DK153489B

DK153489B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 7-aminothiazolylacetamidocephalosporansyrederivater

Info

Publication number: DK153489B
Application number: DK012477AA
Authority: DK
Inventors: Rene Heymes
Original assignee: Roussel Uclaf
Priority date: 1976-01-14
Filing date: 1977-01-13
Publication date: 1988-07-18
Also published as: DK153489C; US4097595A; ES454997A1; DK12477A; CH621555A5; CH617204A5; DE2700552C2; SE7613990L; IE44857L; GB1543005A; BE850338A; SE434842B; FR2342733B1; LU76566A1; JPS6337116B2; FR2342733A1; NL7700406A; JPS5287192A; GB1543004A; DE2700552A1

Description

- i -

DK 153489B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 7-aminothiazolylacetamidoce-phalosporansyrederivater med den i kravets indledning angivne almene formel I.

5 Blandt værdierne af A skal især nævnes et ækvivalent natrium, kalium, lithium, calcium eller magnesium. Blandt de organiske baser, som kan repræsenteres ved A, skal nævnes trimethylamin, triethylamin, methylamin, propylamin, Ν,Ν-dimethylethanolamin eller tris-(hydroxymethyl)-methyl-10 amin.

Blandt produkterne med den almene formel I skal især nævnes de nedenfor i eksemplerne beskrevne produkter og navnlig 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-(acetyl-thiomethyl)-ceph-3-em-4-carboxylsyre.

15 Det vil forstås, at de ovennævnte produkter med form len I kan eksistere enten i den ved hjælp af formlen I angivne form eller i form af produkter med formlen I„

H

20 i · · ·

As '’*'·; .· · ·

U HH

λ,τττ:^^ ' (¾) .

C0oA 0 1 ^ hvor R og A har samme betydning som ovenfor.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig 30 ved det i kravets kendetegnende del anførte.

I en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen behandler man produktet med formlen II med et funktionelt derivat af syren med formlen III.

Dette funktionelle derivat kan være syrechloridet el-35 ler syreanhydridet, hvilket sidste kan dannes in situ ved indvirkning af isobutylchlorformiat på syren. Man kan ligeledes benytte andre halogenider eller også andre anhy-

DK 153489 B

- 2 - drider, som kan dannes in situ ved indvirkning af andre alkylchlorformiater eller af et dialkylcarbodiimid eller af et dicycloalkylcarbodiimid såsom dicyclohexylcarbo-diimid. Man kan ligeledes benytte andre syrederivater 5 såsom syreacidet, syreamidet eller en syreester, som dannes fx ved hjælp af hydroxysuccinimid, p-nitrophenol eller 2,4-dinitrophenol. I det tilfælde, hvor man behandler produktet med formlen II med et halogenid af syren med den almene formel III eller med et anhydrid dannet med 10 et isobutylchlorformiat, arbejder man fortrinsvis i nærværelse af et basisk middel. Som basisk middel kan man fx vælge et alkalimetalcarbonat eller en tertiær organisk base såsom methylmorpholin, pyridin eller en trialkylamin såsom triethylamin.

15 Som surt hydrolysemiddel, som man eventuelt behandler produkterne med formlen la med, skal nævnes trifluoreddi-kesyre, myresyre eller eddikesyre. Disse syrer kan anvendes vandfrie eller i vandig opløsning. Som hydrogenolysemiddel skal især nævnes et system bestående af zink og ed-20 dikesyre.

Man benytter fortrinsvis et surt hydrolysemiddel såsom vandfri trifluoreddikesyre eller vandig myre- eller eddikesyre til eliminering af tert.-butoxycarbonyl- eller tritylgrupperne.

25 Man benytter fortrinsvis systemet bestående af zink og eddikesyre til eliminering af trichlorethylgruppen og katalytisk hydrogenering til eliminering af benzyl, di-benzyl og carbobenzyloxy.

Indvirkningen af produktet med formlen V på produk-30 tet med formlen IV udføres fortrinsvis i vand eller i en blanding af vand og acetone, men man kan ligeledes benytte et andet vandigt opløsningsmiddel såsom en blanding af vand og dioxan, vand og tetrahydrofuran eller vand og ethanol.

35 I det tilfælde, hvor man benytter et produkt med formlen IV, hvor A' betegner et hydrogenatom, eller et produkt med formlen V, hvor B betegner et hydrogenatom, - 3 -

DK 153489B

og i det tilfælde, hvor A' og B begge er hydrogen, består den foretrukne måde i at fremstille in situ det til disse produkter svarende alkalimetalsalt til opnåelse af et produkt med formlen IV, hvor A' betegner et alkalimetalatom, 5 og/eller et produkt med formlen V, hvor B betegner et al-kalimetalatom.

De alkalimetalatomer, som fortrinsvis repræsenteres ved A' og B, er natrium eller kalium.

I det tilfælde, hvor omdannelsen til salt af produk-10 terne med formlen IV, hvor A' betegner et hydrogenatom, og/eller med formlen V, hvor B betegner et hydrogenatom, udføres in situ, benytter man fortrinsvis det sure natrium- eller kaliumcarbonat. Man kan imidlertid benytte andre alkalier såsom natriumhydroxid, kaliumhydroxid eller 15 natrium- eller kaliumcarbonat.

Omsætningen af produktet med formlen II med produktet med formlen IV kan udføres i nærværelse af en stødpude, som opretholder en pH-værdi i nærheden af neutralitet i miljøet, såsom en mononatriumphosphat-natriumhydrogencar-20 bonat-stødpude.

I den ovenfor beskrevne foretrukne udførelsesmåde benytter man endelig en syre til opnåelse af produkterne med formlen la eller Ib. Denne syre er fortrinsvis eddikesyre, men man kan ligeledes benytte andre mineralsyrer 25 eller organiske syrer såsom saltsyre, svovlsyre, myresyre, oxalsyre eller trifluoreddikesyre.

Produkterne med formlen I kan omdannes til salte efter gængse metoder. Omdannelsen til salt kan fx opnås ved indvirkning på disse syrer af en organisk base såsom 30 fx natrium- eller kaliumhydroxid eller natriumhydrogen-carbonat eller også fx triethylamin.

Denne omdannelse til salt udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel eller en blanding af opløsningsmidler såsom vand, ether, ethanol eller acetone.

35 Produkterne med den almene formel I har en meget god antibiotisk virkning dels på grampositive bakterier såsom stafylokokker og streptokokker og navnlig på penicil- - 4 -

DK 153489B

linresistente stafylokokker, dels på gramnegative bakterier, især på coliforme bakterier, Proteus og Klebsiella.

Disse egenskaber gør de omhandlede produkter egnede til at benyttes som medikamenter i behandlingen af sta-5 phylococci såsom staphylococussepticemi, malign ansigtseller hudstaphylococci, pyodermitis, septiske eller sup-purante sår, anthrax, phlegmone, erysipel, primitive eller efter influenza optrædende akutte staphylococci, bronchopneumoni og pulmonære suppurationer.

10 Disse produkter kan ligeledes anvendes som medika menter i behandlingen af colibacillose og dermed forbundne infektioner, ved Proteus- og Klebsiella-infektioner og an-.dre lidelser frembragt af gramnegative bakterier. Således kan man som medikamenter og navnlig som antibiotiske medi-15 kamenter benytte de farmaceutisk acceptable ovenfor definerede produkter med formlen I, især dem, som er beskrevet i eksemplerne.

De farmaceutisk acceptable produkter med formlen I kan anvendes til fremstilling af farmaceutiske produkter, 20 der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste ét af de nævnte produkter.

Disse produkter kan indgives ad oral, rektal eller parenteral vej eller lokalt i topisk applikation på huden og slimhinderne.

25 De kan være faste eller flydende og foreligge i de i den humane medicin gængs benyttede farmaceutiske former såsom fx uoversukrede eller dragerede tabletter, gelatinekapsler, granulater, stikpiller, injektionspræparater, pomade, creme, geleer. De fremstilles efter de gængse 30 metoder. Den eller de aktive bestanddele kan inkorporeres deri sammen med i disse farmaceutiske produkter normalt benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummi arabicum, lactose, stivelse, magnesiumstearat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af 35 animalsk eller vegetabilsk oprindelse, paraffinderivater, glycoler, forskellige fugte-, dispergerings- eller emulgeringsmidler samt konserveringsmidler.

- 5 -

DK 153489B

Den indgivne dosis varierer efter den behandlede lidelse, den pågældende patient, indgiftsmåden og det pågældende produkt.

Den kan fx ligge mellem 0,250 g og 4 g om dagen ad 5 oral vej hos mennesker i tilfælde af produktet ifølge eksempel 2 nedenfor eller mellem 0,500 g og 1 g 3 gange om dagen ad intramuskulær vej i tilfælde af produktet beskrevet i samme eksempel.

Produkterne med formlen V, som er hidtil ukendte, 10 kan fremstilles ved indvirkning af natriumsulfhydrat på det tilsvarende syrechlorid R1C0C1 efter den metode, som er beskrevet i J. Antibiotics 27-8-577 (1974).

Et eksempel på en sådan præparation er angivet nedenfor i den eksperimentelle del.

15 Produkterne med formlen II kan fremstilles ved ind virkning af et produkt med formlen V på 7-aminocephalospo-ransyre.

20 Fremstillingen af produkterne med formlen II, især af dem, hvor R^ betegner en alkylgruppe med 1-4 carbon-atomer, og navnlig 7-amino-3-acetylthiomethylceph-3-em-4--carboxylsyre skal især nævnes.

Produkterne med formlen. III kan fremstilles efter 25 klassiske reaktioner til beskyttelse af amingruppen, som anvendes på 2-amino-4-thiazolyleddikesyre eller på en af dens estere. Et eksempel på en sådan præparation er beskrevet i den eksperimentelle del.

Produkterne med formlen IV fremstilles ved indvirk-30 ning af et produkt med formlen III på 7-aminocephalospo-ransyre eventuelt efterfulgt af en sur hydrolyse. Et eksempel på sådanne reaktioner er givet i den eksperimentelle del.

Produktet ifølge eksempel 4, som fremstilles i den 35 eksperimentelle del, kan eksistere

DK 153489 B

- 6 - enten i den i dette eksempel angivne form eller i form af 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)- 3-(((2-hydroxy-4-thiazolyl)-carbonyl)-thiomethyl)-ceph-3-em-4-carboxylsyre. · 5 Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Eksempel 1 7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acetylthio--methylceph-3-em-4-carboxylsyre 10 Man opvarmer til 90°C i 2 timer 30 minutter en blan ding af 1,63 g 7-(2-(tritylamino-4-thiazolyl)-acetamido)--3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 0,21 g natrium-hydrogencarbonat, 0,66 g kaliumthioacetat, 10 ml vand og 5 ml acetone. Man syrner med 1 ml eddikesyre, suger fra, 15 vasker, kromatograferer på silicagel og eluerer med en blanding af methylenchlorid og ether i forholdet 1:1 og derefter med acetone, vand og ether i forholdet 5:1:4.

Der fås 830 mg af det forventede produkt.

7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acet-20 oxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, der benyttes som udgangsprodukt i eksempel 1, kan fremstilles på følgende måde:

Trin A

2-tritylamino-4-thiazolyleddikesyre 25 Man blander 930 mg 2-amino-4-thiazolyleddikesyre- ethylester, 25 ml tørt chloforom og 0,8 ml triethylamin og 1,65 g tritylchlorid. Man omrører i 3 timer, tilsætter 3 ml 1 N saltsyre og 5 ml vand, omrører, dekanterer, tilsætter 5 ml 1 N saltsyre og 5 ml vand, dekanterer, tør-30 rer og inddamper til tørhed. Til resten sætter man 10 ml dioxan og 6 ml 1 N natriumhydroxidopløsning, omrører ved 50°C og derefter natten over ved stuetemperatur, hvorpå man uddriver opløsningsmidlet, fortynder med vand, vasker med ether, syrner med 0,5 ml eddikesyre, lader krystallisere, 35 suger fra og får 1,33 g 2-tritylamino-4-thiazolyleddikesyre som forventet, som man kan rense ved udrivning med ether.

Smp. 220°C.

- 7 -

DK 153489B

Trin B

7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acfetoxy-methylceph-3-em-4-carboxylsyre

Man blander 801 mg 2-tritylamino-4-thiazolyleddike-5 syre, 10 ml tørt tetrahydrofuran og 2 ml af en 1 M opløsning af N-methylmorpholin i tetrahydrofuran. Man omrører, afkøler til -20°C og tilsætter langsomt 2 ml af en 1 M opløsning af isobutylchlorformiat i tetrahydrofuran, omrører og tilsætter en opløsning af 544 mg 7-aminocephalospo-10 ransyre i 24 ml 1 M opløsning af N-methylmorpholin i tetrahydrofuran og 10 ml vand. Man omrører, idet man lader genopvarme, eliminerer opløsningsmidlet, fortynder med vand, tilsætter 2 ml 2N saltsyre, suger fra, tørrer og isolerer 1,16 g af den forventede syre.

15 Eksempel 2 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acetylthiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylsyre

Man opvarmer i 15 minutter til 60°C det i eksempel 1 opnåede produkt i 50%'s vandig myresyre, uddriver myresy-20 ren, optager i acetone, suger fra og får 325 mg produkt, som man renser ved opløsning i 2,6 ml acetone tilsat 20% vand og 0,3 ml 2 N saltsyre. Man suger fra, tilsætter 3 dråber pyridin og 1 ml acetone og får 0,228 mg renset produkt.

25 Analyse: ^15^16^5N4^3 beregnet: C% 42,04 H% 3,76 N% 13,07 S% 22,44 fundet: 41,7 3,9 12,8 20,9

Eksempel 3 7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acetylthio-30 methylceph-3-em-4-carboxylsyre

Man anbringer under indifferent gas 9,9 g 2-trityl-amino-4-thiazolyleddikesyre, 100 ml tetrahydrofuran og 2,7 ml N-methyl-morpholin. Man omrører 15 minutter ved stuetemperatur, afkøler til -15°C og tilsætter 3,15 ml iso-35 butylchlorformiat. Man omrører 5 minutter mellem -10°C og -15°C.

- 8 -

DK 153489B

Man tilsætter i løbet af 2 minutter 6,5 g 7-amino- 3-acetyl-thiomethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 65 ml vand og 3,15 ml triethylamin. Man omrører 1 time 30 minutter og lader genantage stuetemperatur, hvorpå man uddriver 5 tetrahydrofuranet, syrner, ekstraherer med methylenchlorid og frasuger det uopløselige materiale. Man vasker den organiske fase, inddamper, udriver det opnåede pulver med ether, tørrer og får 15,2 g råprodukt.

Man renser 6,7 g råprodukt ved opløsning i methylen-10 chlorid. Man tilsætter ethylacetat, fraskiller det uopløselige materiale, behandler opløsningen med aktivkul, suger fra, skyller, tørrer og får 5,1 g af det forventede produkt.

7-amino-3-acetylthiomethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 15 der benyttes som udgangsprodukt i eksempel 3, fremstilles på følgende måde:

Man anbringer 5,44 g 7-aminocephalosporansyre og 50 ml vand tilsat 1 o/oo hydroquinon under indifferent atmosfære. Man omrører og tilsætter 1,7 g natriumhydrogencar-20 bonat og tilsætter efter opløsning 3 g kaliumthioacetat.

Man omrører 3 timer ved 60°C, afkøler og syrner med eddikesyre. Man omrører ved stuetemperatur, suger fra, vasker, tørrer og får 4,9 g af det forventede produkt.

Eksempel 4 25 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-(((2-oxo-3H- thiazol in-4-yl)-carbonyl)-thiomethyl)-ceph-3-em-4-carboxylsyre

Man blander 0,825 g 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido )-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 4 ml de-30 stilleret vand, 0,4 g (2-oxo-3H-thiazolin-4-yl)-thiocarb-oxylsyre, 0,39 g mononatriumphosphat og 0,21 g natrium-hydrogencarbonat.

Man omrører 5 timer ved 50°C. Man afkøler og tilsætter eddikesyre indtil en pH-værdi på 4-5. Man frasu-35 ger udfældningen og får efter tørring 0,56 g råprodukt.

Man opløser dette produkt i 5 ml vand indeholdende 1 ækvivalent natriumhydrogencarbonat. Man fikserer på - 9 -

DK 153489B

ionbytterharpiks. Man eluerer med vand og genvinder derefter produktet ved hjælp af vand tilsat 10% isopropanol.

Man forener de produktholdige fraktioner og syrner med eddikesyre. Der fås 0,12 g af det forventede produkt.

5 U.V. spektrum (ethanol tilsat 10% saltsyre): max. 258 nm £ = 16.350 max. 307 nm £ = 10.350 I.R. spektrum (nujol): 1772 cm ^ (/3-lactam) 10 1682-1638 cm1 (C=0 sekundært amid).

7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acetoxyme-thylceph-3-em-4-carboxylsyre, der benyttes som udgangsprodukt i eksempel 4, fremstilles som følger:

Man blander 351 mg 7-(2-(2-tritylamino-4-thiazolyl)-15 acetamido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 0,44 ml eddikesyre og 0,22 ml vand, opvarmer til 60°C, omrører 40 minutter, afkøler, fortynder med acetone og derefter med ether, suger fra og tørrer. Der fås 171 mg af det forventede råprodukt.

20 Man renser, idet man bringer 470 mg i 5 ml blanding af ethanol og vand i forholdet 1:1 til nær kogepunktet, hvorefter man frasuger uopløseligt materiale (A), afkøler, frasuger uopløseligt materiale og isolerer et første udbytte på 170 mg. Man påbegynder atter samme operation, 25 idet man forener det uopløselige materiale (A) med filtratet fra det første udbytte og får 107 mg eller i alt 277 mg af det forventede produkt.

(2-oxo-3H-thiazolin-4-yl)-thiocarboxylsyre, der benyttes som udgangsprodukt i eksempel 4, fremstilles som 30 følger:

Man blander ved 10°C 1,6 g natriumsulfhydrat (70%), 16 ml ethanol, 2,5 ml vand og tilsætter 1,635 g (2-oxo-3H-thiazolin-4-yl)-thiocarboxylsyrechlorid. Man omrører 1 time, uddriver ethanolet, tilsætter vand og indfører un-35 der omrøring 0,8 ml koncentreret saltsyre. Man frasuger produktet, som krystalliserer, skyller og tørrer og får 1,46 g af den forventede syre.

- 10 -

DK 153489B

Eksempel 5 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-(((2-furyl)-carbonyl)-thiomethyl)-ceph-3-em-4-carboxylsyre

Man blander 0,25 g 2-furylthioeddikesyre, 4 ml de-5 stilleret vand, 0,17 mg natriumhydrogencarbonat og 0,435 mg natriumsalt af 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)- 3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre.

Man lader henstå 5 timer ved 50°C. Man afkøler til stuetemperatur og syrner med eddikesyre til en pH-værdi 10 på 3-4.

Man frasuger udfældningen, skyller, tørrer og får 420 mg råprodukt. Dette opløses i vand indeholdende natriumhydroxid. Man anbringer på ionbyttersøjle og elue-rer med vand og derefter med vand tilsat 10% isopropanol.

15 Man forener de produktholdige fraktioner, uddriver opløsningsmidlerne under vakuum, syrner den vandige rest med eddikesyre og får 115 mg af det forventede produkt.

Analyse; ^18^16^6^4^3 beregnet; C% 45,0 H% 3,4 N% 11,7 S% 20,0 20 fundet: 44,5 3,5 12,2 20,0

Natriumsaltet af 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)- 3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, der benyttes som udgangsprodukt i eksempel 5, fremstilles som følger;

Man blander 2,26 g 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acet-25 amido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carboxylsyre, 420 mg natriumhydrogencarbonat, 10 ml vand og 0,5 g aktivkul, omrører 3 minutter ved 50°C, suger fra, vasker med acetone og inddamper til 5 ml. Man tilsætter 50 ml acetone og opvarmer til 60°C, og saltet krystalliserer. Man suger fra og 30 får 1,745 g af det forventede salt, c<D = +120° (c = 1%, vand).

Eksempel 6 7-((2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-propionylthio-methyl)-ceph-3-em-4-carboxylsyre 35 a) Natriumthiopropionat

Man indfører 4,6 ml. propionylchlorid i en opløsning af natriumsulfhydrat fremstillet ved opløsning af 8 g na- - 11 -

DK 153489B

triumsulfhydrat i 20 ml vand og tilsætning af 128 ml ethanol.

Man lader reagere 30 minutter, suger fra, inddamper, optager i ethanol, uddriver opløsningsmidlet og optager 5 derpå atter i ethanol, suger fra, inddamper til tørhed, tilsætter ether og frasuger 4,5 g forventet produkt, b) Man opvarmer i 4 timer til 60°C 1,23 g 7-(2-(2-amino- 4-thiazolyl)-acetamido)-3-acetoxymethylceph-3-em-4-carb-oxylsyre i 12 ml vand indeholdende 252 mg natriumhydrogen-10 carbonat og 516 mg natriumthiopropionat. Man afkøler, tilsætter 0,2 g aktivkul, suger fra, syrner, vasker, tørrer og får 0,88 g råprodukt.

Man omrører 0,44 g af ovenstående produkt i 8,6 ml methylenchlorid og 0,2 ml triethylamin. Man frasuger uop-15 løseligt materiale, som man genekstraherer. Efter fornyet frasugning forenes og inddampes de organiske opløsninger. Resten opløses i vand. Man tilsætter 0,2 ml eddikesyre, suger fra, vasker, tørrer og får 0,232 g renset produkt .

20 Analyse: C16H18°5N4S3 beregnet: C% 43,42 H% 4,1 N% 12,66 S% 21,73 fundet: 43,3 4,3 12,2 20,8

Farmakologisk undersøgelse A) Aktivitet in vitro 25 Metode med fortyndinger i væskeformet miljø

Man fremstiller en række glas, hvori man fordeler samme mængde sterilt næringsmiljø. Man fordeler i hvert glas voksende mængder af det produkt, som skal undersøges, og derefter podes hvert glas med en bakteriestamme. Efter 30 inkubering i 24 eller 48 timer i varmeskab ved 37°C vurderes inhiberingen af væksten ved gennemlysning, hvilket gør det muligt at bestemme de minimale inhiberende koncentrationer (M.I.C.) udtrykt i pg/ml.

35 - 12 -

DK 153489B

Der fås følgende resultater:

Produkt ifølge eksempel 2 M.I.C. i ug/ml _Stamme_ 24 timer 4 8 timer

Staphylococcus Oxford UC 1061 penicillinfølsom 0,5 0,5

Staphylococcus aureus UC 1128 penicillinresistent 1 1

Streptococcus hemolyticus (en bacto Todd Hewitt Broth pH =7,8) 0,05 0,1

Streptococcus faecalis nr. 5 432 5 >40

Bacillus subtilis 0,1 0,5

Escherichia coli UC 1 020 2 5

Escherichia coli UC 1 261 1 1

Klebsiella pneumoniae 52 145 0,5 0,5

Proteus mirabilis (indol-) 1 1

Staphylococcus auerus 54146 0,6 0,6

Escherichia coli (T) 0 26 B 6 3 3

Produkt ifølge eksempel 4 - 13 -

DK 153489B

M.I.C. i pq/ml _ Stamme_ 24 timer 48 timer

Staphylococcus aureus UC 1 061 penicillinfølsom 0,2 0,5

Staphylococcus aureus UC 1 128 penicillinresistent 1 1

Staphylococcus, aureus nr. 54 146 0,5 1

Streptococcus pyogenes A 561 0,1 0,2

Streptococcus faecalis 5 432 10 >-40

Bacillus subtilis 0,1 0,1

Escherichia coli UC 1 020 2 2

Escherichia coli UC 1 261 1 1

Escherichia coli T 026 B 6 23

Escherichia coli R 55 123 D 5 10

Klebsiella pneumoniae 52 145 0,1 0,2

Proteus mirabilis (indol-) A 235 0,6 0,6

Salmonella typhimurium 420 3 3

Produkt ifølge eksempel 5 - 14 -

DK 153489B

M.I.C. i pq/ml _Stamme_ 24 timer 48 timer

Staphylococcus aureus UC 1 061 penicillinfølsom 0,5 1

Staphylococcus aureus UC 1 128 penicillinresistent 1 2

Staphylococcus aureus nr.54146 1 1

Streptococcus pyogenes Ά561 0,1 0,1

Streptococcus faecalis 5 432 5 40

Bacillus subtilis ATCC 6 633 0,2 0,2

Staphylococcus aureus ATCC 6 538 0,5 1

Escherichia coli ST UC 1 020 10 10

Escherichia coli RT UC 1 261 2 2

Escherichia coli T 026 B 6 10 10

Escherichia coli RG R 55 123 D 10 10

Klebsiella pneumoniae Exp. 52 145 0,4 1

Proteus mirabilis (indol-) A 235 2 2

Salmonella typhimurium 10 10

Produkt ifølge eksempel 6 - 15 -

DK 153489B

M.I.C. i ]iq/ml _Stamme_ 24 timer 48 timer

Staphylococcus aureus UC 1 061 penicillinfølsom 0,6 0,6

Staphylococcus aureus UC 1 128 penicillinresistent 1 1

Staphylococcus aureus 54 146 1 2

Streptococcus pyogenes A561 0,2 0,2

Streptococcus faecalis 99 F 74 20 40

Bacillus subtilis ATCC 6 633 0,1 0,1

Staphylococcus aureus ATCC 6 538 0,2 0,4

Escherichia coli ST UC 1 020 10 10

Escherichia coli RT UC 1 261 10 10

Escherichia coli T 026 B 6 40 40

Klebsiella pneumoniae 52 145 3 5

Proteus mirabilis (indol-) A 235 10 20

Salmonella typhimurium 420 5 5

Serratia RG 2 532 10 10

DK 153489B

16 - B) Aktivitet in vivo 1) Undersøgelse af en eksperimentel staphylococci

Man undersøger virkningen af produktet ifølge eksempel 2 på en eksperimentel staphylococci på mus. Man inficerer 5 hold på 10 hanmus med en gennemsnitsvægt på 21,5 g ved in-traperitoneal injektion ved hjælp af 0,5 ml af en 24 timer gammel kultur af Staphylococcus aureus 54 146 i Pasteur’s næringsbouillon fortyndet til 1/5 med destilleret vand.

Man indgiver ved subkutan injektion 1 time, 5 timer og 24 10 timer efter infektionen en bestemt mængde af produktet.

Man konstaterer dødeligheden gennem 8 dage.

Der fås følgende resultat:

Dosis ind- Overle- givet i _Dødelighed efter____ vende c hver mus den injektion 9 h 45 22 h 30 25 h 30 29 h 4 dg. 5 dg. 8, dag 0,1 mg 1 8 1 0/10 0,25 mg 1 1 11 6/10 0,5 mg 1 9/10 2q 0,75 mg 10/10 1 mg 10/10 2) Eksperimentel infektion med Proteus mirabilis

Man undersøger virkningen af produktet ifølge eksempel 2 på en eksperimentel infektion med Proteus mirabilis 25 på mus. Man inficerer hold på 10 hanmus med en gennemsnitsvægt på 22,5 g ved intraperitoneal injektion af 0,5 ml af en 24 timer gammel kultur i Pasteur's næringsbouillon på stamme nr. A 235 af Proteus mirabilis fortyndet til til 1/4 med destilleret vand.

30 Man indgiver ved subkutan injektion en bestemt mængde af produktet 1 time, 5 timer og 24 timer efter infektionen.

Man noterer dødeligheden i løbet af 8 dage.

35 - 17 -

DK 153489B

Resultaterne er som følger:

Dosis indgivet Overlevende i hver injek- Dødelighed efter mus den tion_ 21 h 15_ 8. dag_ 5 Kontrol 10 0/10 0,1 mg 2 8/10 0,25 mg 0 10/10 0,5 mg 0 10/10 0,75 mg 0 10/10 10 3) Eksperimentel infektion med Escherichia coli (T) 026 B6

Man undersøger virkningen af produktet ifølge eksempel 2 på en eksperimentel infektion med Escherichia coli på mus. Man inficerer hold på 10 hanmus med en gennemsnitsvægt på 23 g ved intraperitoneal injektion af 0,5 ml af en 24 timer 15 gammel kultur i næringsbouillon af stammen Escherichia coli (T) 026 B6 fortyndet til 1/6 med destilleret vand.

Man indgiver ved subkutan injektion en bestemt mængde af produktet 1 time, 5 timer og 24 timer efter infektionen.

Man noterer dødeligheden i løbet af 8 dage.

20 Resultaterne er som følger:

Dosis indgivet i Overle- hver _Dødelighed efter_ vende injek- mus den 25 tion 21 h 15 24 h 15 27 h 45 30 h 45 45 h 30 70 h 8. dag

Kontrol 10 0/10 0,5 mg 6 1 1 1 1 0/10 1 mg 1 9/10 2 mg 10/10 30 3 mg 10/10

Sammenligningsforsøg Følgende farmakologiske prøver udføres med 7-(2-(2--amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acetylthiomethyl-ceph-3-35 -em-4-carboxylsyre, forbindelse A, fra ovenstående eksempel 2 og 7-(2-(2-amino-4-thiazolyl)-acetamido)-3-acetoxymethyl--ceph-3-em-4-carboxylsyre, forbindelse B, beskrevet i dansk - 18 -

DK 153489B

patentansøgning 6691/74.

Forsøgsdata

Antibakteriel aktivitet in vitro

Den antibakterielle virkning bestemmes ved fortyn-5 dingsmetoden i væskeformet medium. Der fremstilles en serie glas, hvori der er anbragt lige store mængder af et næringsmedium, og der fordeles voksende mængder af den forbindelse, som. skal undersøges, i glassene. Derpå podes hvert glas med et bakterielt forråd, og efter inkuba-10 tion i 24 og 48 timer i et varmeskab ved 37°C bestemmes vækstinhiberingen ved gennemlysning til bestemmelse af den minimale inhiberende koncentration (MIC) udtrykt i mcg/ml. Næringsmediet er et flydende medium med en pH-værdi på 7, og resultaterne fremgår af følgende tabel I:

Tabel I

_MIC i mcg/ml_

Forbindelse A Forbindelse B 24 h 48 h 24 h 48 h 20 Staphylococcus aureus UC 1061 0,5 0,5 0,5 1

Staphylocuccus aureus UC 1061 + 10% serum (hest) 0,5 0,6 2 2

Staphylococcus aureus UC 1128 11 22 25 Staphylococcus aureus UC 1128 + 5% albumin (menneske) 2 2 5 5

Staphylococcus aureus UC 1128 + 10% serum (hest) 22 55

Staphylococcus aureus 30 nr. 54 146 0,6 0,6 2 2

Streptococcus pyrogenes A 561 0,05 0,1 0,1 0,1

Klebsiella pneumoniae 52145 0,5 0,5 1 1 35

Claims

30. N W. ^co2u CHf - 20 - DK 153489B eller med et funktionelt derivat af denne syre med formlen III, i hvilken formel R' betegner en ved sur hydrolyse eller hydrogenolyse let eliminerbar gruppe, til opnåelse af en forbindelse med formlen la 5 •III-R * A, S N 10 'a=*Ss CH2-C0-HH ^ V. o I CH--S-C-R1 C0~H z II 15 2 6 som man hydrolyserer i surt miljø eller hydrogenolyserer til opnåelse af en forbindelse med formlen I, hvor A betegner et hydrogenatom, hvorpå man eventuelt omdanner denne forbindelse til en forbindelse med formlen I, hvor 20 A betegner et ækvivalent alkalimetal, calcium eller magnesium eller amin, eller man omsætter en forbindelse med formlen IV rø2 25 CH2-C0-NH n. ” Χλ '
0. CB2°TC"3 οο2λ· 6 hvor A1 betegner et hydrogen- eller alkalimetalatom, med 35 en forbindelse med formlen V R1-C-S-B S <V) i DK 153489B - 21 - hvor R har samme betydning som ovenfor, og B betegner et hydrogen- eller alkalimetalatom, til opnåelse af en eventuelt til salt omdannet forbindelse med formlen I, som man om ønsket omdanner til den frie syre og deref-5 ter til et salt som ovenfor defineret. 10