法或干蚀刻法。
除了单晶硅外，还可使用硬质玻璃、硬脂塑料、金属等，能够在流路中构建细微结构的物质。例如：聚二甲基硅氧烷(PDMS)是适合形成细微结构的塑料的一例。使用塑料时，优选对表面赋予亲水性的处理，例如：使表面形成亲水性薄膜的处理。此外，为了容易地观察细胞，优选对至少含阶梯23在内的表面通过镀银等进行镜面加工。也可分别制作堤2和孔3、4，再组装。
5)玻璃基板
玻璃基板10如图1以及其它的例子所示，是压合基板1构成能装液体的空间，而且能够观察通过流路的细胞，保持光学透明性和平面性，提供细胞接合的面的板。只要适用于所述目的，也可使用玻璃以外的透明丙烯酸等塑料。厚度只要压合基板时不歪曲就可以，没有特别的限定，0.1～2mm就已足够。用荧光标记细胞的组成成分进行观察时，优选玻璃基板10薄。
基板1是由硅片构成时，可以通过和上述玻璃基板10压合而一体化，二者通过在200～400℃热处理结合一体化。不过，这种情况下，需要选择使基板1和玻璃基板10的热膨胀系数和热收缩系数一致的材质。
6)管
注入管8、吸出管21通常优选柔软的材质，特别是用脉冲泵7时，需要能和细微动作相应的材质。例如：PDMS、聚乙烯、氯乙烯等。
7)多个元件的排列
通过流路连通的两个孔作为一个元件，在一块基板上配置乃至集成多个元件，制成可同时处理多个样本的装置。可并列配置相同类型的元件，或排列不同的元件。排列根据目的不同，可采用多种组合。例如：通过流路连通两个孔构成的元件的1个元件的大小为长边2.9mm，短边1.2mm时，在一块宽16mm、长10mm的长方形基板1上，以0.8mm的间隔，可配置7列×2行，共计14个。
此外，可将上述的多个元件的集成再集成，也可以是相互不同类型的元件的集成。
此处，将多个元件集成时，玻璃基板10可以是能包容元件全体的1个或者一块。
8)检测手段
在本发明中所用的检测手段只要是能检测出流路9中移动的细胞或者移动后的细胞的手段就可以。根据需要，包括能够记录检测结果的手段。可以采用任何已知的可以使用的细胞检测、记录的手段。例如：显微镜、显微镜和录像相机的组合等。物镜可以采用带有CCD相机的结构。在集成元件检测时，优选物镜采用依次扫描各元件流路的结构。
检测手段通常如图1及其它所示，设置在元件的流路9的下方，不过在由多个元件集成的自动装置中，可以采用在固定的位置设置检测部分，依次移动各个元件的列进行检测、记录的结构。检测器扫描排列成直线的各个元件的流路实现检测。扫描检测器11可有1个或多个。这样可用比较少数量的检测装置对应多个集成元件。
通过流路9的细胞的检测、计数可用显微镜直接捕捉细胞，也可根据常规方法，用发光、荧光物质预先标记细胞，通过捕捉该发光、荧光容易地进行检测、计数。
9)自动控制系统
本发明的装置可以容易地自动控制。例如：分别细胞、因子等样本试料的注入，采用可以用计算机控制移动和液体的排出的自动吸管；液体输送手段采用脉冲泵或步进电机驱动的注射器；注入口的开闭采用滑动式开关部件。用计算机程序控制上述等操作顺序和操作量。注入口的开关用密闭栓取代滑动式开关部件时，不需要控制开关操作。
集成型装置中使用的吸管优选有多道注射头类型的吸管。
根据本发明的构造，能够调整注入的细胞在孔内的位置，将细胞聚集在流路一端使之排成一排，同时保持该状态，并且因为能够稳定地保持流路中趋化性因子等样本试料的扩散造成的浓度梯度，使其能够忠实地反映趋化性因子或抑制剂的作用和细胞的性质，得到定量的结果。
此外，通过采用本发明的构造，即使对装置施加意外振动时，也能抑制对细胞排列和样本试料的浓度梯度的扰乱，正确地捕捉细胞的运动。
根据本发明的构造，能够实现装置的小型化，如果用做检测细胞趋化性或分离趋化性细胞装置，使用的细胞量和以前使用的Boydenchamber相比，可以是其1/500甚至1/1000。即，本发明的装置，可以用全血这样的生物材料本身作为试料，用全血作为试料时，检测嗜中性细胞的趋化性时用0.1μl以下的血液即可，嗜酸性、单细胞或者嗜碱性细胞时，可用1μl左右的血液进行测定。
根据本发明的构造，具有可以在调节细胞在孔内的位置时，实现细微的调整，容易实行装置的自动化的优点。
因为本发明所涉及装置的单位元件可以微小化，所以容易将多个元件集成，可以组装成能够同时处理多个样本的装置。此外，这种情况下，易于制成实现液体注入和检测自动化的装置。
将多个元件集成时，通过组合不同类型的元件使之集成，可同时进行不同目的检测、分离，能提高处理效率。例如：作为细胞趋化性检测装置的情况下，搜索针对同一种细胞的多种趋化性因子或其抑制剂时，或调查针对同一种趋化因子的不同细胞的趋化性等时，可一次进行该搜索。

Claims (3)

1.一种细胞趋化性检测装置，具有两个孔通过对细胞通过有阻力的流路相互连通，各个孔设有用于注入细胞或检验试料的开口的结构，其特征在于(1)：配有使液体移动的手段和在液体注入或吸出后停止该移动的手段；(2)：配有闭塞细胞注入端和样本试料注入端任何一方或双方的开口部的手段。
2.权利要求书1记载的细胞趋化性检测装置，其特征是，使液体移动和停止液体移动的手段选自脉冲泵或注射器。
3.权利要求书1记载的细胞趋化性检测装置，其特征是，闭塞开口部的手段选自柔软的密闭栓、滑动式开关部件、螺塞、阀中的任何一项或它们的组合。
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