BRPI0807794A2

BRPI0807794A2 - Método de proução de composições de rebaudiosídeo a purificado usando cristalização com solvente/antisolvente.

Info

Publication number: BRPI0807794A2
Application number: BRPI0807794-0A
Authority: BR
Inventors: John J Hahn; Jeffrey C Evans; Alan Stuart Myerson; Timothy Oolman; Troy Allen Rhonemus; Christopher A Tyler; Kern M Storo
Original assignee: Cargill Inc
Priority date: 2007-01-22
Filing date: 2008-01-18
Publication date: 2014-07-01
Also published as: KR20090107550A; CA2918593A1; AU2008209573A1; CA2676220A1; ES2381892T3; WO2008091547A2; AR064976A1; US8937168B2; UY30877A1; WO2008091547A3; AR082527A2; EP2124633A2; ATE547953T1; CA2676220C; KR101527237B1; JP2010516764A; CL2008000172A1; AU2008209573B2; JP5307730B2; US20100099857A1

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODO DE PRODUÇÃO DE COMPOSIÇÕES DE REBAUDIOSÍDEO A PURIFICADO USANDO CRISTALIZAÇÃO COM SOLVENTE/ANTISSOLVENTE".

Referência Cruzada a Pedidos Relacionados O presente pedido de patente reivindica o benefício do Pedido

de Patente Provisório US que tem o número de série 60/881.798, depositado em 22 de janeiro de 2007, intitulado METHOD OF PRODUCING PURIFIED REBAUDIOSIDE A COMPOSITIONS USING SOLVENT/ANTISOLVENT CRYSTALLIZATION, e do Pedido de Patente Provisório US que tem 10 o número de série 61/008.163, depositado em 19 de dezembro de 2007, intitulado METHOD OF PRODUCING PURIFIED REBAUDIOSIDE A COMPOSITIONS USING SOLVENT/ANTISOLVENT CRYSTALLIZATION, e por isso a íntegra dos referidos pedidos de patente provisórios estão aqui incorporados a título de referência.

Campo

A presente invenção refere-se à purificação de rebaudiosídeo A a partir de extratos brutos da planta Stevia rebaudiana usando cristalização com solvente/antissolvente.

Antecedentes

A espécie Stevia rebaudiana (''Stevia'') tem sido a matéria de

pesquisa e esforços de desenvolvimento consideráveis voltados para a purificação de certos glicosídeos doces de ocorrência natural da Stevia que tem potencial como adoçantes não-calóricos. Os glicosídeos doces que podem ser extraídos da Stevia incluem os seis rebaudiosídeos (isto é, rebaudiosí25 deo A a F), esteviosídeo (o glicosídeo predominante em extratos da Stevia do tipo selvagem), dulcosídeos, e esterebinas.

Rebaudiosídeo A é o sabor mais doce dos glicosídeos da Stevia, tendo aproximadamente 250-450 vezes a doçura da sacarose. Dos glicosídeos, de modo geral concorda-se que o rebaudiosídeo A é o mais desejá30 vel para uso em adoçantes não-calóricos devido ao seu perfil de doçura favorável, autorizações reguladoras, aceitação do consumidor, e residual amargo mínimo. Já foram relatados vários métodos para a purificação do rebaudiosídeo A a partir de extratos brutos de Stevia contendo rebaudiosídeo A.

A Publicação Japonesa N0 56121454 apresenta um método de separação de esteviosídeo e rebaudiosídeo A com pureza e rendimentos 5 altos por cristalização. No método, uma mistura de esteviosídeo e rebaudiosídeo A é extraída das folhas e talos da Stevia rebaudiana Bertoni por processo convencional. O extrato é dissolvido em solução aquosa de etanol >70% e o rebaudiosídeo A é seletivamente cristalizado a partir da solução.

A Patente Japonesa 63173531 descreve um método de extra10 ção de glicosídeos doces da planta Stevia rebaudiana. A primeira etapa do processo é extrair uma solução líquida de glicosídeos doces da planta Stevia rebaudiana. Em segundo lugar, a solução líquida de glicosídeos doces é passada por uma resina porosa não-polar e é eluída com um solvente orgânico solúvel em água, de preferência metanol. Em terceiro lugar, a solução 15 eluída é concentrada e secada para dar um material em pó. Este procedimento isola uma mistura de glicosídeos doces, mas não isola um único glicosídeo doce puro tal como rebaudiosídeo A.

A Publicação de Pedido de Patente US N0 2006/0083838 (Jackson et ai.) apresenta um método de isolamento e purificação de rebaudiosídeo A a partir do material de partida Stevia rebaudiana comercialmente disponível. O método compreende: (1) um estágio de formulação de EtOH para formular um solvente à base de EtOH selecionado, (2) um primeiro estágio de refluxo usando o material de partida Stevia e opcionalmente estágios de refluxo adicionais usando o retentado isolado de uma mistura refluxada ou de uma mistura de lavagem com agitação, (3) opcionalmente, um ou mais estágios de lavagem com agitação, e (4) um estágio de purga com etanol e secagem. Nas modalidades que usam Stevia de qualidade inferior como material de partida, um segundo estágio de refluxo é tipicamente adicionado antes do estágio de lavagem com agitação para maximizar a pureza do produto final rebaudiosídeo A. No método apresentado, um estágio de formulação de EtOH é conduzido para formular um solvente de refluxo desejado para uso na(s) etapa(s) de refluxo. Tipicamente, o solvente de refluxo é mistura de etanol e água com cerca de 5% a 15% em volume de água. O processo inclui ainda uma ou mais etapas de refluxo intensivo de energia que são tipicamente conduzidas a uma temperatura de cerca de 89° C a 90° C por cerca de 1 hora. O método conforme declarado produz rebaudiosídeo A 5 solúvel em água 100% puro.

A Patente US N0 5.962.678 (Payzant et al.) apresenta um método de extração de glicosídeos doces selecionados da planta Stevia rebaudiana. No método apresentado, os glicosídeos doces são extraídos da planta Stevia e são processados para obter componentes individuais em um processo de múltiplos estágios. Primeiro, a planta Stevia é tratada para extrair uma solução líquida aquosa contendo glicosídeos doces mistos. Usando uma série de resinas de troca tônica, os glicosídeos não-doces impuros são separados dos glicosídeos doces mistos, que são secados. Estes glicosídeos doces mistos secos, que ainda contêm impurezas, são então dissolvidos em um solvente orgânico solúvel em água tal como metanol anidro para formar uma solução. A solução é refluxada e é resfriada para precipitar um primeiro componente do tipo glicosídeo doce. Este primeiro componente do tipo glicosídeo doce, que é tipicamente esteviosídeo, pode ser recuperado por filtração e pode ser ainda purificado pelo método descrito para o segundo componente.

O filtrado proveniente da cristalização do primeiro glicosídeo doce precipitado pode ser ainda tratado para obter um segundo componente do tipo glicosídeo doce por concentração do filtrado por meio de aquecimento. Com o resfriamento da solução, um segundo componente do tipo glicosí25 deo doce precipita , o qual pode ser recuperado. Este segundo componente do tipo glicosídeo doce é tipicamente Rebaudiosídeo A. Ele pode ser ainda purificado através de sua dissolução em um solvente orgânico solúvel em água tal como metanol que pode opcionalmente conter uma pequena quantidade de água. A solução é aquecida, refluxada, e finalmente resfriada para 30 precipitar o segundo componente do tipo glicosídeo doce com uma pureza maior. O precipitado pode ser recuperado por filtração. Este processo de purificação pode ser repetido até ser obtido um sólido cristalizado final de pureza desejada. O método relata níveis de pureza do Rebaudiosídeo A de 90% ou mais ou 95% ou mais.

A Patente US N0 4.361.697 (Dobberstein et ai) apresenta um processo para recuperar glicosídeos do tipo diterpeno da planta Stevia rebaudiana. O processo inclui as etapas de extrair seqüencialmente o material de planta com um primeiro solvente de polaridade intermediária para extrair substâncias de planta que tendem a interferir em uma separação por cromatografia líquida dos glicosídeos, e em seguida com um segundo solvente de alta polaridade para extrair glicosídeos, e separar por meio de cromatografia os glicosídeos extraídos introduzindo-se os mesmos em uma coluna de cromatografia líquida com um preenchimento de fase estacionária orgânica contendo oxigênio covalentemente ligado através de um átomo de silício a um suporte inorgânico. Os glicosídeos são eluídos com um solvente de polaridade que é maior que aquela do primeiro solvente porém menor que aqueIa do segundo solvente.

A Patente US N0 4.892.938 (Giovanetto) apresenta um método para recuperar esteviosídeos a partir de material de planta seco da Stevia rebaudiana Bertoni por meio de extração e purificação. Um extrato é obtido através de tratamento em água a uma temperatura de cerca da temperatura 20 ambiente a cerca de 65 0C com agitação e subsequente filtração e centrifugação. Este extrato é tratado com hidróxido de cálcio, com o que obtém-se um precipitado por meio de filtração ou centrifugação. Este precipitado é tratado com uma resina de troca iônica fortemente ácida e subsequentemente com uma resina de troca iônica fracamente básica, filtrada e seca.

A Patente US N0 4.082.858 (DuBois) apresenta um método para

a recuperação de rebaudiosídeo A a partir das folhas de plantas Stevia rebaudiana. A purificação final é obtida por cromatografia líquida subsequentemente seguida por uma extração inicial com água e alcanol tendo 1 a 3 átomos de carbono, de preferência metanol. Também está descrito que á30 gua pode ser usada como o solvente inicial, seu solvente preferido neste estágio é um haloalcano líquido tendo de 1 a 4 átomos de carbono. O segundo solvente preferido é um alcanol tendo de 1 a 3 átomos de carbono, enquanto que o terceiro solvente preferido é um alcanol tendo de 1 a 4 átomos de carbono e opcionalmente pequenas quantidades de água.

O Pedido de Patente US N0 2006/0134292 (Abelyan et al.) apresenta um processo para recuperar glicosídeos doces a partir de material de 5 planta da Stevia rebaudiana. As folhas secas e transformadas em pó são tratadas com água na presença de uma pectinase, celulase, e alfa-amilase. Considera-se que o uso de tais enzimas aumenta consideravelmente a taxa de extração e facilita os estágios de purificação seguintes. O extrato resultante é purificado usando tratamento com hidróxido de cálcio e ultrafiltração. 10 O permeado é passado através da coluna preenchida com bentonita e concentrado até a forma de um xarope a vácuo. O tratamento com etanol permite separar o rebaudiosídeo A praticamente puro da mistura. O rebaudiosídeo A com alta pureza é obtido depois da lavagem dos cristais com 88-95% de etanol.

A Patente US N0 5.972.120 (Kutowy et al.) apresenta um pro

cesso para a extração de compostos doces da Stevia rebaudiana Bertoni, por extração em coluna, seguida de purificação por filtração. A extração ocorre em temperaturas na faixa de 0°C a 25°C. De preferência, uma etapa de pré-tratamento de microfiltração é usada para clarificar o extrato. A purifi20 cação é feita por ultrafiltração seguida de nanofiltração. As condições de filtração são controladas para otimizar a recuperação dos compostos doces.

Outras técnicas incluem aquelas apresentadas nas Publicações Japonesas Nos 56121454; 56121455; 52062300; e 56121453 concedidas a Ajinomoto Company, Inc., e na Publicação Chinesa N0 1243835 concedida a Hailin Stevia Rebaudium Sugar.

Um aperfeiçoamento nas técnicas e métodos disponíveis para a purificação de rebaudiosídeo A a partir da Stevia rebaudiana ("Stevia") é desejado. Em particular, é desejado um método que pode ser conduzido à temperatura ambiente sem a necessidade de etapas de aquecimento ou resfriamento ou refluxo intensivo de energia.

Sumário

A invenção oferece métodos de purificação de rebaudiosídeo A a partir de uma mistura compreendendo glicosídeos da planta Sfewa rebaudiana ("Stevia"). Os métodos da invenção são úteis para preparar composições de rebaudiosídeo A altamente puro a partir de composições de partida de Stevia bruta que tipicamente possuem uma concentração de rebaudiosí5 deo A consideravelmente baixa. As composições de rebaudiosídeo A altamente puro são úteis como adoçantes não-calóricos em composições comestíveis e mastigáveis tais como gêneros alimentícios, bebidas, medicamentos, doces, goma de mascar, e similares.

Vantajosamente, em algumas modalidades, o método da inven10 ção pode ser conduzido totalmente à temperatura ambiente ou próximo à temperatura ambiente sem necessidade de etapas de refluxo intensivo de energia, aquecimento, e/ou resfriamento. Além disso, o método da invenção não requer separações cromatográficas para fornecer composições de rebaudiosídeo A de alto teor de pureza. No entanto, em algumas modalidades 15 da invenção, o método pode compreender um ou mais de: (i) aquecimento, (ii) resfriamento, e (iii) separação em uma coluna cromatográfica para purificar a composição de rebaudiosídeo A para atingir o nível de pureza desejado.

Em um aspecto, o método da invenção compreende as etapas

de:

(a) fornecer uma composição de partida de Stevia compreendendo:

rebaudiosídeo A; e

um ou mais de rebaudiosídeo B, rebaudiosídeo C, rebaudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F, esteviosídeo, e dulcosídeo;

(b) formar uma solução de glicosídeos dissolvendo a composição de partida de Stevia em um solvente compreendendo: (i) uma mistura de um álcool inferior (por exemplo, um C1- C3 álcool) e água, ou (ii) uma mistura de um ácido carboxí

Iico inferior (por exemplo, ácido acético) e água; e

(c) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos da etapa (b) em uma quantidade que é eficaz para fazer com que pelo menos uma porção do rebaudiosídeo A cristalize da solução de glicosídeos na forma de uma composição de rebaudiosídeo A purificado com um nível de pureza maior que aquele da composição de partida de Stevia.

5 Em muitas modalidades, a composição de partida de Stevia

compreende cerca de 40% em peso ou mais de rebaudiosídeo A. Por exemplo, a composição de partida de Stevia pode compreender cerca de 40% a cerca de 80% em peso de rebaudiosídeo A ou cerca de 40% a cerca de 60% em peso de rebaudiosídeo A.

A composição de partida de Stevia é dissolvida em uma compo

sição solvente que compreende (i) uma mistura de um álcool inferior (por exemplo, umC1 a C3 álcool) e água; ou (ii) uma mistura de um ácido carboxílico inferior (por exemplo, ácido acético) e água; para formar uma composição de glicosídeos. Exemplos de álcoois inferiores úteis incluem metanol, etanol, e propanol (n-propanol e i-propanol). Em muitas modalidades, a composição solvente compreende uma mistura de álcool inferior e água, onde a porção álcool inferior compreende cerca de 30% a cerca de 70% em peso da composição solvente, e a porção de água compreende cerca de 30% a cerca de 70% em peso da composição solvente. Em uma modalidade exemplificativa, a composição solvente compreende cerca de 50% em peso de etanol e 50% em peso de água. Uma composição solvente de um ácido carboxílico inferior (por exemplo, ácido acético) e água também pode ser usada. Quando usado como solvente, o ácido carboxílico inferior está tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 30% em peso a cerca de 90% em peso, e a água está tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 10% em peso a cerca de 70% em peso. Mais tipicamente, o ácido carboxílico inferior está tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 50% em peso a cerca de 90% em peso, e a água está tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 10% a cerca de 50% em peso.

Embora qualquer quantidade abaixo do limite de solubilidade possa ser usada, a composição de partida de Stevia é tipicamente dissolvida na composição solvente para dar uma solução de glicosídeos compreendendo cerca de 15% a cerca de 50% em peso da composição de partida de Stevia e cerca de 50% a cerca de 85% em peso da composição solvente. Por exemplo, uma solução de glicosídeos exemplificativa compreende cerca 5 de 30% em peso da composição de partida de Stevia dissolvida e cerca de 70% em peso da composição solvente, onde cerca de 50% da composição solvente são etanol e cerca de 50% em peso da composição solvente são água.

Depois de dissolver a composição de partida de Stevia na com10 posição solvente, uma quantidade eficaz de um antissolvente é adicionada à solução de glicosídeos para dar início à cristalização do rebaudiosídeo A. O antissolvente serve para alterar a solubilidade de equilíbrio do rebaudiosídeo A na solução resultante para que a concentração de rebaudiosídeo A seja supersaturada (isto é, acima de seu limite de solubilidade). Como o rebaudi15 osídeo A está acima de seu limite de solubilidade de equilíbrio, o rebaudiosídeo A cristaliza a partir da composição solvente na forma de cristais de rebaudiosídeo A purificado.

Quando uma mistura de um álcool inferior (por exemplo, um C1- C3 álcool) e água é usada como o solvente, o antissolvente tipicamente 20 compreende um álcool inferior, tal como um C1-C3 álcool. Exemplos representativos incluem metanol, etanol, propanol (por exemplo, n-propanol e ipropanol), acetona, e acetato de etila. O antissolvente pode ser o mesmo C1-C3 álcool usado no solvente ou pode ser um C1-C3 álcool diferente. Por exemplo, o solvente pode compreender etanol e água, e o antissolvente po25 de compreender metanol. Quando um ácido carboxílico inferior e água são usados como o solvente, antissolventes úteis incluem metanol, etanol, propanol (por exemplo, n-propanol e i-propanol), acetona, e acetato de etila.

Quanto à massa da composição solvente, a massa do antissolvente tipicamente varia de cerca de 0,5:1 a cerca de 9:1, mais tipicamente cerca de 2:1 a cerca de 3:1.

O antissolvente pode ser adicionado em uma única adição (isto é, uma única adição de todo o volume de antissolvente) ou ele pode ser adicionado em várias adições, cada uma delas proporcionando uma fração da quantidade total necessária de antissolvente. Uma taxa de adição mais lenta, ou várias adições pequenas do antissolvente, pode proporcionar uma composição de rebaudiosídeo A de pureza mais alta do que aquela que resultaria se o antissolvente fosse adicionado de uma só vez.

Depois da adição do antissolvente, a composição resultante é tipicamente agitada a cerca da temperatura ambiente para permitir que ocorra a cristalização do rebaudiosídeo A. Opcionalmente, a solução pode ser semeada pela adição de cristais de semeadura compreendendo rebaudiosí10 deo A muito puro. Tipicamente, a cristalização ocorre em cerca de 24 horas depois da adição do antissolvente. Via de regra, o tempo para cristalização diminui à medida em que aumenta a pureza da composição de partida de rebaudiosídeo A. Por exemplo, se a composição de partida for relativamente pura (por exemplo, 80% de Reb. A) em rebaudiosídeo A, a cristalização po15 de levar menos de 1 hora. Em muitas modalidades, a cristalização leva cerca de 1 a 4 horas.

Depois da cristalização, o rebaudiosídeo A purificado pode ser recuperado usando-se técnicas conhecidas tais como filtração ou centrifugação. Depois da recuperação, os cristais de rebaudiosídeo A purificado podem ser ainda purificados por meio de lavagem com um álcool inferior, por exemplo, metanol ou etanol.

Em muitas modalidades, o método da invenção produz composições de rebaudiosídeo A purificado que compreendem cerca de 90% em peso ou mais de rebaudiosídeo A, por exemplo, cerca de 95% em peso ou 25 mais de rebaudiosídeo A, cerca de 96% em peso ou mais, cerca de 97% em peso ou mais, ou cerca de 98,5% em peso ou mais de rebaudiosídeo A. Em muitas modalidades, o método da invenção produz composições de rebaudiosídeo A purificado que compreendem cerca de 2,5% em peso ou menos de rebaudiosídeo B, por exemplo, cerca de 2% em peso ou menos de re30 baudiosídeo B ou cerca de 1% em peso ou menos de rebaudiosídeo B. Em muitas modalidades, o método da invenção produz composições de rebaudiosídeo A purificado que compreendem cerca de 1% em peso ou menos de rebaudiosídeo D, por exemplo, cerca de 0,5% ou menos de rebaudiosídeo D. Os níveis finais de rebaudiosídeo A, B, e D vão depender tipicamente da quantidade destes materiais presentes no material de alimentação inicial.

Em um outro aspecto, a invenção oferece um método de Iava5 gem de um sólido que compreende rebaudiosídeo A e rebaudiosídeo D para remover pelo menos uma porção do rebaudiosídeo D da composição sólida. O método compreendendo as etapas de: (a) fornecer um sólido compreendendo rebaudiosídeo A e rebaudiosídeo D; e (b) lavar o sólido com um C1- C3 álcool para remover pelo menos uma porção do rebaudiosídeo D da 10 composição sólida. Exemplos de solventes incluem C1-C3 álcoois tais como metanol, etanol, e propanol. Em muitas modalidades, metanol é preferido para a redução do rebaudiosídeo D.

Breve Descrição das Figuras

A figura 1 mostra um padrão de difração de raios X para cristais de rebaudiosídeo A produzidos por cristalização a partir de um solvente de etanol/água usando metanol como o antissolvente.

A figura 2 mostra uma imagem por microscopia ótica de cristais de rebaudiosídeo A produzidos por cristalização a partir de um solvente de etanol/água usando metanol como o antissolvente.

Descrição Detalhada

Em um aspecto, a invenção oferece um método de purificação de composições que compreendem rebaudiosídeo A. Os métodos da invenção podem ser usados para preparar composições de rebaudiosídeo A altamente puro que são adequadas como adoçantes de baixo teor calórico em 25 composições comestíveis ou mastigáveis tais como gêneros alimentícios, bebidas, medicamentos, doces, goma de mascar, e similares.

Em um aspecto, a invenção oferece um método de purificação de rebaudiosídeo A a partir de uma mistura de glicosídeos. O método compreende as etapas de:

(a) fornecer uma composição de partida de Stevia compreen

dendo: rebaudiosídeo A; e um ou mais de rebaudiosídeo B1 rebaudiosídeo C, rebaudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F1 esteviosídeo, e dulcosídeo;

(b) formar uma solução de glicosídeos dissolvendo a composição de partida à base de glicosídeos em um solvente

compreendendo uma mistura de: (i) um álcool inferior (por

exemplo, um C1 a C3 álcool) e água, ou (ii) um ácido carboxílico inferior (por exemplo, ácido acético) e água; e

(c) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos da etapa (b) em uma quantidade que é eficaz para fazer com pelo menos uma

porção do rebaudiosídeo A cristalize da solução de glicosídeos na forma de uma composição de rebaudiosídeo A purificado.

Etapa (a):

Os métodos da invenção são úteis para purificar composições de partida compreendendo rebaudiosídeo A para formar composições de 15 rebaudiosídeo A altamente puro. Tipicamente, as composições de partida são derivadas da planta Stevia rebaudiana usando técnicas conhecidas, tais como extração dos glicosídeos do tipo diterpeno das folhas da Stevia usando água ou soluções de solvente-água opcionalmente precedidas por um pré-tratamento, tal como extração de compostos graxos e/ou outros com20 postos). As operações de pré-tratamento podem incluir etapas de clarificação e descoloração (por exemplo, usando coagulantes, adsorventes e/ou extração com solvente), e podem incluir opcionalmente a remoção de cinzas por meio de troca de íons. Depois disto, uma nova purificação pode ser efetuada por adsorção seletiva, tratamento com solvente, ou uma combinação. 25 Finalmente, o material de partida pode ser purificado por cristalização e secado. Composições de partida úteis compreendem rebaudiosídeo A e também compreendem um ou mais outros glicosídeos tais como rebaudiosídeo B, rebaudiosídeo C, rebaudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F, esteviosídeo, e dulcosídeo.

Em muitas modalidades, as composições de partida compreen

dem cerca de 40% em peso ou mais de rebaudiosídeo A, por exemplo, cerca de 40% a cerca de 95% em peso de rebaudiosídeo A. Esteviosídeo também está tipicamente presente na composição de partida. Em algumas modalidades, o esteviosídeo está presente até cerca de 40% em peso da composição de partida. Outros glicosídeos que podem estar presentes na composição de partida incluem, por exemplo, rebaudiosídeo B, rebaudiosídeo C, 5 rebaudiosídeo D, e rebaudiosídeo F. Composições de partida típicas compreendem, por exemplo, até cerca de 8% em peso de rebaudiosídeo B, até cerca de 10% em peso de rebaudiosídeo C, até cerca de 2% em peso de rebaudiosídeo F, até cerca de 1% em peso dulcosídeo, e até cerca de 4% em peso de rebaudiosídeo D. Rebaudiosídeo E também pode estar presen10 te na composição de partida.

Vantajosamente, o método da invenção pode ser usado para purificar rebaudiosídeo A a partir das composições de partida que têm um nível de pureza baixo de rebaudiosídeo A. Por exemplo, o método da invenção pode ser usado para produzir rebaudiosídeo A purificado a partir de 15 composições de partida com menos de cerca de 60% em peso de rebaudiosídeo A, por exemplo, cerca de 40% a cerca de 60% em peso de rebaudiosídeo A.

Etapa (b):

No método da invenção, a composição de partida é dissolvida em uma composição solvente para formar uma solução. Tipicamente, a composição de partida é adicionada à composição solvente e a composição solvente é agitada para fazer com que a composição de partida dissolva na composição solvente. A composição de partida pode ser adicionada à composição solvente a uma taxa relativamente constante com o tempo, ou pode ser adicionada em uma ou mais adições distintas. Tipicamente, a composição de partida é dissolvida na composição solvente aproximadamente à temperatura ambiente, por exemplo, cerca de 20°C a cerca de 25°C. Também está dentro do escopo da invenção aquecer ligeiramente a composição solvente para ajudar a dissolver a composição de partida. Por exemplo, a composição solvente pode ser aquecida até uma temperatura que varia de cerca de 20°C a cerca de 70°C, mais tipicamente que varia de cerca de 60°C a cerca de 70°C. As composições solventes úteis compreendem: (i) uma mistura de um álcool inferior (por exemplo, um C1-C3 álcool) e água; ou (ii) uma mistura de um ácido carboxílico inferior e água. Exemplos de álcoois inferiores incluem metanol, etanol, e propanol (por exemplo, n-propanol e i5 propanol). Misturas de dois ou mais álcoois e água também podem ser usadas. Em muitas modalidades, a composição solvente compreende cerca de 20% em peso a cerca de 80% em peso de álcool inferior e cerca de 20% em peso a cerca de 80% em peso de água, com base no peso total da composição solvente. Mais tipicamente, a composição solvente compreende cerca 10 de 30% em peso a cerca de 70% em peso de álcool inferior e cerca de 30% em peso a cerca de 70% em peso de água. Em modalidades exemplificativas, a composição solvente compreende cerca de 40% em peso a cerca de 60% em peso de álcool inferior e cerca de 40% em peso a cerca de 60% em peso de água, ou cerca de 45% em peso a cerca de 55% em peso de álcool 15 inferior e cerca de 45% em peso a cerca de 55% em peso de água. Em uma modalidade exemplificativa, a composição de partida compreende cerca de 50% em peso de etanol e cerca de 50% em peso de água.

Exemplos de ácidos carboxílicos inferiores incluem ácido acético, ácido fórmico, e ácido propiônico embora outros ácidos carboxílicos infe20 riores também possam ser usados. Quando usado como solvente, o ácido carboxílico inferior está tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 30% em peso a cerca de 90% em peso, e a água está tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 10% em peso a cerca de 70% em peso. Mais tipicamente, o ácido carboxílico inferior está 25 tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 50% em peso a cerca de 90% em peso, e a água está tipicamente presente em uma quantidade que varia de cerca de 10% em peso a cerca de 50% em peso. Em uma modalidade exemplificativa, a composição solvente é 50% em peso ácido acético e 50% em peso de água.

A composição solvente é tipicamente preparada misturando-se

os componentes individuais antes da adição da composição de partida de rebaudiosídeo A. No entanto, também é possível dissolver a composição de partida de rebaudiosídeo A em um componente da composição solvente e em seguida adicionar o segundo componente para compor a composição solvente.

Depois da dissolução da composição de partida na composição 5 solvente a solução de glicosídeos resultante tipicamente compreende cerca de 15% em peso a cerca de 50% em peso dos sólidos dissolvidos da composição de partida e cerca de 50% a cerca de 85% em peso de solvente. Em algumas modalidades, a solução de glicosídeos compreende cerca de 30% em peso a cerca de 50% em peso de sólidos dissolvidos e cerca de 10 50% em peso a cerca de 70% em peso de solvente.

Etapa (c):

Depois de formada a solução de glicosídeos, uma quantidade eficaz de um antissolvente é então adicionada à solução de glicosídeos para induzir a cristalização de rebaudiosídeo A. Depois da adição de uma quanti15 dade eficaz do antissolvente, a solução de glicosídeos resultante (incluindo o antissolvente) excede o limite de solubilidade do rebaudiosídeo A fazendo assim com que o rebaudiosídeo A cristalize a partir da solução de glicosídeos. Como os outros glicosídeos que podem estar presentes na solução de glicosídeos permanecem abaixo de seu limite de solubilidade, o rebaudiosí20 deo A cristaliza preferencialmente a partir da solução.

Antissolventes úteis incluem materiais que são eficazes para modificar o limite de solubilidade do rebaudiosídeo A na solução de glicosídeos. Mais particularmente, um antissolvente eficaz tanto é miscível na solução de glicosídeos como é capaz de reduzir o poder de solvatação da á25 gua diminuindo a constante dielétrica da solução. Tipicamente, os antissolventes são líquidos que são miscíveis em água e tipicamente são menos polares que a água. Exemplos representativos de antissolventes incluem álcoois inferiores (por exemplo, C1 a C3 álcoois) tais como metanol, etanol, e propanol (n-propanol e i-propanol). Também úteis são a acetona e o ace30 tato de etila. O antissolvente pode ser o mesmo álcool inferior que está presente na composição solvente ou pode ser um álcool inferior diferente.

No método da invenção, o antissolvente é adicionado à solução de glicosídeos em uma quantidade eficaz para induzir a cristalização de pelo menos uma porção do rebaudiosídeo A que está presente na composição de glicosídeos. A quantidade de antissolvente que é necessária pode depender de diversos fatores que incluem, por exemplo, a constituição da 5 composição solvente, a composição do material de partida, a quantidade de rebaudiosídeo A que está presente na composição, a quantidade de outras impurezas do tipo glicosídeo na solução, a temperatura de cristalização, e a temperatura de dissolução. Tipicamente, a massa do antissolvente que é adicionada em relação à massa de solvente na solução de glicosídeos varia 10 de cerca de 0,5:1 a cerca de 9:1. Mais tipicamente, a massa de antissolvente em relação à massa de solução de glicosídeos varia de cerca de 2:1 a cerca de 3:1.

A cristalização do rebaudiosídeo A pode ser conduzida usando um processo de cristalização em batelada ou um processo de cristalização contínuo. Em um processo em batelada, a composição de partida, o solvente, e o antissolvente são todos adicionados a um único recipiente onde ocorre a cristalização. Depois de os cristais serem recolhidos o processo pode ser repetido. Na cristalização contínua, uma mistura de glicosídeos de alimentação é dissolvida em uma solução de solventes. A mistura resultante é continuamente bombeada para um vaso de cristalização. Ao mesmo tempo, o antissolvente é bombeado para o vaso de cristalização em uma quantidade que vai resultar na concentração final desejada de antissolvente quando misturado com o solvente e com a mistura de solutos. A cristalização ocorre neste vaso, que tipicamente ocorre a uma taxa mais alta que em um vaso em batelada devido à presença contínua de cristais de semeadura. A suspensão espessa produzida é continuamente bombeada para fora do vaso a uma taxa igual à soma dos influxos de solvente e antissolvente, mantendo assim um volume constante no cristalizador. A suspensão espessa produzida é filtrada ou centrifugada, e em seguida secada para dar um produto final. Os solventes usados no processo podem ser recuperados por destilação. O soluto dissolvido no final da cristalização pode ser recuperado e reciclado para alimentação ou usado separadamente. O antissolvente pode ser adicionado à solução de glicosídeos em uma adição (isto é, toda a quantidade adicionada em uma única adição) ou pode ser adicionado em várias adições. Em algumas modalidades, o antissolvente é adicionado à solução de glicosídeos a uma taxa de adição 5 constante com o tempo. A taxa de adição do antissolvente à solução de glicosídeos pode afetar a pureza dos cristais de rebaudiosídeo A que se formam. Por exemplo, a adição do antissolvente em uma única adição pode fazer com que o rebaudiosídeo A cristalize rapidamente a partir da solução de glicosídeos resultando em cristais de rebaudiosídeo A que apresentam 10 pureza mais baixa que aquela dos cristais que se formariam se o antissolvente fosse adicionado à solução de glicosídeos lentamente com o tempo, ou em várias adições pequenas.

Tipicamente, o antissolvente é adicionado à solução de glicosídeos enquanto os dois materiais são mantidos à cerca da temperatura am15 biente, por exemplo, cerca de 20 ± 5°C. Depois da adição do antissolvente, a solução de glicosídeos resultante é deixada repousar, com agitação suave a moderada, aproximadamente à temperatura ambiente para que o rebaudiosídeo A cristalize a partir da solução de glicosídeos. Tipicamente, o rebaudiosídeo A cristaliza em cerca de 24 horas depois da adição do antissolven20 te. A taxa de cristalização tipicamente diminui à medida em que o material de partida de rebaudiosídeo A diminui.

Em algumas modalidades, o método da invenção inclui ainda a etapa de resfriar a solução de glicosídeos para promover a cristalização do rebaudiosídeo A a partir da solução de glicosídeos. A solução de glicosídeos 25 pode ser resfriada antes da adição do antissolvente, simultaneamente com a adição do antissolvente, ou subsequentemente à adição do antissolvente. Combinações dos procedimentos precedentes também podem ser praticadas. A solução de glicosídeos pode ser resfriada para qualquer temperatura útil para promover a cristalização do rebaudiosídeo A. Em algumas modali30 dades, a solução de glicosídeos é resfriada para uma temperatura de cerca de O0C a cerca de -10°C. A taxa de resfriamento pode ser qualquer taxa útil, mas tipicamente varia de cerca de 1°C/minuto a cerca de 5°C/minuto. Em algumas modalidades, a solução é semeada para promover a cristalização e aumentar a pureza do rebaudiosídeo A cristalizado. A semeadura é tipicamente efetuada pela adição de uma pequena quantidade de rebaudiosídeo A altamente puro (por exemplo, cerca de 0,2% a cerca de 5 10% em peso de carga de sementes com base na massa total) à solução.

Depois da cristalização, o rebaudiosídeo A purificado pode ser removido por filtração usando-se técnicas e materiais bastante conhecidos. Em algumas modalidades, os cristais de rebaudiosídeo A purificado foram lavados usando-se um álcool inferior (por exemplo, um C1 a C3 álcool) tal 10 como metanol, etanol, ou propanol (n-propanol ou i-propanol), ou uma mistura dos mesmos. A lavagem com um álcool inferior pode ser eficaz na remoção de solvente residual junto com quaisquer glicosídeos que estejam dissolvidos no solvente. Tipicamente, os glicosídeos que estão na porção líquida da torta de filtrado molhada estão em quantidade mais baixa na 15 composição de rebaudiosídeo A do que aqueles na parte sólida da torta de filtrado. A lavagem remove os glicosídeos aumentando assim a concentração total de rebaudiosídeo A depois de a torta de filtrado ter secado. Além disso, a lavagem pode remover preferencialmente glicosídeos indesejados (por exemplo, remover Reb. B e Reb. D dos cristais de Reb. A).

O método da invenção pode ser usado para produzir uma com

posição de rebaudiosídeo A purificado. Em algumas modalidades, a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 90% em peso ou mais de rebaudiosídeo A. Em outras modalidades, a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 95% em peso ou mais de re25 baudiosídeo A. Em ainda outras modalidades, a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 97% em peso ou mais de rebaudiosídeo A. Em ainda outras modalidades, a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 98% em peso ou mais de rebaudiosídeo A ou cerca de 99% em peso ou mais de rebaudiosídeo A. Em muitas modali30 dades, a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 2,5% em peso ou menos de rebaudiosídeo B, ou cerca de 2% em peso ou menos de rebaudiosídeo B. Em muitas modalidades, a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 1% em peso ou menos de rebaudiosídeo D, ou cerca de 0,5% em peso ou menos de rebaudiosídeo D. Em muitas modalidades, a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 0,1% em peso ou menos de esteviosídeo.

As composições de rebaudiosídeo A purificado da invenção po

dem ser usadas como o único adoçante de gêneros alimentícios, bebidas, medicamentos, tabaco, fármacos, e produtos para o cuidado pessoal, ou podem ser misturadas com outros adoçantes nesses produtos (isto é, como um "coadoçante"). Mais de um adoçante é tipicamente usado para obter 10 perfis de sabor e/ou propriedades físicas específicos. Tais adoçantes incluem adoçantes convencionais (cana-de-açúcar, açúcar de beterraba, mel, xaropes, e outros adoçantes "naturais") e adoçantes de alta intensidade (ciclamatos, sacarina, sucralose, aspartame, Stevia, e outros adoçantes de alta intensidade quimicamente produzidos e/ou naturais).

Em um outro aspecto, a invenção oferece um método de cristali

zação de esteviosídeo usando cristalização com solvente/antissolvente. A cristalização de esteviosídeo a partir de uma composição de glicosídeos que compreende rebaudiosídeo A e esteviosídeo pode ser útil para formar uma composição de esteviosídeo purificado e também para oferecer uma com20 posição de glicosídeos dissolvida que é enriquecida em rebaudiosídeo A em relação à composição de partida. Depois de enriquecida em rebaudiosídeo A (por exemplo, cerca de 20% em peso a cerca de 50% em peso de rebaudiosídeo A), a composição de rebaudiosídeo A enriquecida pode ser usada como um material de partida no processo descrito acima para formar com25 posições de rebaudiosídeo A purificado.

Em muitas modalidades, o método de precipitação de esteviosídeo por cristalização com solvente/antissolvente compreende as etapas de:

(a) fornecer uma composição de glicosídeos compreendendo rebaudiosídeo A e esteviosídeo (outros glicosídeos também

estão tipicamente presentes);

(b) formar uma solução de glicosídeos dissolvendo a composição de glicosídeos em um solvente compreendendo um álcool inferior (por exemplo, um C1 a C3 álcool e água); e (c) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos da etapa (b) em uma quantidade que é eficaz para fazer com pelo menos uma porção do esteviosídeo cristalize da solução de glicosídeos formando assim uma composição de glicosídeos que é enriquecida em rebaudiosídeo A em relação à solução de glicosídeos da etapa (b).

Em algumas modalidades, o método pode compreender ainda as etapas de:

(d) filtrar o esteviosídeo cristalizado e recuperar uma composição enriquecida em rebaudiosídeo A a partir da solução de glicosídeos da etapa (c);

(e) formar uma segunda solução de glicosídeos dissolvendo a composição de glicosídeos enriquecida da etapa (d) em um solvente compreendendo um álcool inferior (por exemplo, um C1 a C3 álcool) e água; e

(f) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos doces da etapa (e) em uma quantidade que é eficaz para cristalizar pelo menos uma porção do rebaudiosídeo A a partir da solução de glicosídeos doces na forma de uma composição de rebaudiosídeo A purificado.

A invenção será agora descrita com referência aos exemplos não Iimitativos a seguir.

EXEMPLOS Materiais de partida

A Tabela 1 lista várias composições de material de partida que foram usadas nos Exemplos. TABELA 1

Material Dulc. Stev. Reb. A Reb. B Reb. C Reb. F Reb. D (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) 59 RA40 0,6 39,1 44,4 1,0 10,0 1.8 3,1 58 RA60 0,6 29,7 56,6 1,5 7,6 1,5 2,5 26 RA80 0,2 9,3 79,2 3,6 3,4 1,0 3,2 70 RA80 0,1 2,6 86,5 8,1 1,2 1,2 0,4 RA 20 1,6 74,1 16,0 0,0 7,0 0,7 0,6 EXEMPLO 1

Primeiro, a composição de partida 70 RA80 (vide, Tabela 1) foi dissolvida a 30% em peso em uma composição solvente compreendendo 50% em peso de etanol e 50% em peso de água. A solução resultante foi deixada entrar em equilíbrio por uma noite à temperatura ambiente. Subsequente ao equilíbrio o antissolvente metanol foi adicionado à composição de glicosídeos doces na quantidade mostrada na Tabela 2 para provocar cristalização. Depois da adição do antissolvente, a cristalização foi deixada prosseguir à temperatura ambiente por uma noite. Subsequente à cristalização as soluções foram filtradas e a torta de filtrado resultante foi lavada com 2 pesos de etanol. As tortas de filtrado e as amostras de sobrenadante foram então secadas e as tortas secas foram analisadas por HPLC para determinar a composição de glicosídeos. Os resultados estão apresentados na Tabela 2. TABELA 2 Mat. Antissolvente Lavagem Rendimento de Rendimento de Dulc. Stev. Reb. A Reb. B Reb.C Reb. F Outros massa (%) Reb. A (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) 70 0,25 wt 2 wt 0,0 0,0 RA80 MeOH EtOH 0,0 0,0 - - -- - -- -- 0,0 0,0 - -- - -- ~ -- 70 0,50 wt 2 wt 38,1 42,0 0,0 0,2 95,5 3,9 0,1 0,2 0,2 RA80 MeOH EtOH 0,0 0,0 -- 0,2 -- -- -- - 0,0 0,0 -- 0,2 - -- - -- 70 1 wt wt 57,7 62,7 0,0 0,0 94,1 5,1 0,0 0,3 0,1 RA80 MeOH EtOH 57,5 63,2 0,0 0,0 95,0 4,3 0,0 0,3 0,1 58,9 64,0 0,0 0,1 94,1 5,0 0,0 0,3 0,3 70 2 wt 2 wt 62,0 70,2 0,0 0,2 98,0 1,5 0,0 0,2 0,4 RA80 MeOH EtOH 62,1 70,4 0,0 0,1 98,1 1,4 0,0 0,1 0,4 62,2 70,6 0,0 0,0 98,3 1,1 0,0 0,2 0,3 70 3 1t 2 wt 65,6 73,5 0,0 0,0 96,9 2,3 0,0 0,2 0,4 RA80 MeOH EtOH 64,1 72,2 0,0 0,0 97,4 1,9 0,0 0,2 0,4 64,7 73,2 0,0 0,0 97,9 1,6 0,0 0,2 0,4 70 4 wt 2 wt 64,2 72,2 0,0 0,0 97,3 2,1 0,0 0,2 0,4 RA80 MeOH EtOH 64,5 72,7 0,0 0,0 97,5 1,9 0,0 0,2 0,4 60,8 68,4 0,0 0,0 97,4 2,0 0,0 0,2 0,4 * Outros = soma dos picos entre Reb. A e Reb. B, que se acredita incluir Reb. D e Steviolbiosídeo. EXEMPLO 2

Primeiro, os materiais de partida identificados na Tabela 3 foram dissolvidos a 30% em peso em uma composição solvente compreendendo 50% em peso de etanol e 50% em peso de água. As soluções resultantes foram deixadas entrar em equilíbrio por uma noite à temperatura ambiente. Subsequente ao equilíbrio, 2 volumes de antissolvente foram adicionados à composição de glicosídeos doces para provocar cristalização. Depois da adição do antissolvente, a cristalização foi deixada prosseguir à temperatura ambiente por uma noite. Foi observado que a adição de 2 volumes de antissolvente causou cristalização nos materiais de partida com 80% de Reb. A mas não resultou em cristalização nas composições de glicosídeos doces preparadas a partir das composições de partida com 60% ou 40% de Reb. A. Um volume adicional de antissolvente foi adicionado às composições de glicosídeos preparadas a partir das composições de partida com 60% ou 40% de Reb. A. O volume adicional do antissolvente etanol fez com que ocorresse cristalização em duas das três amostras preparadas com 60% de Reb. A. O volume adicional do antissolvente etanol não fez com que ocorresse cristalização em qualquer das amostras preparadas com 40% de Reb. A. O volume adicional do antissolvente metanol fez com que ocorresse cristalização nas três amostras preparadas com 40% de Reb. A e nas três amostras preparadas com 60% de Reb. A. Subsequente à cristalização as soluções foram filtradas e as tortas de filtrado resultantes foram lavadas com 2 volumes de etanol. As tortas de filtrado foram então secadas e as tortas secas foram analisadas por HPLC para determinar a composição de glicosídeos. Os resultados estão apresentados na Tabela 3. TABELA 3 Mat. Antissolvente Lavagem Rendimento Rendimento Dulc. Stev. Reb. Reb. Reb. Reb. F Outros de massa de Reb. A A B C 70 2 wt 2 wt 50,1 55,8 0,1 0,0 98,3 1,4 0,0 0,2 0,0 RA80 EtOH EtOH 46,0 51,3 0,1 0,0 98,4 1,4 0,0 0,1 0,0 46,9 52,6 0,1 0,0 98,9 1,0 0,0 0,1 0,0 70 2 wt 2 wt 38,1 42,0 0,1 0,0 97,6 1,8 0,0 0,2 0,3 RA80 MeOH EtOH - - 0,1 0,0 97,7 1,8 0,1 0,2 0,1 --- -- 0,3 0,0 97,6 1,8 0,1 0,2 0,0 70 3 wt 2 wt 57,7 62,7 0,4 0,0 95,5 2,9 0,1 0,2 0,8 RA60 EtOH EtOH 57,5 63,2 0,3 0,0 96,1 2,6 0,1 0,3 0,6 58,9 64,0 - - -- - --- -- 70 3 wt 2 wt 62,0 70,2 0,2 0,0 97,5 1,4 0,1 0,3 0,4 RA60 MeOH EtOH 62,1 70,4 0,3 0,0 97,8 1,1 0,2 0,3 0,3 62,2 70,6 0,4 0,0 97,8 0,9 0,2 0,3 0,3 70 3 wt 65,6 73,5 --- --- -- -- --- --- RA40 EtOH 64,1 72,2 -- - -- - ~ - 64,7 73,2 - -- - -- -- - ~ 70 3 wt 2 vol. 64,2 72,2 0,3 0,0 98,1 0,6 0,2 0,4 0,4 RA40 MeOH EtOH 64,5 72,7 0,2 0,0 98,2 0,6 0,2 0,5 0,3 60,8 68,4 0,6 0,0 97,6 0,6 0,3 0,4 0,4 * Outros = soma dos picos entre Reb. A e Reb. B que se acredita incluir Reb. D e Steviolbiosídeo. EXEMPLO 3

RA 20 (vide, Tabela 1) foi dissolvido em uma solução de 50% de etanol e 50% de água para produzir uma solução contendo 30% em peso de RA 20. A solução foi diluída com 3 pesos de metanol, filtrada, e lavada com 5 dois pesos de metanol. Os cristais constituíram 56% em peso do material original, e foram enriquecidos com esteviosídeo. O filtrado constituiu o equilíbrio do material, e foi enriquecido com Reb. A. A pureza dos cristais resultantes e do filtrado está dada na Tabela 4.

TABELA 4

Dulc Stev Reb. A Reb. B Reb. C Reb. F Outros* Cristais 0,0% 93,2% 3,9% 0,1% 0,5% 0,0% 2,2% Filtrado 0,0% 29,8% 40,8% 60,0% 21,9% 4,1% 2,8% * Outros = soma dos picos entre Reb. A e Reb. B que se acredita incluir Reb. D e Steviolbiosídeo.

EXEMPLO 4

Uma matéria-prima de steviol glicosídeos contendo cerca de 60% em peso de Reb A foi dissolvida em um solvente contendo 65% em 15 peso de etanol e 35% em peso de água para produzir uma solução contendo 56% em peso de steviol glicosídeos. A solução foi aquecida a cerca de 70°C até o ponto em que todos os glicosídeos estavam dissolvidos. Etanol a 100% foi adicionado como antissolvente para que a composição final do solvente fosse 89,3% em peso de etanol. Simultaneamente com a adição de 20 etanol, a solução foi lentamente resfriada durante cerca de 2 horas à temperatura ambiente. Os cristais resultantes foram filtrados da solução e lavados com 2 pesos da torta de etanol a 95%, e foram secados. A torta de filtrado continha 95-97% em peso de Reb A em termos secos. Cerca de 75% do Rebaudiosídeo A na solução foram recuperados na cristalização.

EXEMPLO 5

Uma matéria-prima de steviol glicosídeos contendo cerca de 80% em peso de Reb A foi dissolvida em um solvente contendo 85% em peso de etanol e 15% em peso de água para produzir uma solução contendo 15% em peso de steviol glicosídeos. A solução foi aquecida a cerca de 70°C até o ponto em que todos os glicosídeos estavam dissolvidos. Etanol a 100% foi adicionado como antissolvente para que a composição final do solvente fosse 89,3% em peso de etanol. Simultaneamente com a adição de etanol, a solução foi lentamente resfriada durante cerca de 2 horas à temperatura ambiente. Os cristais resultantes foram filtrados da solução e lavados 5 com 2 pesos da torta de etanol a 95%, e foram secados. A torta de filtrado continha 94-95% em peso de Reb A em termos secos. Mais de 95% do Rebaudiosídeo A na solução foram recuperados na cristalização.

Outras modalidades desta invenção serão evidentes para os versados na técnica levando em consideração este relatório ou a partir da 10 prática da invenção aqui descrita. Variações nas modalidades descritas neste relatório tornar-se-ão evidentes para os versados na técnica depois da leitura deste relatório. Os inventores esperam que os versados na técnica usem tais variações conforme apropriado, e pretendem que a invenção seja praticada de outras formas além daquelas especificamente descritas neste 15 relatório. Por conseguinte, a invenção inclui todas as modificações e equivalentes da matéria apresentada nas reivindicações conforme permitido pela legislação aplicável. Todas as patentes, documentos de patente, e publicações citadas neste relatório estão aqui incorporadas a título de referência como se individualmente incorporadas.

Claims

1. Método de purificação de rebaudiosídeo A a partir de uma mistura de glicosídeos, o método compreendendo as etapas de: (a) fornecer uma composição de partida à base de glicosídeos compreendendo: rebaudiosídeo A; e um ou mais de rebaudiosídeo B, rebaudiosídeo C, rebaudiosídeo D, rebaudiosídeo E, rebaudiosídeo F, steviosídeo, e dulcosídeo; (b) formar uma solução de glicosídeos dissolvendo a composição de partida à base de glicosídeos em um solvente compreendendo: (i) uma mistura de um álcool inferior e água, ou (ii) uma mistura de um ácido carboxílico inferior e água; e (c) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos da etapa (b) em uma quantidade que é eficaz para fazer com que pelo menos uma porção do rebaudiosídeo A cristalize da solução de glicosídeos na forma de uma composição de rebaudiosídeo A purificado.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o método inclui ainda a etapa de semear a solução de glicosídeos da etapa (c) adicionando cristais compreendendo rebaudiosídeo A à solução de glicosídeos.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o método é realizado como um processo de cristalização em batelada.

4. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o método é realizado como um processo de cristalização contínuo.

5. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de partida à base de glicosídeos compreende cerca de 40% em peso ou mais de rebaudiosídeo A.

6. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de partida à base de glicosídeos compreende cerca de 40% a cerca de 80% em peso de rebaudiosídeo A.

7. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de partida à base de glicosídeos compreende cerca de 60% em peso ou menos de rebaudiosídeo A.

8. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de partida à base de glicosídeos compreende cerca de 40% a cerca de 60% em peso de rebaudiosídeo A.

9. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o álcool inferior compreende um C1 a C3 álcool.

10. Método de acordo com a reivindicação 9, em que o C1 a C3 álcool é selecionado de metanol, etanol, n-propanol, i-propanol, ou uma mistura dos mesmos.

11. Método de acordo com a reivindicação 9, em que o C1 a C3 álcool é etanol.

12. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente compreende cerca de 30% a cerca de 70% em peso de C1 a C3 álcool e cerca de 30% a cerca de 70% em peso de água.

13. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente compreende cerca de 40% a cerca de 60% em peso de C1 a C3 álcool e cerca de 40% a cerca de 60% em peso de água.

14. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente compreende cerca de 45% a cerca de 55% em peso de C1 a C3 álcool e cerca de 45% a cerca de 55% em peso de água.

15. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o antissolvente compreende um C1 a C3 álcool, ou uma mistura dos mesmos.

16. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o antissolvente compreende metanol, etanol, i-propanol, n-propanol, acetona, acetato de etila, ou uma mistura dos mesmos

17. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente compreende etanol e água; e em que o antissolvente compreende etanol.

18. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o solvente compreende etanol e água; e em que o antissolvente compreende metanol.

19. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o ácido carboxílico inferior compreende ácido acético, ácido fórmico, ácido propiônico, ou uma mistura dos mesmos.

20. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a massa de antissolvente em relação à massa da solução de glicosídeos varia de cerca de 0,50:1 a cerca de 9:1.

21. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a massa do antissolvente em relação à massa da solução de glicosídeos varia de cerca de 1:1 a 3:1.

22. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a solução de glicosídeos compreende cerca de 15% em peso a cerca de 50% em peso de composição de partida; e cerca de 50% a cerca de 85% em peso de solvente.

23. Método de acordo com a reivindicação 1, incluindo ainda a etapa de recuperar a composição de rebaudiosídeo A purificado por filtração.

24. Método de acordo com a reivindicação 1, incluindo ainda a etapa de lavar a composição de rebaudiosídeo A purificado com um C1 a C3 álcool, ou uma mistura dos mesmos.

25. Método de acordo com a reivindicação 23, em que o álcool é etanol.

26. Método de acordo com a reivindicação 23, em que o álcool é metanol.

27. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 90% em peso ou mais de rebaudiosídeo A.

28. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 95% em peso ou mais de rebaudiosídeo A.

29. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 97% em peso ou mais de rebaudiosídeo A.

30. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 98% em peso ou mais de rebaudiosídeo A.

31. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 2,5% em peso ou menos de rebaudiosídeo B.

32. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 2% em peso ou menos de rebaudiosídeo B.

33. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 1 % em peso ou menos de rebaudiosídeo D.

34. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a composição de rebaudiosídeo A purificado compreende cerca de 0,5% em peso ou menos de rebaudiosídeo D.

35. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o antissolvente é adicionado em uma única adição à solução de glicosídeos.

36. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o antissolvente é adicionado à solução de glicosídeos em várias adições.

37. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o antissolvente é adicionado à solução de glicosídeos continuamente.

38. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a solução de glicosídeos e o antissolvente estão a uma temperatura que varia de cerca de 15°C a cerca de 25°C.

39. Método de acordo com a reivindicação 1, em que a etapa de formação da solução de glicosídeos inclui aquecer o solvente até uma temperatura que varia de cerca de 60° C a cerca de 70° C.

40. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o método inclui ainda a etapa de resfriar a solução de glicosídeos.

41. Método de acordo com a reivindicação 40, em que a etapa de resfriamento da solução de glicosídeos ocorre: (i) antes da adição do antissolvente; (ii) simultaneamente com a adição do antissolvente; (iii) depois da adição do antissolvente; ou qualquer combinação dos mesmos.

42. Método de acordo com a reivindicação 40, em que a solução de glicosídeos é resfriada para uma temperatura que varia de cerca de O0C a cerca de -10°C.

43. Método de acordo com a reivindicação 40, em que a solução de glicosídeos é resfriada a uma taxa que varia de cerca de 1°C/minuto a cerca de 5°C/minuto.

44. Método de enriquecimento de uma composição de glicosídeos em rebaudiosídeo A por cristalização seletiva de steviosídeo usando cristalização com solvente/antissolvente, o método compreendendo as etapas de: (a) fornecer uma composição de glicosídeos compreendendo rebaudiosídeo A e steviosídeo; (b) formar uma solução de glicosídeos dissolvendo a composição de glicosídeos em um solvente compreendendo: (i) uma mistura de um álcool inferior (por exemplo, a C1-C3 álcool) e água, ou (ii) uma mistura de um ácido carboxílico inferior e água; e (c) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos da etapa (b) em uma quantidade que é eficaz para fazer com que pelo menos uma porção do steviosídeo cristalize da solução de glicosídeos formando assim uma composição de glicosídeos que é enriquecida em rebaudiosídeo A.

45. Método de acordo com a reivindicação 44, compreendendo ainda a etapa de: (d) recuperar a composição de glicosídeos enriquecida a partir de solução de glicosídeos da etapa (c).

46. Método de acordo com a reivindicação 45, compreendendo ainda a etapa de: (e) formar uma solução de glicosídeos dissolvendo a composição de glicosídeos doce da etapa (d) em um solvente compreendendo um C1 a C3 álcool e água; e (f) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos da etapa (e) em uma quantidade que é eficaz para cristalizar pelo menos uma porção do rebaudiosídeo A a partir da solução de glicosídeos na forma de uma composição de rebaudiosídeo A purificado.

47. Método de cristalização de steviosídeo usando cristalização com solvente/antissolvente, o método compreendendo as etapas de: (a) fornecer uma composição de glicosídeos compreendendo rebaudiosídeo A e steviosídeo; (b) formar uma solução de glicosídeos dissolvendo a composição de glicosídeos em um solvente compreendendo (i) uma mistura de um álcool inferior (por exemplo, um C1-C3 álcool) e água, ou (ii) uma mistura de um ácido carboxílico inferior e água; e (c) adicionar um antissolvente à solução de glicosídeos da etapa (b) em uma quantidade que é eficaz para fazer com que pelo menos uma porção do steviosídeo cristalize da solução de glicosídeos formando assim um cristal de steviosídeo purificado.

48. Método de lavagem de um sólido que compreende rebaudiosídeo A e rebaudiosídeo D para remover pelo menos uma porção do rebaudiosídeo D da composição sólida, o método compreendendo as etapas de: (a) fornecer um sólido compreendendo rebaudiosídeo A e rebaudiosídeo D; e (b) lavar o sólido com um C1-C3 álcool para remover pelo menos uma porção do rebaudiosídeo D da composição sólida.

49. Método de acordo com a reivindicação 48, em que o C1-C3 álcool é selecionado do grupo que consiste em metanol, etanol, e propanol.

50. Método de acordo com a reivindicação 48, em que o C1-C3 álcool é metanol.