JPS59187795A - 抗アスペルギルス菌抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、アスペルギルス菌菌体表面抗原に対する特異
性の優れた、高力価の、しかも生産段階にお（ｊる再現
（１１に（０れた抗体の製３ｉ−法、その抗体およびぞ
れを分泌づる融合細胞（以下、ハイブリ６− ドーマど称り−る）に関り゛る。 近年、細菌による感染症は予防医学の発ｊヱと抗生物′
ａの７：ＬＨ及にＪ、って著しく減少し７できたが、真
菌による疾患は世界的にかえって増加の傾向にある。こ
れら感染弁の原因である真菌の多くは通常の環ｔｒλ−
■・で常在している菌であり、健康者の口腔、消化管、
咽頭、皮膚、膣などに存在し一〇いる。真菌症どしては
、心内膜炎、肺炎、尿路疾患、髄膜炎、骨および関節疾
患、皮ｈ′り疾患等が報告されている。真菌症１．１ま
た、結核や癌など、慢性（肖耗性疾患に（７１発しＣ著
しく症状を悪化さぼることも知られている。一方、真菌
症に有効な抗生物質等の治療法は少４１＜、副作用が強
く現われる場合が多い。従っで真菌の迅速な検出とその
正確な同定は臨床ト重要な意味を持っていると共に、真
菌症に対する有効イＴ冶療法が切望されている。このほ
か弁酵Ｍ造−［稈において有害な真菌類と醸造酵母とを
迅速か゛つ正確に識別づることが求められている。 ｊ′スペルギルス菌はこの」、うな問題をかがえた真菌
の中でも代表的なものの１つぐある。本発明の抗体は、
アスペルギルス屈の分類、同定ｄ５よびアメペルー１゛
ルス症の治療に極め（有効な手段を提供するものである
。 従来、真菌の分類、同定は形態学的お」、び色素生産な
どの生化学的性状をもとに行なわれていたが、これらは
迅速１／１−に欠（プている上に熟練を必要とした。−
１う、ウサギ等の動物に免疫を行ない、免疫に用いたの
どは７！、４’にる種の菌体Ｃ吸収して得た因子血清を
用いに面泊学的同定法も行なわれている。しかし、この
因子血清は、動物を免疫して１４１られる血清Ｃ′あり
、多種類の特異ｔ（ｌをもつ抗体の胛合物で（１する。 Ｑ’　ｖで、ぞの特異性や力価が［Ｊッ１〜毎にある程
度のバラツキを４つつことは避（ＪられイＴい。加えて
１間−の屈に属乃る真菌は、抗り？’的に′Ｌ−／−い
に似かよっているため、得られる因子血清の力価は一般
に低い。また、因子血清を得る為の吸収操作も繁雑であ
る。 本番明壱等は、特異↑４に優れ、不純物が少なく、高い
力価をも・）た抗アスペルギルス菌抗体を安定に製造す
る方法について研究を重ねた結果、アスペルギルス菌に
対する抗体産生細胞とインビトロにおいて長期継代培養
可能な細胞を融合せしめることにより、アスペルギルス
閑に対する抗体を産生じしかも長期継代培養可能なハイ
ブリドーマが１ｑられ、該ハイブリドーマにより分泌さ
れる抗体を採取づ゛ることにＪ、って、特異性が高く、
夾郭物が少なく、高い力価をもった抗アスペルギルス菌
抗体が得１うれることを見出し、本発明を完成するに争
った。 本発明の抗イホ製造法は、従来法の欠点を根本的に克服
したちのであって、これにＪ、って得られる９− ハイブリドーマは、継代培養可能で゛、牛体外および生
体内において、実質的に無限に増殖を続Ｌ−Ｊ、特定の
抗原決定ＩＪに対する抗体を産生じ続（）る性質を有し
ている。従って、この製造方法によってｉｌｌ造される
抗体は、事実上、単一の特異性を有し、また単一の分子
種からなる抗アスペルギルス菌抗体で・ある。（、Ｙつ
−（、需要に応じて容易に必要な量の生産ができ、［１
ット間のバラツキをぽとんどなくすことが可能であり、
しかも極めて高力価の抗体含有液を得ることができる。 Ｊ：た、吸収操作を必要と１！づ゛、アスペルギルス菌
体のＪ、うな非精製免疫原を用いても高度に特異的な抗
体が生産される点も優れＣいる。抗原に対する高度に特
異的な反応性のために、従来法に比べて、繁雑な手順を
ふむことなく、迅速でしかも信頼１）Ｆの高い同定が可
能に＜’にる。また物質としての純度の高ざの故に、従
来の血清療法にありがら−Ｃあった火照物質に山−１ｎ
　− 来Ｊるア１ノルギー反応等の出現頻度が低下し、アスペ
ルギルス症治療剤どして使用−づ−る可能性が聞りだ。 即ち、本発明は該抗体の製造」−もまた製品の応用上も
極めて有利イ〈条件を提供するものである。 抗体ｐｔ生細胞と骨髄腫細胞どの融合によって特定の抗
体を産生ずるハイブリドーマが得られる場合があルコと
は、ＫＯｈｌｅｒらの報告（Ｎ　ａｔｕｒｅ。 ２５６巻、　４９！１−４９７頁（１９７５）ｃ）＞よ
びｇｕｒ、、ノ。 ｌ　ｍｍＬＩｎｏｌ、、　６巻、　５１１−５１９頁（
１９７６）　）をはじめとして既に知られている。しか
し、本発明収面に（Ｊ１アスペルギルス菌などの真菌類
に対す−る抗体を産生ずるハイブリドーマが形成されう
るか否か、また、ぞうして形成されたハイブリドーマの
中に、アスペルギルス菌の分類、同定やアスペルギルス
症の治療剤に用い得る優れた特巽性を有覆る抗体を産生
するハイブリドーマが含まれているが否かについては知
らねη−い４ｒかった３、アスペルギルス閑に対する抗
体の製造に本発明の製造法を適用し、従来法で′は１ｑ
られなかったΔｓｐｅｒｇ　ｉ　ｌ　ｌｕｓｆｌｌｍｉ
（ｊａｔＩＩＳに反応Ｊる抗体を百たことは、本発明者
等の創意である。 本発明は以下の工程から成る。 △、抗体産産生胞の調製 本発明のハイブリドーマおよび抗体を得る為には、親細
胞として、アスペルギルス菌に対Ｊる抗体産生細胞とイ
ンビトロにお（ブる長期継代培養可能な細胞を必要とす
る。両者の融合により、アスペルギルス菌に対する抗体
を産生じ、しかもインビ１へ口におい′Ｃ良期継代］８
Ｍ可能なハイブリトーンを得ることができる４つけであ
る。 アスペルギルス菌に対する抗体産生細胞は、ヒ１−を含
めたいり゛れの動物種から育て−しよく、また、あらか
じめ免疫を行なうこと（、玄必須では４

【いが、これを
行なうことによって目的とするハイブリドーマの採取効
率を茗しく上げることができる。 じ１〜の細胞を用いる場合には、アスペルギルス感染症
の病歴のある者や、血清中のアスペルギルス菌に対１−
る抗体価が高い者を選ぶことができる。 人為的に免疫した生体から１ｑようとする場合、免疫に
用いる免疫原としては、アスペルギルス菌体そのものま
たはグルタルアルデヒド処理、マイ１〜マイシン処理も
しくは加熱処理などによって増殖性を失わせた菌体を用
いてもよく、また菌体より表面抗原を酵素処理などの適
当な方法で分間精製したものを用いで））よい。また菌
種としては次に挙げる菌種の中から選ぶことができる。 菌糸、胞子などその形態はいずれでもよい。 −１３＝ Ａ　ｓｐｅｒｇｉ　ｌ　ｌｕｓ　　ｏｒｙｚａＯ免疫に
際し、ノ［−］イン１〜完全または不完全７ジコバン１
へのような助剤を免疫原に混合し℃用いることができる
。免疫の際の免疫原投与法は皮下注射、腹腔内注躬、静
脈内注射、皮内注２１　、筋肉内注射等いずれで−ｂよ
いが、皮下注射または腹ＩＰＰ内注射が好ましい。免疫
は１回、または適当な間隔、好ましくは１週乃至５週を
おいて繰り返し行なってもよい。免疫した動物の血清中
のアスペルギルス菌に対Ｊ−る抗体価を測定し抗体価が
充分高くなった動物／）日ら抗体産生細胞を得れば、そ
の後の操作の効率を−にげることができる。融合には最
終免疫後３　ヘ−５Ｆｊ後の動物由来の抗体産生細胞を
用いるのが好ましい。該抗体産生細胞は形質細胞おＪ、
びイの前駆細胞ひあるリンパ球ひあり、これは個体のい
ずれの部位から１ｑて−ｂＪ、いが、一般には稗臓、リ
ンパ１１Ｄ、末梢血またはイれらの絹み合わせ一１／ｌ
− から（！することかできる。 ［３，細胞融合 一ムう　ＩＪの親＠Ｉ１１包て゛あるインビ゛１〜［］
において■（期継代培養可能な■１胞は、抗体産生細胞
と融合しでト１的にかイ丁っだハイブリドーマを生づ゛
るものであればいずれでもよいが、その確率の高いのは
骨髄腫等の白血病細胞である。由来の種もヒｊ〜、ラッ
ト、マウス等いずれでもよい、、後述するように、融合
後混在する親細胞を除くためにはヒボキ）ナンチング７
′ニンホス小すボシル１〜ランスフ丁ラーげ欠１日株細
胞４ｊたはデミジン：１−ナーゼ欠損株細胞を用いるの
が好ましい。 例えば、と１〜山来のＧ　Ｍ−１５００６Ｔ　Ｇ　−Ａ
　Ｉ−２゜ＲＰ　Ｍ　Ｉ　８２２Ｇ、マウス由来のｐ　
３−Ｘ　６３−Δｑ８．Ｅつ３−Ｎｓ＋／１−△０４−
１．　Ｓ　ｐ２／　Ｏ−Δｇ１４．　Ｘ　６３−　Ａ　
ａ８　、６５３　＜；どを用いることかできる。 上述の抗体産生朋０胞の由来復−る秤ど長１１ＪＩ継代
培養可能な細胞の由来覆る種は同一であることが不可欠
で゛はないが、融合の９Ｊｓ率、融合１りの細胞の＋１
買の安定１り、生体内で培養りる際の簡便さなとの点か
ら一般には同一のものを用いる方が右利である場合が多
い。特に長期継代培養可能なｗｌ胞どしてマウス由来の
１−）３−Ｘ　６３−　Ａ　ａ８．　Ｐ　３−Ｎ　Ｓ　
Ｉ　／　１−Δ（Ｊ４−１．　８０２１０−△ｇ１４　
またはＸ（ｊ３−Δｇ８．６５３を用いる場合には同系
マウスである１３　Ａ　Ｌ、　Ｂ　／　ｃま／こはイの
交雑マウスを用いるのが右利である。 融合に際してはレンダイウィルス、ポリー■ヂレングリ
１−ル等の融合イ（ｆ進剤を用いるのがよく、特にポリ
ニブ１ノングリコール１０００．１５４０，２０００゜
４０００または６　（１００＜丁どを用いるのが好まし
い。これを約３０〜ｊ）１）％含む溶液中で融合を行な
わぜる。助剤どし−（更にジメヂルスル小キシドを添加
しでしよい。 Ｃ，ハイブリドーマの樹〜γ 融合１ｖの混合物中には、ハイブリドーマの他、親細胞
である抗体産生細胞とインビ１−口で長期継代培養可能
４ｆ細胞等が残存している。前者は通常長期間のインビ
１〜［１の培養に耐えられインいので問題はないが、後
者は１］的とり−るハイブリドーマと共に増殖する可能
性があるのでこれを除くことが望２１ｚシい。このため
後者として、ヒボキザンヂングアニンホスボリボシルト
ランスフエラーゼまた【まデミジンキナーゼ欠損株細胞
を用い、融合さ氾た後、ヒボキザンヂン、アミノプテリ
ンＪ′３よびデミジンを含む培地中で培養する。これに
よりハイブリドーマのみを選択的に生育させることがで
きる。親細胞どして（ニボキ１ｔンヂングアニンボスホ
リボシル１〜ランスフェラーゼまたはデミジンキナ−Ｖ
欠損株細胞を用いない場合には、融合に先だって該細胞
を］メジンおＪζびアクヂノマイシンＤ１７− で処理して細胞の増殖性を失わけてａ３　＜ことにＪ、
す、ハイブリドーマを親細胞との混合物ｌ）１１ら選択
してもよい。 このようにして得たハイブリドーマ群は、一般には２個
１ス」二のり［１−ンを含むことが多く、完全に同一の
性質を右す゛る細胞の集団ではない。個々のクローンを
分鰹１したい場合には、クローン化を行なうことが必要
である。クローン化は、単一の特異性をもつ抗体を製造
づ−る為には勿論であるが、多種類のクローンカ曹昆在
づる系においで長期間培養を行なっている間にしばしば
起こるポピユレーションの変化を防ぐ意味からもイｊ効
て゛あり、行なうことが望まＩ）い。り［ｌ−ン化の方
法としては、限界希釈法、軟寒天法、フィブリングル法
等を用いることができイ）。また螢光活１（１化細胞選
別装首を用いてり「１−ン化の際の細１抱の分前を行４
Ｔうことも可能である。６１．た、長期間Ｊｊ４養の間
に起こる１　　　〇　　− 変異株の出現に対し、時々クローン化を行なうことで元
の細胞の性質をもった細胞を保存することができる。 以−１のような製造法に従って作製したアスペルギルス
菌にス（］匁る抗体を産生ずるハイブリドーマの例どし
で、ＩＬホの実施例にも示づ−ように、ＡＳ−１，ＡＳ
−２，△Ｓ−３．ＡＳ〜４またはΔＳ−５が挙げられる
。 ハイブリドーマの軒１持法とし−Ｃは、インビト［１お
よびインビボで継代する他に常法に従って凍結保存づ−
ることができる。 Ｄ、抗体の製造 抗体の製造に３５たっては、アスペルギルス閑に対する
抗体を産生ずるハイシリドーマをインビトロまたＩＪ牛
体内で培養り−る。 インビＩ−［ｊの培養の場合には、本発明のハイブリド
ーマのために適当な栄養培地、例えば１０％（Ｖ／Ｖ）
の牛胎児血清、５Ｘ１０Ｍのβ−メルカプ１ヘエタノー
ル、１ｍＭのピルビ゛ン酸す１〜リウムおよび抗生物質
を添加したＲ　Ｆ）Ｍ　ｒ　１６４０培地を用いること
ができる。ＲＰ　Ｍ　Ｉ　４６４０１．、”地に代えＣ
１Ｌ５Ｑ　／　ｌ−のグルコ１−スを含むＤ　ＬＩ　Ｉ
　１）Ｏｃｃｏ’　ｓｍｏｄｉｆｉｅｄ　　Ｆ　ａｇｌ
ｅ′ｓ　　Ｍ　Ｅ　Ｍ　（以下、ｆ）　Ｌｌ　ｌ　ｂｃ
ｃｃｏ’ｓＭ　ｒＥ　Ｍと略り）］８地を用いてもよい
。細胞を増殖さける時適当な初期濃度は、各々のハイブ
リドーマによつ−Ｃ異なるが、一般に約１０８個／ｍｌ
であり、培養中の細胞温度は２Ｘ　４０’個／ｍｌを超
えないことが望ましい。 本発明のハイブリドーマを４Ｌ体に移植し−Ｃ１固型ま
たは腹水型乙・・増殖させ、その生体より体液、望まし
く（５１血１ｉ−ｊｌたけ腹水を採取り−ることにより
、該ハイブリドーマが分泌する抗体を製造Ｊることもで
きる。この方法にＪ、つ−Ｕ　４！７られる粗製抗体液
は、不純物として宿主とな−）だ生体由来の種々の物質
を含・むという欠点をもつ一方、４１一体外の培養にＪ
、って得られる抗体液に比べて著しく高濃度の目的抗体
を含むという点で（蔓れでいる。ハイブリトーンを腹腔
に移植して増殖させる場合においては移（１１１の前、
好ましくは３〜９週間前にブリスタン（２，６，Ｈｌ、
　１４−７１〜ラメデルベンタデ′カン）を腹腔内に投
与しておくことにより、粗製抗体液の収量を高めること
ができるが、この処置は必須ではない。なお、宿主どし
て用いる生体は移植するハイブリドーマの親細胞と同種
同系の動物が望まし０゜この場合には通常特別の処置を
しなくてもハイブリドーマはその生体内で増殖ηるが、
ハイブリドーマと宿主の組織適合性抗原型が一致しない
場合、一般に宿主生体に抗リンパ球抗体投与、Ｘ線照射
等の処置をあらかじめ施しておくことが必要である。移
植後、細胞が成長してくるまでに通常１週間から３週間
を要づ−る。 ２１− ｊメ十のＪ、う＜−Ｌ　！ｌ’Ｊ　ＩＷ法に従っでイ′
１製したアスペルギルス菌に幻する抗体の例として、後
述の実施例に示すように、△５ｐＯｒｏｉｌｌｕｓ　ｆ
ｕｍｉｇａｔｕｓ−ど反応づ−ｎ　ｉ　ｇ　ｅ　ｒと−
ｂ反応Ｊる抗体、Ａ３．Ｊ、び他の真菌類ども反応する
抗体が挙げられる３、その特異刊と免疫グロブリンのク
ラスは後記表−１に示す通り４′ある。 なお、従来法により、つ１ナギをΔｓｐｏｒｇｉ　ｌ　
Ｉｌｌｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ−で免疫し−Ｕ　［？られ
た抗血清をＡ　５ＤｅｒＱ　！　ｌ　Ｉｕｓ　ｆ　１ａ
ＶＩＩｓ−で吸収し−Ｃ作製した抗体ｃ３ＬＡ　ｓｐｅ
ｒｇ　＋　＋目＋ｓ　ｆｕｍｉｇａ只擬−と特異的に反
応せず他のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の種ども反応した
。５１だ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ　、
　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅおよび　ｓｐ
ｃｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒで吸収した抗体は力価か
極め−Ｃ低く、Ａ　５Ｄｅｒ！１ＩｉｌｌｌＪｓ　ｆｌ
ｌｍｉＯａｌｌｌｓとほとんど反応しなかった。 −９９− 本発明の抗体は、粗製抗体液の２１８ま使用してもよい
が、硫酸アンモニウｌ＼分画法やイオン交換りＩＩ　Ｎ
７１〜グラフイーなど免疫グ［］プリン精製の常法に従
って、或いはｐ　ｒｏｔｅｉｎ　　Δや抗原にＪ、るア
フィニフイク［］７１〜グラノイー法等により、精製し
て用いることができる。 叉、（１７られた抗体は前述の如く、△ｓｐｅｒｇ　ｉ
　ｌ　１ｕｓｆ　ｕ　ｍ　ｉ　ｇ　ａ　ｔ　ｔ＋　ｓの
分類・同定ｄ３　Ｊ’：びアスペルギルス症の治療や予
防に有効であり、アフイニデイクロマ１〜グラフィー等
によって抗原物質の精製を行なう場合など、広範囲に使
用できる。 また、必要に応じて上記抗体を混合して用いても差し支
えない。 以ゴミ、具体的イｒ実施例を述べる。 ）１口例１ （１）免疫Ｉにｊの調製：　　Ａｓｐｅｒ（ｌｉｌｌｔ
ｌｓ　ｒｕｍｒｇａｔｕｓＩ　Ａ　Ｍ　３００６株をボ
ア１ヘデー１ニス１ヘロース培地を含む斜面寒天に接種
し、２５℃のふ囲器で゛２週間培養を行イｆ−）た。１
１１差終了後、白金耳にて菌体６３　Ｊ：び胞子を回収
し、０　、０１％ツイーン８００を含むリン酸緩衝生理
食塩水（以下、Ｐ　１３Ｓと略、ｐｉ−１７，２）に懸
濁ぜしめ、菌体を除去後、遠心分離ｆ（１０００ｘＧ、
　４℃、１０分間）を行ない、洗清く胞子）を１ｑた。 この洗浄操作を４同繰り返した後、ｒ−）　ｒ３　Ｓで
゛５×１０３個／ｍｌの淵り印に調整し、免疫原懸濁液
として以下の実験に用いた、１ （２）抗体産生ＭＩＬ胞の調製：　　８日令のＩ（Ｉｌ
性Ｂ△１−　Ｂ　／　ｃマウス（日本ヂャールズリバー
）に上記免疫原懸濁液０．２ｍｌを静脈両投シノツるこ
とにＪ、り免疫を行なった。ざらに、１４目目に再度免
疫を行イ「い、免疫開始後４２目目に、上記免疫原懸濁
液０．２ｍｌを静脈両投！−′５づることによりブース
ターを行ない、３１」後にマウスを１］（２面死ぼしめ
、クリーンベンヂ（日Ｘ″？製作所）内で′牌を無菌的
に摘出した。次に、ＲＰＭ　１１Ｂ４０培地を含むシャ
ーレに牌を入れ、ビンセラ１−にて細片にほぐし、おだ
やかにピペッティングを行なった後、上記牌懸濁液をス
テンレス製金網で濾過して、牌細胞懸濁液を１ｑだ。こ
の懸濁液を遠心力Ｈｉ　（５００ｘｇ、１０分間）して
得た細胞ペレッ１〜に対して０．７４７％の塩化アンモ
ニウノ＼を含む１．７ｍＭＩ〜リス・塩酸緩衝液（ｐｉ
１７，６５　）を加え、懸濁することににり赤血球を破
壊・除去した。そして、この牌細胞懸濁液を遠心力８１
　（５００ｘｇ、　３分間）して得た細胞ペレットをＲ
Ｐ　Ｍ　Ｉ　１Ｇ４０培地で３回洗浄し、ＲＰＭ１１６
４０培地ＣｌＯ３個培地０１０温 （３）細胞融合おＪ、びハイブリドーマの調′！Ａ：前
もってインビトロでｊｌ（養したマウス骨１領腫細胞Ｓ
　１１２／　Ｏ−Ａ　ｇ１４　　ｌｘ　１０　　個と、
」二記牌細胞懸濁液（ＩＸｌｏ　　個）どを混合し、遠
心分離（　５００Ｘｇ　、　！ｉ分間）を行ない、上清
を除去して細胞ペレッ２５ー １〜を得た。容器の底をおだやかにたたくことにＪ、リ
ペレットをほぐした後、３１℃に保温した５０％（Ｖ／
Ｖ）のポリエチレングリ」−ル４０００を含むＲ　ＰＭ
　Ｉ　１６４０培地１ｍｌを添加し、１分間敢冒した。 次に、３７℃の１１■潟槽に入れ、１分間容器をおだや
かにまわすことによりポリエヂレングリコール溶液と細
胞ペレッ１〜を混合させた。次に３７℃に保温したＲ　
ＰＭ　Ｉ　１６４０培地を　ｉｍｌ／３０秒の速度で合
８１１０ｍ１加えた後、遠心分離（　５００ｘｇ，　５
分間）を行なった。上清を除去した後、細胞ペレッ１−
をＲ　ＰＭ　１　１６４０培地に懸濁させ、遠心分離（
　５００ｘｇ，　５分間）を行ない、細胞ペレッ１〜を
１げた。この洗浄操作を再度繰り返した後、細胞べ１ノ
ツ１〜に３７℃に保温した１１Ａ丁培地、すなわち２０
％生胎児血清。 ２ｍＭグルタミン、　１ｍＭピルビン酸，　　４．５０
　／　ｌ−のグルコース、　　５Ｘ１０　　Ｍのβ−メ
ルカプ１〜エタノール、　　Ｌｘｌ（ｌ　　Ｍヒポ４ザ
ンヂン，　　４Ｘ１０−’Ｍアミノシノーリン、　　１
．６Ｘ　１０−”　Ｍデミジンおよび５０　ｍ　ｇ／ｌ
のＩｉＡ酸カナマイシンを含む１欠Ｐ　Ｍ　［１Ｂ４０
培地２０ｍ１を加え、」、り懸）蜀ざぜた。この細胞懸
濁液を９６つＴル（ｒ）組織培養用プレート（Ｎ　ｕｎ
ｃ　１６７００８゜ＮＩＩｎｃ礼、＞″ンマーク）の各
つ■ルに１００Ｉｌｌずつ分注し、３７°Ｃで５％の炭
酸ガスを含む炭酸ガス培養器中で培養を開始した１、培
養開始２４時間後に、１−Ｉ　Ａ　Ｔ　ｉｑ地を１００
７．、！ｌずつ添加した。その後、２へ一３Ｅ１間隔で
各つ〕ル中の培地１００μｍを除き、新たにＨＡ　Ｔ培
地１００ｕｌを加えることにより培養を行ない、ＨＡ　
Ｔ培地中（・増殖能力を有するハイブリドーマを選択し
た。 培養開始２週間以後、ハイブリドーマの増殖を観察する
と共に、各つＴル中の培養ｌｘ清油中抗体の有無を下記
（４）に記載の方法で検査した。 （／Ｉ）抗体産生ハイブリドーマの樹立：　上記により
得られた］８養上清中の抗体の有無は酵素免疫測定法に
より調べた１、１ＪイＴわｌ〕、Ａ　ｓｐｃｒｇ　ｉ　
ｌ　１ｕｓＪ狙朋凹倶じ、Ｉ　Ａ　Ｍ　：ＨＨ）６株を
リゾ［１−デー１ス（−［１１−スブロスに接種（〕、
２５℃で３週間振需培養を行４Ｉ：った。ｊＡ　ｍｌ？
　了４Ｇ、遠心分Ｍ！、　（１０００ｘ　ｆｌｌ、　１
５分１ｉｉ　）にＪ、り培養１−清を回収し、メンブ１
ノンノイルター（０，４５μ）を用いで濾過し、濾液を
ｊΔ析ブｊ−ブに入れ、蒸溜水にス・１して、４℃で４
１１間透析を行なった。透析外液は月］　１回新しい蒸
溜水と交換した１、透１１１終了後、透４１？内液を凍
結乾燥し、相抗原粉末を得た。この抗原をＰＢＳに溶解
し、１００７、ｚ　ｇ　／　ｍｌの濶１１に調整し、ぞ
の、’＋０ｌｌｌ　量を９６ウエルプレート（Ｎ　ｌＩ
ｎＣ−Ｊ　ｍ１ｌｌＵｎｏｐｌａｊ（！　　］’　。 ＮＩＩｎｃネ１．デンマーク）の各つ■ルに分ン［じ、
４°Ｃ−ｅ１晩放置後、０．０５％ツイーン２ｏ［Ｆ］
を含む１つｆ３　Ｓで３回洗）争し、抗原プ１ノー１へ
を作製した。 洗浄後の抗原プレー１〜の各つＪルに被検体（各つ王ル
の１８　ｆｌ十漬）を１００μｍ加え、３７°Ｃて　１
時間反応さけた３、そし−’ＣＯ，０５％ツイーン２０
＠を含むｌ）　Ｂ　Ｓで３回洗浄後、西洋ワサビ由来ペ
ルオキシダーゼ結合−１ツギ抗マウス免疫グ「１プリン
抗体（カッベル判、アメリカ）を馬血清で１０００倍に
希釈した溶液５０μｍを各ウェルに分注し、３７°Ｃで
・１時間反応ざゼた。反応終了後、０．０５％ツイーン
■ ２０　　を含むＰ　Ｂ　Ｓで各ウールを５回洗浄し、Ｉ
ｍｇ／ｍｌのＯ−フェニレンジアミンおＪ、び０．０４
％（Ｖ／Ｖ）の３１％過酸化水索水を含むＯ，１Ｍクエ
ン酸緩衝液（ｐｌ−１４，５）　　４００μｍを各ウー
ルに加え、室温ｒ３０分間反応さ１遍だ。各ウールに１
２．５％硫酸を５０μＩ加えることにより酵素反応を停
止させ、４９２　ｎ　ｍにおりる吸光度測定により同定
を行なった。 その結束、１９２つ■ル中１５個のウールで抗体産生が
認められた。 次いで、抗体産生が認められたウーＬル中のハイブリド
ーマのり１］−ン化を行なった。すなわち、２９− 栄養供給細胞（ｆｅｅｄｅｒ　ｃｅｌｌｓ）どじで前処
ＩＮのＪ（連合１１Ｉｌ性Ｂ　Ａ　１．−　Ｂ　／　ｃ
マウスから牌を摘出し、上記（２）ど同様の方法で牌細
胞を得、Ｎ　Ａ　Ｔ培地η゛５×１０　個／ｎ１１の濃
度に調整した。イしで、この牌細胞懸濁液に上記ハイブ
リドーマを２個／ｍｌになるように加え、よく撹拌した
後、９６つ丁ルの絹械培養用−プレーｌ”　（Ｎ　ＩＩ
ｎｃ　１［１７００８，Ｎ　ＵｎＣ礼。 デンマーク）の各ウェルに　１００μｍずっ分注した。 ２４時間後に、各つ■ルに１１Δ丁培地を１００μｍず
つ分注し、３７℃で、５％の炭酸ガスを含む培養器中で
培養を行なった。 りｌ］−ン化２週間以後、ハイブリドーマの増殖を観察
Ｊ−るど共に、各つ「ル中の培養土油中の抗体の有無を
４１記（４）の方法で検査した。その結束、各つ■ルの
クローン化につき、２個から７０個の抗体産生バイブリ
ド−７が得られた。このハイブリドーマの中から、抗体
分泌能が高く、増殖性−”＋　　ｎ　　＝ に優れ、しかし安定イＩ−細胞Ｃあるクローンを選び、
十と同様の方法で゛再度クローン化を行イｆい、抗体ｐ
ｌ′：牛ハイブリドーマＡ　Ｓ−１，△Ｓ−２おＪ、び
Ａ　Ｓ　−３４樹３′ｌじた。 （！ラ　）　且−４１１： （インビ１〜１−１培養による生産）；ハイブリドーマ
△Ｓ−１，△Ｓ−２ま７ｔはＡＳ−３を２０％牛脂児血
清。 ２ｍＭグルタミン、　４ｍＭピルビンＭＬ、　　４．！
ｉ！：ｌ　／　ｌ−のクルロース、　　５Ｘ１０　　Ｍ
のβ−メルカプトエタノールおよび５０ｍｇ／ｌ−の硫
酸カッ−マイシンを含むＲＰ　Ｍ　Ｉ　１６４０培地に
　１×１０Ｓ個／１１１になるように懸濁させ、この細
胞懸濁液２５ｍ１を７５（：１ｍ　　組織培養用フラス
コ（−Ｊ−ニング７１．アメリカ）に分注し、３７°Ｃ
て゛０％炭酸ガスを含む炭酸ガス培養器中で培養を行な
った。増殖がほぼ定′ｈ；に達した４目口に、培養上清
を採取した。この時の細胞数は約２Ｘ　１０’個／ｍ＋
であり、上清の抗体含量は各々２．５μｇ／＋１１１．
　３．ｉμｏ　／ｍｌ、　　１．４μ（］　／ｍｌであ
った・（インビボ培養による生産）ニブリスタン（２，
６゜１０．１４−ｉｔ”ラメヂＪレペンタデカン）　　
０．５ｍｌを腹腔内に投与後１０日から３０口口のＢへ
１Ｂ／Ｃマウスの腹腔内にインビトロで増殖さ１士だハ
イブリドーマ△Ｓ−１，△Ｓ−２」、たはΔＳ−３を５
×１０（Ｉ！ｌｌ接種した。接種後２４）いし３週１」
に腹水を採取し、遠心分離（１０００ｘｇ、　４℃、１
５分間）により腹水上清を得た。各ハイーＩリド−７に
つき１０匹のマウスから約３０■１の腹水上清が得られ
、ぞの抗体含量は各々　１．！ｉｍｇ／ｍｌ、　　３．
１ｍｇ／ｍｌ、　　２．７ｍ！ＩＩ／ｍｌであった。 Ｍ　３００６株、Δｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇ
ａｔｕｓｌ　Ｆ　０５８４０株。 Ａ　ＳＤｅｒｇｉ　ｌ　ＩＬＩＳ　ｒｕｍｉＱａｔ、ｕ
ｓ　Ｉ　Ｆ　０４０５７株。 △ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ　　Ｉ　ＡＭ３
００３株。 △ｓｐＯｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒＩ　ＡＭ２０９３
株おにびＡ　Ｓｌ）Ｏｒｇｉ　ｌ　ｌｕｓ　ｏｒｙｚａ
ｅ　Ｉ　Ａ　Ｍ　２６００株を、ボテ１〜デキス１〜ロ
ース培地に接種し、２５°Ｃで・３週間振盪培養を行な
い、培養上清を得、以下、上記（４）に記載の方法に準
じて抗原プレー１〜を作製し、ハイブリドーマＡＳ−１
，Ａｓ−２またはＡＳ−３のインビトロ培養上清との反
応性を調べた。ぞ−の結果を後記表−１に示した。 （性状の検１ｉ＝Ｊ）：抗マウスＩＯＣ抗体、抗マウス
ＭＡ抗体および抗マウスＩｑＭ抗体（Ｍｉｌｅｓネ１．
アメリカ）を０，１Ｍ炭酸すｌ〜ツリウム　１００倍希
釈した溶液５０μｍを９６つＴシブ１ノー１〜（Ｎ　ｕ
ｎｃ−Ｉ　ＩＩＩｍＬＩｎＯｐｌａｔｅ　　Ｔ　、　Ｎ
　ＬｌｎＣ社、デンマーク）に分注し、４℃で２４時間
放置しｔこ。０．０５％ツイーン２０［Ｆ］を含むＰＢ
Ｓで各つ・ルを充分に洗浄後、上記（５）で１［７たハ
イブリドーマＡｓ−１，ＡＳ−２またはΔＳ−３の培養
上清を１００μｌ加え、３７°Ｃで１時間反応させた。 反応終了後、０．０５％ツイーン３３− ２０のを含む＋１　＋３８で３回洗浄し、次いてパ西洋
ツリビ由来ペルＡキシダーげ結含抗マウス免疫グロブリ
ン抗体くカッベル社、アメリカ）を馬血清で１ｏｏｏイ
ｓに希釈した溶液ｉ）０μｍを各ウェルに分注し、３７
℃で１時間反応さけた。反応終了後、０．０５％ツイー
ン２００を含むＰＢＳで各ウェルを５回洗浄し、次いで
、ｌ１１１（１／１ｌ１００−）Ｊニレンジアミンおよ
び０．０４％（Ｖ／Ｖ＞の３１％過酸化水素水を含む０
．１ＭりＴン酸緩画液（１）ｌ−１４，５＞　　１００
μｍを各ウェルに加え、室温で３０分間反応させた。各
つ■ルに１２．５％硫酸を加えることにより酵素反応を
停止させ、４９２ｎｍにおける吸光度測定により同定を
行なった。その結果を後記表−１に示した。 実施例２ （１）免疫原の調Ｍ　：　　Ａ　ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
　ｆｕｍｉｇａｔｕｓＩ　Ａ　Ｍ　３００６株をツアベ
ックドックスブ■］スに接種し、２５℃で３週間振盪培
養を行なった。培養終了後、遠心分向Ｉ１．　（１（１
００ＸΩ、１５分間）にＪ、り培養」清を回収し、メン
ブレンフィルター（０，４５μ）を用いて濾過し、濾液
を透析ヂューゾに入れ、蒸溜水にｔ４’　ｌ、　Ｔ、４
℃で４０間透析を行なった。透析外液は１０１回新しい
蒸溜水と交換した。透析終了後、透析内液を凍結乾燥し
、粗抗原粉末を得た。 この抗原をＰＢＳに溶解し、　１００μ（Ｊ　／ｍｌの
濃度に調整し、免疫原溶液どして以下の実験に用いた。 （２）竹林産生細胞の調製二　　８連合の一可性ＣＤ「
１　マウス（［］］本タレアに上記免疫原溶液とフロイ
ン１へ完全アジコバン１〜との混和ｉｌ！　０　、２　
ｍ　ｌを皮］・投１５覆ることにより免疫を行なった。 ざらに、１４日間隔で免疫を２回繰り返し、免疫開始後
７０日回転、上記免疫原溶液０，２ｎ１１を静脈内投与
することによりブースターを行ない、３日後にマウスを
脱血外せしめ、クリーンベンチ（日立製作所）内で牌お
よび腸間膜リンパ節を無菌的に摘出した。 次に、Ｄ　ｕ　ｌ　ｈｅｃＣｏ’　ｓ　Ｍ　Ｅ　Ｍ培地
を含むシャーレに牌及び腸間膜リンパ節を入れ、実施例
１（２）と同様の方法により　１×１０　　個／ｍｌの
牌細胞懸濁液を　得　ｌこ　。 （３）細胞融合およびハイブリドーマの調製：前もって
インビ１〜目で１８養したマウス骨髄腫細胞Ｐ　３−Ｘ
　６３−△ｇ８１Ｘ１０　　個と、上記牌細胞懸濁液（
１ｘ１０　　個）とを混合し、遠心分離１　（５００ｘ
（ａ、　５分間）を行ない、上清を除去して細胞ペレッ
１へを１！７だ。容器の底を１ｌ−３だやかにたたくこ
とによりペレットを（Ｊぐした後、３７°Ｃに保温した
。これに、３７℃（こｆ＾渇した４５％ポリ丁−ヂレン
グリニ１−ル４０００を含むＤ　ｕ　ｌ　ｂｅｃｃｏ’
　ｓ　Ｍ　ＩＥ　Ｍ培地　１ｍｌを約　１分間か４Ｊて
徐々に加えた。３７℃に７分間保った後、容器をゆっく
りと回転ざけながら、３１℃に保ン晶したＤ　ｕｌｂｅ
ｃｃｏ’ｓ　Ｍ　ＩＩ　Ｍ培地１５■１を容器４Ｖ面に
伝わらせながら約５分間か（Ｊで加えた１、更に約２５
ｍ　ｌのＤｕｌｈｅｃｃｏ’ｓ　Ｍ　ＩＥ　Ｍ培地を加
えた後、遠心分離（５００ｘｇ、　５分間）を行ない、
」−清を除いた。 細胞ベレッ１〜に、３７℃に保温した１０％生胎児血清
を含むＤ　ｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍ　Ｅ　Ｍ培地を加え
、１Ｘ　１０’個／ｍｌに調整し、おだやかにピペツ１
〜で混和した後、２４ウエルの！１織培養用プレーｈ　
（Ｎ　ｕｎｃｌｏｎ。 ＮＩＩｎｃ社、デンマーク）の各つＴルにｌＸ１０”個
分注し、３７℃で５％の炭酸ガスを含む炭酸ガス培養器
中で培養を開始した。培養開始２４時間後に、１−Ｉ　
Ａ丁培地を１ｍｌずつ添加した。その後、２〜３日間隔
で各つ」−ル中の培地１ｍｌを除ぎ、新たに１−ＩＡ丁
培地１ｍｌを加えることにより培養を行ない、１−１Δ
丁培地中で増殖能力を右するハイブリドーマを選択した
。 」８養開始２週間以後、ハイブリドーマの増殖を観察す
るど共に、各ウェル中のｊ８養上清中の抗体の有無を実
施例１（４）に記載の方法で検査した。 ３７− その結果、４８つ丁ル中２１個のウェルで抗体産生が認
められた。 （４）抗体産生ハイブリドーマの樹立：次いで、抗体産
生が認められたつ」ル中のハイブリドーマのクローン化
を軟寒天法により行なった。ずイｒわら、４５℃に保温
した２、５％寒天（［）ｉｆｃｏ、　　ドイツ）３Ｏｎ
＋ｌと１ｏイｅｔａ度のｐ　ｕ　ｌ　ｂｅｃｃｏ’ｓＭ
ＥＭ培地３ｍｌを混合さ培地３札ｌ４５℃保温のＬ）　
ｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍ　Ｆ　Ｍ培地Ｎ７ｍ１を加えた
。この寒天溶液に栄養供給細胞（ｆｏｅｄｅｒ　ｃｅｌ
ｌｓ）として無毛百の８日令紺］性Ｃ１）Ｆ、　　マウ
ス牌細胞を５Ｘ１０Ｓ個／ｍｌにイＪ−るＪＪうに加え
た後、直径１０ｃｍのぺ１・り朋（Ｆ　ａｌｃｏｎ　３
００３．　１３　ｅｃｔｏｎ−Ｄ　１ｃｋｉｎｓｏｎ社
、）′メリカ）に１０ｍ１ずつ分注し、室温で１５分間
放置覆ることによりゲル化さけた。そして、抗体産生陽
栢のつＪ−ル中のハイプリドーマ懸濁液約２ｍｌと、等
量の０．５％寒天を含むＤ　ｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍ　
Ｅ　Ｍ　ＦＳ地を−９０− 混合し、２ｍｌずつ上記ゲル化居士に細胞が均一に分イ
１】するように分注した。３７°Ｃで５％炭酸ガスを含
む炭酸ガス培養器中で培養を行なった。培養開始１殺１
０Ｆ１０以降、軟寒天上に生じた細胞のコロニーをバス
ツールビベラ１へにて採取し、９６ウエルの組織ｊγ１
養用養成平底プレートし、さらに［）　ｕｌｂｅｃｃｏ
　ｓ　Ｍ　Ｆ　Ｍ　ＪｒＳ地を０．２ｍｌ加え、３７°
Ｃで５％炭酸ガスを含む炭酸ガス培養器中で培養を行な
った。そして、ハイブリドーマの増殖を観寮覆−るど共
に、各つＴル中の培養上清中の抗体の有無を実施例１（
／ｌ）に記載の方法で検査した。 抗体産生が陽性のハイブリドーマの中から、抗体分泌能
が高く、増殖性に優れ、しかも安定なり１−１−ンをｊ
バび、−）Ｘ述ど同様の方と人で再Ｌａクローン化を行
イｉい、抗体産生ハイブリドーーζノＡＳ−４およびＡ
　Ｓ　　５を樹立した。 （！〕）抗体の生産： （１２１１〜口培養による生産）；実施例１（５）に記
載の方法によりハイブリドーマＡ　Ｓ−４おＪ、びＡＳ
−！ｉの９’＜養を行ない、培養上清を得た。 （インビボ培養による生産）：実施例１（５）に記載の
方法によりＣＤ　Ｆ、　　マウス腹腔内にハイブリドー
マＡＳ−４およびＡ　Ｓ−５を移植し、２ないし３週１
１に腹水を採取し、腹水ト消をｔｌだ。１０匹のマウス
から約３０ｍ１の−に清が得られｌこ。 （６）抗体の特異性および性状：　実施例１（６）に記
載の方法でハイブリドーマＡＳ　　４およびＡＳ５の培
養上清の特異性おＪζび免疫グロブリンのクラスを調べ
た。ぞの結果を表−１に示す。 実施例３ 実施例１および２で１！′？られた抗体を、１ｆｆ１０
匹のｌ　ＣＲ？ウスに２０／　ｋ（］経口、４００ｍＭ
　ｋｇ腹腔内または２００ｍｑ／　ｋ（］静脈内投与し
、１４［１間生死を観察したどころ、これら抗体による
死°亡は全く認められなかった。 また、実施例１および２で１ｑられたハイブリドーマＡ
Ｓ−１乃金△Ｓ−５の形態、大ぎざ、性状を表−２に示
す。 表−２ 代理人弁理士今　　村　　　元 第１頁の続き ヴ■発　明　者　桜井勝雄 東京都新宿区百人町３−２６−１ 呉羽化学大久保社宅４０３号 ［相］発　明　者　知久友子 流山土木１４１０−２ ＠発　明　者　小口青春 東京都練馬区練馬３−１０−１３第 −呉羽荘２２号 ＠発　明　者　松永謙− 東京都新宿区百人町３−２６−１ ３０３ ＠発　明　者　吉汲親雄 国立車乗２−１９−４６ ４３−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　抗アメベルキルス菌抗体産生細胞とイン１１〜
   口にａ３いて長期継代培養可能な細胞とからハイブリド
   ーマを作製し、該バイブリド−７が分泌する抗体を採取
   Ｊることからなるアスペルギルス菌菌体表面抗原に対す
   る抗体の製造方法。 （２）　該抗アスペルギルス菌抗体産生細胞が、牌細胞
   、リンパ１１１）細胞、末梢面白血球Ｊ′、たはそれら
   の解合物であることを特徴とする特許請求の範囲第１１
   １１に記載の方法。 （３）　該抗アスペルギルス菌抗体産生細胞がマウス由
   来細胞であることを特徴とする特許請求の範囲第２項に
   記載の方法。 （４）　該抗アスペルギルス菌抗体産生細胞が、［３Δ
   Ｌ　ＩＩ　／　ｃマウスまた（−１ぞの交雑マウス由来
   細胞であることを特徴とする特許請求の範囲第３項に記
   載の方法。 （５）　該長期継代培養可能４Ｔ細胞が骨髄腫細胞であ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項１ジ至第４項
   のいずれかに記載の方法。 （６）　該長期継代培養可能な細胞が、ヒポキサン１ン
   グアニンホスホリボシル１ヘランス７［ラーＵまたはヂ
   ミジンヤナーゼ欠損株細胞であることを特徴とする特許
   請求の範囲第１項乃至第５項のいずれかに記載の方法。 （７）　該長期継代培養可能な細胞がマウス由来細胞で
   あることを特徴とする特ｒ［請求の範囲第１項乃至第６
   項のいずれかに記載の方法。 （８）　該長期継代培養可能な細胞が、Ｐ３−Ｘ６３−
   ＡＱ８、Ｐ３−ＮＳ　Ｉ／１−Δ（］４−１　、Ｓｐ２
   １０−Ａｇ１４またはＸ　６３−　Ａ　（１８，６５３
   細胞であることを特徴とする特Ｓ′Ｆ請求の範囲第７項
   に記載の方法。 （９）　該抗アスペルギルス菌抗体産生細胞が、該アス
   ペルギルス菌で免疫した動物由来の細胞であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項乃至第８項のいずれかに
   記載の方法。 （１０）　　該抗アスペルギルス菌抗体産生■１胞と該
   長期継代培養可能な細胞を融合さける過程において、融
   合促進剤としてポリエチレングリコールを用いることを
   特徴とする特「１！［請求の範囲第１項乃至第９項のい
   ずれかに記載の方法。 （１１）　　該ハイブリドーマを、ヒボキサンチン、ア
   ミノプテリンおよびチミジンを含有りる培地中で培養す
   ることにより、選択的に生育させることを特徴とする特
   許請求の範囲第１項乃至第１０項のいずれかに記載の方
   法。 （１２）　　該ハイブリドーマをクローン化して単一の
   クローンに分難づることを特徴とする特許請求の範囲第
   １項乃〒第１１項のいり゛れかにｉ【コ載の方法、３（
   １３）　　該ハイブリドーマのりＩ」−ン化に際し、限
   界希釈法、軟寒天法またはフィブリングル法を用いるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１２項に記載の方法。 （１４）　　該ハイブリドーマをインご１〜［コで′培
   養して抗体を分泌させることを特徴とする特許請求の範
   囲第１項乃至第１３項のいずれかに記載の方法。 （１５）　　該ハイブリドーマを生体内に移植し、その
   動物の体液から抗体を分１ｌｉＩｌ？Ｉることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項乃〒第１３項のいずれかに記
   載の方法。 （１６）　　該体液が血清または１１り水でｄうること
   を特徴とするＦ［訂請求の範ｆｕｌｌ第１５項に記載の
   方法。 （１７）　　該ハイブリドーマを移植Ｊる動物がマウス
   であることを特徴とする特ｒ［請求の範囲第１２項また
   は第１６項に記載の乃η、１゜ （１８）　　該バイブリド・−マを移１ｆｉ　′１Ｊ−
   る動物がＢＡＬ　Ｂ　／　ｃマウスまたはその交雑マウ
   スであることを特徴とする特Ｙ［請求の範囲第１７項に
   記載の方法。 （１９）　　該アスペルギルス菌がＡ　ｓｐｅｒｇｉ　
   ｌ　ｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓであることを特徴とする
   特許請求の範囲第１項乃至第１８項のいずれかに記載の
   方法。 （２０）　　特許請求の範囲第１項乃至第１９項のいず
   れかに記載の方法で製造されるアスペルギルス菌菌体表
   面抗原に対する抗体。 （２１）　　ハイブリドーマＡＳ−１，ＡＳ−２，Ａｓ
   −３゜Ａ　Ｓ−４またはＡＳ−５ににり分泌されること
   を特徴とする特許請求の範囲第２０項に記載の抗体。 （２２）　　ハイブリドーマＡＳ−１またはＡ　Ｓ−／
   ｌにより分泌されるＡ　ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｔ’ｕ
   ｍｉｇａｔｕｓ菌体表面抗原に対する抗体であることを
   特徴とする特許請求の範囲第２０項または第２１項に記
   載の抗体。 （２３）　　ハイブリドーマΔＳ−２，△Ｓ−３または
   八５− ３、、−５により分泌されるＡｓｐｃｒｇｉｌｌｕｓ　
   ｆｕｍｉｇａｔｕｓ。 Ａｓｐｃｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ　、　　Ａｓｐ
   ｃｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒおよびＡｓｐｃｒｇｉｌ
   ｌｕｓ　ｏｒｙｚａａ菌体表面抗原に対する抗体である
   ことを特徴とする特ｆｆ請求の範囲第２０項または第２
   １項に記載の抗体。 （２４）　　抗アスペルギルス菌抗体産生細胞どイン１
   １〜口にｄ−３いて長期継代培養可能な細胞とから作製
   されるアスペルギルス菌菌体表面抗原に対する抗体を分
   泌するハイブリドーマ。 （２５）　　　ＡＳ−１，ＡＳ−２，ＡＳ−３，Δ３−
   ４またはＡＳ−５であることを特徴とする特ｇｔ（請求
   の範囲第２４項に記載のハイブリドーマ。