JP2009502985A

JP2009502985A - ウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよび類似体の使用

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Publication number: JP2009502985A
Application number: JP2008524341A
Authority: JP
Inventors: チンミンジャン，; ウエイホアチン，
Original assignee: ションホア（グアーンジョウ）ファーマスーティカルサイエンスアンドテクノロジーカンパニーリミテッド
Priority date: 2005-08-02
Filing date: 2006-07-21
Publication date: 2009-01-29
Anticipated expiration: 2026-07-21
Also published as: BRPI0616536B8; UA90159C2; EP1930002A1; SI1930002T1; CA2617659C; EP1930002B1; NZ566153A; IL189162A0; WO2007014515A1; MX2008001673A; CA2617659A1; EP1930002A4; JP5473328B2; IL189162A; ES2567130T3; ZA200801635B; HUE027244T2; CY1117480T1; EA200800467A1; CN100427082C

Abstract

ウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用であって、特に、ヒトおよび動物におけるＨＢＶ、ＨＰＶまたはＨＳＶ感染に使用される。これらウイルス感染は、Ｂ型肝炎、単純ヘルペス、尖圭コンジローマ、膣炎、子宮頸管炎および子宮頸部びらんである。その他、ヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体および補助薬によって調整された種々の薬剤やパーソナルケア商品が提供される。
【選択図】なし

Description

本発明は、ウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用に関する。特に、本発明は、ヒトおよび動物におけるＢ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルスおよび単純ヘルペスウイルス関連疾患（Ｂ型肝炎、尖圭コンジローマ、単純ヘルペス、膣炎、子宮頸管炎および子宮頸部びらん等）の治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用、ならびに子宮頸癌の治療を助けるためのかかる薬剤の使用に関する。

ヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の中で、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが、食品および薬物保存料として、しばしば使用された。没食子酸エステル（「３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステル」）は、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）の合成を阻害することができる。これは、血小板凝集に対して、アスピリン（ＡＳＰ）よりも強力で速い効果を有し、注射用溶液中で使用されてきた。没食子酸は、Ｂ型肝炎ウイルス複製を阻害することが証明されている（ＪｏｕｒｎａｌｓｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＬｉｂｅｒａｔｉｏｎＡｒｍｙＨｉｇｈＳｐｅｃｉａｌｉｚｅｄＳｃｈｏｏｌ、１９９８年、２６（２）：５〜７頁参照）。今までのところ、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステルを含むヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体を使用してヒトにおけるウイルス感染、例えばＢ型肝炎または皮膚粘膜ウイルス感染を治療することは、報告されていない。

中国特許第ＣＮ１４１１３３９Ａ号および米国特許第６，２９４，１８６号は、抗菌組成物を開示している。組成物は、安全かつ有効な量の安息香酸類似体を含み、これは以下の構造（ＩＩ）を有する。

式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４およびＲ_５は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＳＨ、ＮＨ_２、ＣＮ、アルキル、アルコキシ、ＮＲ_２、ＯＲ、ＮＯ_２、ＣＯＲ、ＣＯＮＲ_２、ＣＯ_２ＲまたはＳＯ_３Ｒであり、ここでＲは、独立して、Ｈ、アルキルまたはアルコキシであり、一方Ｒ_３は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＳＨ、ＣＮ、アルキル、アルコキシ、ＯＲ、ＮＯ_２、ＣＯＲ、ＣＯＮＲ_２、ＣＯ_２ＲまたはＳＯ_３Ｒであり、ここでＲは、独立して、Ｈ、アルキルまたはアルコキシであった。前述の特許参考文献は、最も好ましい実施形態を、サリチル酸（「２−ヒドロキシ安息香酸」）、安息香酸またはそれらの組合せとして指摘し、これらの化合物を使用することができるｐＨ範囲も、１〜７に限定した。

ウイルスは最も小さい公知の病原性微生物であるが、それらは最も広く蔓延する。今日では、世界の伝染性疾患のほぼ４分の３がウイルスによって引き起こされる。臨床上の診断において、多くの疾患がウイルス感染に関連する。

尖圭コンジローマは性器疣贅または性病性疣贅とも呼ばれ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によって誘導される良性の皮膚粘膜増殖である。これは最も頻繁に見られる性感染症の１つであり、生殖器の炎症および癌に密接に関連している。現在、ポドフィロキシンが、性器疣贅を治療するための薬物の１つである。その利点は、治療期間が短いことであり、不利な点は、皮膚刺激、および疼痛、浮腫、びらん等を含む深刻な副作用があることである。組換えインターフェロンα−２βゲルは、性器疣贅を治療するための効果的な外用薬として認識されている。

最近の研究から、子宮頸部びらんの患者の２９．３％が、ＨＰＶ陽性であると試験されたが、正常な集団中の陽性率はわずか１１．１％であることが示された（ＦｕｑｉａｎｇＣｈｅｎ、ＴｕｍｏｒＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎＭａｇａｚｉｎｅ、２００１年、８（４）３４２〜３４４頁、ＣｈｅｎｋａｎｇＸｕ、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｈｏｎｇｓｈａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９８年、１９（３）：２２３〜２２６頁）。慢性子宮頸管炎患者の約６９％において、高リスクＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８が発現されたこと、および子宮頸部びらんの程度が増大すると、増加する割合でこれらのサブタイプが検出されたことが報告されている（Ａｈｎｗｓ他、ＪＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍＳｕｐｐｌ、１９９７年；２８〜２９：１３３〜１３９頁）。顆粒状または乳糖状びらんと正常な子宮頸部との間のＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８の検出率の違いは有意であった。子宮頸癌におけるＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８の陽性率は、ＰＣＲによって検出した場合、８３．３３％と高くあり得た。高リスクＨＰＶのＤＮＡは、宿主細胞の染色体に組み込むことができ、その際、Ｅ６およびＥ７腫瘍タンパク質を生成することができた。Ｅ６およびＥ７は、それぞれ、抗癌遺伝子ｐ５３およびＲｂを阻害することができた。結果として、細胞はｐ５３およびＲｂの制御を失い、定常状態の細胞の活発な増殖を引き起こして、癌性になることがあろう。細胞中にＨＰＶ１６が残る場合、これは子宮頸病変を癌に変えることができた。外陰部感染と異なり、子宮頸ＨＰＶ感染は主にＨＰＶ１６／１８を伴い、通常、疣贅を引き起こさない。これは長時間潜伏感染として存在し、最初に異型過形成を誘導し、他の因子が加わったときに癌性になる。

単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）は二本鎖ＤＮＡウイルスであり、口、呼吸経路、生殖路粘膜、損傷を受けた皮膚および多くの他の経路によって、標的生物に入ることができる。これはヒトの間で極めて一般的な感染であり、感染率は８０〜９０％と高い。典型的な症状としては、粘膜および皮膚のある部分での水疱の集まりが挙げられるが、時々、深刻な全身性疾患が起こる場合があり、内臓を害する。以前の研究者らは、ＨＳＶ−１およびＨＰＶ−２が、別々に、口唇癌、外陰癌および子宮頸癌に関連するかもしれないと示し、それらに多くの関心が集まった（Ｓｕｎｈｅ、Ｃｈｉｎａｐｒａｃｔｉｃａｌｇｙｎａｅｃｏｌｏｇｙａｎｄｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓｊｏｕｒｎａｌ、２００１年、１７（７）：４０７〜４０９頁）。現在、ＨＳＶ感染を治療するための薬物としては、イドクスウリジン、シトシンアラビノシド、ビダラビン、ブロモビニル、ウリジン、アシクロビル等が挙げられる。しかし、これらの薬物の治療時間は非常に長く、約５〜７日間である。

ビダラビン、ビダラビンリン酸、アシクロビルおよびジドブジン等の、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を治療するのに有用な抗ウイルス薬は、１９８０年代に試されているが、深刻な副作用および高い毒性のために、Ｂ型肝炎の治療にはもはや使用されていない。最近、ラミブジン、ファムシクロビル、ロブカビル、アデホビル、ＦＴＣ、ＦＭＡＵ、ＦＤＤＣ、ＢＭＳ２００４７５等の多くのヌクレオシド薬が開発され、それらは、ＨＢＶに対して有意な阻害効果を有した。不幸にも、ウイルスは変異することがあり、これらの薬物の長期使用の後に薬物耐性になることがある。さらに、これらの薬物は短期間の使用では一時的効果しか有さないため、長期間摂取する必要がある。

したがって、ＨＢＶ、ＨＰＶ及び／又はＨＳＶ感染を予防および治療するための新薬が、常に研究および開発されている。

本発明の主な目的は、ウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のため、特に、ヒトおよび動物におけるＨＢＶ、ＨＰＶ及び／又はＨＳＶ関連疾患の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用を提供することである。

本発明は、以下の一般式（Ｉ）によってあらわされるヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体を提供する。

式中、ＲはＣ_１−１１アルキルであり、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５は、独立して、ＯＨまたはＨであり、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５の少なくとも１つはＯＨであるが、サリチル酸塩は排除される。

好ましくは、ＲはＣ_１−８アルキル、すなわちＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、Ｃ_３Ｈ_７、Ｃ_４Ｈ_９、Ｃ_５Ｈ_１１、Ｃ_６Ｈ_１３、Ｃ_７Ｈ_１５、Ｃ_８Ｈ_１７であり、最も好ましい炭素原子の数は１〜３、すなわち、ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５およびＣ_３Ｈ_７である。

Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５は、ともに、好ましくは、２つ以上のＯＨ基を含み、さらに好ましくは３つ以上のＯＨ基を含む。

ひとつの好ましい実施形態において、式（Ｉ）のヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体としては、以下の化合物が挙げられる。４−ヒドロキシ安息香酸エステル、２，４−ジヒドロキシ安息香酸エステル、３，４−ジヒドロキシ安息香酸エステル、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸エステル、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステルまたは３，４，６−トリヒドロキシ安息香酸エステルである。好ましい実施形態において、本発明の化合物としては、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸エステル、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステルおよび３，４，６−トリヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。最も好ましい実施形態において、本発明の化合物としては、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。

本発明の化合物及び／又はかかる化合物を有効成分として含む組成物を用いて、ヒトおよび動物におけるウイルス関連疾患の治療のため、特に、Ｂ型肝炎、尖圭コンジローマ、単純ヘルペス、膣炎、子宮頸管炎、子宮頸部びらんおよび子宮頸癌を含むがこれらに限定するものではない、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＳＶ関連疾患の治療のための薬剤を製造することができる。

治療薬として、本発明の化合物及び／又は有効成分としてかかる化合物を有効量含む組成物は、人体および皮膚におけるウイルス感染を予防および治療するための製品の、主な成分である。これは、保存料、抗酸化剤等のアジュバント成分として使用されるだけではない。化合物及び／又はかかる化合物を有効成分として含む組成物の濃度が減少して製品の抗ウイルス効果が減少すると、皮膚粘膜ウイルス関連疾患の予防および治療のための有効成分として作用する。前述の有効量は、かかる化合物または組成物がウイルス感染を効果的に排除または予防することができる用量を意味する。

本発明の化合物のほとんどは、公知の化合物である。それらのいくつかは、食品添加物の製造に使用され、いくつかは補助薬である。さらにいくつかは、市場で購入することができるか、天然の植物から抽出することができるか、または公知の方法で製造することができる医薬品中間体である。

本発明の化合物及び／又はかかる化合物を含む組成物は、注射または経口製剤用の種々のアジュバントとともに、粉末、溶液、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、液体、または他の薬学的に許容され得る調製物にすることができる。

本発明の化合物及び／又はかかる化合物を含む組成物は、皮膚粘膜製剤用の種々のアジュバントとともに、軟膏、ゲル、洗液、錠剤、坐剤、ペッサリー、スプレーまたは他の薬学的に許容され得る調製物等の、種々の調製物にすることができる。

本発明の化合物及び／又はかかる化合物を含む組成物を使用して、抗ウイルスパーソナルケア製品を製造することができる。パーソナルケア製品としては、滅菌溶液、ハンドソープ、手の滅菌用ローション、ボディクレンザー、ボディクレンジングゲル、ボディウォッシングソープ、パーソナルケアティッシュ、ティッシュペーパー、点鼻薬が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

本発明の単一の化合物または１以上の化合物の組合せは、本発明の薬剤を製造するために使用することができる。化合物（複数の化合物を含む）を、種々の薬学的に許容され得る支持体と組み合わせて、薬学的に許容され得る製剤の形成を容易にすることができる。これらの支持体としては、デンプン、デキストリン、Ｔｗｅｅｎ−８０、カルボマー、セルロース、カルボキシメチルセルロースアルギン酸ナトリウム、グリセリン、プロパンジオール、ポリエチレングリコール、ラウロカプラム、イソプロパノール、トロラミンおよびスパン６０（モノステアリン酸ソルビタン）が挙げられるが、これらに限定されない。

また、単一の化合物または化合物の組合せは有効成分であり、この有効成分を滅菌溶液、ハンドソープ、手の滅菌用ローション、ボディクレンザー、ボディクレンジングゲル、ボディウォッシングソープ、パーソナルケアティッシュ、ティッシュペーパーまたは点鼻薬に加えて、皮膚上のウイルスを死滅させることができる。

本発明の製剤およびパーソナルケア製品は、当該分野で公知の従来の方法で製造することができる。

化合物及び／又はかかる化合物を含む組成物は、ＨＰＶ６／１１、１６／１８ウイルスを効果的に死滅させるか、または予防することができ、ＨＰＶウイルス感染の治療薬剤を製造するために使用して、尖圭コンジローマ、膣炎、子宮頸管炎、子宮頸部びらんを治療し、子宮頸癌の治療を助けることができる。本発明は、リアルタイム定量的蛍光ＰＣＲを用いて、試料中のＨＰＶの量を検出して、化合物およびそれらの治療効果をスクリーニングする。この方法は、いくつかの刊行物において報告されている（Ｙｏｕｌｉｎｇ、Ｃａｉ、ＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅｖｅｎｅｒｅａｌｄｉｓｅａｓｅａｎｄｃａｎｃｅｒ、２００２年、８：２、１０８頁、Ｙｕａｎｓｈｅｎｇ、Ｗｕ、Ｒｕｉｑｉａｎｇ、Ｑｕ、ＰｒａｃｔｉｃａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｍｅｄｉｃｉｎｅｃｌｉｎｉｃｓ、２００３年、３：２、１頁）。

生体外で長時間培養することができる肝臓腫瘍細胞系２．２．１５は、最も一般的に使用されるＢ型肝炎の細胞アッセイモデルである。これは、本発明において、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇの細胞分泌に対する本発明の化合物の効果を試験するために使用される。試験結果から、本発明のヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の効果が、ヒドロキシ安息香酸およびその類似体のものより優れていることが示される。

本発明の化合物のいくつかは、その用量範囲において非毒性の食品添加物である。ＨＰＶまたはＨＳＶに感染した患者の臨床試験から、ヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体が、ウイルス感染に対して、ヒドロキシ安息香酸およびその類似体よりも高い治療効果を有することが示された。

ヒドロキシ安息香酸エステルは、ヒドロキシ安息香酸よりも安定している。実験から、没食子酸プロピルが、特に人体の弱アルカリ性条件（ｐＨ７．４）または腸のアルカリ性条件（ｐＨ８．６）にあるときに、没食子酸よりも安定していることが示された。分光分析によって示されるように、ｐＨ６．８〜８．６の条件下で、ヒドロキシ安息香酸溶液は、ヒドロキシ安息香酸エステルよりも短い時間で、無色から黄色に変化した。

一方で、ヒドロキシ安息香酸エステルの抗ウイルス活性は、その対応する酸のものよりも高い。例えば、没食子酸プロピルの抗ウイルス活性は、没食子酸のものよりも約１倍高い。本願の実施例中に示されるデータから、ヒドロキシ安息香酸エステルが、ヒドロキシ安息香酸のプロドラッグほど効かなかったことが実証された。したがって、本発明の化合物は、品質が調整され顕著な治療効果を利点とする抗ウイルス薬またはパーソナルケア製品にすることができる。

以下の実施例は、本発明をさらに説明するために示すものであるが、これによって本発明の範囲を限定するものと解釈されるものてはない。

本発明において使用される物質（＞９９％の含有量）およびそれらの供給業者は以下のとおりである。
物質／供給業者
ｐ−ヒドロキシ安息香酸／Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル／GuangZhou Gases Factory Co., Ltd.
２，３−ジヒドロキシ安息香酸／Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd.
２，３−ジヒドロキシ安息香酸メチル／Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd.
２，４−ジヒドロキシ安息香酸／Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd.
２，４−ジヒドロキシ安息香酸メチル／Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd.
３，４−ジヒドロキシ安息香酸／Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd.
３，４−ジヒドロキシ安息香酸メチル／Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd.
２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸／Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory
没食子酸／Zhejiang Ouhai Chemical Reagent Co., Ltd.
没食子酸プロピル／Lianyungang Hongqi Chemical Plant
没食子酸エチル／Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory
没食子酸メチル／Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory
没食子酸オクチル／Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory
没食子酸ドデシル／Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory
組換えヒトインターフェロンα−２βゲル／SIU-FUNG USTC Pharmaceutical Co.,Ltd.
ポリイノシン酸／Guangdong Kaiping Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.

抗ＨＰＶマイクロエマルションの調製
２０ｍｌの１，２−プロピレングリコール、１５ｍｌのＴｗｅｅｎ−８０および５ｍｌのアゾンを混合し、適当な量の滅菌蒸留水を加えて、外用のための溶液１００ｍｌを得た。各１０ｇの安息香酸、サリチル酸、安息香酸およびサリチル酸の組合せ、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、２，３−ジヒドロキシ安息香酸、２，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、３，４−ジヒドロキシ安息香酸メチル、没食子酸、没食子酸ドデシル、没食子酸オクチル、没食子酸プロピル、没食子酸エチル、没食子酸メチル、２，４−ジヒドロキシ安息香酸メチルを、５０ｍｌのそれぞれの外用のための溶液に加えた。溶液のｐＨ値を５．５に調節した。次いで、適量の外用のための溶液を加えて、本発明の化合物または対照群を１０％の含む１００ｍｌのマイクロエマルションを得た。

没食子酸プロピルを含む抗ＨＰＶ注射液の調製
１０ｇの没食子酸プロピル、８．５ｇの塩化ナトリウム、１０ｍｌの１，２−プロピレングリコールおよび１０ｍｌのＴｗｅｅｎ−８０を混合し、滅菌蒸留水中に溶解させて最終体積を１００ｍｌとした。溶液のｐＨ値を７．４に調節した。次いで、溶液をろ過し、カプセル化し、１００℃で３０分間滅菌して、没食子酸プロピルの注射のための溶液を得た。

没食子酸エチルを含む発泡錠の調製
０．２５ｇの没食子酸エチル、０．０１ｇのポリイノシン酸および０．４５ｇの酒石酸を、８０メッシュ篩で別々に篩い分け、９５％エタノールで軟らかい物質にし、次いで、１２メッシュ篩で篩い分けた。得られた湿った粒子を５０℃で乾燥させた。０．６５ｇの炭酸水素ナトリウム、０．０２ｇのデキストリンおよび滅菌蒸留水を混合して、軟らかい物質を生成し、次いで、これを１２メッシュ篩で篩い分け、５０℃で乾燥させた。得られた物質を、最初に生成した乾燥した粒子と混合した。最後に、滅菌蒸留水を混合物に加え、加熱し、０．０１ｇのＰＥＧ６０００と混合して発泡錠にした。

定量的蛍光ＰＣＲ分析による薬物スクリーニング
試料
実施例１で得られたマイクロエマルションを試験試料として使用し、生理食塩水を対照として使用した。

ＨＰＶ試料：尖圭コンジローマ試料を、臨床患者から採取した。試料を生理食塩水で洗浄して、血液を洗い流した。次いで、無菌条件下でそれらを小片に切断し、３倍体積の生理食塩水と混合し、均質化し、その後の使用のために−４０℃で保存した。

実験方法
５０μｌの各試験化合物のマイクロエマルションまたは５０μｌの生理食塩水を、５０μｌのＨＰＶ試料のホモジネートに加えた。混合物を、３７℃で２４時間、温浴中でインキュベートした。次いで、ＨＰＶ６／１１およびＨＰＶ１６／１８ＤＮＡの量を、ＤａＡｎＧｅｎｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓＣｅｎｔｅｒから購入したＦＱ−ＰＣＲ診断キットを用いて検出した。従来のアルカリ開裂法によって０．２ｍｌのＤＮＡを各試料から抽出し、薄肉管にいれた。適当な量のプライマー、Ｆ−ＰＲＯＢＥ、ＤＮＴＰ、ＤＮＡポリメラーゼおよびバッファー溶液を当該管に加えた。ＡＢＩＰＲＩＳＭ（商標）７７００定量的蛍光ＰＣＲ機械を用いた。以下の条件下で反応を行った。最初に９３℃で２分間変性し、さらに変性及びアニーリングを９３°で４５秒間、５５℃で１２０秒間行い、これを４０回繰り返す。最後に、コンピュータによって結果を分析および計算し、表１に示した。

実験結果
試験化合物を加えた２４時間後に、没食子酸オクチル、没食子酸プロピル、没食子酸エチル、没食子酸メチル、没食子酸がテストすると、ＦＱ−ＰＣＲによってＨＰＶ６／１１またはＨＰＶ１６／１８は検出されなかった。ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルの群についても、ＨＰＶ１６／１８は検出されなかった。しかし、ｐ−ヒドロキシ安息香酸での試験において、ＨＰＶ１６／１８が検出された。２，４−ジヒドロキシ安息香酸メチルおよび３，４−ジヒドロキシ安息香酸メチルでの試験において、少量のＨＰＶ１６／１８が検出された。対照的に、対照群、ならびに安息香酸、サリチル酸ならびに安息香酸およびサリチル酸の混合物、没食子酸ドデシルならびに３，４−ジヒドロキシ安息香酸での試験において、多量のＨＰＶ６／１１およびＨＰＶ１６／１８が見られた。この結果から、本発明の化合物が、生体外において、ＨＰＶを効果的かつ迅速に排除することができることが示された。ヒドロキシ安息香酸エステルのアルコールアルキルの炭素原子の数は、１２より少ないのがよい。

尖圭コンジローマの治療におけるヒドロキシ安息香酸エステルの臨床的使用
診断基準
以下の基準は、中華人民共和国衛生局の衛生防疫局（Health and Epidemic Prevention Bureau）発行の「性病防治手帳 (Handbook for Venereal Disease Prevention and treatment)」（第２版）から取った。
乳頭もしくはカリフラワーの形状または他の形状をした疣贅を有する軟らかい過形成が、陰門または肛門の皮膚の周りに見られた。５％酢酸ホワイト試験の結果は陽性であった。

患者選択基準
臨床観察のために選択された患者は、上述の基準を満たさなければならない。その上、それらの皮膚病変の直径は、１ｃｍに等しいか、または１ｃｍ未満であるべきである。また、患者は、観察前の２週間、疾患のためのいかなる治療も受けなかった。真菌、トリコモナス、細菌感染もしくは他の合併症、慢性疾患、深刻な肝疾患および腎疾患を有する患者、または妊娠もしくは授乳中の女性は選択しなかった。女性に対する治療は、月経期間には行わなかった。

実験方法
５０人の認定された患者を選択し、無作為に５つの群に分けて、それぞれｐ−ヒドロキシ安息香酸、没食子酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、没食子酸プロピルおよび組換えヒトインターフェロンα−２βゲルで試験した。ｐ−ヒドロキシ安息香酸、没食子酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルおよび没食子酸プロピルの試料を、実施例１に記載されているように調製した。患部に１日３回、朝、正午および夜に、試験試料で患者を処置した。試料を適用して疣贅を覆い、患者に、治療部位を露出させ、２０分間動かないよう指示した。

治療効果の基準
観察時間：８日間。８日後に治癒しなかった患者は試験試料をさらに１２週間使用し続け、その予後を１２週間の間追跡した。

観察項目：治療の前に、疣贅の位置、形状、大きさおよび数を注意深く観察し、書き留めた。

「回復した」：全ての皮膚病変が消えた
「明らかな効果」：７０％を超える皮膚病変が消えた
「改善された」：３０％を超える皮膚病変が消えた
「効果なし」：３０％未満の皮膚病変が消えるか、または元々の皮膚病変が変化しない、もしくはさらに拡大した
臨床結果を表２に示した。

結果から、尖圭コンジローマの治療における最良の薬物と考えられた組換えヒトインターフェロンα−２βゲルでも、疣贅を排除するのに少なくとも４週間を要することが示された。統計分析から、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルおよび没食子酸プロピルの効果が、ｐ−ヒドロキシ安息香酸および没食子酸のものよりも有意に優れていることが示された。組換えヒトインターフェロンα−２βゲルと比較した場合、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルおよび没食子酸プロピルは、より明らかな効果を有した。また、本発明の化合物は、いかなる明らかな皮膚刺激も引き起こさなかった。唯一の副作用は、何人かの患者が、化合物を使用したときに灼熱感を経験する場合があったことであった。

Ｂ型肝炎２．２．１５細胞系によるＨＢｓＡｇの分泌に対する、ヒドロキシ安息香酸エステル類似体の阻害効果
実験材料
Ｂ型肝炎２．２．１５細胞系を、ＨＢＶＤＮＡ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙｏｆＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓまたはＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇから購入した）で形質転換し、抗ＨＢＶ薬化合物をスクリーニングするための細胞モデルとして使用した（ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌＯｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅｏｎＬｉｖｅｒＤｉｓｅａｓｅｓ、２００４年、１４（３）：１５８頁参照）。細胞培地ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯＣｏｍｐａｎｙ）、ウシ胎仔血清（ＨａｎｇｚｈｏｕＳｉｊｉＱｉｎｇＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＭａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ）、Ｇ４１８（ＧＩＢＣＯＣｏｍｐａｎｙ）、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（Ｓｉｇｍａ）、ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇ診断キット（ＳｈａｎｇｈａｉＫｅｈｕａＢｉｏ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏ．、Ｌｔｄ）。

実験方法
毒性試験の結果に従って、下記の表３に挙げられるヒドロキシ安息香酸エステル類似体を、２０ｍｌの１，２−プロピレングリコールおよび１５ｍｌのＴｗｅｅｎ−８０を含む混合物に溶解させ、滅菌生理食塩水で希釈して、２μｍｏｌ／ｍｌの試験化合物にした。次いで、これを、等しい体積で細胞培地と混合して、１μｍｏｌ／ｍｌの試験化合物を含む溶液を得た。１ｍｌあたり１×１０^５個の細胞の濃度の細胞を、２４ウェルプレートに、１ｍｌ／ウェルで接種した。試験の３日後に、細胞培養混合物由来の上清を収集した。ＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇの阻害率の結果を、表３に挙げる。

実験結果
没食子酸、没食子酸プロピル、３，４−ジヒドロキシ安息香酸、３，４−ジヒドロキシ安息香酸エチルは、２．２．１５細胞によるＨＢｓＡｇおよびＨＢｅＡｇの分泌に対して、阻害効果を有した。没食子酸プロピルおよび３，４−ジヒドロキシ安息香酸エチルによる阻害は、没食子酸および３，４−ジヒドロキシ安息香酸よりも効果的であった。

臨床試験におけるＨＳＶ感染の外用治療
ＨＳＶ感染があると臨床的に診断された２２人の患者を、無作為に選択し、２つの群に分けた。アシクロビル軟膏、および実施例１に記載されているように調製した没食子酸プロピルを含むマイクロエマルションを、１日３回、それぞれ２つの群の患者の患部に適用した。

結果から、没食子酸プロピルを用いることによる回復の平均時間は３日間であるが、アシクロビル軟膏での治療の回復の平均時間は５．５日間であることが示された。ＨＳＶ感染の治療において、没食子酸プロピルマイクロエマルションは、アシクロビル軟膏よりも効果的であった。

液体ハンドクレンザーの調製
下記の表４に挙げられる割合に従って、ミリスチル硫酸ナトリウム、１，２−プロピレングリコール、４−クロロ−３，５−ジメチルフェノール、トリクロサンおよび芳香物質を混合し、５％まで混合物に水を加えた。次いで、成分が完全に溶解するまで、撹拌しながら混合物を８０℃に加熱した。得られた溶液を室温まで冷却した。ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルを加え、撹拌しながら溶液に溶解させた。ＮａＯＨまたはＨＣｌで、溶液のｐＨ値を５．０に調節した。次いで、滅菌蒸留水を加えて、生成物を得た。

没食子酸プロピルおよび没食子酸の安定性試験
２０ｍｌの１，２−プロピレングリコール、１５ｍｌのＴｗｅｅｎ−８０および５ｍｌのアゾンを混合し、滅菌蒸留水を加えて体積を１００ｍｌにした。ＮａＯＨまたはＨＣｌで溶液のｐＨ値をｐＨ６．８に調節して、マイクロエマルションを得た。１０ｇの没食子酸プロピルおよび１０ｇの没食子酸を、それぞれマイクロエマルションに溶解させ、十分混合した。１０ｍｌの各マイクロエマルションを、ふた付きの透明ガラスチューブに加えた。溶液は両方とも透明であった。４００〜５００ｎｍでの２つの溶液の吸光度を分光光度法で測定し、それらの吸光度は０．１５未満であった。２つの溶液は室温で３０日間維持されると、没食子酸溶液は淡褐色に変化したが、没食子酸プロピル溶液は無色のままであった。再度分光光度法によって測定すると、没食子酸溶液の吸光度は１．２であり、没食子酸プロピル溶液のものは０．４であった。このことから、没食子酸プロピルが、溶液中で、没食子酸よりも安定していることが示された。

本発明のヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体を用いて、ウイルス感染を予防および治療するため、特に、Ｂ型肝炎、単純ヘルペス、尖圭コンジローマ、膣炎、子宮頸管炎および子宮頸部びらん等の、ヒトおよび動物におけるＨＢＶ、ＨＰＶまたはＨＳＶ感染に関連した疾患のための、医薬組成物を調製することができる。本発明において開示されるヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体は、公知のヒドロキシ安息香酸およびその類似体よりも効果的で安定している。ヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体を補助薬とともに調製すると、種々の医薬およびパーソナルケア製品にすることができる。

本発明を、一般的用語および特定の実施例で詳細に上述してきた。当業者は、本願の記載に基づいて、容易に改変または改良することができる。したがって、本発明に基づいた関連のある改変形態および改良形態は、本発明の範囲に属するものである。

Claims

以下の一般式（Ｉ）によって示され、

式中、ＲはＣ_１−１１アルキル基であり、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５は、独立して、ＯＨまたはＨであり、少なくとも１つはＯＨであるが、サリチル酸塩は排除される、ウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ウイルス感染が、ヒトおよび動物におけるＨＢＶ、ＨＰＶまたはＨＳＶ感染であることを特徴とする請求項１記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ウイルス感染が、Ｂ型肝炎、尖圭コンジローマ、単純ヘルペス、膣炎、子宮頸管炎および子宮頸部びらんであることを特徴とする請求項１又は２記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ウイルス感染の予防および治療のための薬剤が子宮脛癌の治療に使用されるものであることを特徴とする請求項１又は２記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ＲはＣ_１−8アルキル基であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ＲはＣ_１−３アルキル基であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５の少なくとも二つがＯＨであること特徴とする請求項１乃至６のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５の少なくとも三つがＯＨであること特徴とする請求項１乃至７いずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体が、４−ヒドロキシ安息香酸エステル、２，４−ジヒドロキシ安息香酸エステル、３，４−ジヒドロキシ安息香酸エステル、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸エステル、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステルまたは３，４，６−トリヒドロキシ安息香酸エステルからなるグループから選択されるものであることを特徴とする請求項１乃至６のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体が、２，３，４−トリヒドロキシ安息香酸エステル、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステルまたは３，４，６−トリヒドロキシ安息香酸エステルからなるグループから選択されるものであることを特徴とする請求項１乃至９のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記ヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体が、３，４，５−トリヒドロキシ安息香酸エステルであることを特徴とする請求項１乃至１０のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記化合物および／またはかかる化合物を有効成分として含む組成物は、注射または経口製剤のための種々のアジュバントとともに、粉末、溶液、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、液体に調整され、あるいは、皮膚粘膜製剤のための種々のアジュバントとともに、軟膏、ゲル、洗液、錠剤、坐剤、ペッサリー、スプレーまたは他の薬学的に許容され得る調製物に調製されているものであることを特徴とする請求項１乃至１１のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。
前記化合物および／またはかかる化合物を有効成分として含む組成物が、パーソナルケア製品として使用されるものであり、かかるパーソナルケア製品がハンドソープ、手の滅菌用ローション、ボディクレンザー、ボディクレンジングゲル、ボディウォッシングソープ、パーソナルケアティッシュ、ティッシュペーパー、点鼻薬またはこれらの組み合わせであることを特徴とする請求項１乃至１０のいずれかに記載のウイルス感染の予防および治療用の薬剤の製造のためのヒドロキシ安息香酸エステルおよびその類似体の使用。