BRPI0820518A2 - compostos, composição farmacêutica e métodos de quimiossensibilização de células cancerígenas e de tratamento de mamífero com câncer - Google Patents

Abstract

compostos, composição farmacêutica e métodos de quimiossensibilização de células cancerígenas e de tratamento de mamífero com câncer a presente invenção relaciona-se com compostos de tetraaza fenalen-3-ona que inibem a poli (adp-ribose) polimerase (parp) e são úteis na quimiossensibilização terapêutica do câncer. a indução de neuropatia periférica é um efeito colateral comum de muitas das quimioterapias convencionais e mais novas. a presente invenção proporciona, além disso, meios para confiavelmente prevenir ou curar a neuropatia induzida por quimioterapia. a invenção também se relaciona com o uso dos compostos inibidores de parp descritos para intensificar a eficácia de agentes quimioterapêuticos tais como temozolomida. a invenção relaciona-se também com o uso dos compostos inibidores de parp descritos para radiossensibilizar células de tumor a radiação ionizante. a invenção também se relaciona com o uso dos compostos inibidores de parp descritos para tratamento de cânceres com defeitos de reparação de dna.

Description

“Compostos, Composição Farmacêutica e Métodos de Quimiossensibilização de Células Cancerígenas e de Tratamento de Mamífero com Câncer”

Relatório Descritivo

Campo da Invenção [001] A presente invenção refere-se a compostos tetraaza fenaleno3-ona, os quais inibem Poli(ADP-ribose) Polimerase (PARP).

Antecedentes [002] A presente invenção refere-se a inibidores de enzima nuclear poli(adenosina 5’-difosfo-ribose) polimerase [“poli(ADP-ribose) polimerase” ou “PARP”, aos quais também se refere como ADPRT (NAD:proteína (ADP-ribosil transferase (polimerizando)) e PARS (poli(ADP-ribose) sintetase) e proporciona compostos e composições que contêm os compostos revelados. Ademais, a presente invenção proporciona métodos de utilização dos inibidores PARP para tratar câncer.

[003] Há interesse considerável no desenvolvimento de inibidores PARP como quimiosensibilizadores para uso em terapia do câncer e para limitar dano celular após isquemia ou estresse endotóxico. Em particular, a potenciação de citotoxicidade da temozolomida observada em estudos pré-clínicos com inibidores PARP-1 potentes reflete inibição de reparação por excisão de base e subsequente citotoxicidade devido a processamento incompleto de N⁷-metilguanina e N³-metiladenina. Há, agora, um corpo de dados pré-clínicos demonstrando que citotoxicidade de temozolomida é potenciada pela coadministração de um inibidor PARP tanto in vitro quanto in vivo. Plummer e colaboradores, Clin. CâncerRes., 11(9), 3402 (2005).

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2/111 [004] A temozolomida, um agente de metilação de DNA, inclui danos ao DNA, que são reparados por reparação por excisão de base dependentes de O⁶-alquilguanina alquiltransferase (ATase) e de poli(ADP-ribose) polimerase-1 (PARP-1). A temozolomida é um agente alquilante de DNA monofuncional disponível oralmente usado para tratar gliomas e melanoma maligno. A temozolomida é rapidamente absorvida e sofre quebra espontânea para formar o triazeno de monometila ativo, 5-(3-metil-l-triazeno)imidazola-4-carboxamida. O triazeno de monometila forma diversos produtos de metilação de DNA, sendo as espécies predominantes N⁷-metilguanina (70%), N³metiladenina (9%), e O⁶-metilguanina (5%). A não ser que reparado por O⁶-alquilguanina alquiltransferase, O⁶-metilguanina é citotóxica devido a desemparelhamento com a timina durante a replicação de DNA. Esse desemparelhamento é reconhecido no filamento filho por incompatibilidade entre as proteínas de reparação e a timina extirpada. Entretanto, a não ser que o nucleotídeo de O⁶-metilguanina original no filamento parental seja reparado pela remoção mediada por ATase do aduto de metila, a timina pode ser reinserida. Rodadas inúteis repetitivas de excisão de timina e incorporação em frente a um nucleotídeo de O⁶-metilguanina não reparado levam a um estado de ruptura de filamento persistente e a ramificação MutS do sistema de reparo de incompatibilidade sinaliza o impedimento do ciclo celular G2M e a iniciação da apoptose. Os produtos de alquilação de nucleotídeo de N⁷-metilguanina e N³-metiladenina quantitativamente mais importantes formados pela temozolomida são rapidamente reparados pela reparação por excisão de base. Plummer, e colaboradores, Clin. CâncerRes., 11(9), 3402 (2005).

[005] A quimiossensibilização por inibidores PARP não é limitada à temozolomida. Geralmente, drogas citotóxicas ou radiação podem incluir ativação de PARP-1, e tem sido demonstrado que inibidores de PARP-1 podem potencializar o dano no DNA e os efeitos citotóxicos de quimioteparia e irradiação. Kock, e colaboradores, 45 J. Med. Chem.

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4961 (2002). A reparação de DNA mediada por PARP-1 em resposta a agentes nocivos a DNA representa um mecanismo para resistência a droga em tumores e a inibição desta enzima tem mostrado elevar a atividade de radiação ionizante e de diversos agentes antitumor citotóxicos, incluindo temozolomida e topotecano. Suto e colaboradores, na Patente US 5.177.075, revelam diversas isoquinolinas usadas para aumentar os efeitos letais de radiação ionizante ou de agentes quimioterapêuticos em células de tumor. Weltin e colaboradores, “Effect of 6(5H)-Phenanthridinone, na Inhibitor of Poly(ADP-ribose) Polymerase, on Cultured Tumor Cells”, Oncol. Res,, 6:9, 399-403 (1994) revelam a inibição de atividade de PARP, reduzida proliferação de células de tumor, e um efeito sinergístico marcado quando células de tumor são co-tratadas com uma droga alquilante. PARP-1 é, assim, um alvo terapêutico potencialmente importante para aumento das terapias de câncer prejudiciais ao DNA.

[006] Os inibidores de PARP podem também inibir o crescimento de células tendo defeitos na via de recombinação homóloga (HR) de reparação de DNA de filamento duplo. Ver Bryant e colaboradores, “Specific killing of BRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADPribose) polymerase”, Nature 434, 913 (2005); Farmer e colaboradores, “Targeting the DNA repair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategif, Nature 434, 917 (2005). Este efeito opera sem a presença de quimiosensibilizadores. Id. Estados conhecidos associados com defeitos na HR incluem defeitos BRCA-1, defeitos BRCA-2, e cânceres associados com anemia Fanconi. McCabe e colaboradores, “Deficiency in the Repair ofDNA Damage by Homologous Recombination and Sensitivity to Poly(ADP-Ribose) Polymerase Inhibition”, Câncer Res. 66, 8109 (2006). Proteínas identificadas como associadas com uma anemia Fanconi incluem FANCA, FANCBM FANCC, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FANCL e FANCM. Id. Para estudos, ver Zaremba e colaboradores, “PARP Inhibitor Development for Systemic Câncer Targeting”, Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry 7, 515 (2007) e Lewis e colaboradores, “Clinicai

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4/111 poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors for the treatment of câncer”, Curr. Opin. Investigational Drugs 8, 1061 (2007).

[007] Grande número de inibidores PARP foi descrito em Banasik e colaboradores, “Specific Inhibitors of Poly(ADP-Ribose) Synthetase and Mono(ADP-Ribosyl)-Transferase”, J. Biol. Chem., 267:3, 1569-75 (1992), e em Banasik e colaboradores, “Inhibitors and Activators of ADPRibosylation Reactions”, Molec. Cell. Biochem., 138, 185-97 (1994). Entretanto, o uso eficaz destes inibidores de PARP, nas formas discutidas acima, tem sido limitado pela produção concorrente de efeitos colaterais indesejados. Ver Milam e colaboradores, “Inhibitors of Poly(Adenosine Diphosphate-Ribose) Synthesis; Effect on Other Metabolic Processes”, Science, 223, 589-91 (1984).

[008] Além do acima mencionado, inibidores PARP têm sido revelados e descritos nos seguintes pedidos de patente internacionais: WO 00/42040; WO 00/39070; WO 00/39104; WO 99/11623; WO 99/11628; WO 99/11622; WO 99/59975; WO 99/11644; WO 99/11945; WO 99/11649; e WO 99/59973. Um exame abrangente do estado da técnica foi publicado por Li e Zhang em IDrugs 2001, 4(7): 804-812 (PharmaPress Ltd ISSN 1369-7056).

[009] A capacidade dos inibidores de PARP de potencializar a letalidade de agentes citotóxicos quimiosensibilizando células de tumor para efeitos citotóxicos de agentes quimioterapêuticos tem sido relatada, inter alia, em US 2002/0028815; US 2003/0134843; US 2004/0067949; White AW, e colaboradores, 14 Bioorg. and Med. Chem Letts. 2433 (2004); Canon Koch SS, e colaboradores, 45 J. Med. Chem. 4961 (2002); Skalitsky DJ, e colaboradores, 46 J. Med. Chem. 210 (2003); Farmer H, e colaboradores, 434 Nature 917 (14 de abril de 2005); Plummer ER, e colaboradores, 11(9) Clin. Câncer Res. 3402 (2005); Tikhe JG, e colaboradores, 47 J. Med. Chem. 5467 (2004); Griffin R.J., e colaboradores, WO 98/33802; e Helleday T, e colaboradores, WO 2005/012305.

[0010] A indução de neuropatia periférica é um fator comum na

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5/111 limitação de terapia com drogas quimioterapêuticas. Quasthoff e Hartung, J. Neurology, 249, 9-17 (2002). A neuropatia induzida por quimioterapia é um efeito colateral encontrado seguindo o uso de muitas das quimioterapias convencionais (por exemplo, Taxol, vincritina, cisplatina) e quimioterapias mais novas (por exemplo, velcade, epotilona). Dependendo da substância usada, uma neuropatia sensorial pura e dolorosa (com cisplatina, oxaliplatina, carboplatina) ou uma neuropatia sensorimotor misturada com ou sem envolvimento do sistema nervoso autônomo (com vincristina, taxol, suramina) podem ocorrer. A neurotoxicidade depende na dose cumulativa total e no tipo de droga usada. Em casos individuais, neuropatia pode se desenvolver mesmo após uma única aplicação da droga. A recuperação dos sintomas é frequentemente incompleta e um longo período de regeneração é requerido para restaurar função. Até agora, poucas drogas estão disponíveis para prevenir ou curar com segurança neuropatia induzida por quimioterapia.

[0011] Continua a haver uma necessidade de inibidores PARP eficazes e potentes, que aumentam os efeitos letais de agentes quimioterapêuticos em células de tumor, enquanto produzindo efeitos colaterais mínimos.

[0012] Além disso, os inibidores PARP têm sido relatados como eficazes em células tumorais hipóxicas sensíveis à radiação e eficazes na prevenção da recuperação de células tumorais de dano potencialmente letal de DNA após terapia com radiação, presumivelmente pela sua capacidade de prevenir reparo de DNA. Patentes US 5.032.617; US 5.215.738; e US 5.041.653.

[0013] Publicações recentes sugerem que inibidores PARP matam células de câncer de mama que são deficientes em gene associado com câncer de mama-1 e -2 (BRCA1/2). Estes estudos sugerem que inibidores de PARP podem ser eficazes para tratamento de cânceres de mama associados com BRCA1/2. [Farmer e colaboradores, Nature 2005, 434, 917; DeSoto e Deng, Intl. J. Med. Sei. 2006, 3, 117; Bryant e

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6/111 colaboradores, Nature, 2005, 434, 913.] [0014] Continua a haver uma necessidade de inibidores de PARP eficazes e potentes que aumentem os efeitos letais de radiação ionizante e/ou agentes quimioterapêuticos em células de tumor ou inibam o crescimento de células tendo defeitos na via de recombinação homóloga (HR) de reparação de DNA de filamento duplo, enquanto produzem efeitos colaterais mínimos.

Sumário da Invenção [0015] A presente invenção proporciona compostos descritos nesse documento, derivados dos mesmos e seus usos para inibir poli(ADPribose) polimerase (“PARP”), composições contendos estes compostos e métodos para fazer e usar estes inibidores PARP para tratar os efeitos das condições descritas neste documento.

[0016] A presente invenção tb fornece um composto de tetraaza fenaleno-3-ona de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

(I) em que R é (a) NR^XR², em que R¹ é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, cicloalquila C3-C8, alcóxi C1-C0,

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7/111 alquenilóxi C2-C0, fenila, fenóxi, benzilóxi,

NR^AR^B (alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), NR^AR^B (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)carbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ)carbonila, (cicloalquila Cs-Cs)carbonila, (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)oxicarbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)oxicarbonila, (cicloalquila CsCs) oxicarbonila, arilcarbonila, sulfonila, arilsulfonila, aril(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), aril(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), aril(cicloalquila Cs-Cs), (alquila de cadeia ramificada ou linear CiCõ)arila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)arila, (cicloalquila Cs-Cs)arila, arila, heterociclila, heterociclil(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), e heterociclil(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0); em que cada heterociclila tem entre 1 e 7 heteroátomos independentemente selecionados de O, N, ou S, e em que cada de R^A e R^B são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs;

e R² é selecionado do grupo que consiste em alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ, cicloalquila Cs-Cs, alcóxi C1-C0, alquenilóxi C2-C0, fenila, fenóxi, benzilóxi,

NR^XR^Y (alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), NR^XR^Y (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)carbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ)carbonila, (cicloalquila Cs-Cs)carbonila, (alquila de cadeia ramificada

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8/111 ou linear Ci-Cõ)oxicarbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2 - Cõ) oxicarbonila, (cicloalquila C3-Cs) oxicarbonila, arilcarbonila, sulfonila, arilsulfonila, aril(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), aril(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), aril(cicloalquila Cs-Cs), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)arila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)arila, (cicloalquila Cs-Csjarila, arila, heterociclila, heterociclil(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), e heterociclil(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0); em que cada heterociclila tem entre 1 e 7 heteroátomos independentemente selecionados de O, N, ou S, e em que cada de R^x e R^Y são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs;

em que R¹ e R² são independentemente substituídos por entre 0 e 4 substituintes, cada um independentemente selecionados de halo, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, alcóxi C1-C0, trifluormetila, trifluoretila, e amino; e desde que ambos R¹ e R² não possam ser metila, e R² não possa ser (fenil)prop-l-ila quando R¹ é hidrogênio; ou (b) arilóxi, substituída por entre 0 e 4 substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em halo, alcóxi C1-C0, trifluormetila, trifluoretila, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, cicloalquila C3Cs, NR^CR^D, NR^cR^D(alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Ce), e NR^CR^D (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0) em que cada um de R^c e R^D é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; e quando mais

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9/111 de um substituinte é da forma NR^CR^D, cada ocorrência de R^c e R^D é independentemente selecionada a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; ou (c) uma heterociclila tendo entre 1 e 7 heteroátomos independentemente selecionados de O, N ou S; e tendo entre 0 e 4 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, haloalquila, hidroxila, nitro, trifluormetila, trifluoretila, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, alcóxi C1-C0, alquenilóxi C2-C0, fenila, fenóxi, benzilóxi, amino, tiocarbonila, ciano, imino, NR^ER^F(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), NR^ER^F(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0) sulfidrila, tioalquila, dioxa-espiroetila, (alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0) carbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0)carbonila, (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)oxicarbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ)oxicarbonila, arilcarbonila, sulfonila, arilsulfonila, aril(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), aril(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), aril(cicloalquila Cs-Cs), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)arila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ)arila, (cicloalquila Cs-Csjarila, arila, heterociclila, heterociclila(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), e heterociclila(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), em que cada heterociclila tem entre 1 e 7 heteroátomos independentemente selecionados de O, N, ou S, em que cada um de R^E e R^F é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; e quando mais do que um substituinte é da forma NR^ER^F, cada ocorrência de R^E e R^F é independentemente selecionada a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; em

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10/111 que cada um dos ditos 0-4 substituintes é independentemente substituído por entre 0 e 4 outros substituintes, e cada dito outro substituinte é independentemente selecionado de halo, alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, cicloalquila C3-C8, alcóxi C1-C0, trifluormetila, trifluoretila, e amino; desde que R tenha pelo menos um substituinte quando R é um grupo N-piperidinila, N-pirrolidinila ou um Nmorfolinila.

[0017] Em algumas modalidades, cada anel de cada heterociclila de Fórmula (I) é independentemente de tamanho de 5-7 átomos.

[0018] Algumas modalidades incluem um, dois ou três átomos de nitrogênio em pelo menos um anel da heterociclila de Fórmula (I).

[0019] Em algumas modalidades, a heterociclila de Fórmula (I) compreende 1-3 anéis. Em algumas modalidades, a heterociclila tem 17 heteroátomos independentemente selecionados de O, N e S. Em algumas modalidades, a heterociclila compreende 1-2 anéis. Em algumas modalidades, a heterociclila compreende um anel. Em algumas modalidades, as várias ocorrências da heterociclila de Fórmula (I), cada uma independentemente, compreendem 1-3 anéis. Em algumas modalidades, as várias ocorrências da heterociclila de Fórmula (I), cada uma independentemente, compreendem 1-2 anéis. Em algumas modalidades, as várias ocorrências da heterociclila de Fórmula (I), cada uma independentemente, compreendem um anel.

[0020] Em algumas modalidades, a heterociclila da Fórmula (I) é selecionada a partir do grupo que consiste em piperidinila, piperazinila, piridazinila, dihidropiridila, tetrahidropiridila, piridinila, pirimidinila, dihidropirimidinila, tetrahidrofrimidinila, hexahidropirimidinila, dihidropirazinila, tetrahidropirazinila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, pirrolila, dihidropirolila, imidazolila, dihidroimidazoila, pirazolila, dihidropirazolila, azepanila, [l,2]diazepanila, [l,3]diazepanila, [l,4]diazepanila, indolila, dihidroindolila, isoindolila, dihidroisoindoli,

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11/111 dihidroquinolila, tetrahidroquinolila, dihidroisoquinolila e tetrahidro isoquinolila; ou subconjuntos dos mesmos.

[0021] A presente invenção também se refere a uma composição farmacêutica que compreende (i) uma quantidade terapeuticamente de um composto de Fórmula (I) e (II) um portador farmaceuticamente aceitável.

[0022] A presente invenção proporciona compostos que inibem a atividade de polimerase in vitro e in vivo de poli(ADP-ribose) polimerase (PARP), e composições contendo os compostos revelados.

[0023] A presente invenção proporciona métodos para inibir, limitar e/ou controlar a atividade de polimerase in vitro e/ou in vivo de poli(ADP-ribose) polimerase (PARP) em células de soluções, tecidos, órgãos ou sistemas de órgãos. Em uma modalidade, a presente invenção proporciona métodos para limitar ou inibir atividade PARP em um mamífero, tal como um humano, tanto local quanto sistematicamente.

[0024] Em uma realização, a invenção proporciona um método de quimiossensibilização para tratar câncer compreendendo colocar em contato as células de câncer com um composto de tetraaza fenaleno-3ona de Fórmula (I) que potencializa citotoxicidade ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e ainda colocar em contato o tumor ou células de câncer com um agente anticâncer.

[0025] Uma realização da presente invenção proporciona um método de quimiossensibilização em que uma primeira dose de pelo menos um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado isolada ou repetidamente a um paciente em necessidade do mesmo e em que subsequentemente uma segunda dose de pelo menos um agente quimioterapêutico é administrada isolada ou repetidamente ao referido paciente após um período de tempo para fornecer uma quantidade eficaz de quimiossensibilização.

[0026] Um aspecto da presente invenção proporciona uma formulação farmacêutica compreendendo o composto de Fórmula (I) em

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12/111 uma forma selecionada a partir do grupo que consiste em exemplos não limitativos desses agentes quimioterapêuticos são enumerados abaixo. Bases livres, sais, hidratos, ésteres, solvatos, estereoisômeros farmaceuticamente aceitáveis e misturas dos mesmos. De acordo com um outro aspecto, a formulação farmacêutica ainda compreende um portador farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, um agente quimioterapêutico. As seguintes modalidades são para fins ilustrativos apenas e não se destinam a limitar de qualquer forma o escopo da presente invenção. Em uma realização, uma formulação farmacêutica da invenção compreende um composto da invenção em um portador farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade, uma formulação farmacêutica da invenção compreende um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da invenção em um portador farmaceuticamente aceitável. Em outra realização, uma formulação farmacêutica da invenção compreende um composto da invenção e um ou mais agentes quimioterapêuticos em um portador farmaceuticamente aceitável. Em outra realização, uma formulação farmacêutica da invenção compreende um sal farmaceuticamente aceitável de um composto da invenção e um ou mais agentes quimioterapêuticos em um portador farmaceuticamente aceitável. Exemplos não limitativos desses agentes quimioterapêuticos são enumerados abaixo.

[0027] De acordo com aspectos adicionais da invenção, o composto quimiossensibilizante e o agente quimioterapêutico são administrados de modo essencialmente simultâneo.

[0028] De acordo com um aspecto da invenção, o agente quimioterapêu-tico é selecionado do grupo que consiste em temozolomida, adriamicina, camptotecina, carboplatina, cisplatina, daunorubicina, docetaxel, doxorrubicina, interferona-alfa, interferonabeta, interferona-gama, interleucina 2, irinotecano, paclitaxel, um taxóide, dactinomicina, danorrubicina, 4’-deoxidoxorrubicina, bleomicina, pilcamicina, mitomicina, neomicina e gentamicina, etoposida, 4-OH ciclofosfamida, um complexo de coordenação de

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13/111 platina, topotecano, análogos e derivados terapeuticamente eficazes dos mesmos e misturas dos mesmos. De acordo com um aspecto específico, o agente quimioterapêutico é a temozolomida.

[0029] Em outra realização, a presente invenção proporciona métodos de tratamento do efeito do câncer e/ou de radiossensibilizar células cancerígenas para deixar as células de câncer mais suscetíveis à terapia de radiação e, assim, impedir que as células de tumor se recuperem de dano potencialmente letal ao DNA após terapia com radiação, compreendendo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Um método desta modalidade é direcionado para especifica e preferencialmente radiossensibilizar células de câncer deixando as células cancerígenas mais suscetíveis à terapia de radiação do que células não-tumorais.

[0030] A presente invenção também provê um método de tratamento de câncer em um sujeito em necessidade do mesmo compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que as células de câncer têm um defeito na reparação de cisão de DNA de filamento duplo. Em uma modalidade, o defeito na reparação de cisão de DNA de filamento duplo é um defeito na recombinação homóloga. Em uma realização, as células cancerígenas têm um fenótipo selecionado do grupo que consiste em um defeito BRCA-1, um defeito BRCA-2, um defeito BRCA-1 e BRCA-2 e anemia Fanconi.

[0031] Em outra realização, a presente invenção proporciona métodos de tratar câncer de mama associado com BRCA1/2 compreendendo administrar um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0032] De acordo com uma modalidade da invenção, o composto para uso no método de quimiossensibilização da invenção, o método de radiossensibilização da invenção ou o método da invenção de

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14/111 tratamento de câncer em que as células de câncer têm um defeito na reparação de cisão de DNA de filamento duplo, é um composto selecionado de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em outro aspecto, o composto é selecionado do grupo que consiste em

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e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[0033] A presente invenção também fornece meios para tratar neuropatia periférica induzida por quimioterapia. De acordo com um aspecto da invenção, os compostos da presente invenção são administrados antes de, ou junto com, a administração de pelo menos um agente de quimioterapia para prevenir o desenvolvimento de sintomas de neuropatia ou para mitigar a severidade de tais sintomas. Conforme outro aspecto, os compostos da presente invenção são administrados após a administração de pelo menos um agente quimioterapêutico para tratar um paciente para os sintomas de neuropatia ou para mitigar a severidade de tais sintomas. Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para retardar, atrasar, ou deter o crescimento de células de câncer em um mamífero, compreendendo a administração de um agente quimioterapêutico, e ainda compreendendo a administração de um composto de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em uma quantidade suficiente para potencializar a atividade anticâncer de dito agente quimioterapêutico.

[0034] Ainda outros aspectos e vantagens da presente invenção

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21/111 tornar-se-ão facilmente evidentes para aqueles versados na técnica da seguinte descrição detalhada, em que são mostradas e descritas modalidades preferidas da invenção, simplesmente a título de ilustração do melhor modo contemplado de executar a invenção. Como será percebido, a invenção é capaz de outras e diferentes modalidades, e seus diversos detalhes são capazes de modificações em vários aspectos óbvios, sem se afastar da invenção. Consequentemente, a descrição deve ser considerada como ilustrativa na essência e não como restritiva.

Breve Descrição dos Desenhos [0035] Figura 1 - A administração oral do Composto 13 inibidor de PARP-1 + TMZ demonstrando a sobrevida aumentada de camundongos portadores de modelo de melanoma B16.

[0036] Figura 2 - A administração oral do Composto 13 inibidor de PARP-1 + TMZ demonstrando a sobrevida aumentada no modelo de glioma SJGBM intracraniano.

[0037] Figura 3 - A administração oral do Composto 37 inibidor de PARP-1 + TMZ demonstrando a sobrevida aumentada de camundongos portadores de modelo de melanoma B16.

[0038] Figura 4 - A administração oral do Composto 37 inibidor de PARP-1 + TMZ demonstrando a sobrevida aumentada no modelo de glioma SJGBM intracraniano.

[0039] Figura 5 - A administração oral do Composto 37 inibidor de PARP-1 + radiação demonstrando a inibição do crescimento de tumor no modelo de câncer de cabeça e pescoço.

[0040] Figura 6 - A administração oral do Composto 37 inibidor de PARP-1 demonstrando inibição do crescimento de tumores mutantes BRCA1

Descrição Detalhada da Invenção [0041] A presente invenção proporciona compostos descritos neste

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22/111 documento, derivados dos mesmos e seus usos para inibir poli(ADPribose) polimerase (“PARP”), composições contendo estes compostos e métodos para fazer e usar estes compostos para tratar, prevenir e/ou melhorar os efeitos de cânceres potencializando os efeitos citotóxicos de radiação ionizante em células tumorais.

[0042] A presente invenção proporciona compostos descritos neste documento, derivados dos mesmos e seus usos para inibir poli(ADPribose) polimerase (“PARP”), composições contendo estes compostos e métodos para fazer e usar estes compostos para trata os efeitos de câncer potencializando os efeitos citotóxicos de agentes quimioterapêuticos em células de tumor.

[0043] A presente invenção proporciona um método de quimiossensibilização para tratar tumor e/ou células de câncer compreendendo colocar em contato as referidas células de câncer com um composto de Fórmula (I) e ainda colocar em contato as citadas células de câncer com um agente anticâncer.

[0044] A presente invenção proporciona compostos descritos neste documento, derivados dos mesmos e seus usos para inibir poli(ADPribose) polimerase (“PARP”), composições contendo estes compostos e métodos para fazer e usar estes compostos para inibir o crescimento de células tendo defeitos via de recombinação homóloga (HR) da reparação do DNA de filamento duplo.

[0045] Os compostos e composições da presente invenção pode ser usada na presença ou ausência rádio ou quimiossensibilizadores para tratamento de câncer. Os compostos e composições são preferencialmente usados na ausência de rádio ou quimiossensibilizadores, onde o câncer tem um defeito na via de recombinação homóloga (HR) de reparação de DNA de filamento duplo. Esses defeitos são associados com, e tem fenótipos de, defeitos BRCA-1, defeitos BRCA-2, defeitos BRCA-l/BRCA-2 dual, e anemia Fanconi.

[0046] A anemia Fanconi é uma doença geneticamente heterogênea e pacientes com anemia Fanconi tem um risco consideravelmente

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23/111 aumentado de câncer. Onze proteínas têm sido associadas com anemia Fanconi. FANCA, FANCB, FANCC, FANCE, FANCF, FANCG e FANCM formam um complexo central nuclear. O complexo interage com FANCL para incorporar ubiquinona de FANCD2. FANCD2 é usada para reparação de ligação cruzada de DNA. FANCd2 acumula em locais de dano de DNA e se associa com BRCA-1 e BRCA-2.

[0047] Cânceres exemplificativos que podem ser associados a defeitos de HR incluem câncer de mama e câncer de ovário. Câncer de mama para tratamento pelos métodos da invenção pode incluir todos os tipos de câncer de mama e preferencialmente inclui carcinoma ductal invasivo e carcinoma lobular invasivo. Câncer de ovário para tratamento pelos métodos da invenção inclui todos os tipos de câncer de ovário, preferencialmente tumores ovarianos epiteliais, tumores ovarianos de célula germinativa e tumores estromais dos cordões sexuais.

[0048] Os compostos da presente invenção podem ser sintetizados usando os materiais primários e métodos revelados no Pedido US 10/853.714, que é incorporado neste documento como referência em sua totalidade.

[0049] Tipicamente, os compostos, tais como aqueles de Fórmula (I), usados nas composições da invenção terão um IC50 para inibir poli(ADP-ribose) polimerase in vitro de cerca de 20 μΜ ou menos, preferencialmente menos do que cerca de 10 μΜ, mais preferencialmente menos do que cerca de 1 μΜ, ou preferencialmente menos do que cerca de 0,1 μΜ, mais preferencialmente menos do que cerca de 0,01 μΜ.

[0050] Um método conveniente para determinar o IC50 de um composto inibidor de PARP é um ensaio de PARP usando PARP humano recombinante purificado de Trevigan (Gaithersburg, Md.), como se segue: O ensaio de enzima PARP é ajustado em gelo em um volume de 100 microlitros que consiste em 100 mM de Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM de MgCU, 28 mM de KC1, 28 mM de NaCI, 3,0 gg/ml de DNA de esperma de arenque ativado por DNase I (Sigma, Mo.), 30 micromolar de

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24/111 [³H]nicotinamida adenina dinucleotídeo (62,5 mCi/mmole), 15 microgramas/ml de enzima PARP, e várias concentrações dos compostos a serem testados. A reação é iniciada adicionando-se enzima e incubando-se a mistura em 25 °C. Após 2 minutos de incubação, a reação é concluída adicionando-se 500 microlitros de ácido tricloroacético (p/v) 30% gelado. O precipitado formado é transferido para um filtro de fibra de vidro (Packard Unifilter-GF/C) e lavado três vezes com 70% de etanol. Após o filtro ser seco, a radioatividade é determinada por contagem de cintilação. Descobriu-se que os compostos desta invenção têm atividade enzimática potente na faixa de uns poucos nanomolares a 20 micromolares em IC50 neste ensaio de inibição.

[0051] Como usado neste documento, “alquila” significa uma cadeia de hidrocarbonetos saturada ramificada ou não ramificada compreendendo um número designado de átomos de carbono. Por exemplo, cadeia de hidrocarbonetos alquila ramificada ou linear Ci-Cõ contém de 1 a 6 átomos de carbono, e inclui, mas não está limitada a substituintes tais como metila, etila, propila, iso-propila, butila, isobutila, tert-butila, n-pentila, n-hexila, e semelhantes, a não ser que de outra forma indicado. Em algumas modalidades, a cadeia alquila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de Ci a Cõ. Em algumas modalidades, a cadeia alquila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C2 a C5. Em algumas modalidades, a cadeia alquila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de Ci a C4. Em algumas modalidades, a cadeia alquila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C2 a C4. Em algumas modalidades, a cadeia alquila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C3 a C5. Em algumas modalidades, a cadeia alquila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de Ci a C2. Em algumas modalidades, a cadeia alquila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C2 a C3.

[0052] “Alquenila” significa uma cadeia de hidrocarboneto insaturada

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25/111 ramificada ou não ramificada compreendendo um número designado de átomos de carbono. Por exemplo, cadeia de hidrocarbonetos alquenila ramificada ou linear C2-C0 contém de 2 a 6 átomos de carbono, tendo pelo menos uma ligação dupla, e inclui, mas não está limitada a substituintes tais como etenila, propenila, isopropenila, butenila, isobutenila, tert-butenila, n-pentenila, n-hexenila, e semelhantes, a não ser que de outra forma indicado. Em algumas modalidades, a cadeia alquenila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C2 a Cõ. Em algumas modalidades, a cadeia alquenila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C2 a C5. Em algumas modalidades, a cadeia alquenila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C2 a C4. Em algumas modalidades, a cadeia alquenila é uma cadeia de carbono ramificada ou não ramificada de C3 a C5.

[0053] “Alcóxi” significa o grupo -OZ, em que Z é alquila como definido neste documento. Z pode também ser uma cadeia de hidrocarboneto saturada ramificada ou não ramificada contendo de 1 a 6 átomos de carbono.

[0054] “Ciclo”, usado neste documento como um prefixo, se refere a uma estrutura caracterizada por um anel fechado.

[0055] “Halo” significa pelo menos um segmento flúor, cloro, bromo ou iodo, a não ser que de outra forma indicado.

[0056] Cada um de “NR^AR^B”, “NR^XR^Y”, “NR^CR^D”, e “NR^ER^F”, como descrito neste documento, engloba independentemente amino (NH2), bem como amino substituído. Por exemplo, NR^AR^B pode ser -NH(CHs), -NH(ciclohexil) e -N(CH2CH3)(CH3). Quando mais de um substituinte é da forma “NR^AR^B”, “NR^XR^Y”, “NR^CR^D”, ou “NR^ER^F”, cada ocorrência de R^A, R^B, R^c, R^D, R^x ou R^Y é independentemente selecionada a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia ramificada ou linear C2-C0 e cicloalquila C3-C8. Tais exemplos são para fins ilustrativos apenas e não são destinados a ser limitativos de qualquer forma.

[0057] “Arilcarbonila” refere-se a um radical carbonila substituída

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26/111 por arila, como descrito neste documento. Exemplos não limitativos incluem fenilcarbonila e naftilcarbonila.

[0058] “Alquilcarbonila” refere-se a um radical carbonila substituída por alquila como descrito neste documento. Exemplos não limitativos incluem acila e propilcarbonila.

[0059] “Alcoxicarbonila” refere-se a um radical carbonila substituída por alcóxi, como descrito neste documento. Exemplos não limitativos incluem metoxicarbonila e tert-butiloxicarbonila.

[0060] “Ar” ou “arila” referem-se a um segmento carbocíclico aromático tendo um ou mais anéis fechados. Exemplos incluem, sem limitação, fenila, naftila, antracenila, fenantracenila, bifenila e pirenila.

[0061] “Heterociclila” refere-se a um segmento cíclico tendo um ou mais anéis fechados, com um ou mais heteroátomos (por exemplo, oxigênio, nitrogênio ou enxofre) em pelo menos um dos anéis e em que o anel ou anéis pode(m) independentemente ser aromáticos, não aromáticos, fundidos e/ou com pontes. Exemplos incluem sem limitação piperidinila, piperazinila, piridazinila, dihidropiridila, tetrahidropiridila, piridinila, pirimidinila, dihidropirimidinila, tetrahidropirimidinila, hexahidropirimidinila, dihidropirazinila, tetrahidropirazinila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, pirrolila, dihidropirolila, imidazolila, dihidroimidazoila, pirazolila, dihidropirazolila, azepanila, [l,2]diazepanila, [l,3]diazepanila, [l,4]diazepanila, indolila, dihidroindolila, isoindolila, dihidroisoindoli, dihidroquinolila, tetrahidroquinolila, dihidroisoquinolila, e tetrahidroisoquinolila.

[0062] “Arilalquila” refere-se a um radical alquila substituída por arila. Exemplos não limitativos incluem benzila, feniletila e fenilpropila.

[0063] “Alquilarila” refere-se a um radical arila substituído por alquila. Exemplos não limitativos incluem tolila e dimetilfenila.

[0064] “Cicloalquila” refere-se a um segmento cíclico de hidrocarboneto que é não aromático. Exemplos incluem, sem limitação, ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclohexano, cicloheptano,

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27/111 ciclooctano, ciclopenteno, ciclohexeno, ciclohepteno, e cicloocteno.

[0065] O termo “a lesão nervosa” refere-se a qualquer dano a tecido nervoso e qualquer incapacidade ou morte resultante do mesmo. A causa de a lesão nervosa pode ser metabólica, tóxica, neurotóxica, iatrogênica, térmica ou química, e inclui sem limitação, isquemia, hipóxia, acidente cerebrovascular, trauma, cirurgia, pressão, efeito de massa, hemorragia, radiação, vasoespasmo, doença neurodegenerativa, infecção, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrópica (ELA), processo de mielinação/desmielinação, epilepsia, desordem cognitiva, anormalidade de glutamato e efeitos secundários dos mesmos.

[0066] O termo “neuroprotetivo” refere-se ao efeito de redução, repressão ou melhoramento de a lesão nervosa, e proteção, ressuscitação ou renascimento do tecido nervoso que sofreu a lesão nervosa.

[0067] O termo “neurodegeneração preventiva” inclui a capacidade de prevenir uma doença neurodegenerativa ou prevenir mais neurodegeneração em pacientes que já estão sofrendo de ou têm sintomas de uma doença neurodegenerativa.

[0068] O termo “tratar” refere-se a:

(i) prevenir uma doença, desordem ou condição de ocorrer em um animal que pode ser predisposto à doença, desordem e/ou condição, mas não foi ainda diagnosticado como tendo-a; e/ou (ii) inibir a doença, desordem ou condição, isto é, reprimindo seu desenvolvimento; e/ou (iii) aliviar a doença, desordem ou condição, isto é, causando regressão da doença, desordem e/ou condição.

[0069] O termo “quimiossensibilizador”, como usado aqui, é definido como uma molécula, tal como uma molécula de peso molecular baixo, administrado a animais em quantidades terapeuticamente eficazes para

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28/111 potencializar a atividade antitumoral de agentes quimioterapêuticos. Tais quimiossensibilizadores são úteis, por exemplo, para aumentar o efeito de retardamento do crescimento ou de repressão de uma dada dose de um agente quimioterapêutico ou para melhorar o perfil de efeito colateral de um agente quimioterapêutico permitindo reduções em sua dose enquanto mantendo sua eficácia antitumoral.

[0070] O termo “radiossensibilizador”, como usado aqui, é definido como uma molécula, tal como uma molécula de peso molecular baixo, administrada a animais em quantidades terapeuticamente eficazes para aumentar a sensibilidade das células para ser radiossensibilizadas para radiação eletromagnética e/ou para promover o tratamento de doenças as quais são tratáveis com radiação eletromagnéticas. Doenças que são tratáveis com radiação eletromagnética incluem doenças neoplásicas, tumores benignos e malignos, e células cancerosas. O tratamento com radiação eletromagnética de outras doenças não listadas neste documento também é contemplado.

[0071] “Quantidade eficaz” refere-se à quantidade requerida para produzir o efeito desejado.

[0072] “Substituído” significa que pelo menos um hidrogênio em um grupo designado é substituído por outro radical, desde que a valência norma do grupo designado não seja excedida. A respeito de qualquer grupo contendo um ou mais substituintes, tais grupos não se destinam a introduzir qualquer substituição que seja estericamente impraticável, sinteticamente inviável e/ou inerentemente instável. Em algumas modalidades da invenção, como descrito neste documento, um substituinte pode substituir um radical, o qual dito radical é ele mesmo um substituinte. Por exemplo, no composto mostrado abaixo, para fins ilustrativos apenas, o anel de piperazinila é uma heterociclila, que pode ser substituída por 0-4 substituintes, como descrito neste documento. No composto de exemplo, o anel de piperazinila é substituído por arilsulfonila, em que arila é fenila e em que a arilsulfonila pode ser ainda substituída 0-4 vezes como descrito neste documento. No

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29/111 composto de exemplo, o segmento fenilsulfonila é ainda substituída por tert-butila. Esse exemplo é dado para fins ilustrativos apenas e não se destina a ser limitados de qualquer modo.

N [0073] “Sujeito” refere-se a uma célula ou tecido, in vitro ou in vivo, um animal ou um humano. Pode-se também se referir a um sujeito animal ou humano como um “paciente”.

[0074] “Animal” refere-se a um organismo vivo tendo sensação e o poder de movimento voluntário, e que requer para sua existência oxigênio e comida orgânica. Exemplos incluem, sem limitação, membros das espécies humana, mamífera e primata.

[0075] Amplamente, os compostos e composições da presente invenção podem ser usados para tratar ou prevenir dano ou morte celular devido a necrose ou apoptose, isquemia cerebral e reperfusão ou doenças neurodegenerativas em um animal, tal como um humano. Os compostos e composições da presente invenção podem ser usados para estender a sobrevida e capacidade proliferativa de células e, desse modo, podem ser usados para tratar ou prevenir doenças associadas com os as mesmas; eles alteram a expressão de genes de células senescentes; e eles radiossensibilizam células de tumor hipóxicas. Preferencialmente, os compostos e composições da invenção podem ser usados para tratar ou prevenir danos a tecidos resultante de dano ou morte celular devido a necrose ou apoptose, e/ou afetar atividade neuronal, tanto mediada quanto não mediada por toxicidade por NMDA. Os compostos da presente invenção não são limitados a ser úteis no tratamento de neurotoxicidade mediada por glutamato e/ou vias

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30/111 biológicas NÃO-mediadas. Além disso, os compostos da invenção podem ser usados para tratar ou prevenir outros danos a tecidos relacionados a ativação PARP, como descrito neste documento.

[0076] A presente invenção proporciona compostos que inibem a atividade de polimerase in vitro e/ou in vivo de poli(ADP-ribose) polimerase (PARP), e composições contendo os compostos revelados.

[0077] A presente invenção proporciona métodos para inibir, limitar e/ou controlar a atividade de polimerase in vitro e/ou in vivo de poli(ADP-ribose) polimerase (PARP) em qualquer das soluções, células, tecidos, órgãos ou sistemas de órgãos. Em uma modalidade, a presente invenção proporciona métodos para limitar ou inibir atividade PARP em um mamífero, tal como um humano, tanto local quanto sistemáticamente.

[0078] Os compostos da invenção agem como inibidores PARP para tratar ou prevenir cânceres quimiopotencializando os efeitos citotóxicos dos agentes quimioterapêuticos. Os compostos da invenção agem como inibidores PARP para tratar ou prevenir câncer sensibilizando células para os efeitos citotóxicos da radiação. Os compostos da invenção agem como inibidores PARP para tratar ou prevenir câncer de mama associado com BRCA1/2.

[0079] Os compostos da presente invenção podem possuir um ou mais centro(s) assimétrico(s) e, assim, podem ser produzidos como misturas (racêmica e não racêmica) de estereoisômeros ou como enantiômeros ou diastereômeros individuais. Os estereoisômeros podem ser obtidos usando-se um material primário oticamente ativo, resolvendo uma mistura racêmica ou não racêmica de um intermediário em algum estágio apropriado da síntese, ou por resolução do composto de Fórmula (I). Ê entendido que os estereoisômeros individuais, bem como misturas (racêmicas e não racêmicas) de estereoisômeros são englobados pelo escopo da presente invenção.

[0080] Os compostos da invenção são úteis em uma forma de base livre, na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos

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31/111 farmaceuticamente aceitáveis, ésteres farmaceuticamente aceitáveis, solvatos farmaceuticamente aceitáveis, pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis, metabólitos farmaceuticamente aceitáveis, e na forma de estereoisômeros farmaceuticamente aceitáveis. Estas formas estão todas dentro do escopo da revelação.

[0081] “Hidrato”, “éster”, “solvato” ou “sal farmaceuticamente aceitável” referem-se a um sal, hidrato, éster ou solvato dos compostos inventivos que possuem a atividade farmacológica desejada e que não é nem biologicamente nem de outra forma indesejada. Ácidos orgânicos podem ser usados para produzir sais, hidratos, ésteres ou solvatos, tais como acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenosulfonato, p-toluenosulfonato, bissulfato, sulfamato, sulfato, naftilato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentano-propionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, 2hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, tosilato e undecanoato. Ácidos inorgânicos podem ser usados para produzir sais, hidratos, ésteres ou solvatos, tais como hidrocloreto, hidrobrometo, hidroiodeto e tiocianato.

[0082] Exemplos de sais, hidratos, ésteres ou solvatos básicos apropriados incluem hidróxidos, carbonatos e bicarbonatos de amônia, sais de metal alcalino, tais como sais de sódio, lítio e potássio, sais de metal alcalino terroso, tais como sais de cálcio e magnésio, sais de alumínio e sais de zinco.

[0083] Sais, hidratos, ésteres ou solvatos podem ser também formados com bases orgânicas. Bases orgânicas apropriadas para a formação de sais de adição básica, hidratos, ésteres ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção incluem aqueles que são não tóxicos e fortes o suficiente para formar tais sais, hidratos, ésteres ou solvatos. Para fins de ilustração, a classe de tais bases orgânicas pode incluir mono, di e trialquilaminas, tais como metilamina, dimetilamina, trietilamina e diciclohexilamina; mono

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32/111 , di ou trihidroxialquilaminas, tais como mono-, di e trietanolamina; aminoácidos, tais como arginina e lisina; guanidina; N-metilglucosamina; N-metil-glucamina; L-glutamina; N-metil-piperazina; morfolina; etilenodiamina; N-benzil-fenetilamina; (trihidróximetil)aminoetano; e semelhantes. Ver, por exemplo, “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sei., 66:1, 1-19 (1977). Consequentemente, grupos contendo nitrogênio básicos podem ser quaternizados com agentes incluindo: haletos de alquila inferior, tais como cloretos, brometos e iodetos de metila, etila, propila e butila; sulfatos de dialquila, tais como sulfatos de dimetila, dietila, dibutila e diamila; haletos de cadeia longa, tais como cloretos, brometos e iodetos de decila, laurila, miristila e estearila; e haletos de aralquila, tais como brometos de benzila e de fenetila.

[0084] Os sais de adição ácidas, hidratos, éteres ou solvatos dos compostos básicos podem ser preparados tanto dissolvendo-se a base livre de um composto da presente invenção em uma solução de álcool aquosa ou aquosa ou outro solvente apropriado contendo o ácido ou base apropriados, quanto isolando-se o sal por evaporação da solução. Alternativamente, a base livre de um composto da presente invenção pode ser reagida com um ácido, bem como reagindo um composto da presente invenção tendo um grupo ácido no mesmo com uma base, tal que as reações são em um solvente orgânico, caso em que o sal separa diretamente ou pode ser obtido concentrando-se a solução.

[0085] “Pró-droga farmaceuticamente aceitável” refere-se a um derivado dos compostos inventivos que sofre biotransformação antes de apresentar seu(s) efeito(s) farmacológico(s). A pró-droga é formulada com o(s) objetivo(s) de estabilidade química melhorada, aceitação e observância pelo paciente melhoradas, biodisponibilidade melhorada, duração da ação prolongada, seletividade do órgão melhorada, formulação melhorada (por exemplo, hidrossolubilidade aumentada), e/ou efeitos colaterais diminuídos (por exemplo, toxicidade). A pródroga pode ser facilmente preparada dos compostos inventivos usando

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33/111 métodos conhecidos na técnica, tais como aqueles descritos por Burgers Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, Fifth Ed., Vol. 1, pp. 172-178, 949-982 (1995). Por exemplo, os compostos inventivos podem ser transformados em pró-drogas convertendo-se um ou mais dos grupos hidróxi ou carbóxi em ésteres.

[0086] “Metabólito farmaceuticamente aceitável” se refere a drogas que sofreu uma transformação metabólica. Após a entrada no corpo, a maioria das drogas são substratos para reações químicas que podem mudar suas propriedades físicas e efeitos biológicos. Estas conversões metabólicas, que normalmente afetam a polaridade do composto, alteram a forma na qual as drogas são distribuídas no corpo e excretadas dele. Entretanto, em alguns casos, metabolismo de uma droga é requerido para efeito terapêutico. Por exemplo, drogas anticâncer da classe antimetabólito devem ser convertidas para suas formas ativas após elas terem sido transportadas para dentro da célula de câncer. Uma vez que a maioria das drogas sofre transformação metabólica de algum tipo, as reações bioquímicas que desempenham um papel no metabolismo da droga podem ser numerosas e diversas. O principal local de metabolismo de droga é o fígado, embora outros tecidos possam também participar.

[0087] Além disso, os métodos das invenções podem ser usados para tratar câncer e para quimiossensibilizar e radiossensibilizar células de câncer e/ou tumor. O termo “câncer”, como usado neste documento, é definido amplamente. Os compostos da presente invenção podem potencializar os efeitos de “agentes anticâncer”, termo o qual também engloba “agentes anticrescimento de célula tumoral”, “agentes quimioterapêuticos”, “agentes citostáticos”, “agentes citotóxicos” e “agentes antineoplásicos”. O termo “câncer de mama associado com BRCA1/2” engloba câncer de mama no qual as células de câncer de mama são deficientes nos genes supressores de tumor câncer de mama BRCA1 e/ou BRCA2.

[0088] Por exemplo, os métodos da invenção são úteis para tratar

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34/111 cânceres tais como tumores produtores de ACTH, leucemia linfocítica aguda, leucemia não linfocítica aguda, câncer do córtex adrenal, câncer da bexiga, câncer do cérebro, câncer de mama, câncer cervical, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica, câncer colorretal, linfoma de célula T cutâneo, câncer endometrial, câncer do esôfago, sarcoma de Ewing, câncer da vesícula biliar, leucemia de célula pilosa, câncer de cabeça e pescoço, linfoma de Hodgkin, sarcoma de Kaposi, câncer renal, câncer hepático, câncer pulmonar (de célula pequena e/ou não pequena), efusão peritoneal maligna, efusão pleural maligna, melanoma, mesotelioma, mieloma múltiplo, neuroblastoma, linfoma não-Hodgkin, osteosarcoma, câncer ovariano, câncer do ovário (células germinativas), câncer de próstata, câncer pancreático, câncer de pênis, retinoblastoma, câncer de pele, sarcoma de tecidos moles, carcinomas de células escamosas, câncer estomacal, câncer testicular, câncer da tireoide, neoplasmos trofoblásticos, câncer uterino, câncer vaginal, câncer da vulva e tumor de Wilm.

[0089] Em algumas modalidades não limitadoras, as células de câncer e/ou tumor são selecionadas do grupo que consiste em câncer do cérebro, melanoma, câncer de cabeça e pescoço, câncer do pulmão de células não pequenas, câncer testicular, câncer ovariano, câncer de cólon e câncer retal.

[0090] A presente invenção também se refere a uma composição farmacêutica compreendendo (i) uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de um composto de Fórmula (I) e (ii) um portador farmaceuticamente aceitável.

[0091] A discussão acima relacionada à utilidade das modalidades preferidas e à administração dos compostos da presente invenção também se aplica à composição farmacêutica da presente invenção.

[0092] O termo “portador farmaceuticamente aceitável”, como usado neste documento, se refere a qualquer portador, diluente, excipiente, agente de suspensão, agente lubrificante, adjuvante, veículo, sistema de suprimento, emulsificador, desintegrante, absorvedor, preservativo,

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35/111 surfactante, corante, flavorizante ou adoçante.

[0093] Para estes fins, a composição da invenção pode ser administrada oralmente, parenteralmente, por spray de inalação, por adsorção, por absorção, topicamente, retalmente, nasalmente, bucalmente, vaginalmente, intraventricularmente, via um reservatório implantado em formulações de dosagem contendo portadores farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos convencionais, ou por qualquer outra forma de dosagem conveniente. O termo parenteral, como usado neste documento, inclui injeção intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intratecal intraventricular, intraesternal, e intracranial ou técnicas de infusão.

[0094] Quando administrada parenteralmente, a composição estará normalmente em uma unidade dose, forma injetável estéril (solução, suspensão ou emulsão que é preferencialmente isotônica com o sangue do recipiente com um portador farmaceuticamente aceitável. Exemplos de tais formas injetáveis estéreis são suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis. Estas suspensões podem ser formuladas de acordo com técnicas conhecidas na técnica usando agentes dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão. As formas injetáveis estéreis podem também ser soluções injetáveis estéreis ou suspensões em diluentes ou solventes parenteralmente aceitáveis não tóxicos, por exemplo, como soluções em 1,3-butanodiol. Dentre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, soro fisiológico, solução de Ringer, solução de dextrose, solução de cloreto de sódio isotônica, e solução de Hank. Além disso, óleos fixos, estéreis são convencionalmente empregados como solventes ou meios de suspensão. Para este fim, qualquer óleo fixo insípido pode ser empregado, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos, óleo de milho, de semente de algodão, de amendoim, e de gergelim. Ácidos graxos, tais como oleato de etila, miristato de isopropila, e ácido oléico e seus derivados glicerídeos, incluindo óleo de oliva e óleo de rícino, especialmente nas suas versões polioxietiladas, são úteis na preparação

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36/111 de injetáveis. Estas soluções ou suspensões de óleo podem também conter diluentes ou dispersantes de álcool de cadeia longa.

[0095] O soro fisiológico estéril é um portador preferido e os compostos são frequentemente suficientemente solúveis em água para serem compostos como uma solução. O portador pode conter quantidades menores de aditivos, tais como substâncias que aumentam a solubilidade, isotonicidade, e estabilidade química, por exemplo, antioxidantes, tampões e preservativos.

[0096] Formulações apropriadas para administração nasal ou bucal (tais como formulações de dispensação de talco autoimpulsionador) podem compreender cerca de 0,1% a cerca de 5% p/p, por exemplo 1% p/p de ingrediente ativo. As formulações para uso médico humano da presente invenção compreendem um ingrediente ativo em associação com um portador farmaceuticamente aceitável, assim, e opcionalmente outro(s) ingrediente(s) terapêutico(s).

[0097] Quando administrada oralmente, a composição será normalmente formulada em formas de unidade dose tais como comprimidos, pílulas, pó, grânulos, esferas, pastilhas mastigáveis, cápsulas, líquidos, suspensões ou soluções aquosas, ou formas de dosagem similares, usando equipamento e técnicas convencionais conhecidas na técnica. Tais formulações tipicamente incluem um portador sólido, semissólido ou líquido. Portadores exemplificativos incluem lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma de acácia, fosfato de cálcio, óleo mineral, manteiga de cacau, óleo de teobroma, alginatos, tragacanto, gelatina, xarope, metilcelulose, monolaurato de polioxietileno sorbitano, hidroxibenzoato de metila, hidroxibenzoato de propila, talco, estearato de magnésio e semelhantes.

[0098] A composição da invenção é preferencialmente administrada como uma cápsula ou comprimido contendo uma dose única ou dividida do composto de Fórmula (I) ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A composição pode ser administrada como uma solução, suspensão ou emulsão estéril, em uma dose única ou dividida.

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Comprimidos podem conter portadores tais como lactose e amido de milho, e/ou agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio. Cápsulas podem conter diluentes, incluindo lactose e amido de milho seco.

[0099] Um comprimido pode ser feito comprimindo ou moldando o ingrediente ativo opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Tabletes comprimidos podem ser preparados comprimindose, em uma máquina apropriada, o ingrediente ativo em uma forma fluidizante, tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturadas com um ligante, lubrificante, diluente inerte, superfície ativa, ou agente dispersante. Comprimidos moldados podem ser feitos moldando-se em uma máquina apropriada, uma mistura do ingrediente ativo pulverizado e um portador apropriado umedecido com um diluente líquido inerte.

[00100] Os compostos desta invenção podem também ser administrados retalmente na forma de supositórios. Estas composições podem ser preparadas misturando-se a droga com um excipiente não irritativo apropriado, que é sólido em temperatura ambiente, mas líquido à temperatura retal e, assim, derreterão no reto para liberar a droga. Tais materiais incluem manteiga de cacau, cera de abelha e glicóis de polietileno.

[00101] As composições e métodos da invenção também podem utilizar tecnologia de liberação controlada. Desse modo, por exemplo, os compostos revelados podem ser incorporados em matriz de polímero hidrofóbico para liberação controlada durante um período de dias. A composição da invenção pode, então, ser moldada em um implante sólido, ou emplastro externamente aplicado, apropriado para fornecer concentrações eficazes dos inibidores PARP durante um período prolongado de tempo sem a necessidade para frequente readministração. Esses filmes de liberação controlada são bem conhecidos da técnica. Particularmente preferidos são sistemas de suprimento transdérmico. Outros exemplos de polímeros comumente empregados para este fim que podem ser usados na presente invenção

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38/111 incluem copolímero de acetato de etileno-vinila não degradável, copolímeros de ácido glicólico-ácido láctico degradável, que podem ser usados externamente ou internamente. Certos hidrogéis, tais como poli(hidroxi-etilmetacrilato) ou poli(vinilálcool), também podem ser úteis, mas para ciclos de liberação mais curtos do que sistemas de liberação de outros polímeros, tais como aqueles acima mencionados.

[00102] Numa modalidade, o portador é um polímero biodegradável sólido ou mistura de polímeros biodegradáveis com características de liberação constante e cinética de liberação apropriadas. A composição da invenção pode, então, ser moldada em um implante sólido apropriado para fornecer concentrações eficazes dos compostos da invenção durante um período de tempo prolongado sem a necessidade de frequente readministração. A composição da presente invenção pode ser incorporada no polímero biodegradável ou na mistura de polímeros de qualquer forma apropriada conhecida daqueles de conhecimento comum na técnica e pode formar uma matriz homogênea com o polímero biodegradável, ou pode ser encapsulado de alguma forma dentro do polímero, ou pode ser moldado em um implante sólido.

[00103] Em uma realização, o polímero biodegradável ou mistura de polímeros é usado para formar um “depósito” macio contendo a composição farmacêutica da presente invenção que pode ser administrado como um líquido dispersível, por exemplo, por injeção, mas que permanece suficientemente viscoso para manter a composição farmacêutica dentro da área localizada ao redor do local da injeção. O tempo de degradação do depósito assim formado pode ser variado de vários dias até uns poucos anos, dependendo do polímero selecionado e seu peso molecular. Usando uma composição de polímero em forma injetável, até a necessidade de fazer uma incisão pode ser eliminada. Em qualquer caso, um “depósito” de suprimento flexível ou dispersível se ajustará à forma do espaço que ocupa com o corpo com um mínimo de trauma a tecidos circundantes. A composição farmacêutica da presente invenção é usada em quantidades que são terapeuticamente

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39/111 eficazes, e podem depender do perfil de liberação desejado, da concentração da composição farmacêutica requerida para o efeito sensibilizador, para o período de tempo que a composição farmacêutica tem que ser liberada para tratamento.

[00104] Os compostos da invenção são usados na composição em quantidades que são terapeuticamente eficazes. As composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, tais como agentes preservativos, estabilizadores, welling ou emulsificantes, promotores de solução, sais para regular a pressão osmótica, e/ou tampões. Além disso, eles podem também conter outras substâncias terapeuticamente valiosas, tais como, sem limitação, os agentes quimioterapêuticos específicos enumerados neste documento. As composições são preparadas conforme os métodos de mistura, granulação ou revestimento convencionais, e contêm cerca de 0,1 a 75% por peso, preferencialmente cerca de 1 a 50% por peso, do composto da invenção.

[00105] Para serem terapeuticamente eficazes como objetivos do sistema nervoso central, os compostos da presente invenção devem penetrar facilmente a barreira hematoencefálica quando administrados perifericamente. Os compostos que não podem penetrar a barreira hematoencefálica podem ser eficazmente administrados por uma rota intraventricular ou outro sistema de suprimento apropriado adequado para administração ao cérebro.

[00106] Para uso médico, a quantidade requerida do ingrediente ativo para alcançar um efeito terapêutico variará com o composto, rota de administração, mamífero sob tratamento particulares e com a desordem ou doença particular sendo tratada. Uma dose sistemática apropriada de um composto da presente invenção ou um sai farmaceuticamente aceitável do mesmo para um mamífero sofrendo de qualquer das condições como descritas acima neste documento, é na faixa de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg do composto ingrediente ativo, a dosagem típica sendo de cerca de 1 a cerca de 10 mg/kg.

[00107] Fica entendido, no entanto, que um nível de dose específico

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40/111 para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, da idade, do peso corporal, do estado geral de saúde, da dieta, do tempo de administração, da taxa de excreção, da combinação de droga e da severidade da doença particular sendo tratada e da forma de administração.

[00108] Ê entendido que o médico ou veterinário de conhecimento comum determinará e prescreverá facilmente a quantidade eficaz do composto para tratamento profilático ou terapêutico da condição para qual o tratamento é administrado. Procedendo desse modo, o médico ou veterinário pode, por exemplo, empregar um bolus intravenoso seguido por uma infusão intravenosa e administrações repetidas, parenteralmente ou oralmente, como considerado apropriado. Enquanto é possível para um ingrediente ativo ser administrado sozinho, é preferível que se apresente como uma formulação.

[00109] Quando preparando uma forma de dosagem incorporando as composições da invenção, os compostos podem também ser misturados com excipientes convencionais, tais como ligantes, incluindo gelatina, amido pré-gelatinizado, e semelhantes; lubrificantes, tais como óleo vegetal hidrogenado, ácido esteárico, e semelhantes; diluentes, tais como lactose, manose, e sacarose; desintegrantes, tais como carboximetilcelulose e amido glicolato de sódio; agentes de suspensão, tais como povidona, álcool de polivinila, e semelhantes; absorventes, tais como dióxido de silicone; preservativos, tais como metilparabeno, propilparabeno e benzoato de sódio; surfactantes, tais como lauril sulfato de sódio, polisorbato 80, e semelhantes; corantes; flavorizantes; e adoçantes. Excipientes farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos nas técnicas farmacêuticas e são descritas, por exemplo, em Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton PA (por exemplo, 20^th Ed., 2000), e Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association, Washington, D.C., (por exemplo, I^a·, 2^a e 3^a Eds., 1986, 1994 e 2000, respectivamente).

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41/111 [00110] A presente invenção refere-se ao uso de um composto de Fórmula (I) no preparo de um medicamento para o tratamento de qualquer doença ou desordem em um animal descrito neste documento. Em uma realização, os compostos da presente invenção são usados para tratar câncer. Em uma realização preferida, os compostos da presente invenção são usados para potencializar os efeitos citotóxicos de radiação ionizante. Nessa modalidade, os compostos da presente invenção agem como radiossensibilizador. Em uma realização preferida alternativa, os compostos da presente invenção são usados para potencializar os efeitos citotóxicos de agentes quimioterapêuticos. Nessa modalidade, os compostos da presente invenção agem como um quimiossensibilizador. Em outra realização preferida, os compostos da presente invenção são usados para inibir o crescimento de células tendo defeitos na via de recombinação homóloga (HR) de reparação de DNA de filamento duplo.

[00111] Qualquer agente quimioterapêutico farmacologicamente aceitável que age danificando DNA é apropriado como o agente quimioterapêutico da presente invenção. Em particular, a presente invenção contempla o uso de uma quantidade quimioterapeuticamente eficaz de pelo menos um agente quimioterapêutico incluindo, mas não limitado a: temozolomida, adriamicina, camptotecina, carboplatina, cisplatina, daunorubicina, docetaxel, doxorrubicina, interferona-alfa, interferona-beta, interferona-gama, interleucina 2, irinotecano, paclitaxel, topotecano, um taxóide, dactinomicina, danorrubicina, 4’deoxidoxorrubicina, bleomicina, pilcamicina, mitomicina, neomicina, gentamicina, etoposida 4-OH ciclofosfamida, um complexo de coordenação de platina, topotecano, e misturas dos mesmos. De acordo com um aspecto preferido, o agente quimioterapêutico é temozolomida.

[00112] A invenção contida neste documento demonstra a utilidade dos compostos e composições da presente invenção no tratamento e/ou prevenção de câncer, tal como por radiossensibilização e/ou quimiossensibilização de células de tumor e/ou de câncer para agentes

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42/111 quimioterapêuticos, e para inibir o crescimento de células tendo defeitos na via de recombinação homóloga (HR) de reparação de DNA de filamento duplo.

[00113] Os seguintes exemplos são para fins ilustrativos apenas e não se destinam a limitar o escopo do pedido.

[00114] Numa modalidade, a presente invenção proporciona um composto tetraaza fenaleno-3-ona de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

em que R é (a) NR^XR², em que R¹ é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, cicloalquila C3-C8, alcóxi C1-C0, alquenilóxi C2-C0, fenila, fenóxi, benzilóxi,

NR^AR^B (alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), NR^AR^B (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)carbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ)carbonila, (cicloalquila Cs-Csjcarbonila, (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)oxicarbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)oxicarbonila, (cicloalquila C3Csjoxicarbonila,

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43/111 arilcarbonila, sulfonila, arilsulfonila, aril(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), aril(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), aril(cicloalquila Cs-Cs), (alquila de cadeia ramificada ou linear CiCõ)arila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)arila, (cicloalquila Cs-Csjarila, arila, heterociclila, heterociclil(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), e heterociclil(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0); em que cada heterociclila tem entre 1 e 7 heteroátomos independentemente selecionados de O, N, ou S, e em que cada de R^A e R^B são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs;

e R² é selecionado do grupo que consiste em alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ, cicloalquila C3-C8, alcóxi C1-C0, alquenilóxi C2-C0, fenila, fenóxi, benzilóxi, NR^XR^Y (alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), NR^XR^Y (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)carbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)carbonila, (cicloalquila Cs-Csjcarbonila, (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)oxicarbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)oxicarbonila, (cicloalquila Cs-Csjoxicarbonila, arilcarbonila, sulfonila, arilsulfonila, aril(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), aril(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), aril(cicloalquila Cs-Cs), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)arila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-Cõ)arila, (cicloalquila Cs-Csjarila, arila, heterociclila, heterociclil(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), e heterociclil(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0); em que cada heterociclila tem entre 1 e 7 heteroátomos independentemente

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44/111 selecionados de O, N, ou S, e em que cada de R^x e R^Y são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs;

em que R¹ e R² são independentemente substituídos por entre 0 e 4 substituintes, cada um independentemente selecionados de halo, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, alcóxi C1-C0, trifluormetila, trifluoretila, e amino; e desde que ambos R¹ e R² não possam ser metila, e R² não possa ser (fenil)prop-l-ila quando R¹ é hidrogênio; ou (b) arilóxi, substituída por entre 0 e 4 substituintes, cada um independentemente selecionado do grupo que consiste em halo, alcóxi C1-C0, trifluormetila, trifluoretila, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, cicloalquila C3Cs, NR^CR^D, NR^cR^D(alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Có), e NR^CR^D (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0) em que cada um de R^c e R^D é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; e quando mais de um substituinte é da forma NR^CR^D, cada ocorrência de R^c e R^D é independentemente selecionada a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; ou (c) uma heterociclila tendo entre 1 e 7 heteroátomos independentemente selecionados de O, N ou S; e tendo entre 0 e 4 substituintes independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, haloalquila, hidroxila, nitro, trifluormetila, trifluoretila, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, alcóxi C1-C0, alquenilóxi C2-C0, fenila, fenóxi, benzilóxi, amino, tiocarbonila, ciano, imino, NR^ER^F(alquila de cadeia

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45/111 ramificada ou linear C1-C0), NR^ER^F(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0) sulfidrila, tioalquila, dioxa-espiroetila, (alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0) carbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0)carbonila, (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)oxicarbonila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ)oxicarbonila, arilcarbonila, sulfonila, arilsulfonila, aril(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), aril(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), aril(cicloalquila Cs-Cs), (alquila de cadeia ramificada ou linear Ci-Cõ)arila, (alquenila de cadeia linear ou ramificada C2Cõ)arila, (cicloalquila Cs-Csjarila, arila, heterociclila, heterociclila(alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0), e heterociclila(alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0), em que cada heterociclila tem entre 1 e 7 heteroátomos independentemente selecionados de O, N, ou S, em que cada um de R^E e R^F é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; e quando mais do que um substituinte é da forma NR^ER^F, cada ocorrência de R^E e R^F é independentemente selecionada a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, e cicloalquila Cs-Cs; em que cada um dos ditos 0-4 substituintes é independentemente substituído por entre 0 e 4 outros substituintes, e cada dito outro substituinte é independentemente selecionado de halo, alquila de cadeia ramificada ou linear C1-C0, alquenila de cadeia linear ou ramificada C2-C0, cicloalquila C3-C8, alcóxi C1-C0, trifluormetila, trifluoretila, e amino; desde que R tenha pelo menos um substituinte quando R é um grupo N-piperidinila, N-pirrolidinila ou um Nmorfolinila.

[00115] Em algumas modalidades, cada anel de cada heterociclila de Fórmula (I) é independentemente de 5-7 átomos de tamanho.

[00116] Algumas modalidades incluem um, dois ou três átomos de

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46/111 nitrogênio em pelo menos um anel da heterociclila de Fórmula (I). [00117] Em algumas modalidades, a heterociclila de Fórmula (I) compreende 1-3 anéis. Em algumas modalidades, a heterociclila tem 17 heteroátomos independentemente selecionados a partir de O, N e S. [00118] Em algumas modalidades, a heterociclila da Fórmula (I) é selecionada a partir do grupo que consiste em piperidinila, piperazinila, piridazinila, dihidropiridila, tetrahidropiridila, piridinila, pirimidinila, dihidropirimidinila, tetrahidrofrimidinila, hexahidropirimidinila, dihidropirazinila, tetrahidropirazinila, pirrolidinila, imidazolidinila, pirazolidinila, pirrolila, dihidropirolila, imidazolila, dihidroimidazoila, pirazolila, dihidropirazolila, azepanila, [l,2]diazepanila, [l,3]diazepanila, [l,4]diazepanila, indolila, dihidroindolila, isoindolila, dihidroisoindoli, dihidroquinolila, tetrahidroquinolila, dihidroisoquinolila, e tetrahidroisoquinolila.

[00119] Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um composto selecionado do grupo que consiste em

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52/111

62. , 63

. 65

. 69 θ ,

Η Η Η

Η

e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

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53/111 [00120] Em algumas modalidades, a invenção proporciona o composto que é

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00121] Em algumas modalidades, a invenção proporciona o composto que é

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00122] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método de quimiossensibilizar células de câncer em um mamífero em necessidade de quimioterapia, compreendendo a administração ao dito mamífero de um composto de Fórmula (I), como descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, dito mamífero é um humano. Em algumas modalidades, dita administração é administração de uma composição farmacêutica compreendendo o referido composto e um portador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o método de

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54/111 quimissensibilização ainda compreende a administração ao dito mamífero de um agente quimioterapêutico. Em algumas modalidades, o referido composto quimiossensibilizador e o citado agente quimioterapêutico são administrados de modo essencialmente simultâneo. [00123] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método de quimiossensibilizar células de câncer em um mamífero em necessidade de quimioterapia, compreendendo a administração a dito mamífero de um composto selecionado do grupo que consiste em compostos 7-28, 30-46, 50-66, 69, 72, 74-76, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, como descrito neste documento. Em algumas modalidades, dito mamífero é um humano. Em algumas modalidades, dita administração é administração de uma composição farmacêutica compreendendo o referido composto e um portador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o método de quimiossensibilização ainda compreende administrar ao referido mamífero um agente quimioterapêutico. Em algumas modalidades, o referido composto quimiossensibilizante e o citado agente quimioterapêutico são administrados de modo essencialmente simultâneo.

[00124] Em algumas modalidades, o agente quimioterapêutico da invenção é selecionado do grupo que consiste em temozolomida, adriamicina, camptotecina, carboplatina, cisplatina, daunorubicina, docetaxel, doxorrubicina, interferona-alfa, interferona-beta, interferonagama, interleucina 2, irinotecano, paclitaxel, topotecano, um taxóide, dactinomicina, danorrubicina, 4’deoxidoxorrubicinadeoxidoxorrubicina, bleomicina, pilcamicina, mitomicina, neomicina, gentamicina, etoposida, 4-OH ciclofosfamida, um complexo de coordenação de platina, e misturas dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente quimioterapêutico é temozolomida ou um sal do mesmo.

[00125] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método de radiossensibilizar células de câncer em um mamífero em necessidade de terapia de radiação compreendendo administrar a dito

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55/111 mamífero um composto de Fórmula (I), como descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, dito mamífero é um humano. Em algumas modalidades, dita administração é administração de uma composição farmacêutica compreendendo o referido composto e um portador farmaceuticamente aceitável.

[00126] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método de radiossensibilizar células de câncer em um mamífero em necessidade de terapia de radiação compreendendo administrar a dito mamífero um composto selecionado do grupo que consiste em compostos 7-28, 30-46, 50-66, 69, 72, 74-76 e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, como descrito neste documento. Em algumas modalidades, dito mamífero é um humano. Em algumas modalidades, dita administração é administração de uma composição farmacêutica compreendendo o referido composto e um portador farmaceuticamente aceitável.

[00127] Em algumas modalidades, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula (I), como descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um portador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ainda compreende um agente quimioterapêutico, como descrito neste documento.

[00128] Em algumas modalidades, a invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto selecionado do grupo que consiste em compostos 7-28, 30-46, 50-66, 69, 72, 74-76, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, como descrito neste documento. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica ainda compreende um agente quimioterapêutico, como descrito neste documento.

[00129] Em algumas modalidades, as células de câncer tratadas por métodos quimiossensibilizantes e/ou radiossensibilizantes da invenção são selecionados do grupo que consiste em tumores produtores de

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ACTH, leucemia linfocítica aguda, leucemia não linfocítica aguda, câncer do córtex adrenal, câncer da bexiga, câncer do cérebro, câncer de mama, câncer cervical, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica, câncer colorretal, linfoma de célula T cutâneo, câncer endometrial, câncer do esôfago, sarcoma de Ewing, câncer da vesícula biliar, leucemia de célula pilosa, câncer de cabeça e pescoço, linfoma de Hodgkin, sarcoma de Kaposi, câncer renal, câncer hepático, câncer pulmonar (de célula pequena e/ou não pequena), efusão peritoneal maligna, efusão pleural maligna, melanoma, mesotelioma, mieloma múltiplo, neuroblastoma, linfoma não-Hodgkin, osteosarcoma, câncer ovariano, câncer do ovário (células germinativas), câncer de próstata, câncer pancreático, câncer de pênis, retinoblastoma, câncer de pele, sarcoma de tecidos moles, carcinomas de células escamosas, câncer estomacal, câncer testicular, câncer da tireoide, neoplasmos trofoblásticos, câncer uterino, câncer vaginal, câncer da vulva e tumor de Wilm. Em algumas modalidades, as células de câncer tratadas pelos métodos de quimiossensibilização e/ou radiossensibilização da invenção são selecionados do grupo que consiste em câncer de cérebro, melanoma, câncer de cabeça e pescoço, câncer testicular, câncer ovariano, câncer de mama, câncer pulmonar de célula não pequena e câncer retal.

[00130] Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de um mamífero tendo um câncer caracterizado por ter um defeito na via de recombinação homóloga (HR) de reparação de DNA de filamento duplo, compreendendo administrar ao dito mamífero um composto de Fórmula (I), como descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, dito mamífero é um humano. Em algumas modalidades, dita administração é administração de uma composição farmacêutica compreendendo o referido composto e um portador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, as células cancerígenas têm um fenótipo selecionado do grupo que consiste em i) um defeito BRCA-1, ii) um

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57/111 defeito BRCA-2, iii) um defeito BRCA-1 e BRCA-2, e iv) anemia Fanconi. Em algumas modalidades, as células cancerígenas são selecionadas de câncer de mama ou câncer ovariano.

[00131] Em algumas modalidades, a invenção proporciona um método de tratamento de um mamífero tendo um câncer caracterizado por ter um defeito na via de recombinação homóloga (HR) de reparação de DNA de filamento duplo, compreendendo administrar a dito mamífero um composto selecionado do grupo que consiste em compostos 7-28, 30-46, 50-66, 69, 72, 74-76, e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, como descrito neste documento. Em algumas modalidades, dito mamífero é um humano. Em algumas modalidades, dita administração é administração de uma composição farmacêutica compreendendo o referido composto e um portador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, as células de câncer têm um fenótipo selecionado do grupo que consiste em i) um defeito BRCA-1, ii) um defeito BRCA-2, iii) um defeito BRCA-1 e BRCA-2, e iv) anemia Fanconi. Em algumas modalidades, as células cancerígenas são selecionadas de câncer de mama ou câncer ovariano.

Procedimentos Sintéticos para os Compostos Revelados

Esquema 1

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Procedimento

Geral E

EtOH nh₂nh₂

Procedimento A: Preparação de ácido 3-nitro-ftálico dimetil éster, 2 [00132] A uma solução agitada de 4-nitro-isobenzofurano-l,3-diona (150g, 0,78 mol), 1, em 2 L de MeOH foi adicionado 50 mL de ácido sulfúrico concentrado. A reação foi aquecida para refluxo por 16 horas. A solução misturada foi resfriada para temperatura ambiente e então derramada em 3 L de água gelada e resultado em um precipitado branco pesado. Isto foi triturado por 15 minutos e o precipitado foi filtrado e o sólido foi lavado com água cuidadosamente e seco para fornecer 120 g de ácido 3-nitro-ftálico dimetil éster, 2, como um sólido branco (65%). ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 8,54 (d, J = 7,25 Hz, 1H),

8,42 (d, J = 7,82 Hz, 1H), 7,98 (t, J = 8,20 Hz, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,98 (s, 3H). ¹³C NMR: 52,03, 52,29, 111,02, 115,67, 119,08, 131,80, 133,68, 148,80, 167,64, 168,63.

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Procedimento B: Preparação de ácido 3-amino-ftálico dimetil éster, 3 [00133] O composto 2 (205 g, 1,0 mol) foi dissolvido em 2 L de MeOH. Pd/C 10% catalítico foi adicionado e a solução foi hidrogenada sob PB (45 psi) em um aparelho de hidrogenação Parr em temperatura ambiente durante a noite. Filtrado por celite e evaporado para fornecer um rendimento quantitativo de ácido 3-amino ftálico dimetil éster, 3. ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 7,26 (t, J = 7,33 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,34 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 6,12 (s, 2H), 3,77 (s, 3H). ^X3C NMR: 51,51, 51,77, 110,50, 115,16, 118,56, 131,26, 148,28, 167,12, 168,11.

Procedimento C: Preparação de ácido 2-clorometil-4-oxo-3,4-dihidroquinazolina-5-carboxílico metil éster, 4:

[00134] 100 mL de cloroacetonitrila foi deixado agitar em 130 mL de 1,4 dioxano em temperatura ambiente. Gás HC1 seco foi borbulhado pela solução por trinta minutos seguido pela adição de 30 g de ácido 3amino-l,2-ftálico dimetil éster, 3. A reação foi refluída por aproximadamente três horas, resultando em um precipitado branco pesado. A suspensão foi resfriada com um banho de gelo, filtrada e lavada com pentano para remover quaisquer solventes residuais. 30 g (83%) de um sólido branco analiticamente puro, 4, foi isolado. ^XH NMR (300 MHz, DMSO-dõ): 7,88 (t, J = 8,33 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 7,08 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 7,33 Hz, 1H), 4,60 (s, 2H), 3,84 (s, 3H); ¹³C NMR: 42,21, 54,86, 119,95, 127,77, 130,86, 135,71, 136,78, 150,59, 155,70, 162,49, 171,24.

Procedimento Geral D: Preparação de compostos, 5:

[00135] Substituição do grupo cloro do composto 4 por nucleófilos, tais como amina, usando o Procedimento geral D fornece os compostos

5. A uma solução do composto de cloro 4 em DMF seco ou MeCN é

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60/111 adicionado carbonato de potássio e um nucleófilo, tal como uma amina. A mistura reagente é aquecida para 70 °C por 12 horas e resfriada para temperatura ambiente. Ê adicionada água à mistura reagente, seguido por acetato de etila. A camada orgânica é coletada, lavada com água, salmoura e seca sobre sulfato de sódio. Os solventes são removidos em vácuo. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna em sílica gel usando acetato de etila/hexanos como eluente para fornecer os produtos 5 em 50 - 95% de rendimento. Um exemplo foi dado na preparação do composto 7.

Procedimento Geral E: Preparação dos compostos, 6:

[00136] Um anel 2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona pode ser formado por condensação dos compostos 6 com hidrazina. A uma solução dos compostos 6 em etanol absoluto é adicionado excesso de hidrazina anidrosa em temperatura ambiente. A solução é refluída durante a noite e resfriada para temperatura ambiente. Ê adicionada água gelada e sólido branco é separado. O sólido é coletado por filtração a vácuo e lavado com água e pequena quantidade de metanol para fornecer produtos sólidos brancos 6 em 40 - 90% de rendimento. Um exemplo foi dado na preparação do composto 7.

Exemplo 1

Preparação de 8-(4-hidróxi-piperidina-l-ilmetil)-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 7.

[00137] Seguindo o Procedimento Geral D: Uma solução de MeCN (25 ml), 4-hidroxipiperidina (0,46 mg, 4,5 mmol), 4 (1,0 g, 3,9 mmol), e carbonato de potássio (1 g, 7 mmol) foi deixada refluxando sob nitrogênio e agitada durante a noite. A mistura reagente foi evaporada até a aridez e extraída com diclorometano. Purificada com uma coluna de sílica usando 9:1 diclorometano/MeOH para fornecer 1,05 g (84%) de

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61/111 um sólido quase branco, ácido 2-(4-hidróxi-piperidina-l-ilmetil)-4-oxo3,4-dihidro-quinazolina-5-carboxílico metil éster, 7a.

[00138] Seguindo o Procedimento Geral E: A uma solução de composto 7a (1,0 g, 3,1 mmol) em EtOH (20 mL) quando refluindo foi adicionado monohidrato de hidrazina (7 mL, grande excesso) e aquecida durante a noite. A reação foi resfriada para temperatura ambiente e H2O (15 mL) foi adicionada, resultando em um precipitado branco pesado. Filtrado e lavado com 1:1 EtOH/LLO para fornecer 0,6 g (64%) de um sólido branco analiticamente puro, 7. MP: 168-171 °C; MS (ES+): 300; ^XH NMR (300 MHz, CD3OD): 1,46-1,55 (m, 2H), 1,71-1,75 (m, 2H) 2,15-2,23 (m, 2H) 2,70-2,75 (m, 2H) 3,16-3,18 (m, 1H) 3,25 (s, 2H) 3,47-3,55 (m, 1H) 7,30-7,33 (m, 1H) 7,60-7,64 (m, 2H). AnaL Calculado para C15H17N5O2.I.7 H₂O: C, 56,45; H, 6,06; N, 21,94; Encontrado: C, 56,10;

H, 6,00; N, 22,25.

[00139] O composto 7 pode ser formulado com um ácido. Por exemplo: para uma solução de 7 (0,6 g, 2,0 mmol) em 10 mL de 1,4 dioxano/DMF (9:1) em 90 °C foi adicionado MsOH (0,14 mL, 2,1 mmol), resultando em um precipitado branco pesado. Filtrado e triturado em éter dietílico para fornecer 0,5 g (63%) de um sólido quase branco, sal de mesilato de 7. ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 1,55-1,58 (m, 2H),

I, 78-1,82 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 3,15-3,50 (m, 4H), 3,63-3,65 (m, 1H), 4,04 (s, 2H), 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,51-7,66 (m, 2H), 11,73 (s, 1H) [00140] AnaL Calculado para C15H17N5O2. ICH3SO3H. 2H₂O: C, 44,54; H, 5,84; N, 16,23, S, 7,43; Encontrado: C, 44,48; H, 5,76; N, 16,27, S, 7,60.

[00141] Os seguintes compostos foram sintetizados de procedimentos similares de preparação do composto 7, usando as aminas correspondentes apropriadas.

Preparação de 8-(4-fenil-piperazina-l-ilmetil)-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 8.

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62/111 [00142] Sintetizado pelo uso de 1-fenilpiperazina para Procedimento Geral D. 52% de rendimento global para os últimos dois passos. MS (ES+): 361; Ή NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 2,65-2,68 (m, 4H), 3,19-3,22 (m, 4H) 3,39 (s, 2H); 6,78 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 6,95 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,19 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 7,48-7,51 (m, 1H), 7,62-7,64 (d, J = 7,2 Hz, 1H),

7,75 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 11,23 (s, br, 1H), 11,78 (s, 1H); Anal. Calculado para C2oH2oNõOr2,0 H2O: C, 60,59; H, 6,10; N, 21,20; Encontrado: C, 60,48; H, 6,05; N, 21,35.

Preparação de 8-(4-benzil-piperidina-l-ilmetil)-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 9.

[00143] Sintetizado pelo uso de 1-benzilpiperazina para Procedimento Geral D. 20% de rendimento global para os últimos dois passos. MS (ES-): 372; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 1,22 - 1,50 (m, 5H), 2,45 2,55 (m, 4H), 2,85 (d, 2H), 3,28 (s, 2H), 7,14 - 7,19 (m, 3H), 7,25 - 7,30 (m, 2H), 7,50 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,75 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 11,25 (s, br, 1H), 11,76 (s, 1H); Anal. Calculado para C22H23N5O1: C, 70,76; H, 6,21; N, 18,75; Encontrado: C, 70,36; H, 6,18; N, 18,63.

Preparação de 8-fenoximetil-2,9-dihidro-1,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3ona, 10.

[00144] Sintetizado pelo uso de fenol para Procedimento Geral D. 60% de rendimento global para os últimos dois passos. MS (ES+): 293; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 4,90 (s, br, 3H), 7,00 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,34 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,76 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 11,20 (s, br, 1H), 11,80 (s, 1H). Anal. Calculado para Ci₆Hi₂N₄O₂O,75 H₂O · 0,25 N₂H_4: C, 61,24; H, 4,66; N, 20,08; Encontrado: C, 61,06; H, 4,27; N, 20,13.

Preparação de 8-[4-(4-flúor-fenil)-3,6-dihidro-2H-piridina-l-ilmetil]-2,9Petição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 64/116

63/111 dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 11.

[00145] Sintetizado pelo uso de hidrocloreto de 4-(4-fluorfenil)-1,2,3,6tetra-hidropiridina para Procedimento Geral D. 24% de rendimento global para os últimos dois passos. MS (ES+): 376; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-dõ): 2,51 - 2,53 (s, br, 2H), 2,77 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,24 (s, br, 2H), 3,46 (s, 2H), 6,16 (m, 1H), 7,16 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 7,46 -.7,52 (m, 3H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 11,18 (s, br, 1H), 11,79 (s, 1H). Um sal de mesilato de 11 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, DMSO-cZõ): 2,34 (s, 3H), 2,84 (bs, 2H), 3,66 (m, 2H), 4,11 (m, 2H), 4,36 (s, 2H), 6,21 (m, 1H), 7,25 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,56 - 7,59 (m, 2H), 7,72 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 11,25 (s, br, 1H), 11,76 (s, 1H). Anal. Calculado para C21H18FN5O1· 1,0 CH3SOH. 0,2 H₂O: C, 55,62; H, 4,75; N, 14,74; S, 6,75; Encontrado: C, 55,65; H, 4,71; N, 14,73; S, 6,74.

Preparação de 8-[4-(4-cloro-fenil)-piperazina-l-ilmetil]-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 12.

[00146] Sintetizado pelo uso de l-(4-clorofenil)-piperazina para Procedimento Geral D. 23% de rendimento global para as últimas duas etapas. Um sal de mesilato de 12 foi preparado. MS (ES+): 396; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-dõ): 2,33 (s, 3H), 4,31 (s, 2H), 7,03 (d, J = 9,3 Hz, 2H),

7,31 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 11,23 (s, br, 1H), 11,90 (s, 1H). Anal. Calculado para C20H19CIN0O1. 1.0 CH3SOH: C, 51,37; H, 4,72; N, 17,12; S, 6,53; Encontrado: C, 51,27; H, 4,91; N, 17,03; S, 6,48.

Preparação de 8-(4-fenil-3,6-dihidro-2H-piridina-l-ilmetil)-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 13.

[00147] Sintetizado pelo uso de 4-fenil-l,2,3,6-tetrahidro-piridina para Procedimento Geral D. 80% de rendimento global para os últimos dois

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64/111 passos. MS (ES+): 358; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-cfe); 2,56 (m, 2H), 2,78 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,25 (d, J = 2,6 Hz, 2H), 3,47 (s, 2H), 6,19 (s, 1H), 7,23 - 7,27 (m, 1H), 7,24 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,45 (d, J= 7,1 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,75 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 11,27 (s, br, 1H), 11,78 (s, 1H). Um sal de mesilato de 13 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,34 (s, 3H), 2,84 - 2,88 (m, 2H), 3,65 - 3,69 (m, 2H), 4,13 (s, 2H), 4,37 (s, 2H), 6,21 - 6,25 (m, 1H),

7,32 - 7,44 (m, 4H), 7,53 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,72 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,82 (t, J= 8,1 Hz, 1H), 11,30 (s, br, 1H), 11,93 (s, 1H). Anal. Calculado para C21H19N50.1.0 CH3SOH. 0,4 H₂O: C, 57,35; H, 5,21; N, 15,20; S, 6,96; Encontrado: C, 57,30; H, 5,16; N, 15,29; S, 7,10;

Preparação de 8-[(3,4-dicloro-benzilamino)-metil]-2,9-dihidro-l,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 14.

[00148] Sintetizado pelo uso de 3,4-diclorobenzilamina para Procedimento Geral D. 10% de rendimento global para os últimos dois passos. Um sal de mesilato de 14 foi preparado. MS (ES+): 375; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-dõ): 2,33 (s, 3H), 4,06 (s, 2H), 7,39 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,53 - 7.57 (m, 1H), 7,69 - 7,88 (m, 4H), 11,31 (s, br, 1H), 11,91 (s, 1H).

Preparação de 8-fl2-(3-flúor-fenil)-etilamino]-metil|-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 15.

[00149] Sintetizado pelo uso de 3-fluorfenetilamina para Procedimento Geral D. 12% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 15 foi preparado. MS (ES+): 338; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-dõ): 2,34 (s, 3H), 3,02 - 3,08 (m, 2H), 3,34 - 3,38 (m, 2H), 4,14 (s, 2H), 7,08 - 7,18 (m, 3H), 7,37 - 7,44 (m, 2H), 7,71 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 11,92 11,35 (s, br, 1H), (s, 1H).

Preparação de 8-[(3-trifluormetil-benzilamino)-metil]-2,9-dihidroPetição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 66/116

65/111 l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 16.

[00150] Sintetizado pelo uso de 3-(trifluormetil)benzilamina para Procedimento Geral D. 14% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 16 foi preparado. MS (ES+): 374; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-dõ): 2,33 (s, 3H), 4,10 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 7,39 (d, J =

7,6 Hz, 1H), 7,69 - 7,86 (m, 5H), 7,99 (s, 1H), 11,25 (s, br, 1H), 11,91 (s, 1H). Anal. Calculado para C19H18F3N5O· 1.0 CH₃SOH.1,0 H₂O: C, 46,82; H, 4,14; N, 14,37; S, 6,58; Encontrado: C, 46,81; H, 4,17; N, 14,64; S, 6,35.

Preparação de 8-(l,4-dioxa-8-aza-spiro[4,5]dec-8-ilmetil)-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 17 [00151] Sintetizado pelo uso de etileno cetal de 4-piperidona para Procedimento Geral D. 10% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 370; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 1,69 - 1,71 (m, 4H), 2,57 (s, br, 4H), 3,35 (s, 2H), 3,87 (s, 4H), 7,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H),

7,62 (d, J = Ί,Ί Hz, 1H), 7,74 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 11,23 (s, br, 1H), 11,76 (s, 1H). Anal. Calculado para C17H19N5O3 · 0,2 H₂O: C, 59,19; H, 5,67; N, 20,30; Encontrado: C, 59,03; H, 5,60; N, 20,63.

Preparação de 8-fl2-(3,4-dicloro-fenil)-etilamino]-metil|-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 18.

[00152] Sintetizado pelo uso de 3,4-diclorofenetilamina para Procedimento Geral D. 17% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 18 foi preparado. MS (ES-): 387; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-dõ): 2,36 (s, 3H), 3,04 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 3,37 (t, J =

8,1 Hz, 2H), 4,14 (s, 2H), 7,30 - 7,43 (m, 2H), 7,61 - 7,75 (m, 3H), 7,79 -7,84 (m, 1H), 11,31 (s, br, 1H), 11,91 (s, 1H).

Preparação de 8-f[2-(3-trifluormetil-fenil)-etilamino1-metil|-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 19.

Petição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 67/116

66/111 [00153] Sintetizado pelo uso de 2-(3-trifluormetil-fenil)-etilamina para Procedimento Geral D. 39% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 19 foi preparado. MS (ES-): 387; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-dõ): 3,74 (s, 3H), 3,13 (t, J= 8,1 Hz, 2H), 3,30 (t, J =

8,2 Hz, 2H), 4,15 (s, 2H), 7,40 - 7,43 (m, 1H), 7,62 - 7,72 (m, 4H), 7,79 - 7,85 (m, 1H), 11,35 (s, br, 1H), 11,92 (s, 1H).

Preparação de 8-[(l-aza-biciclo[2.2.2]oct-3-ilamino)-metil]-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 20.

[00154] Sintetizado pelo uso de (S)-(-)-3-aminoquinuclidina para Procedimento Geral D. 23% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 20 foi preparado. MS (ES+): 325; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-dõ): 1,97 - 2,03 (m, 3H), 2,20 - 2,35 (m, 1H), 2,35 -

2,44 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 3,72 - 3,80 (m, 6H), 4,15 - 4,21 (m, 1H), 4,38 (s, 2H), 7,46 (d, J = 7,6, 1H) 7,69 - 7,72 (m, 1H), 7,78 - 7,84 (m, 1H),

8,63 (s, br, 3H).

Preparação de 8-(4-etíl-píperazína-l-ílmetíl)-2,9-díhídro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 21.

[00155] Sintetizado pelo uso de etilpiperazina para Procedimento Geral D. 35% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 21 foi preparado. MS (ES+): 313, ^XH NMR (300 MHz, DMSOd6): 1,25, (t, J = 7,4 Hz, 3H), 2,41 (s, 6H), 2,51 - 3,87 (m, 10H), 3,87 (s, 2H), 7,70 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,91 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 9,82 (s, 1H), 11,96 (s, 1H). ¹³C NMR (DMSO-d6): 157.40,155.99, 140,65, 135,96, 133,84, 126,72, 119,71, 118,65, 115,85, 56,09, 50,30, 49,05, 48,55, 8,51. Anal. Calculado para CiõH₂oNõO-2,0 CH3SO3H. 1,2 H2O·: C, 40,84; H, 5,43; N, 15,79; Encontrado: C, 41,09; H, 5,82; N, 15,97.

Preparação de 8-(4-metil-piperazina-l-ilmetil)-2,9-dihidro-1,2,7,9Petição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 68/116

67/111 tetraaza-fenaleno-3-ona, 22.

[00156] Sintetizado pelo uso de metilpiperazina para Procedimento Geral D. 29% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 22 foi preparado. MS (ES+): 299; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-dõ): 2,38 (s, 3H), 2,58 - 2,63 (m, 2H), 3,09 - 3,18 (m, 4H), 3,40 -

3,45 (m, 2H), 3,51 (s, 2H), 7,50 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,79 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 9,53 (s, br, 1H), 11,85 (s, 1H). Anal. Calculado para CisHisNõO· 1,15 CH3SO3H. 1,0 H₂O·: C, 45,44; H, 5,81; N, 19,69; S, 8,64; Encontrado: C, 45,18; H, 5,88; N, 19,83; S, 8,68;

Preparação de 8-(4-benzil-[l,4]diazepan-l-ilmetil)-2,9-dihidro-l,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 23.

[00157] Sintetizado pelo uso de l-benzil-[l,4]diazepano para Procedimento Geral D. 24% de rendimento global para os dois últimos passos. MP: 140 - 142 °C; MS (ES-): 387; ^XH NMR (400 MHz, CDCI3): 1,88 (m, 2H), 2,77 (m, 4H), 2,89 (m, 4H), 3,62 (s, 2H), 3,69 (s, 2H), 7,20 - 7,42 (m, 6H), 7,45 (s, br, 1H), 7,74 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 11,50 (s, br, 1H); Anal. Calculado para C22H24N0O· 1,35 Η₂Ο·: C, 64,01; H, 6,52; N, 20,36; Encontrado: C, 64,18; H, 6,59; N, 20,46.

[00158] Um sal de HC1 de 23 foi preparado: a uma solução de 23 (0,5

g) em 20 mL de dioxano foi borbulhado gás HC1 por 30 minutos. A solução foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após a filtragem, o precipitado foi lavado com dioxano para fornecer 0,25g (48%) de sólido quase branco analiticamente puro, um sal de HC1 de 23. ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 2,08 (m, 2H), 3,36 (m, 4H), 3,56 (m, 4H), 4,04 (s, 2H), 7,02 (d, 1H), 7,20 - 7,35 (m, 5H); 7,36 (d, 1H), 7,45 (t, 1H); Anal. Calculado para C22H24N0O· 2,0 HC1. 1,15 H₂O·: C, 54,81; H, 5,92; N, 17,43; Encontrado: C, 54,81; H, 5,92; N, 17,36.

Preparação de ácido 4-(3-oxo-2,9-dihidro-3H-1,2,7,9-tetraaza-fenaleno8-ilmetil)-[l,4]diazepano-l-carboxílico tert-butil éster, 24.

Petição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 69/116

68/111 [00159] Sintetizado pelo uso de ácido [l,4]diazepano-l-carboxílico tbutil éster para Procedimento Geral D. 30% de rendimento global para os dois últimos passos. MP: 219-221 °C; MS (ES-): 397; ^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): 1,46 (s, 9H); 1,88 (m, 2H); 2,83 (m, 4H); 3,50 (m, 4H); 3,59 (s, 2H); 7,63 (m, 1H); 7,72 - 7,86 (m, 3H), 11,90 (s, br, 1H). Anal. Calculado para C20H20N0O3. 0,5 H2O·: C, 58,95; H, 6,68; N, 20,62; Encontrado: C, 58,83; H, 6,69; N, 20,60.

Preparação de 8-[4-(4-flúor-benzil)-[l,4]diazepan-l-ilmetil]-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 25.

[00160] Sintetizado pelo uso de l-(4-flúor-benzil)-[l,4]diazepano para Procedimento Geral D. 35% de rendimento global para os dois últimos passos. MP: 163 - 165 °C; MS (ES-): 405; ^XH NMR (400 MHz, CDCI3): 1,87 (m, 2H), 2,72 (m, 4H), 2,88 (m, 4H), 3,63 (s, 2H), 3,65 (s, 2H), 6,99 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 7,30 (m, 3H) 7,61 (s, br, 1H), 7,78 (m, 1H); 7,93 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 10,82 (s, br, 1H). Anal. Calculado para C22H23N0O. 1,5 H2O·: C, 60,96; H, 6,05; N, 19,39; Encontrado: C, 61,07; H, 5,97; N, 19,59.

[00161] Um sal de mesilato de 25 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 2,06 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 3,06 (m, 2H), 3,24 (m, 2H), 3,46 (m, 4H), 3,65 (s, 4H), 3,74 (s, 2H), 4,33 (s, 2H), 7,25 (m, 3H), 7,46 (m, 3H), 7,62 (t, J = 8,4 Hz, 1H). Anal. Calculado para C22H23FN0O· 1,3 CH3SO3H. 0,5 C4H8O2. 2,0 H2O·: C, 49,70; H, 5,97; N, 13,74; S, 6,82; Encontrado: C, 49,40; H, 5,97; N, 13,37; S, 6,65.

Preparação de 8-[l,4]diazepan-l-ilmetil-2,9-dihidro-1,2,7,9-tetraazafenaleno-3-ona, 26.

[00162] Sintetizado do composto 24. A uma solução de 24 (1,5 g, 3,7 mmol) em 30 mL de CH2CI2 foi adicionado 6 mL de TFA, ao mesmo tempo em que se agita em temperatura ambiente. Após 30 minutos, os solventes foram evaporados e o resíduo foi lavado com acetonitrila para

Petição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 70/116

69/111 fornecer 1,0 g (90%) de sólido branco analiticamente puro. MP: 147 149 °C; MS (ES-): 297; ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 1,96 (m, 2H), 2,82 (t, 2H), 3,01 (t, 2H), 3,28 (t, 4H), 3,53 (s, 2H), 7,22 (d, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,61 (t, 1H). Anal. Calculado para CisHisNõO· 1,1 CF₃CO₂H. 1,0 H₂O·: C, 46,76; H, 4,81; N, 19,02; Encontrado: C, 46,64; H, 4,98; N, 19,02.

Preparação de 8-[4-(2-trifluormetil-benzoil)-[l,4]diazepan-l-ilmetil]-2,9dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 27.

[00163] Sintetizado do composto 26. A uma solução do composto 26 (0,2 g, 0,6 mmol) em 5 mL de Ch₂Cl₂ foi adicionado 1 mmol de TEA e 0,8 mmol de cloreto de 2-trifluormetil-benzoíla. A reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Após os solventes serem evaporados, o resíduo foi purificado com HPLC semipreparativo para fornecer um sólido (15% de rendimento). MP: 140 - 142 °C; MS (ES-): 469; ^XH NMR (400 MHz, CDCI3): 1,92 - 2,10 (m, 2H), 2,91 - 3,10 (m, 4H), 3,36 - 3,44 (m, 2H), 3,64 - 3,74 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 7,57 (m, 3H), 7,79 (m, 2H), 7,93 (m, 1H). Anal. Calculado para C₂3H₂iF₃NõO₂· 0,9 HC1: C, 54,89; H, 4,39; N, 16,70; Encontrado: C, 54,93; H, 4,43; N, 16,34.

Preparação de 8-[4-(3-cloro-benzoil)-[l,4]diazepan-l-ilmetil]-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 28.

[00164] Sintetizado do composto 26. A uma solução de composto 26 (0,2g, 0,6 mmol) em 5 mL de CH₂C1₂ foi adicionado 1 mmol de TEA e 0,8 mmol de cloreto de 3-cloro-benzoíla. A reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Após os solventes serem evaporados, o resíduo foi purificado com HPLC semipreparativo para fornecer um sólido (16% de rendimento). MP: 147 - 149 °C; MS (ES-): 436; ^XH NMR (400 MHz, CDCI3): 1,88 - 2,08 (m, 2H), 2,86 - 3,07 (m, 4H), 3,52 - 3,71 (m, 4H), 3,81 - 3,89 (m, 2H), 7,33 - 7,43 (m, 4H), 7,62 (d, 1H), 7,81 (t, 1H), 7,90 (t, 1H). Anal. Calculado para C₂₂H₂iC1N_õO₂· 0,7 H₂O: C, 54,89;

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70/111

Η, 4,39; Ν, 16,70; Encontrado: C, 54,93; Η, 4,43; Ν, 16,34.

Preparação de 8-(4-piridina-2-il-piperazina-l-ílmetíl)-2,9-díhídro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 30.

[00165] Sintetizado pelo uso de l-piridina-2-il-piperazina para Procedimento Geral D. 20% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 30 foi preparado. MS (ES-): 360; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-dõ): 2,37 (s, 6H), 3,52 (s, br, 4H), 3,93 (s, br, 4H), 4,30 (s, 2H), 6,93 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,82 - 7,91 (m, 2H), 8,16 - 8,18 (m, 1H), 11,96 (s, 1H). Anal. Calculado para C19H19N7O. 1,9 CH3SO3H. 1,2 H₂O·: C, 44,38; H, 5,17; N, 17,33; S, 10,77; Encontrado: C, 44,21; H, 5,19; N, 17,28; S, 10,68.

Preparação de 8-fl2-(2-flúor-fenil)-etilamin]-metil|-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 31.

[00166] Sintetizado pelo uso de 2-(2-flúor-fenil)-etilamina para Procedimento Geral D. 20% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 31 foi preparado. MS (ES-): 336; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-dõ): 2,41 (s, 5H), 3,02 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 3,32 (t, J =

8,3 Hz, 2H), 4,16 (s, 2H), 7,19 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 7,32 - 7,35 (m, 2H),

7,42 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,82 (t, J= 8,1 Hz, 1H), 9,10 (s, br, 1H), 11,92 (s, 1H). Anal. Calculado para CisHiõFNsO .

1,75 CH3SO3H. 0,75 H₂O: C, 45,70; H, 4,76; N, 13,49; S, 10,81; Encontrado: C, 45,45; H, 4,69; N, 13,42; S, 11,10.

Preparação de 8-[4-(4-flúor-fenil)-piperazina-l-ilmetil]-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 32.

[00167] Sintetizado pelo uso de 4-(4-flúor-fenil)-piperazina para Procedimento Geral D. 57% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 32 foi preparado. MS (ES-): 377; ^XH NMR

Petição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 72/116

71/111 (400 MHz, DMSO-cfe): 2,40 (s, 5H), 3,45 (s, br, 4H), 3,59 (s, br, 4H), 4,37 (s, 2H), 7,03 - 7,15 (m, 4H), 7,44 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,83 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 9,8 (s, br, 1H), 11,94 (s, 1H). Anal. Calculado para C20H19FN0O . 1,65 CH3SO3H: C, 46,85; H, 5,01; N, 15,14; S, 9,53; Encontrado: C, 46,74; H, 5,15; N, 15,14; S, 9,53.

Preparação de 8-fl2-(4-flúor-fenil)-etilamino]-metil|-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 33.

[00168] Sintetizado pelo uso de 2-(4-flúor-fenil)-etilamina para Procedimento Geral D. 19% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de mesilato de 33 foi preparado. MS (ES-): 336; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-dõ): 2,38 (s, 6H), 3,06 - 3,10 (m, 2H), 3,30 - 3,34 (m, 2H), 4,18 (s, 2H), 7,19 - 7,22 (m, 2H), 7,34 - 7,42 (m, 3H), 7,71 (d, J =

8,6 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 9,6 (s, br, 1H), 11,92 (s, 1H). Anal. Calculado para CisHiõFNsO. 2,0 CH3SO3H: C, 45,36; H, 4,57; N, 13,22; S, 12,11; Encontrado: C, 45,34; H, 4,58; N, 13,16; S, 11,88.

Preparação de 8-(4-acetíl-[l,4]díazepan-l-ílmetíl)-2,9-díhídro-l,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 34.

[00169] Sintetizado pelo uso de [l,4]diazepano-l-il-etanona para Procedimento Geral D. 16% de rendimento global para os dois últimos passos. MP: 191 - 193 °C; MS (ES-): 339; ^XH NMR (400 MHz, CDCI3): 2,11 (s, 3H), 2,84 - 2,93 (m, 4H), 3,56 - 3,76 (m, 6H), 7,66 (m, 1H), 7,83 - 7,92 (m, 2H), 9,3 (s, br, 1H), 11,3 (s, br, 1H). Anal. Calculado para C17H20N0O2. 0,6 H₂O: C, 58,14; H, 6,08; N, 23,93; Encontrado: C, 58,09; H, 6,18; N, 24,08.

Preparação de 8-(fenetílamíno-metíl)-2,9-díhídro-1,2,7,9-tetraazafenaleno-3-ona, 35.

[00170] Sintetizado pelo uso de fenetilamina para Procedimento Geral D. 29% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de

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72/111 mesilato de 35 foi preparado. MS (ES-): 358; Ή NMR (400 MHz, DMSOd₆): 2,32 (s, 3H), 3,00 - 3,04 (m, 2H), 3,31 - 3,36 (m, 2H), 4,15 (s, 1H), 7,37 - 7,42 (m, 6H), 7,71 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,8 Hz, 1H),

9,70 (s, br, 1H), 11,92 (s, 1H). Anal. Calculado para C18H17N5O. 1,0 CH3SO3H. 1,8 H₂O: C, 50,95; H, 5,54; N, 15,64; S, 7,16; Encontrado: C, 50,95; H, 5,54; N, 15,64; S, 7,16.

Preparação de 8-(4-feníl-píperídína-l-ílmetíl)-2,9-díhídro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 36.

[00171] Sintetizado pelo uso de 4-fenil-piperidina para Procedimento Geral D. 33% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 318; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 1,87 - 1,93 (m, 4H), 2,37 -

2,46 (m, 2H), 2,56 (m, 1H), 3,10 - 3,14 (m, 2H), 3,54 (s, 2H), 7,17 - 7,34 (m, 5H), 7,56 (bs, 1H), 7,76 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 11,10 (s, br, 1H), 11,76 (s, 1H). Um sal de mesilato de 36 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 2,08 (m, 4H), 2,95 (m, 1H), 3,34 (m, 2H), 3,84 (m, 2H), 4,23 (s, 2H), 7,21 - 7,39 (m, 6H), 7,59 (m, 1H), 7,70 (m, 1H). Anal. Calculado para C21H21N5O. 1,3 CH3SO3H. 0,5 H₂O: C, 54,29; H, 5,56; N, 14,19; S, 8,45; Encontrado: C, 54,03; H, 5,65; N, 13,98; S, 8,64.

Preparação de 8-(l,3-díhídro-ísoíndol-2-ílmetíl)-2,9-díhídro-l,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 37.

[00172] Sintetizado pelo uso de isoindolina para Procedimento Geral D. 40% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 316; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3,77 (s, 2H), 4,04 (s, 4H), 7,20 7,30 (m, 4H), 7,49 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,6 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,74 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 11,34 (s, br, 1H), 11,78 (s, 1H). Um sal de mesilato de 37 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2,34 (s, 3H), 4,64 (s, 2H), 4,87 (s, 4H), 7,39 - 7,46 (m, 5H), 7,72 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,83 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 11,30 (s, br, 1H), 11,95 (s, 1H). Anal. Calculado para

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Ci₈Hi₅N₅O. 1,25 CH3SO3H. 2,0 H₂O: C, 48,83; H, 5,11; N, 14,79; S, 8,46; Encontrado: C, 48,80; H, 5,11; N, 14,97; S, 8,71.

Preparação de 8-(4-benzenosulfonil-[l,4]diazepan-l-ilmetil)-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 38.

[00173] Sintetizado do composto 26. A uma solução de composto 26 (0,2 g, 0,67 mmol) em 5 mL de CH2CI2 foi adicionado TEA (2 mmol) e cloreto de benzenosulfonila (1 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após os solventes serem evaporados, o resíduo foi derramado em 10 mL de H₂O e o produto foi purificado com HPLC preparativo para fornecer um sólido branco analiticamente puro (5% de rendimento). MP: 265 - 268 °C; MS (ES-): 437; Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 1,79 (m, 2H), 2,50 (m, 4H), 2,79 (m, 4H), 3,51 (s, 2H), 7,44 (d, 1H), 7,62 - 7,79 (m, 7H), 11,1 (s, br, 1H),

11,75 (s, 1H). Anal. Calculado para C21H22N0O3S. 0,5 H₂O: C, 56,36; H, 5,18; N, 18,78; S, 7,17; Encontrado: C, 56,44; H, 5,12; N, 19,00; S, 7,19.

[00174] Um sal de mesilato de 18 foi preparado. MS (ES+): 439; ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 2,18 (m, 2H), 2,35 (s, 6H), 3,36 (m, 2H), 3,65 (m, 6H), 4,3 (s, 2H), 7,24 (d, 1H), 7,51 - 7,71 (m, 7H). Anal. Calculado para C21H22N0O3S. 1,8 CH3SO3H. 1,0 H₂O: C, 43,50; H, 5,00; N, 13,35; S, 14,26; Encontrado: C, 43,61; H, 5,00; N, 13,15; S, 14,59.

Preparação de 8-(4-piridina-4-il-piperazina-l-ilmetil)-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 39.

[00175] Sintetizado pelo uso de l-(4-piridil)piperazina para Procedimento Geral D. 10% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 360; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,80 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,61 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,99 (s, 2H), 6,83 (d, J= 7,1 Hz, 2H),

7,42 - 7,45 (m, 1H), 7,73 - 7,81 (m, 2H), 8,26 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 11,20 (s, br, 1H), 11,90 (s, 1H). Um sal de HC1 de 39 foi preparado. ^XH NMR

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74/111 (400 MHz, D₂O): 2,74 - 2,77 (m, 4H), 3,43 (s, 2H), 3,35 - 3,69 (m, 4H),

6,93 (d, J= 7,1 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,58 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,92 (d, J= 7,1 Hz, 2H). Anal. Calculado para C19H19N7O 1,0 HC1. 2,5 H₂O: C, 51,53; H, 5,69; N, 22,14; Encontrado: C, 51,46; H, 5,69; N, 21,90; Cl, 8,27.

Preparação de 8-(4-benzil-piperazina-l-ilmetil)-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 40.

[00176] Sintetizado pelo uso de 4-benzil-piperazina para Procedimento Geral D. 12% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 373; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2,44 (s, br 4H), 3,35 (s, br, 4H), 3,48 (s, 2H), 7,23 - 7,34 (m, 5H), 7,49 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,74 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 11,10 (s, br, 1H), 11,77 (s, 1H). Um sal de HC1 de 40 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, D2O): 2,54 -

2,70 (m, 2H), 3,10 - 3,50 (m, 6H), 3,48 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 7,20 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,47 - 7,51 (m, 5H), 7,62 (t, J = 8,1 Hz, 1H). Anal. Calculado para C₂iH₂₂N_õO · 1,0 HC1. 2,5 H₂O: C, 55,32; H, 6,19; N, 18,43; Encontrado: C, 55,54; H, 6,08; N, 18,32.

Preparação de 8-(4-metil-[l,4]diazepan-l-ilmetil)-2,9-dihidro-l,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 41.

[00177] Sintetizado pelo uso de l-metil-[l,4]diazepano para Procedimento Geral D. 24% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 311; ^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆): 1,75 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,55 (m, 4H), 2,79 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 7,52 (d, J = 8,2 Hz, 1H),

7,64 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,75 (t, J= 8,1 Hz, 1H), 11,55 (s, 1H). Anal. Calculado para CiõH₂₀NõO. 0,95 H₂O: C, 58,33; H, 6,70; N, 25,51; Encontrado: C, 58,32; H, 6,65; N, 25,53.

Preparação de 8-[4-(lH-indol-3-il)-piperidin-l-ilmetil]-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 42.

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75/111 [00178] Sintetizado pelo uso de 3-piperidin-4-il-lH-indole para Procedimento Geral D. 19% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 397; Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 1,83 - 1,94 (m, 4H), 2,31 (m, 2H), 2,50 (s, 2H), 2,79 - 2,99 (m, 3H), 6,96 - 7,09 (m, 3H),

7,32 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,54 - 7,63 (m, 3H), 7,75 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 10,79 (s, 1H), 11,80 (s, 1H). Um sal de mesilato de 42 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,15 (m, 4H), 2,32 (s, 3H), 3,11 (m, 1H), 3,52 (m, 2H), 3,73 (m, 2H), 4,29 (s, 2H), 7,10 - 7,18 (m, 3H), 7,36 (d, 1H); 7,46 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,69 - 7,83 (m, 3H), 10,91 (s, 1H), 11,93 (s, 1H). Anal. Calculado para C23H22N0O. 1,0 CH3SO3H. 1,25 H₂O: C, 55,23; H, 5,62; N, 16,91; S, 6,14; Encontrado: C, 55,27; H, 5,53; N, 16,95; S, 6,00.

Preparação de 8-[(2-piridina-4-il-etilamino)-metil]-2,9-dihidro-1,2,7,9tetraaza-fenaleno-3-ona, 43.

[00179] Sintetizado pelo uso de 4-etilamino-piridina para Procedimento Geral D. 10% de rendimento global para os dois últimos passos. Um sal de HC1 de 43 foi preparado. MS (ES-): 319; ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 3,28 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 3,53 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 4,09 (s, 2H), 7,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 8,52 (d, J = 5,3 Hz, 2H). Anal. Calculado para C17H10N0O. 1,3 HC1. 2,6 H₂O. 0,1 N₂H₄: C, 47,52; H, 5,38; N, 20,27; Encontrado: C, 47,12; H, 5,26; N, 20,67.

Preparação de 8-(3,4-dihidro-lH-isoquinolina-2-ilmetil)-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 44.

[00180] Sintetizado pelo uso de 1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolina para Procedimento Geral D. 30% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 330; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,81 - 2,90 (m, 4H); 3,52 (s, 2H), 3,72 (s, 2H), 7,05 - 7,25 (m, 4H), 7,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,74 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 11,30 (s, br, 1H),

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11,91 (s, 1H). Anal. Calculado para C19H17N5O: C, 68,87; H, 5,17; N, 21,13; Encontrado: C, 68,34; H, 5,19; N, 21,30.

[00181] Um sal de mesilato de 44 foi preparado. MS (ES-): 330; ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 2,80 (s, 3H), 3,31 (t, 2H), 3,85 (m, 2H), 4,47 (s, 2H), 4,68 (s, 2H), 7,23 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,28 - 7,42 (m, 4H), 7,67 (d, J = 8,0 Hz, 1H); 7,80 (t, J = 7,9 Hz, 1H). Anal. Calculado para C19H17N5O. 1,12 CH3SO3H. 2,0 H₂O: C, 50,87; H, 5,41; N, 14,74; S, 7,56; Encontrado: C, 50,89; H, 5,47; N, 14,84; S, 7,63.

Preparação de 8-(5,6-dímetóxí-3,4-díhídro- lH-ísoquínolína-2-ílmetil)-

2,9-díhídro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 45.

[00182] Sintetizado pelo uso de 5,6-dimetóxi-l,2,3,4-tetrahidroisoquino-lina para Procedimento Geral D. 29% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 311; ^XH NMR (400 MHz, DMSOd₆): 2,79 (s, 4H), 3,49 (s, 2H), 3,61 (s, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 6,69 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,74 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 11,55 (s, 1H). Anal. Calculado para C21H21N5O3: C, 64,44; H, 5,41; N, 17,89; Encontrado: C, 64,24; H, 5,43; N, 17,98.

[00183] Um sal de mesilato de 45 foi preparado. MS (ES-): 330; ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 2,82 (s, 3H), 3,21 (t, 2H), 3,65 - 3,85 (m, 8H), 4,48 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 6,75 (s, 1H), 6,83 s, 1H), 7,38 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,82 (t, 1H). Anal. Calculado para C21H21N5O3. 1,18 CH3SO3H. 1,75 H₂O: C, 49,70; H, 5,49; N, 13,07; S, 7,03; Encontrado: C, 49,77; H, 5,49; N, 13,17; S, 7,03.

Preparação de 8-[4-(3-trífluormetil-benzenosulfonil)-[l,4]diazepan-lílmetíl]-2,9-díhídro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 46.

[00184] Sintetizado do composto 26. A uma solução de composto 26 (0,2g, 0,67 mmol) em 5 mL de CH2CI2 foi adicionado TEA (2 mmol) e cloreto de 3-trifluormetil-benzenosulfoni (1 mmol). A mistura foi agitada

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77/111 em temperatura ambiente durante a noite. Após os solventes serem evaporados, o resíduo foi derramado em 10 mL de H2O e o produto foi purificado com HPLC preparativo para fornecer um sólido branco analiticamente puro (15% de rendimento). MS (ES+): 507; Ή NMR (400 MHz, DMSO-dõ): 1,82 (m, 2H), 2,73 - 2,81 (m, 4H), 3,25 - 3,42 (m, 6H), 7,44 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,74 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,89 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 8,04 - 8,13 (m, 3H), 11,10 (s, br, 1H),

11,75 (s, 1H). Anal. Calculado para C22H21F3N0O3S. 1,1 H₂O: C, 50,21; H, 4,44; N, 15,97; S, 6,09; Encontrado: C, 50,19; H, 4,54; N, 15,50; S, 5,97.

Esquema 2

4tíA ( l i1)

48B (m — 2)

A (n. - 1)

B (n - 2)

Procedimento Geral F: Preparação de compostos 47A e 47B:

[00185] Substituição do grupo cloro do composto 4 por piperazina ou [l,4]diazepano usando o Procediment Geral F fornece o composto 47A ou 47B. A uma solução agitando de 4 (1 eq) em acetonitrila foi adicionado piperazina ou [l,4]diazepano (grande excesso) sob um

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78/111 cobertor de nitrogênio. À solução foi permitido agitar-se durante a noite e depois evaporada até a aridez. O material cru foi purificado por meio de um plugue de sílica com 9:1 diclorometano: metanol para fornecer um sólido branco, ácido 4-oxo-2-piperazina-l-ilmetil-3,4-dihidroquinazolina-5-carboxílico metil éster, 47A ou ácido 2-[l,4]diazepan-lilmetil-4-oxo-3,4-dihidro-quinazolina-5-carboxílico metil éster, 47B.

Procedimento Geral G: Preparação de compostos 48A e 48B:

[00186] Uma reação de amina 47A ou 47B com vários cloretos de sulfonila produz sulfonil amida 48A ou 48B. A uma solução agitada de 47A ou 47B (1,0 eq) em piridina foram adicionados vários cloretos de sulfonila (1,1 eq). À reação foi permitido agitar-se durante a noite e depois foi evaporada até a aridez. O resíduo foi então extraído com diclorometano e lavado com salmoura. O produto foi evaporado até a aridez e usado sem posterior purificação.

Procedimento Geral E: Preparação de compostos 49A e 49B:

[00187] Um anel de 2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona pode ser formado por condensação do composto 48A ou 48B com hidrazina. A uma solução dos compostos 6 em etanol absoluto é adicionado excesso de hidrazina anidrosa em temperatura ambiente. A solução é refluída durante a noite e resfriada para temperatura ambiente. Ê adicionada água gelada e sólido branco é separado. O sólido é coletado por filtragem a vácuo e lavado com água e uma pequena quantidade de metanol para fornecer produtos sólidos brancos 6 em 40 - 90% de rendimento. Um exemplo foi dado na preparação de compostos 49A e 49B.

Exemplo 2

Preparação de 8-[4-(4-metóxi-benzenosulfonil)-piperazina-l-ilmetil]-2,9dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 50.

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79/111 [00188] A uma solução agitando de 4 (2,2 g, 8,73 mmol, 1 eq.) em 200 mL de acetonitrila foi adicionado piperazina (14 g, 0,162 mol, grande excesso) sob um cobertor de nitrogênio. À solução foi permitido agitarse durante a noite e depois evaporada até a aridez. O material cru foi purificado por meio de plugue de sílica com 9:1 diclorometano:metanol para fornecer 2,0 g de um sólido branco macio, ácido 4-oxo-2piperazina- l-ilmetil-3,4-dihidro-quinazolina-5-carboxílico metil éster, 47A. MS (ES-): 301; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,40 - 2,43 (m, 4H), 2,69 - 2,72 (m, 4H), 3,41 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 7,44 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,82 (t, J = 7,8 Hz, 1H).

[00189] A uma solução em agitação de 47A (170 mg, 0,56 mmol, 1 eq.) em 5 mL de piridina foi adicionado cloreto de 4-metoxibenzeno sulfonila (130 mg, 0,62 mmol, 1,1 eq), resultando em uma solução amarelo brilhante. À reação foi permitido agitar-se durante a noite e depois foi evaporada até a aridez. O resíduo ceroso foi então extraído com diclorometano e lavado com salmoura. O material cru foi dissolvido em 10 mL de EtOH e 5 mL de monohidrato de hidrazina (grande excesso). Esta solução foi refluída durante a noite, resultando em um precipitado branco pesado, que foi filtrado, lavado com éter etílico e seco para dar um sólido quase branco. Este sólido foi então purificado ia cromatografia para fornecer 112 mg de composto 50 analiticamente puro. Um sal de mesilato de 50 foi preparado. 8% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES+): 455; ^XH NMR (400 MHz, DMSOd₆): 2,34 (s, 3H), 3,19 (bs, 4H), 3,44 (bs, 4H), 3,89 (s, 3H), 4,20 (s, 2H), 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,72 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,70 - 7,83 (m, 4H), 11,20 (s, br, 1H), 11,93 (s, 1H). AnaL Calculado para C21H22N0O4S. 1,5 CH3SO3H. 3,0 H₂C.0,l N₂H₄: C, 41,20; H, 5,29; N, 13,24; S, 12,22; Encontrado: C, 41,07; H, 5,09; N, 13,53; S, 12,62.

[00190] Os compostos seguintes foram sintetizados de procedimentos similares de preparação do composto 50, usando o cloreto de sulfonila correspondente apropriado.

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Preparação de 8-[4-(3-flúor-benzenosulfonil)-piperazina-l-ilmetil]-2,9dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 51.

[00191] Sintetizado pelo uso de cloreto de 3-flúor-benzenosulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G: Um sal de mesilato de 51 foi preparado. 35% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 441; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,31 (s, 3H), 3,25 (bs, 4H), 3,39 (bs, 4H), 4,15 (s, 2H), 7,42 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,65 - 7,71 (m, 4H), 7,78 - 7,82 (m, 2H), 11,78 (s, 1H). Anal. Calculado para C20H19N0O3S.

I, 25 CH3SO3H. 2,4 H₂O: C, 42,43; H, 4,87; N, 13,87; s, 11,91; Encontrado: C, 42,13; H, 4,79; N, 13,48; S, 11,89.

Preparação de 8-[4-(tolueno-4-sulfonil)-piperazina-l-ilmetil1-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 52.

[00192] Sintetizado pelo uso de cloreto de tolueno-4-sulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de mesilato de 52 foi preparado. 38% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 438; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,36 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 3,20 (bs, 4H), 3,46 (bs, 4H), 4,22 (s, 2H), 7,43 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,68 - 7,81 (m, 4H), 11,90 (s, 1H). Anal. Calculado para C21H22N0O3S. 1,3 CH3SO3H. 4,0 H₂O: C, 42,25; H, 5,58; N, 13,22; S, 11,61; Encontrado: C, 42,63; H, 5,53; N, 13,40; S, 11,90.

Preparação de 8-(4-benzenosulfonil-piperazina-l-ilmetil)-2,9-dihidro- l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 53.

[00193] Sintetizado pelo uso de cloreto de benzenosulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de mesilato de 53 foi preparado. 30% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 438; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,70 (s, 3H), 3,36 (bs, 4H), 3,51 (bs, 4H), 4,14 (s, 2H), 7,11 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,40 - 7,70 (m, 7H),

II, 90 (s, 1H). Anal. Calculado para C20H20N0O3S. 1,2 CH3SO3H. 2,5

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Η₂0. 0,08 Ν₂Η₄: C, 43,36; Η, 5,17; Ν, 14,67; S, 12,01; Encontrado: C, 43,00; Η, 5,17; Ν, 15,05; S, 12,40.

Preparação de 8-[4-(3-trifluormetil-benzenosulfonil)-piperazina-1ílmetíl]-2,9-díhídro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 54.

[00194] Sintetizado pelo uso de cloreto de 3-triflúor-benzenosulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de mesilato de 54 foi preparado. 15% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 438; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,32 (s, 3H), 3,26 - 3,35 (m, 8H), 4,10 (s, 2H), 7,43 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 - 7,80 (m, 2H), 7,98 8,26 (m, 4H), 11,92 (s, 1H).

[00195] Anal. Calculado para C₂iHi9NõO₃S. 1,3 CH3SO3H. 2,0 H₂O: C, 40,99; H, 4,35; N, 12,86; S, 11,29; Encontrado: C, 40,71; H, 4,60; N, 12,68; S, 11,50.

Preparação de 8-[4-(4-cloro-benzenosulfonil)-piperazina-l-ilmetil]-2,9dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 55.

[00196] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-clorobenzenosulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de mesilato de 55 foi preparado. 15% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 458; Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 2,31 (s, 3H), 3,18 (bs, 4H), 3,40 (bs, 4H), 3,98 (s, 2H), 7,43 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,68 - 7,84 (m, 5H), 11,90 (s, 1H). Anal. Calculado para C₂oHi9ClNõ0₃S. 1,3 CH3SO3H. 2,0 H₂O: C, 41,27; H, 4,59; N, 13,56; S, 11,90; Encontrado: C, 41,07; H, 4,66; N, 13,30; S, 11,89.

Preparação de 8-[4-(4-flúor-benzenosulfonil)-piperazina-l-ilmetil]-2,9dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 56.

[00197] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-fluorbenzenosulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de HC1 de 56 foi preparado. 42% de rendimento global para os três últimos passos. MS

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82/111 (ES-): 441; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-cfe): 2,31 (s, 3H), 3,18 (bs, 4H), 3,49 (bs, 4H), 3,98 (s, 2H), 7,43 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,68 - 7,84 (m, 5H), 11,90 (s, 1H).

Preparação de 8-[4-(4-isopropil-benzenosulfonil)-piperazina- 1-ilmetil]-

2.9- díhídro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 57.

[00198] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-isopropilbenzenosulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de mesilato de 57 foi preparado. 22% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 465; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 1,26 (d, J = 6,8 Hz, 6H),

2,33 (s, 3H), 3,01 - 3,05 (m, 1H), 3,16 - 3,32 (m, 10H), 7,41 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,68 - 7,80 (m, 4H), 11,89 (s, 1H). Anal. Calculado para C23H20N0O3S. 1,35 CH3SO3H. 1,75 H₂O. 0,1 N₂H₄: C, 46,35; H, 5,64; N, 13,76; S, 11,94; Encontrado: C, 46,01; H, 5,62; N, 13,80; S, 12,33.

Preparação de 8-[4-(4-tert-butil-benzenosulfonil)-piperazina- 1-ilmetil]-

2.9- dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 58.

[00199] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-tertbutilbenzenosulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de mesilato de 58 foi preparado. 23% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 480; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 1,25 (s, 9H), 2,21 (s, 3H), 3,05 - 3,15 (m, 8H), 3,99 (bs, 2H), 7,32 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,59 - 7,72 (m, 6H), 11,81 (s, 1H). Anal. Calculado para C24H28N0O3S. 1,5 CH3SO3H. 2,75 H₂O: C, 45,42; H, 5,90; N, 12,46; S, 11,89; Encontrado: C, 45,23; H, 5,76; N, 12,84; S, 12,17.

Preparação de 8-[4-(4-isopropil-benzenosulfonil)-[ 1,4]diazepano-1ilmetil]-2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 59.

[00200] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-isopropilbenzenosulfonila e composto 47B para Procedimento Geral G. 22% de rendimento global

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83/111 para os dois últimos passos. MS (ES-): 479; ^XH NMR (400 MHz, DMSOd₆): 1,23 (d, 6H), 1,79 (m, 2H), 2,40 - 2,55 (m, 4H), 2,71 - 2,90 (m, 4H), 3,00 (m, 1H), 3,48 (s, 2H), 7,48 (m, 3H), 7,73 (m, 4H), 11,80 (s, 1H). Anal. Calculado para C₂4H₂₈ N0O3S: C, 59,98; H, 5,87; N, 17,49; S, 6,67; Encontrado: C, 60,02; H, 5,85; N, 17,55; S, 6,52.

Preparação de 8-[4-(4-cloro-benzenosulfonil)-[l,4]diazepano-l-ilmetil]-

2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 60.

[00201] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-cloro-benzenosulfonila e composto 47B para Procedimento Geral G. 8% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 472; ^XH NMR (400 MHz, DMSOd6): 1,80 (m, 2H), 2,73 - 2,78 (m, 4H), 3,50 (m, 4H), 3,69 (s, 2H), 7,45 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,71 - 7,83 (m, 6H), 10,95 (s, br, 1H), ll,76(s, 1H). Um sal de mesilato de 60 foi preparado. ^XH NMR (400 MHz, D2O): 1,92 (m, 2H), 2,73 (s, 5H), 3,50 - 3,77 (m, 8H), 4,36 (s, 2H), 7,49 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,75 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 7,78 - 7,93 (m, 4H). Anal. Calculado para C₂iH₂iC1NõO₃S. 1,61 CH3SO3H: C, 39,57; H, 4,99; N, 12,25; S, 12,20; Encontrado: C, 39,50; H, 5,29; N, 12,57; S, 12,47.

Preparação de 8-[4-(3-fluor-benzenosulfonil)-[l,4]diazepano-l-ilmetil]-

2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 61.

[00202] Sintetizado pelo uso de cloreto de 3-fluor-benzenosulfonila e composto 47B para Procedimento Geral G. 16% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES+): 457; 1H NMR (400 MHz, DMSOd6): 1,79 (m, 2H), 2,70 - 2,81 (m, 4H), 3,26 - 3,40 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 7,45 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 7,55 - 7,74 (m, 6H), 11,10 (s, br, 1H), 11,75 (s, 1H). Anal. Calculado para C21H21 FN6O3S. 1,15 H2O: C, 52,85; H, 4,92; N, 17,61; S, 6,72; Encontrado: C, 52,88; H, 4,93; N, 17,43; S, 6,48.

Preparação de 8-[4-(4-metóxi-benzenosulfonil)-[l,4]diazepano-l-ilmetil]Petição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 85/116

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2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 62.

[00203] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-metóxi-benzenosulfonila e composto 47B para Procedimento Geral G. 21% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES+): 469; 1H NMR (400 MHz, DMSOd6): 1,78 (m, 2H), 2,72 - 2,79 (m, 4H), 3,30 - 3,39 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 7,14 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 7,09 - 7,22 (m, 3H), 11,10 (s, br, 1H), 11,80 (s, 1H). Anal. Calculado para C22H24N6O4S. 1,0 H2O: C, 54,31; H, 5,39; N, 17,27; S, 6,59; Encontrado: C, 54,38; H, 5,34; N, 17,28; S, 6,19.

Preparação de 8-[4-(4-tert-butil-benzenosulfonil)-[ 1,4]diazepano-1ilmetil]-2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 63.

[00204] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-t-butil-benzenosulfonila e composto 47B para Procedimento Geral G. 14% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 493; 1H NMR (400 MHz, DMSOd6): 1,31 (s, 9H), 1,79 (m, 2H), 2,73 - 2,86 (m, 4H), 3,26 - 3,41 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 7,45 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,62 - 7,76 (m, 6H), 11,20 (s, br, 1H), 11,80 (s, 1H). Anal. Calculado para C25H30N6O3S: C, 60,71; H, 6,11; N, 16,99; S, 6,48; Encontrado: C, 60,78; H, 6,10; N, 17,08; S, 6,36.

Preparação de 8-[4-(4-amino-benzenosulfonil)-[l,4]diazepano-l-ilmetil]-

2,9-dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 64.

[00205] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-nitro-benzenosulfonila e composto 47B para Procedimento Geral G. 14% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 452; 1H NMR (400 MHz, DMSOd6): 1,76 (m, 2H), 2,71 - 2,79 (m, 4H), 3,21 - 3,31 (m, 4H), 3,46 (s, 2H), 6,01 (s, 2H), 6,64 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,74 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 11,10 (s, br, 1H), 11,75 (s, 1H). Anal. Calculado para C21H23N7O3S. 0,5 H2O:

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C, 54,53; Η, 5,23; N, 21,20; S, 6,93; Encontrado: C, 54,50; H, 5,24; N, 20,84; S, 6,74.

Preparação de 8-[4-(bifenil-4-sulfonil)-[l,4]diazepano-l-ilmetil]-2,9dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 65.

[00206] Sintetizado pelo uso de cloreto de bifenil-4-sulfonila e composto 47B para Procedimento Geral G. 10% de rendimento global para os dois últimos passos. MS (ES-): 513; 1H NMR (400 MHz, DMSOd6): 1,82 (m, 2H), 2,73 - 2,83 (m, 4H), 3,29 - 3,41 (m, 4H), 3,48 (s, 2H),

7,47 - 7,53 (m, 4H), 7,62 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,68 - 7,78 (m, 3H), 7,82 -

7,93 (m, 4H), 11,00 (s, br, 1H), 11,75 (s, 1H). Anal. Calculado para C27H26N6O3S. 2,3 H2O: C, 58,32; H, 5,55; N, 15,11; S, 5,77; Encontrado: C, 58,24; H, 4,89; N, 15,10; S, 5,79.

Preparação de 8-[4-(4-amino-benzenosulfonil)-piperazina-l-ilmetil]-2,9dihidro-l,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3-ona, 66.

[00207] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-nitrobenzeno sulfonila e composto 47A para Procedimento Geral G. Um sal de mesilato de 66 foi preparado. 35% de rendimento global para os três últimos passos. MS (ES-): 438; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2,32 (s, 3H), 3,13 (bs, 4H),

3,42 (bs, 4H), 4,18 (s, 2H), 6,71 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,40 - 7,43 (m, 3H),

7,70 - 7,80 (m, 2H), 11,20 (s, br, 1H), 11,92 (s, 1H). Anal. Calculado para C20H21N7O3S. 1,3 CH3SO3H. 2,75 H2O: C, 41,67; H, 5,20; N, 15,97; S, 12,01; Encontrado: C, 41,76; H, 5,25; N, 15,92; S, 12,22.

Esquema 3

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<»? 68

6Ü

Procedimento Geral L para preparar os compostos 71. A uma solução em agitação de 70 (1,0 eq) em THF sob nitrogênio foi adicionado TEA (1 mL, excesso) e tanto cloreto de sulfonila quanto cloreto ácido (1,2 eq). À reação foi permitido agitar-se por quatro horas tempo após o qual foi evaporada e extraída com CH2CI2/H2O, seca e condensada. Material cru foi ainda purificado por meio de cromatografia em coluna usando 9:1 CFbCh/MeOH para fornecer produtos analiticamente puros 71.

Exemplo 3

Preparação de ácido (3-oxo-2,0-dihidro-3H-1,2,7,9-tetraaza-fenaleno-8ilmetiD-carbâmico tert-butil éster, 69.

[00208] Procedimento H para preparar ácido 2-aminometil-4-oxo-3,4dihidro-quinazolina-5-carboxílico metil éster, 67. A uma solução de 25 mL de 7N NH3 (grande excesso) em MeOH em 0 °C foi adicionado o composto 4 (1,0 g, 4,0 mmol) em um tubo selado. A mistura foi então aquecida em 2 x 50 mL de CH2CI2. O produto foi usado como está, sem posterior purificação.

[00209] Procedimento I para preparar ácido 2-(tertbutoxicarbonilamino-metil)-4-oxo-3,4-dihidro-quinazolina-5-carboxílico metil éster, 68. A uma solução de 50 mL de CH2CI2 de com 2 mL de

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TEA (excesso), DMAP catalítico e composto 67 (do Procedimento H) foi adicionado anidrido de boc (2,6 g, 3 eq) em temperatura ambiente. À reação foi permitido agitar-se por 60 minutos, tempo durante o qual todos os sólidos entraram em solução. A solução foi evaporada até a aridez e purificada por meio de cromatografia em coluna usando CH2CI2 e 5% de MeOH para fornecer 0,5 g de composto analiticamente puro, 68.

[00210] Procedimento J para preparar 69. 5g de composto 68 foi dissolvido em 10 mL de monohidrato de hidrazina e 25 mL de etanoL A mistura foi refluída por quatro horas até que nenhum material primário foi detectado por TLC. A reação foi resfriada, derramada em 100 mL de água gelada e extraída com 2 x 25 mL de EtOAc. As camadas orgânicas foram secas com salmoura e, em seguida, com sulfato de magnésio. Purificada por meio de cromatografia em coluna usando 9:1 CLLCh/MeOH para fornecer 2,7 g de composto 69 analiticamente puro. MS (ES-): 314; ^XH NMR (400 MHz, CDCI3): 1,45 (s, 9H), 3,90 (s, 2H), 6,15 (bs, 1H), 6,94 - 7,30 (m, 3H), 12,38 - 12,43 (m, br, 2H). Anal. Calculado para C15H17N5O3. 0,2 H₂O: C, 56,49; H, 5,50; N, 21,96; Encontrado: C, 56,61; H, 5,60; N, 21,85.

Preparação de 8-aminometil-2,9-dihidro-1,2,7,9-tetraaza-fenaleno-3ona, 70, [00211] Procedimento K para preparar 70. 250 mg de composto 69 foi dissolvido em 10 mL de CH2CI2 juntamente com 4 mL de TEA. À reação foi permitido agitar-se em temperatura ambiente durante a noite, resultando em um precipitado branco pesado, que foi filtrado e lavado com CH2CI2 e seco sob vácuo para fornecer um rendimento quantitativo de material analiticamente puro, um sal de TEA do composto 70. MS (ES+): 216; ^XH NMR (400 MHz, D₂O): 3,97 (s, 2H), 6,91 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 8,0 Hz, 1H). Anal. Calculado para C10H9N5O. 1,3 CF3COOH. 0,2 H₂O: C, 41,27; H, 2,86; N, 19,10;

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Encontrado: C, 41,00; H, 3,04; N, 19,25.

Preparação de 4-metil-7V-(3-oxo-2,9-dihidro-3H-1,2,7,9-tetraazafenaleno-8-ílmetíl)-benzenosulfonamída, 72.

[00212] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-metilbenzeno sulfonila e composto 70 para Procedimento Geral L. 20% de rendimento para composto 72. MS (ES-): 368; ^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): 2,27 (s, 3H),

3,93 (s, 2H), 7,28 - 7,43 (m, 3H), 7,67 - 7,78 (m, 4H), 11,43 (s, 1H), 11,83 (s, 1H). Anal. Calculado para C17H15N5O3S: C, 55,27; H, 4,09; N, 18,96; S, 8,68; Encontrado: C, 54,93; H, 4,09; N, 18,63; S, 8,33.

Preparação de 7V-(3-oxo-2,9-dihidro-3H, 1,2,7,9-tetraaza-fenaleno-8ilmetiD-benzenosulfonamida, 74.

[00213] Sintetizado pelo uso de cloreto de benzeno sulfonila e composto 70 para Procedimento Geral L. 25% de rendimento para composto 74. MS (ES-): 354; ^XH NMR (400 MHz, CDCI3): 3,95 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,45 - 7,60 (m, 3H), 7,67 - 7,77 (m, 2H), 7,91 - 7,93 (m, 2H), 8,24 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 11,24 (s, 1H), 11,83 (s, 1H). Anal. Calculado para C10H13N5O3S. 1,0 H₂O: C, 51,47; H, 4,05; N, 18,76; S, 8,59; Encontrado: C, 51,17; H, 4,20; N, 18,73; S, 8,31.

Preparação de 7V-(3-oxo-2,9-dihidro-3H-1,2,7,9-tetraaza-fenaleno-8ilmetiD-acetamida, 75.

[00214] Sintetizado pelo uso de anidrido acético e composto 70 para Procedimento Geral L. 22% de rendimento para o composto 75. MS (ES): 256; ^XH NMR (400 MHz, DMSO-d₆): 1,91 (s, 3H), 4,05 (s, 2H), 7,32 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,49 - 7,81 (m, 2H), 8,40 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 11,25 (s, 1H), 11,75 (s, 1H). Anal. Calculado para C12H11N5O2. 0,5 H₂O: C, 54,13; H, 4,54; N, 26,30; Encontrado: C, 54,14; H, 4,52; N, 26,00.

Preparação de 4-nitro-7V-(3-oxo-2,9-dihidro-3H-l,2,7,9-tetraazaPetição 870190115391, de 08/11/2019, pág. 90/116

89/111 fenaleno-8-ilmetil)-benzamida, 76.

[00215] Sintetizado pelo uso de cloreto de 4-nitro-benzoíla e composto 70 para Procedimento Geral L. 25% de rendimento para composto 76. MS (ES-): 363; ^XH NMR (400 MHz, CDC1₃): 3,99 (s, 2H), 7,18 - 7,20 (m, 1H), 7,34 - 7,38 (m, 1H), 7,75 - 7,90 (m, 2H), 8,20 - 8,32 (m, 2H), 8,40 - 8,48 (m, 3H).

Potência Inibitória de PARP in vitro - IC50 [00216] Um método conveniente para determinar IC50 de um composto inibidor de PARP é um ensaio PARP usando PARP humano recombinante purificado de Trevigan (Gaithersburg, Md.), como se segue: O ensaio de enzima PARP é deixado em gelo em um volume de 100 microlitros, que consiste em 100 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 1 mM de MgCU, 28 mM de KC1, 28 mM de NaCl, 3,0 gg/ml de DNA de esperma de arenque ativado por DNase I (Sigma, Mo.), 30 micromolar de [³H]nicotinamida adenina dinucleotídeo (62,5 mei/mmole), 15 microgramas/ml de enzima PARP, e várias concentrações dos compostos a serem testados. A reação é iniciada adicionando-se enzima e incubando-se a mistura em 25 °C. Após 2 minutos de incubação, a reação é terminada adicionando-se 500 microlitros de água gelada 30% (p/v) de ácido tricloroacético. O precipitado formado é transferido para um filtro de fibra de vidro (Packard Unifilter-GF/C) e lavado três vezes com 70% de etanol. Após o filtro estar seco, a radioatividade é determinada por contagem cintilação. Descobriu-se que os compostos desta invenção têm atividade enzimática potente na faixa de uns poucos nanomolares a 20 micromolares em IC50 neste ensaio de inibição.

[00217] Usando o ensaio PARP descrito acima, valores de IC50 aproximados foram obtidos para os seguintes compostos:

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Tabela I

Composto

Estrutura

IC50 nM

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n/a

₂₃ 39

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n/a

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Eficácia in vivo para o Composto 13

1) Modelo intracraniano de camundongo de melanoma B16:

[00218] A linhagem celular B16 de melanoma do murino de origem C57BL/6J (H-2^b/H-2^b) foi cultivada em RPMI-1640 contendo 10% de soro fetal bovino (Invitrogen, Milão, Itália), 2mM L-glutamina, 100 unidades/ml de penicilina e 100 pg/ml de estreptomicina (Flow Laboratories, Mc Lean, VA), a 37 °C em uma atmosfera umidificada em 5% de CO2. TMZ foi fornecido pela Schering-Plough Research Institute (Kenilworth, NJ). O composto 13 foi dissolvido em 70 mM PBS sem potássio.

[00219] Para transplantes intracranianos, células (10⁴ em 0,03 ml de RPMI-1640) foram injetadas intracranianamente (ic) através da área centro-média do osso frontal a uma profundidade de 2 mm, utilizando uma microsseringa de vidro de 0,1 ml e uma agulha descartável de calibre 27. Células B16 (10⁴) de melanoma do Murino foram injetadas ic em camundongos B6D2F1 (C57BL/6 x DBA/2) machos. Antes do desafio tumoral, os animais foram anestesiados com cetamina (100 mg/kg) e xilazina (5 mg/kg) em uma solução de NaCl 0,9% (10 ml/kg/ip). O exame histológico do crescimento do tumor no cérebro foi realizado 1-5 dias após o desafio tumoral de modo a determinar o tempo de tratamento.

[00220] O composto 13 foi administrado per os 15 minutos antes do TMZ. Camundongos de controle foram injetados com veículos de drogas. Em camundongos portadores de tumor, o tratamento iniciou 48 horas depois do desafio, quando a infiltração tumoral no tecido circundante do cérebro estava histologicamente evidente. Camundongos foram tratados com composto 13 por gavagem oral uma vez ao dia por cinco dias, em doses de 10 mg/kg.

[00221] Em camundongos portadores de tumor, o tratamento iniciou no segundo dia após o desafio, quando a infiltração tumoral no tecido

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103/111 circundante do cérebro estava histologicamente evidente. Os camundongos foram tratados diariamente com o composto 13 mais TMZ por 5 dias e monitorados para mortalidade por 90 dias. Os tempos médios de sobrevida (MST) foram determinados e a porcentagem do aumento da vida útil (ILS) foi calculado como: {[MST (dias) de camundongos tratados/MST (dias) de camundongos de controle]1}χ100. A eficácia dos tratamentos foi avaliada comparando-se as curvas de sobrevivência entre grupos tratados e de controle.

[00222] Todos os procedimentos envolvendo camundongos e os cuidados foram realizados em conformidade com diretrizes nacionais e internacionais (European Economy Community Council Directive 86/109, OLJ318, 0 1 de dezembro de 1987 e Guia NIH para o cuidado e uso de animais em laboratório, 1985).

[00223] Curvas de sobrevivência foram geradas por estimativa produto-limite Kaplan-Meier e diferenças estatísticas entre os vários grupos (8 animais/grupo) foram avaliadas por testes de log-rank com correção de Yates (software Primer of Biostatistics, McGraw-Hill, New York, NY). A significância estatística foi determinada em um nível p = 0,05. As diferenças são consideradas estatisticamente significantes quando P < 0,05.

[00224] Os resultados indicam que a administração oral de 10 mg/kg do composto 13 aumentou significativamente o tempo de sobrevivência de camundongos tratados com a combinação do composto 13 + TMZ e foi significativamente mais alto do que aquele observado em animais que receberam TMZ como agente único (P < 0,0001). Não foram observadas diferenças significantes em tempos de sobrevivência entre os grupos de controle e tratados com TMZ (Figura 1).

2) Modelo de xenotransplante intracraniano de glioma SJGBM2 em camundongos:

[00225] O composto 13 foi testado no modelo de xenotransplante

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104/111 intracraniano de glioma SJGBM2 em camundongos. (Tentori e colaboradores Clin Câncer Reser. 2003, 9, 5370). Para esta finalidade, o composto 13 foi dado uma vez a cada 15 minutos pré-TMZ a 10 mg/kg, po.

[00226] Descobriu-se que uma dose de 10 mg/kg do composto 13 foi eficaz (Figura 2). Sua combinação com TMZ aumentou o MTS de 22,5 d (TMZ sozinho) para 25 d (P = 0,002).

Eficácia in vivo para o Composto 37

1) Modelo intracraniano de camundongo do melanoma B16 [00227] O experimento foi realizado como descrito acima para o Composto 13. Foi averiguado se a administração oral do Composto 37 (5 mg/kg ou 12,5 mg/kg) pode aumentar a eficácia do TMZ contra o melanoma B16 crescendo no local de CNS. Em camundongos portadores de melanoma B16, os resultados indicaram que o tempo médio de sobrevida dos grupos tratados com a combinação do Composto 37 12,5 mg/kg + TMZ foi significativamente maior do que aquele observado nos animais que receberam TMZ como agente único (Figura 3).

2) Modelo de xenotransplante intracraniano do glioma SJGBM2 em camundongos:

[00228] A eficácia do Composto 37 foi então investigada utilizando um modelo ortotópico de um xenotransplante multiforme de glioblastoma humano (SJGBM2) em camundongos nude. A resposta do SJGBM2 ao TMZ, utilizado como agente único ou em combinação com o Composto 37 (10 mg/kg ou 20 mg/kg) por cinco dias ou em combinação com o Composto 37 (MGI25036) 10 mg/kg por cinco dias seguido por um tratamento de 14 dias com 100 mg/kg do Composto 37 como agente único, é mostrada na Figura 4. Os resultados indicam que a

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105/111 administração oral do Composto 37 (10 mg/kg ou 20 mg/kg) + TMZ prolongou significativamente a sobrevida de camundongos portadores de tumor em relação aos controles ou a animais tratados com TMZ. Deve-se notar que nesse modelo de tumor o TMZ foi ineficaz. O tratamento com 10 mg/kg do Composto 37 + TMZ por cinco dias seguido por uma alta dose do Composto 37 (100 mg/kg) por 14 dias aumenta significativamente a sobrevida do animal em relação a 10 mg/kg do Composto 37 + TMZ por cinco dias.

3) Reforço no tratamento de radiação de carcinoma em célula escamosa da cabeça e do pescoço [00229] A linhagem celular HNSCC humana JHU012 foi utilizada, tendo sido previamente geneticamente caracterizada e originalmente derivadas nos Johns Hopkins University Head and Neck Laboratories de explantes de tumores humanos. A linhagem celular foi mantida em RPMI 1640 médio com 10% de soro fetal bovino e 1% de penicilina/estreptomicina em 5% de CO2 a 37 °C em incubadoras umidificadas. Foram realizados experimentos em camundongos nude BALB/c nu/nu machos de 6 semanas de idade. Os animais foram aleatoriamente divididos nos seguintes grupos de tratamento: Grupo 1 controles, Grupo 2 - Somente radiação (2 Gray (gy)/dia por 2 dias), Grupo 3 - 100 mg/kg do Composto 37 oralmente sozinho (BO) qdxl7, Grupo 4-30 mg/kg do Composto 37 BO + Radiação, Grupo 5-100 mg/kg do Composto 37 BO + Radiação, com cada grupo que consiste em 8 camundongos. Os camundongos foram anestesiados por uma injeção intraperitoneal de 3-5 mL tribromoetanol. Os tumores foram estabelecidos no flanco direito por injeção subcutânea de lxlO⁷ células. Quatorze dias depois da injeção de células, os tumores foram cirurgicamente expostos e medidos em 3 dimensões utilizando compassos de calibre. O composto 37 foi então administrado oralmente nos Grupos de tratamento 3-5. Nos Grupos 4 e 5, os animais receberam

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106/111 o Composto 37 15 minutos antes da radiação (2 gy/dia por 2 dias). No dia 31 após a inoculação das células tumorais, os tumores foram novamente cirurgicamente expostos e medidos em 3 dimensões utilizando compassos de calibre. Foi observada uma significante inibição do crescimento do tumor no Grupo 5 tratado com 100 mg/kg administrado oralmente do Composto 37 + Radiação (volume do tumor ao final do experimento = 209,04 mm³) comparado ao Grupo de controle 1 (volume do tumor ao final do experimento = 585,9 mm³ p<0,01). (Figura 5) O Composto 37 a 30 mg/kg em combinação com radiação não teve efeito significativo na inibição do crescimento do tumor comparado com a radiação sozinha (Figura 5). Além disso, 100 mg/kg do Composto 37 PO qdxl7 sozinho não teve efeito significativo na inibição do crescimento do tumor comparado aos veículos de controle (Figura 5). Isso indica um efeito aumentado quando a dose mais alta do Composto 37 foi combinada com a radiação ao contrário a cada modalidade de tratamento sozinha.

4) Efeito do Composto 37 no crescimento do tumor em camundongos portadores de tumores deficientes em BRCA-1 [00230] 1 x 10⁶ células null BRCA-1 foram injetadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos nu/nu fêmeas (6-7 semanas de idade; Harlan Sprague Dawley, Indianápolis, Indiana). Depois de aproximadamente 10-14 dias, os tumores atingiram aproximadamente 100 mm³. Os camundongos foram divididos em grupos de modo que o tamanho médio do tumor fosse semelhante entre os grupos com o mínimo de desvios-padrões. A administração começou no dia após a triagem e o volume do tumor foi monitorado três vezes por semana. Os tumores foram medidos em dois diâmetros e o volume calculado por (lxw)²/2. Os camundongos foram retirados do estudo quando os tumores atingiram 1500 mm³. “Tempo até o Ponto Final” ou TPF (o número de dias que levou para o tumor atingir 1500 mm³ ou mais) é o

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107/111 ponto final do estudo. O Composto 37 foi pesado a cada 2-3 dias e dissolvido em água engarrafada esterilizada (J.T. Baker, Ultrapure Bioreagent 4221-02) para 10 mg/ml. O composto foi administrado oralmente, diariamente por 28 dias a partir do início do estudo - dia 1. Foi utilizado um controle positivo, usando um conhecido inibidor PARP que mostrou ser eficaz como agente autônomo nos modelos BRCA (Bryant et al). O agente de controle positivo foi dosado em 25 mg/kg IP qdx5 a partir do início do experimento. 100 mg/kg do Composto 37 foram eficazes para retardar de modo significativo o crescimento do tumor no modelo null BRCA-1 em ambos os períodos testados. Quando a dosagem do Composto 37 foi interrompida no dia 28, os tumores começaram a crescer aproximadamente 10-14 dias depois. O Composto 37 não apenas atrasou significativamente o crescimento do tumor comparado com os veículos de controle, como também atrasou o crescimento do tumor comparado com o controle positivo (p<0,05) em ambos os experimentos.

[00231] Foi realizado um estudo para comparar a biodisponibilidade e os níveis plasmáticos do cérebro de vários mamíferos administrados com os compostos revelados e um composto de técnica anterior similar. O composto de técnica anterior tem a seguinte fórmula:

O estudo comparativo foi conduzido como se segue:

[00232] Inibidores PARP em soluções de água foram dosados por injeção intravenosa em bolus (<1 min), ou por gavagem oral. Para cães,

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108/111 a administração intravenosa e oral foi realizada em um modelo de cruzamento com um período de lavagem de uma semana entre as vias de dosagem. A dose de triagem foi de 30 mg/kg para cada componente. Para camundongos, foram sacrificados três animais por ponto temporal foram sacrificados por asfixia por CO2 e o sangue coletado por punção cardíaca. Para ratos e cães, amostras sanguíneas seriadas foram tomadas em vários pontos temporais a partir do número indicado de animais. Para ratos, o volume de amostras de sangue foi imediatamente substituído por 2X o volume de 1:1 sangue do rato doador: soro fisiológico heparinizado. As amostras de sangue foram transferidas para recipientes heparinizados, misturados brevemente e armazenados em gelo até a centrifugação para preparar o plasma. O plasma foi transferido para recipientes frescos e armazenado a < -70 °C até bioanálise. Em alguns casos, foram coletados cérebros ou tecido tumoral após o sacrifício e armazenados a < -70 °C até a bioanálise.

[00233] Amostras de plasma foram processadas por precipitação com acetonitrila, evaporação e reconstituição. Cérebro e amostras de tecido tumoral foram homogeneizados com soro fisiológico tamponado com fosfato, pH 7,4, precipitado com acetonitrila, seguido por evaporação e reconstituição. As amostras reconstituídas foram analisadas versus padrões de calibração de matriz por LC - MS/MS. O desempenho do método bioanalítico foi verificado pelo desempenho das amostras de controle de qualidade. Geralmente, o menor limite de quantificação do plasma foi de 5 ng/mL. Os menores limites de quantificação do tecido dependem do grau de diluição durante a homogeneização, mas geralmente eram de 15 a 20 ng/g.

[00234] Dados de concentração de plasma, cérebro e tumor foram processados por análise farmacocinética não compartimental utilizando WinNonlin Professional Versão 4.1, AUC foi calculado utilizando a regra Linear/Log. Pontos temporais para a fase Lambda Z foram selecionados através de inspeção visual. As vertentes das fases terminais foram calculadas através de regressão linear não ponderada.

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109/111 [00235] Os inibidores PARP seletivos foram testados para propriedades farmacocinéticas do plasma e tecido básicos em camundongos, ratos e cães. Após a avaliação, essa família de compostos parece ser biodisponível por via oral em todas as espécies e penetrar em cérebro e tecido tumoral. A Tabela I resume a biodisponibilidade oral (BO) para os compostos 8, 13, 36 e 37 e o composto comparativo em camundongos e ratos e a relação cérebro/plasma (C/P) para esses cinco compostos em camundongos e ratos.

[00236] Os resultados do estudo comparativo estão resumidos na Tabela II. Os resultados mostram que, enquanto o composto da técnica anterior tem boa biodisponibilidade, o composto da técnica anterior tem uma razão entre cérebro e níveis de plasma muito baixa. Inesperadamente, os compostos revelados de Fórmula (I) têm uma boa razão entre cérebro e nível de plasma se comparado com o composto da técnica anterior. Esses resultados mostram que os compostos divulgados são inesperadamente acessíveis para o sistema nervoso central, onde são necessários para o benefício terapêutico se comparado com o composto de técnica anterior.

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Tabela II

Comparação de Biodisponibilidade (BO) e Razão entre Cérebro e Níveis de Plasma (C/P) para compostos selecionados da Fórmula (I) em relação a um composto de técnica anterior relacionado.

Composto	BO em camundongos	C/P em camundongos	BO em ratos	C/P em ratos
N SYo Composto Comparativo	77%	<5%)	77%)	<5%
'XI ,~X) cXaXj 8	49%)	49%)	58%)	40%
H 13	61%)	46%)	51%)	42%
M Y í Π χχ xz	75%)	30-64%)	50%	71- 117%

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36
H |P iMr iH rw 37	81%	26%	45%	36%

[00237] Estando, assim descrita a invenção, será óbvio que a mesma pode ser variada de muitas formas. Tais variações não devem consideradas como um desvio do espírito e escopo da invenção, e todas as tais alterações se destinam a ser incluídas dentro do escopo das reivindicações que se seguem.

Incorporação Por Referência [00238] Todas as publicações, patentes, e publicações de pedido de patente pré-concessão citadas nessa especificação são incorporadas neste documento como referência e para todos os fins, como se cada uma das publicações individuais ou pedido de patente fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada como referência. No caso de inconsistências, prevalecerá a presente invenção.

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1/3 “Compostos, Composição Farmacêutica e Métodos de Quimiossensibilização de Células Cancerígenas e de Tratamento de Mamífero com Câncer”

Claims (13)

1. Reivindicações

   5 1 - Composto, caracterizado por que é

   

   ou um sal, éster, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. 2 - Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que 10 o composto é um sal farmaceuticamente aceitável do Composto 37.
3. 3 - Composto, de acordo com a Reivindicação 2, caracterizado por que o sal farmaceuticamente aceitável compreende um ácido orgânico.
4. 4 - Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que é

   
5. 5 - Composição Farmacêutica, caracterizada por que compreende o composto segundo qualquer uma das Reivindicações 1-4 e um portador

   2/3 farmaceuticamente aceitável.
6. 6 - Composição Farmacêutica, de acordo com a Reivindicação 5, caracterizada por que compreende ainda um agente quimioterapêutico selecionado a partir do grupo que consiste em temozolomida, adriamicina, camptotecina, carboplatina, cisplatina, daunorubicina, docetaxel, doxorubicina, interferon-alfa, interferon-beta, interferon-gama, interleucina 2, irinotecan, paclitaxel, topotecan, um taxoide, dactinomicina, danorubicin, 4’-deoxidoxorubicina, bleomicina, pilcamicina, mitomicina, neomicina, gentamicina, etoposide, 4-OH ciclofosfamida, um complexo de coordenação de platina e misturas dos mesmos.
7. 7 - Composição Farmacêutica, de acordo com a Reivindicação 6, caracterizado por que o referido agente quimioterapêutico é temozolomida ou um sal do mesmo.
8. 8 - Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-4, ou Composição Farmacêutica, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 5-7, caracterizado por que é para uso na quimiosensibilização ou radiosensibilização de células cancerosas em pessoa humana em necessidade de quimioterapia ou terapia de radiação, respectivamente.
9. 9 - Composto ou Composição Farmacêutica, de acordo com a Reivindicação 8, caracterizado por que as células cancerígenas são selecionadas a partir do grupo que consiste em tumores produtores de ACTH, leucemia linfocítica aguda, leucemia não linfocítica aguda, câncer do córtex ad-renal, câncer da bexiga, câncer do cérebro, câncer da mama, câncer cervical, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica, câncer coloretal, linfoma da célula-T cutânea, câncer endometrial, câncer do esôfago, sarcoma de Ewing, câncer da vesícula biliar, leucemia de células cabeludas, câncer da cabeça e do pescoço, linfoma de Hodgkin, sarcoma de Kaposi, câncer do rim, câncer do fígado, câncer do pulmão (célula pequena e/ou não pequena), sangramento peritoneal

   3/3 maligno, sangramento pleural maligno, melanoma, mesotelioma, mieloma múltiplo, neuroblastoma, Linfoma de não Hodgkin, osteossarcoma, câncer ovariano, câncer do ovário (célula germinativa), câncer da próstata, câncer pancreático, câncer peniano, retinoblastoma, câncer de 5 pele, sarcoma de tecido mole, carcinomas da célula escamosa, câncer do estômago, câncer do testículo, câncer da tiróide, neoplasmas trofoblásticos, câncer uterino, câncer vaginal, câncer da vulva e tumor de Wilm.
10. 10 - Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-4, 10 ou Composição Farmacêutica, de acordo com qualquer uma das

    Reivindicações 5-7, para uso no tratamento de pessoa humana que tem um câncer caracterizado por ter um defeito na rota da recombinação homóloga (HR) da reparação do DNA de fita dupla.
11. 11 - Composto ou Composição Farmacêutica, de acordo com a 15 Reivindicação 10, caracterizado por que o câncer tem um fenótipo selecionado a partir do grupo que consium defeito BRCA-I e BRCA-2 e iv) anemia de Fanconi.
12. 12 - Composto ou Composição Farmacêutica, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 9-11, caracterizado por que o câncer é

    20 selecionado a partir de câncer do seio, câncer ovariano ou melanoma.
13. 13 - Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 5-7, caracterizado por que é para uso no tratamento do câncer.