BRPI0616536B1

BRPI0616536B1 - Uso de um éster de ácido hidroxibenzoico

Info

Publication number: BRPI0616536B1
Application number: BRPI0616536-2A
Authority: BR
Inventors: Weihua QIN
Original assignee: Shenghua (Guangzhou) Pharmaceutical Science & Technology Co., Ltd
Priority date: 2005-08-02
Filing date: 2006-07-21
Publication date: 2020-05-26
Also published as: BRPI0616536B8; HUE027244T2; CN1907276A; EA200800467A1; AU2006275232B2; CA2617659C; CY1117480T1; CN100427082C; NZ566153A; JP5473328B2; WO2007014515A1; HK1113747A1; EP1930002A4; PL1930002T3; KR20080036128A; ES2567130T3; DK1930002T3; AU2006275232A1; JP2009502985A; EA016576B1

Abstract

uso de um éster de ácido hidróxi benzóico e seus análogos na manufatura de um medicamento para a prevenção e o tratamento de infecção por vírus. o uso de ésteres de ácido hidróxi banzóico e seus análogos para a manufatura de um medicamento para a prevenção e o tratamento de infecção por vírus, especialmente infecções hbv, hpv e hsv humanas e animais são apresentados, de maneira que a infecção do vírus compreende hb, herpes simplex, condiloma acuminata, vaginites, cervicites e erosão cervical. de qualquer forma, os vários tipos de medicamentos e produtos de enfermagem pessoais que são preparados por ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos e adjuvantes farmacêuticos são fornecidos.

Description

USO DE UM ÉSTER DE ÁCIDO HIDROXIBENZOICO

Campo Técnico

A presente invenção refere-se ao uso de ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos para a manufatura de um medicamento para a prevenção e o tratamento de infecção por vírus. Particularmente, a invenção refere-se ao uso de ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos para a manufatura de um medicamento para o tratamento do vírus de hepatite B, papillomavirus humano e doenças relacionadas ao vírus herpes simplex nos seres humanos e nos animais (tais como hepatite B, condiloma acuminata, herpes simplex, vaginite, cervicite e erosão cervical) e o uso de tal medicamento para auxiliar no tratamento do câncer cervical.

Antecedentes Técnicos

Entre os ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos, os ésteres de ácido p-hidróxi benzóico são utilizados frequentemente como conservantes de alimentos e drogas. O éster de ácido gálico (“ácido 3, 4, 5,-triidróxi benzóico) pode inibir a síntese de tromboxano A2 (TXA2). Ele tem um efeito mais forte e mais rápido contra a agregação de plaquetas do que a aspirina (ASP) e tem sido utilizado em solução para a injeção. Foi demonstrado que o ácido gálico inibe a replicação do vírus de hepatite B (consultar Journa1s of Guangzhou Liberation Army High Specialized School, 1998,26 (2) :5-7).

Até a presente data, não houve nenhum relato do uso de ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos incluindo os ésteres de ácido 3,4,5-triidróxi benzóico para o tratamento de infecção por vírus no ser humano, por exemplo, a infecção por vírus de hepatite B ou da mucosa da pele.

A patente chinesa n°. CN 1411339A e a patente U.S. n°. 6.294.186 descreveram uma composição antimicrobiana. A

Petição 870200033587, de 12/03/2020, pág. 5/10

2/20 composição inclui uma quantidade segura e eficaz de analogos do ácido benzóico, que têm a seguinte estrutura (II):

em que R_lz R₂, R« e Rs são independentemente H, OH, F, I, Br, Cl, SH, NH₂, CN, alquila, alcóxi, NR₂, OR, N0₂, COR, CONR₂,

CO₂R ou SO3R, em que R é independentemente H, alquila ou alcóxi; R₃ é independentemente H, OH, F, I, Br, Cl, SH, CN, alquila, alcóxi, OR, N0₂, COR, CONR₂, CO₂R ou SO₃R, em que R é independentemente H, alquila ou alcóxi. As referências acima mencionadas de patentes também indicaram a realização mais 10 preferida como o ácido salicílico (ácido 2-hidróxi benzóico), o ácido benzóico, ou a combinação destes; elas também limitaram a faixa do pH em que estes compostos poderíam ser utilizados a 1-7.

Embora os vírus sejam os menores microorganismos 15 patogênicos conhecidos, eles se espalham mais extensamente. ' Atualmente, quase três quartos das doenças contagiosas no mundo são causados por vírus. No diagnóstico clinico, muitas doenças estão relacionadas à infecção por vírus.

O condiloma acuminata, também chamado de verruga genital ou verruga venérea, é um crescimento benigno da mucosa da pele induzido pelo papillomavirus humano (HPV). E uma das doenças sexualmente transmitidas mais normalmente observadas e está intimamente relacionada à inflamação e ao

3/20 câncer dos órgãos genitais. Atualmente, a podofilotoxina é uma das drogas para o tratamento da verruga genital. A sua vantagem é o tempo curto do tratamento e a desvantagem é a irritação de pele e efeitos colaterais intensos, incluindo 5 dor, edema, erosão, e assim por diante. O gel de interferon α-2β recombinante é reconhecido como uma droga externa eficaz para o tratamento da verruga genital.

As pesquisas recentes indicaram que 29,3% dos pacientes da erosão cervical apresentaram resultado positivo 10 no teste de HPV enquanto a taxa positiva entre a população normal é de apenas 11,1% (Fuqiang Chen, Tumor Prevention Magazine, 2001, 8 (4) 342-344; Chenkang Xu, Journal of

Zhongshan Medical University, 1998, 19 (3):223-226). Foi relatado que HPV16 e HPV18 de alto risco foram expressos em 15 aproximadamente 69% de pacientes com cervicite crônica; e que esses subtipos foram detectados a taxas crescentes à medida que o grau de erosão cervical aumentou (Ahn ws et al., J Cell Biochere Suppl, 1997 ; 28-29:133-139). A diferença das taxas de detecção de HPV16 e HPV18 entre a erosão granular ou 20 papilar e o cervix normal era significativa. A taxa positiva de HPV16 e HPV18 no câncer cervical podia ser tão elevada quanto 83,33% quando detectada por PCR. O DNA de HPV de alto risco podia se integrar nos cromossomas das células hospedeiras e então produzir proteínas de tumor E6 e E7. As 2’5 proteínas E6 e E7 podiam inibir respectivamente os genes anti-câncer p53 e Rb. Em conseqüência disto, as células deviam perder o controle de p53 e Rb. Isto deve fazer com que as células no estado estável crescessem ativamente e poderíam se tornar cancerosas. Se HPV16 permanecesse nas células, podería transformar as mudanças patológicas do cervix em câncer. Distintamente da infecção das partes pudendas, a infecção do cervix por HPV envolve principalmente HPV 16/18 e normalmente não irá causar verrugas. Irá existir como uma

4/20 infecção latente por muito tempo e induzir a hiperplasia atípica no início e se tornar cancerosa quando os outros fatores forem adicionados.

O vírus de herpes simplex (HSV) é um vírus de DNA de cordão dobro e pode penetrar nos organismos alvo através da boca, da passagem respiratória, da mucosa do trato genital, da pele danificada e muitos outros canais. É uma infecção completamente comum entre os seres humanos e a taxa de infecção é tão elevada quanto 80-90%. Os sintomas típicos 10 incluem aglomerados de bolhas em determinadas partes da mucosa e da pele, enquanto que a doença sistêmica ocasionalmente grave pode ocorrer e causar danos aos órgãos internos. As pesquisas anteriores indicaram que o HSV-1 e o HSV-2 podem ser relacionados separadamente ao câncer dos 15 lábios, ao câncer da vulva e ao câncer do cervix e bastante atenção tem sido prestada a eles (Sunhe, China practical gynaecology and obstetrics journal, 2001, 17 (7):407-409).

Atualmente, as drogas para o tratamento da infecção por HSV incluem idoxuridine, citosina arabinoside, vidarabine, bromovinil, uridina, aciclovir, e assim por diante. Mas ο período de tratamento dessas drogas é bastante longo, de aproximadamente cinco a sete dias.

As drogas antivirais úteis para o tratamento da infecção pelo vírus de hepatite B (HBV) , tais como vidarabine, fosfato de vidarabine, aciclovir e zidovudine, que foram testados nos anos oitenta, não foram mais utilizadas no tratamento da hepatite B devido aos efeitos colaterais intensos e à elevada toxicidade. Recentemente, muitas drogas de nucleoside, tais como lamivudine, famciclovir, lobucavir, adefovir, FTC, FMAU, FDDC, BMS 200475, e assim por diante, foram desenvolvidas e tiveram um efeito inibidor significativo em HBV. Infelizmente, os vírus podem mutar e ficar resistentes às drogas após o uso a longo

5/20 prazo dessas drogas. Além disso, essas drogas precisam ser ingeridas por um longo tempo porque o uso a curto prazo tem apenas um efeito provisório.

Dessa maneira, as pessoas estão sempre pesquisando e desenvolvendo novas drogas para a prevenção e o tratamento da infecção por HBV, HPV e/ou HSV.

Descrição da Invenção

A finalidade principal da presente invenção é a apresentação do uso de ésteres de ácido hidróxi benzóico e 10 seus análogos para a manufatura de um medicamento para a prevenção e o tratamento da infecção por vírus, especialmente para a manufatura de um medicamento para a prevenção e o tratamento de doenças relacionadas com HBV, HPV e HSV nos seres humanos e nos animais.

A presente invenção apresenta ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos ilustrados pela seguinte fórmula geral (I) :

em que, R é o alquila Ci-n; Ri, R2, ^R3 / ^R4 e R5 sao independentemente OH ou H, e pelo menos um de Ri, R2, ^R3, ^R4 e 20 R5 é OH, mas o salicilato é excluído.

De preferência, R é alquila Ci-e, isto é, CH3, C2H5, C3H7, C₄H₉, C_sHu, C₆Hi₃, C₇His, C₈H₁₇; o número mais preferido de átomos de carbono é de um a três, isto é, CH3, C₂H₅ e C₃H₇.

6/20 _R1/ r_2/ r₃, r₄, r₅ contêm de preferência conjuntamente dois ou mais grupos OH, e também contêm de preferência três ou mais grupos OH.

Em determinadas realizações preferidas, os ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos da fórmula (I) incluem os seguintes compostos: éster de ácido 4-hidróxi benzóico; éster de ácido 2,4-diidróxi benzóico; éster de ácido 3,4-diidróxi benzóico; éster de ácido 2,3,4-triidróxi benzóico; éster de ácido 3,4,5-triidróxi benzóico ou éster de 10 ácido 3,4,6-triidróxi benzóico. Em uma realização preferida, os compostos da invenção incluem o éster de ácido 2,3,4triidróxi benzóico, o éster de ácido 3,4,5-triidróxi benzóico e o éster de ácido 3,4,6-triidróxi benzóico. Em uma realização mais preferida, os compostos da invenção incluem o 15 éster de ácido 3,4,5-triidróxi benzóico.

Os compostos da presente invenção e/ou as composições que contêm tais compostos como ingredientes ativos podem ser utilizados para manufaturar medicamentos para o tratamento de doenças relacionadas com vírus nos seres 20 humanos e nos animais, especialmente para o tratamento das doenças relacionadas com HPV, HBV e HSV, incluindo sem limitação, hepatite B, condiloma acuminata, herpes simplex, vaginite, cervicite, erosão cervical e câncer cervical.

Como drogas terapêuticas, os compostos da presente Í5 invenção e/ou as composições que contêm uma quantidade eficaz de tais compostos como ingredientes ativos são os componentes principais dos produtos para a prevenção e o tratamento de infecção por vírus em corpos e peles humanos. Eles não são apenas utilizados como ingredientes adjuvantes tais como 30 conservantes, antioxidantes, e assim por diante. Se o efeito de antivírus de um produto declinar à medida que a concentração dos compostos e/ou das composições que contem tais compostos como ingredientes ativos declinar, eles terão

7/20 agido como ingrediente eficaz para a prevenção e o tratamento de doenças relacionadas a vírus da mucosa da pele* A quantidade eficaz acima mencionada significa a dose na qual tais compostos ou composições podem eliminar ou impedir 5 eficazmente a infecção pelo vírus.

A maior parte dos compostos da presente invenção consiste em compostos conhecidos. Alguns deles têm sido utilizados para a produção de aditivos de alimentos, alguns são adjuvantes farmacêuticos, e alguns sao intermediários 10 farmacêuticos que podem ser comprados no mercado, extraídos de plantas naturais ou então produzidos P^or métodos conhecidos.

Os compostos da presente invenção e/ou as composições que contêm tais compostos, juntamente com vários 15 adjuvantes para a injeção ou formulações orais, podem ser produzidos como pós, solução, comprimidos, cápsulas, grânulos, líquidos, ou outros preparados farmaceuticamente aceitáveis.

Os compostos da presente invenção e/ou as composições que contêm tais compostos, juntamente com vários adjuvantes para formulações para a mucosa da pele, podem ser produzidos em vários preparados, tais como pomadas, géis, líquidos para lavagem, comprimidos, supositórios, diafragmas, sprays ou outros preparados farmaceuticamente aceitáveis.

^5 Os compostos da presente invenção e/ou as composições que contêm tais compostos podem ser utilizados na produção de produtos para cuidados pessoais antivírus. Os produtos para cuidados pessoais incluem, mas sem ficar a eles limitados, soluções para esterilização, sabonetes para as mãos, higienizadores para as mãos, produtos para a limpeza do corpo, géis de limpeza para o corpo, sabonetes para lavar o corpo, lenços para cuidados pessoais, lenços faciais, sprays nasais.

8/20

Um único composto ou uma combinação de mais de um composto da presente invenção podem ser utilizados na manufatura dos medicamentos da presente invenção. O (s) composto(s) pode(m) ser combinado(s) com veículos 5 farmaceuticamente aceitáveis diferentes para facilitar a formação de uma formulação farmaceuticamente aceitável. Esses veículos incluem, mas sem ficar a eles limitados, amido, dextrina, Tween-80, Carbomer, celulose, carbóxi metil celulose, alginato de sódio, glicerina, propanodiol, polietileno glicol, laurocapram, isopropanol, trolamina e

Span 60 (monostearato de sorbitan).

Além disso, quando um único composto ou uma combinação de compostos forem ingredientes ativos, os ingredientes ativos podem ser adicionados em soluções para 15 esterilização, sabonetes para as mãos, higienizadores para as mãos, produtos para a limpeza do corpo, géis para a limpeza do corpo, sabonetes para lavar o corpo, lenços para cuidados pessoais, lenços faciais ou sprays nasais, para matar o vírus na pele.

As formulações e os produtos para cuidados pessoais da presente invenção podem ser produzidos com métodos convencionais conhecidos neste campo.

Os compostos e/ou as composições que contêm tais compostos podem matar ou prevenir eficazmente os vírus HPV Í5 6/11, 16/18, podem ser utilizados para manufaturar medicamentos para o tratamento da infecção pelo vírus HPV, para o tratamento de condiloma acuminata, vaginite, cervicite, erosão cervical, e auxiliar no tratamento do câncer cervical. A presente invenção utiliza PCR fluorescente 3 0 quantitativa em tempo real para detectar a quantidade de HPV na amostra para selecionar os compostos e seus efeitos de tratamento. Esse método foi relatado em diversas publicações (Youling, Cai, Prevention of Chinese venereal disease and

9/20

cancer, 2002, 8:2, 108; Yuansheng, Wu, Ruiqiang, Qu,

Practical Chinese and western medicine clinics, 2003, 3:2, 1) .

A linhagem de células de tumor do fígado 2.2.15 que pode ser cultivada in vitro por um longo tempo é o modelo de ensaio de célula mais comumente utilizado para a hepatite B. Ela é utilizada na presente invenção para testar o efeito dos compostos da presente invenção sobre a secreção de célula de HBsAg e HBeAg. Os resultados indicam que o efeito de ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos da presente invenção é melhor do que aquele do ácido hidróxi benzóico e seus análogos.

Alguns dos compostos da presente invenção são aditivos de alimentos que são atóxicos em sua faixa de 15 dosagem. Os testes clínicos dos pacientes infectados por HPV ou HSV revelaram que os ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos têm um melhor efeito curativo na infecção pelo vírus do que o ácido hidróxi benzóico e os seus análogos.

Os ésteres de ácido hidróxi benzóico são mais estáveis do que o ácido hidróxi benzóico. As experiências demonstraram que o gaiato de propila era mais estável do que o ácido gálico, especialmente quando está na condição alcalina fraca do corpo humano (pH 7,4) ou na condição alcalina intestinal (pH 8,6). A solução de ácido hidróxi ^5 benzóico mudou de incolor para amarelo em um período de tempo mais curto do que o éster de ácido hidróxi benzóico sob a condição de um pH de 6,8-8,6, tal como mostrado por espectrofotometria.

Entrementes, a atividade antiviral de um éster de ácido hidróxi benzóico é mais elevada do que aquela de seu ácido correspondente. Por exemplo, a atividade antiviral do gaiato de propila é aproximadamente uma vez mais alta do que aquela do ácido gálico. Os dados mostrados nos exemplos do

10/20 presente pedido de patente demonstraram que os ésteres de ácido hidróxi benzóico não tiveram o mesmo efeito que os prómedicamentos de ácido hidróxi benzóico. Portanto, os compostos da presente invenção podem ser produzidos como 5 drogas antivirais ou como produtos para cuidados pessoais com as vantagens de uma qualidade controlada e um efeito curativo marcante.

Exemplos interpretados

Os seguintes exemplos são fornecidos para ilustrar 10 ainda mais a presente invenção e não devem ser como limitadores do âmbito da invenção.

Os materiais (> 99¾ ^do conteúdo) presente invenção e seus fornecedores são tal como seg Materiais ---------------ácido p-hidróxi benzóico_________ p-hidróxi benzoato de etila _____ ácido 2,3-diidróxi benzóico _

2.3- diidróxi benzoato de metila__ ácido 2,4-diidróxi benzóico _

2.4- diidróxi benzoato de metila _ ácido 3,4-diidróxi benzóico __

3.4- diidróxi benzoato de metila _ ácido 2,3,4-triidróxi benzóico utilizados na ácido gálico _____________________________ gaiato de propila_____________________ gaiato de etila gaiato de octila gaiato de dodecila gel de interferon α-2β humano recombinante ácido poliinosínico

Fornecedores___-Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd,----------GuangZhou Gases Factory Co·, Ltd,—----------Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd,------------Taizhou Zhongda Chemical Co·, Ltd,------------Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd.------------Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd,------------Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd,_------—

Tairhnu ZhongdaChemicalCo^Ltd, ~ “Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis

Factory_________——,------Zheijang Ouhai Chemical Reagent Co., Ltd,------I ianyungang Honggi Chemical Plant— — —__ Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis ‘Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis' Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis' Factory ________________——-----.^11 i-FilNG USTC Pharmaceutical Co·, Ltd,------_

Guangdong Kaiping Biochemical Phaimaceuhcal Co„ Ltd.

de micro emulsão anti-HPV

Exemplo 1. Preparação ml de 1,2-propileno glicol, 15 ml de azona foram misturados entre si, apropriada de água destilada esteril foi obter 100 ml da solução para uso externo, dentre ácido benzóico, ácido . ml de Tween-80 e e uma quantidade adicionada, para 10 g de cada um uma combinação de salicílico, ácido benzóico e ácido salicílico, ácido p-hidróxi benzóico,

11/20

2,4-diidróxi benzoato gálico, propila, benzoato ácido ácido 3,4-diidróxi benzóico,

3,4-diidróxi benzoato de metila, dodecila, gaiato de octila, etila, gaiato de metila, foram adicionados em 50 respectivamente.

5,5. Uma quantidade a foi então adicionada, para obter 100 ml de contendo 10% dos compostos ZXX^^de contém gaiato de joropila g

sódio, 10 ml de foram misturados

2,3-diidróxi benzóico, ácido p-hidróxi ácido gaiato de 2,4-diidróxi ml da solução para uso foi benzóico, de etila, gaiato de gaiato de de metila externo, ajustado em

O valor do pH da solução .propriada da solução para uso externo uma microemulsão da presente invenção ou o grupo de

8,5 g de cloreto de de Tween-80 estéril até solução foi filtrada, de gaiato de propila,

1,2-propileno glicol e 10 ml e dissolvidos em água destilada . ί 100 ml O valor do pH da um volume final de 10U mi

- ’*· “ZT/.-OpoT/rÍt/lutos, para encapsulada e esterilizada a 100 c p obter . scluOu P>« ^á= Λ „„té, galato_de_etila n 01 9 de ácido

0,25 g de gaiato de etila, 0,01 g rr o 45 q de ácido tartárico foram peneirados -i. so sap— — “ materiais moles com etanol a 95 de um crivo de malha 12. As secadas a

0,02 g de entre si peneirado e então peneirados através partículas molhadas obtidas foram _so.c «,« 9 de c.rhc.to de .«die MM.n.Po, e »su. ae.tll.de =«4.11 “’“7“

p.r. proa«lr o a.teH.1 ί'-', ο φ»1 » através de um crivo de malhe 12, e secado a

50°C.

pr^ia.. * ^S9“ ^a“^tllad‘

12/20 foi adicionada à mistura,

PEG6000 e transformada em

Exemplo 4 . Seleção--da f1nnrescente quantitativa aquecida, misturada com 0,01 comprimidos efervescentes.

droga atravê s da anã1i se g de

PCR no Exemplo 1 foram água em solução salina de c ond i1oma acuminata

As amostras foram

Amostras

As microemulsões obtidas utilizadas como amostras de teste, e a foi utilizada como controle.

Amostras de HPV:as amostras foram tiradas de pacientes clínicos, lavadas com água em solução salina para removerão sangue^ foram cortadas em partes sob condrçoes ^esterers, misturadas com três vezes o volume da água em θθ¹”]]] ' = α -40°C para uso adicionai, homogeneizadas e armazenadas a 40 P Tabela 1. Resultados dos testes para a análise PCR fluorescente quantitativa seguida

Compostos de teste___

Controle ____ ácido benzóico ________— ácido salicílico----ácido benzóico e ácido salicílico______ _—-ácido p-diidróxi benzóico_____ p-diidróxi benzoato de etila___ ácido 3,4-diidróxi benzóico___ ’ p-diidróxi benzoato de metila__________ ácido gálico___ gaiato de dodecila__ gaiato de octila ---------gaiato de propila-----------gaiato de etila gaiato de metila_____________ ácido 2,3-diidróxi benzóico__ ácido 2,4-diidróxi benzóico__ ' 2,4-diidróxi benzoato de metila----------------yÍKTs~HPy 6/11 (cópias/mlj 7,45x10] ZZ--3,60x10]__ ~5?5077θ] Z_______

2.90 x 1Õ⁵

7,00 x 10 ~8,50x 10] _______

1.90 x 10] _______ “8,50 x 1Õ*

0_______

6,70 x 1CT £_______.

0__

ΊΖΓοχ 10^

1,60 x <

5,20 x 10^

Em seleção de droga pela de HPV ~7νϊ7ϊΓΗΡ\Η67^^

1,40x10] --------“2,90 x 10] -----------~2,60x 10]__4,50 xTO⁴

1,30x~10^a -------_0__^ ______—

8,50x10 ---------6,00 X 1Õ²

0__________

4,90 x 10 _0_______

TüõxTtr

4,60 X 1Õ³‘2,5x wát-.odos experimentais j_Qnb_rP o

-----“TTTuma microemulsão de cada um dentre teste ou 50 μΐ de água em solução salina foram em 50 μΐ de homogenate de uma amostra de HPV.

composto de adicionados

13/20 mistura foi incubada em um banho quente a 37°C por 24 horas. Em seguida, a quantidade de DNA de HPV 6/11 e HPV 16/18 for detectada utilizando o kit de diagnóstico FQ-PCR adquirido junto à Da An Gene Diagnostics Center. 0,2 ml de DNA for 5 extraído de cada amostra pelo método convencional de divagem com álcali e colocado em um tubo de parede fina. Uma quantidade apropriada de primers, F-PROBE, DNTP, Polimerase de DNA e soluções tampão foram adrcronados ao tubo. For utilizada uma máquina de PCR fluorescente quantitativa ABI 10 PRISM™7700. A reação foi realizada sob as seguintes condições: desnaturação inicial a 93°C por dois minutos; mais desnaturação e recozimento a 93°C por 45 segundos e a 55°C por 120 segundos, repetir o ciclo por 40 vezes. Finalmente, o resultado foi analisado e calculado pelo computador e mostrado na Tabela 1. Resultados experimentais horas depois de teste, nenhum HPV 6/11 PCR quando gaiato de octila, etila, gaiato de metila, ácido gálico foram testados, grupo do p-hidróxi benzoato de detectado, tampouco. Mas o HPV com o ácido p-hidróxi benzóico. 15/18 foi detectada nos testes metila e 3,4-diidróxi benzoato grandes quantidades de HPV 6/11 e nos testes com ácido benzóico, ácido benzóico e ácido salicílico, ácido 3,4-diidróxi benzóico. Os os compostos da presente invenção O número e mistura dodecila mostraram no grupo de controle salicílico gaiato de resultados poderiam eliminar HPV de á t omos de carbono hidróxi benzóico deve de de ou ter sido adicionado o composto HPV 16/18 foi detectado por FQ. gaiato de propila, gaiato de Para o etila, o HPV 16/18 não foi 16/18 foi detectado no teste Uma pequena quantidade de HPV com

2,4-düdróxi benzoato de metila. Por outro lado, de e HPV 16/18 foram encontradas ácido que eficaz e rapidamente in vitro.

da alquila do álcool de éster de acido ser menor do que doze.

14/20

Exemplo 5. Uso clínico de éster ácido hidróxi_benzôico—no tratamento de condiloma acuminata

Padrões de diagnóstico

Os seguintes padrões foram extraídos do Handbook for Venereal Disease Prevention and Treatment, segunda edição, publicado pelo Health and Epidemic Prevention Bureau of the Ministry of Health of the People's Republic of China.

A hiperplasia mole com forma de bocal ou couve-flor ou verrugas com outras formas foram encontrados em torno da pele do cunnus ou ânus. O resultado do teste branco com ácido de acetato a 5% foi positivo.

Padrões de seleção dos pacientes

Os pacientes selecionados para a observação clínica devem satisfazer os padrões acima. Além disso, o diâmetro de suas lesões de pele deve ser igual ou menor do que 1 cm. Adicionalmente, os pacientes não tiveram nenhum tratamento para a doença nas duas semanas anteriores ã observação. Os pacientes que tinham fungo, trichomoniasis, a infecção por bactérias ou outras complicações, doenças crônicas, doenças graves do fígado e rins, ou mulheres na gravidez ou lactação não foram selecionados. Os tratamentos para as mulheres nao deveriam ser realizados em seus períodos menstruais.

Métodos experimentais

Cinqüenta pacientes qualificados foram selecionados e divididos aleatoriamente em cinco grupos para os testes com ácido p-hidróxi benzôico, ácido gálico, p-hidróxi benzoato de etila, gaiato de propila e gel de interferon α-2β humano recombinante, respectivamente. As amostras de ácido p-hidróxi benzôico, ácido gálico, p-hidróxi benzoato de etila e gaiato de propila foram preparadas tal como descrito no Exemplo 1. Os pacientes foram tratados com a amostra de teste nas áreas afetadas três vezes um dia, de manhã, ao meio-dia e à noite. As amostras foram aplicadas para cobrir as verrugas e foi

15/20 pedido para os pacientes deixarem as áreas tratadas expostas e não se moverem por vinte minutos.

Critérios para o efeito do tratamento:

Tempo da observação: oito dias. Os pacientes não curados depois de oito dias continuaram a usar as amostras de teste por outras doze semanas, e o seu prognóstico foi seguido durante o período de doze semanas.

Itens observados: a posição, a forma, o tamanho e o número das verrugas foram observados cuidadosamente e anotados antes do tratamento.

Recuperado: todas as lesões da pele desapareceram; Efeito Óbvio: mais de 70% das lesões da pele desapareceram; Melhorado: mais de 30% das lesões da pele desapareceram; Não eficaz : menos de 30% das lesões da pele desapareceram ou as lesões da pele originais não mudaram nem aumentaram.

Os resultados mostraram que o gel de interferon α2β humano recombinante que foi considerado como a melhor droga no tratamento de condiloma acuminata ainda levou pelo menos quatro semanas para eliminar as verrugas. A análise estatística mostrou que o efeito do p-hidróxi benzoato de etila e do gaiato de propila era significativamente melhor do que aquele do ácido p-hidróxi benzóico e do ácido gálico. Quando comparado ao gel de interferon α-2β humano recombinante, o p-hidróxi benzoato de etila e o gaiato de propila tiveram um efeito mais aparente. Adicionalmente, os compostos da presente invenção não causaram nenhuma irritação óbvia da pele. O único efeito colateral foi que alguns pacientes puderam experimentar ocasionalmente uma sensação de ardência quando os compostos foram utilizados.

Tabela 2. Resultados do uso clínico dos compostos para o tratamento de condiloma auminata

16/20

---------T	Recuperado	Efeito óbvio	Melhorou	Não eficaz
---- -	1-4 dias	5-8 dias	1-4 dias	5-8 dias
ácido gálico	2		3	1	4
gaiato de propila	7	1	2
ácido p- hidróxi benzóico				5	2	3
p-hidróxi benzoato de etila	6	2	2
interferon α2β humano recombinante	0 período mais curto de tratamento é de quatro semanas.

Exemplo 6. Efeito da inibição do análogo de éster de ácido hidróxi benzóico na secreção de HBsAg pela linhagem de células B 2.2.15 de hepatite

Materiais experimentais

A linhagem de células B 2.2.15 de hepatite foi transfectada por DNA de HBV (adquirido junto ao Institute of Biochemistry and Cell Biology of Shanghai Institute for Biological Sciences ou ao National Center for Drug Screening) e utilizada como o modelo de célula para a seleção de 10 compostos de droga anti-HBV (consultar Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine on Liver Diseases, 2004, 14(3):158). 0 meio de cultura de células DMEM (GIBCO Company), soro fetal de bovino (Hangzhou Siji Qing Biochemical Manufacturer), G418 (GIBCO Company), brometo de 15 3 -(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (Sigma), kit de diagnóstico HBsAg e HBeAg (Shangai Kehua Bio-engineering Co., Ltd.).

Métodos experimentais

De acordo com os resultados de testes de toxicidade, os análogos de ácidos hidróxi benzóico do éster listados na Tabela 3 abaixo foram dissolvidos em uma mistura que contém 20 ml de 1,2-propileno glicol e 15 ml de Tween-80, e diluídos com água em solução salina estéril a 2 pmol/ml do composto de teste. A seguir, foram misturados com o meio de

17/20 cultura de células em um volume igual para obter uma solução que contém 1 pmol/ml do composto testado. As células a uma concentração de células de lxlO⁵ por mililitro foram inoculadas a uma placa de 24 cavidades a 1 ml/cavidade. 0 sobrenadante da mistura da cultura de células foi coletado três dias mais tarde para os testes. Os resultados das taxas de inibição de HBsAg e HBeAg foram listados na Tabela 3. Resultados experimentais

Ácido gãlico, gaiato de propila, ácido 3,4-diidróxi benzóico, 3,4-diidróxi benzoato de etila tiveram um efeito de inibição na secreção de HBsAg e HBeAg pelas células 2.2.15. A inibição pelo gaiato de propila e pelo 3,4-diidróxi benzoato de etila foi mais eficaz do que aquela pelo ácido gálico e pelo ácido 3,4-diidróxi benzóico.

Tabela 3. 0 efeito do ácido hidróxi benzóico e seu éster na secreção de HBsAg e HBeAg por células 2.2.15

	HBsAg________		HBeAg	_
Grupos	Taxa de inibição	Valor P	Taxa de inibição	Valor P
Controle	0		0	..
Ácido gálico	8,83%	<0,05	9,40% __	<0,05
Gaiato de propila	18,83%	<0,01	12,04%	<0,05
Ácido 3,4- diidróxi benzóico	9,81%	<0,05	8,92%	<0,05
3,4-diidróxi benzoato de etila	14,20%	<0,01	6,04%	<0,06

Nota: O software SPSS foi utilizado para a análise estatística e o teste T_________

Exemplo 7. Tratamento externo da infecção por HSV em testes clínicos

Vinte e dois pacientes que foram diagnosticados clinicamente com infecção por HSV foram selecionados aleatoriamente e divididos em dois grupos. Uma pomada de Aciclovir e uma microemulssão contendo gaiato de propila preparada tal como descrito no Exemplo 1 foram aplicadas aos dois grupos, respectivamente, nas áreas afetadas dos pacientes três vezes ao dia.

18/20

Os resultados mostraram que o tempo médio para a recuperação utilizando o gaiato de propila era três dias, ao passo que o tempo médio para a recuperação para o tratamento com a pomada de aciclovir era de 5,5 dias. A microemulsão de gaiato de propila foi mais eficaz do que a pomada de aciclovir no tratamento da infecção por HSV.

Exemplo 8. Preparação de produto de limpeza líquido para as mãos

Sulfato de miristila sódico, 1,2-propileno glicol, 4-cloro-3,5-dimetil fenol, triclosan e material de fragrância foram misturados entre si de acordo com a relação listada na Tabela 4 abaixo, e água foi adicionada a mistura até 5%. A mistura foi aquecida então até 8 0 °C com agitação até os ingredientes ficarem completamente dissolvidos. A solução resultante foi resfriada até a temperatura ambiente, pHidróxi benzoato de etila foi adicionado e dissolvido na solução com agitação. 0 valor do pH da solução foi ajustado em 5,0 com NaOH ou HC1. Água destilada estéril foi então adicionada para obter o produto.

Tabela 4. Preparação de produto de limpeza líquido para as mãos

Ingredientes (% em peso	6	7	8	9	10
Sulfato de miristila sódico	-	5,00	5,00		5,00
1,2-propileno glicol	20,00 (v/v)	20,00 (v/v)	20,00 (v/v)	20,00 (v/v)	20,00 (v/v)
p-hidróxi benzoato de etila	1,00	5,00	8,00	4,00	-
NaOH / HCI	até o pH 5,0	até o pH 4,5	até o pH 4,0	até o pH 6,5	até o pH 6,0
4-cloro-3,5dimetil fenol	1,50 ^R	-	-		-
triclosan	-	0,25	1,00	*	1,00
material de fragrância	1,0	1,0	-	1,0	1.0
água destilada estéril	até 100%	até 100%	até 100%	até 100%	até 100%

Exemplo 9. Teste de estabilidade do gaiato de propila e do ácido gálico

19/20 ml de 1,2-propileno glicol, 15 ml de Tween-80 e 5 ml de azona foram misturados entre si, e água destilada estéril foi adicionada para aumentar o volume para 100 ml. O valor do pH da solução foi ajustado em um pH 6,8 com NaOH ou HC1 para obter uma microemulsão. 10 g de gaiato de propila e 10 g de ácido gãlico foram dissolvidos na microemulsão, respectivamente, e bem misturados. 10 ml de cada microemulsão foram adicionados a um tubo de vidro transparente tampado. Ambas as soluções eram incolores. A absorvência das duas soluções a 400-500 nm foi medida com espectrofotometria e a sua absorvência era inferior a 0,15. Depois que as duas soluções foram mantidas à temperatura ambiente por trinta dias, a solução de ácido galico mudou para marrom claro, ao passo que a solução de gaiato de propila permaneceu incolor. Medida por espectrofotometria outra vez, a absorvência da solução de ácido galico era de 1,2 e a da solução de gaiato de propila era de 0,4. Ela revelou que o gaiato de propila era mais estável em solução do que o ácido galico.

Utilidade Industrial

Os ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos da presente invenção podem ser utilizados na preparação de composições farmacêuticas para a prevenção e o tratamento de infecção por vírus, especialmente para as doenças associadas com a infecção por HBV, HPV ou HSV nos seres humanos e nos animais, tais como hepatite B, herpes simplex, condiloma acuminata, vaginite, cervicite e erosão cervical. Os ésteres de ácido hidróxi benzóico e seus análogos descritos na presente invenção são mais eficazes e estáveis do que o ácido hidróxi benzóico conhecido e seus análogos. O éster de ácido hidróxi benzóico e seus análogos podem ser produzidos em vários medicamentos e produtos para cuidados pessoais quando preparados conjuntamente com adjuvantes farmacêuticos.

20/20

A presente invenção foi descrita acima em detalhes em termos gerais e em exemplos específicos. Um elemento versado na técnica pode facilmente fazer algumas modificações ou melhorias com base na descrição neste pedido de patente.

Portanto, as modificações e as melhorias correspondentes baseadas na presente invenção estão dentro do âmbito da presente invenção.

Claims

1. USO DE UM ÉSTER DE ÁCIDO HIDROXIBENZOICO, tal como indicado na fórmula (I) abaixo:

caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para a prevenção e o tratamento de infecção por HPV humano ou animal, condiloma acuminata induzida por HPV, erosão cervical em pacientes HPV positivo, cervicite crônica em pacientes HPV positivo ou para auxiliar no tratamento do câncer cervical, em que R é um grupo alquila Ci-u; Ri, R₂, Rs, R4 e Rs são independentemente OH ou H; e pelo menos dois deles são OH..

2. USO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo dito R ser um grupo alquila Ci-s.

3. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato dito R ser um grupo alquila C1-3.

de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por pelo menos três dos ditos Ri, R₂, Rs, R

4 e Rs serem OH.

5.

USO de acordo com a reivindicação caracterizado pelo dito éster de ácido hidroxibenzoico ser selecionado do grupo que consiste em éster de ácido 2,4diidróxibenzóico, éster de ácido 3,4-diidróxibenzóico, éster

Petição 870200033587, de 12/03/2020, pág. 6/10

2/2 de ácido 2,3,4-triidróxibenzóico, éster de ácido 3,4,5 triidróxibenzóico e éster de ácido 3,4,6-triidróxibenzóico.

6. USO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo dito éster de ácido hidroxibenzoico ser selecionado do grupo que consiste em éster de ácido 2,3,4triidróxibenzóico, éster de ácido 3,4,5-triidróxibenzóico e éster de ácido 3,4,6-triidróxibenzóico.

7. USO, de acordo com as reivindicações 5 e 6, caracterizado pelo dito éster ácido hidroxibenzoico ser o éster de ácido 3,4,5-triidróxibenzóico.

8. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo dito composto e/ou uma composição compreendendo tal composto como um ingrediente ativo ser/serem produzido(s) como um pó, uma solução, comprimidos, cápsulas, grânulos ou líquidos com vários adjuvantes para a injeção ou a formulação oral, ou produzidos como uma pomada, um gel, uma loção, comprimidos, supositórios, diafragmas ou spray com vários adjuvantes para a formulação da mucosa da pele, ou uma outra formulação farmaceuticamente aceitável.

9. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo dito composto e/ou composição compreendendo tal composto como um ingrediente ativo ser/serem utilizado(s) como produtos para cuidados pessoais, em que tais produtos para cuidados pessoais são sabonetes para as mãos, higienizadores para as mãos, produtos de limpeza para o corpo, géis de limpeza para o corpo, sabonetes para lavar o corpo, lenços para cuidados pessoais, lenços faciais, sprays nasais ou as combinações destes.