BRPI0615972A2 - composto isolado, mistura, composição, item de manufatura, uso de um composto, método para determinar a concentração do composto em uma amostra biológica, kit de diagnóstico e método para avaliar a estabilidade metabólica de um composto - Google Patents

Abstract

COMPOSTO ISOLADO, MISTURA, COMPOSIçAO, ITEM DE MANUFATURA, USO DE UM COMPOSTO, MéTODO PARA DETERMINAR A CONCENTRAçãO DO COMPOSTO EM UMA AMOSTRA BIOLóGICA, KIT DE DIAGNóSTICO E MéTODO PARA AVALIAR A ESTABILIDADE METABóLICA DE UM COMPOSTO A presente invenção refere-se aos derivados de tadalaf ii, substituidos por flúor no átomo de carbono do metileno situado entre os oxigênios do anel benzodioxol, e opcionalmente também substituidos por átomos de deutério no lugar do hidrogênio normalmente abundante, e ^ 13^C no lugar de ^ 12^C normalmente abundante. Esses compostos são inibidores de PDE5 seletivos e possuem propriedades biofarmacêuticas e farmacocinéticas vantajosas. A invenção também apresenta composições que compreendem esses compostos e métodos de tratamento de doenças e condições que são responsivas à inibição de PDE5, sozinhos e em combinação com agentes adicionais.

Description

COMPOSTO ISOLADO, MISTURA, COMPOSIÇÃO, ITEM DEMANUFATURA, USO DE UM COMPOSTO, MÉTODO PARA DETERMINAR ACONCENTRAÇÃO DO COMPOSTO EM UMA AMOSTRA BIOLÓGICA, KIT DEDIAGNÓSTICO E MÉTODO PARA AVALIAR A ESTABILIDADE METABÓLICADE UM COMPOSTO

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃOA presente invenção refere-se a derivados de novosisotopólogos de tadalafil, (também aqui indicada como"Composto 1"), substituídos por flúor e/ou deutério no átomode carbono do metileno situado entre os oxigênios do anelbenzodioxol, opcionalmente também tuídos por átomos dedeutério no lugar do hidrogênio normalmente abundante, e 13Cno lugar de 12C normalmente abundante. Os compostos dapresente invenção são inibidores seletivos de fosfodiesterasetipo 5 (PDE5) especifica de monofosfato de guanosina cíclicae possuem propriedades biofarmacêuticas te farmacocinéticassingulares comparadas a tadalafil. A invenção tambémapresenta composições que compreendem um composto da presenteinvenção e o uso de tais composições nos métodos detratamento das doenças e das condições tratadasvantajosamente pela inibição de PDE5, particularmente aquelasque estão relacionadas à disfunção sexual. A invenção tambémapresenta métodos para o uso de um composto contendo deutérioou 13C da presente invenção para determinar concentrações doComposto 1, particularmente em líquidos biológicos, e paradeterminar padrões de metabolismo do Composto 1.

Antecedentes da InvençãoCompostos da fórmula I foram apresentados comoinibidores potentes e medicamente úteis de fosfodiesterasetipo 5 (PDE5) específica de monofosfato de guanosina cíclica.Daugan AC-M, Patente U.S. n° . 5.859.006 concedida à ICOS;C.Daugan AC-M e Gellibert F, Patente U.S. n°. 6.143.746concedida a ICOS:<formula>formula see original document page 3</formula>

(Fórmula I) ; ou sais de solvatos dos mesmos, em que: Rrepresenta hidrogênio, halogênio ou alquila C1-6; R1representa hidrogênio, alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinilaC2-6/ haloalquila C1-6, cicloalquila C3-8, cicloalquila C3-8/alquila C1-3, arilalquila C1-3, em que a arila é fenila oufenila substituída por um a três substituintes selecionadosdo grupo que consiste em halogênio, alquila C1-6, alcóxi C1-6,metilenodióxi, e as misturas destes, ou heteroalquila C1-3, emque a heteroarila é tienila, furila, ou piridila, cada umadelas substituída opcionalmente por um a três substituintesselecionados do grupo que consiste em halogênio, alquila C1-6,alcóxi C1-6, e as misturas destes; R2 representa um anelaromático monocíclico opcionalmente substituído selecionadoentre benzeno, tiofeno, furano e piridina ou um anelbicíclico opcionalmente substituído

<formula>formula see original document page 3</formula>

unido ao restante da molécula através de um dos átomos decarbono do anel benzeno e em que o anel A fundido é um anelde cinco ou seis membros que pode ser saturado ou parcial outotalmente insaturado e compreende átomos de carbono eopcionalmente um ou dois heteroátomos selecionados entre ooxigênio, o enxofre e o nitrogênio; e

R3 representa hidrogênio ou alquila Ci-3, ou Rl ouR3 representam conjuntamente um componente de cadeia alquilaou alquenila de três ou quatro membros de um anel de cinco ouseis membros.

Composto 1, descrito quimicamente de maneiravariada como pirazino[1',2':1,6]pirido[3, 4-b]indol-1,4-diona, 6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2,3,6,7,12,12a-hexaidro-2-metil-, (6R, 12aR)-; como (6R,12aR)-6-(1,3-benzodioxol-5-il)-2-metil-l,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[1" , 21 :1, 6]pirido [3,4-b] indol-1,4-diona; e como (6R, 12aR)2, 3, 6, 7,12,12a-hexaidro-2-metil-6 -(3,4- metilenodioxifenil)pirazino[21,1':6,1]pirido[3,4-b]indol-1, 4-diona;

O (Composto 1) compreende um exemplo particularmenteimportante deste gênero.

O Composto 1 e as composições farmacêuticas quecompreendem o mesmo têm a utilidade sozinhos e, paradeterminadas condições, em combinação com agentes adicionais,para o tratamento de: disfunção erétil, angina estável,instável e variante, hipertensão, hipertensão pulmonar,doença pulmonar obstrutiva crônica, sindrome de afliçãorespiratória aguda, hipertensão maligna, feocromocitoma,falha cardíaca congestiva, falha renal aguda, falha renalcrônica, aterosclerose, condição de patência reduzida devasos sangüíneos, doenças vasculares periféricas, distúrbiosvasculares, trombocitemia, doenças inflamatórias, infarto domiocárdio, acidente vascular cerebral, bronquite, asmacrônica, asma alérgica, rinite alérgica, glaucoma, úlcerapéptica, distúrbios de motilidade do intestino, angioplastiada coronária ou carótida transluminal pos-percutanea,estenose de enxerto de cirurgia pós-desvio, osteoporose,trabalho pré-terminus, hipertrofia prostática benigna, esíndrome de intestino irritável, nos seres humanos e nosanimais; disfunção erétil nos seres humanos e animais machos;e distúrbio de estimulação de fêmea nas fêmeas. Daugan AC-M eGellibert F, Patente U.S. n°. 6.143.746 concedida à ICOS;Daugan AC-M, Patente U.S. n°. 6.140.329 concedida à ICOS;Daugan AC-M, Patente U.S. n°. 5.859.006 concedida à ICOS;Anderson NR e Gullapalli RP, Patente U.S. n° . 6.841.167concedida à Lilly Icos; Allemeier LL et. al. , Patente U.S.n°. 6.613.768 concedida à Lilly Icos.

As definições e as descrições dessas condições sãoconhecidas do elemento versado na técnica e também sãodelineadas, por exemplo, nas patentes e nas referências acimacontidas nas mesmas; Harrison's Principies of InternaiMedicine 16a edição, Kasper DL et. al. Eds., 2004, McGraw-Hill Professional; e Robbins & Cotran Pathologic Basis of„ 25 Disease, Kumar V et. al. Eds., 2004, W.B. Saunders. 0Composto 1 é indicado atualmente para o tratamento dadisfunção erétil. United States Food and Drug Administration(FDA) New Grug Application (NDA) n° . 021368; vide a etiquetaaprovada em 31/03/2005;http://www.fda.gov/cder/foi/label/2005/021368s004,0051bl.pdf.

A combinação do Composto 1 com os agentesadicionais amplia ou intensifica a sua utilidade notratamento de estados deficientes sexuais nos seres humanos,incluindo aqueles com epilepsia, craniofaringioma,hipogonadismo, ou que tiveram uma histerectomiooforectomia,histerectomia ou ooforectomia; e à indução de acasalamento emanimais que não seres humanos. McCall RB e Meglasson MD,Patente U.S. n°. 6.903.127 concedida à Pharmacia & Upjohn;McCall RB e Meglasson MD, Patente U.S. n°. 6.890.945concedida à Pharmacia & Upjohn; McCall RB e Meglasson MD,Patente U.S. n° . 6.809.112 concedida à Pharmacia & Upjohn.Consultar também Shapira N, Pedido de patente norte-americano20040009957; Adams MA et. al. Pedido de patente norte-americano 20040063719, requerentes Queen1S University atKingston and Callegy Pharmaceuticals; Fox DNA e Hughes B,Pedidos de patentes norte-americanos 20040077624 e20040132731; Hepworth D, Pedido de patente norte-americano20040180958, Requerente Pfizer; Kalvinish I et. al. Pedido depatente norte-americano 20040242590; Pedidos de patentesnorte-americanos 20030225060, 20040097546, 20040204398, e20040266821, requerente Merck; Thomas TN, Pedido de patentenorte-americano 20050009835; Bictash MN et. al. , Pedido depatente norte-americano 20050049255, requerente Pfizer;Chiang P et. al., Pedidos de patentes norte-americanos20030125334, 20050020604, 20050032809, e 20050054656,requerente Pfizer; Santel DJ, Pedido de patente norte-americano 20050101608; e Ghofrani A, Pedido de patente norte-americano 20050107394.

Os usos adicionalmente indicados para o Composto 1incluem métodos de tratamento de machos com baixa contagem deesperma para promover a fertilização de um ovo; ascombinações com os agentes adicionais para o tratamento dehiperglicemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia,hipertrigliceridemia, diabetes, resistência à insulina,metabolismo de glicose enfraquecido, condições de tolerânciaà glicose enfraquecidas (IGT), condições de glicose de plasmade jejum enfraquecidas, obesidade, retinopatia diabética,nefropatia diabética, glomerulosclerose, neuropatiadiabética, sindrome X, doença cardíaca das coronárias, anginapectoris, restenose vascular, e disfunção endotelial; métodosde redução da resistência à insulina e de prevenção contraferimentos de isquemia/reperfusão; combinações com outrosagentes para tratamento da depressão, epilepsia, ataques dedesmaio, hipocinesia, distúrbios craniais, distúrbiosneurodegenerativos, ansiedade, pânico, dor, sindrome deintestino irritável, distúrbios do sono, osteodistrofia,artrite reumatoide, distúrbios neuropatológicos, dorvisceral, distúrbios funcionais do intestino, doençasinflamatórias do intestino, dor associada com dismenorréia,dor pélvica, cistite, pancreatite, edema cíclico, mal deMenires, hiperaldosteroneismo (primário e secundário),hipercalciuria e sintomas do trato urinário inferior, que nãoa incontinência urinária, associados com a hiperplasia debexiga superativa e/ou prostática benigna; métodos para aestimulação do crescimento folicular ovariano, para aprevenção ou o tratamento de uma condição que envolve afibrose, e para aliviar a dor ou a espasticidade em umpaciente que sofre de ferimento do cordão espinhal. Quay SC7Pedido de patente mundial W02004069167, Requerente Nastech;Cohen DS, Pedido de patente norte-americano 20030139429;Lautt WW e Macedo P, Pedido de patente norte-americano200301814 61; Kukreja R, Pedido de patente norte-americano20040009957; Patrick J e Davis M, Pedido de patente norte-americano 20050143314; Nonaka S e Maruyama T, Pedido depatente norte-americano 20040082653; Rawson DJ, Pedido depatente norte-americano 20040132801, Requerente Warner-Lambert; Dack KN et. al., Pedido de patente norte-americano20040138274, requerente Warner-Lambert; Field MJ e WilliamsRG, Pedidos de patentes norte-americanos 20040092522 e20040157847, requerente Warner-Lambert; Westbrook SL eZanzinger JFi Pedido de patente norte-americano 20040167095;Taylor PC Jr et. al., Pedido de patente norte-americano20040180958, requerente Warner-Lambert; Burgess GM, Pedido depatente norte-americano 20040186046, Requerente Pfizer;

Palmer SS et. al., Pedido de patente norte-americano20040259792; Lautt WW, Pedido de patente norte-americano20050049293; Gonzalez-Cadavid, NF e Rajfer J, Pedido depatente norte-americano 20050085486; Takasaka S, Pedido depatente norte-americano 20050107405, Requerente Warner-Lambert; e Lautt WW e Macedo P, Pedido de patente norte-americano 20050119272, requerente DiaMedica.

O Composto 1 foi caracterizado por estudos dainibição in vitro de fosfodiesterases especificas demonofosfatos de guanosina cíclica humanas e demonstrou quetem potência e selectividade elevadas para a isoforma do tipo5 em relação a outras fosfodiesterases humanos. Em células domúsculo liso aórtico cultivadas de ratos, o Composto 1aumenta de maneira dependente da dose as concentraçõesintracelulares de cGMP. Por exemplo, consultar Porst H, Int.J. Impot. Res .2002 14 (Suppl. 1):S57; Daugan A et. al. J.Med. Chem. 2003 46:4533; Daugan AC-M e Gellibert F, PatenteU.S. n°. 6.143.746 concedida à ICOS. Acredita-se que aseletividade do subtipo de PDE seja clinicamente importantedevido ao potencial para os efeitos colaterais associados coma inibição de outras PDEs. Por exemplo, acredita-se que ainibição de PDE6 e possivelmente dos subtipos PDEl causefluxo, visão de cores prejudicada e dores de cabeçaassociadas clinicamente com inibidores menos seletivos (vide,por exemplo, Bischoff E, Int. J. Impot. Res. 2004 16 (Suppl.1):S11; Kuan J e Brock G, Expert Opin. Investig. Drugs 200211:1605).

O Composto 1 também foi caracterizado no modelo dehipertensão de rato espontânea como causador de uma reduçãosignificativa e prolongada da pressão sangüínea depois dadosagem oral. Vide, por exemplo, Daugan A et. al., J. Med.Chem. 2003 46:4533.

Em múltiplos estudos clínicos humanos em machos comdisfunção erétil moderada a grave, o tratamento com oComposto 1 resultou em aumentos relatados por pacientesaltamente significativos na capacidade de penetração e nacapacidade de manter a ereção durante a relação sexual versuso tratamento com placebo. Esses benefícios foram observadosem uma ampla seção transversal dos pacientes incluindoaqueles que sofrem de ferimentos no cordão espinhal oudiabetes. Vide, por exemplo Giuliano F et. al. Eur. Urol.2000 37 (Suppl. 2): Abst. 320; Bella AJ e Brock GB, Curr.Urol. Rep. 2003 4:472; Del Popolo G et. al. Spinal Cord. 200442:643; Fonseca V et. al. , Diabetologia 2004 47: 1914. Osestudos que comparam as preferências dos pacientes entre oComposto 1 e um outro inibidor de PDE5 comercial indicaramconsistentemente uma preferência estatisticamentesignificativa para o Composto 1, o que foi sugerido comosendo devido à meia vida farmacológica mais longa do Composto1 que fornece uma janela maior de oportunidades para aespontaneidade sexual. Vide Doggrell SA, Expert Opin.Pharmacother. 2005 6:75; Stroberg P et. al., Clin. Ther. 200325:2724; Govier F, Clin. Ther. 2003 25:2709; Porst H, Int. J.Impot. Res. 2002 14(Suppl. 1): S57.

Depois da administração oral aos seres humanos, oComposto 1 é bem absorvido, seguido pelo metabolismo oxidanteextensivo e de fase II com apenas uma quantidade menor doComposto 1 sendo excretada inalterada (FDA NDA n° . 02368,etiqueta aprovada em 31/03/2005). 0 trajeto metabólicoprincipal prossegue pela clivagem oxidante inicial do anelbenzodioxol para formar um metabólito de catecol. 0metabolismo subseqüente da fase II segue, incluindoprincipalmente a metilação e a glucuronidação; vide o Esquema

I. As medições in vitro indicam que esses metabólitos nãocontribuem com a atividade clínica do Composto 1. Quando oComposto 1 é dosado simultaneamente com os inibidores decitocromo 3A4 (CYP3A4), ele ocorrem aumentos clinicamentesignificativos na meia vida e exposição do Composto 1 medidocomo a área sob a curva da concentração de plasma-tempo(AUC), conduzindo a recomendações para baixar a dosagemetiquetada nos pacientes que ingerem tais medicações.<formula>formula see original document page 10</formula>Burgess GM et. al., Pedido de patente norte-americano 20040186046, requerente Pfizer Inc. ("o pedido do'046"), apresentam inibidores de PDE5, incluindo o Composto1, e todas as variantes isotópicas dos mesmos, como sendoúteis no tratamento de diabetes. O pedido '04 6 sugere que asubstituição dos inibidores de PDE5 por isótopos, tal como odeutério, pode acarretar determinadas vantagens terapêuticasresultantes de uma maior estabilidade metabólica, tal comouma meia vida in vivo aumentada ou requisitos de dosagemreduzidos. 0 pedido '046 não indica que inibidores de PDE5,nem qual parte de qualquer inibidor de PDE5 particular, deveser substituído com isótopos a fim de produzir uma maiorestabilidade metabólica.

Portanto, é desejável a criação de um composto queexiba as atividades benéficas do Composto 1, mas com uma taxade metabolismo reduzida para estender ainda mais a sua vidaeficaz farmacológica.

Descrição Resumida da Invenção

A presente invenção soluciona os problemasapresentados acima ao fornecer um composto da fórmula II:

<formula>formula see original document page 11</formula>

ou um pró-medicamento ou um sal de pró-medicamento do mesmo,ou um solvato ou um polimorfo destes acima, em que:

X1 e X2 são simultaneamente fluoro; ou X1 é deutérioe X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério;

cada Y é selecionado independentemente entredeutério ou hidrogênio;

o hidrogênio unido ao nitrogênio do indol ésubstituído opcionalmente pelo deutério; e

cada carbono é opcionalmente substituídoindependentemente por 13C.

Em uma realização, X1 e X2 são simultaneamentehidrogênio, produzindo um composto da fórmula IIII:

<formula>formula see original document page 12</formula>

Em uma realização preferida da fórmula III, ocomposto tem a fórmula:

<formula>formula see original document page 12</formula>

Composto 2), ou um pró-medicamento ou um sal do pró-medicamento do mesmo, ou um solvato, um hidrato ou umpolimorfo destes acima, em que o hidrogênio naturalmenteabundante unido ao nitrogênio do indol não é substituído empelo deutério e em que nenhum átomo de carbono naturalmenteabundante é substituído por 13C.

Em uma outra realização preferida da fórmula III,pelo menos um Y é deutério.

Em uma outra realização, X1 é deutério e X2 éhidrogênio ou deutério, resultando em um composto da fórmula (IV)

<formula>formula see original document page 13</formula>

ou um pró-medicamento ou um sal do pró-medicamento domesmo;ou um hidrato, um solvato ou um polimorfo do mesmo; emque:

D é deutério; Y é deutério ou hidrogênio; cadahidrogênio é opcionalmente substituído independentemente pordeutério e o cada carbono é opcionalmente substituídoindependentemente por 13C.

Uma realização preferida da fórmula IV é umcomposto em que Y é deutério.

Uma outra realização preferida é o sal do pró-medicamento de um composto da fórmula IV em que o contra-íondo pró-medicamento salgável é farmaceuticamente aceitável.

Os compostos das fórmulas II, III e IV possuempropriedades físico-químicas alteradas e grande estabilidadeà clivagem de anel benzodioxol por CYP3A4 devido à presençado flúor e, no caso de compostos contendo deutério dasfórmulas II, III e IV, a substituição do hidrogênio pelodeutério. Esses novos compostos têm desse modo efeitosfarmacológicos vantajosamente intensificados em comparação aoComposto 1. Os compostos das fórmulas II, III e IV, e ascomposições que compreendem os mesmos, são úteis na reduçãoou na melhora da gravidade, da duração, ou da progressão, ouintensificam a função comprometida por um distúrbio tratadovantajosamente pela inibição de PDE5, ou pelo aumento dasconcentrações de cGMP intracelular. As aplicações preferidaspara compostos das fórmulas II, III e IV incluem métodos deuso no tratamento de distúrbios sexual, com mais preferênciada disfunção erétil e distúrbio de estimulação de fêmea; edistúrbios cardiovasculares.

A fluoretação tem efeitos impredizíveis naatividade biológica dos compostos nos quais é incorporada nolugar do hidrogênio; vide, por exemplo, Smart BE, J. FluorineChem. 2001 109:3 e Ismail FMD, J. Fluorine Chem. 2002 118:27.Isto é devido à eletronegatividade excessivamente elevada dohidrogênio em relação ao flúor, e o volume significativamentemaior de volume de van der Waals do flúor em uma ligação C-Fem relação ao hidrogênio em uma ligação C-H.

Os benzodioxóis 2,2-difluoretados são conhecidos eforam incorporados em agentes bioativos, mas até a presentedata não são os constituintes em nenhuma droga humana deconhecimento da requerente. Vide, por exemplo Shimizu M eHiyama T, Angew. Chem. Intl. Ed. 2005 44:214. A suamanipulação sintética é conhecida (por exemplo, consultarSchlosser M et. al. Eur. J. Org. Chem. 2003:452) mas amaioria dos 2,2-difluorobenzodioxóis conhecidos possuemsubstituintes removedores de elétrons que servem paraestabilizar o anel difluorometilenodióxi à clivagemhidrolítica. Certamente que em alguns casos os 2,2-difluorobenzodioxóis que contêm substituintes doadores deelétrons moderadamente, tais como grupos alquila, sãoconhecidos como resistentes à purificação por croraatografiacom gel de sílica padrão devido à sua instabilidade extrema;vide, por exemplo, Kuroboshi M e Hiyama T, Synlett 1994:251.

Surpreendentemente, um composto contendo flúor dafórmula II ou III é suficientemente estável para permitir oacesso sintético imediato. Ele também retém vantajosamente aafinidade elevada com PDE5, bem como a separação substancialdessa atividade de inibição de outras enzimas de PDE, emparticular PDEl e PDE6, e aumenta ativamente o cGMPintracelular no músculo liso arterial e do corpo cavernoso.

É sabido que a incorporação do deutério no lugar dohidrogênio produz efeitos significativos nas atividadesfisiológicas e farmacológicas do composto substituído. Porexemplo, as n-nitrosaminas substituídas por deutério podemindicar uma carcinogenicidade aumentado, diminuída ouinalterada, dependendo de onde no hidrogênio composto elassão substituídas pelo deutério e da identidade do composto aoqual as substituições são feitas (Lijinsky W et. al. FoodCosmet. Toxicol. 1982 20:393; Lijinsky W et. al. JCNI 198269:1127). Similarmente, são conhecidos aumentos e diminuiçõesna mutagenicidade bacteriano de aza-aminoácidos substituídospor deutério, dependendo da identidade do derivado deaminoácido e da posição da substituição (Mangold JB et. al. ,Mutation Res. 1994 308:33). A hepatotoxicidade reduzida dedeterminados compostos substituídos por deutério é conhecida(Gordon WP et. al. Drug Metab. Dispôs. 1987 15:589; ThompsonDC et. al. Chem. Biol. Interagir. 1996 101:1). A substituiçãodo deutério pode afetar os odores dos compostos (Turin L,Chem. Senses 1996 21:773) e a ligação da proteína ao plasma(Echmann ml et. al. J. Pharm. Sei. 1962 51:66; Cherrah Y. et.al. Biomed. Environm. Mass Spectrom. 1987 14:653; Cherrah Y.et. al. Biochem. Pharmacol. 1988 37:1311). Mudanças nabiodistribuição e no afastamento de determinados compostossubstituídos por deutério sugerem mudanças em seureconhecimento por mecanismos de transporte ativo (Zello GAet. al. Metabolism 1994 43:487; Gately SJ et. al. J. Nucl.Med. 1986 27:388, Wade D, Chem. Biol.Interact. 1999 117:191).

A substituição do hidrogênio pelo deutério emlocais sujeitos ao metabolismo oxidante, por exemplo, porproteínas heme tais como citocromo P450 e as enzimas deperoxidase, é conhecida em determinados, mas não em todos, oscasos para produzir uma redução significativa na taxa demetabolismo devido ao efeito do isótopo primário de romper aligação C-1H versus C-2H (consultar, por exemplo, GuengerichFP et. al. J. Biol. Chem. 2002 277:33711; Kraus, JA eGuengerich, FP, J. Biol. Chem. 2005 280:19496; Mitchell KHet. al., Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 2003 109:3784, Nelson SDe Trager WF, Drug Metab. Dispôs. 2003 31:1481; Hall LR eHanzlik, RP J. Biol. Chem. 1990 265:12349; Okazaki O. eGuengerich FP J. Biol. Chem. 2 68.1546; Iwamura S et. al. J.Pharmacobio-Dyn. 1987 10:229). Se a etapa de rompimento daligação C-H for limitadora de velocidade, um efeitosubstancial do isótopo pode ser observado. Se outras etapasdeterminarem a velocidade total da reação, o efeito doisótopo pode ser não-substancial. Nos casos onde uma etapa delimitação da velocidade de uma reação envolve arehibridização do carbono ligado de sp2 a sp3, a substituiçãodo deutério cria freqüentemente um efeito negativo doisótopo, acelerando a velocidade da reação. A introdução dodeutério em um composto em um local sujeito à oxidaçãoenzimática não produz predizivelmente uma mudançafarmacocinética significativa. Consultar, por exemplo, MamadaK et. al. Drug Metab. Dispôs. 1986 14:509; Streeter AJ et.al. Arch. Toxicol. 1990 64:109; Morgan DS et. al., Int. Arch.Occup. Environ. Health 1993 65(1 Suppl.):5139.

Embora a incorporação do deutério em compostosorgânicos específicos possa mudar as suas propriedadesfarmacológicas, a exposição geral e a incorporação dodeutério são seguras dentro dos níveis potencialmenteatingidos pelo uso dos compostos da presente invenção comomedicamentos. Por exemplo, a porcentagem em peso dohidrogênio em um mamífero (aproximadamente 9%) e a abundâncianatural do deutério (aproximadamente 0,015%) indicam, porexemplo, que um elemento masculino norte-americano adultomédio contém normalmente aproximadamente 1,2 grama dedeutério (consultar, por exemplo, Harper VW et. al. ".Reviewof Physiological Chemistry" 16a Edição, 1977, Lange MecicalPublications; Ogden CL et. al. CDC Adv. Data 2004 347:1;www.cdc.gov/nchs/data/ad/ad34 7.pdf). Além disso, asubstituição de até aproximadamente 15% do hidrogênio normalpor deutério foi efetuada e mantida por um período de dias asemanas em mamíferos, incluindo roedores e cães, com efeitosadversos mínimos observados (Czajka DM e Finkel AJ, Ann. N.Y.Acad. Sei. 1960 84:770;T homson JF, Ann. N.Y. Acad. Sci 196084:736; Czakja DM et. al. , Am. J. Physiol. 1961 201:357).Concentrações de deutério mais elevadas, geralmente acima de20%, podem ser tóxicas nos animais. No entanto, foiverificado que a substituição aguda de até 15%-23% dehidrogênio em fluidos humanos por deutério não causatoxicidade (Blagojevic N et. al. em 11 Dosimetry & TreatmentPlanning for Nêutron Capture Therapy", Zamenhof R, Solares Ge Harling 0 Eds. 1994. Advanced Medicai Publishing, MadisonWI páginas 125-134.). Esses autores relatam um protocoloclínico em sua prática que envolve a administração oral deaté 1 litro por dia de água deuterada (D2O) por até cincodias, seguida por uma administração intravenosa de 4 litrosde água deuterada antes dos procedimentos da radiação; essaágua deuterada é incorporada imediatamente por todo o corpoalém do compartimento de fluido, incluindo a glucose e oglicogênio, gorduras, e o cholesterol e desse modo as paredesdas células (por exemplo, consultar Diabetes Metab. 199723:251). Em um elemento humano do sexo masculino de 70 kg, asubstituiação de 15% do hidrogênio no compartimento de fluidopor deutério corresponde à incorporação de aproximadamente 1kg de deutério ou o equivalente de aproximadamente 5 kg deágua deuterada. Essas quantidades são de ordens de magnitudealém do nível concebido da administração de qualquer um doscompostos contendo deutério da presente invenção.

Os rastreadores de deutério incluindo drogasetiquetadas com deutério e doses, em alguns casosrepetidamente, de milhares a dezenas de milhares demiligramas de água deuterada, também são utilizados em sereshumanos saudáveis de todas as idades incluindo recém nascidose mulheres grávidas, sem incidentes relatados (por exemplo,Pons G e Rey E, Pediatrics 1999 104:633; Coward WA et. al. ,Lancet 1979 7:13; Schwarcz HP, Control. Clin. Trials 1984 5(4 Suppl) : 573; Eckhardt CL et. al. Obes. Res. 2003 11:1553;Rodewald LE et. al. , J. Pediatr. 1989 114:885; Butte NF et.al. Br. J. Nutr. 199165:3; MacLennan AH et. al. , Am. J.,Obstet. Gynecol. 1981 139:948). Desse modo, está claro quequalquer deutério liberado, por exemplo, durante ometabolismo dos compostos contendo deutério da presenteinvenção, não acarreta nenhum risco de saúde.

Os compostos da presente invenção exibem taxasreduzidas de metabolismo oxidante em comparação ao Composto 1medicamente importante. Espera-se que isso estenda ainda maisa vida farmacológica de uma dose terapêutica dos compostos dapresente invenção com respeito a uma dose similar do Composto 1, estendendo vantajosamente a janela do paciente deoportunidades para a espontaneidade sexual.

As propriedades alteradas dos compostosisotopicamente modificados da presente invenção não obterásua capacidade de ligação à sua proteína alvo. Isto ocorreporque tal ligação é principalmente dependente da ligaçãonão-covalente entre a proteína e o inibidor que pode serimpactado positivamente e negativamente pela substituiçãoisotópica, dependendo da substituição específica envolvida, equaisquer efeitos negativos que um átomo pesado da presenteinvenção pode ter na ligação não-covalente altamenteotimizada entre os compostos da fórmula I e as proteínas deabsorção de serotonina serão relativamente menores. Osfatores principais que contribuem com o reconhecimento não-covalente de moléculas pequenas por proteínas e a força deligação entre elas incluem: Forças de van der Waals, ligaçõesde hidrogênio, ligações iônicas, reorganização molecular,energia de dessolvação de moléculas pequenas, interaçõeshidrofóbicas e, em determinados exemplos, energia dedeslocamento para ligandos ligados pré-existentes. Consultar,por exemplo, The Pharmacological Basis of Therapeutics, deGoodman & GiIman, Décima edição, Hardman JG e Limbird LE,eds. McGraw-Hill, 2001 e The Organic Chemistry of DrugsDesign and Drug Action, Silverman RB, 2004, Academic Press.

Os compostos da presente invenção possuem umatopologia molecular que está bem dentro do envelopeconformacional englobado pelos compostos ativos conhecidos dafórmula I. A substituição do hidrogênio pelo deutério nãoaltera a forma molecular e a troca de 13C por 12C éconformacionalmente neutra (Holtzer ME et. al. , Biophys.J.2001 80:939). A substituição do deutério causa uma ligeiradiminuição no raio de van der Waals (Wade D, Chem. Biol.Interact. 1999 117:191); mas a requerente acredita que taldiminuição não irá reduzir bastante a afinidade de ligaçãoentre a molécula e seu receptor. Além disso, o tamanho menordos compostos deuterados impede que eles sejam envolvidos emnovos embates estéricos indesejáveis com a proteína deligação em relação ao Composto 1. Os átomos nem de deutérionem de 13C nos compostos da presente invenção contribuemsignificativamente com a ligação do hidrogênio ou asinterações iônicos com os receptores de proteínas. Istoocorre porque a principal ligação de hidrogênio e asinterações iônicas formadas pelo Composto 1 com PDE5 sãomediadas pelos nitrogênios e pelos oxigênios dentro doComposto 1 e possivelmente seu próton de NH do indol que agecomo um doador da ligação de hidrogênio. Quaisquer átomos dedeutério ligados ao nitrogênio do indol serão trocadosrapidamente com os prótons solventes maciços sob condiçõesfisiológicas. A reorganização da proteína ou o movimento dacadeia lateral serão idênticos entre um composto da presenteinvenção e seus isotopólogos de átomos leves. A energia dedessolvação de um composto da presente invenção seráequivalente ou menor do que àquela do Composto 1, resultandoem uma afinidade de ligação neutra ou aumentada para oreceptor; Turowski M et. al., J. Am. Chem. Soe. 2003125:13836. A substituição de 13C no lugar de 12C nos compostosda presente invenção não terá nenhuma alteração prática nadesolvação.

Descrição Detalhada da Invenção

A presente invenção apresenta um composto dafórmula II:<formula>formula see original document page 21</formula>

(II), em que:

X1 e X2 são simultaneamente fluoro; ou X1 é deutérioe X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério;

cada Y é selecionado independentemente entredeutério ou hidrogênio;

o hidrogênio ligado ao nitrogênio do indol ésubstituído opcionalmente pelo deutério; e

cada carbono é opcionalmente substituídoindependentemente por 13C.

Em uma realização preferida da fórmula II, pelomenos um Y é deutério. Com mais preferência, um ou mais deY4, Y7, Y8a, Y8b, Y9a, Y9b ou Y9c são deutério. As realizaçõesainda mais preferidas incluem um composto em que Y4 édeutério, um composto em que Y7 é deutério, um composto emque Y8a e Y8b é o deutério, um composto em que cada um de Y9a,Y9b e Y9c são deutério; e um composto que combina uma ou maisdas substituições de deutério acima.

Em cada um dos compostos preferidos indicadosacima, é ainda preferível que todos os átomos de hidrogênionão especificamente substituídos por deutério e todos osátomos de carbono não especificamente substituídos por 13Cestejam presentes em sua abundância isotópica natural. Portodo este relatório descritivo, a referência a "cada Y"inclui, independentemente, todos os grupos "Y" incluindo, porejemplo, Y3, Y4, Y6, Y7, Y8, Y8a, Y8b, Y9, Y9a, Y9b, Y9c, Y10, Y11,Ylla, Yllb, Y13, Y14, Y15 e Y16, onde aplicável.

Em uma realização preferida, a invenção apresentaum composto em que X1 e X2 são simultaneamente fluoro:

<formula>formula see original document page 22</formula>

(III), ou um pró-medicamento ou um sal do pró-medicamento domesmo, ou solvatos ou polimorfos destes acima.

Em uma realização preferida da fórmula III, ocomposto tem a fórmula:

<formula>formula see original document page 22</formula>

(Composto 2), ou um pró-medicamento ou um sal do pró-medicamento do mesmo, ou um solvato, um hidrato ou umpolimorfo destes acima, em que o hidrogênio ligado aonitrogênio do indol não é substituído pelo deutério e nenhumátomo de carbono é substituído por 13C.

Em uma outra realização preferida, a invençãoapresenta um composto em que X1 é deutério e X2 é selecionadoentre hidrogênio ou deutério:

<formula>formula see original document page 23</formula>

(IV) , ou um pró-medicamento ou o sal do pró-medicamento domesmo; ou um hidrato, um solvato ou um polimorfo do mesmo; emque: D é deutério; Y é deutério ou hidrogênio; cadahidrogênio é opcionalmente substituído independentemente pordeutério; e cada carbono é opcionalmente substituídoindependentemente por 13C.

De acordo com uma realização preferida da fórmulaIV, Y é deutério. Ainda mais preferível é quando até trêsátomos de hidrogênio adicionais são substituídos pelodeutério.

0 termo "composto", tal como aqui empregado,presta-se a incluir pró-medicamentos e sais do pró-medicamento de um composto da presente invenção. 0 termotambém inclui todos os solvatos, hidratos e polimorfos dequalquer um destes acima. A recitação específica de "pró-medicamento, "sal do pró-medicamento", "solvato", " "hidrato"ou "polimorfo" em determinados aspectos da invenção descritaneste pedido de patente não será interpretada como uma

De acordo com uma outra realização preferida dafórmula IV, um átomo de carbono é substituído por 13C.omissão pretendida dessas formas em outros aspectos dainvenção onde o termo "composto" é empregado sem a recitaçãodessas outras formas.

Tal como aqui empregado e a menos que estejaindicado de alguma outra maneira, o termo "pró-medicamento"significa um derivado de um composto que pode hidrolisar,oxidar, ou então reagir sob condições biológicas (in vitro ouin vivo) para formar um composto da presente invenção. Ospró-medicamentos só podem se tornar ativos com tal reação sobcondições biológicas, ou podem ter atividade em seus formasnão-reagidas. Os exemplos dos pró-medicamentos contempladosna presente invenção incluem, mas sem ficar a eles limitados,os análogos ou os derivados dos compostos de qualquer dasfórmulas aqui apresentadas que compreendem porções bio-hidrolisáveis, tais como amidas bio-hidrolisáveis, ésteresbio-hidrolisáveis, carbamatos bio-hidrolisáveis, carbonatosbio-hidrolisáveis, ureidas bio-hidrolisáveis, e análogos defosfato bio-hidrolisáveis. Outros exemplos de pró-medicamentos incluem derivados dos compostos de qualquer dasfórmulas aqui apresentadas que compreendem porções -NO, -NO2,-0N0, ou -ONO2. Os pró-medicamentos podem ser tipicamentepreparados empregando métodos bem conhecidos, tais comoaqueles descritos por Burger1S Medicinal Chemistry and DrugDiscovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5aed); consultar também Goodman e Gilman, The Pharmacologicalbasis of Therapeutics, 8a ed., McGraw-Hill, Int. Ed. 1992,"Biotransformation of Drugs".

Tal como aqui empregado e a menos que estejaindicado de alguma outra maneira, os termos "amida bio-hidrolisável", éster bio-hidrolisável", carbamato bio-hidrolisável", "carbonato bio-hidrolisável", "ureida bio-hidrolisável" e "análogo de fosfato bio-hidrolisável"significam uma amida, éster, carbamato, carbonato, ureida, ouanálogo de fosfato, respectivamente, que: 1) não destroem aatividade biológica do composto e não conferem a essecomposto propriedades vantajosas in vivo, tais como aabsorção, a duração da ação, ou o início da ação; ou 2) sãoeles próprios biologicamente inativos mas são convertidos invivo em um composto biologicamente ativo. Os exemplos deamidas bio-hidrolisáveis incluem, mas sem ficar a eleslimitados, amidas de alquila inferior, amidas de a-aminoácidos, amidas do alcóxiacila, e amidas dealquilaminoalquilcarbonila. Os exemplos de ésteres bio-hidrolisáveis incluem, mas sem ficar a eles limitados,ésteres de alquila inferior, ésteres de alcoxiacilóxi,ésteres de alquilacilaminoalquila, e ésteres de colina. Osexemplos de carbamatos bio-hidrolisáveis incluem, mas semficar a eles limitados, alquilaminas inferiores,etilenodiaminas substituídas, aminoácidos, hidróxialquilaminas, aminas heterocíclicas e heteroaromáticas, epoliéter aminas.

Um sal do pró-medicamento é um composto formadoentre um grupo ácido e básico do pró-medicamento, tal como umgrupo funcional amino, ou uma base e um grupo ácido do pró-medicamento, tal como um grupo funcional carboxila. Em umarealização preferida, o sal do pró-medicamento é um salfarmaceuticamente aceitável. De acordo com uma outrarealização preferida, o contraíon ao pró-medicamento salgáveldo composto da fórmula I é farmaceuticamente aceitável. Oscontraíons farmaceuticamente aceitáveis incluem, por exemplo,os ácidos e bases aqui indicados como sendo apropriados paraformar sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os pró-medicamentos e sais do pró-medicamentoparticularmente favorecidos são aqueles que aumentam abiodisponibilidade dos compostos da presente invenção quandotais compostos são administrados a um mamífero (por exemplo,permitindo que um composto administrado oralmente sejaabsorvido mais imediatamente no sangue) ou que intensificam aaplicação do composto original a um compartimento biológico(por exemplo, o cérebro ou o sistema nervoso central) emrelação à espécie original. Os pró-medicamentos preferidosincluem os derivados onde um grupo que intensifica asolubilidade aquosa ou o transporte ativo através da membranado intestino é adicionado à estrutura das fórmulas aquidescritas. Consultar, por exemplo, Alexander, J. et. al.Journal of Medicinal Chemistry 1988, 31, 318-322; Bundgaard,H. Design of Prodrugs; Elsevier: Amsterdam, 1985; páginas 1-92; Bundgaard, H.; Nielsen, Ν. M. Journal of MedicinalChemistry 1987, 30, 451-454; Bundgaard, Η. A Textbook of DrugDesign and Development; Harwood Academic Publ.: Switzerland,1991; páginas 113-191; Digenis, G. A. et. al. Handbook ofExperimental Pharmacology 1975, 28, 86-112; Friis, G. J.;Bundgaard, Η. A Textbook of Drug Design and Development; 2aed.; Overseas Publ.: Amsterdam, 1996; páginas 351-385;Pitman, I. H. Medicinal Research Reviews 1981, 1, 189-214.

O termo "farmaceuticamente aceitável", tal comoempregado na presente invenção, refere-se a um componente queestá dentro do âmbito do julgamento médico correto,apropriado para ser utilizado no contato com tecidos de sereshumanos e de outros mamíferos sem toxicidade imprópria,irritação, resposta alérgica, e outros ainda, e éproporcional com uma relação razoável de benefício/risco. Um"sal farmaceuticamente aceitável" significa qualquer salatóxico que, quando da administração a um receptor, temcapacidade de formar, direta ou indiretamente, um composto ouuma pró-droga de um composto da presente invenção. Um"contraíon farmaceuticamente aceitável" é uma porção iônicade um sal que não é tóxica quando liberada do sal quando daadministração a um receptor.Os ácidos geralmente empregados para formar os saisfarmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos taiscomo bissulfato de hidrogênio, ácidos clorídrico, bromídrico,iodrídrico, sulfúrico e fosfórico, bem como ácidos orgânicostais como os ácidos para-tolueno sulfônico, salicílico,tartárico, bitartárico, ascórbico, maléico, besílico,fumárico, glucônico, glucurônico, fórmico, glutâmico, metanosulfônico, etano sulfônico, benzeno sulfônico, láctico,oxálico, para-bromofenil sulfônico, carbônico, succínico,cítrico, benzóico e acético, e os ácidos inorgânicos eorgânicos relacionados. Tais sais farmaceuticamenteaceitáveis incluem desse modo sulfato, pirossulfato,bissulfato, sulfito, bissulfato, fosfato, monoidrogenfosfato,diidrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo,iodeto, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato,formiato, isobutirato, caprato, heptanoato, propiolato,oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato,maleato, butino-1,4-dioato, hexino-1,6-dioato, benzoato,clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidróxi benzoato, metóxi benzoato, ftalato, tereftalato, sulfonato,xileno sulfonato, fenilacetato, fenilpropionato,

fenilbutirato, citrato, lactato, β-hidróxi butirato,glicolato, maleato, tartrato, metano sulfonato, propanosulfonato, naftaleno-l-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato,mandelato e sais similares. Os sais de adição de ácidofarmaceuticamente aceitáveis preferidos incluem aquelesformados com ácidos minerais tais como o ácido clorídrico e oácido bromídrico, e especialmente aqueles formados com ácidosorgânicos tais como o ácido maléico.

As bases apropriadas para formar saisfarmaceuticamente aceitáveis com grupos funcionais ácidos depró-drogas da presente invenção incluem, mas sem ficar a eleslimitadas, hidróxidos de metais alcalinos tais como o sódio,potássio e lítio; hidróxidos de metais alcalino-terrosos taiscomo o cálcio e o magnésio; hidróxidos de outros metais, taiscomo o alumínio e o zinco; amônia, e aminas orgânicas, taiscomo mono, di ou trialquilaminas não-substituídas ousubstituídas por hidróxi; diciclohexilamina; tributilamina;piridina; N-metila, N-N-etilamina; dietilamina; trietilamina;mono, bis ou tris-(2-hidróxi-alquilaminas inferiores), taiscomo mono, bis ou tris-(2-hidroxietil)amina, 2-hidróxi-ter-butilamina ou tris-(hidroximetil)metilamina, Ν,N,-di-alquilainferior-N-(hidróxi alquila inferior) aminas, tais como N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina ou tri-(2-hidroxietil)amina;N-metil-D-glucamina; e aminoácidos tais como a arginina, alisina, e outros ainda.

Tal como empregado na presente invenção, o termo"hidrato" significa um composto que inclui adicionalmente umaquantidade estoiquiométrica ou não-estoiquiométrica de águaligada por forças intermoleculares não-covalentes.

O termo "solvato" significa um composto que incluiadicionalmente uma quantidade estoiquiométrica ou não-estoiquiométrica de solvente tal como a água, acetona,etanol, metanol, diclorometano, 2-propanol, ou outros ainda,ligados por forças intermoleculares não-covalentes.

Tal como empregado na presente invenção, o termo"polimorfo" significa formas cristalinas sólidas de umcomposto ou de um complexo do mesmo. Polimorfos diferentes domesmo composto podem exibir propriedades físicas, químicase/ou espectroscópicas diferentes. As propriedades físicasdiferentes incluem, mas não são limitadas à estabilidade (porexemplo, ao calor, à luz ou à umidade), compressibilidade edensidade (importante na formulação e na manufatura doproduto), ao higroscopicidade, solubilidade e taxas dedissolução e solubilidade (que pode afetar abiodisponibilidade). As diferenças em estabilidade podemresultar de mudanças na reatividade química (por exemplo,oxidação diferencial, de modo que uma forma de dosagem sedescolore mais rapidamente quando compreendida por umpolimorfo do que quando compreendida por um outro polimorfo)ou características mecânicas (por exemplo, os tabletes sedesintegram em armazenagem enquanto um polimorfocineticamente favorecido se converte em um polimorfotermodinamicamente mais estável) ou ambas (por exemplo, ostabletes de um polimorfo são mais suscetíveis à decomposiçãoem umidade elevada). As diferentes propriedades físicas dospolimorfos podem afetar seu processamento. Por exemplo, umpolimorfo pode ser mais propenso a formar solvatos ou podeser mais difícil de filtrar ou limpar as impurezas do queoutro, por exemplo, devido à forma ou ã distribuição detamanho de suas partículas.

Os compostos da presente invenção contêm átomos decarbono assimétricos. Como tal, um composto da presenteinvenção pode existir como um estereoisômero individual, bemcomo uma mistura de estereoisômeros. Conseqüentemente, umcomposto da presente invenção irá incluir não somente umamistura estereoisomérica, mas também os respectivosestereoisômeros individuais substancialmente livres uns dosoutros estereoisômeros. 0 termo "substancialmente livre", talcomo empregado na presente invenção, significa que menos de25% de outros estereoisômeros, de preferência menos de 10% deoutros estereoisômeros, com mais preferência menos de 5% deoutros estereoisômeros e com a máxima preferência menos de 2%de outros estereoisômeros, estão presentes. Os métodos para aobtenção ou a síntese de estereômeros são bem conhecidos noestado da técnica e podem ser aplicados conforme praticávelaos compostos finais ou ao material de partida ouintermediários. Outras realizações são aquelas em que ocomposto é um composto isolado.Os compostos da invenção podem ser sintetizados portécnicas bem conhecidas. Os materiais de partida edeterminados intermediários utilizados na síntese doscompostos da presente invenção estão disponíveis junto afontes comerciais ou podem ainda ser sintetizados utilizandoreagentes e técnicas conhecidos no estado da técnica,incluindo aqueles esquemas de síntese delineados na presenteinvenção. Vide, por exemplo, Daugan AC-M, Patente U.S. n°.5.859.006, cedida à ICOS Corporation; Daugan AC-M, PatenteU.S. n°. 6.140.329, cedida à ICOS Corporation; Daugan AC-M eGellibert F, Patente U.S. n° . 6.143.746, cedida à ICOSCorporation; e Daugan AC-M et. al. , J. Med. Chem. 2003 46:4533. Cada um desses documentos é aqui incorporado a títulode referência.Um método conveniente para a produção de compostosda fórmula II é mostrado graficamente no esquema II. Noesquema II, E representa um grupo funcional que é conhecidono estado da técnica da síntese orgânica como um grupo éster,ou equivalente funcional, lábil para o fechamento de aneldurante a formação de amidas cíclicas. Os grupos Eapropriados incluem, por exemplo, metila, etila, propila,butila, isobutila, ciclopropiletila, fenila, benzila, 4-clorobenzila, 2-nitrobenzila, alila, propargila,tricloroetila, e assim por diante. Muitos de tais gruposapropriados adicionais serão evidentes aos elementos versadosna técnica; por exemplo, determinadas amidas também podemestar em tais reações de ciclização. Os grupos E preferidosincluem metila, etila, benzila, alila, e com mais preferênciametila. Cada Y é independentemente hidrogênio ou deutério. Zrepresenta um grupo nucleófugo tal como é sabido no estado datécnica, muitos dos quais serão aparentes ao elemento versadona técnica. Os grupos Z preferidos incluem haletos tais como cloreto, brometo e iodeto; e sulfonatos tais como tosilato,mesilato, brosilato, nosilato, e outros ainda. 0 cloreto e obrometo são os mais preferidos. R representa um grupo deativação de ácido tal como sabido no estado da técnica,incluindo haletos tais como fluoreto, cloreto e brometo;anidridos tais como anidridos simétricos, anidrido piválicos,e outros anidridos misturados, tais como aqueles formados coma reação com cloroformatos; ésteres ativados tais comopentafluorometila, succinimidila, e outros ainda. Outrosátomos de hidrogênio e de carbono nos compostos das fórmulasII, XIII, XIV e XV são substituídos opcionalmente pordeutério e 13C, respectivamente. As modificações do esquemaacima serão aparentes aos elementos versados na técnica dasíntese orgânica.

O indol deuterado e substituído por 13C, D,L-triptofano, haloacetatos tais como o ácido cloroacético e ocloreto de cloracetila, e os derivados de glicina, sãocomercialmente disponíveis (por exemplo, isótopos de C/D/N,Pointe-Claire, Quebec, Canadá; Sigma Aldrich (ISOTEC) , St.Louis, MO) e permitem a síntese dos derivadoscorrespondentemente etiquetados de triptofano e compostosetiquetados com acetil da fórmula XIV pelos meios conhecidosno estado da técnica da síntese orgânica e bioquímica. Porexemplo, consultar Greenstein JP, Methods Enzymol.1957 3:554;Stewart KK e Doherty RF, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 197370:2850; Venkatachalam S et. al., Org. Prep. Proc. Intl. 199325:249; Evans DA et. al., em Peptídeos,Chemistry and Biology,Marshall GR (Ed.) 1999 Escom, Leiden, Holland página 143;Evans DA et. al., J. Am. Chem. Soe. 1990 112:4011; SchollkopfU, Pure Appl. Chem. 1983 55:1799, Myers AG e Gleason JL, Org.Synth. 1999 76:57; Watanabe T e Snell EE, Proc. Natl. Acad.Sci EUA 1972 69:1086; e Xiong C et. al. J. Org. Chem. 200222 :1399.

Os compostos fluoretados da fórmula III podem serimediatamente sintetizados pelo químico habilitado. Porexemplo, (3,4-difluorometilenodióxi)bromobenzeno (tambémconhecido como 5-bromo-2,2-difluorobenzo[d] [l,3]dioxol) podeser obtido como um item do comércio ou ser preparado tal comodescrito por Benefiel RL e Krumkalns EV, patente U.S. n° .4.110.099 concedida à Eli Lilly. A troca de metal-halogênioseguida pela reação com um reagente de formilação tal como,por exemplo, uma dimetil formamida, resulta no composto dafórmula III. Os isotopólogos de átomos pesados da fórmula IIItambém são disponíveis por meios conhecidos no estado datécnica da síntese orgânica. Por exemplo, a reação doreagente organometálico acima mencionado com dimetilformamida deuterada ou substituída por 13C formilacomercialmente disponível resulta em isotopólogos contendoátomos pesados no grupo formila. A reação de 3,4-diidróxibromobenzeno com cloreto de metileno etiquetado com 13C pormeios conhecidos no estado da técnica (por exemplo, Cabedo Net. al., J. Med. Chem. 2001 44:1794; Panseri P et. al.Patente U.S. n°. 5.936.103 concedida à Borregaard Italia),seguida pela conversão do (3,4-metileno-13C-dióxi)bromobenzeno resultante em seu análogo dedifluorometileno (por exemplo, Patente U.S. n°. 4.110.099) ea formilação instala 13C no carbono do metileno da fórmulaIII. A formilação de metileno análoga do 5,6-dibromobenzo [d] [l,3]dioxol comercial, disponível, porexemplo, junto à Chemos gmbH, Regenstauf, Alemanha, como 1,2-dibromo-4,5-metilenodióxi benzeno, seguida pela reação com umequivalente de um reagente de metalação tal como n-butillítio, e resfriamento brusco com deutério subseqüente,resulta em 5-bromo-6-deutero-2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol.

A metalação e a formilação subseqüentes resultam então nocomposto da fórmula III em que Y4 é o deutério. Devido ànatureza forte do ácido do anel 2,2-difluorobenzo[d] [l,3]dioxol na posição orto em relação aosátomos de oxigênio, essencialmente todos os padrões desubstituição são acessíveis através da halogenação e dalitiação, da ou redução catalítica de halogênios sob gásdeutério por meios conhecidos no estado da técnica (porexemplo, consultar Yadav JS et. al., Adv. Synth. Catai. 2004346:77; Kirefu T, et. al. J. Label. Compd. Radiopharm. 200144:329), e proteção removível conforme necessário. VideGorecka J et. al. Eur. J. Org. Chem. 2004:64; e Schlosser Met. al., Eur. J. Org. Chem. 2003:452. Os 2,2-difluorobenzo [d] [l,3]dioxóis também ficam disponíveis por umaabordagem diferente que envolve a conversão dos catecóiscorrespondentes em tiocarbonatos, por exemplo, utilizandotiofosgênio, seguida pela reação com um reagente defluoretação tal como H-Bu4NH2F3 e um oxidante apropriado talcomo a N-halo-succinimida ou a 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoina (Kuroboshi M e Hiyama T, Synlett 1994 251;Cousseau J e Albert P, Buli. Chim. Soe. Fr. 1986 910).

0 2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-carboxaldeído eseus isotopólogos de átomos pesados podem ser utilizados nolugar do análogo de átomo leve não-fluoretado (isto é,benzo[d][1,3]dioxol-5-carboxaldeído) em qualquer um dosesquemas de reação conhecidos para a síntese do Composto 1para produzir um composto da fórmula III. Devido ã naturezade removedor de elétrons do substituinte de carboxaldeído,esse derivado de 1,3-benzodioxol é razoavelmente estável àscondições ácidas, mas um cuidado apropriado pode ser útil,por exemplo, na condição ácida e na elaboração da reação paraevitar qualquer degradação do produto da reação, tal comoaquelas na reação de Pictet-Spengler, se tal abordagem forutilizada para produzir o Composto 2.

O catalisador de ciclização de ácido pode ser umácido prótico forte (vide, por exemplo, Whaley WM eGovindachari TR, Org. React. 19516:74), ou um ácido de Lewisou ácido de Lewis assistido por ácido de Bronsted (porexemplo, Yamada H et. al. J. Org. Chem. 1998 63:6348). Muitasvariações nesta reação de ciclização, geralmente indicadacomo reação de Pictet-Spengler, são conhecidas, incluindoaquelas que aumentam os excessos enantioméricos oudiastereoméricos nos produtos. Por exemplo, consultarRozwadowski MD, Heterocycles 1994 39:903; Campiglia P et.al., Mol. Divers. 2004 8:427, Horiguchi Y et. al. Chem.Pharm. Buli. 2003 51:1368, e Nakamura S et. al. , Org. Lett.2003 5: 2087. Se a reação for executada no solvente apróticocom um ácido de Lewis, ou alternativamente sob condiçõespróticas, os protons de ácidos são substituídos por deutério,por exemplo, utilizando CF3CO2D, e então o compostoresultante da fórmula XIV irá conter um deutério em Y7.

Os compostos deuterados da fórmula IV podem sersintetizados, por exemplo, pela reação de 3,4-diidróxibenzaldeído com os reagentes de metilação deuteradosapropriados. Os exemplos de tais reagentes incluem, porexemplo, as formas mono e di-deuteradas de dihalometanos taiscomo o diclorometano, o dibromometano, o bromoclorometano, odiiodometano, e outros ainda. A síntese dos benzodioxóis dosprecursores de (o-diidroxifenil) catecol é bem conhecida noestado da técnica e descrita, por exemplo, por Cabedo N et.al., J. Med. Chem. 2001 44:1794; Walz AJ e Sundberg RJ, J.Org. Chem., 2000 65:8001; Orús L et. al., J. Med. Chem. 200245:4128; Chang J et. al. Helv. Chim. Acta 2003 86:2239;Moreau A et. al. , Tetrahedron 2004 60:6169; e Panseri P et.al. Patente U.S. n° . 5.936.103 concedida à Borregaard Italia,cada um dos quais é aqui incorporado a título de referência.A última referência apresenta um método particularmenteeficiente para a produção em grande escala que pode seradaptado ao diclorodideuterometano imediatamente disponível.

No esquema II, a separação dos isômeros cis-transde tetraidro-/3-carbolina; a acilação, por exemplo com cloretode cloroacetila; e o fechamento de anel, de preferência commetilamina, são então realizados de uma maneira análogaàquela descrita para a síntese do Composto 1 no estado datécnica, bem como nas referências acima citadas.

A metilamina etiquetada com 13C deuterada écomercialmente disponíveis, permitindo a substituiçãoisotópica do grupo n-metila unido ao anel dioxopiperazina.

Pelos meios tal como descrito acima e por outrosque serão aparentes aos elementos versados na técnica dasíntese orgânica, a substituição dos hidrogênios e doscarbonos nos compostos da presente invenção por deutério e13C, respectivamente, pode ser realizada imediatamente.

Os métodos para a otimização das condições dareação, caso necessário minimizando os sub-produtoscompetitivos, são conhecidos no estado da técnica. Aotimização da reação e a escala ascendente podem utilizarvantajosamente um equipamento de síntese paralelo de altavelocidade e microreactores controlados por computador (porexemplo, Design and Optimization in Organic Synthesis, 2aedição, Carlson R, Ed, 2005; Elsevier Science Ltd.; Jáhnisch,K et al, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 20 04 43:406; e asreferências nos mesmos). Os esquemas de reação e osprotocolos adicionais podem ser determinados pelo elementoversado na técnica através do uso de software de banco dedados buscável por estrutura comercialmente disponível, porexemplo, SciFinder® (divisão CAS da American ChemicalSociety) e Crossfire Beilstein® (Elsevier MDL), ou pela embancos de dados de palavras-chave apropriados utilizando umengenho de busca da Internet tal como Google® ou bancos dedados de palavras-chave tais como o banco de dados de textosda Repartição de Patentes e Marcas dos Estados Unidos.

Os métodos sintéticos aqui descritos também podemincluir adicionalmente incluir etapas, antes ou depois dasetapas aqui descritas especificamente, para adicionar ouremover grupos de proteção apropriados a fim de permitirfinalmente a síntese do composto das fórmulas aqui descritas.

De acordo com uma outra realização, a invençãoapresenta qualquer um dos compostos intermediários descritosacima XIV ou XV, em que pelo menos um átomo de hidrogênio oude carbono foi substituído por deutério ou 13C,respectivamente. A invenção também apresenta o compostointermediário XIII, em que um X1 é deutério e X2 éselecionado entre hidrogênio ou deutério.

As combinações dos substituintes e das variáveisprevistas pela presente invenção são somente aquelas queresultam na formação de compostos estáveis. 0 termo"estável", tal como empregado na presente invenção, refere-seaos compostos que possuem estabilidade suficiente parapermitir a manufatura e que mantêm a integridade do compostopor um período de tempo suficiente para serem úteis para asfinalidades detalhadas na presente invenção (por exemplo,formulação em produtos terapêuticos, intermediários para ouso na produção de compostos terapêuticos dos compostos,intermediários isoláveis ou armazenáveis, tratamento de umadoença ou de uma condição responsiva à redução da atividadede PDE5).

o termo "isotopólogo" refere-se à espécie quedifere de um composto da presente invenção somente nacomposição isotópica de suas moléculas ou íons. Os termos"isotopólogo mais leve" e "isotopólogo de átomo mais leve"tal como empregado na presente invenção, referem-se à espécieque difere de um composto da presente invenção que compreendeum ou mais átomos isotópicos leves de 1H ou 12C nas posiçõesocupadas por um deutério ou 13C. Para as finalidades dapresente invenção, 11C não é denominado como um isótopo decarbono leve.

Um composto específico da presente invenção tambémpode ser denominado como um "composto isotópico de átomopesado" para ser distinguido de seus isotopólogos mais levesao discutir as misturas de isotopólogos. Isto ocorre porqueum composto específico e todos seus isotopólogos mais leves,incluindo o Composto 2 que não possui deutério e 13C, sãocompostos da fórmula II.

A terminologia de nomeação de produtos químicospode ser complexa e nomes químicos diferentes podem sersempre razoavelmente aplicados à mesma estrutura. Para evitarqualquer confusão, o "Composto 1" refere-se á forma de baselivre do agente inibidor de PDE5 ativo da droga aprovada peloFDA no NDA n°. 021368.

Deverá ser reconhecido que muitos átomos queocorrem geralmente em sistemas biológicos existemnaturalmente como misturas de isótopos. Desse modo, qualquercomposto da Fórmula I compreende inerentemente quantidadespequenas de isotopólogos e/ou deuterados contendo 13Cdeuterado. A presente invenção diferencia tais formas que têmquantidades menores de tais isotopólogos de seu âmbito umavez que o termo "composto" tal como empregado na presenteinvenção refere-se a uma composição da matéria que épredominantemente um isotopólogo específico. Um composto, talcomo definido na presente invenção, nas realizações, contémmenos de 10%, de preferência menos de 6%, e com maispreferência menos de 3% de todos os isotopólogos restantes.Um composto da presente invenção compreende preferivelmenteátomos de hidrogênio e carbono, designados não-especificamente como deutério e 13C, respectivamente, em suaabundância isotópica natural. As composições de importânciaque podem conter mais de 10% de todos os isotopólogosespecíficos restantes combinados são denominadas na presenteinvenção como misturas e devem satisfazer os parâmetrosdeterminados abaixo. Esses limites da composição isotópica etodas as referências à composição isotópica na presenteinvenção referem-se unicamente à forma de base ativa e livredo composto da fórmula I e não incluem a composição isotópicade porções hidrolisáveis dos pró-medicamentos ou doscontraíons, sendo que alguns deles, tais como o cloreto e obrometo, existem naturalmente como misturas que compreendemporcentagens substanciais de isótopos múltiplos.

0 termo "átomo pesado" refere-se aos isótopos de umpeso atômico mais elevado do que o isótopo predominante deocorrência natural.

0 termo "átomo pesado estável" refere-se aos átomospesados não-radioativos.

"2H" e "D" referem-se ao deutério.

"Estereoisômero" refere-se aos enantiômeros e aosdiastereômeros.

"PDE" refere-se à fosfodiesterase específica demonofosfato de guanosina cíclico.

"cGMP" refere-se ao monofosfato de guanosinacíclico.

"S1-GMP" refere-se a guanosina-51-monofosfato."cAMP" refere-se ao monofosfato de adenosinacíclica.

"5'-AMP" refere-se a adenosina-51-monofosfato.

"AIBN" refere-se a 2,2-2,21-azo-bis(isobutironitrilo)."THF" refere-se a tetraidrofurano."DMF" refere-se a Ν,Ν-dimetil formamida."n-BuLi" refere-se 1-butil lítio."aq." refere-se a aquoso."h" refere-se a horas."min" refere-se a minutos."salmoura" refere-se a cloreto de sódio aquososaturado.

11US" refere-se aos Estados Unidos da América."FDA" refere-se Food and Drug Administration."NDA" refere-se a New Drug Application."AUC" refere-se à área sob a curva da concentraçãode plasma-tempo.

CYP3A4 refere-se à isoforma 3A4 da oxidase docitocromo P450.

CYP2D6 refere-se à isoforma 2D6 da oxidase do citocromoP450.

"MC-4R" refere-se ao receptor de melanocortina-4humana.

"5-HT" refere-se à 5-hidróxi triptamina ou àserotonina.

"NEP" refere-se à endopeptidase neutra (EC3.4.24.11).

"HMG-CoA" refere-se à 3-hidróxi-3-metilglutaril-coenzima A.

"ETA" refere-se aos receptores do subtipo A deendotelina.

"ETB" refere-se aos receptores do subtipo B deendotelina.

" PPAR11 refere-se ao receptor ativado peloproliferador de peroxissomo.

A invenção também apresenta composições quecompreendem (consistem essencialmente em, consistem em) umamistura de um composto da presente invenção e de seusisotopólogos mais leves. Essas misturas podem ocorrer, porexemplo, simplesmente como o resultado de uma ineficácia naincorporação de um isótopo em uma determinada posição; trocaintencional ou inadvertida de prótons para o deutério, porexemplo, troca do solvente em massa para o deutério unido aoheteroátomo; ou misturas intencionais de compostos puros.

Em uma realização, tais misturas compreendem pelomenos aproximadamente 5 0% do composto isotópico do átomopesado (isto é, menos de aproximadamente 50% de isotopólogosmais leves) . É mais preferível uma mistura que compreendepelo menos 80% do composto isotópico do átomo pesado. É damáxima preferência uma mistura que compreende 90% do compostoisotópico do átomo pesado.

Em uma realização alternativa, a mistura compreendeum composto e seus isotopólogos mais leves em proporçõesrelativas de modo que pelo menos aproximadamente 50%, depreferência pelo menos 80%, com mais preferência pelo menos90%, ainda com mais preferência pelo menos 95% e com a máximapreferência pelo menos 98% dos compostos em uma dita misturacompreendam um isótopo em cada posição que contém um isótopode átomo pesado estável no composto isotópico do átomopesado.o que segue exemplifica esta definição. Um compostohipotético da invenção contém o deutério nas posições Y9a, Y9be Y9c. Uma mistura que compreende este composto e todos osseus isotopólogos potenciais mais leves e a proporçãorelativa de cada um deles são indicados na tabela abaixo.

Tabela 1

<table>table see original document page 41</column></row><table><table>table see original document page 42</column></row><table>

A partir da tabela pode ser observado que ocomposto mais os isotopólogos mais leves 1, 2 e 4 compreendemo isótopo deutério na posição Y9a. Esses compostos estãopresentes na mistura em quantidades relevantes de 40%, 15%,14% e 6%. Desse modo, 75% da mistura compreende o isótopo emY9a que está presente no composto. O composto mais osisotopólogos mais leves 1, 3 e 5 compreendem o isótopodeuterio na posição Y . Estes compostos estão presentes namistura em quantidades relevantes de 40%, 15%, 13% e 5%.Desse modo, 73% da mistura compreende o isótopo em Y9b queestá presente no composto. O composto mais os isotopólogosmais leves 2, 3 e 6 compreendem o isótopo deutério na posiçãoY9c. Estes compostos estão presentes na mistura emquantidades relevantes de 40%, 14%, 13% e 4%. Desse modo, 71%da mistura compreende o isótopo em Y9c que está presente nocomposto. Conseqüentemente, esta mistura compreende umcomposto e seus isotopólogos mais leves em proporçõesrelativas de modo que 71% dos compostos em uma dita misturacompreendem um isótopo em cada posição que contém um isótopode átomo pesado estável no composto isotópico completo.

A invenção também apresenta composições quecompreendem uma quantidade eficaz de um composto da fórmulaII, ou um pró-medicamento ou um sal de um pró-medicamento domesmo; ou um solvato, um hidrato ou um polimorfo do mesmo, sefor aplicável; um veículo aceitável. De preferência, umacomposição da presente invenção é formulada para usofarmacêutico ("uma composição farmacêutica"), em que oveículo é um veículo farmaceuticamente aceitável. 0(s)veículo(s) deve(m) ser "aceitável(is)" no sentido de ser(em)compatível(is) com os outros ingredientes da formulação e, nocaso de um vecículo farmaceuticamente aceitável, nãodeletérios ao seu receptor em quantidades tipicamenteempregadas em medicamentos.

Os veículos, os adjuvantes e os veículosfarmaceuticamente aceitáveis que podem ser utilizados nascomposições farmacêuticas da presente invenção incluem, masnão sem ficar a eles limitados, trocadores de íons, alumina,estearato de alumínio, lecitina, proteínas do soro, tais comoa albumina do soro humana, substâncias tamponadoras tais comofosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio,misturas de glicerídeo parciais de ácidos graxos vegetaissaturados, água, sais ou eletrólitos, tais como o sulfato deprotamina, fosfato dissódico hidrogenado, fosfato de potássiohidrogenado, cloreto de sódio, sais de zinco, sílicacoloidal, trissilicato de magnésio, polivinil pirrolidona,substâncias baseadas em celulose, polietileno glicol, carbóximetil celulose sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros debloco de polietileno-polioxipropileno,polietileno glicol egordura de lã.

As composições farmacêuticas da invenção incluemaquelas apropriadas para administração oral, retal, nasaltópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal.ou parenteral(incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa eintradermal). Consultar Doherty PC Jr et. al. Patente U.S.n°. 6.548 concedida à Vivus, Inc.; Place VA, Patente U.S. n°.6.469.016 cedida à Vivus, Inc. Em determinadas realizações, ocomposto das fórmulas na presente invenção é administradotransdermalmente (por exemplo, utilizando um emplastrotransdermal ou técnicas iontoforéticas). Outras formulaçõespodem convenientemente ser apresentadas na forma de dosagemunitária, por exemplo, comprimidos e cápsulas de liberaçãoprolongada e em lipossomas e podem ser preparadas por todosos métodos bem conhecidos no estado da técnica de farmácia.Consultar, por exemplo, Remington1S Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company, Filadélfia, PA (17a ed. 1985).

Tais métodos de preparação incluem a etapa decolocar em associação com a molécula a ser administradaingredientes tais como o veiculo que constitui um ou maisingredientes acessórios. Em geral, as composições sãopreparadas ao colocar em associação uniforme e intimamente osingredientes ativos com veículos líquidos, lipossomas ouveículos sólidos finamente divididos ou ambos e então senecessário moldar o produto.

Em determinadas realizações preferidas, o compostoé administrado oralmente. As composições da presente invençãoapropriadas para a administração oral podem ser apresentadascomo unidades distintas tais como cápsulas, saquinhos oucomprimidos, sendo que cada uma contém uma quantidadepredeterminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos;como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou emum líquido não-aquoso; ou como uma emulsão líquida de óleo-em-água ou um emulsão líquida de água-em-óleo ouacondicionadas em lipossomas e como um bolus, etc. Ascápsulas de gelatina mole podem ser úteis para conter taissuspensões, que podem aumentar vantajosamente a taxa deabsorção do composto. Por exemplo, consultar Anderson NR eGullapalli RP, Patente U.S. n°. 6.841.167 cedida à Lilly Inc.

Um comprimido pode ser produzido por compressão oupor moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientesacessórios. Os tabletes comprimidos podem ser preparados aocomprimir em uma máquina apropriada o ingrediente ativo emuma forma de fluxo livre tal como um pó ou grânulos,misturados opcionalmente com um aglutinante, lubrificante,diluente inerte, conservante, agente ativo de superfície oudispersante. Os comprimidos moldados podem ser feitos aomoldar em uma máquina apropriada uma mistura do compostopulverizado umedecido com um diluente líquido inerte. Oscomprimidos podem ser opcionalmente revestidos ou marcados epodem ser formulados para obter nos mesmos uma liberaçãolenta ou controlada do ingrediente ativo. Os métodos deformulação de tais composições de liberação lenta oucontrolada de ingredientes farmaceuticaraente ativos, taiscomo aqueles na presente invenção e outros compostosconhecidos no estado da técnica, são conhecidos no estado datécnica e descritos em diversas patentes norte-americanasconcedidas, sendo que algumas incluem, mas sem ficar a elaslimitadas, as Patentes U.S. n° . 4.369.172; e 4.842.866, e asreferências citadas nas mesmas. Os revestimentos podem serutilizados para a aplicação dos compostos ao intestino(consultar, por exemplo, as Patentes U.S. n° . 6.638.534,5.217.720 e 6.569.457, 6.461.631, 6.528.080, 6.800.663 e asreferências citadas nas mesmas). Tais revestimentos são devalor particular na aplicação de um composto da fórmula II, emais especificamente para a aplicação do Composto 2.

No caso de comprimidos para o uso oral, os veículosque são utilizados geralmente incluem lactose e amido demilho. Agentes lubrificantes, tais como o estearato demagnésio, também são tipicamente adicionados. Para aadministração oral em uma forma de cápsula, os diluentesúteis incluem lactose e o amido de milho seco. Quandosuspensões aquosas são administradas oralmente, o ingredienteativo é combinado com agentes emulsificantes e de suspensão.Caso desejado, alguns agentes adoçantes e/ou flavorizantese/ou corantes podem ser adicionados. Tensoativos tais como olauril sulfato de sódio podem ser úteis para intensificar adissolução e a absorção.

As composições apropriadas para a administraçãotópica incluem losangos que compreendem os ingredientes emuma base aromatizada, geralmente a sacarose e acácia outragacanto; e pastilhas que compreendem o ingrediente ativoem uma base inerte, tais como gelatina e glicerina ousacarose e acácia.

As composições apropriadas para a administraçãoparenteral incluem soluções para injeção aquosas e não-aquosas estéreis que podem conter antioxidantes, tampões,bacteriostáticos e solutos que resultam na formulaçãoisotônica com o sangue do receptor pretendido; e suspensõesaquosas e não-aquosas estéreis que podem incluir agentes desuspensão e agentes de espessamento. As formulações podem serapresentadas em recipientes de dose unitária ou de dosesmúltiplas, por exemplo, ampolas e frascos lacrados, e podemser armazenadas em uma condição seca congelada (Iiofilizada)que requer somente a adição do veículo líquido estéril, porexemplo, água para injeções, imediatamente antes do uso. Assoluções e as suspensões para injeção improvisadas podem serpreparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis.

Tais soluções para injeção podem estar na forma,por exemplo, de uma suspensão aquosa ou oleaginosa injetávelestéril. Essa suspensão pode ser formulada de acordo com astécnicas conhecidas no estado da técnica utilizando agentesde dispersão ou de umidifcação apropriados (tal como, porexemplo, Tween 80) e agentes de suspensão. 0 preparadoinjetável estéril também pode ser uma solução ou umasuspensão injetável estéril em um diluente ou em um solventenão-tóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, como umasolução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e os solventesaceitáveis que podem ser empregados são incluídos o manitol,a água, a solução de Ringer e a solução isotônica de cloretode sódio. Além disso, os óleos estéreis e fixos sãoempregados convencionalmente como um solvente ou meio desuspensão. Para esta finalidade, qualquer óleo fixo suavepode ser empregado incluindo mono ou diglicerídeossintéticos. Os ácidos graxos, tais como o ácido oléico e seusderivados de glicerldeo são úteis na preparação deinjetáveis, tais como os óleos farmaceuticamente aceitáveisnaturais, tais como o azeite de oliva ou o óleo de rícino,especialmente em suas versões polioxietiladas. Essas soluçõesou suspensões oleosas também podem conter o diluente ou odispersante de álcool de cadeia longa tal como Ph. Helv ou umálcool similar.

As composições farmacêuticas da presente invençãopodem ser administradas na forma de supositórios para aadministração retal ou vaginal. Essas composições podem serpreparadas ao misturar um composto da presente invenção comum excipiente não-irritante apropriado que seja sólido àtemperatura ambiente, mas liquido à temperatura retal eportanto irá derreter no reto para liberar os componentesativos. Tais materiais incluem, mas sem ficar a eleslimitados, manteiga de cacau, cera de abelha e polietilenoglicóis.

A administração tópica das composiçõesfarmacêuticas da presente invenção é especialmente útilquando o tratamento desejado envolve as áreas ou os órgãosfacilmente acessíveis pela aplicação tópica. Para a aplicaçãotópica à pele, a composição farmacêutica será formulada comuma pomada apropriada que contém os componentes ativossuspensos ou dissolvidos em um veículo. Os veículos para aadministração tópica dos compostos da presente invençãoincluem, mas sem ficar a eles limitados, óleo mineral,petróleo líquido, petróleo branco, propileno glicol, compostode polioxipropileno e polioxietileno, cera emulsificante eágua. Alternativamente, a composição farmacêutica pode serformulada com uma loção ou um creme apropriado que contém ocomposto ativo suspenso ou dissolvido em um veículo. Osveículos apropriados incluem, mas sem ficar a eles limitados,óleo mineral, monoestearato de sorbitano, polissorbato 60,ésteres cetílicos de cera, álcool cetearílico, 2-octildodecanol, álcool benzílico e água. As composiçõesfarmacêuticas da presente invenção também podem ser aplicadastopicamente ao trato intestinal inferior por meio deformulação retal de supôsitório ou em uma formulação de enemaapropriada. Os emplastros transdermais tópicos e aadministração iontoforética também são incluídos na presenteinvenção.

As composições farmacêuticas da presente invençãopodem ser administradas por aerossol nasal ou por inalação.

Tais composições são preparadas de acordo com técnicas bemconhecidas no estado da técnica de formulação farmacêutica epodem ser preparadas como soluções em solução salina,empregando o álcool benzílico ou outros conservantesapropriados, promotores de absorção para intensificar abiodisponibilidade, fluorocarbonos e/ou outros agentessolubilizantes ou dispersantes conhecidos no estado datécnica. Tal administração é conhecida como sendo eficaz comas drogas para disfunção erétil: Rabinowitz JD e ZaffaroniAC, Patente U.S. n° . 6.8 03.031, concedida à Alexza MolecularDelivery Corporation.

A aplicação dos agentes terapêuticos em questãopode ser local, para ser administrada no local de interesse.

Várias técnicas podem ser utilizadas para aplicar aspresentes composições no local de interesse, tais comoinjeção, uso de cateteres, trocartes, projéteis, gelplurônico, stents, polímeros de liberação prolongada de drogaou outro dispositivo que forneça acesso interno.

Desse modo, de acordo com uma outra realização, oscompostos da presente invenção podem ser incorporados nascomposições para revestir um dispositivo médico implantável,tais como próteses, válvulas artificiais, enxertosvasculares, stents ou cateteres. Os revestimentos apropriadose a preparação geral de dispositivos implantáveis revestidossão descritos nas patentes U.S. n°. 6.099.562; 5.886.026 e5.304.121. Os revestimentos são materiais poliméricostipicamente biocompatíveis, tais como um polímero dehidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenoglicol, ácido poliláctico, acetato de etileno vinila, e asmisturas dos mesmos. Os revestimentos são opcionalmenteadicionalmente cobertos por um revestimento apropriado defluorossilicone, polissacarídeos, polietileno glicol,fosfolipídios ou combinações dos mesmos para fornecercaracterísticas de liberação controlada na composição. Osrevestimentos para dispositivos invasivos devem ser incluídosdentro da definição do veículo, do adjuvante ou do veículofarmaceuticamente aceitável, uma vez que esses termos sãoutilizados na presente invenção.

De acordo com uma outra realização, a invençãoapresenta um método de revestimento de um dispositivo médicoimplantável, o qual compreende a etapa de colocação do ditodispositivo em contato com a composição de revestimentodescrita acima. Ficará óbvio aos elementos versados natécnica que o revestimento do dispositivo irá ocorrer antesdo implante em um mamífero.

De acordo com uma outra realização, a invençãoapresenta um método de impregnação de um dispositivo deliberação de droga implantável, o qual compreende a etapa decolocação do dito dispositivo de liberação de droga emcontato com um composto ou uma composição da presenteinvenção. Os dispositivos de liberação de droga implantáveisincluem, mas sem ficar a eles limitados, cápsulas de polímeroou balas biodegradáveis, cápsulas de polímero difundíveis,não-degradáveis e pastilhas de polímero biodegradáveis.

Dispositivos mecânicos implantáveis também são conhecidos;consultar, por exemplo, Gerber MT, Pedidos de patentes norte-americanos 20050010259, 20050033372, 20050070969, cedidos àMedtronic Inc.

De acordo com uma outra realização, a invençãoapresenta um dispositivo médico implantável revestido com umcomposto ou uma composição que compreende um composto dapresente invenção, de modo que o dito composto sejaterapeuticamente ativo.

De acordo com uma outra realização, a invençãoapresenta um dispositivo de liberação de droga implantávelimpregnado com ou contendo um composto ou uma composição quecompreende um composto da presente invenção, de modo que odito composto seja liberado a partir do dito dispositivo eseja terapeuticamente ativo.

Onde um órgão ou um tecido são acessíveis por causade sua remoção do paciente, tal órgão ou tecido pode serbanhado em um meio contendo uma composição da presenteinvenção, uma composição da presente invenção pode serpincelada no órgão ou uma composição da presente invençãopode ser aplicada de qualquer outra maneira conveniente.

A presente invenção apresenta adicionalmentecomposições farmacêuticas que compreendem uma quantidadeeficaz de um ou mais compostos da invenção em combinação comuma quantidade eficaz de um segundo agente terapêutico útilno tratamento ou na prevenção de uma condição selecionadaentre angina estável, angina instável, angina variante,hipertensão, hipertensão pulmonar, doença pulmonar obstrutivacrônica, síndrome de aflição respiratória aguda, hipertensãomaligna, feocromocitoma, falha cardíaca congestiva, falharenal aguda, falha renal crônica, aterosclerose, uma condiçãode patência reduzida de vasos sangüíneos, uma doença vascularperiférica, um distúrbio vascular, trombocitemia, uma doençainflamatória, infarto do miocárdio, acidente vascularcerebral, bronquite, asma crônica, asma alérgica, rinitealérgica, glaucoma, úlcera péptica, um distúrbio demotilidade do intestino, angioplastia da coronária oucarótida transluminal pós-percutânea, estenose de enxerto decirurgia pós-desvio, osteoporose, trabalho pré-terminus,hipertrofia prostática benigna, ou sindrome de intestinoirritável, em um corpo de um animal humano ou não-humano; otratamento de um estado de deficiência sexual em um serhumano, incluindo o estado de disfunção sexual em fêmeas,incluindo condições recorrentes, e o tratamento dos pacientesque têm uma condição de coexistência de epilepsia,craniofaringioma, hipogonadismo ou que teve suahisterectomiooforectomia, histerectomia ou ooforectomia; bemcomo hiperglicemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia,hipertrigliceridemia, diabetes, resistência à insulina,metabolismo de glicose , condição de tolerância à glicoseenfraquecida (IGT), condição de glicose de plasma de jejumenfraquecida, obesidade, retinopatia diabética, nefropatiadiabética, glomerulosclerose, neuropatia diabética, sindromeX, doença cardíaca das coronárias, angina pectoris, restenosevascular, disfunção endotelial, depressão, epilepsia, ataquesde desmaio, hipocinesia, distúrbios craniais, distúrbiosneurodegenerativos, depressão, ansiedade, pânico, dor,sindrome de intestino irritável, distúrbios do sono,osteodistrofia, artrite reumatoide, distúrbiosneuropatológicos, dor visceral, distúrbios funcionais dointestino, doenças inflamatórias do intestino, dor associadacom a dismenorréia, dor pélvica, cistite, pancreatite, edemacíclico, mal de Menires, hiperaldosteroneismo (primário esecundário), hipercalciuria e sintomas do trato urinárioinferior, com exceção da incontinência urinária, associadoscom a hiperplasia de bexiga superativa e/ou prostáticabenigna;ou de indução do acasalamento em um mamífero que nãoo ser humano.

Tais segundos agentes terapêuticos úteis emcombinação com os compostos da presente invenção incluem, massem ficar a eles limitados: um vasodilator, prostaglandinaEl, prostaciclina, um α,β-bloqueador misto, um bloqueadorct2 -adrenérgico, um inibidor de ACE, um inibidor de NPE, umagente dopaminérgico agindo centralmente, um peptídeointestinal vasoativo, um bloqueador de canal de cálcio, umatiazida diurética, (5R)-(metilamino)-5,6-diidro-4H-imidazo[4,5,1-ij]quinolin-2(IH)-ona, (5R)-(metilamino)-5,6-diidro-4H-imidazo[4,5,1-ij]quinolina-2(IH)-tiona, e seus saisfarmaceuticamente aceitáveis; um ligando de receptor 5-HT2,particularmente 5-HT2a e ligandos de receptor 5-HT2c; umantagonista de esterase de acetil colina; um antagonista dafamília do receptor de vasopressina, ou um derivadofarmaceuticamente aceitável do mesmo; compostos de 1-deprenila ou propargilamina; agonistas humanos do receptor demelanocortin-4 (MC-4R);gama-butirobetaína; um ligando dealfa-2-delta; um antagonista do receptor de angiotensina II;um antagonista do subtipo EPl do receptor de prostaglandinaE2; um antagonista de endotelina; um agente anti-diabético,um inibidor de reductase HMG-Co-a, um inibidor de reabsorçãode serotonina (SSRI), ou um sal farmaceuticamente aceitáveldos mesmos; e as combinações destes acima.

Os exemplos de vasodilatadores incluem, mas semficar a eles limitados, nitroglicerina, dinitrato deisosorbeto, tetranitrato de pentaeritritila, isosorbeto-5-mononitrato, nitrato de propatila, trolnitrato, nicroandil,hexanitrato de manitol, hexanitrato de inositol, ésteretílico de N-[3-nitratopivaloil]-6-cisteína, nitrito deisoamila, S-nitroso-N-acetil-D-D, L-l-penicilamina, 1,2,5-oxadiazol-2-óxido, furazan-N-óxido, molsidomina, mesocarb, umcomposto de ferro nitrosila, um nitroprusseto de sódio, óxidonítrico, e as misturas dos mesmos.

Os exemplos de bloqueadores alfa-adrenérgicosincluem, mas sem ficar a eles limitados, fentolamina eprazocin.

Os exemplos de α,β-bloqueadores mistos incluem,mas se mficar a ele limitados, carvedilol.

Os exemplos de α2-bloqueadores adrenérgicosincluem, mas sem ficar a ele limitados, yohimbine.

Os exemplos de inibidores de ACE incluem, mas semficar a eles limitados, quinapril, enalapril, captopril,spirapril, fosinopril, moexipril, enalaprilat, ramipril,perindopril, indolapril, lisinopril, alacepril, trandolapril,benazapril, libenzapril, delapril, cilazapril, e ascombinações dos mesmos.

Os exemplos de inibidores de NEP incluem, mas semficar a eles limitados, aqueles apresentados por Hepworth D,Pedido de patente norte-americano 20040180941, do requerentePfizer IAN e Dack, Pedido de patente norte-americano20040138274, requerente Warner-Lambert.

Os exemplos de agentes dopaminérgicos agindocentralmente incluem, mas sem ficar a ela limitados,apomorfina.

Os exemplos de bloqueadores de canal de cálcioincluem, mas sem ficar a eles limitados, amlodipine,diltiazem, felodipine, isradipine, nicardipine, nifedipine, everapamil.

Os exemplos de tiazidas incluem, mas sem ficar aeles limitados, hidroclorotiazida, flumetiazida,hidroflumetiazida, bendroflumetiazida, metilclotiazida,triclormetiazida, politiazida ou benztiazida.

Os exemplos de ligandos de receptores S-HT2a e 5-HT2c incluem, mas sem ficar a eles limitados, aquelesapresentados por Chiang P et. al. nos Pedidos de patentesnorte-americanos 20050054656, 20050020604, e 20050032809,requerente Pfizer.

Os exemplos de antagonistas de esterase de acetilcolina incluem, mas sem ficar a eles limitados, donepezil,galantamine, rivastigme, tacrine, physostigime, neostigmine,edrophonium, piridostigmine, demecarium, piridostigmine,fosfoline, metrifonato, zanapezil, e ambefionium.

Os exemplos de antagonistas da família do receptorde vasopressina incluem, mas sem ficar a eles limitados,relcovaptan, atosiban, conivaptan, OPC21268, ou 8-cloro-5-metil-1-(3,4,5,6-tetraidro-2H- [1,2']bipiridinil-4-il) -5,6-diidro-4H-2,3,5,10b-tetraazo-benzo[e]azuleno, ou um sal ou umsolvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos; e aquelesapresentados por Wayman PC e Russell RJ, Pedido de patentenorte-americano 20050014848, Requerente Pfizer.

Os exemplos de compostos de propargilamina incluem,mas sem ficar a eles limitados, aqueles apresentados por YuPH et. al., patente U.S. n°. 5.508.311 e nas referências alicitadas.

Os exemplos dos agonistas de MC-4R incluem, mas semficar a eles limitados, aqueles apresentados pela Merck, arequerente nos pedidos de patentes norte-americanos20030225060, 20040097546, 20040204398 e 20040266821.

Os exemplos de ligandos de alfa-2-delta incluem,mas sem ficar a eles limitados, gabapentina e pregabalina.

Os exemplos de antagonistas do receptor deangiotensin II incluem, mas sem ficar a eles limitados,candesartan, eprosartan, irbesartan, losartan, olmesartan,olmesartan medoxomil, saralasin, telmisartan e valsartan, eos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Os exemplos de antagonistas do subtipo EPl doreceptor de prostaglandina EZ incluem, mas sem ficar a eleslimitados, o ácido 4-[2-[N-isopropil-N-(5-metil-2-furylsulfonil)amino]5-trifluorometilfenoximetil]benzóico; oácido 4-[2-[N-isopropil-N-(5-metil-2-furilsulfonil)-amino-1-4 , 5-dimetilfenoximetil]benzóico; o ácido 3-metil-4-[2-[N-isobutil-N-(5-metil-2-furilsulfonil)amino]-4,5-dimetilfenoximetil]benzóico; o ácido 4-[6-[N-isobutil-N-(5-metil-2-furilsulfonil)amino]indan-5iloximetil]cinâmico; oácido 3-metil-4-[6-[N-isobutil-N-(4-metil-2-tiazolylsulfonil)amino]indan-5-iloximetil]cinâmico; o ácido4-[4,5-dimetil-2 -[N-metil-N-(5-metil-2-furilsulfonil)-N-propilamino]fenoximetil]benzóico; o ácido 4[6-[N-isobutil-N-(4-metil-2-thiazolylsulfonil)amino]indan-5-iloximetil]benzóico; os sais atóxicos dos mesmos, ou osésteres dos mesmos.

Os exemplos de antagonistas de endotelin incluem,mas sem ficar a eles limitados, antagonistas de endotelin nãopeptídicos tais como bosentan, antagonista do receptorETA/ETB, tal como PD145065, e a enzima de conversão deendotelin tal como fosforamidon.

Os exemplos de agentes anti-diabéticos incluem, massem ficar a eles limitados, intensificadores da secreção deinsulins, intensificadores da sensibilidade à insulina,moduladores do trajeto de sinalização de insulina, tais comoinibidores de fosfatases da proteína tirosina (PTPases) ,compostos miméticos que não de moléculas pequenasantidiabéticos e inibidores de amidotransferase de glutamina-fructose-6-fosfato (GFAT); os compostos que influenciam umaprodução de glicose hepática desregulada, tais como osinibidores de glicose-6-fosfatase (G6Pase), os inibidores defrutose-1,6-bisfosfatase (F-l,6-BPase), os inibidores deglicogênio fosforilase (GP) , os antagonistas do receptor deglucagon e os inibidores fosfoenolpiruvato de carbóxi cinase(PEPCK); os inibidores de piruvato desidrogenase quinase(PDHK); os inibidores de esvaziamento gástrico; insulina; osinibidores de GSK-3; agonistas do receptor de retinoide X(RXR); agonistas de β-3 AP; agonistas de proteínas dedesacoplamento (UCPs); agonistas de PPARy que não do tipoglitazona; agonisas duplos de PPARy/PPARa; compostos anti-diabéticos contendo vanádio; hormônios de incretina, taiscomo agonistas de peptídeo-1 tal como glucagona (GLP-I) eagonistas de GLP-1; antagonistas de receptor de imidazolinade células β; miglitol; e antagonistas a2-adrenérgicos.

Os exemplos de inibidores de reductase HMG-Co-Aincluem, mas sem ficar a eles limitados, atorvastatin,cerivastatin, fluvastatin, pitavastatin, lovastatin,pravastatin, rosuvastatin, simvastatin, mevastatin, e os saisfarmaceuticamente aceitáveis, ésteres, lactonas e formasisoméricas dos mesmos.

Os exemplos de inibidores de absorção de serotoninincluem, mas sem ficar a eles limitados, femoxetine,fluoxetine, fluvoxamine, indalpine, indeloxazine,milnacipran, paroxetine, sertraline, sibutramine, zimeldine,citalopram, escitalopram, fenfluramine, venlafaxine,duloxetine e aqueles apresentados por Marek GJ et. al.,Pedido de patente norte-americano n°. 20050014848, requerentePfizer.

Em uma outra realização, a invenção apresentaformas de dosagem separadas de um composto da presenteinvenção e um segundo agente terapêutico, que são associadosum com o outros. 0 termo "associados um com o outro" tal comoempregado na presente invenção significa que formas dedosagem separadas são acondicionadas juntas ou então unidasumas às outras de uma maneira tal que fique imediatamenteevidente que as formas de dosagem separadas se prestam a servendidas e administradas conjuntamente (dentro de menos de 24horas umas das outras, consecutiva ou simultaneamente).

Nas composições farmacêuticas da invenção, ocomposto da pesente invenção está presente em uma quantidadeeficaz. Tal como empregado na presente invenção, o termo"quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade que, quandoadministrada em um regime de dosagem apropriado, é suficientepara reduzir ou melhorar a gravidade, a duração ou aprogressão ou para intensificar a função comprometida por umdistúrbio associado com a atividade elevada de PDE 5 ouconcentrações intracelulares baixas de cGMP, por exemplo, nasparedes arteriais ou no músculo lisdo do corpo cavernoso;para impedir o avanço de um distúrbio associado com baixasconcentrações de cGMP intracelulares vasculares ou de músculoliso, causar a regressão de um distúrbio associado com baixasconcentrações de cGMP intracelulares vasculares ou de músculoliso, ou intensificar ou melhorar o(s) efeito(s) profiláticosou terapêuticos de uma outra terapia.

Em determinadas realizações preferidas, otratamento de acordo com a invenção propicia uma redução ouuma prevenção de pelo menos um sintoma ou manifestação de umdistúrbio que esteja ligado à atividade de PDE5, tal comodeterminado na inibição in vivo ou in vitro de pelo menosaproximadamente 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%,95%, 98% ou 99% de tal atividade. Com respeito à inibição daatividade de PDE5, o termo "quantidade eficaz" significa umaquantidade que resulta em uma redução detectável nacapacidade de PDE5 de converter cAMP ou cGMP ou seusisotopólogos etiquetados com 32P, respectivamente, em 5'-7JyiPou 5'-GMP ou seus isotopólogos etiquetados com 32P; ouaumento na quantidade ou concentração de cGMP intracelular,particularmente no tecido de músculo liso arterial e corpocavernoso, em um paciente ou em uma amostra biológica; ou acorreção ou o alívio de um comportamento, um déficit, umsintoma, uma síndrome ou uma doença, ou a intensificação deuma função comprometida de outra maneira que foi ligada abaixos níveis de cGMP intracelular, sozinha ou em combinaçãocom um outro agente ou agentes; ou a indução de umcomportamento, uma atividade ou uma resposta que estejaligada a níveis normalizados ou aumentados de cGMPintracelular.

A inter-relação de dosagens para animais e sereshumanos (com base em miligramas por metro quadrado dasuperfície corpórea) é descrita por Freireich et al. , (1966)Câncer Chemother Rep 50:219. As áreas de superfície corpóreaspodem ser aproximadamente determinadas a partir da altura edo peso do paciente. Consultar, por exemplo, ScientificTables, Geigy Pharmaceuticals, Ardley, N.Y., 1970, 537. Umaquantidade eficaz de um composto da presente invenção podevariar de aproximadamente 0,001 mg/kg a aproximadamente 500mg/kg, com mais preferência 0,01 mg/kg a aproximadamente 50mg/kg, e ainda com mais preferência 0,025 mg/kg aaproximadamente 1,5 mg/kg. Doses eficazes também irão variar,tal como reconhecido pelos elementos versados na técnica,dependendo das doenças tratadas, da gravidade da doença, davia de administração, do sexo, da idade e da condição geralde saúde do paciente, do uso do excipiente, da possibilidadede co-uso com outros tratamentos terapêuticos tal como o usode outros agentes, e do julgamento do médico atendente.

Para as composições farmacêuticas que compreendemum segundo agente terapêutico, uma quantidade eficaz dessesegundo agente terapêutico fica compreendida entreaproximadamente 20% e 100% da dosagem utilizada normalmenteem um regime de monoterapia utilizando apenas esse agenteadicional. De preferência, uma quantidade eficaz ficacompreendida entre aproximadamente 70% e 100% da dosemonoterapêutica normal. As dosagens monoterapêuticas normaisdos segundos agentes terapêuticos são bem conhecidas noestado da técnica. Consultar, por exemplo, Wells et al.,eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a edição, Appleton andLange, Stamford, Conn. (2 000); PDR Pharmacopoeia, TarasconPocket Pharmacopoeia 2000, edição de luxo, TarasconPublishing, Loma Linda, Calif (2000), sendo que cada uma dasreferências é incorporada inteiramente na presente invenção atitulo de referência.

Espera-se que alguns dos agentes terapêuticossecundários relacionados acima ajam sinergisticamente com oscompostos da presente invenção. Quando isto ocorrer, irápermitir que a dosagem eficaz do segundo agente terapêuticoe/ou do composto da presente invenção seja reduzida daquelarequerida em um monoterapia. Isto tem a vantagem de minimizaros efeitos colaterais tóxicos do segundo agente terapêuticoou de um composto da presente invenção, incrementossinergisticos na eficácia, facilidade melhorada deadministração ou uso e/ou despesa total reduzida napreparação ou formulação do composto.

Métodos de Tratamento

Em uma realização, a presente invenção apresenta ummétodo de inibição de PDE 5 ou de aumento dos níveisintracelulares de GMP, particularmente no músculo lisoarterial e do corpo cavernoso, em um indivíduo, o qualcompreende a etapa de administração ao dito indivíduo de umaquantidade eficaz de um composto da fórmula II, combinado depreferência em uma composição com um veículofarmaceuticamente aceitável.

O método é empregado de preferência para otratamento de um indivíduo que sofre ou é suscetível a uma oumais doenças ou distúrbios selecionados entre disfunçãoerétil, angina estável, instável e variante, hipertensão,hipertensão pulmonar, doença pulmonar obstrutiva crônica,síndrome de aflição respiratória aguda, hipertensão maligna,feocromocitoma, falha cardíaca congestiva, falha renal aguda,falha renal crônica, aterosclerose, condição de patênciareduzida de vasos sangüíneos, doenças vasculares periféricas,distúrbios vascular, trombocitemia, doenças inflamatórias,infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, bronquite,asma crônica, asma alérgica, rinite alérgica, glaucoma,úlcera péptica, distúrbios de motilidade do intestino,angioplastia da coronária ou carótida transluminal pós-percutânea, estenose de enxerto de cirurgia pós-desvio,osteoporose, trabalho de pré-terminus, hipertrofia prostáticabenigna, e síndrome de intestino irritável, nos seres humanose nos animais; disfunção erétil nos seres humanos e nosanimais machos; e distúrbio de estimulação de fêmea nasfêmeas. O método também pode ser empregado para o tratamentode um indivíduo que sofre ou é suscetível a uma ou maisdoenças ou distúrbios selecionados da baixa contagem deesperma nos machos que impede a fertilização bem sucedida deum ovo; a redução da resistência à insulina; a prevenção deferimentos de isquemia/reperfusão; a prevenção ou otratamento de uma condição que envolve a fibrose,· e paraaliviar a dor ou a espasticidade em um paciente que sofre deferimento do cordão espinhal. Outras realizações incluemqualquer um dos presentes métodos em que o indivíduo éidentificado como com necessidade do tratamento indicado.

De preferência, o método é utilizado com maispreferência no tratamento de um distúrbio sexual ou umdistúrbio cardiovascular, em que o distúrbio sexual éselecionado entre disfunção erétil ou distúrbio deestimulação de fêmea. Com mais preferência, a condição a sertratada é a disfunção erétil.

Um outro aspecto da invenção é um composto dafórmula II para ser utilizado no aumento dos níveisintracelulares de GMP ou na inibição de PDE5. De preferência,esse uso é no tratamento ou na prevenção em um assunto de umadoença, um distúrbio ou um sintoma indicados acima.

Um outro aspecto da invenção é o uso de um compostoda fórmula II na manufatura de um medicamento para aumentaros níveis intracelulares de GMP ou inibir PDE5. Depreferência, o medicamento é utilizado para o tratamento ou aprevenção em um indivíduo de uma doença, um distúrbio ou umsintoma indicados acima.

Em uma outra realização, o método de tratamento deuma das doenças, distúrbios ou sintomas indicados acimacompreende adicionalmente a etapa de administração ao ditopaciente de um segundo agente terapêutico que, sozinho ou emcombinação com o Composto 1, seja eficaz aos estadossexualmente deficientes nos seres humanos com epilepsia,craniofaringioma, hipogonadismo, ou que tenham tido umahisterectomyooforectomia, histerectomia ou ooforectomia; oupara induzir o acasalamento em animais que não seres humanos.

Em ainda uma outra realização, o método detratamento compreende a etapa adicional de administração aodito paciente de um segundo agente terapêutico que, sozinhoou em combinação com o Composto 1, seja eficaz no tratamentode um ou mais dentre a hiperglicemia, hiperinsulinemia,hiperlipidemia, hipertrigliceridemia, diabetes, resistência àinsulina, metabolismo de glicose enfraquecido, condição detolerância à glicose enfraquecida (IGT), condição de glucosede plasma de jejum enfraquecida, obesidade, retinopatiadiabética, nefropatia diabética, glomerulosclerose,neuropatia diabética, síndrome X, doença cardíaca dascoronárias, angina pectoris, restenose vascular, disfunçãoendotelial, depressão, epilepsia, ataques de desmaio,hipocinesia, distúrbios craniais, distúrbiosneurodegenerativos, depressão, ansiedade,o pânico, dor,síndrome de intestino irritável, distúrbios do sono,osteodistrofia, artrite reumatoide, distúrbiosneuropatológicos, dor visceral, distúrbios funcionais dointestino, doenças inflamatórias do intestino, dor associadacom a dismenorréia, dor pélvica, cistite, pancreatite, edemacíclico, mal de Menires, hiperaldosteroneismo (primário esecundário), hipercalciuria e sintomas do trato urinárioinferior, com exceção da incontinência urinária, associadoscom a hiperplasia de bexiga superativa e/ou prostáticabenigna.

O segundo agente terapêutico pode ser administradojuntamente com um composto da fórmula II como parte de umaúnica forma de dosagem ou como formas de dosagens múltiplas.

Alternativamente, o segundo agente terapêutico pode seradministrado antes, consecutivamente, ou depois daadministração de um composto da presente invenção. Em taltratamento de terapia de combinação, os compostos da presenteinvenção e o(s) segundo(s) agente(s) terapêutico(s) sãoadministrados por métodos convencionais. A administração dosegundo agente terapêutico pode ocorrer antes,simultaneamente e/ou após a administração do composto dapresente invenção. Quando a administração do segundo agenteterapêutico ocorre simultaneamente com um composto dapresente invenção, os dois (ou mais) agentes podem seradministrados em uma única forma de dosagem (tal como umacomposição da presente invenção que compreende um composto dainvenção e um segundo agente terapêutico tal como descritoacima), ou em formas de dosagens separadas. A administraçãode uma composição da presente invenção que compreende umcomposto da invenção e um agente terapêutico adicional a umindivíduo não impossibilita a administração separada do ditoagente terapêutico, de nenhum outro agente terapêutico ou denenhum composto da presente invenção ao dito indivíduo em umaoutra hora durante um curso de tratamento.

As quantidades eficazes de um segundo agenteterapêutico útil nos métodos da presente invenção são bemconhecidas dos elementos versados na técnica e a orientaçãopara a dosagem pode ser encontrada nas patentes aquimencionadas. No entanto, está bem dentro da visão geral doelemento versado na técnica a determinação da faixa ideal deuma quantidade eficaz do outro agente terapêutico. Em umarealização da invenção onde um segundo agente terapêutico éadministrado a um animal, a quantidade eficaz do composto dapresente invenção é menor do que a sua quantidade eficaz nocaso em que o segundo agente terapêutico não é administrado.

Em uma outra realização, a quantidade eficaz do segundoagente terapêutico é menor do que sua quantidade eficaz nocaso em que o composto da presente invenção não éadministrado. Desta maneira, os efeitos colateraisindesejados associados com as doses elevadas de um ou outroagente podem ser minimizados. Outras vantagens potenciais(que incluem sem limitação regimes de dosagem melhorados e/oucusto reduzido das drogas) serão aparentes aos elementosversados na técnica.

Os segundos agentes terapêuticos úteis no método detratamento da presente invenção são os mesmos que aquelesdescritos acima como parte das composições em combinação.

De acordo com um outro aspecto, a invençãoapresenta um composto da fórmula II e um ou mais dos segundosagentes terapêuticos descritos acima, ou em uma únicacomposição ou como formas de dosagens separadas para o uso notratamento ou na prevenção em um indivíduo de uma doença, umdistúrbio ou um sintoma indicados acima.

Em ainda um outro aspecto, a invenção apresenta ouso de um composto da fórmula II e um ou mais dos segundosagentes terapêuticos descritos acima na manufatura de ummedicamento, ou como uma única composição ou como formas dedosagens separadas, para o tratamento ou a prevenção em umindivíduo de uma doença, um distúrbio ou um sintoma indicadosacima.

Os compostos da presente invenção podem serensaiados in vitro por métodos conhecidos. Por exemplo, osensaios humanos da inibição de PDE5, e as fosfodiesterasesrelacionadas PDE3, PDE4, e PDE6, estão comercialmentedisponíveis junto à MDS Pharma Services. A Cerep (Paris,França) fornece ensaios comerciais para PDEl, PDE2, PDE3,PDE4, PDE5 e PDE6. A metodologia para tais ensaios também ébem conhecida; consultar, por exemplo Komas N et. al., Br J.Pharmacol 1991 104:495; Wells JN, Biochim. Biophys. Acta 197519:430; e Rotella DP et. al., J. Med. Chem. 2000 43:1257. Osaumentos em níveis intracelulares de GMP no tecido apropriadotambém são determinados imediatamente; consultar, porexemplo, Daugan AC-M e Gellibert F, Patente U.S. n°.6.143.746 concedida à ICOS. Desse modo, a atividadeenzimática e a especificidade para os compostos da presenteinvenção, bem como a eficácia celular, são determinadosimediatamente.

Os modelos animais que medem a atividade anti-hipertensiva também estão disponíveis e fornecem a mediçãopreditiva in vivo da capacidade dos inibidores PDE5 deefetuar a vasodilatação por aumentos em níveis de cGMP emmúsculo liso arterial bem como a potência e a extensão daação dos inibidores. Consultar, por exemplo, Daugan AC-M eGellibert F, Patente U.S. n°. 6.143.74 6 concedida à ICOS;30 Daugan A et. al. J. Med. Chem. 2003 46:4533. Cada um doscompostos da presente invenção pode ser testados por taismeios. Os compostos da presente invenção também podem sertestados em ensaios in vitro, para quantificar a suaatividade, resistência ao metabolismo do fígado pelaexposição celular ou do tecido, ou por enzimas metabólicasisoladas tais como CYP3A4, ou pela medição farmacocinética invivo (disponível comercialmente, por exemplo, junto à SRIBiosciences, Menlo Park, CA; Covance, Princeton NJ; CharlesRiver Laboratories, Wilmington, MA; e Cerep, Seattle WA;entre outros) e comparado ao Composto 1.

Métodos de kits de diagnósticose acordo com uma outra realização, a invençãoapresenta um método para determinar a concentração doComposto 1 em uma amostra biológica, em que o dito métodocompreende as etapas de:

a) adição de uma concentração conhecida de umsegundo composto à dita amostra biológica, em que o ditosegundo composto tem a fórmula:

Fórmula II:em que:

X1 e X2 são simultaneamente fluoro; ou X1 é deutérioe X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério;

cada Y é selecionado independentemente entredeutério ou hidrogênio;

o hidrogênio unido ao nitrogênio do indol ésubstituído opcionalmente pelo deutério;

cada carbono é opcionalmente substituídoindependentemente por 13C; e em que pelo menos o hidrogênio ésubstituído pelo deutério ou pelo menos um carbono ésubstituído por 13C;

b) sujeição da dita amostra biológica a umdispositivo de medição que distingue o Composto 1 do ditosegundo composto;

c) calibração do dito dispositivo de medição paracorrelacionar a quantidade detectada do Composto 1 com aconcentração conhecida do dito segundo composto adicionado àdita amostra biológica; e

d) determinação da concentração do dito composto nadita amostra biológica comparando a quantidade detectada doComposto 1 com a quantidade detectada e a concentraçãoconhecida do dito segundo composto.

Em uma realização preferida, o dito segundocomposto tem a fórmula:

<formula>formula see original document page 67</formula>

(IV), em que:Y é hidrogênio ou deutério e;

cada átomo do hidrogênio é substituídoopcionalmente pelo deutério e cada átomo de carbono ésubstituído opcionalmente por 13C.

Os dispositivos de medição que podem distinguir oComposto 1 do dito segundo composto incluem qualquerdispositivo de medição que possa distinguir entre doiscompostos que são de estrutura idêntica, exceto pelo fato queum deles contenha um ou mais isótopos de átomo pesado versus

o outro. De preferência, tal dispositivo de medição é um espectrômetro de massa.

Em uma realização preferida, pelo menos três átomosde hidrogênio e carbonos combinados são, respectivamente,substituídos por deutério e 13C no dito segundo composto;isto é, (número total de D) + (número de 13C)≥3.

Em uma outra realização preferida, o métodocompreende a etapa adicional de extração orgânica do Composto1e do dito segundo composto da dita amostra biológica pelaextração de fase orgânica ou sólida antes da etapa b).O Composto Ieo segundo composto terãopropriedades de solubilidade, extração e cromatográficassimilares, mas uma massa molecular significativamentediferente. Desse modo, o segundo composto é útil como umpadrão interno em um método que compreende a etapa deextração orgânica para medir a eficiência dessa extração epara assegurar uma determinação exata da concentraçãoverdadeira do Composto 1 (consultar Tuchman M e McCann MT,Clin. Chem. 1999 45:571; Leis HJ et. al. , J. Mass Spectrom.2001 36:923; Taylor RL et. al. , Clin. Chem. 2002 48:1511).

Os compostos da presente invenção (o segundocomposto) são particularmente úteis neste método, contantoque não sejam radioativos e portanto não representem perigoao pessoal que manuseia os compostos. Desse modo, essesmétodos não requerem precauções além daquelas aplicadasnormalmente na análise de amostras clinicas.

Além disso, os isótopos etiquetados estavelmenteforam utilizados por muito tempo para ajudar na pesquisasobre o mecanismo enzimático de enzimas do citocromo P450(Korzekwa KR et. al., Drug Metab. Rev. 1995 27:45 ereferências no mesmo; Kraus JA e Guengerich FP, J. Biol.Chem. 2005 280:19496; Mitchell KH et. al., Proc. Natl. Acad.Sei. EUA 2003 109:3784).

Em uma outra realização, a invenção apresenta umkit de diagnósticos que compreende:

a) um composto que tem o composto que possui afórmula:<formula>formula see original document page 69</formula>

(II), em que:

X1 e X2 são simultaneamente fluoro; ou X1 é deutérioe X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério;

cada Y é selecionado independentemente entredeutério ou hidrogênio;

o hidrogênio unido ao nitrogênio do indol ésubstituído opcionalmente pelo deutério;

cada carbono é opcionalmente substituídoindependentemente por 13C; e

pelo menos o hidrogênio é substituído pelo deutérioou pelo menos um carbono é substituído por 13C; e

b) instruções para usar o dito composto paradeterminar a concentração de um composto de teste em umaamostra biológica.

Em uma realização preferida, o dito composto tem afórmula:(IV), em que:

Y é hidrogênio ou deutério e;

cada átomo de hidrogênio é substituídoopcionalmente pelo deutério e cada átomo de carbono ésubstituído opcionalmente por 13C.

Em uma outra realização, a invenção apresenta ummétodo de avaliação da estabilidade metabólica de um compostoda fórmula II, o qual compreende as etapas de colocação docomposto da fórmula il em contato com uma fonte de enzimametabolizante por um período de tempo; e comparação daquantidade do dito composto aos produtos metabólicos do ditocomposto depois do dito período de tempo.

Em uma outra realização, o método compreende umaetapa adicional de comparação da quantidade do dito compostoaos produtos metabólicos do dito composto em um intervalodurante o dito período de tempo. Este método permite adeterminação de uma taxa de metabolismo do dito composto.

Em uma outra realização preferida, o métodocompreende as etapas adicionais de colocação de um compostoda fórmula II em contato com uma dita fonte de enzimametabolizante; comparação da quantidade do dito composto dafórmula II aos produtos metabólicos do dito composto dafórmula II após o dito período de tempo determinando uma taxade metabolismo do dito composto da fórmula I; e comparação daestabilidade metabólica do Composto 1 e do dito composto dafórmula II. Este método é útil na determinação de quaissítios em um composto da fórmula II a substituição dodeutério ou de 13C adicional deve causar aumentos naestabilidade metabólica. Ele também é útil na comparação daestabilidade metabólica de um composto da fórmula II com aestabilidade metabólica do Composto 1.

Uma fonte de enzima metabolizante pode ser umaproteína metabólica purificada, isolada ou parcialmentepurificada, tal como um citocromo P450; uma fração biológica,tal como uma fração do microssomo do fígado; ou uma parte deum órgão metabolizante, tal como uma fatia do fígado.

A determinação da quantidade de composto e de seusprodutos metabólicos é bem conhecida no estado da técnica.Ela é tipicamente obtida ao remover uma alíquota da misturade reação e ao submeter a uma análise capaz de distinguirentre o composto e seus metabólitos, tais como HPLC de fasereversa com absorção de UV ou detecção espectroscópica demassa. As concentrações da enzima metabolizante e do compostopodem ser variadas para determinar os parâmetros cinéticos,por exemplo, utilizando um software de regressão não-linearapropriado tal como é conhecido no estado da técnica. Aocomparar os parâmetros cinéticos de um composto da fórmula Ie o Composto 1, um efeito do isótopo de deutério de estadoestacionário (D(V/K)) pode ser determinado como a relação dosprodutos formados no hidrogênio versus as reações dodeutério.

A determinação de uma taxa de metabolismo de umcomposto da fórmula I pode ser conseguida em uma reaçãoseparada da reação para determinar a taxa de metabolismo doComposto 1. Alternativamente, o Composto 1 pode ser misturadocom um composto da fórmula I em uma experiência de competiçãopara determinar as taxas de desaparecimento dos doiscompostos, ao empregar uma instrumentação analítica capaz dediferenciar entre os dois compostos com base em suasdiferenças de massa.

Contudo, em uma outra realização, a cinética deestado pré-estacionário, tal como V0, pode ser determinadapelos meios conhecidos no estado da técnica, por exemplo,utilizando um aparelho de fluxo de resfriamento brusco, aomonitorar as reações de resfriamento brusco em temposvariáveis após ter misturado o composto ou o isotopólogo coma fonte de enzima metabolizante.

Em uma realização correlata, a invenção apresentaum kit que compreende, em frascos separados: a) o Composto 1;e b) uma fonte de enzima metabolizante. O kit é útil paracomparar a estabilidade metabólica de um composto da fórmulaI com o Composto 1, bem como a avaliação do efeito dodeutério e a substituição de 13C em várias posições em umcomposto da fórmula I. Em uma realização preferida, o kitcompreende adicionalmente instruções para o uso do Composto 1e da dita fonte de enzima metabolizante para avaliar aestabilidade metabólica de um composto da fórmula I.

A fim de que a invenção possa ser compreendida maisamplamente, os seguintes exemplos são apresentados. Eles nãose prestam a limitar o âmbito da invenção e exemplosadicionais ficarão evidentes aos elementos versados natécnica. Em cada exemplo apresentado na presente invenção, ocarbono será 12C e o hidrogênio será 1H, sendo que cada um éincorporado em sua abundância natural, a menos que estejaespecificado de alguma outra maneira.

Exemplo 1: 2 , 2-Difluorobenzo[d] [1,3]dioxol-5-carbaldeído. Umasolução de 12 7 mmol de 5-bromo-2,2-difluorobenzo[d] [l,3]dioxol em 200 ml de THF é resfriada sobargônio em um banho de C02/acetona e tratada com 1,05equivalente de n-BuLi em THF. A mistura é agitada poraproximadamente dez minutos a frio, e então tratada com 1,2equivalente de DMF. A mistura é agitada por trinta minutos afrio, e a seguir o banho frio é removido e a reação é agitadapor uma hora e meia à temperatura ambiente e então resfriadabruscamente com 150 ml de uma solução saturada de cloreto deamônio. A camada orgânica é separada e a camada aquosa élavada duas vezes com éter. Os componentes orgânicoscombinados são lavados com salmoura, secados em MgSO4 econcentrados em vácuo. A cromatografia com gel de sílica(eluente de EtOAc/hexanos) resulta no composto do título.

Exemplo 2: 5-Bromo-6-deutero-2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol.

Uma solução de 24 mmol de 5,6-dibromo-2,2-difluorobenzo[d] [l,3]dioxol (Chemos gmbH, Regenstauf,Alemanha) em 4 0 ml de THF é resfriada sob argônio em um banhode C02/acetona e tratada com 0,98 equivalente de n-BuLi emTHF. A mistura é agitada por aproximadamente dez minutos afrio, e então tratada com 1 ml de D2O. A mistura é agitadapor quinze minutos a frio, e a seguir o banho frio é removidoe a agitação é continuada por uma hora e meia, e a seguirresfriada bruscamente com 4 0 ml de uma solução saturada decloreto de amônio. A camada orgânica é separada então e acamada aquosa é lavada duas vezes com éter. Os componentesorgânicos combinados são lavados com salmoura, secados comMgSO4 e concentrados em vácuo. A cromatograf ia com gel desílica (eluente de éter) resulta no composto do título.Exemplo 3: 6-Deutero-2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-carbaldeído. Uma porção de 13,2 mmol do produto do Exemplo 2é formilada empregando o procedimento geral descrito noExemplo 1 para obter, após o cromatografia com gel de sílicacom eluente de EtOAc/hexanos, o produto do título.Exemplo 4: 2,2-Difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-deuterocarbaldeído. Uma amostra de 32,2 de 5-bromo-2,2-difluorobenzo[d][l,3]dioxol é formilada empregando oprocedimento geral descrito no Exemplo 1 exceto pelo fato queé utilizada Ν,Ν-dimetil formamida-l-d como reagente deformilação para obter, após o cromatografia com gel de sílicacom eluente de EtOAc/hexanos, o produto do titulo.Exemplo 5: (IH)-)-Metil 1-(2,2-difluorobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4, 9-tetraidro-lH-pirido[3,4,-b]indol-3-carboxilato(fórmula IV, em que E é metila e cada grupo Y é hidrogênio).Uma solução de 37,4 mmol de éster metilico de D-triptofnao e41,1 mmol do produto do Exemplo 1 em 220 ml de cloreto demetileno é resfriada sob argônio em um banho a -5°C e tratadacom 5,4 ml de ácido trifluoroacético. A mistura é agitada portrinta minutos, o banho de gelo é removido, e a agitação écontinuada por 17 horas à temperatura ambiente. A reação éoutra vez resfriada em um banho do gelo e tornadaligeiramente básica (pH ~ 8,5-9) mediante a adição em porçõesde uma solução de NaHCO3 saturada. Após uma agitação por mais45 minutos, a reação é lavada com NaHCO3 IN e a camada aquosaé extraída duas vezes com cloreto de metileno adicional. Ascamadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura meio-saturada, secadas em MgSO4 e concentradas, resultando nocomposto do título. A cromatografia de vaporização com gel desílica (eluente de CH30H/CH2C12) resulta no produto do títulocomo componente do produto de movimento mais rápido enquantoas últimas frações compreenderam o estereoisômero (1S,3R).

Exemplo 6: (IR,3R)-Metil 2-(2-chloroacetil)-1-(2, 2-difluorobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH-pirido [3,4,-jb] indol-3-carboxilato (fórmula V, em que E émetila e cada grupo Y é hidrogênio) . Uma porção de 12,7 mmoldo produto do Exemplo 5 em 8 0 ml de cloreto de metileno étratada com 15,2 mmol de bicarbonato de sódio e resfriada emum banho de gelo/água sob uma atmosfera de argônio. A misturaé agitada vigorosamente e tratada por gotejamento com 3 0,7mmol de cloreto de cloroacetila. Após uma agitação por dezminutos, o banho do gelo é removido e a agitação é continuadapor uma hora e meia à temperatura ambiente. A mistura édividida entre 150 ml cada de éter e NaHCO3 saturado, e acamada orgânica é lavada com água, a seguir com salmoura, esecada em MgSO4 e concentrada em vácuo. 0 produto resultanteé utilizado em reações subseqüentes sem purificaçãoadicional.

Exemplo 7: (6R, 12aR)- 6 -(2,2-Difluorobenzo[d]-1,3-dioxol-5 -il) -1,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[11,2' :1,6]pirido[3,4-b]indol-2-trideuterometil-l,4-diona (fórmula III em queY , Y e Y sao deuterio e todos os grupos Y restantes saohidrogênio). Uma solução de 8,2 mmol do produto do Exemplo 6em 3 0 ml de metanol é tratada com 41 mmol de metilamina-d5(Isotec) como uma solução a 18% em metanol. A mistura éaquecida a 50 0C sob argônio por 17 horas, e a seguirconcentrada em vácuo. 0 resíduo é dissolvido em cloreto demetileno e lavado com água (duas vezes) e salmoura meiosaturada, e então secado em MgSO4 e concentrado em vácuo. Acromatografia com gel de sílica com cloreto demetileno/metanol como eluente resulta no produto do título.

Exemplo 8: (IR,3R)Metil 1-(6-deutero-2,2-difluorobenzo[d]-dioxol-5-il) 2,3,4, 9-tetraidro-lH-pirido [3,4, -Jb] indol-3-carboxilato (fórmula IV, em que E é metila, Y4 é deutério etodos os grupos Y restantes são hidrogênio) . Uma amostra doproduto do Exemplo 3 (6,6 mmol) é reagida com 38,5 mmol deéster met[ilico de D-d-triptofano empregando procedimentogeral descrito no Exemplo 5, obtendo o produto cis-transmisto. A cromatografia de vaporização em gel de sílica(eluente de CH3OH/CH2Cl2) do produto do Exemplo 8 resulta noproduto do título como o componente do produto de movimentorápido.

Exemplo 9: (6R, 12aR)-6-(6-Deutero-2,2-difluorobenzo[d]-1, 3-dioxol-5-il)-2-metil-l,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[11,21:1,6]pirido[ 3,4-b]indol-1,4-diona(fórmula III em que Y4 é deutério e todos os grupos Yrestantes são hidrogênio). Uma parte do produto do Exemplo 8(8,7 mmol) é reagida com metilamina (como uma solução a 33%(em peso) em etanol) empregando o procedimento geral descritono Exemplo 6 para obter, após a cromatograf ia com gel desílica com cloreto de metileno/metanol como eluente, oproduto do título.

Exemplo 10: (lS,3R)Metil 1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-l-deutero-2-propionil-2,3,4,9-tetraidro-lH-pirido[3,4-Jb] indol-3-carboxilato (fórmula IV, em que E é metila, Y7 édeutério e todos os grupos Y restantes são hidrogênio). Umaamostra de 18,7 mmol do produto do Exemplo 4 é sujeitada àciclização de Pictet-Spengler com 20,6 mmol de éster metílicode D-triptofano e 2,7 ml de CF3CO2D empregando o procedimentogeral descrito no Exemplo 5 para obter, após a cromatografiacom gel de sílica com cloreto de metileno/metanol comoeluente, o produto do título como componente do produto demovimento rápido.

Exemplo 11: (IR,3R)Metil 2-(2-chloroacetil)-1-deutero-l-(2,2-difluorobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH- 25 pirido [3,4, -Jb] indol-3-carboxilato (fórmula V, em que E émetila, Y7 é deutério e todos os grupos Y restantes sãohidrogênio). Uma porção de 5,7 mmol do produto do Exemplo 10é cloracetilada de acordo com o procedimento geral descritono Exemplo 6. 0 produto resultante é utilizado em reaçõessubseqüentes sem purificação adicional.

Exemplo 12: (6R,12aR)-6-Deutero-6 -(2,2-difluorobenzo[d]-1,3 -dioxol-5-il)-2-metil-l,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[1',21:1,6]pirido[3,4-b,indol-4-diona(fórmula III em que Yl é deutério e todos os grupos Yrestantes são hidrogênio). Uma solução de 3,9 mmol do produtodo Exemplo 11 é reagida com metilamina empregando oprocedimento geral descrito no Exemplo 9 para obter, após acromatografia com gel de sílica com cloreto demetileno/metanol como eluente, o produto do título.Exemplo 13: (IR,3R)Metil 2-(2-dideuterochloroacetil)-1-(2,2-difluorobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lHpirido [3 , 4 ,-£>] indol-3-carboxilato (fórmula V, em que E émetila, Y8a e Y8b são deutério e todos os grupos Y restantessão hidrogênio). Uma solução de 6,8 mmol de ácidocloroacético-d3 (isótopos de C/D/N) e 7,2 mmol dediisopropiletilamina em 18 ml de cloreto de metileno éresfriada em um banho de gelo/metanol sob argônio e tratadapor gotejamento com 6,8 mmol de cloreto de pivaloila. Asolução é agitada por vinte minutos, e a seguir tratada comuma solução de 4,5 mmol do produto do Exemplo 5 e 4,5 mmol dediisopropiletilamina em 2 ml de cloreto de metileno. Asolução é agitada por 16 horas a 0°C, dividida então entre 15ml cada de éter e NaHCO3 saturado, e a camada orgânica élavada com salmoura, secada em MgSO4 e concentrada em vácuo.

O produto é utilizado para reações subseqüentes sempurificação adicional.

Exemplo 14: (6R, 12aR)-3,3-Dideutero-6-(2,2-difluorobenzo[d] -1,3-dioxol-5-il)-2-metil-l,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino [11,2' :1,6]pirido [ 3,4-b]indol-1,4-diona(fórmula III em que Y8a e Y8b é deutério e todos os grupos Yrestantes são hidrogênio). 0 produto inteiro do produto doExemplo 13, exceto uma porção de ~2 mg retida, é reagido commetilamina empregando o procedimento geral descrito noExemplo 9 para obter, após a cromatografia com gel de sílicacom cloreto de metileno/metanol como eluente, o produto dotítulo.Exemplo 15: (6R, 12aR)-6-Deutero-6-(2,2-difluorobenzo[d]-If3-dioxol-5-il) -2-metH-13C-I, 2, 3, 4, 6, 7, 12, 12a-octaidropirazino[l1,21:1,6]pirido[3,4-b]indol-1,4diona(fórmula III em que Y7 é deutério e todos os grupos Yrestantes são hidrogênio, e o grupo n-metila é substituídopor 13C). Um frasco de pressão de parede pesada é carregadocom porções de 2,6 mmol do produto do Exemplo 11 em 12 ml demetanol. A solução é tratada com 5,2 mmol de cloridreto demetil-13C-amina (Isotec) e 5,2 mmol de diisopropiletilamina.

O frasco é lacrado e aquecido a 500C por 16 horas, a reação éentão concentrada em vácuo, o resíduo é dividido entrecloreto de metileno e água, e a camada orgânica é lavada comsalmoura meio saturada, secada em MgSO4 e concentrada emvácuo. A cromatografia com gel de sílica com cloreto demetileno/metanol como eluente resulta no composto do título.

Exemplo 16: (IR,3R)Metil 2-(2-cloroacetil-2-13C)-1-deutero-1-(2, 2-difluorobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH-pirido [3, 4,-jb] indol-3-carboxilato (fórmula V, em que E émetila, Y7 é deutério e todos os grupos Y restantes sãohidrogênio e o grupo cloroacetil metileno é substituído por13C). Uma porção de 1,8 mmol do produto do Exemplo 10 écloroacetilado empregando o procedimento geral descrito noExemplo 13 exceto que ácido cloroacético-2-13C (Isotec) ésubstituído no lugar de ácido cloroacético-d3. Depois daelaboração, o produto é utilizado sem purificaçãosubseqüente.

Exemplo 17: (6R, 12aR)- 6-Deutero-6-(2,2-difluorobenzo[d]-1,3 -dioxol-5-il)-2-metil-l,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[l1,21:1,6]pirido[3,4-b]indol-1,4-diona-3-13C(fórmula III em que Yl é deutério e todos os grupos Yrestantes são hidrogênio, e o metileno não-substituído doanel dioxopiperazina é substituído por 13C) . 0 produtointeiro do produto do Exemplo 16, exceto uma porção de ~2 mgretida, é reagido com metilamina empregando o procedimentogeral descrito no Exemplo 9 para obter, após a cromatografiacom gel de sílica com cloreto de metileno/metanol comoeluente, o produto do titulo.

Exemplo 18: (6R, 12aR)- 6 -(2,2-Difluorobenzo[d]-1,3-dioxol-5-il) -1,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[l1,21 :1,6]pirido[3,4-b]indol-2-metil-l, 4-diona (Composto 2). Uma solução de31,7 mmol do produto do Exemplo 6 em 100 ml de metanol étratada com 160 mmol de metilamina como uma solução a 33% emetanol. A mistura é aquecida a 50°C sob argônio por 18 horas,e então concentrada em vácuo. 0 resíduo é dissolvido emcloreto de metileno e lavado com água (duas vezes) e salmourameio saturada, e a seguir secado em MgSO4 e concentrado emvácuo. A cromatografia com gel de sílica com cloreto demetileno/metanol como eluente resulta no produto do título.

Exemplo 19: Deuterodibromometano. Uma solução de 1,1 mole dedeuteróxido de sódio em 14 0 ml de óxido de deutério é tratadasob argônio com 116 mmol de óxido arsenioso para formar umasolução de arsenito de sódio. Bromofórmio (190 mmol) étratado sob argônio com 6,5 ml de etanol-d (CH3CH2OD) e 1 mlda solução de arsenito de sódio e aquecido brevemente(injetor de calor) para iniciar a reação. 0 restante dasolução de arsenito de sódio é adicionado através de funil degotejamento a uma taxa para manter o refluxo suave. A misturaé aquecida então em um banho de óleo a IOO0C por mais quatrohoras e meia. A mistura é destilada azeotropicamente, e aseguir o material destilado é separado e a camada aquosa éextraída com 15 ml de pentano. As camadas orgânicas sãocombinadas, secada com CaCl2, e destiladas para obter ocomposto do título.

Exemplo 20: 2-deuterobenzo[d] [1,3]dioxol-5-carbaldeído(fórmula XII em que X1 é D e X2 é H) . Uma solução de 3,4-diidróxi benzaldeído (20 mmol) em 60 ml de dimetil formamida(DMF) é tratada sob argônio com 60 mmol do produto do Exemplo1 e 70 mmol de CsF. A mistura é aquecida em um banho de óleoa 140°C por três horas com agitação vigorosa. A mistura éentão filtrada, concentrada em vácuo, e o resíduo épurificado por meio de cromatografia de vaporização em gel desílica (eluente de éter), resultando no produto do título.Exemplo 21: 2,2-dideuterobenzo[d] [1,3]dioxol-5-carbaldeído(fórmula XII em que X1 é D e X2 é H) . Uma solução de 3,4-diidróxi benzaldeído (150 mmol) em 110 ml de dimetilformamida (DMF) é tratada sob argônio com 6 00 mmol dedideuterodiclorometano (Aldrich Chemicals) e 720 mmol de CsF.A mistura é aquecida sob refluxo por três horas com agitaçãovigorosa. A mistura é então filtrada, concentrada em vácuo, eo resíduo é purificado por meio de cromatografia devaporização em gel de sílica (eluente de éter), resultando noproduto do título.

Exemplo 22: (IR, 3R)-Metil 1-(2-deuterobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH-pirido[3,4,-b]indol-3-carboxilato(fórmula XIII, em que X1 é D, X2 é H, eEé metila) . Umasolução de 12,7 mmol de éster metílico de D-triptofano e 13,9mmol do produto do Exemplo 21 em 8 0 ml de cloreto de metilenoé resfriada sob argônio em um banho a -5°C e tratada com 1,9ml de ácido deuterotrifluoroacético (CF3CO2D) . A mistura éagitada por trinta minutos, o banho de gelo é removido, e aagitação é continuada por 21 horas à temperatura ambiente. Areação é outra vez resfriada em um banho de gelo e tornadaligeiramente básica (pH ~ 8,5-9) pela adição em porções deuma solução de NaHCO3 saturada. Após uma agitação por mais 45minutos, a reação é lavada com NaHCO3 IN e a camada aquosa éextraída duas vezes com cloreto de metileno adicional. Ascamadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura meiosaturada, secadas em MgSO4 e concentradas, resultando nocomposto do título. A cromatografia de vaporização em gel desílica (eluente de CH30H/CH2C12) resulta no produto do títulocomo componente do produto de movimento rápido enquanto asúltimas frações compreenderam o estereoisômero (1S, 3R).

Exemplo 23: (IR, 3R)-Metil 2-(2-cloroacetil)-1-(2-deuterobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH-

pirido[3,4,-b]indol-3-carboxilato (fórmula XIV em que X1 é D,X2 é H, e E é metila). Uma porção de 4,1 mmol do produto doExemplo 22 em 30 ml de cloreto de metileno é tratada com 5,0mmol de bicarbonato de sódio e resfriada em um banho degelo/água sob uma atmosfera de argônio. A mistura é agitadavigorosamente e tratada por gotejamento com 9,9 mmol decloreto de cloroacetila. Após uma agitação por dez minutos, obanho de gelo é removido e a agitação é continuada por umahora e meia à temperatura ambiente. A mistura é divididaentre 60 ml cada de éter e NaHCO3 saturado, e a camadaorgânica é lavada com água, a seguir com salmoura, e secadaem MgSO4 e concentrada em vácuo. A cristalização do éterresulta no produto do título.

Exemplo 24: (6R, 12aR)-6-(2-deuterobenzo[d]-1, 3-dioxol-5-il)-2-metil-l,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[l1,21:1,6]pirido[3,4-b]indol-1,4-diona(Fórmula IV em que Y=H). Uma solução de 1,8 mmol do produtodo Exemplo 23 em 3 0 ml de metanol é tratada com 9 mmol demetilamina (como uma solução a 33% (em peso) em ethanol) . Amistura é aquecida a 50°C sob argônio por 17 horas, e entãoconcentrada em vácuo. 0 resíduo é dissolvido em cloreto demetileno e lavado com água (duas vezes) e salmoura meiosaturada, e então secada em MgSO4 e concentrada em vácuo. Arecristalização de 2-propanol resulta no composto do título.

Exemplo 25:( IR, 3R)-Metil 1-(2,2-dideuterobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH-pirido[3,4,-b]indol-3-carboxilato(fórmula XIII, em que X1 é D, X2 é H, eEé metila) . Umaamostra do produto do Exemplo 21 (42,2 mmol) é reagida com38,5 mmol de éster metílico de D-triptofano empregando oprocedimento geral descrito no Exemplo 22, resultando noproduto cis-trans misto. A cromatografia de vaporização emgel de sílica (eluente de CH30H/CH2C12) do produto do Exemplo8 resulta no produto do título como componente do produto demovimento rápido.

Exemplo 26: (IR, 3R)-Metil 2-(2-cloroacetil)-1-(2,2-dideuterobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH-pirido[3,4,-b]indol-3-carboxilato (fórmula XIV em que X1 é De X2 é H, e E é metila). Uma porção de 14,1 mmol do produtodo Exemplo 25 é reagida com cloreto de cloroacetilaempregando o procedimento geral descrito no Exemplo 23 paraobter, após a cristalização do éter, o produto do título.

Exemplo 27: (6R, 12aR)-6-(2,2-dideuterobenzo[d]-1,3-dioxol-5-il)-2-metil-l,2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino [1',21 :1,6]pirido[3, 4-b]indol-1,4-diona(Fórmula IV em que Y = D). Uma porção do produto do Exemplo26 (8,7 mmol) é reagida com metilamina alcoólica empregando oprocedimento geral descrito no Exemplo 23 para obter, após acristalização de 2-propanol, o produto do título.

Exemplo 28: (IR, 3R)-Metil 2-(2-cloroacetil-2-13 C)-l-(2,2-dideuterobenzo[d]-dioxol-5-il)-2,3,4,9-tetraidro-lH-pirido[3,4,-b]indol-3-carboxilato. Uma solução de 2,3 mmol deácido cloroacético-2-13C (Isotec) e 2,3 mmol dediisopropiletilamina em 4 mmol de cloreto de metileno éresfriada em um banho de gelo/metanol sob argônio e tratadapor gotejamento com 2,2 mmol de cloreto de pivaloila. Asolução é agitada por vinte minutos, e então tratada com umasolução de 2,2 mmol do produto do Exemplo 25 e 2,2 mmol dediisopropiletilamina em 1 ml de cloreto de metileno. Asolução é agitada por 16 horas a 0°C, dividido então entre 15ml de cada éter e NaHCO3 saturado, e a camada orgânica élavada com salmoura, secada em MgSO4 e concentrada em vácuo.A cristalização do éter resulta no produto do titulo.Exemplo 29: (6R, 12aR)-6 -(2,2-dideuterobenzo[d]-1,3-dioxol-5-il)-2-metil-1,2,3,4,6,7,12,12a-

octaidropirazino[11,21 :1,6]pirido [3,4-b]indol-1,4-diona-3-13C. Uma solução de 0,6 mmol do produto do Exemplo 28 éreagida com metilamina empregando o procedimento geraldescrito no Exemplo 24 para obter, após a cristalização de 2-propanol, o produto do título.

Exemplo 30: (6R, 12aR)-6-(2, 2-dideuterobenzo[d]-1,3-dioxol-5-il)-1, 2, 3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[l1,21:1,6]pirido[3,4-b]indol-2-trideuterometil-1,4-diona. Uma amostra de 1,8 mmol do produtodo Exemplo 26 é reagida com metilamina-d5 (Isotec) como umasolução a 18% em metanol empregando o procedimento geraldescrito no Exemplo 24, modificado empregando 3 equivalentesde amina e executando a reação em um frasco de pressãolacrado. A elaboração e a cristalização de 2-propanolresultam no composto do título.

Exemplo 31: (6R, 12aR)-6-(2,2-dideuterobenzo[d]-1, 3-dioxol-5-il) -2-metil-13C-1,2, 3, 4, 6, 7,12, 12a-octaidropirazino[11,21:1,6]pirido[3,4-b]indol-1,4-diona. Umfrasco de pressão de parede pesada é carregado com uma porçãode 0,96 mmol do produto do Exemplo 26 em 8 ml de metanol. Asolução é tratada com 1,9 mmol de cloridreto de metil-13C-amina (Isotec) e 1,9 mmol de diisopropiletilamina. 0 frasco élacrado e aquecido a 500C por 17 horas, a reação é entãoconcentrada em vácuo, o resíduo é dividido entre cloreto demetileno e água, e a camada orgânica é lavada com salmourameio saturado, secada em MgSO4, e concentrada em vácuo. Acristalização de 2-propanol resulta no composto do título.

Exemplo 32: (6R, 12aR)-6-(2,2-dideuterobenzo[d]-1, 3-dioxol-5-il)-2-metil-13C-I, 2,3,4,6,7,12,12a-octaidropirazino[11,21:1,6]pirido[3,4-b]indol-1,4-diona-3-13C. Uma porção de 0,6 mmol do produto do Exemplo 10 éreagida com cloridreto de metil-13C-amina empregando oprocedimento geral descrito no Exemplo 31 para resultar noproduto do título.

Exemplo 33: Inibição de PDE5 e da selectividade de subtipo. Aatividade de compostos de teste na inibição de isoformahumana de PDE5 é executada pela MDS Pharma Servicesempregando essencialmente o protocolo de Hidaka H e Asano T,Biochim. Biophys. Acta 1976 429:485. Contrapeneiraçõesempregando PDEl e PDE6 também são realizadas pela MDS PharmaServices. Esses testes demonstram a atividade nanomolar decada composto da fórmula II testado.

Exemplo 20: Efeitos hipotensivos em modelo de ratohipertensiva espontâneo. Os efeitos dos produtos dos Exemplos7, 9, 12, 18, 27 e 30 são testados pela administração oralaos ratos espontaneamente hipertensivos em Cerep, empregandoessencialmente o procedimento de Bazil MK et. al. , J.Cardiovasc. Pharmacol. 1993 22:897 e um tamanho de amostra deoito ratos por grupo. Cada composto demonstra reduçõessignificativas na pressão sangüínea sustentada por oito horasquando dosados a 10 mg/kg.

Todas as referências aqui citadas, quer seja emmídia impressa, eletrônica, armazenada que pode ser lida porcomputador ou uma outra forma, são expressamente incorporadasa título de referência em sua totalidade, incluindo mas semfica a eles limitadas, sumários, artigos, jornais,publicações, textos, tratados, folhas de dados técnicos,sites da rede na Internet, bancos de dados, patentes, pedidosde patentes, e publicações de patentes.

A recitação de uma lista de grupos químicos emqualquer definição de uma variável neste caso incluidefinições dessa variável como qualquer grupo individual oucombinação de grupos listados. A recitação de uma realizaçãopara uma variável neste caso inclui essa realização comoqualquer realização individual ou em combinação com quaisqueroutras realizações ou partes das mesmas.

Outras realizações da invenção serão aparentes aoselementos versados na técnica em consideração ao relatóriodescritivo e a prática da invenção aqui apresentada.

Pretende-se que o relatório descritivo e os exemplos sejamconsiderados apenas como exemplificadores, com um âmbito ecaráter verdadeiros da invenção sendo indicados pelasseguintes reivindicações.

Claims (89)

1. COMPOSTO ISOLADO, caracterizado pelo fato deapresentar a fórmula II: <formula>formula see original document page 86</formula> (II), ou um pró-medicamento ou um sal do pró-medicamento domesmo; ou um hidrato ou um solvato ou um polimorfo dequalquer um destes acima; em que:X1 e X2 são simultaneamente fluoro; ou X1 é deutérioe X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério;cada Y é selecionado independentemente entredeutério ou hidrogênio;o hidrogênio unido ao nitrogênio do indol ésubstituído opcionalmente pelo deutério; ecada carbono é opcionalmente substituídoindependentemente por 13C.

2. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo; ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos umY é deutério.

3. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo; ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com areivindicação 2, caracterizado pelo fato de que pelo menos umde Y4, Y7, Y8a, Y8b, Y9a, Y9bou Y9c é deutério.

4. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo, ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com areivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o ditocomposto é deuterado em um ou mais de:a. Y4;b. Y7;c. Y8a e Y8b simultaneamente; oud. Y9a, Y9b e Y9c simultaneamente.

5. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo; ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com qualquerdas reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que X1 eX2 são simultaneamente fluoro.

6. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo; ou hidrato ou solvato ou polimorfo dequalquer um destes acima, de acordo com a reivindicação 5,caracterizado pelo fato de ter uma fórmula:em que o hidrogênio unido ao nitrogênio do indol não ésubstituído pelo deutério e nenhum átomo de carbono ésubstituído por 13C.

7. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo; ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com qualquerdas reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que X1 édeutério, e X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério.

8. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo, ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com qualquerdas reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que X1 eX2 são simultaneamente deutério.

9. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo; ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com areivindicação 8, caracterizado pelo fato de que pelo menostrês Y são deutério.

10. COMPOSTO, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo; ou o hidrato ou o solvato ou opolimorfo de qualquer um destes acima, de acordo com areivindicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que um átomode carbono é substituído por 13C.

11. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 4, ou 5 a 10, caracterizado pelo fato deque todos os átomos de hidrogênio não substituídos pelodeutério e todos os átomos de carbono não substituídos por-13C estão presentes em sua abundância isotópica natural.

12. MISTURA, caracterizada pelo fato de consistiressencialmente em:a. um composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 10, em que o dito composto compreende pelomenos um átomo de deutério ou pelo menos um átomo de 13C; eb. isotopólogos mais leves do dito composto, em quepelo menos 50% da dita mistura consistem no dito composto.

13. MISTURA, caracterizada pelo fato de consistiressencialmente em:a. um composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 10, em que o dito composto compreende pelomenos um átomo de deutério ou pelo menos um átomo de 13C; eb. isotopólogos mais leves do dito composto, em quepelo menos 50% dos compostos na dita mistura compreendem umisótopo em cada posição ocupada por um isótopo no composto.

14. COMPOSIÇÃO, caracterizada pelo fato decompreender uma quantidade eficaz de um composto, ou pró-medicamento ou sal do pró-medicamento do mesmo, ou hidrato ousolvato ou polimorfo de qualquer um destes acima de acordocom qualquer uma das reivindicações 1 a 10; e um veículoaceitável.

15. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 14,caracterizada pelo fato de que a dita composição é formuladapara o uso farmacêutico, e em que o veículo é um veículofarmaceuticamente aceitável.

16. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 15,caracterizada pelo fato de compreender adicionalmente umaquantidade eficaz de um segundo agente terapêutico, em que odito segundo agente terapêutico é útil sozinho ou emcombinação com um composto da fórmula 1 para o tratamento oua prevenção de uma condição selecionada entre angina estável,angina instável, angina variante, hipertensão, hipertensãopulmonar, doença pulmonar obstrutiva crônica, síndrome deaflição respiratória aguda, hipertensão maligna,feocromocitoma, falha cardíaca congestiva, falha renal aguda,falha renal crônica, aterosclerose, uma condição de patênciareduzida de vasos sangüíneos, uma doença vascular periférica,um distúrbio vascular, trombocitemia, uma doençainflamatória, infarto do miocárdio, acidente vascularcerebral, bronquite, asma crônica, asma alérgica, rinitealérgica, glaucoma, úlcera péptica, um distúrbio demotilidade do intestino, angioplastia da coronária oucarótida transluminal pós-percutânea, estenose de enxerto decirurgia pós-desvio, osteoporose, trabalho pré-terminus,hipertrofia prostática benigna, síndrome de intestinoirritável, disfunção sexual fêmea humano, uma condição dedeficiência sexual humana recorrente, um estado dedeficiência sexual em um ser humano devido a uma condição co-existente de epilepsia, craniofaringioma, ou hipogonadismo,um estado de deficiência sexual em um ser humano devido ahisterectomiooforectomia, histerectomia ou oophorectomia,outros estados de deficiência sexual em um ser humano; ohiperglicemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia,hipertrigliceridemia, diabetes, resistência à insulina,metabolismo de glicose enfraquecido, condições de tolerânciaà glicose enfraquecidas (IGT), condições de glicose de plasmade jejum enfraquecidas, obesidade, retinopatia diabética,nefropatia diabética, glomerulosclerose, neuropatiadiabética, sindrome X, doença cardíaca das coronárias, anginapectoris, restenose vascular, disfunção endotelial,depressão, epilepsia, ataques de desmaio, hipocinesia,distúrbios craniais, distúrbios neurodegenerativos,ansiedade, pânico, dor, incluindo a dor visceral e pélvica ea dor associada com a dismenorréia; distúrbios do sono,osteodistrofia, artrite reumatoide, distúrbiosneuropatológicos, distúrbios funcionais do intestino, doençasinflamatórias do intestino, cistite, pancreatite, edemacíclico, mal de Menires, hiperaldosteroneismo (primário esecundário); hipercalciuria e sintomas do trato urinárioinferior, com exceção de incontinência urinária, associadoscom a hiperplasia de bexiga superativa e/ou prostáticabenigna; ou acasalamento prejudicado em um mamífero que nãoum ser humano.

17. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 16,caracterizada pelo fato de que o dito agente terapêuticoadicional é selecionado de um ou mais de um vasodilator,prostaglandina El, prostacyclin, α-bloqueador adrenérgico,um bloqueador α,β-adrenérgico misto, um bloqueador a2-adrenérgico, um inibidor de ACE, um inibidor de NEP, umagente dopaminérgico agindo centralmente, um peptídeointestinal vasoativo, um bloqueador de canal de cálcio, umataiazida; (5R)-(metilamino)-5,6-diidro-4H-imidazo[4,5,1-ij]quinolin-2(IH)-ona, (5R)-(metilamino)-5,6-diidro-4H-imidazo[4,5,1-ij]quinolina-2(IH)-tiona, e seus saisfarmaceuticamente aceitáveis; um ligando de receptor 5-HT2,particularmente 5-HT2a e ligandos de receptor 5-HT2c; umantagonista de esterase de acetil colina, um antagonista dafamília do receptor de vasopressina, ou um seu derivadofarmaceuticamente aceitável, compostos d 1-deprenil oupropargilamina, receptor de melanocortin-4 (MC-4R), gama-butirobetaína, um ligando alfa-2-delta, um antagonista doreceptor de angiotensina II, um antagonista do subtipo EPl doreceptor de prostaglandin E2, um antagonista de endotelin, umagente anti-diabético, um inibidor de reductase HMG-Co-a-A,um inibidor de reabsorção de serotonina (SSRI) , ou um salfarmaceuticamente aceitável dos mesmos.

18. ITEM DE MANUFATURA, caracterizado pelo fato decompreender formas de dosagem separados de um composto, oupró-medicamento ou sal de pró-medicamento do mesmo; ouhidrato ou solvato ou polimorfo de qualquer um destes acimade acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10; e umagente terapêutico adicional, em que ambas as formas dedosagem são em um único recipiente.

19. USO DE UM COMPOSTO, ou pró-medicamento ou saldo pró-medicamento do mesmo; ou hidrato ou solvato oupolimorfo de qualquer um destes acima de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato deservir para a manufatura de um medicamento para inibir aatividade de PDE5.

20. USO DE UM COMPOSTO, ou pró-medicamento ou saldo pró-medicamento do mesmo; ou hidrato ou solvato oupolimorfo de qualquer um destes acima de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato deservir para a manufatura de um medicamento para aumentarníveis de GMP no tecido da parede arterial ou no músculo lisodo corpo cavernoso.

21. USO DE UM COMPOSTO, ou pró-medicamento ou saldo pró-medicamento do mesmo; ou hidrato ou solvato oupolimorfo de qualquer um destes acima de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 10 caracterizado pelo fato deservir para a manufatura de um medicamento útil no tratamentode um indivíduo que sofre ou é suscetível à disfunção erétil;angina estável, instável e variante;o hipertensão,hipertensão pulmonar, doença pulmonar obstrutiva crônica,síndrome de aflição respiratória aguda, hipertensão maligna,feocromocitoma, falha cardíaca congestiva, falha renal aguda,falha renal crônica, aterosclerose, condição de patênciareduzida de vasos sangüíneos, doenças vasculares periféricas,distúrbios vascular, trombocitemia, doenças inflamatórias,infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, bronquite,asma crônica, asma alérgica, rinite alérgica, glaucoma,úlcera péptica, distúrbios de motilidade do intestino,angioplastia da coronária ou carótida transluminal pós-percutânea, estenose de enxerto de cirurgia pós-desvio,osteoporose, trabalho de pré-terminus, hipertrofia prostáticabenigna, síndrome de intestino irritável, disfunção erétilnos animais, distúrbio de estimulação de fêmea nas fêmeas;baixa contagem de esperma, para a finalidade de promover afertilização de um ovo; a redução da resistência à insulina,a estimulação do crescimento folicular ovariano, a prevençãoou o tratamento de uma condição que envolve a fibrose, e paraaliviar a dor ou a espasticidade em um paciente que sofre deferimento do cordão espinhal, sendo que o dito que compreendea etapa de administração ao dito indivíduo de uma composiçãoque compreende uma quantidade eficaz de um composto dafórmula II; ou um pró-medicamento ou um sal do pró-medicamento do mesmo; ou um hidrato, um solvato ou umpolimorfo de qualquer um destes acima; e um veículoaceitável.

22. USO, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil para oalívio ou a prevenção da disfunção erétil.

23. USO, de acordo com a reivindicação 22,caracterizado pelo fato de que o receptor pretendido domedicamento é um ser humano do sexo masculino.

24. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção do distúrbio de estimulação de fêmea.

25. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção de falha cardíaca congestiva.

26. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da hipertensão.

27. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da angina.

28. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção de falha renal.

29. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alivioou na prevenção distúrbios vasculares.

30. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil paraaliviar a angioplastia da coronária ou carótida transluminalpós-percutânea.

31. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da hipertrofia prostática benigna.

32. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção do trabalho pré-terminus.

33. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da síndrome de intestino irritável.

34. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da aterosclerose.

35. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção do infarto do miocárdio.

36. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da asma.

37. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção de acidente vascular cerebral.

38. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção de doenças inflamatórias.

39. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da trombocitemia.

40. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alivioou na prevenção de feocromocitoma.

41. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da osteoporose.

42. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil naintensificação do acasalamento nos animais.

43. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da resistência à insulina.

44. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção de uma condição que envolve a fibrose.

45. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o medicamento é útil no alívioou na prevenção da dor ou espasticidade em um paciente quesofre de ferimento do cordão espinhal.

46. USO, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que o dito medicamento deve seradministrado com um segundo agente terapêutico, em que o ditosegundo agente terapêutico é utilizado convencionalmentesozinho, ou é eficaz em combinação com um composto da fórmulaI para o tratamento ou a prevenção de uma condiçãoselecionada entre angina estável, angina instável, anginavariante, hipertensão, hipertensão pulmonar, doença pulmonarobstrutiva crônica, síndrome de aflição respiratória aguda,hipertensão maligna, feocromocitoma, falha cardíacacongestiva, falha renal aguda, falha renal crônica,aterosclerose, uma condição de patência reduzida de vasossangüíneos, uma doença vascular periférica, um distúrbiovascular, trombocitemia, uma doença inflamatória, infarto domiocárdio, acidente vascular cerebral, no tratamento ou naprevenção de uma condição selecionada entre angina estável,angina instável, angina variante, hipertensão, hipertensãopulmonar, doença pulmonar obstrutiva crônica, síndrome deaflição respiratória aguda, hipertensão maligna,feocromocitoma, falha cardíaca congestiva, falha renal aguda,falha renal crônica, aterosclerose, condição de patênciareduzida de vaso sangüíneo, uma doença vascular periférica,um distúrbio vascular, trombocitemia, uma doençainflamatória, infarto do miocárdio, acidente vascularcerebral, bronquite, asma crônica, asma alérgica, rinitealérgica, glaucoma, úlcera péptica, um distúrbio demotilidade do intestino, angioplastia da coronária oucarótida transluminal pós-percutânea, estenose de enxerto decirurgia pós-desvio, osteoporose, trabalho pré-terminus,hipertrofia prostática benigna, síndrome de intestinoirritável, o disfunção sexual em fêmea humana, uma condiçãode deficiência sexual humana recorrente, um estado dedeficiência sexual em um ser humano devido a uma condiçãocoexistente de epilepsia, craniofaringioma, ou hipogonadismo,um estado de deficiência sexual em um ser humano devido ahisterectomiooforectomia, histerectomia ou ooforectomia,outros estados de deficiência sexual em um ser humano;hiperglicemia, hiperinsulinemia, hiperlipidemia,hipertrigliceridemia, diabetes, resistência à insulina,metabolismo da glicose enfraquecido, condições de tolerânciaà glicose enfraquecidas (IGT), condições de glicose de plasmade jejum enfraquecidas, obesidade, retinopatia diabética,nefropatia diabética, glomerulosclerose, neuropatiadiabética, síndrome X, doença cardíaca das coronárias, anginapectoris, restenose vascular, disfunção endotelial,depressão, epilepsia, ataques de desmaio, hipocinesia,distúrbios craniais, distúrbios neurodegenerativos,ansiedade, pânico, dor, incluindo a dor visceral e pélvica ea dor associada com a dismenorréia; distúrbios do sono,osteodistrofia, artrite reumatoide, distúrbiosneuropatológicos, distúrbios funcionais do intestino, doençasinflamatórias do intestino, cistite, pancreatite, edemacíclico, mal de Menires, hiperaldosteroneismo (primário esecundário); hipercalciuria e sintomas do trato urinárioinferior, com exceção da incontinência urinária, associadoscom a hiperplasia de bexiga superativa e/ou prostáticabenigna; ou o acasalamento prejudicado em um mamífero nãohumano, em que o dito segundo agente terapêutico éadministrado ao dito paciente como parte da dita composiçãoou como uma forma de dosagem separada.

47. USO, de acordo com a reivindicação 46,caracterizado pelo fato de que o dito agente terapêuticoadicional é selecionado de um ou de mais dentre umvasodilator, prostaglandin El, prostacyclin, bloqueador a-adrenérgico, um bloqueador β,α-adrenérgico, um bloqueador a2-adrenérgico, um inibidor de ACE, um inibidor de NEP, umagente dopaminérgico agindo centralmente, um peptídeointestinal vasoativo, um bloqueador de canal de cálcio, umatiazida; (5R)-(metilamino)-5,6-diidro-4H-imidazo[4,5,1-ij]quinolin-2(IH)-ona, (5R)-(metilamino)-5,6-diidro-4H-imidazo[4,5,1-ij]quinolina-2(IH)-tiona e seus saisfarmaceuticamente aceitáveis; um ligando do receptor 5-HT2,particularmente 5-HT2a e ligandos do receptor 5-HT2c; umantagonista de esterase de acetil colina; um antagonista dafamília do receptor de vasopressina, ou um derivadofarmaceuticamente aceitável dos mesmos; compostos de 1-deprenil ou de propargilamina; agonistas do receptor demelanocortin-4 humano (MC-4R), gama-butirobetaína, um ligandoalfa-2-delta, um antagonista do receptor de angiotensin II,um antagonista do subtipo EPl do receptor de prostaglandinE2, um antagonista de endotelina, um agente anti-diabético,um inibidor de reductase HMG-Co-a-A; um inibidor dereabsorção de serotonina (SSRI), ou um sal farmaceuticamenteaceitável dos mesmos.

48. COMPOSTO, caracterizado pelo fato deapresentar a fórmula XIIIa<formula>formula see original document page 98</formula>D e deuterio;Y é selecionado entre hidrogênio ou deutério;cada átomo de carbono é substituído opcionalmentepor 13C; ecada átomo de hidrogênio é opcionalmentesubstituído por deutério.

49. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 48,caracterizado pelo fato de que Y é deutério.

50. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 49,caracterizado pelo fato de que todos os átomos de hidrogênioe todos os átomos de carbono estão presentes em suaabundância isotópica natural.

51. COMPOSTO, caracterizado pelo fato deapresentar a fórmula (XIV)<formula>formula see original document page 99</formula>em que:X1 e X2 são simultaneamente fluoro; ou X1 é deutérioe X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério;Y é selecionado entre hidrogênio ou deutério;E é um grupo éster lábil para o fechamento de aneldurante a formação de amida cíclica;cada átomo de carbono é opcionalmente 13C; ecada hidrogênio é substituído opcionalmente pelodeutério.

52. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 51,caracterizado pelo fato de que E é metila, etila, benzila, oualila.

53. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 51 ou-52, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Y édeutério.

54. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 53,caracterizado pelo fato de que Y4 é deutério.

55. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 53,caracterizado pelo fato de que Y7 é deutério.

56. Composto, de acordo com a reivindicação 53, emque pelo menos um de Y8a e Y8b é independentemente deutério.

57. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 56,caracterizado pelo fato de que ambos Y8a e Y8b sãoindependentemente deutério.

58. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 53,caracterizado pelo fato de que um a três átomos de hidrogêniosão substituídos por deutério.

59. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 58,caracterizado pelo fato de que um átomo de carbono é 13C.

60. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 51 a 59, caracterizado pelo fato de que todosos átomos de hidrogênio não substituídos por deutério e todosos átomos de carbono não substituídos por 13C estão presentesem sua abundância isotópica natural.

61. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 51 a 60, caracterizado pelo fato de que X1 eX2 são simultaneamente fluoro.

62. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 51 a 60, em que X1 é deutério e X2 éselecionado entre hidrogênio ou deutério.

63. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 62,caracterizado pelo fato de que X2 é deutério.

64. COMPOSTO, c caracterizado pelo fato deapresentar a fórmula XV:<formula>formula see original document page 101</formula> em que:X1 e X2 são simultaneamente fluoro; ou X1 é deutérioe X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério;Z é um grupo nucleófugo;cada Y é selecionado independentemente entrehidrogênio ou deutério;E é um grupo éster lábil para o fechamento de aneldurante a formação de amida cíclica;o hidrogênio unido a cada nitrogênio é substituídoopcionalmente pelo deutério; ecada átomo de carbono é substituído opcionalmentepor 13C.

65. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 64,caracterizado pelo fato de que Z é cloreto, brometo, iodeto,mesilato, ou tosilato.

66. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 64,caracterizado pelo fato de que E é metila, etila, benzila, oualila.

67. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 64,caracterizado pelo fato de que X é cloreto, brometo, iodeto,mesilato, ou tosilato; e E é metila, etila, benzila, oualila.

68. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 64 a 67, caracterizado pelo fato de que pelomenos um Y é deutério.

69. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 68,caracterizado pelo fato de que Y4 é deutério.

70. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 68,caracterizado pelo fato de que Y7 é deutério.

71. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 68,caracterizado pelo fato de que pelo menos um de Y8a e Y8b éindependentemente deutério.

72. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 71,caracterizado pelo fato de que ambos Y8a e Y8b sãoindependentemente deutério.

73. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 68,caracterizado pelo fato de que um a três átomos de hidrogêniosão substituídos pelo deutério.

74. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 73,caracterizado pelo fato de que um átomo de carbono é 13C.

75. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 64 a 74, caracterizado pelo fato de que todosos átomos de hidrogênio não substituídos pelo deutério etodos os átomos de carbono não substituídos por 13 C estãopresentes em sua abundância isotópica natural.

76. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 64 a 75, caracterizado pelo fato de que X1 eX2 são simultaneamente fluoro.

77. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 64 a 75, caracterizado pelo fato de que X1 édeutério e X2 é selecionado entre hidrogênio ou deutério.

78. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 77,caracterizado pelo fato de que X2 é deutério.

79. MÉTODO PARA DETERMINAR A CONCENTRAÇÃO DOCOMPOSTO EM UMA AMOSTRA BIOLÓGICA, caracterizado pelo fato decompreender as etapas de:a. adição de uma concentração conhecida de umcomposto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10a uma amostra biológica;b. sujeição da dita amostra biológica a umdispositivo de medição que distingue o Composto 1 do ditocomposto;c. calibração do dito dispositivo de medição paracorrelacionar a quantidade detectada do dito composto com aconcentração conhecida do dito composto adicionado à ditaamostra biológica; ed. determinação da concentração do Composto 1 nadita amostra biológica comparando a quantidade detectada doComposto 1 com a quantidade detectada e a concentraçãoconhecida do dito composto.

80. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 79,caracterizado pelo fato de que o dito composto compreendepelo menos três isótopos de átomos pesados selecionadosindependentemente entre deutério ou 13C.

81. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 79,caracterizado pelo fato de compreender a etapa adicional deextração orgânica do Composto 1 e do dito composto da ditaamostra biológica antes da etapa b.

82. KIT DE DIAGNÓSTICO, caracterizado pelo fato decompreender um composto de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 10 em um vaso lacrado; e instruções parausar o dito composto para determinar a concentração doComposto 1 em uma amostra biológica.

83. KIT, de acordo com a reivindicação 82,caracterizado pelo fato de que o composto da fórmula Icompreende pelo menos três isótopos de átomos pesadosselecionados independentemente entre o deutério ou 13C.

84. MÉTODO PARA AVALIAR A ESTABILIDADE METABÓLICADE UM COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações-1 a 10, caracterizado pelo fato de compreender as etapas de:a. colocação do composto em contato com uma fontede enzima metabolizante por um período de tempo; eb. comparação da quantidade do dito composto aosprodutos metabólicos do dito composto após o dito período detempo.

85. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 84,caracterizado pelo fato de que o método compreende uma etapaadicional de comparação da quantidade do dito composto aosditos produtos metabólicos do dito composto em um intervalodurante o dito período de tempo.

86. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 84,caracterizado pelo fato de que o método compreende as etapasadicionais de: c) colocação de um isotopólogo do ditocomposto em contato com a dita fonte de enzima metabolizante;d) comparação da quantidade do dito isotopólogo aos produtosmetabólicos do dito isotopólogo após o dito período de tempo;e e) comparação da estabilidade metabólica do dito compostoao dito isotopólogo, em que as etapas c e d são executadasantes, simultaneamente em um vaso de reação diferente,simultaneamente em um mesmo vaso de reação, ou após, asetapas a e b.

87. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 86,caracterizado pelo fato de que o dito isotopólogo é oComposto 1.

88. KIT DE DIAGNÓSTICO, caracterizado pelo fato decompreender, em vasos separados, o composto 1 e uma fonte deenzima metabolizante.

89. KIT DE DIAGNÓSTICO, de acordo com areivindicação 82, caracterizado pelo fato de compreenderadicionalmente instruções para usar o dito kit para comparara estabilidade metabólica de um ou mais compostos de acordocom qualquer uma das reivindicações 1 a 10 com a estabilidademetabólica do Composto 1.