CA1094546A

CA1094546A - Procede de preparation de derives de l'acide 7-amino thiazolyl acetamido cephalosporanique

Info

Publication number: CA1094546A
Application number: CA269,203A
Authority: CA
Inventors: Rene Heymes
Original assignee: Roussel Uclaf SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1976-01-14
Filing date: 1977-01-05
Publication date: 1981-01-27
Also published as: IE44857L; SE7613990L; ES454997A1; GB1543005A; US4097595A; DK12477A; CH621555A5; JPS6337116B2; DE2700552C2; JPS5287192A; BE850338A; FR2342733B1; DK153489B; SE434842B; FR2342733A1; CH617204A5; GB1543004A; DE2700552A1; LU76566A1; JPS59144785A

Abstract

La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de l'acide 7-amino thiazolyl acétamido céphalosporanique de formule I: (I) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupement facilement éliminable par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse choisi dans le groupe constitué par les groupements tert-butoxy-carbonyle, trityle, dibenzyle, trichloroéthyle et carbobenzyloxy, R1 représente un radical alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone ou un hétérocycle à 5 éléments comportant, le cas échéant, un groupement cétonique. A représente soit un atome d'hydrogéne, soit un équivalent de métal alcalin, alcalinoterreux ou de magnésium, soit un équivalent de base organique aminée, ainsi que leur procédé de préparation. Lesdits dérivés possèdent une très bonne activité antibiotique.

Description

~0~ ~5~6 La presente i.nvention a pour objet un procédé de préparation des nouveaux dérivés de l'acide 7-amino thiazo]yl acétamido céphalosporanique de formule I :

N~-I-R

S N
\~-J
~ C~I -C-N~I (I)

2 ll \ r~S~

~\ CH2 S-C -Rl dans laquelle R représente un atome d'hydrogene ou Ull groupe-ment facilement éliminable par hydrolyse acide ou par hydro-genolyse choisi dans le groupe constitue par les groupemen-ts tert-butoxycarhonyle, trityle, dibenzyle, -trichloroethyle et carbobenzyloxy, Rl represente un radical alkyle ayal~t de 1 à 4 atomes de carbone ou un hétérocycle a 5 eléments com-portant, le cas échéant, un groupement cétonique, A repré-sente soit un atome d'hydrogène, soit un équivalent de méta].
alcalin, alcalino-terreux ou de magnésium, soit un équivalent de base organique aminée.

Parmi les valeurs de Rl, on peut citer les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, sec-bu~yle, tert-butyle, furyle, thiazolyle, oXothiazolinyle, isothiazolyle, oxazolyle, imidazolyle, diazolyle, thiadiazolyle,tétrazolyle.

Parmi les valeurs de A, on peut citer notamment un équivalent de sodium, de potassium, de lithiurn, de calcium ou de magnésillm; parmi les bases organiques qui peuvent etre représentées par A, on peut citer la triméthylamine, la triethyl-amine, la méthylamine, la propylamine, la N,N-dimé-thyléthanol-amine ou la tris (hydroxy méthyl) méthylamine.

L'inventiorl a notamment pour objet un procédé de ~* I ~f~ky lO'~S46 préparation des produits de formule I, dans laquelle R est choisi dans le groupe constitué par les groupements tert-butoxycarbonyle, trityle, dibenzyle, trichloro~thyle et carbobenzyloxy.
L'invention a plus particulièrement pour objet un procédé de préparation des produits de formule I dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupement trityle, R
représente un radical méthyle, éthyle, furyle ou 2-oxo (3H) thiazolin-4-yle et A représente un atome d'hydrogène.
Parmi les produits de formule gén~rale I, on peut citer notamment les produits décrits ci-après dans les exemples et particulièrement l'acide 7-~ -(2-amino 4-thiazolyl) acétamido~

3-(acétylthiométhyl) ceph-3-ème 4-carboxylique.
Il est entendu que les produits de formule I précédem-ment cités peuvent exister :
- Soit sous la forme indiqu~e par ladite formule I, - Soit sous la forme de produits de formule Iz :
R
N

S'~
~
H2-CI-NH ~ ~ ~ (Iz) 0 ~ CH S-C-R
C02A 2 ~ 1 dans laquelle R, Rl et A ont la signification précitée.

: Le procédé de préparation das produits de formule I

est caractérisé en ce que l'on traite :

- Soit un produit de formule II :

/~ ~ CH -S-C-R (II) dans laquelle Rl a la sigrlification donnée ci-dessus, par un acide de formu~e III :
~H-R' .S~
~ / (III) ~ Cl-l ~2~1 ou par un derive foncti.onnel de cet acide de formule III, formule dans laquelle R' represente uri groupement facilement éliminable par hydrolyse acide ou par hydrogenolyse choisi dans le groupe cons-titue par les groupements tert-bu-toxy-carbonyle, trityle, dibenzyle, trich]oroethyle et carbobenzyloxy, pour obtenir un produit de formule Ia :

NH-R' S N
~
`c~2 co ~ f c~2 s c Rl :
correspondant à un produit de formule I, dans laquelle R
représente un groupement facilement éli.minable par hydrolyse acide ou par hydrogenolyse choisi dans le groupe constitue par les groupements tert-butoxycarbonyle, trityle, dibenzyle, trichloroethyle et carbobenzyloxy, et A represente un atome d'hydrogène, produit de formule Ia que l'on hydrolyse, le cas echéant, en milieu acide ou hydrogénolyse, pour obtenir un produit de formule Ib:

~, .
~ ' .
.

~09~5~6 NH

S N

2 \ ,,S ~ (Ib) ~r O/J-- \~\ CH2S_IC~_Rl correspondant ~ un produit de formule I, dans laquelle R et A
repr~sentent chacun un atome d'hydrogène et que, si désir~, on salifie par une base minérale ou organique, les produits de formule Ia ou Ib selon les méthodes usuelles, pour obtenir les produits correspondants de formule I, dans laquelle A représente un ~quivalent de métal alcalin, alcalino-terreux ou de magnésium, ou de base organique aminée ;
- Soit l'on traite un produit de formule IV :
NH-R

S ~ N
\=~
CH -C0-~H
2 ~ ~,S ~ (IV) 02A ' O

dans laquelle R a la signification donnée ci-dessus et A' repré-sente un atome d'hydrogène ou de m~tal alcalin par un produit de formule V :

o ( V ) dans laquelle Rl a la signification précitée et B représente un 30 atome d'hydrogène ou de métal alcalin, pour obtenir un produit de formule Ia ou Ib, salifi~ ou non, produit que, s'il est salifié, l'on traite par un acide, pour obtenir un produit de

- 4 -l` ~og4546 formule Ia ou Ib, produit que l'on salifie ensuite, si désiré, selon les méthodes usuelles.
Dans un mode préférentiel d'exécution du procédé, on traite le produit de formule II par un dérivé fonctionnel de l'acide de formule III.
Ce dérivé fonctionnel peut être le chlorure ou l'anhy-dride d'acide, ce dernier pouvant être formé in situ par action du chloroformiate d'isobutyle sur l'acide. On peut également utiliser d'autres halogénures ou encore d'autres anhydrides formés in situ par action d'autres chloroformiates d'alcoyle, d'un dialcoylcarbodiimide ou d'un dicycloalcoylcarbodiimide, tel que le dicyclohexylcarbodiimide. On peut également utiliser d'autres dérivés d'acides, tels que l'a~ide d'acide , l'amide d'acide ou un e~ter d'acide formé, par exemple, avec l'hydroxy succinimide, le paranitrophénol ou le 2-4 di-nitrophénol. Dans le cas où l'on traite le produit de formule II par un halogénure de l'acide de formule générale III ou par un anhydride formé avec un chloroformiate d'isobutyle, on procède, de préférence, en présence d'un agent basique.
Comme agent basique, on peut choisir, par exemple, un carbonate de métal alcalin ou une base organique terriaire, telle que la méthyl morpholine, la pyridine ou une trialcoylamine, telle que la triéthylamine.
Comme agent d'hydrolyse acide auquel on soumet, le cas échéant, les produits de formule Ia, on peut citer l'acide trifluoroacétique, l'acide formique ou l'acide acétique. Ces acides peuvent être employés anhydres ou en solution aqueuse.
Comme agent d'hydrogénolyse, on peut citer notamment le système zinc-acide acétique.
On utilise, de préférence, un agent d'hydrolyse acide, tel que l'acide trifluoroacétique anhydre ou les acides formique~
ou acétique aqueux, pour ~liminer les groupement tert-butoxy-, ~10~4546 carbonyle ou trityle.
On utilise, de préf~rence, le système zinc-acide acétique, pour éliminer le groupe trichloroéthyle et l'hydro-génation catalytique, pour éliminer les groupes benzyles, dibenzyles et carbobenzyloxy.
L'action du produit de formule V sur le produit de formule IV est réalisée, de préférence, dans l'eau ou dans un m~lange eau-acétone, mais on peut également utiliser un autre solvant aqueux, tel qu'un mélange eau-dioxanne, eau-tétrahydro-furanne ou eau-alcool-éthylique.
Dans le cas où l'on utilise un produit de formule IV
dans laquelle A' représente un atome d'hydrogène ou un produit de formule V, dans laquelle B représente un atome d'hydrogène et dans le cas où A' et B sont tous deux de l'hydrogène, le mode préférentiel du proc~dé consiste à préparer in situ le sel alcalin corxe~pondant à ces produits, pour obtenir un produit de formule IV, dans laquelle A' représente un atome de métal alcalin et/ou un produit de formule V, dans laquelle B représente un atome de m~tal alcalin.
Les atomes de métau~ alcalins représentés préférentiel-lement par A' et B sont le sodium ou le potassium.
Dans le cas où la salification des produits de formule IV, danq laquelle A' représente un atome hydrogène et/ou de formule V, dans laquelle B représente un atome d'hydrogène, est effectuée in situ, on utilise préférentiellement le carbonate acide de sodium ou de potassium. On peut cependant utiliser d'autres substanceq alcalines, telles que la soude, la potaqse ou les carbonates de sodium ou de potassium.
La réaction du produit de formule V sur le produit de formule IV peut ~tre conduite en présence d~un tampon maintenant dans le milieu un pH voisin de la neutralit~, tel qu'un tampon phosphate monosodique-carbonate acide de sodium.

10~4S~6 Dans le mode préférentiel décrit ci-dessus, on utilise enfin un acide, pour obtenir les produits de formule Ia ou Ib.
Cet acide est, de préférence, l'acide acétique, mais on peut également utiliser d'autres acides minéraux ou organiques, tel~
que l'acide chlorhydrique, sulfurique, formique, oxalique ou trifluoroacétique.
Cependant dans le cas où l'on utilise un produit de formule IV, dans laquelle A' représente un atome de métal alcalin et R représente un atome d'hydrogène et un produit de formule V, dans laquelle B représente un atome de métal alcalin en quantités stoechiométriques, l'acide acétique libéré au cours de la réac-tion peut permettre aux produits de formule Ib de cristalliser sous forme de sel interne rendant ainsi inutile l'utilisation de l'acide mentionné ci-dessus.
Les produits de formule Ia ou Ib peuvent être salifiés selon les méthodes usuelles. La salification peut, par exemple, ~tre obtenue par action sur ces acides d'une base minérale, telle que, par exemple, l'hydroxyde de sodium ou de potassium ou le bicarbonate de sodium ou d'une base organique comme la triéthyl-amine.
Cette salification est réalisée, de préférence, dans un solvant ou un mélange de solvants, tels que l'eau, l'éther ~thylique, l'éthanol ou l'acétone.
Les produits de formule générale I possèdent une très bonne activité antibiotique d'une part, sur les bactéries gram . (+), telles que les staphylocoques, les streptocoques et notam-ment sur les staphylocoques pénicillino-r~sistants et d'autre part, sur les bactéries gram (-) notamment sur les bactéries coliformes, les proteus et les klebsiellae.
Ces propriétés rendent aptes lesdits produits ~ être utilisés comme médicaments dans le traitement des staphylococcies, telles que septicémies ~ staphylocoques, staphylococcies malignes 109~5~6 de la face ou cutanées, pyodermites, plaies septiques ou sup-purantes, anthrax, phlegmons, ~résipèles, staphylococcies aigues primitives ou post grippales, bronchopneumonies, suppura-tions pulmonaires.
Ces produits peuvent également être utilisés comme médicaments dans le traitement des collibacilloses et infections associées, dans les infections à Proteus et à Klebsiella et dans d'autres affections provoquées par des bactéries à gram (-).
Ainsi, l'on peut employer, ~ titre de médicaments et nota~nent de m~dicaments antibiotiques, les produits de formule I, tels que définis ci-dessus, pharmaceutiquement acceptables, et notamment ceux décrits dans les exemples.
Les produits de formule I, pharmaceutiquement accep-tables, peuvent être employés pour la préparation de compositions pharmaceutiques renfermant, à titre de principe actif, l'un au moins desdits produits.
Ces compositions peuvent être administrées par voie buccale, rectale, parentérale ou par voie locale en application topique sur la peau et les muqueuses.

Elles peuvent être solides ou liquides et se présenter sous les forme~ pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme, par exemple, les comprimés, simples ou dragé-ifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les prépara-tions in~ectables, les pommades, les cr~mes, les gels, elles sont préparées selon les méthodes usuelles. Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le st~arate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsi-fiants, les conservateurs.

~- 8 -10~45~l6 ~a dose administr~e est variable selon l'affection traitée, le sujet en cause, la voie d'administration et le produit considéré.
Elle peut être, par exemple, comprise entre 0~250 g et 4 g par jour, par voie orale chez l'homme, avec le produit décrit à l'exemple 2 ou encore comprise entre 0~50~ g et 1 g, trois fois par jour, par voie intramusculaire, avec le produit décrit à ce même exemple.
Les prodults de formule V qui ne sont pas connus peuvent être préparés par action du sulfhydrate de sodium sur le chlorure d'acide correspondant RlC0Cl selon la méthode décrite dans J. Antibiotics 27-8-577 (1974).
Un exemple d'une telle préparation est donnée plus loin dans la partie expérimentale.
Les produits de formule II peuvent être préparés par action d'un prodult de formule V sur l'acide 7-amino céphalos-poranlque.
Un exemple d'une telle préparation est donnée dans la partie expérimentale.
La pLéparatiOn des produits de formule II, notammerlt de ceux pour lesquels Rl représente un radical alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone et plus particulièrement de l'acide 7-amino 3-acétyl thiométhyl ceph-3-ème 4-carboxylique, fait partie de l'invention.
Les produits de formule III peuvent être préparés ~- par les réactions classiques de protection de la fonction amineappliquées à l'acide 2-amino 4-thiazolyl acétique ou à un de ses esters. Un exemple d'une telle préparation est d~crit dans la partie expérimentale.
Les produits de formule IV sont préparés par action d'un produit de formule III sur l'acide 7-amino c~phalosporani-que suivie, le cas échéant, d'une hydrolyse acide. Un exemple : ! , _ g .~'' ', , :

10~4546 de telles r~actions est donné dans la partie expérimentale.
Le produit de l'exemple 4, préparé dans la partie expérimentale, peut exister :
- Soit sous la forme indiquée ~ cet exemple ;
- Soit sous la forme de l'acide 7-~2-(2-amino 4-thiazolyl) acétamidoJ 3- ~ (2-hydroxy 4-thiazolyl) carbonyl) thiométhyl~ ceph-3-ème 4-carboxylique.
Les exemples suivant~ illustrent l'invention sans toutefois lui conférer aucun caractère limitatif.
Exemple 1 : Acide 7- ~2-(2-tritvlamino 4-thiazolyl) ac~tamido 3-acétylthiométhYl ceph-3-ème 4-carboxYlique On porte à 90C pendant deux heures trente minutes, un mélange de 1.63 g d'acide 7- ~2-(2-tritylamino ~-thiazolyl) acétamido~ 3-acétoxyméthyl ceph-3-ème 4-carboxylique, 0.21 g de bicarbonat0 de sodium, 0.66 g de thioacétate de potassium, 10 cm3 d'eau et 5 cm3 d'ac~tone. On acidifie par 1 cm3 d'acide acétique, essore, lave, chromatographie sur silice et élue par un mélange chlorure de méthylène-éther tl-l), puiq acétone-eau-éther (5-1-4). On recueille 830 mg de produit attendu.
L'acide 7- ~2-(2-tritylamino 4-thiazolyl) acétamido 3-acétoxy méthyl ceph-3-ème 4-carboxylique utilisé au départ de l'exemple 1, a été préparé comme suit :
Stade A : Acide 2-tritylamino 4-thiazolyl acéti~ue :
On mélange 930 mg de 2-amino 4-thiazolyl acétate d'éthyle, 25 cm3 de chloro~orme sec et 0~8 cm3 de tri~thylamine et 1,65 g de chlorure de trityle. On agite trois heures, ajoute 3 cm3 d'acide chlorhydrique N et 5 cm3 d'eau, agite, décante, rajoute 5 cm3 d'acide chlorhydrique N et 5 cm3 d'eau, décante, sèche et concentre à sec.
On ajoute au résidu 10 cm3 de dioxanne et 6 cm3 de soude N, agite à 50 C, puis une nuit à température a~biante, chasse le solvant, dilue à l'eau, lave à l'éther, acidifie avec - ~o~4S~6 0.5 cm3 d'acide acétique, laisse cristalliser, essore, et obtient 1.33 g d'acide 2-tritylamino 4-thiazolyl ac~tique attendu, que l'on peut purifier par empâtage à l'éther. F = 220 C. `
Stade B : Acide 7- ~-(2-trltylamino 4-thlazolyl) acétamido~
3-acetoxv méthyl ceph-3-ème 4-car~oxyliq~e :
On mélange 801 mg d'acide 2-tritylamino 4-thiazolyl acétique, 10 cm3 de tétrahydrofuranne sec et 2 cm3 d'une solu-tion molaire de N-méthyl morpholine dans le tétrahydrofuranne.
On agite, refroidit à - 20C et ajoute lentement 2 cm3 d'une solution molaire de chloroformiate d'isobutyle dans le t~tra-hydrofuranne, agite et ajoute une solution de 544 mg d'acide 7-amino céphalosporanique dans 24 cm3 d'une solution molaire N-méthyl morpholine dan~ le tétrahydrofuranne et 10 cm3 d'eau.
On agite en laissant réchauffer, élimine le solvant, dilue dans l'eau, ajoute 2 cm3 d'acide chlorhydrique 2N, essore, sèche et isole 1.16 g de l'acide attendu.
Exem~le 2 : Acide 7-~2-(2-amino 4-thiazolYl) acétamido,73-acétyl-thiométhYl ceph-3-ème 4-carboxvlique On porte 15 minutes à 60C, le produit obtenu à
l'exemple 1, dans l'acide formique aqueux à 50 %, chasse l'acide formique, reprend à l'acétone, essore, obteint 325 mg de produit que l'on purifie en le dissolvant dans 2.6 cm3 d'acétone à
20 % d'eau et 0.3 cm3 d'acide chlorhydrique 2N. On essore, ajoute 3 gouttes de pyridine et 1 cm3 d'acétone. On obtient 0.228 mg de produit purifié.
e : C15H165N4S3 Calcul~ : C % 42.04 I~ % 3.76 N % 13.07 S % 22.44 Trouvé : 41.7 3.9 12.8 20.9 Exemple 3 : Acide 7- ~2-(2-tritylamino 4-thiazolYl) acétamido 3-acétvlthiom~thyl ceph-3-ème 4-carboxvlique ~.

On place sous gaz inerte, 9.9 g d'acide 2-tritylamino 4-thiazolyl acétique, 100 cm3 de tétrahydrofuranne et 2.7 cm3 109~546 de N-méthyl morpholine. On agite un quart d'heure à température ambiante, on refroidit à - 15C et on ajoute 3.15 cm3 de chloro-formiate d'isobutyle. On agite 5 minutes entre - 10 et - 15C.
On ajoute en deux minutes, 6.5 g d'acide 7-amino 3-acétylthiométhyl ceph-3-ème 4-carboxylique, 65 cm3 d'eau et 3.15 cm3 de triéthylamine. On agite une heure trente en revenant à température ambiante, puis on chasse le tétrahydrofuranne, acidifie, extrait au chlorure de méthylène et essore l'insoluble.
On lave la phase organique, concentre, triture la poudre obtenue à l'éther, sèche et obtient 15.2 g de produit brut.
On purifie 6.7 g de produit brut en le dissolvant dans le chlorure de méthylène. On ajoute de l'acétate d'éthyle, sépare les parties insolubles, traite la solution au noir de carbone, essore, rince, sèche et obtient 5.1 g de produit attendu.
L'acide 7-amino 3-ac~t~lthiométhyl ceph-3-ème 4-carbo-xylique utilis~ au départ de l'exemple 3, a été préparé comme suit :
On place 5.44 g d'acide 7-amino céphalosporanique et SO cm3 d'eau à 1% d'hydroquinone sous gaz inerte. On agite et 20 ajoute 1.7 g de bicarbonate de sodium,puis ajoute, après dissolu-tion, 3 g de thioacétate de potassium. On agite 3 heures à 60C, refroidit et acidifie à l'acide acétique. On agite ~ température abiante,essore, lave,sèche et obtient 4.9g de produit attendu.
Exem~le 4 : Aclde_7- ~r2-~2 _mino 4 th _z_ 1Y1) acétamido ~3-~(2-oxo (3H) thiazolin 4-Yl) c~ y~) thiométhyl~ ceph-3-ème _ _ _ .. _.. ~ _ ._ _ ~ ~_ . _ _.... _ ..___ .._ .__ . _ _ 4-carboxYli,~Lue On mélange 0,825 g d'acide 7- ~ -(2-amino 4-thiazolyl~
acétamido/ 3-ac~toxym~thyl ceph-3-ème 4-carboxylique, 4 cm3 d'eau distillée, 0,4 g d'acide (2-oxo (3H) thiazolin 4-yl) ;:~
thiocarboxylique, 0.39 g de phosphate monosodique et 0.21 g de bicarbonate de sodium.

On agite 5 heures à 50C. On refroidit, ajoute de ' :

109~5~6 l'acide acétique jusqu'à pH 4-5. On essore la précipité et obtient, après séchage, 0.56 g de produit brut.
On dissout ce produit dans 5 cm3 d'eau contenant un équivalent de bicarbonate de sodium. On fixe sur résine échangeuse d'ions. On élue à l'eau, puis récupère le produit par de l'eau à 10 % d'isopropanol. On réunit les fractions contenant le produit, acidifie a l'acide acétique. On obtient 0.12 g de produit attendu. Spectre d'Ultra Violet dans l'éthanol 10 % d'acide chlorhydrique.
max. 258 nm ~ = 16 350 ;
max. 307 nm ¢= 10 350.
Infra-Rouge : (nujol).
1772 cm (~ lactame) ;
1682 - 1638 cm 1 (C = 0 amide secondaire).
.

L'acide 7- ~2-~2-amino 4-thiazolyl) acétamide~ 3-acétoxyméthyl ceph-3-ème 4-carboxylique utilisé au départ de l'exemple 4, a été préparé comme suit :
On m~lange 351 mg d'acide 7- ~2-(2-tritylamino 4-thiazolyl) acétamido~ 3-acétoxyméthyl ceph-3-ème 4-carboxylique, 0.44 cm3 d'acide acétique et 0.22 cm3 d'eau, porte ~ 60C, agite quarante minutes, refroidit, dilue à l'acétone, puis à l'éther, essore et sèche. On obtient 171 mg de produit brut attendu.
On purifie en portant 470 mg dans 5 cm3 d'une solution éthanol-eau (1-1) au voisinage de l'ébullition, essore l'insolu-ble (A), re~roidit, essore l'insoluble et isole un premier jet de 170 mg. On recommence la même opération en réunissant l'in-soluble (A) au filtrat du premier jet et obtient 107 mg, soit en tout 277 mg de produit attendu, L'acide (2-oxo (3H) thiazolin 4-yl) thiocarboxylique utilisé au départ de l'exemple 4, a été préparé comme suit :
On mélange à 10C, 1.6 g de sulfhydrate de sodium à
70 %, 16 cm3 d'éthanol, 2.5 cm3 d'eau et ajoute 1.635 g de S~6 chlorure de liacide (2-oxo (3H) thiazolin 4-yl) thiocarboxylique.
On agite une heure, chasse l'ethanol, ajoute de l'eau et intro-duit sous agitation, 0.8 cm3 d'acide chlorhydrique concentré.
On essore le produit qui cristallise rince et sèche et obtient 1.46 g d'acide attendu.
Exemple 5 : Acide 7-~ 2-(2-amino 4-thiazolYl) acétamido~ 3-[((2-furyl) carbonvl) thiom~thyl~ ceph-3-~me 4-carboxYlique On mélange 0.25 g d'acide 2-furyl thioacétique, 4 cm3 d'eau distillée, 0.17 mg de bicarbonate de sodium et 0.435 mg du sel de sodium de l'acide 7- ~2-(2-amino 4-thiazolyl) acétamido~
3-acétoxy méthyl ceph-3-ème 4'carboxylique.
On laisse 5 heures à 50C. On refroidit à température ambiante et on acidifie à l'acide ac~tique ~ pH 3-4.
On essore le précipité, rince, sèche et obtient 420 mg de produit brut. Celui-ci est dissous dans de l'eau contenant de la soude. On place sur colonne échangeuse d'ions, on élue par de l'eau, puis par de l'eau additionnée de 10 % d'isopropanol.
On réunit les fractions contenant le produit, chasse les solvants sous vide,acidifie le résidu aqueux à l'acide acétique et obtient 115 mg de produit attendu.
AnalYSe : C18H166N4S3 Calculé : C % 45.0 H % 3.4 N % 11.7 S % 20.0 Trouvé : 44.5 3.5 12.2 20.0 Le sel de sodium de l'acide 7- ~2-(2-amino 4-thiazolyl) acétamidoJ 3-acétoxy méthyl ceph-3-ème 4-carboxylique, utilisé
au départ de l'exemple 5, a ~t~ préparé comme suit :
On mélange 2.26 g d'acide 7- ~2-(2-amino 4-thiazolyl) acétamido~ 3-ac~toxy méthyl ceph-3-ème 4-carboxylique, 420 mg de bicarbonate de sodium, 10 cm3 d'eau et 0.5 g de charbon actif, agite trois minutes à 50C, essore, lave à l'acétone et concentre à 5 ml. On ajoute 50 cm3 d'acétone, chauffe ~ 60C, le sel cristallise. On essore et obtient 1.745 g de sel attendu .

~0~4546 ( ~ ~ = + 120 (c = 1 % dans l'eau).
Exemple 6 : Acide 7- ~2-~2-amino 4-thiazolyl) acetamido) 3-propionyl thiométhYl ceph-3-~me 4-carboxylique a) Thio~ropionate_de sodi_m_:
On introduit 4.6 cm3 de chlorure de propionyle dans une solution de sulfhydrate de sodium préparée en dissol-vant 8 g de sulfhydrate de sodium dans 20 cm3 d'eau et en ajou-tant 128 cm3 d'athanol.
On laisse r~agir 30 minutes, essore, concentre, reprend ~ l'éthanol, chasse le solvant, puis reprend ~ nouveau à l'étha-nol, essore, concentre ~ sec, ajoute de l'éther et essore les 4.5 g de produit attendu.
b) On porte 4 heures à 60C, 1.23 g d'acide 7- C2-(2-amino 4-thiazolyl) acétamido~ 3-acétoxy méthyl ceph-3-~me 4-carboxylique dans 12 cm3 d'eau contenant 252 mg de bicarbonate de sodium et 516 mg de thiopropionate de sodium. On refroidit, ajoute 0.2 g de noir de charbon, essore,acidifie, lave~sèche et obtient 0.88 g de produit brut.
On agite 0,44 g du produit précédent dans 8.6 cm3 de chlorure de méthylène et 0.2 cm3 de triéthylamine. On essore l'insoluble que l'on réextrait. Après nouvel essorage, les solutions organiques sont réunies et concentrées. Le résidu est dissous dans l'eau. On ajoute 0.2 cm3 d'acide acétique, essore.
lave, sèche et obtient 0~232 g de produit purifié.

Analyse : C H 0 N S

Calculé : C % 43,42 H % 4.1 ~ % 12.66 S % 21.73 Trouvé : 43.3 4.3 12.2 20.8 Exemple 7 :
On a réalisé une préparation pour injection de formule :

- Acide 7- ~2-(2-amino 4-thiazolyl) acétamidoJ 3-acétylthiométhyl ceph-3-ème 4-carboxylique ................... 500 mg;
- Excipient aqueux stérile q.s.p.................... 5 cm3 . .

i~gi~s~

Exem~le 8 :
On a préparé des gélules répondant à la formule :
- Acide 7- ~2-(2-amino 4-thiazolyl) acétamido~ 3-acétylthiométhyl ceph-3-ème 4-carboxylique.............. 250 mg , - Excipient q.s. pour une gélule terminée à 400 mg.

Etude ~harmacolo~i~ue A) Activité in vitro Méthode des dilutions en milleu li~ulde :
On prépare une série de tubes dans lesquels on répartit une même quantité de milieu nutritif stérile. On distribue dans cha~ue tube des ~uantités croissantes du produit ~ étudier, pUi5 chaque tube est ensemencé avec une souche bactérienne. Après incubation de 24 heures, ou 48 heures à l'Ptuve ~ 37C, l'in-hibition de la croissance est appréciée par transillumination ce qui permet de déterminer les concentrations minimales in-hibitrices (C. M. I.) exprimées en ,ug/cm3.
Les résultats suivants ont été obtenus :-1~9~ 6 Produit de l'exemple 2 _ C.M.I. en ~g/ml Souche Staphylococcus Oxford UC 1061 Pénicillino sensible .................................... 0.5 0.5 _ _ Staphylococcus aureus UC 1128 Pénicillino r~sistant ...................... ~........... 1 1 Streptococcus hémolyticus (en bacto Todd Hewitt Broth p~ = 7.8)........ 0.05 0.1 Streptococcus faecalis n 5 432 ............. 5 ~40 Bacillus subtilis 0.1 0.5 Escherichia Coli UC 1 020 ................... 2 5 Escherichia Coli UC 1 261 ................... 1 _ _ _ Klebsiella pneumoniae 52 145 ................ 0.5 0.5 Proteus mirabilis (indol -).................. 1 ., . Staphylococcus aureus 54 146 ................ 0.6 0.6 .
Escherichia Coli (T) 0 26 B 6........ ~...... 3 3 ~09454~

Produit de l'exemple 4 C.M.I. en ~ug/cm Souche , _ _ Staphylococcus aureus UC 1 061 Pénicillino sensible............... ~. 0.2 0.5 Staphylococcus aureus UC 1 128 P~nicillino r~sistant ...................... 1 _ _ Staphylococcus aureus N 54 146.............. 0.5 1 _ Streptococcus pyogenes A 561 ............... 0.1 0.2 _ _ Streptococcus faecalis 5 432 ............... 10 >40 Bacillus subtilis........................... 0.1 0.1 Escherichia Coli UC 1 020 .................. 2 2 Escherichia Coli UC 1 261 .................. 1 1 _ Escherichia Coli T 026 B 6 ................. 2 3 Escherichia Coli R 55 123 D ................ 5 10 . _ Klebsiella Pneumoniae 52 145 ............... 0.1 0.2 _ ~
Proteus mirabilis (indol -) A 235 .......... 0.6 0.6 Salmonella Typhimurium 420 ................. 3 - 1~3 -Produit de l'exemple 5 . C.M.I. en,ug/cm3 Souche _ 24 H . 48 H
_ , Staphylococcus aureus UC 1 061 P~nicillino sensible ~............ ~......... 0.5 Staphylococcus aureus UC 1 128 Pénicillino résistant ...................... 1 2 Staphylococcus aureus N 54 146 .......
_ Streptococcus pyogenes A 561 ............... 0.1 0.1 Streptococcus faecalis 5 432 ............... 5 40 _ Bacillus subtilis ATCC 6 633 ..... ~. 0.2 0.2 Staphylococcus aureus ATCC 6 538 ........... 0.5 _ ., : Escherichia Coli ST UC 1 020 ............... 10 10 _ Escherichia Coli RT UC 1 261 ............... 2 2 Escherichia Coli T 026B6 ................... 10 10 Escherichia Coli RG R 55 123 D ............. 10 10 Klebsiella pneumoniae Exp. 52 145 .......... 0.4 1 Proteus mirabilis (Indol -) A 235 .......... 2 2 Salmonella Typhimurium ..................... 10 10 Produit de l'exemple 6 I C.M.I. en~ug/cm3 Souche Staphylococcus aureus UC 1 061 Pénicillino sensible ................. 0.6 0.6 _ _ _ Staphylococcus aureus UC 1 128 P~nicillino résistant ................ 1 1 Staphylococcus aureus 54 146 ......... 1 2 _ Streptococcus pyogenes A 561 ......... 0.2 0.2 .

Streptococcu~ faecalis 99 F 74 ....... 20 40 _ _ Bacillus subtilis ATCC 6 633 ......... 0.1 0.1 _ Staphylococcus aureus ATCC 6 538 ..... 0.2 0.4 E~cherichia Coli ST UC 1 020 ......... 10 10 Escherichia Coli RT UC 1 261 ......... 10 10 ~ _ Escherichia Coli T 026B6.............. 40 40 Klebsiella pneumoniae 52 145 ......... 3 S

Proteus mirabili~ (Indol -) A 235 .... 10 20 ,.
Salmonella Typhimurium 420 ........... 5 5 _ Serratia RG 2 532 .................... 10 10 :`.

10~45~16 8) Activité in vivo :
1) Etude d'une sta~ylococcle ex~erim_ntale :
On a étudi~ l'action du produit de l'exemple 2 sur une staphylococcie expérimentale de la souris. On a infecté
des lots de dix souris mâles d'un poids moyen de 21.5 g, par injection intrap~ritonéale, à l'aide de 0.5 ml d'une culture de 24 heures de staphylococcus aureus 54 146 en bouillon nutritif Pasteur diluée au 1/5 avec de l'eau distillée. On a administré, par injection sous-cutan~e, une ~:eure, cinq heures et vingt-quatre heures après l'infection une quantité déterminée de produit. On a noté la mortalité pendant huit jours.
Les résultats ont ~té les suivants :

Dose Mortalité après survivantesJ

à chaque ___________________________ ___~____ .___________ iniection 9 h 45 22 h 30125 h 30~29 h 4 i!s i au 8ème i , __ _________. ______ _______ _______. .____ ___ ___ _________ :_ 0.1 mg.~....... 1 8 1 0/10 _____________. ______ _______ ~_______ ____ ____ ____ ____________ 0.25 mg........ 1 1 1 1 6/10 _____________. ______ _______ _______. .____ ____ ____ ____________ 0.5 mg ........ 1 9/10 _____________ _______. ._______ _______. .____ ____ ____ ____________ 0.75 m~........ 10/10 _____ .._______ ______. ._______ _______. .____ ____ ____ ____________ 1 mg........... _ _ 10/10 2) Infection ex~érimentale ~ Proteus mirabilis :
__ _________ ______________________________ On a étudié l'action du produit de l'exemple 2 sur une infection expérimentale à Proteus mirabilis de la souris.
On a infecté des lots de dix souris m~les d'un poids moyen de 22.5 g, par injection intrapéritonéale de 0.5 ml d'une culture de vin~t-quatre heures en bouillon nutritif Pasteur de la souche de Proteus mirabilis N A 235 diluée au 1/4 par de l'eau distill~e.

~o~

On a administré, par injection sous-cutanée, une heure, cinq heures et vingt-quatre heures apr~s l'infection, une quanti-t~ d~terminée de produit.
On a noté la mortalité pendant huit jours.
Les résultats ont été les suivants :

achaqduemiinn~etcrtion Mortalité après 21 h 15 Souris siurvivantes ___________________ _______________________ ___________________ Témoin ....................... lO 0/10 10___________________. ._______________________ __________________ 0 1 mg ._______________________ 8/10 0.25 mg....................... O lO/10 ___________________. ._____________._________ __________________ 0.5 mg ....................... O 10/lO
___________________. ._______________________ __________________ 0.75 mg....................... lO/10 3) Infection ex~érimentale à Escherichia Coli (T) ____________ __________._______________________ 026 B 6 :

On a étudié l'action du produit de l'exemple 2 sur une infection expérimentale d'Escherichia Coli de la souris. On a infect'é des lots de dix souris mâles d'un poids moyen de 23 g, par injection intrapéritonéale de 0.5 ml d'une culture de vingt-quatre heures en bouillon nutritif de la siouche Escherichia Coli (T) 026 B 6, diluée au l/6 par de l'eau distillée.
On a administré par injection sous-cutanée, une heure, cinq heures et vingt-quatre heures après l'infection, une quantit~ d~terminée de produit. On a noté la mortalité pendant huit jours.

., .

..

.

10~5~6 Les résultats ont ~t~ les suivants :

Dose ad- tSouris ministr~e Mort~lité apx~s survi-~ ch qte 21h 15 24h-1~-27h-4~I30h-4~ '4~h 30 70 h vantes ___________ ______. .______. .______ ______. .______ ._____ __________ T~moin....... 10 0/10 ___________ ______ .______. .______. ______. .______ _____ __________ 0.5 mq....... 6 1 1 1 1 0/10 ___________ ______~ .______. .______. .______. .______ _____ __________ 1 mg......... 1 9/10 ___________ ______. .______. .______. .______ ______ _____ __________ 2 mg......... 10/10 ___________ ______. .______. .______. .______ ______ _ ___ __________ 3 mg......... 10~10

Claims

Les réalisations de l'invention, au sujet desquelles un droit exclusif de propriété ou de privilège est revendiqué, sont définies comme il suit :

1. Procédé de préparation des nouveaux dérivés de l'acide 7-amino thiazolyl acétamido céphalosporanique de formule générale I :

(I) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un grou-pement facilement éliminable par hydrolyse acide ou par hydro-génolyse choisi dans le groupe constitué par les groupements tert-butoxycarbonyle, trityle, dibenzyle, trichloroéthyle et carbobenzyloxy, R1 représente un radical alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone ou un hétérocycle à 5 éléments comportant, le cas échéant, un groupement cétonique, A représente, soit un atome d'hydrogène, soit un équivalent de métal alcalin, al-calino-terreux ou de magnésium, soit un équivalent de base or-ganique aminée, caractérisé en ce que l'on traite :
- Soit, un produit de formule II :

(II) dans laquelle R1 a la signification précitée, par un acide de formule III :

(III) ou par un dérivé fonctionnel de cet acide de formule III, formule, dans laquelle R' représente un groupement facilement éliminable par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse choisi dans le groupe constitué par les groupements tert-butoxycar-bonyle, trityle, dibenzyle, trichloroéthyle et carbobenzyloxy, pour obtenir un produit de formule Ia :

(Ia) correspondant à un produit de formule I, dans laquelle R re-présente un groupement facilement éliminable par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse choisi dans le groupe constitué
par les groupements tert-butoxycarbonyle, trityle, dibenzyle, trichloroéthyle et carbobenzyloxy, et A représente un atome d'hydrogène, produit de formule Ia que l'on hydrolyse, le cas échéant, en milieu acide ou hydrogénolyse, pour obtenir un produit de formule Ib :

(Ib) correspondant à un produit de formule I, dans laquelle R et A
représentent chacun un atome d'hydrogène et que, si désiré, on salifie par une base minérale ou organique, les produits de formu-le Ia ou Ib, pour obtenir les produits correspondants de formule I, dans laquelle A représente un équivalent de métal alcalin, al-calino-terreux ou de magnésium ou de base organique aminée :
- Soit, l'on traite un produit de formule IV :

(IV) dans laquelle R a la signification précitée et A' représente un atome d'hydrogène ou de métal alcalin par un produit de formule V :

(V) dans laquelle R1 a la signification précitée et B représente un atome d'hydrogène ou de métal alcalin, pour obtenir un produit de formule Ia ou Ib, salifié ou non, produit que, s'il est salifié, l'on traite par un acide, pour obtenir un produit de formule Ia ou Ib, produit que, si désiré, l'on salifie ensuite.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on prépare des produits de formule générale I, telle que définie à la revendication I, dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupement trityle, R1 représente un radical méthyle, éthyle, furyle ou 2-oxo (3H) thiazolin 4-yle et A représente un atome d'hydrogène.

3. Procédé selon la revendication 1, carac-térisé en ce que les produits de formule II sont préparés en faisant réagir un produit de formule V, telle que définie à la revendication 1, sur l'acide 7-amino céphalosporanique.

4. Procédé selon la revendication 3, carac-térisé en ce que, dans la formule V, R1 représente un radical alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone.

5. Procédé selon la revendication 4, carac-térisé en ce que l'on prépare l'acide 7-amino 3-acétylthio-méthyl ceph-3-ème 4-carboxylique.

6. Les nouveaux dérivés de l'acide 7-amino thiazolyl acétamido céphalosporanique de formule I, telle que définie à la revendication 1, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 1.

7. Les produits de formule I, telle que définie à la revendication 2, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon la revendication 2.