CH658070A5

CH658070A5 - Lignee cellulaire derivee d'hybridomes humains, son procede de preparation et son utilisation pour la production d'anticorps humains monoclonaux.

Info

Publication number: CH658070A5
Application number: CH7057/81A
Authority: CH
Inventors: Carlo M Croce
Original assignee: Wistar Inst
Priority date: 1980-11-07
Filing date: 1981-11-04
Publication date: 1986-10-15
Also published as: SE8106528L; AU548738B2; BE891003A; NZ198851A; FR2493865A1; GB2086937A; AT380898B; GB2086937B; CA1198066A; IT8124862A0; ATA476381A; SE460907B; JPS57126424A; IT1140050B; AU7716781A; DE3144181A1; FR2493865B1

Description

La présente invention appartient au domaine de l'immunologie. Elle se rapporte à une lignée cellulaire humaine susceptible de fusionner avec des lymphocytes humains.

Normalement, les cellules myélomatiques humaines ne fusionnent pas de façon satisfaisante mais, au moyen de la présente invention, on fournit des cellules génétiquement stables et capables de former des hybrides.

La production d'anticorps spécifiques pour les déterminants an-tigêniques de virus, tumeurs et agents étrangers est importante à la fois pour l'immunothérapie et pour la recherche médicale.

Des anticorps monoclonaux pour des déterminants antigéniques ont été produits in vitro dans les cultures de cellules de rate infectées avec un virus, ainsi que l'a illustré la technique Epstein-Barr. Des anticorps ont également été produits en utilisant des cellules hybrides réunies, ou hybridomes, entre des cellules de rate de souris et des cellules myélomatiques de souris: voir les brevets U.S. Nos 4.172.124 et 4.196.265. Des cellules hybrides réunies de cellules de rate de souris BALB/c et de cellules myélomatiques de souris BALB/c ont également été décrites dans la littérature par Kohler et coll. dans Nature, Vol. 256, 495-497 (1975), et dans Eur. J. Immunol., Vol. 6, 511-519 (1976). Les cellules de rate utilisées pour la production de ces hybrides furent prises de souris immunisées au moyen de globules rouges de sang de mouton. D'autres articles révélant la production d'hybrides de cellules réunies de cellules de rate animales et de cellules myélomatiques animales comprennent ceux de Milstein et coll. dans Nature, Vol. 266, 550-552 (1977); Koprowski et coll. dans Proc. Nat. Acad. Sci., Vol. 74, 2985-2988 (1977) et Welsh dans Nature, Vol. 266, 495 (1977).

La technologie des hybridomes s'est révélée capable de rendements satisfaisants pour les taux de production d'anticorps. Cependant, les anticorps produits par des hybridomes consistant en cellules somatiques hybrides entre des cellules de rate produisant des anticorps et des cellules myélomatiques de souris BALB/c sont nécessairement des agents étrangers lorsque injectés dans le corps humain. En conséquence, le système naturel de réponse immunitaire humain fabrique des anticorps pour combattre les anticorps produits par les hybridomes après leur première introduction dans le corps humain. Des injections répétées de ces anticorps peuvent résulter en choc.

Certains chromosomes humains se perdent normalement lors de la réunion de lymphocytes humains avec des cellules myélomatiques de souris pour la formation d'hybrides souris-humains. Tels hybrides doivent conserver les deux chromosomes humains qui transportent les gènes réarrangés pour les chaînes humaines d'immunoglubi-line légère et lourde afin de rester efficaces. En conséquence, il est difficile d'obtenir des hybridomes entre espèces qui sécréteraient des anticorps humains.

Il est profitable de fournir une cellule hybridome formée par la réunion d'une cellule myélomatique humaine avec un lymphocyte humain. Une cellule hybridome de ce genre pourrait produire des anticorps humains avec un risque réduit de chocs résultant des injections répétées dans un être humain. Cependant, en général, les cellules myélomatiques humaines se réunissent mal avec les lymphocytes humains.

La présente invention fournit une ligne de cellules myélomatiques stable, qui peut être cultivée et sous-cultivée à l'infini, et qui est capable d'hybridation avec des lymphocytes humains et avec des lymphocytes provenant d'autres anipiaux afin de former des cellules hybrides réunies stables.

En outre, la présente invention fournit un procédé de production d'hybridomes à partir de cellules myélomatiques humaines, lesquels

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hybridomes sont capables d'exprimer des anticorps utiles qui seraient acceptés par le système de réponse immunitaire humain.

La présente invention projette également de fournir un procédé de production d'anticorps qui seraient utilisés pour le traitement de maladies humaines, avec laquelle les anticorps produits seraient acceptés par le système immunitaire humain.

En accord avec la présente invention, une cellule myélomatique humaine est fournie, laquelle est capable d'hybridation avec des cellules humaines et animales produisant des anticorps, laquelle lignée de cellules est un mutant de cellules humaines GM 1500 B et une déficience de phosphoribosyl-transférase d'hypoxanthine (HPRT).

Les moyens de production de cellules hybrides utilisant les lignées de cellules myélomatiques humaines stables, avec déficience en HPRT, sont fournis dans une des incorporations de la présente invention.

Les moyens de production pour les anticorps utilisant de telles cellules hybrides sont fournis dans une autre incorporation.

Cette invention fournit, entre autres, un procédé de production pour de nouvelles cellules qui sont génétiquement stables, qui peuvent être cultivées et sous-cultivées à l'infini et qui produisent de grandes quantités d'anticorps contre des virus, tumeurs et agents étrangers, ainsi que leurs déterminants antigéniques. Ces lignées cellulaires sont des cellules hybrides réunies (a) d'une lignée stable de cellules humaines myélomatiques déficientes en HPRT, par exemple une lignée de cellules malignes dérivées d'une tumeur primaire de la moelle osseuse, et (b) de lymphocytes produisant des anticorps, tels que ceux de la rate ou des nodules lymphatiques, ou des lymphocytes périphéraux. Une lignée de cellules particulièrement préférée est un hybride de cellules réunies entre des lymphocytes humains périphéraux et des cellules myélomatiques humaines. Ces lignées de cellules peuvent être conservées considérablement pendant une période indéfinie dans un milieu de culture sélectif tel que l'hypoxanthine-aminoptérine-thymidine (HAT), et peuvent continuer à produire indéfiniment des anticorps spécifiques pour des déterminants antigéniques.

Les cellules myélomatiques de cette invention furent dérivées de la lignée de cellules humaines B de type GM 1500 qui peut être obtenue au Dépôt de Cellules Humaines Mutantes Génétiques (Human Genetic Mutant Cell Repository) de l'Institut de Recherche Médicale à Camden dans le N&w Jersey (Institute for Médical Research).

Les cellules myélomatiques GM 1500 furent traitées avec du sul-fonate d'éthyle de méthyle pour augmenter leur taux de mutation, et elles furent sélectionnées pour leur déficience en phosphoribosyl-transférase d'hypoxanthine (HPRT) dans un milieu contenant de la thioguanine-6 avec une concentration d'à peu près 30 microgrammes/ml [la technique de base pour la sélection est décrite dans Nature, Vol. 256, 495-497 (1975)]. Ce procédé tue la plupart des cellules myélomatiques; les cellules humaines B meurent normalement dans un milieu contenant de la thioguanine-6. En outre, même parmi les cellules survivantes, la plupart ne sont pas capables d'hybridation avec des lymphocytes.

Deux publications ont révélé l'hybridation des cellules humaines B myélomatiques GM 1500 avec des cellules myélomatiques non humaines. Les cellules GM 1500 ne furent pas soumises à un traitement mutagène ni à tout autre procédé de sélection avant la réunion dans les procédés révélés par ces articles. Ces articles sont: Croce et coll. dans Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., Vol. 76, 3416-3419 (1974) et Croce et coll. dans Eur. J. Immunol., Vol. 10, 486-488 (1980).

Bien que le sulfonate d'éthyle de méthyle puisse être utilisé favorablement comme agent mutagène dans le procédé décrit précédemment, il est entendu que tout autre agent mutagène peut être utilisé pour provoquer une mutation des cellules humaines B GM 1500 tant que l'agent n'affecte pas les cellules de façon adverse.

Le traitement à l'agent mutagène et le procédé de sélection donnèrent deux «survivants», rendant possible la propagation de lignées de cellules myélomatiques modifiées, stables, déficientes en HPRT : les deux survivants furent désignés par le nom de GM 1500 6TG-Al-1 et GM 1500 6TG Al-2. Les deux survivants qui semblent fonctionner de manière interchangeable, forment des lignées cellulaires 5 continues qui sont interposées dans la Collection de Cultures Américaines Typiques (American Type Culture Collection) (ATCC), 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852-US, sous les numéros d'accès CRL-8032 et CRL-8038, respectivement. Ces lignées de cellules myélomatiques possèdent la caractéristique disio tincte de pouvoir être hybridées avec des lymphocytes humains ainsi qu'avec les lymphocytes d'autres animaux. Ces cellules sécrètent de l'IgG (immunoglobuline gamma-2, K) comme les cellules-parentes GM 1500, et elles sont positives pour l'antigène nucléaire du virus Epstein-Barr. Les cellules furent conservées dans le milieu essentiel 15 minimum Eagle (MEM), le milieu RPMI (Rosewell Park Memorial Institute) 1640 pouvant être utilisé comme alternative, avec 10% de sérum de fœtus bovin. La croissance des cellules myélomatiques est inhibée par le milieu sélectif d'hypoxanthine-aminoptérine-thymi-dine. Ce milieu est décrit dans Science, Vol. 154, 709-710 (1964). Le 20 reste de cet exposé se réfère aux cellules GM 1500 6TG-A1-2; la ligne cellulaire GM 1500 6TG-A1-1 peut être utilisée comme alternative.

Les lymphocytes utilisés peuvent être n'importe quels lymphocytes venant d'un être humain, considéré comme ayant les anticorps 25 requis. Il est également possible de stimuler les lymphocytes humains in vitro pour obtenir les anticorps souhaités. Par exemple, les lymphocytes peuvent être prélevés sur un malade contaminé par un virus actif tel que la rage, la grippe, la rougeole, la rubéole, la poliomyélite, etc. Cependant, il va de soi que ceux-ci ne sont que des 30 exemples; l'on peut également utiliser des lymphocytes créant des anticorps attaquant d'autres virus ou d'autres antigènes non viraux, tels que le pollen. Il est préférable que les lymphocytes soient des ' lymphocytes périphéraux séparés du sang du malade, ou des cellules de la rate.

35 Dans l'une des mises en œuvre de l'invention, la source de lymphocytes utilisée était du plasma sanguin héparinisé provenant d'un malade souffrant de panencéphalite sclérosante subaiguë (SSPE), une infection du virus de la rougeole du cerveau. Afin de vérifier la présence de lymphocytes anti-SSPE dans ce plasma sanguin, un 40 échantillon de sérum fut dilué à 1:10 000 000 avec une solution tampon de phosphate et il fut trouvé qu'il liait à l'aide de titrage ra-dio-immun à des cellules cibles, infectées de rougeole. Ces données ainsi que l'évidence de lésions histologiques du cerveau caractéristiques de la maladie confirmèrent le diagnostic clinique de SSPE. 45 Un échantillon de 10 ml de plasma sanguin héparinisé fut prélevé de ce malade et une suspension de lymphocytes purifiés au Ficoll fut préparée de la façon enseignée par Gerhard et coll., Eur. J.

Immunol., 5, 720-725 (1975). Les globules rouges furent lysés par incubation de l'échantillon de sang pendant 15 minutes à 4°C dans du so NH4.CI (0,83%). La suspension de cellules résultante fut lavée par centrifugation (800Xg) au moyen de sérum bovin inactivé par la chaleur et d'une centrifugation dans un milieu sans protéine (RPMI 1640, tamponné avec 7,5 mM d'HEPES, pH 7,2). La production des hybrides fut accomplie par le mélange d'environ dix millions de cel-55 Iules myélomatiques sélectionnées avec déficience en HPRT de cette invention avec un à dix millions de lymphocytes. Le mélange de cellules fut centrifugé à 800Xg et les cellules furent suspendues à nouveau, pour réunion dans une solution à 50% (poids-volume) de glycol de polyéthylène-1000 (PEG) dilué dans un milieu essentiel 60 minimum (MEM) sans sérum. Suivant les procédures de réunion enseignées par Davidson et coll., Soamt., Cel Genet. 2,175-176, le glycol de polyéthlyène fut d'abord dilué dans le MEM sans sérum, et ensuite dans le MEM avec sérum avant que les cellules ne soient ensemencées dans les puits de plaques Linbro dans un milieu sélectif 65 déhypoxanthine-aminoptérine-thymidine. Les cultures furent incubées à 37eC dans une atmosphère de 95% d'air/5% C02 et tous les 7 à 10 jours le milieu de culture fut partiellement remplacé par un milieu frais (HAT) (de 1/2 à 1/3).

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La croissance des cellules'fut observée dans 20 des 24 puits 15 à 21 jours après incubation des cultures produites par la réunion de lymphocytes avec les cellules myélomatiques.

Toute croissance dans un milieu HAT est une indication d'hybridation couronnée de succès entre les lymphocytes et les cellules myélomatiques. Ces cellules furent reproduites continuellement dans un milieu HAT et furent clonées en microplaques (Linbro) par limitation de la dilution. Chaque clone indépendant (dérivé d'un puits indépendant) fut ensuite testé pour l'obtention de chaînes d'immuno-globulines humaines et pour la capacité d'immunoprécipitation des protéines du virus de la rougeole. Il fut trouvé que les hybridomes sécrétaient des IgM spécifiques pour les nucléocapsides du virus de la rougeole, ainsi qu'il est décrit ci-dessous.

La spécificité des anticorps pour le virus de la rougeole fut déterminée par immunoprécipitation et électrophorèse avec gel de poly-acrylamide-SDS à 10%, lesquelles techniques sont bien connues dans le domaine (SDS est une abréviation pour le sulfate de sodium dodécyle). Généralement, les cultures de cellules furent marquées avec 100 microcuries de leucine-3H (70 curies par millimole) par millilitre de solution en y étant exposées pendant 12 heures d'incubation. Les chaînes d'immunoglobulines furent ensuite immunopréci-pitées avec des antisérums d'immunoglobuline antihumaine selon des procédures établies. Les chaînes marquées d'immunoglobulines humaines immunoprécipitées furent ensuite séparées par électrophorèse conventionnelle sur gel de polyacrylamide-SDS à 10%.

Une comparaison fut faite entre (1) les immunoprécipitations de l'immonoglobuline produite par les cellules GM 1500 6TG-A1-2 suivant une réaction avec un antisérum gamma antihumain; (2) des immunoprécipitations de chaînes d'immunoglobulines sécrétées par des hybridomes humain-humain (obtenus par le procédé de réunion décrit précédemment) suivant une réaction avec un antisérum mu antihumain; et (3) des immunoprécipitations de chaînes d'immunoglobulines sécrétées avec un hybridome humain-humain suivant une réaction avec des antisérums de chaînes spécifiques mu et gamma antihumain, utilisant les techniques électrophorétiques de séparation expliquées précédemment. Le but de cette comparaison était de démontrer que les hybridomes humain-humain produits selon la présente invention exprimaient les deux chaînes d'immunoglobulines humaines mu et gamma.

Six échantillons de cellules, hybrides clones furent testés par immunoprécipitation des immunoglobulines sécrétées par les hybrides avec un antisérùm de lapin anti-mu (IgGl). Tous les hybrides exprimèrent la chaîne de l'immunoglobuline mu humaine. Certains de ces hybridomes exprimèrent également une chaîne légère d'immunoglobuline migrant différemment de la chaîne légère exprimée par le clone myélomatique GM 1500 6TG-A1-2. L'un de ces clones hybridomes n'était pas capable de produire la chaîne légère d'immunoglobuline exprimée par les cellule GM 1500 6TG-A1-2. Le liquide de culture des hybridomes qui avaient été immunoprécipités avec les antisérums de lapin de la chaîne mu et gamma antihumaine exprimèrent deux chaînes lourdes d'immunoglobuline, la chaîne gamma de la cellule parente GM 1500 6TG-A1-2 et la chaîne mu de la cellule parente B du SSPE humain (panencéphalite sclérosante subaiguë).

Une autre comparaison fut faite par électrophorèse au gel de Polyacrylamide pour déterminer la spécificité des anticorps exprimés par les hybridomes de l'invention pour l'antigène du virus de la rougeole. Deux échantillons de milieux de culture des hybridomes furent comparés avec deux contrôles. Les contrôles étaient: (a) du sérum prélevé d'un malade se remettant d'une infection de rougeole atypique et (2) du liquide de culture de la lignée de cellule humaine GM 1500 6TG-A1-2. Le sérum provenant d'un malade ayant eu une rougeole atypique fut choisi pour tester la contre-efficacité des anticorps du virus de la rougeole. Les résultats de la comparaison furent obtenus suivant les techniques conventionnelles d'analyse. Les procédés utilisés dans l'immunoprécipitation furent les suivants: (1) des lyses de cellules CV1 infectées par le virus de la rougeole, marquées avec de la méthionine-S, furent utilisées comme antigènes; des échantillons (25 microlitres) de l'antigène furent mélangés avec des

échantillons (100 microlitres) de liquide de culture concentré et incubé à environ 37" C pendant 90 minutes et ensuite à 4 pendant 4 heures; (3) des échantillons (25 microlitres) d'anticorps antihumain total de lapin furent ensuite ajoutés; (4) les incubations furent répétées; (5) les polypeptides précipités furent recueillis par centrifugation dans une centrifugeuse Eppendorf durant 20 minutes à 10000 tpm; (6) le culot visible récupéré fut suspendu à nouveau dans un tampon phosphate et lavé trois fois; (7) le culot fut suspendu dans un tampon de lyse et bouilli pendant trois minutes; (8) les solutions résultantes furent électrophorésées sur un gel de polyacrylami-de-SDS à 10% suivant les conditions décrites par Hall et coll., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A.; Vol. 76, 2047-2051 (1979). Après la fluori-graphie, le gel séché fut exposé sur un film radiographique Cronex.

Les liquides des cultures des hybridomes précipitèrent le Polypeptide du virus NP et changèrent les quantités de ses fragments de division. Les anticorps dans les liquides de culture sont donc spécifiques pour un polypeptide simple, NP, qui est le polypeptide structural essentiel du nucléocapside du virus, et l'antigène primaire du virus de la rougeole.

Une autre comparaison fut faite, utilisant l'analyse électrophoré-tique sur gel de polyacrylamide-SDS entre (1) les polypeptides du virus de la rougeole précipités par le liquide de culture (non concentré) d'un sous-clone hybridome, obtenu en limitant la dilution, et (2) les polypeptides du virus précipités par le même sérum de rougeole atypique que celui utilisé plus haut. Les résultats confirment la spécificité des anticorps dans le liquide de culture du clone hybridome, alors que le sous-clone de celui-ci précipite le polypeptide NP avec une activité comparable à celle du clone hybridome parent.

La lignée cellulaire produite par la réunion de la lignée cellulaire myélomatique humaine stable déficiente en HPRT de cette invention avec des lymphocytes produisant des anticorps humains, ainsi que démontré par les lymphocytes anti-SSPE utilisés dans la mise en œuvre de l'invention précédente, est une culture hybride montrant les caractéristiques à la fois des lymphocytes normaux et des cellules myélomatiques parentes, et semble être dérivée d'un seul cas de réunion. Les cellules ont une nature hybride puisque:

(a) la lignée cellulaire hybride a été maintenue pendant plusieurs mois dans un milieu sélectif HAT qui inhibe la croissance des cellules myélomatiques parentales mais pas celle des lymphocytes normaux qui, à leur tour, ne survivraient probablement pas in vitro plus de 4 à 5 semaines;

(b) le nombre de chromosomes dans les cellules hybrides est proche de la somme de celui des lymphocytes normaux et des celules myélomatiques parentes;

(c) l'hybridome de nouvelles chaînes d'immunoglobulines telles que les chaînes légères et mu, et

(d) l'hybride produit des anticorps spécifiques, alors que les cellules myélomatiques parentales ne produisent pas ce genre d'anticorps. En outre, le taux de production d'anticorps de ce genre est plus élevé que celui observé dans des cultures de lymphocytes non hybridisés.

Des procédés similaires peuvent être effectués par un spécialiste dans ce domaine, à l'aide d'autres lymphocytes, y compris des lymphocytes humains qui expriment d'autres anticorps, et des lymphocytes d'autres animaux. Comme alternative à la culture d'hybrido-mes in vitro, des cellules hybridomes peuvent être injectées dans un animal immunosupprimé tel qu'une souris Nude pour culture in vivo.

Les anticorps produits par les hybrides peuvent être récupérés par l'usage de techniques courantes et peuvent être utilisés en recherche médicale analytique pour l'identification d'antigènes dans des échantillons de sang et de milieux de culture. Les anticorps sont considérablement homogènes et sont hautement spécifiques pour l'antigène cible. Une source de différents anticorps homogènes," chacun hautement spécifique à un antigène particulier, permet aux chercheurs de déterminer rapidement la spécificité d'un antigène et/ou de caractériser les antigènes. En outre, les anticorps peuvent être administrés aux êtres humains malades pour assister la lutte contre la maladie.

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REVENDICATIONS

1. Lignée cellulaire dérivée d'une cellule fusionnée hybride de (a) une cellule provenant d'une lignée cellulaire myélomatique humaine GM-1500 sensible à un milieu d'hypoxanthine-aminoptérine-thymi-dine et de (b) un lymphocyte producteur d'anticorps.
2. Lignée cellulaire selon la revendication 1 où ladite lignée cellulaire myélomatique correspond à la lignée cellulaire déposée à l'ATCC sous le N° CRL-8032.
3. Lignée cellulaire selon la revendication 1 où ladite lignée cellulaire myélomatique correspond à la lignée cellulaire déposée à l'ATCC sous le N° CRL-8038.
4. Lignée cellulaire selon la revendication 1 où le lymphocyte producteur d'anticorps est un lymphocyte humain.
5. Procédé de production d'une lignée de cellules hybrides selon la revendication 1, par la réunion d'une cellule produisant des anticorps et d'une cellule myélomatique, caractérisé en ce que la cellule myélomatique est une mutante d'une cellule humaine B GM 1500 déficiente en phosphoribosyl-transférase d'hypoxanthine.
6. Procédé selon la revendication 5 où la cellule myélomatique est prise à partir d'une lignée continue de cellules produite par le traitement des cellules humaines B GM 1500 avec du sulfonate d'éthyle de méthyle pour augmenter le taux de mutation des cellules, et on sélectionne ensuite les cellules avec la thioguanine-6 pour la déficience en phosphoribosyl-transférase d'hypoxanthine.
7. Procédé selon la revendication 5 où la cellule myélomatique est obtenue à partir "de la lignée cellulaire continue déposée à l'ATCC sous le numéro d'accès CRL-8032.
8. Procédé selon la revendication 5 où la cellule myélomatique est obtenue à partir de la lignée cellulaire continue déposée à l'ATCC sous le numéro d'accès CRL-8038.
9. Procédé selon la revendication 5 où la cellule hybride réunie est cultivée et les anticorps produits par la cellule hybride sont recueillis.
10. Procédé selon la revendication 9 où ledit hybride est cultivé in vitro.
11. Procédé selon la revendication 9 où ledit hybride est cultivé in vivo.
12. Procédé selon la revendication 9 où ledit hybride est cultivé dans un milieu contenant de rhypoxanthine-aminoptérine-thymide.
13. Procédé selon la revendication 5 où ladite cellule produisant des anticorps est un lymphocyte choisi parmi le groupe composé de cellules de rate, cellules de nodules lymphatiques et lymphocytes pé-riphéraux.
14. Procédé selon la revendication 13 où la cellule produisant des anticorps est un lymphocyte périphéral.
15. Procédé selon la revendication 5 où la cellule produisant des anticorps est obtenue à partir d'un être humain infecté par un virus.
16. Procédé selon la revendication 15 où le virus est choisi parmi le groupe composé de la rage, la rougeole, la grippe, la rubéole et la poliomyélite.
17. Procédé selon la revendication 16 où le virus est celui de la rougeole.
18. Cellule myélomatique humaine, capable d'hybridation avec des cellules humaines et animales produisant des anticorps pour la mise en œuvre du procédé selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle est une mutante de cellules humaines B GM 1500 déficiente en phosphoribosyl-transférase d'hypoxanthine.
19. Cellule selon la revendication 18 où la lignée de cellules correspond à la lignée cellulaire déposée à l'ATCC sous le N° CRL-8032.
20. Cellule selon la revendication 18, où la lignée de cellules correspond à la lignée cellulaire déposée à l'ATCC sous le N° CRL-8038.
21. Utilisation d'une lignée cellulaire selon la revendication 1 pour la production d'anticorps monoclonaux humains, caractérisée en ce qu'on cultive la lignée cellulaire selon la revendication 1 et que l'on collecte le liquide de culture après croissance de ladite lignée cellulaire.