BR112020025283A2

BR112020025283A2 - Análogos de rapamicina e usos dos mesmos

Info

Publication number: BR112020025283A2
Application number: BR112020025283-2A
Authority: BR
Inventors: Eddine Saiah; David John O'Neill; Seong Woo Anthony Kang
Original assignee: Navitor Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2018-06-15
Filing date: 2019-06-17
Publication date: 2021-03-09
Also published as: CO2020015747A2; JP2021528396A; EA202092692A1; EP4302827A3; US20210220339A1; EP3813946A4; MX2020013630A; AU2019286524A1; KR20210021534A; US20240173305A1; WO2019241789A1; EP4302827A2; IL279329A; US20190388401A1; CN117843659A; CN112423843B; US11944605B2; FI3813946T3; SG11202012447YA; EP3813946A1

Abstract

análogos de rapamicina e usos dos mesmos. a presente invenção refere-se a compostos, composições dos mesmos e métodos de uso dos mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANÁLO- GOS DE RAPAMICINA E USOS DOS MESMOS".

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se aos compostos e métodos úteis para modulação da atividade de MTORC1. A invenção também fornece composições farmaceuticamente aceitáveis que compreendem os compostos fornecidos da presente invenção e métodos de uso de tais composições no tratamento de várias doenças.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] O complexo mTOR 1 (mMTORC1) regula positivamente o crescimento e a proliferação celular, promovendo muitos processos anabólicos, incluindo a biossíntese de proteínas, lipídios e organelas, e limitando os processos catabólicos, tal como a autofagia. Muito do co- nhecimento sobre a função de MTORC1 vem do uso do macrolídeo bacteriano, a rapamicina. Ao entrar na célula, a rapamicina liga-se à proteína de ligação a FK506 de 12 kDa (FKBP12) e interage com o domínio de ligação de rapamicina FKBP12 (FRB) de mMTOR, desse modo inibindo as funções de MTORC1 (Guertin, D.A. & Sabatini, D.M. Cancer Cell 12(1): 9-22 (2007)). Ao contrário de seu efeito sobre mMTORC1, a rapamicina FKBP12 não interage fisicamente com ou ini- be agudamente o complexo mTOR 2 (mMTORC?2) (Janinto, E. et al., Nat. Cell Bio., 6(11): 1122-8 (2004); Sarbassov, D.D. et a/l., Curr. Biol. 14(14): 1296-302 (2004)). Com base nestas observações, MTORC1 e mMTORC?2 foram respectivamente caracterizados como os complexos sensíveis à rapamicina ou insensíveis à rapamicina. Entretanto, este paradigma pode não ser totalmente preciso, visto que o tratamento crônico com rapamicina pode, em alguns casos, inibir a atividade de mMTORC?2 bloqueando sua montagem (Sarbassov, D.D. et al., Mol. Cell, 22(2): 159-68 (2006)). Além disso, recentes relatos sugerem que as funções importantes de MTORC1 são resistentes à inibição por ra-

pamicina (Choo, A.Y. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 105(45): 17414-9 (2008); Feldman, M.E. et a/., PLOS Biol., 7(2):e38 (2009); Garcia- Martinez, J.M. et al., Biochem J., 421(1): 29-42 (2009); Thoreen, C.C. et al., J. Biol. Chem., 284(12): 8023-32 (2009)). Portanto, a inibição seletiva de MTORC1 permitiria o tratamento de doenças que envolvem a desregulação da síntese de proteínas e do metabolismo celular. Além disso, este entendimento detalhado da regulação das vias de ativação do MTORC1 permitirá a descoberta de novas estratégias pa- ra regular os processos anormais da doença, modulando a atividade do mMTORC1 em todo o seu espectro de funções.

[0003] Muitas doenças estão associadas com respostas celulares anormais ativadas por eventos, como descrito acima. Estas doenças incluem, porém não estão limitadas à, doenças autoimunes, doenças inflamatórias, doenças ósseas, doenças metabólicas, doenças neuro- lógicas e neurodegenerativas, câncer, doenças cardiovasculares, aler- gias e asma, doença de Alzheimer, e doenças relacionadas ao hormô- nio.

[0004] O alvo mecanístico do complexo de rapamicina 1 (MTORC1) é um regulador de crescimento principal que detecta diver- sos sinais ambientais, tais como fatores de crescimento, tensões celu- lares e níveis de nutrientes e energia. Quando ativado, o MTORC1 fos- forila os substratos que potencializam os processos anabólicos, tais como a tradução do mRNA e a síntese de lipídios, e limita os catabóli- cos, tal como a autofagia. A desregulação de MTORC1 ocorre em um amplo espectro de doenças, incluindo diabetes, epilepsia, neurodege- neração, resposta imune, crescimento do músculo esquelético supri- mido e câncer, entre outras (Howell, J.J. et al., Biochem. Soc. Trans., 41: 906-12 (2013); Kim, S.G. et al., Molecular and cells, 35(6): 463-73 (2013); Laplante, M. & Sabatini, D.M., Cell, 149(2): 274-93 (2012)).

[0005] A rapamicina foi descoberta inicialmente como um metabó-

lito antifúngico produzido por Streptomyces hygroscopicus em uma amostra de solo da Ilha de Páscoa. Posteriormente, descobriu-se que a rapamicina possui propriedades imunossupressoras e antiproliferati- vas em células de mamíferos, despertando o interesse em identificar o modo de ação da rapamiícina. A rapamicina mostrou ser um inibidor potente da fosforilação de S6K1. Ao mesmo tempo, o alvo da rapami- cina (TOR) foi identificado em leveduras e células animais. A rapami- cina forma um complexo de ganho de função com a proteína de liga- ção a FK506 de 12 kDa (FKBP12), e este complexo liga-se e atua es- pecificamente como um inibidor alostérico de TOR de mamífero (MTOR, também conhecido como complexo de TOR mecanístico) 1 (MTORC1).

[0006] A análise bioquímica e genética de MTOR demonstrou que ele está presente em dois complexos funcionalmente distintos. Os componentes principais de MTORC1 consistem em mTOR, letal para mamíferos com proteína 8 sec-13 (mMLST8) e proteína associada regu- latória de TOR (Raptor). Componentes adicionais incluem proteína de interação de MTOR contendo domínio DEP (DEPTOR) e substrato Akt de de 40 kDa rico em Prolina (PRASA40).

[0007] O núcleo do complexo 2 mMTOR (mMTORC?2) é composto por mMTOR, companheiro insensível à rapamicina de MTOR (Rictor), prote- ína 1 que interage com a proteína quinase ativada por estresse (MSIN1) e mLST8. A proteína observada com rictor 1/2 (protor 1/2) e DEPTOR são componentes regulatórios adicionais. S6 cinase 1 (S6K1) e proteína de ligação do fator de inibição elF4E 1 (4E-BP1) são dois substratos bem caracterizados de MTORC1, enquanto AKT é um substrato bem caracterizado de mMTORC?2 (Li, J. et al., Cell Met, 19(3):373-9 (2014)).

[0008] Como a FKBP12-rapamicina não se liga ao mTORC?2, acreditava-se inicialmente que a rapamicina inibia apenas mMTORC1

(Sarbassov, D.D. et al., Curr. Biol., 14(14): 1296-302 (2004)). No en- tanto, em 2006, foi demonstrado que a rapamicina suprime a monta- gem e função de MTORC? e inibe pAkt (Sarbassov, D.D. et al., Mole- cular Cell, 22(2): 159-68 (2006)). Os efeitos da rapamicina na fosforila- ção de S473 de Akt (um substrato MTORC2) e de T389 de S6K1 (um substrato MTORC1) foram comparados em várias linhagens celulares. Em células PC3, HEK-293T, HeLa e H460, tratamentos de 1 ou 24 ho- ras com rapamicina inibiram a fosforilação de S6K1, consistente com a inibição de MTORC1. A inibição seletiva de S6K1 pela rapamicina de- ve levar a um aumento na fosforilação de Akt e, de fato, isto é o que é relatado em células HeLa. No entanto, em células PC3, o fármaco di- minuiu fortemente a fosforilação de Akt, sugerindo que a rapamicina não é seletiva nesta linhagem celular. Inibição parcial de pAKT é ob- servada em células HEK-293T. Em cerca de um terço das linhagens celulares, a rapamicina causou forte ou inibição parcial da fosforilação da Akt, enquanto o fármaco não afetou ou aumentou a fosforilação da Akt nas outras. A inibição de pAKT após 24 horas é também observada em linhagens celulares primárias e não transformadas incluindo células en- doteliais e musculares. A rapamicina também demonstrou inibir o pAkt in vivo, visto que os camundongos tratados diariamente durante 1 semana com o fármaco diminuíram a fosforilação de Akt no timo, tecido adiposo, coração e pulmão. Estes achados demonstraram que a inibição da fos- forilação de Akt pela rapamicina é comum e ocorre em linhagens de células normais, linhagens de células cancerosas e também in vivo.

[0009] Foi concluído por Sarbassov et al. que a rapamicina e seus análogos (CCI 779, RADOO01 também conhecido como Everolimo, AP23573) podem inibir a função de MTORC?2 em certas linhagens ce- lulares e tecidos. A inibição de Akt mediada pela rapamicina pode aju- dar a explicar os efeitos colaterais do fármaco. Por exemplo, a rapami- cina inibe fortemente a fosforilação de Akt no tecido adiposo, um tipo de tecido no qual a atividade de Akt estimulada por insulina desempe- nha um papel importante na supressão da lipólise. A inibição de Akt pela rapamicina em adipócitos pode permitir que a lipólise permaneça elevada mesmo na presença de insulina, resultando no acúmulo de áci- dos graxos livres no plasma que podem ser usados pelo fígado para ge- rar triglicerídeos, fornecendo um mecanismo molecular para a hiperlipi- demia comumente visto em pacientes tratados com rapamicina.

[0010] Pereira et al. (Mol Cell Endocrinol., 355(1): 96-105 (2012)) exploraram os efeitos da rapamicina na captação de glicose e proteí- nas sinalizadoras de insulina em adipócitos obtidos por meio de bióp- sias de gordura em doadores humanos. Na concentração terapêutica (0,01 UM), a rapamicina reduziu a fosforilação de Ser473 de AKT (PKB) e reduziu a captação de glicose em adipócitos humanos por meio da sinalização de insulina prejudicada.

[0011] Lamming et al. (Science., 335(6076): 1638-1643 (2012)) demonstraram que a rapamíicina interrompeu mTORC?2 in vivo e que mMTORC? foi necessário para a supressão da gliconeogênese hepática mediada por insulina.

[0012] Resultados similares foram mostrados em humanos. Di Pa- olo et al. publicaram descobertas similares em humanos (JASN, 17(8): 2236-2244 (2006)). O objetivo principal de seu estudo foi verificar o efeito de exposição crônica à rapamicina sobre a ativação de AKT, em vista de seu papel principal na regulação de crescimento e sobrevi- vência celular, bem como sobre as respostas celulares aos nutrients e fatores de crescimento. Eles descobriram que a inibição de MTOR es- tava associada com uma sub-regulação acentuada de forsforilação de AKT basal e induzida por insulina. AKT é responsável principalmente por muitas das ações metabólicas da insulina e eles concluíram, por- tanto, que a depressão da ativação de AKT se correlacionou significa- tivamente com o aumento da resistência à insulina em receptores de transplante renal.

[0013] Kennedy et al. revisaram recentemente o papel de mMTORC1 e mMTORC2 no metabolismo e envelhecimento (Cell Metab., 23(6): 990-1003 (2016)).

[0014] Foi surpreendentemente descoberto que os compostos for- necidos inibem o MTORC1, porém não afetam mMTORC2 (como medi- do pelo seu impacto no pAKT) durante longos períodos de tempo (por exemplo, 8 horas, 24 horas, 30 horas e 48 horas). Esta nova atividade é baseada na presença de um grupo suficientemente grande na posição C-7 da rapamicina e seus análogos. Pequenas substituições nesta posi- ção como OMe, como visto em rapamicina, OEt, OBn não conferem sele- tividade sobre MTORC2 em 24 horas. Grupos de comprimento médio, tal como OCH2CH20H ou OCH2CH2CH2O0H apresentam seletividade parci- al sobre MTORC?2 às 24 horas, porém ainda apresentam algum nível de inibição. Em comparação, grupos maiores, tais como aqueles da presente invenção (por exemplo, 1-19), fornecem uma seletividade acentuada sobre MTORC2 medida pelo impacto de pAKT.

[0015] A localização desta substituição é também crítica para a seletividade observada. A introdução de substituições maiores na po- sição 43, por exemplo, não leva a este perfil de seletividade exclusivo reivindicado neste pedido.

[0016] Para os propósitos de clareza, a estrutura de Rapamicina é reproduzida abaixo com as posições C-7 e C-43 observadas.

OH O o, ela mole)" o Ss Ba) N O, 7/0 oO Ox Rapamicina

[0017] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece no- vos análogos da rapamicina que são inibidores potentes de MTORC1 como medido por pS6K. Ao contrário da Rapamicina e Everolimo, es- tes compostos não inibem o pAKT em períodos de tempo mais longos (por exemplo, 24 horas e 48 horas). Estes compostos também apre- sentam melhor solubilidade e melhor farmacocinética em comparação com a Rapamicina.

[0018] A atividade de um composto utilizado nesta invenção como um inibidor de MTORC1, pode ser ensaiada in vitro, in vivo ou em uma linhagem celular. Ensaios in vitro incluem ensaios que determinam a inibição de MTORC1. As condições detalhadas para o ensaio de um composto utilizado nesta invenção como um inibidor de MTORC1 são bem conhecidas por aqueles versados na técnica. Tais métodos são descritos em detalhes por Liu et al., Cancer Research, 73(8): 2574-86 (2013) and Liu et a/., J. Biological Chemistry 287(13): 9742-52 (2012).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0019] Descobriu-se atualmente que os compostos desta inven- ção, e composições farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são eficazes como inibidores, inibidores de MTORC1. Tais compostos têm a Fórmula geral |: O- | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que o anel A e R' são como definidos e descritos aqui.

[0020] Os compostos da presente invenção e composições farma- ceuticamente aceitáveis dos mesmos são úteis para o tratamento de uma variedade de doenças, distúrbios ou condições associados com mMTORC1. Tais doenças, distúrbios ou condições incluem aqueles aqui descritos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0021] FIG. 1 mostra uma comparação entre dois Western blots realizados após tratamento de células PC3 com rapamicina ou um composto da presente invenção (1-40) durante 24 e 48 horas. O man- chamento indica forte inibição da via de MTORC1 tanto para rapamici- na quanto 1|-40 em ambos os pontos de tempo. Ao contrário, a via de mMTORC?, enquanto inibida por rapimicina tanto em 24 quanto 48 ho- ras, não é inibida por 1-40, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0022] FIG. 2 mostra uma comparação entre três Western blots realizados após tratamento de células PC3 com rapamicina ou um composto da presente invenção (1-40) durante 30, 15, ou 5 minutos. O manchamento indica uma inibição dependente de tempo da via de mMTORC1 tanto para rapamicina quanto 1-40.

[0023] FIG. 3 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina, tensirolimo, everolimo, ridaforolimo, ou um composto da presente invenção (1-118) durante 24 hrs. O man- chamento indica forte inibição da via de MTORC1 para todos os com- postos, e inibição dependente de concentração moderada de mMTORC1 por 1-118. Significantemente, rapamicina, tensirolimo, evero- limo, e ridaforolimo mostram uma inibição dependente de dose da via de mTORC?2, enquanto 1-118 não inibe a via de MTORC2, como de- mostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0024] FIG. 4 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina ou compostos da presente invenção (1-106, 1-113, e 1-118) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para cada composto testado e nenhuma inibição de fosforilação de 4E-BP1. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o MTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0025] FIG. 5 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina ou compostos da presente invenção (1-117, 1-102, 1-103, e 1-39) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para cada composto testado e ne- nhuma inibição de fosforilação de 4E-BP1. Significantemente, os com- postos da presente invenção não inibem o MTORC2, como demostra- do pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0026] FIG. 6 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina ou compostos da presente invenção (1-117, 1-99, 1-100, e 1-101) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para rapamicina 1-117, 1-100, e 1-101, e uma inibição dependente de concentração apreciável da via de mMTORC1 for 1-99. Significantemente, os compostos da presente in- venção não inibem o mMTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0027] FIG. 7 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina ou um composto da presente invenção (1|-117) durante 24. O manchamento indica forte inibição da via de mMTOCR1 por ambos os compostos testados. Significantemente, o composto da presente invenção não inibe MTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0028] FIG. 8 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina ou compostos da presente invenção (1-39, 1-101, e 1-99) durante 24 horas. O manchamento indica forte ini- bição da via de MTORC1 para rapamicina e 1-39, e uma inibição de- pendente de concentração apreciável da via de MTORC1 para 1-101 e 1-99. Significantemente, os compostos da presente invenção não ini- bem o mTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosfo- rilação de AKt.

[0029] FIG. 9 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina ou compostos da presente invenção (1-98 e 1-97) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para rapamicina e |-98, e uma inibição dependente de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-101 e 1-99. Signifi- cantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0030] FIG. 10 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina ou compostos da presente invenção (1-96 e 1-100) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para todos os compostos testados. Significante- mente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0031] FIG. 11 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina, everolimo, ou um composto da pre- sente invenção (1-7) for 90 minutos. O manchamento indica forte inibi- ção da via de MTORC1 para rapamicina e everolimo, e uma inibição dependente de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-7. Significantemente, o composto da presente invenção não inibe o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0032] FIG. 12 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com rapamicina, everolimo, ou um composto da pre- sente invenção (1-7) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para rapamicina e everolimo, e uma inibi- ção dependente de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-7. Significantemente, o composto da presente invenção não inibe o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0033] FIG. 13 mostra dois Western blots realizados após trata-

mento de Jurkat cells com everolimo ou compostos da presente inven- ção (1-40 e |-117) durante 24 hrs. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para todos os compostos testados. Significante- mente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0034] FIG. 14 mostra dois Western blots realizados após trata- mento de células MEF negativas (TSC -/-) de esclerose tuberosa (TSC2) com everolimo ou compostos da presente invenção (1-40, 1-7, e 1-117) durante 90 minutos. O manchamento indica forte inibição da via de mTORC1 para everolimo, 1-40, e 1-117, e inibição dependente de concentração apreciável da via de MTORC1 para 1-7. Significantemen- te, os compostos da presente invenção não inibem o MTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0035] FIG. 15 mostra dois Western blots realizados após trata- mento de células MEF positivas (TSC +/+) esclerose tuberosa 2 (TSC2) com everolimo ou compostos da presente invenção (1-40, 1-7, e 1-117) durante 90 minutos. O manchamento indica forte inibição da via de mTORC1 para everolimo e 1-40, inibição dependente de concentra- ção moderada da via de MTORC1 para 1-117, e inibição dependente de concentração apreciável da via de MTORC1 para 1-7. Significante- mente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0036] FIG. 16 mostra dois Western blots realizados após trata- mento de células MEF TSC -/- com everolimo ou compostos da pre- sente invenção (1-40, |-7, e |-117) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, 1-40, e |-117, e uma inibição dependente de concentração apreciável da via de mMTORC1 para 1-7. Significantemente, os compostos da presente in- venção não inibem o mMTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0037] FIG. 17 mostra dois Western blots realizados após trata- mento de células MEF TSC +/+ com everolimo ou compostos da pre- sente invenção (1-40 e 1-7) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, uma inibição depen- dente de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-40, e uma inibição dependente de concentração modesta da via de MTORC1 pa- ra I|-7. Significantemente, os compostos da presente invenção não ini- bem o mTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosfo- rilação de AKt.

[0038] FIG. 18 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC -/- com everolimo, rapamicina, ou compostos da presente invenção (1-2 e 1-92) durante 24 horas. O manchamento indi- ca forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, rapamicina, e |-2, e uma inibição dependente de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-92.

[0039] FIG. 19 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, rapamicina, ou compostos da presente invenção (1-2 e 1-92) durante 24 horas. O manchamento indi- ca forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, rapamicina, e ini- bição dependente de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-2 e 1-92. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0040] FIG. 20 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, ou compostos da presente invenção (1-20, 1-40 e 1-36) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, e inibição dependen- te de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-20, 1-40, e |-

36. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o MTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforila-

ção de AKt.

[0041] FIG. 21 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, ou compostos da presente invenção (1-35, 1-7 e 1-26) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, e modest concentra- tion dependent inhibition da via de MTORC1 para 1-35, 1-7, e 1-26. Sig- nificantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0042] FIG. 22 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, ou compostos da presente invenção (1-9, 1-97 e 1-98) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, modest concentration dependent inhibition da via de MTORC1 para 1-9, 1-97, e 1-98. Signifi- cantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0043] FIG. 23 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, ou a compostos da presente invenção (1-91) durante 90 minutos. O manchamento indica forte inibi- ção da via de MTORC1 para rapamicina e 1-91. Interessantemente, |- 91 exibe alguma inibição de MTORC2, como demonstrado pela inibi- ção de fosforilação de AKt.

[0044] FIG. 24 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, ou a compostos da presente invenção (1-91) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para rapamicina e 1-91. Interessantemente, 1-91 exibe alguma inibição de MTORC2, como demonstrado pela inibição de fosforilação de AKt.

[0045] FIG. 25 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, ou a compostos da presente invenção (1-105) durante 90 minutos. O manchamento indica forte ini- bição da via de MTORC1 para rapamicina e 1-105. Significantemente, o composto da presente invenção não inibe o MTORC2, como demos- trado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0046] FIG. 26 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo, ou a compostos da presente invenção (1-105) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibi- ção da via de MTORC1 para rapamicina e 1-105. Significantemente, o composto da presente invenção não inibe o MTORC2, como demos- trado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0047] FIG. 27 mostra dois Western blots realizados após trata- mento de células PC3 com everolimo ou compostos da presente in- venção (1-2 e 1-92) durante 24 horas. O manchamento indica forte ini- bição da via de MTORC1 para cada composto testado e nenhuma ini- bição de fosforilação de 4E-BP1. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o MTORC2, como demostrado pela au- sência de inibição de fosforilação de AKt.

[0048] FIG. 28 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo ou um composto da presente invenção (1-105) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibi- ção da via de MTORC1 para cada composto testado e nenhuma inibi- ção de fosforilação de 4E-BP1. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o MTORC2, como demostrado pela au- sência de inibição de fosforilação de AKt.

[0049] FIG. 29 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo ou compostos da presente invenção (1-90 e 1-110) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo e 1-90, e inibição depen- dente de concentração moderada da via de MTORC1 para 1-110. Sig-

nificantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0050] FIG. 30 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF TSC +/+ com everolimo ou um composto da presente invenção (1-115) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibi- ção da via de MTORC1 para everolimo e inibição dependente de con- centração moderada da via de MTORC1 para 1-115. Significantemen- te, o composto da presente invenção não inibe o MTORC2, como de- mostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0051] FIG. 31 mostra um Western blot realizado após tratamento de wild-type MEF cells com everolimo ou compostos da presente in- venção (1-105, 1-117, 1-40, e 1-90) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo, e moderate inhibition da via de MTORC1 para 1-105, 1-117, 1-40, e 1-90. Significan- temente, os compostos da presente invenção não inibem o MTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0052] FIG. 32 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF do tipo selvagem com everolimo ou compostos da presente invenção (1-105, 1-117, 1-40, e 1-90) durante 24 horas. O man- chamento indica forte inibição da via de MTORC1 para cada composto testado. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0053] FIG. 33 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF do tipo selvagem com everolimo ou compostos da presente invenção (1-85 e 1-83) durante 90 minutos. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para cada composto testado. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0054] FIG. 34 mostra um Western blot realizado após tratamento de células MEF do tipo selvagem com everolimo ou compostos da presente invenção (1-85 e 1-83) durante 24 horas. O manchamento in- dica forte inibição da via de MTORC1 para cada composto testado. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0055] FIG. 35 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com everolimo ou compostos da presente invenção (I- 85 e 1-83) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para cada composto testado.

[0056] FIG. 36 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 e células MEF do tipo selvagem com everolimo ou um composto da presente invenção (1-115) durante 24 horas. O mancha- mento indica forte inibição da via de MTORC1 para cada composto testado nas células PC3, forte inibição da via de MTORC1 para evero- limo nas células MEF WT, e inibição dependente de concentração mo- derada da via de MTORC1 para 1-115 in WT MEF cells. Significante- mente, o composto da presente invenção não inibe o MTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0057] FIG. 37 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com everolimo, um composto da presente invenção (I- 117), PEGs curtos, everolimo em combinação com a short PEG, ou |- 117 em combinação com um PEG curto, durante 24 horas. O man- chamento indica forte inibição da via de MTORC1 para everolimo e |- 117, sozinho e em combinação com um PEG curto. Os PEGs curtos sozinhos não mostraram inibição de MTORC1 ou mMTORC?2. Signifi- cantemente, o composto da presente invenção não inibe o MTORC?2, ou sozinho ou em combinação com um PEG curto, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0058] FIG. 38 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com everolimo ou compostos da presente invenção (I- 71, 1-73 e 1-75) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para todos os compostos testados. Significante- mente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0059] FIG. 39 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com everolimo ou compostos da presente invenção (I- 85 e 1-83) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para todos os compostos testados. Significantemente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0060] FIG. 40 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com everolimo ou a compostos da presente invenção (1-65) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de mMTORC1 para ambos compostos testados. Significantemente, o com- posto da presente invenção não inibe o MTORC2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0061] FIG. 41 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com everolimo ou compostos da presente invenção (I- 5, 1-106 e 1-102) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibi- ção da via de MTORC1 para todos os compostos testados. Significan- temente, os compostos da presente invenção não inibem o MTORC?2, como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0062] FIG. 42 mostra um Western blot realizado após tratamento de células PC3 com everolimo ou compostos da presente invenção (I- 75, 1-71 e 1-62) durante 24 horas. O manchamento indica forte inibição da via de MTORC1 para todos os compostos testados. Significante- mente, os compostos da presente invenção não inibem o mMTORC?2,

como demostrado pela ausência de inibição de fosforilação de AKt.

[0063] FIG. 43 mostra o curso de tempo para um teste de sensibi- lidade à insulina e tolerância à glicose em camundongos C57BI/6 ma- gros.

[0064] FIG. 44 mostra os resultados de um teste de tolerância à glicose intraperitoneal em camundongos C57BI/6 magros durante tra- tamento crônico com rapamicina, 1-40 ou veículo. ***P < 0,001; **** P < 0,0001; ANOVA unidirecional e todas as barras indicam a médiae SD.

[0065] FIG. 45 mostra a área sob a curva (AUC) para clearance de glicose em camundongos C57BI/6 magros durante tratamento crônico com rapamicina, 1-40 ou veículo. ***P < 0,001; teste T e todas as bar- ras indicam a média e SD.

[0066] FIG. 46 mostra manchamento com Vermelho Sirius de te- cido renal de um modelo de camundongo AKI/CKD.

[0067] FIG. 47 mostra o percentual de área de fibrose de tecido renal em um modelo de camundongo AKI/CKD após tratamento com everolimo, 1-40, 1-117, ou veículo. *P = 0,02 em comparação com com veículo, teste t.

[0068] FIG. 48 mostra a expressão de mRNA de colágeno em um modelo de camundongo AKI/CKD após tratamento com veículo ou |-

40. **P < 0,01, ***P < 0,001 vs. simulado; +TP < 0,01 vs. veículo.

[0069] FIG. 49 mostra a expressão de mRNA de colágeno Ill em um modelo de camundongo AKI/CKD após tratamento com veículo ou 1-40. **P < 0,01 vs. simulado; TP < 0,05 vs. veículo.

[0070] FIG. 50 mostra a expressão de mRNA de fibronectina em um modelo de camundongo AKI/CKD após tratamento com veículo ou 1-40. **P < 0,01 vs. simulado; TP < 0,05 vs. veículo.

[0071] FIG. 51 mostra a área de tecido renal infiltrada por macró- fagos em um modelo de camundongo AKI/CKD após tratamento com veículo ou 1-40. *P < 0,05, ***P < 0,001 vs. simulado; TTP < 0,05 vs.

veículo.

[0072] FIG. 52 mostra o percentual de inibição de produção de IFN-y em um ensaio de MLR alogênico após tratamento com rapami- cina, everolimo, 1-40, ou 1-117.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE CERTAS MODALIDADES

1. Descrição Geral de Certas Modalidades da Invenção:

[0073] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula |:

O | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: o anel A é um derivado monovalente de rapamicina ou um análogo (isto é, um rapálogo) do mesmo; em que R' é ligado a ele na posição C-7 hidroxila da rapamicina ou um análogo da mesma; R' é uma cadeia C3.30 hidrocarboneto monovalente, saturada ou insa- turada, linear ou ramificada, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e independentemen- te substituídas por —-N(R)-, —=N(R)C(O)-, -C(O)N(R)-, -—N(R)S(O)2, — S(O)aN(R)-, -O-, —C(O) —, -OC(O)-, —-C(0)O-, —S-, -S(O)-, —S(O)2—, ou -P(O)(R)2, ou um anel heterocíclico saturado ou parcialmente insa- turado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroátomos independen- temente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou R' é selecionado da Fórmula P-0: AemaiooR P-0 em que: * indica o ponto de ligação ao anel A;

cada Z é independentemente -O-, -S-, -NR-, ou -SO>-; n é de cerca de 2 a cerca de 300; e cada R é independentemente hidrogênio ou um grupo C1-8 alifático opcionalmente substituído.

[0074] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula | diferente daqueles selecionados de:

OH O o, ANS mo) "O. SS ds H o Z o RX N O. == ss) H Mon,

OH O o, o A mol >: —r SW 3 H o

O X N O. == Ns) Ho her Ho "-)

OH O —Oo, õ " o AN NS mo > “a SW EH o % NR N o. = o H O OMe Aro :

2. Compostos e Definições:

[0075] Os compostos da presente invenção incluem aqueles des- critos geralmente aqui, e são adicionalmente ilustrados pelas classes, subclasses e espécies descritas aqui. Como usado aqui, as seguintes definições devem ser aplicadas, salvo indicação em contrário. Para os propósito desta invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica dos Elementos, versão CAS, Handbo- ok of Chemistry and Physics, 75º Ed. Além disso, os princípios gerais da química orgânica são descritos em "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, e "March's Advan- ced Organic Chemistry", 5º Ed., Ed.: Smith, M.B. e March, J., John Wi- ley & Sons, Nova lorque: 2001, todo o conteúdo dos quais é aqui in- corporado por referência.

[0076] O termo “alifático” ou “grupo alifático”, como usado aqui, significa uma cadeia linear (isto é, não ramificada) ou ramificada, subs- tituída ou não substituída de hidrocarbonetos que é completamente saturada ou que contém uma ou mais unidades de insaturação, ou um hidrocarboneto monocíclico ou hidrocarboneto bicíclico que está com- pletamente saturado ou que contém uma ou mais unidades de insatu- ração, porém que não é aromático (também referido aqui como "car- bociclo", "cicloalifático" ou "cicloalquila"), que possui um único ponto de ligação ao resto da molécula. A menos que especificado de outro modo, os grupos alifáticos contêm de 1 a 6 átomos de carbono alifáti- cos. Em algumas modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1a 5 átomos de carbono alifáticos. Em outras modalidades, os grupos alifá- ticos contêm de 1 a 4 átomos de carbono alifáticos. Em ainda outras modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 3 átomos de carbono alifático, e em ainda outras modalidades, os grupos alifáticos contêm de 1 a 2 átomos de carbono alifático. Em algumas modalidades, “ci- cloalifático” (ou “carbociclo” ou “cicloalquila”) refere-se a um hidrocar- boneto monocíclico C3-C6s que é completamente saturado ou que con- tém uma ou mais unidades de insaturação, porém que não é aromáti- co, que possui um único ponto de ligação ao resto da molécula. Gru- pos alifáticos adequados incluem, porém não estão limitados aos gru- pos alquila, alquenila, alquinila e híbridos lineares ou ramificados,

substituídos ou não substituídos e híbridos dos mesmos, tais como (cicloalquil) alquila, (cicloalquenil) alquila ou (cicloalquil) alquenila.

[0077] O termo "heteroátomo" significa um ou mais de oxigênio, enxofre, nitrogênio, fósforo ou silício (incluindo, qualquer forma oxida- da de nitrogênio, enxofre, fósforo ou silício; a forma quaternizada de qualquer nitrogênio básico ou; um nitrogênio substituível de um anel heterocíclico, por exemplo N (tal como em 3,4-di-hidro-2H-pirrolil), NH (como em pirrolidinil) ou NR + (em pirrolidinil N-substituído)).

[0078] O termo "insaturado", como usado aqui, significa que uma metade tem uma ou mais unidades de insaturação.

[0079] Como usado aqui, o termo "cadeia de hidrocarboneto biva- lente C1-8 (ou C1-6) saturada ou insaturada, linear ou ramificada”", refe- re-se às cadeias bivalentes de alquileno, alquenileno e alquinileno que são lineares ou ramificadas como definido aqui.

[0080] O termo "alquileno" refere-se a um grupo alquila bivalente. Uma “cadeia alquileno” é um grupo polimetileno, isto é, -(CH2) n-, em que n é um número inteiro positivo, preferivelmente de 1 a 6, de 1 a 4, de 1 a 3, de 1 a 2, ou de 2 a 3. Uma cadeia alquileno substituída é um grupo polimetileno no qual um ou mais átomos de hidrogênio de meti- leno são substituídos por um substituinte. Substituintes adequados in- cluem aqueles descritos abaixo para um grupo alifático substituído.

[0081] O termo "alquenileno" refere-se a um grupo alquenila biva- lente. Uma cadeia de alquenileno substituída é um grupo de polimeti- leno contendo pelo menos uma ligação dupla na qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um substituinte. Substituin- tes adequados incluem aqueles descritos abaixo para um grupo alifáti- co substituído.

[0082] O termo "halogênio" significa F, CI, Br, ou |.

[0083] O termo "arila" usado sozinho ou como parte de uma por- ção maior como em "aralquila", "aralcóxi," ou "ariloxialquila", refere-se aos sistemas de anéis monocíclicos ou bicíclicos tendo um total de cinco a quatorze membros em anel, em que pelo menos um anel no sistema é aromático e em que cada anel no sistema contém de 3 a 7 membros do anel. O termo “arila” pode ser usado alternadamente com o termo “anel arila”. Em certas modalidades da presente invenção, "ari- la" refere-se a um sistema de anel aromático que inclui, porém não se limita a, fenila, bifenila, naftila, antracila e similares, que pode conter um ou mais substituintes. Também incluído no escopo do termo “arila”, como é usado aqui, está um grupo em que um anel aromático é fundi- do a um ou mais anéis não aromáticos, tais como indanila, ftalimidila, naftimidila, fenantridinila, ou tetra-hidronaftila, e similares.

[0084] Os termos "heteroarila" e "heteroar-", usados sozinhos ou como parte de uma fração maior, por exemplo, "heteroaralquila" ou "heteroaralcóxi", referem-se aos grupos com 5 a 10 átomos, preferi- velmente 5, 6, ou 9 átomos do anel; tendo de 6, 10, ou 14 Tr elétrons compartilhados em uma matriz cíclica; e tendo, além de átomos de carbono, de um a cinco heteroátomos. O termo “heteroátomo” refere- se ao nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, e inclui qualquer forma oxidada de nitrogênio ou enxofre, e qualquer forma quaternizada de um nitro- gênio básico. Os grupos heteroarila incluem, sem limitação, tienila, fu- ranil, pirrolila, imidazolila, pirazolila, triazolila, tetrazolila, oxazolila, iso- xazolila, oxadiazolila, tiazolila, isotiazolila, tiadiazolila, piridila, piridazi- nila, piramidinila, piridazinila, pimidinila, piridinolizinila, pimidinila, piridi- ridolizinila, pimidinila, pirilinizinila, piramidinila, piridinil, pirila-pirila. Os termos “heteroarila” e “heteroar-”, como usado aqui, também incluem grupos em que um anel heteroaromático é fundido a um ou mais anéis arila, cicloalifático ou heterocíclico, onde o radical ou ponto de fixação está no anel heteroaromático. Exemplos não limitantes incluem indoli- la, isoindolila, benzotienila, benzofuranila, dibenzofuranila, indazolila, benzimidazolila, benztiazolila, quinolila, isoquinolila, cinolinila, ftalazini-

la, quinazolinila, 4H-quinolizinila, carbazolila, acridinila, fenazinila, fe- notiazinila, fenoxazinila, tetra-hidroquinolinila, tetra-hidroisoquinolinila, e pirido[2,3—b]—1,4-0xazin-3(4H)-ona. Um grupo heteroarila pode ser mono ou bicíclico. O termo “heteroarila” pode ser usado alternadamen- te com os termos “anel heteroarila”, “grupo heteroarila" ou “heteroaro- mático”, qualquer um dos quais termos inclui anéis que são opcional- mente substituídos. O termo "heteroaralquila" refere-se a um grupo alquila substituído por um heteroarila, em que as porções alquila e he- teroarila independentemente são opcionalmente substituídas.

[0085] Como usado aqui, os termos "heterociclo", "heterociclila", "radical heterocíclico" e "anel heterocíclico" são usados alternadamen- te e referem-se a um heterocíclico monocíclico estável de 5 a 7 mem- bros ou porção bicíclica de 7 a 10 membros que é saturada ou parci- almente insaturada, e tem, além de átomos de carbono, um ou mais, preferivelmente um a quatro, heteroátomos, como definido acima. Quando usado em referência a um átomo o anel de um heterociclo, o termo "nitrogênio" inclui um nitrogênio substituído. Por exemplo, em um anel saturado ou parcialmente insaturado tendo de O a 3 heteroá- tomos selecionados de oxigênio, enxofre ou nitrogênio, o nitrogênio pode ser N (como em 3,4-di-hidro-2H-pirrolil), NH (como em pirrolidini- la), ou *NR (como em pirrolidinila N-substituída).

[0086] Um anel heterocíclico pode ser ligado ao seu grupo pen- dente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulta em uma estrutura estável e qualquer um dos átomos pode ser opcional- mente substituído. Exemplos de tais radicais heterocíclicos saturados ou parcialmente insaturados incluem, sem limitação, tetra-hidrofu- ranila, tetra-hidrotiofenila, pirrolidinila, piperidinila, pirrolinila, tetra- hidroquinolinila, tetra-hidroisoquinolinila, decahidroquinolinila, oxazepi- nolana, piperazinolila, oxazepinolana, piperazinolila, oxazepinolila, pi- perazinolila, oxazepinolila, piperazzinolila, oxazepinolanila, oxazepi-

nolila, piperazzinolila, oxazepinolila, oxazepinolila, piperazinila, morfo- linila, e quinuclidinila. Os termos "heterociclo", "heterociclila", "anel he- terociclila", "grupo heterocíclico", "fração heterocíclica" e "radical hete- rocíclico" são usados alternadamente aqui, e também incluem grupos em que um anel heterocíclico é fundido a um ou mais anéis arila, hete- roarila, ou cicloalifática, como indolinila, 3H-indolila, cromanila, fenan- tridinila, ou tetra-hidroquinolinila. Um grupo heterociclila pode ser mono ou bicíclico. O termo "heterociclilalquila" refere-se a um grupo alquila substituído por um heterociclila, em que as porções alquila e heteroci- clila independentemente são opcionalmente substituídas.

[0087] Como usado aqui, o termo “parcialmente insaturado” refere- se a uma porção do anel que inclui pelo menos uma ligação dupla ou tripla. O termo "parcialmente insaturado" é destinado a abranger anéis com múltiplos locais de insaturação, porém não se destina a incluir frações arila ou heteroarila, como aqui definido.

[0088] Como descrito aqui, os compostos da invenção podem con- ter porções "opcionalmente substituídas". Em geral, o termo “substituí- do”, seja precedido pelo termo “opcionalmente” ou não, significa que um ou mais hidrogênios da porção designada são substituídos por um substituinte adequado. A menos que indicado de outro modo, um gru- po "opcionalmente substituído" pode ter um substituinte adequado em cada posição substituível do grupo, e quando mais de uma posição em qualquer estrutura pode ser substituída com mais de um substituinte selecionado de um grupo especificado, o substituinte pode ser igual ou diferente em todas as posições. As combinações de substituintes pre- vistas por esta invenção são preferivelmente aquelas que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente viáveis. O termo “estável”, como usado aqui, refere-se aos compostos que não são substancialmente alterados quando submetidos às condições que permitem sua produção, detecção e, em certas modalidades, sua re-

cuperação, purificação e uso para uma ou mais das finalidades descri- tas aqui.

[0089] Substituintes monovalentes adequados em um átomo de carbono substituível de um grupo "opcionalmente substituído" são in- dependentemente halogênio; (CH2)gd4uRº; (CH2))4ORº; -O(CH2)>34aRº, —O-(CH2)>3U4C(O)ORº; — (CH2)d4CH(ORº)2; -(CH2)J4SRº; (CH2))4Ph, que pode ser substituí- do com Rº; -(CH2)> 4O(CH2))-1Ph que pode ser substituído com Rº; — CH=CHPh, que pode ser substituído com Rº; -(CH2)>-4O0(CH2)0-1- piridila que pode ser substituída com Rº; —-NO>2; -—CN; —N3; -(CH>2)o- aN(Rº)23; H(CH2)o4aN(Rº)C(O)Rº; —N(Rº)C(S)Rº; (CH2)JXaN(Rº)C(O) NRº2; -N(Rº)C(S)NRº2; -(CH2)uN(Rº)C(O)ORº; N(Rº)N(Rº)C(O)Rº; -“N(RIN(Rº)C(OINRº2; — -N(RIN(Rº)C(O)JORº; —H(CH2)JUYUC(O)Rº; — C(S)Rº; (CH2))-4C(0)ORº; (CH2))-4C(O)SRº; -(CH2)o-4C(O0)OSIRº3; — (CH2))240C(O)Rº; -OC(O)(CH2)J4SR-, SC(S)SRº; -(CH2))4SC(O)Rº; (CH2)d4C(O)NRº2; -C(S)NRº; —C(S)SRº; -SC(S)SRº, -(CH2)40C (O)NRº2; -C(O)N(ORº)Rº; -C(O)C(O)Rº; -C(O)CH2C(O)Rº; -C(NORº) Rº; -(CH2))4SSRº; -(CH2)a 4S(O)2Rº; (CH2)94S(0)2ORº; (CH2))-40S (O)LRº; —S(O)NRº; -(CH2)S3uS(O)Rº; -N(Rº)S(O)ANRº2; —N(Rº)S (O)2Rº; -N(ORº)Rº; —C(NH)NRº2; —P(O)2Rº; -P(O)Rº2; -OP(O)Rº2; — OP(O)(ORº)2; SIRº3; -(C1+4 alquileno linear ou ramificado)O—-N(Rº)2; ou —(C14 alquileno linear ou ramificado)C(O)O-N(Rº)», em que cada Rº pode ser substituído como definido abaixo e é independentemente hi- drogênio, C1-6 alifático, -CH2Ph, -O(CH2).-1Ph, -CH>2-(anel heteroarila de 5 a 6 membros), ou um anel arila ou saturado parcialmente insatu- rado de 5 a 6 membros com O a 4 heteroátomos selecionados de ni- trogênio, oxigênio ou enxofre ou, não obstante a definição acima, duas ocorrências independentes de Rº, considerando em conjunto com seu(s) átomo(s) interveniente(s), formam um anel arila mono ou bicícli-

co saturado, parcialmente insaturado, de 3 a 12 membros tendo de O a 4 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, que pode ser substituído como definido abaixo.

[0090] Substituintes monovalentes adequados em Rº (ou o anel considerando duas ocorrências independentes de Rº juntamente com seus átomos intervenientes), são independentemente halogênio (CH2)o-2Rº, —(haloRº), —(CH2)2OH, —(CH2))22ORº, —(CH2) 2CH(ORº*):; —O(haloRº), CN, —N3z —(CH2))2C(O)Rº, —(CH2)o- 2C(0)OH, H(CH2)g)2C(0)JORº, —(CH2))2SRº, —(CH2))-2SH, —(CH2)o 2NH2, —(CH2)2aNHRº, —(CH2)92aNRº, —NO>, —-SiRº3, —OSIiRº;, -C(O)SRº, —((C14 alquileno linear ou ramificado)C(O)ORº, ou -SSRº em que cada Rº é não substituído ou quando precedido por "halo" é substituído apenas por um ou mais halogênios, e é independentemen- te selecionado de C1-4 alifático, CH2Ph, -O(CH2).-Ph, ou um anel par- cialmente insaturado de 5 a 6 membros ou arila tendo de O a 4 hetero- átomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Substituintes divalentes adequados em um átomo de carbono saturado de R' incluem =O e=S.

[0091] Substituintes divalentes adequados em um átomo de car- bono saturado de um grupo "opcionalmente substituído" incluem o se- guinte: =O, =S, =NNR'2, =-NNHC(O)R', =NNHC(O0)OR', =NNHS(O)2R', =NR', =-NOR”, -O(C(R 2))2-30-, ou -S(C(R'2))2-38-, em que cada inde- pendente ocorrência de R* é selecionado de hidrogênio, C1-6 alifático que pode ser substituído como definido abaixo, ou um anel arila satu- rado parcialmente insaturado, parcialmente insaturado, de 5 a 6 mem- bros não substituído tendo de O a 4 heteroátomos selecionados de ni- trogênio, oxigênio, ou enxofre. Substituintes divalentes adequados que estão ligados aos carbonos substituíveis vicinais de um grupo "opcio- nalmente substituído" incluem: -O(CR'2)2-30-, em que cada ocorrên- cia independente de R* é selecionado de hidrogênio, C1-6 alifático que pode ser substituído como definido abaixo, ou um anel arila saturado, parcialmente insaturado, não substituído de 5 a 6 membros, tendo de O a 4 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre.

[0092] Substituintes adequados no grupo alifático de R * incluem halogênio, —Rº, -(haloRº*), -OH, -ORº, -O(haloRº*), -CN, —-C(0) OH, — C(O0)ORº, —-NH>2, —=-NHRº, —=NRº2, ou —-NO>, em que cada Rº é não substituído ou onde precedido por “halo” é substituído apenas por um ou mais halogênios, e é independente Ci. alifático, -CH2Ph, — O(CH2);-1Ph, ou um anel arila saturado parcialmente insaturado de 5 a 6 membros com O a 4 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxi- gênio ou enxofre.

[0093] Substituintes adequados em um nitrogênio substituível de um grupo "opcionalmente substituído" incluem —R*, —-NR2, -«C(O)R!, — C(O)OR!, -C(O)C(O)Rt, -C(O)CH2C(O)R!, -S(O)2R!, -S(O)2aNRi2, — C(S)NR'2, -C(NH)NR*2, ou -N(Rt)S(O)2R*; em que cada R* é inde- pendentemente hidrogênio, C1-. alifático que pode ser substituído co- mo definido abaixo, -OPh não substituído, ou um anel arila saturado parcialmente insaturado, parcialmente insaturado ou não substituído de 5 a 6 membros com O a 4 heteroátomos independentemente do ni- trogênio, oxigênio, ou enxofre, ou, não obstante a definição acima, du- as ocorrências independentes de R*, consideradas em conjunto com o(s) seu(s) átomo(s) interveniente(s), formam um anel arila mono ou bicíclico não substituído de 3 a 12 membros saturado, parcialmente insaturado, ou arila mono ou bicíclico tendo de O a 4 heteroátomos in- dependentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre.

[0094] Substituintes adequados no grupo alifático de R* são inde- pendentemente halogênio, -Rº, -(haloRº*), -OH, -ORº, -O(haloRº), — CN, -C(0)OH, —C(0)ORº, —-NH2, -NHRº, —NRº2, ou —-NO>, em que cada Rº é não substituído ou onde precedido por "halo" é substituído apenas por um ou mais halogênios, e é independente C1-,4 alifático, —

CH2Ph, -O(CH2).-1Ph, ou um anel arila saturado, parcialmente insatu- rado, ou arila de 5 a 6 membros tendo de O a 4 heteroátomos selecio- nados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre.

[0095] Como usado aqui, o termo "sal farmaceuticamente aceitá- vel" refere-se aos sais que são, dentro do escopo do julgamento médi- co seguro, adequados para uso em contato com tecidos de humanos e animais inferiores sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similares, e são proporcionais a uma relação risco/benefício razoá- vel. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, S. M. Berge et al., descrevem sais farmaceuti- camente aceitáveis em detalhe em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66,1-19, incorporado aqui por referência. Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos os desta invenção incluem aqueles deriva- dos de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos adequados. Exemplos de sais de adição de ácido não tóxico farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formado com ácidos inorgânicos, tais co- mo ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido fosfórico, ácido sulfú- rico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos, tais como ácido acéti- co, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou pelo uso de outros métodos usados na técnica, tal como permuta iônica. Outros sais farmaceuticamente acei- táveis incluem sais de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benze- nosulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforos- sulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, glicofosfato, fumarato, glico-heptonato, glicerofosfato, gliconato, hemissulfato, heptanoate, hexanoate, hidroiodeto, 2—hidróxi- etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3- fenilpropionato, fosfato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sul-

fato, tartarato, tiocianato, p-toluenossulfonato, undecanoato, valerato e similares.

[0096] Sais derivados de bases apropriadas incluem sais de me- tais alcalinos, metais alcalino-terrosos, amônio e N* (C14 alquil)a. Sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio e similares. Outros sais farmaceutica- mente aceitáveis incluem, quando apropriado, amônio não tóxico, amônio quaternário e cátions de amina formados usando contraíons, tais como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfo- nato de alquila inferior e sulfonato de arila.

[0097] A menos que indicado de outro modo, as estruturas repre- sentadas aqui também pretendem incluir todas as formas isoméricas (por exemplo, enantiomérica, diastereomérica, e geométrica (ou con- formacional)) da estrutura; por exemplo, as configurações de Re S para cada centro assimétrico, isômeros de ligação dupla Z e E, e isô- meros conformacionais Z e E. Portanto, isômeros estereoquímicos simples, bem como misturas enantioméricas, diastereoméricas e geo- métricas (ou conformacionais) dos presentes compostos estão dentro do escopo da invenção. A menos queindicado de outro modo, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção estão dentro do es- copo da invenção. Além disso, a menos que indicado de outro modo, as estruturas aqui descritas também pretendem incluir compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, compostos possuindo as presentes estrutu- ras incluindo a substituição de hidrogênio por deutério ou trítio, ou a subs- tituição de um carbono por um carbono enriquecido com "ºC ou **C estão no escopo desta invenção. Estes compostos são úteis, por exemplo, co- mo ferramentas analíticas, tais como sondas em ensaios biológicos ou como agentes terapêuticos de acordo com a presente invenção.

[0098] Os termos "afinidade mensurável" e "inibir de forma mensu-

rável", como usado aqui, significam uma mudança mensurável na ati- vidade de MTORC1 entre uma amostra que compreende um composto da presente invenção, ou composição do mesmo, e mMTORC1, e uma amostra equivalente que compreende mMTORC1 na ausência do referi- do composto, ou composição do mesmo.

3. Descrição de Modalidades Exemplares:

[0099] Como descrito acima, em certas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula |:

O | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: O anel A é um derivado monovalente de rapamicina ou um análogo (isto é, um rapálogo) do mesmo; em que R' é ligado a ele na posição C-7 hidroxila da rapa- micina ou um análogo da mesma; e R' é uma cadeia C3.39 hidrocarboneto monovalente, satu- rada ou insaturada, linear, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e independentemente substituídas por -N(R)-, —N(R)C(O)-, -C(O)N(R)--, -N(R)S(O)2, — S(O)aN(R)-, -O-, —C(O) —, -OC(O)-, —-C(0)O-, —S-, -S(O)-, —S(O)2—, ou -P(O)(R)2; ou um anel heterocíclico saturado ou parcialmente insa- turado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroátomos independen- temente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou R' é selecionado da Fórmula P-0: AemaiooR P-0 em que: * indica o ponto de ligação ao anel A; cada Z é independentemente -O-, -S-, -NR-, ou -SO>-;

n é de cerca de 2 a cerca de 300; e cada R é independentemente hidrogênio ou um grupo C1-8 alifático opcionalmente substituído.

[00100] Será apreciado que o termo “rapamicina”, e estruturas da mesma, recitado ao longo da especificação é destinado a abranger rapamicina e análogos da mesma.

[00101] Para os propósitos de clareza, a Fórmula II fornecida é re- produzida abaixo com a porção R' descrita ligada à porção C-7 hidro- xila. Consequentemente, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Il:

OH O MAR - FS

PA A sol > : o) Ss

COUT N o. = dO H x

U ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é uma cadeia C3.39 hidrocarboneto monovalente, satura- da ou insaturada, linear ou ramificada, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e indepen- dentemente substituídas por —N(R)—, —N(R)C(O), —C(OJ)N(R), — N(R)S(O)2—, -S(O)2aN(R)-, -O-, —C(O) —, -OC(O)--, -C(0)O-, —S-, — S(O)—, —S(O)2—, ou -P(O)(R):; ou um anel heterocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroáto- mos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou en- xofre ou R' é selecionado da Fórmula P-0: Amo?

P-0 em que: * indica o ponto de ligação à posição C-7 hidroxila; cada Z é independentemente -O-, -S-, -NR-, ou -SO>-; n é de cerca de 2 a cerca de 300; e cada R é independentemente hidrogênio ou um grupo C1-6 alifático op- cionalmente substituído.

[00102] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Il-a ou Il-b:

OH O A o ANS mol > —r RW z n? z & NX N o. = Ho Hi o Ô1 R$ or Il-a

OH O o, o À Ns ro > = SS i 1? o N N o. = o H Og ; Il-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada of R' é como definido acima e descrito aqui em classes e subclasses.

[00103] Será apreciado que o termo “rapamicina”, e estrutura da mesma, relacionada por toda a especificação destina-se a abranger a rapamicina e análogos da mesma. Consequentemente, em certas mo- dalidades o anel A é Rapamicina. Em algumas modalidades, o anel A é Everolimo. Em algumas modalidades, o anel A é Tensirolimo. Em algumas modalidades, o anel A é Ridaforolimo. Em algumas modali- dades, o anel A é Umirolimo.

[00104] Os análogos recitados de rapamicina acima (isto é, rapálo- gos) são para exemplificação e não se destina a limitar a presente in- venção.

[00105] Como definido acima, R' é uma cadeia C3-30 hidrocarboneto monovalente, saturada ou insaturada, linear ou ramificada, opcional- mente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e independentemente substituídas por —N(R),, — N(R)C(O)—, -C(O)N(R)-, —-N(R)S(O)2—, -S(O)2aN(R)--, -O-, —C(O) —, — OC(O)-, -C(0)O-, —S-, -S(O)--, ou -S(O)2—, ou um anrl heterocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxi- gênio ou enxofre.

[00106] Em certas modalidades, R' é uma cadeia C3-30 hidrocar- boneto monovalente, saturada ou insaturada, linear ou ramificada, op- cionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e independentemente substituídas por —-N(R)-, — N(R)C(O)—, -C(O)N(R)-, —-N(R)S(O)2—, -S(O)2aN(R)--, -O-, —C(O) —, — OC(O)—, -C(0)O-, —S-, -S(O)--, —S(O)2—, ou -P(O)(R)2. Em algumas modalidades, R' é uma cadeia hidrocarboneto monovalente, saturada, ramificada, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R* são opcional e independentemente substituídas por —N(R) —, =N(R)C(O)-, —-C(O)N(R) —, —=N(R)S(O)2—, -S(O)2N(R) —, —O-, —C(O0) —, -OC(O)-, —-C(0)O-, —S-, -S(O)--, —-S(O)2—, ou -P(O)(R)2. Em algumas modalidades, R' é uma cadeia hidrocarboneto monovalente, insaturada, linear, opcionalmente substituída em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e independentemente substi- tuídas por -N(R) —, =N(R)C(O)-, —-C(O)N(R) —, —=N(R)S(O)2-, -S(O).N (R) —, —O-—, —C(O) —, -OC(O)--, -C(0)O-S-, -S(O)-, -S(O)., ou —

P(OX(R)2. Em algumas modalidades, R' é uma cadeia hidrocarboneto monovalente, insaturada, ramificada opcionalmente substituída em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e indepen- dentemente substituídas por -—N(R) —, —=N(R)C(O)-, -C(O)N(R) -—, — N(R)S(O)2-, -S(O)2N(R) —, -O-, —C(O) —, -OC(O)-., -C(0)O-, —S-, — S(O)—, -S(O)2-, ou -P(O)(R)a. Em algumas modalidades, R' é uma cadeia hidrocarboneto monovalente, satuarada, opcionalmente substi- tuída em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcional e independentemente substituídas por -O-. ; 14 e e

[00107] Em algumas modalidades, R' é . Em algumas data Ro é nado dat modalidades, R' é HO . Em algumas modalidades, R' é AAA HH Em algumas modalidades, R' é á—> —ºH, Em al- gumas modalidades, R' é ou, Em algumas modalidades, R' é

NH

[00108] Em algumas modalidades, R' é rol 2 A.

SE

[00109] Em algumas modalidades, R' é FF”, Em algumas A. au So DT modalidades, R' é FE Em algumas modalidades, R' é FE Em s 2 algumas modalidades, R' é FEF,

: h D.

[00110] Em algumas modalidades, R' é H . Em algumas

DÊ NO ANO modalidades, R'? | . Em algumas modalidades, R' é H. Em algumas modalidades, R1 é — O NH. Hom OH Ho" oH

[00111] Em certas modalidades, R' é oH., Em algumas mo- Hom VoH Ro Hot OH Ho .oH dalidades, R' é or. Em algumas modalidades, R' é “on. noto! Ho oH Em algumas modalidades, Ré oH. Em algumas modalidades, À eu Hot OH HO" Ho OH Ho oH Ré oÉ “or . Em algumas modalidades, R' é O NH, e oH

[00112] Em algumas modalidades, R1 é HO POR,

[00113] Em certas modalidades, R' é de Fórmula P-0:

SEemszi—oR P-0 em que: * indica o ponto de ligação ao anel A; cada Z é independentemente -O-, -S-, -NR-, ou -SO>-; n é de cerca de 2 a cerca de 300; e cada R é independentemente hidrogênio, ou um grupo C1-8 alifático opcionalmente substituído.

[00114] Em algumas modalidades, n é de cerca de 2 a cerca de 10; de cerca de 10 a cerca de 20; de cerca de 20 a cerca de 30; de cerca de 30 a cerca de 40; de cerca de 40 a cerca de 50; de cerca de 50 a cerca de 60; de cerca de 60 a cerca de 70; de cerca de 70 a cerca de 80; de cerca de 80 a cerca de 90; de cerca de 90 a cerca de 100; de cerca de 110 a cerca de 120; de cerca de 120 a cerca de 130; de cer- ca de 140 a cerca de 150; de cerca de 150 a cerca de 160; de cerca de 170 a cerca de 180; de cerca de 180 a cerca de 190; de cerca de 190 a cerca de 200; from 200 a cerca de 210; de cerca de 210 a cerca de 220; de cerca de 220 a cerca de 230; de cerca de 230 a cerca de 240; de cerca de 240 a cerca de 250; de cerca de 250 a cerca de 260; de cerca de 260 a cerca de 270; de cerca de 270 a cerca de 280; de cerca de 280 a cerca de 290; ou de cerca de 290 a cerca de 300.

[00115] Em algumas modalidades R' é Emo o, em que n e R são como descrito aqui.

oH

[00116] Em algumas modalidades, R' é ADA . Em algu- oH mas modalidades, R' é rol . Em algumas modalidades, R' oH oH é rol . Em algumas modalidades, R' é rol . oH Em algumas modalidades, R' é ol . Em algumas modali-

dades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalida- des, Rº é Aro Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é front Em algumas modalida- des, Rº é Aro Em algumas modalidades, R' é fArol Em algumas modalidades, R' é Ano Em algumas modalidades, R' é Prot Em algumas modalida- des, Rº é Aro Em algumas modalidades, R' é mod Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é Aros Em algumas modalida- des, Rº é Aro Em algumas modalidades, R' é mod Em algumas modalidades, R' é Aro.

Em algumas modalidades, R' é fot", Em algumas modalida- des, R' é rol Em algumas modalidades, R' é rod Em algumas modalidades, R' é Aro.

Em algumas modalidades, R' é fot", Em algumas modalida- des, R' é rol Em algumas modalidades, R' é rol Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é rol, Em algumas modalida-

des, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é frota. Em algumas modalidades, R' é rol Em algumas modalidades, R' é frota". Em algumas modalida- des, Rº é frog Em algumas modalidades, R' é Aro

[00117] Em algumas modalidades, R' é oNV Em at gumas modalidades, R' é Aprov Em algumas modalida- des, Rº é Aro ore Em algumas modalidades, R' é Aro ee Em algumas modalidades, R' é Aro ore Em algumas modalidades, R' é Aro ore Em algumas moda- lidades, Rº é Aro eve Em algumas modalidades, R' é Amo ore Em algumas modalidades, R' é AÁLmol ore Em algumas modalidades, R' é Aro Me Em algumas moda- lidades, Rº' é “Mol” Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é Aron Em algumas modalidades, R' é Aron Em algumas moda- lidades, Rº' é “tok” Em algumas modalidades, R' é Aros Em algumas modalidades, R' é Aro ore Em algumas modalidades, R' é Aron Em algumas moda- lidades, Rº é Aro Me Em algumas modalidades, R' é Aro Me Em algumas modalidades, R' é Aro Me

Em algumas modalidades, R' é rob Em algumas moda- lidades, Rº é Aron Me Em algumas modalidades, R' é Aro Me Em algumas modalidades, R' é Aro Em algumas modalidades, R' é Aro Me Em algumas moda- lidades, Rº é Aro Me Em algumas modalidades, R' é rol Me Em algumas modalidades, R' é rod Me Em algumas modalidades, R' é ol o Em algumas moda- lidades, Rº é rol Me Em algumas modalidades, R' é Mod Me Em algumas modalidades, R' é fot Em algumas modalidades, R' é frog o Em algumas moda- lidades, Rº é rob Em algumas modalidades, R' é Aro Me Em algumas modalidades, R' é Aro Me Em algumas modalidades, R' é rol o Em algumas modal- idades, R' é “todas Me

[00118] Em algumas modalidades, R' é AoA Em algu- mas modalidades, R' é Aro

[00119] Em algumas modalidades, R' é Amei o Em algu- Agi ot mas modalidades, R' é oo :

OH So o ss. o A or à Ô

[00120] Em algumas modalidades, R' é Son . Em al- SS" o < O, : Nou gumas modalidades, R' é HO . Em algumas modalidades, oH - = Tas LO o < TF O, o N É ovo y Ri O, / Ré ou . Em algumas modalidades, R' é N : oH

E o o ; R Dam Em algumas modalidades, R' é O X-oH. Em algumas mo-

SO o o dalidades, R' é Dot. À Ss o o

[00121] Em algumas modalidades, R' é e .Em al-

É temo Inca gumas modalidades, R' é CN : 3 Ago

[00122] Em algumas modalidades R' é o .

[00123] Em certas modalidades, R' é um anel heterocíclico satura- do ou parcialmente insaturado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 hete- roátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. A, Dá

[00124] Em algumas modalidades, R' é OH. Em algumas mo- ss x

Ç Ç dalidades, Ré / Em algumas modalidades, R' é Lo : Dr O o ! o o Em algumas modalidades, R' é 7 .

[00125] Em algumas modalidades, R' é selecionado daqueles des- critos na Tabela 1, abaixo.

[00126] Em certas modalidades, R é independentemente hidrogênio ou um grupo opcionalmente substituído selecionado de C1-6 alifático. Em algumas modalidades, R é hidrogênio. Em algumas modalidades, R é metila. Em algumas modalidades, R é etila. Em algumas modali-

dades, R é propila. Em algumas modalidades, R é Tou.

[00127] Em algumas modalidades, R é selecionado daqueles des- critos na Tabela 1, abaixo.

[00128] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Il:

OH O / MOO SONO 0 fe . Ho, , o SS á oO “o s So o, N N. O. =

O H & Sex

LU ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00129] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Ill-a ou Ill-b: oH O / MOON o fe) s HO, , o x " a) | “o Ss

SH EQ, N N. O. = O” Hi S *%R or Ill-a

OH O , MAR s à z Ho, ”. o O ss

SOR

SH o, N N O. = Ho H Oo Og Ill-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

R' é como descrito aqui.

[00130] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula IV:

OH O / e PV» Y o oo Õ vs ELAS x o > RW cs O

HO E 2 O, N N O. = do H Og ;

DA ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00131] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula IV-a ou IV-b:

OH O , MARA O, Õ “ Oo “7 W HO: É H Oo z o NX N O. = do Hi Og , Or IV-a oH O / MARX ss O O o VA k ; o Ox " | ) —. W Ho Su (o) Z &% NX N o. =

HO H fo) Og ; IV-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

R' é como descrito aqui.

[00132] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula V:

OH O / MAR - RE o j /. “e o O e RA v so

CH Z & NX N O. = o H o O. Roo Vv ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00133] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula V-a ou V-b:

OH O / MAR y ES 1º o [o ss o=P " o o Ss

TH eo, N N O. = Ho Hi o Ô. R$ ,or V-a

OH O / MA ss d z 1º d ss EP im o o o SS

SH eo, N N O. = o H

O Og ; V-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

R' é como descrito aqui.

[00134] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula VI:

OH O / MAR ; ss Yo º% o A NS o o RW

SH Z & N N o. = o H O O. Roo

VI ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00135] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Vl-a ou Vl-b: oH O , MARAA, Yo e. dx ss o AO Oo s

E o, N N O. TE HO Hz o O. R$ or Vl-a

OH O / MAR ES Neo 2 O. ss o SS NOUS, c

SH o N N O. = Ho! H

O Oi ; VI-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

R' é como descrito aqui.

[00136] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula VII:

OH O / o ES y FS O j Ho o &. o x ES o e RW sc Oo 7H 1 O, N N o. = do H Oi R ,

VII ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00137] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Vil-a ou ViIl-b:

OH O , MARA A HON Oo o O ss o o RW

SH EO, N N O. == Ho Hi O O. Rós or Vil-a

OH O / MAOS ss HOAN O Ô. “ o. 7 o NR o o

SH Z & NX N O. = o H O O.

RS Vil-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

R' é como descrito aqui.

[00138] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula VIII:

OH O HoNL —o Ô. s O Ê o NR o AO" À NR ss Oo

FLA Z & NX N O. =

HO H O O. Ro

[00139] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Vill-a ou VIIl-b:

OH O Ho No, —o O. s o > : AO, S $ o

SA E, NS N O. = Ho" Hi º RR or Vill-a oH O Ho No o. õ. " ; o Na A) “o s

SA o, N N O. = dO H Og ; ViIll-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00140] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula IX-a, IX-b, IX-c, IX-d, IX-e, IX-f, ou IX-g: oH O O. o Ox O) "O, SS z n? O, q N fo) = o H

O [SS ; IX-a oH O MAR o o) Ho, ”. o RN o o SS 8 N O. = o H o

OR IX-b oH O , MA = 2 . eo Ex o A SW Ho : nv? N fo) = do Ho Ro IX-c OH o / OS ” o 1 Nx SN PA) " o SN Sn? & W N. O. ms Ho" H Oo [x ; IX-d

OH O / MAR ã o

O No à o O os o 7 W cs Oo

CH Z % NX N (o) = o H O O. RO, IX-e

OH O / MAR A o HON o o O RS NAS mf SN cs Oo

SH Z & RW N O. =

HO H 9 Ox R .or IX-f

OH O / MAR o HO o O. ú AO DAL x — W cs Oo

CH z 2% NR N O. = o H

O [x ; X-g ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00141] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula X-a, X-b, X-c, X-d, X-e, X-f, ou X-g:

OH O Dx —o o %% Ho: o SS % N N fo) = do O. Ro X-a

OH O / Dx à z Õ. HO, Oo NX

A o: “o RW % N N O. =

HO O O. Ro X-b

OH O / Dx oo Ho o o RW

O NR N o. = o o O. Ro, X-c

OH O / Dx

O / o x o=PA o o RW % N N O. = o o O.

RS

X-d

OH O / Dx Wo, o. Oo x aa o RW & NX N o. =

HO O [e X-e

OH O / Dx Ho o Q o x ua o RW & N N o. =

HO

O OR , or X-f

OH O

DB HoN, —o, O. Oo o NX XxX o RW o N N O. =

HO O Og ; X-g ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é como descrito aqui.

[00142] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula Xl-a, XI-b, XI-c, XI-d, Xl-e, XI-f, ou Xl-g:

OH O

MAR E Oo, À o [x ss rol» 7 SW so

SE Z %& NX N o. = Ho H o [o ; Xl-a

OH O MAR ss —o, Ho, & O o o fo) o SW

SH Z & RW N o. = Ho H o po, XlI-b

OH O / AR “ o s o —" SW Do Ho E z % NR N o. = Ho H

O po, Xl-c

OH O , MAR ss

O / “, o O so AN" o "a SW Esso) “AH N o. = Ho H

O po ;

XI-d

OH O / MAR ss No O? ENNNO NA OD" | SN

O

SH Z %& NX N O. = o H

O po ; Xl-e

OH O / MAR o

O HON o po o O o A Ad o 7 W E Oo

CH z % N N O. = Ho H o O. P-O or XI-f

OH O / MAR a Ho o O. s Ma, A o > ' “7 RW sc Oo

CH Z % W N O. =

HO H

O po ; XI-g ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: P-O é como descrito aqui.

[00143] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula XII:

OH O AR o —o », o O o mo > 7 RW cs Oo

SH Z & NX N o. = o H

O OR A roIA ;

XI ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Rºn são como descrito aqui.

[00144] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece a composto of Formulae Xll-a ou Xll-b:

OH O

MAR E —Oo ", o O ss mol > B x e H o Z &% N N O. = HO Hi

O Ô OR Lol .or Xll-a

OH O o >, O. “ LO o ” Ho — RW e H o Z & NX N o. = o H

O OR Aro ; Xll-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Rºn são como descrito aqui.

[00145] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula XIII:

OH O —o Ho. “ o x NS o o RW

SH Z & NX N O. = do H OR ANA ;

[00146] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula XlIll-a ou Xlll-b:

OH O —o Ho. “ o x NS

SH z % NX N O. = do H 2 OR NINA , Or Xlll-a

OH O —o O. N HO, 7 o NR o o o

E % NX N O. = Ho H o Amro Xill-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Rºn são como descrito aqui.

[00147] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula XIV:

OH O —Oo , o [ox o ro») | , SW ss O

TH Z & NX N o. =

HO H O O. oH

HO oH Ho OH,

XIV ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00148] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula XIV-a ou XIV-b:

OH O AR - —o “, o o ss o IN, S cs Oo 7H

T O N N O. = Ho Hi: o O. oH Ho oH

HO OH, or XIV-a

OH O —Oo , o [ox o ro») | , SW ss O

TH Z & NX N o. =

HO H O O. oH

HO oH Ho OH, XIV-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00149] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula XV:

OH O o HO, “ O. o VA > “o o > o 7 W cs Oo

CH

Z O NW N O. = o H o O. oH

HO oH Ho oH ,

XV ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00150] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto de Fórmula XV-a ou XV-b:

OH O AR s —o Ho, “ o O Si o o RW

SH

Z O N N O. = Oo Hi: o fo) oH

HO oH Ho: OH, or XV-a

OH O —o HO, Ox o VA > “o o o “a RW cs Oo

CH

Z O RW N O. = o H o O. oH

HO oH Ho oH , XV-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00151] Rapamicina é comercializada sob a marca RapamuneO& (nome genérico, sirolimo) e é bastante conhecida por sua atividade antiproliferativa e imunossupressora. Rapamicina é aprovada pelo FDA para a prevenção da rejeição de transplantes e para revestimento de stents para prevenção de reestenose. Além dos benefícios docu- mentados da rapamicina, é bem conhecido que a rapamicina está as- sociada a uma série de efeitos colaterais graves. Tais efeitos colate- rais incluem sintomas similares aos da diabetes de tolerância à glicose diminuída e diminuição da sensibilidade à insulina. Além disso, repor- tou-se que a rapamicina ativa a via de sinalização de Akt (incluindo ativação de Akt e ERK), desse modo aumentando o risco do paciente de câncer.

[00152] Como usado aqui, a frase “rapamicina sozinha” destina-se a comparar um composto da presente invenção com rapamicina, ou um análogo da mesma, como alternativas.

[00153] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula |, 11, II, IV, V, VI, VII, VIII, XII, XIII, XIV, ou XV é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula Il-a, Ill-a, IV-a, V-a, Vl-a, Vil-a, Vill-a, Xll-a, XIll- a, XIV-a, ou XV-a é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em al- gumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula Il-b, Ill-b, IV- b, V-b, VI-b, Vil-b, Vill-b, XIl-b, XIll-b, XIV-b, ou XV-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha.

[00154] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula IX-a, IX-b, IX-c, IX-d, IX-e, IX-f, ou IX-g é mais eficaz do que a rapamicina sozinha.

[00155] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula X-a, X-b, X-c, X-d, X-e, X-f, ou X-g é mais eficaz do que a rapa- micina sozinha.

[00156] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula Xl-a, XI-b, Xl-c, XI-d, Xl-e, XI-f, ou Xl-g é mais eficaz do que a rapamicina sozinha.

[00157] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula Il-a ou Il-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algu- mas modalidades, um composto fornecido de Fórmula Ill-a ou Ill-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula IV-a ou IV-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algumas modalidades, um composto forne-

cido de Fórmula V-a ou V-b é mais eficaz do que a rapamicina sozi- nha. Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula VI- a ou Vl-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula Vil-a ou VIl-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula Vill-a ou VIll-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algumas modalidades, um composto forneci- do de Fórmula Xll-a ou XIl-b é mais eficaz do que a rapamicina sozi- nha. Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula Xlll-a ou XIll-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algu- mas modalidades, um composto fornecido de Fórmula XIV-a ou XIV-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha. Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fórmula XV-a ou XV-b é mais eficaz do que a rapamicina sozinha.

[00158] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula 1, 11, UM, IV, V, VI, VII, VIII, XII, XIII, XIV, ou XV quando adminis- trado a um paciente, resulta em menos e/ou menor gravidade de efei- tos colaterais do que quando rapamicina é administrada.

[00159] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula IX-a, IX-b, IX-c, IX-d, IX-e, IX-f, ou IX-g quando administrado a um paciente, resulta em menos e/ou menor gravidade de efeitos cola- terais do que quando rapamicina é administrada.

[00160] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula X-a, X-b, X-c, X-d, X-e, X-f, ou X-g quando administrado a um paciente, resulta em menos e/ou menor gravidade de efeitos colaterais do que quando rapamicina é administrada.

[00161] Em algumas modalidades, um composto fornecido de Fór- mula Xl-a, XI-b, Xl-c, XI-d, Xl-e, XI-f, ou Xl-g quando administrado a um paciente, resulta em menos e/ou menor gravidade de efeitos cola- terais do que quando rapamicina é administrada.

[00162] “Compostos Exemplares da invenção são estabelecidos na Tabela 1, abaixo. Tabela 1. Compostos Exemplares

OH O

MARA o. o à N.. rol» "O. S ES o o, N N o. = oO No A,

Ç o o o 1-1

OH O Oo õ Ho ». o O ss NAO “O Sw

E % SN N o. = fa 9 QN 1-2 oH O o, o Ôd& mol >” Oo s

ES do, N N O. = do H o. -.

O - 1-3 oH O —Oo ô í ".” o *. ” Ho ) 7 SW so

SH & NW N O. = O Hi: O fo) tod on 1-4

OH O o, o À LN.» no >: . Ss HS n? o, N N o. = o HÁ 1-5

OH O —Oo õ >. o À.» OS : nº o, q N o = do 4. od ot 1-6 oH O Oo Ô » o À Ne ol > —. SS sn? o N N O. = o H falo 7

OH O Oo ô . », o O " um Ho)", > z H o z % NX N o. = Ho H ê Io oH 1-8 oH O MARA = —Oo o . ss to >" "2 SW Oo 8 z %& NX N o. = o nd oo 1-9

OH O MAR v ES Oo, ô a, o [ox o mol >" = SE : n? z % N N o = Ho H o o.

À

CA Lo Lo 1-10

OH O o, o Aos sol > 2 Ss ES o 1 =, N N o = do H AIoj o 111

OH O o, NO sol > > Ss

ES O N o = o H Ao ot 1-12

OH O o, o À Ns mol >" o Ss < n? N o = o H3 oa or 1-13

OH O Po) ô . >. o AN ol > S So 8 % NY N o = ho H Ao or 1-14

OH O MARA, ss —o. Ô " HO —, RW es Hd o 2 O, Ni N O. = f. oO H à oi ot 1-15

OH O o, : ol Ns Ho "O, SW : nº E, NS N o = do HÍ Mol or 1-16 oH O

DB O o O Ho SW no o, N N o = o H o QN 17

OH O MARAA, Oo ô », o [o ss Ho > SS : nº z O N N o. =

HO H

O QN O 1-18

OH O —O õ À | o O ú | ) > " RW e Hd o

Z O N N O. = O o á ÇA OH 1-19 oH O

MARA —o. a o Ô& ss Ho ) a SW e H o o, N N o. = o n AQ OH 1-20

OH O AA, o . o À Ns Ho ) 7 SW e H o Ao, N N o. = do Hi Asi or 1-21

OH O MAR ; ss —o, . o . ss Ho ) — W : o

PN Z %& NX N O. = o H Í oo 1-22 feraro) —O Ã >, oh AD" — SN — E o HO % Y N o. = o! H o CAÇA OH 1-23

OH Q o ô >, o os to > = Ss o

SO eo, N N o. = o 4 ol OH 1-24

OH O o ô >. o Rs mol > >, Ss eo, NS N o = Teo H o. jodos 1-25

OH O o ô 2, o Ns to > “ SE o 8 o NR N o. = do 4) Mojo 1-26

OH O MAR - o —Oo õ N >, o Ns mo > 2 S =: np? N O. = dO H o OMe ol 1-27

OH O o, e ôÃs mol >" > Ss sn? =, q N o. = o * A OH ot 1-28

OH O mA o, A sol» "O Ss % NY N o = do Ao ot 1-29

OH O

MARA o, 5 ANN mol > SW cn? L & X N o. = o ns og ot 1-30

OH O o, er os mo " SW : H o z & NR N o. = oO no Ho hor 1-31

OH O —-o o O a > "O, Ss PP : n? Ho No) Y N fe) = o nl oi ot 1-32

OH O MAR ; ss —Oo o q ss ro >" 7 SS : o 8 O, NR N O. = o H OS oo 1-33

OH O MA ; o —o. o O Ws mol >" 7 NW SH o =, N N O. ==

HO H o O OH 1-34

OH O MAR ) ss —o. Ô s Ho a SW e H o 1 O, Ni N O. = dO H o o oH 1-35

OH O MARA ss —o . o [ox ns nom ) 7 RW : nº o, N N O. = o H Ao or 1-36

OH O MAR - o o. | o As Hom ) —" W : n?

Z O NX N O. == Ho H

O OA OH 1-37

OH O MA : ss o, o ôhs n? 2 O, NE N O. TE HO' H o NT 1-38 oH O MAR ó o Oo ê ' . o x w mol > — Ss : H o N o. = o H AI NHz 1-39

OH O —o, o . ss to >" "2 SW o 8 N o = do n. Loo 1-40

OH O Oo õ >. o os mo >" sn SE H o Z & N N o. = ho nl Ho OH Hot oH oH 1-41

OH O —o, Ô >. o O ss a mo > —" SW sn? =, SN N fo) = Ho H O O. Ho OH HO" OH fa 1-42

OH O e, PR EM o o & ss mol > 2 Ss in? N o. = fo nd Hot OH por sOH oH 1-43

OH O —o o O o to >" 2 S SH o eo, N N fo) = ho nr Hot oH Ho oH cÊÉ vor 1-44

OH O Oo ô >, o À Ns " ro > > SW Do f H O, N N o. = o H LI o 1-45

OH O o ô >, O. ss Px o ” Ho —" SR Oo

SH : % NR N o. = o Ho Lost or

O 1-46

OH O

DO Ã >, O. ss LO o D Ho : SW

DO

SH z & N N o. = o H o O. Hot OH no OH

CÊ NH 1-47

OH O —o ô À o [NNE ol DN c Oo

SH I & NW N o. —/ OH o H NAN dA OH o 1-48

OH O Pr PP - ES —o õ ", o À Ns mo > Sd so NR z o N oH N O. = Do Ho H o O O.

E o A or à i Son 1-49

OH O Oo ô A o [ox o ol INS, : Oo

SH jz O. N

P OH N O. = S o H o

O o,

VN o oH

HO 1-50

OH O nu, DS : ES Oo õ >, o A o as mol» a SW sc Oo

SH j % N =N N o. = JO Ho H o Oo O. É o, o AN, )

N 1-51

OH O o. o À Ns ro) ÃO s oH

CCE DA N O. = IO H “A

O DS O,

NS q ONOoH O, Nou 1-52

OH O o, o & Ne rol >" A, Ss : n? o NS T Oo

OH CE, HO' H o ' < O, Now 1-53

OH O Oo ô , o À Ne mol > 7 SR oH 2 Oo

SH P 1 =O, N d N o. = Sf o H o . <

AN ON oH 1-54 oH O E.) õ

2. o à Ns mol >: o SS FS nº? o SN N fe) = Ho H º QN OH 1-55

OH O MR s o o ô& s no" A, Ss Z n? EO, N N o. = o Ho

NOSSAS 1-56

OH O HO" 7 SW sn? eo, N N O. = IO Hi O. Ho" OH Homo! oH 1-57

OH O Oo ô À o Ô mol >" “2 SS Oo

SH j &% NX N O. = Ho H O O. “ oH Ho

OH HOT >y oH 1-58

OH O Oo ô >. o À Ns AD — RW rr : 1? HO % Y N o. = à IO" H ê. a

N 1-59

OH O Oo ô >” o à = A " SW Oo rr s H HO % Y N o. = o H

ÊNO

N 1-60

OH O AR . - —Oo õ >, o Ô. o A) 7 SW cs Oo - DP o

HO T O Y N O. = HO Hi O Ô. he | 1-61

OH O Oo. o [NES AI, S PP É 1? HO % Y N O. = ho H Ns [NA | 1-62

OH O o. o NR. ro "A, S I n? Z & X N fo) = do HÁ,

À OH Ho Ho oH 'oH 1-63

OH O o, õ , o As ro, S o, NS N o = Ho nº” o sf o o e 1-64

OH O o ô >, o A Ns ol > o Ss : 1? o NY N o = ho H O 2 SS

SP

HO 1-65

OH O HoN o o ANS NAO o SE

DN % NR N o. = ho: Hº o í

OH 1-66

OH O —o ô HoN o ”. o à No o a NR o

SH Z & N N o. = Ho H Oo À í

OH 1-67

OH O

MARA o. o O o SW PP : HS? HO fr % Y N o. = do HÁ

DO

N 1-68

OH O o, o ô& ss o Y W - sn HO &% Y N O. = HO' H o O. 1-69

OH O MAR ; ss —Oo Õ A o [ o o RW : Oo ” : H HO Y % Y N O. == HO' Hi O 2 Oo

NE F

F 1-70 OoH O 7 * FS —o Õ , o x ss

O RW PP sn? HO % Y N O. == Ho H O 2 Oo Ns

F

É 1-71

OH O

MAR NS Ho o, ô. “ o. " o A o NAO" | SN : 1? & Ni N O. = f. IO H ô o %

OH 1-72

OH O Ho MARA A, 1 ONA o —o o & " A Ad o > SS Do

SH o N N o = o H

O À o 4

OH 1-73

OH O Oo ô > o À Ne o SR

DO - 4 HO % Y N o = Ho Hi o Ô. Ne

N 1-74

OH OQ Po) ê À o À o Ss 2 DO ” Sa HO % Y N o. = o H O | o

AN | 1-75

OH O HON —o o e o o —— DS : o “AH O, N N O. =

HO H

O W í

OH 1-76

OH O —Oo ô A o A o fe) SW : n? HO % N N O. = dO H & o ts

F

E 77

OH O Ho No —o o O ss o %

SA ss NR N Oo. = Fo H

AR o

S

OH 1-78

OH O ARANA, Oo Ô » o À Ns o o SR

PP SH HO 7 Y N fo) = o Hi o x o

AR F

FE 1-79

OH O —o. o À Ne o Y Ss PP : nn? HO fr Y N o. = o H x o

E F

FE 1-80

OH O —o. o x ss o o Ss

PP SH Ho 7% Y N o. = o H

A o

ANO

H 1-81

OH O ” s AR o —Oo õ >, o À RN.

O RW : Oo ” À HO T % Y N O. = HO' Hi O |

O .S FDF

F 1-82 oH O MA ; ss —O Õ À o x "

O RW rr sn? HO io Y N O. == ho H O q x 2

FF 1-83

OH O —o o x ss o W PP : H o Ho % Y N. O. == HO" Hz o q o se ?

E

É 1-84

OH O o ô >, o O ss o NR Esso)

PP E HO 1% Y N fe) = o H O qn o 2 ?

F

É 1-85

OH O mA A —o o A * o SS PP Ea o HO % Y N o. = do H x o Do

F

É 1-86

OH O o, elas o SS rr : n? HO % Y N o. = fo H x o

E F

FÉ 1-87

OH O MA . ss —Oo õ f. o x E

O Y RW S Oo

PP SH HO T % Y N O. == HO' H O q

O 3º

FIDF

F 1-88

OH O ” s —Oo Õ >. o O Ro o RW : Oo = q —o 7 Y N O. == HO Hz O “q o Ta 1-89

OH O MAR ss —Oo ô . Or o O e o > RW : Oo ” À —Oo Y & NX N O. =

HO H O qn o Ta 1-90

OH O MAR - ss —Oo Õ . o O ss

HO RW : Oo

SH

Z O NX N O. =

O H O qn

O SO ? F

F 1-91

OH O MAR o —o õ a Or o O e o > DS : Oo = Sd —o 7 Y N O. =

HO H O n Oo Te 1-92

OH O MAR . ss —Oo õ . Ã o O o am sol)", S : o

SH TO, N N O. == o Hz O “ Oo

S

OH 1-93

OH O P s —Oo õ ». o O o mol > " SS : o Sb Z & NX N O. ==

O H O “ Oo %

OH 1-94

OH O —o o O a “ mo)", S : 1?

O NX N O. = DO H õ eo

S oH 1-95

OH O MAR y ss o. o A ss no > —/ SS : nº O, NX N O. = do Es Oo * oH 1-96

OH O —o ô Ú o Ox No au mol > "a SW 2 o

SH 2 =, N N o. = o H O “ o %

OH 1-97 oH O o, o . ss rol >: , SS cs nº 2º NY N o. = o H %“ o %

OH 1-98

OH OQ MARAA, o, o Ns A) "O, Ss PP SH o no Nro) Y N o = fio H “ o 4

OH 1-99 oH O o, ô ss

DO Ho SW se H o o N N o = ho H o W fo o Oo e 1-100

OH O Pr. PP Y ES —o. o Ox o PR nr SW es H o 2, Ni N o. = fo nr terre en e

CN 1-101

OH O —O, Ô s À . o AN. Ho O, SW EH o o N N o. = o H “ o SãO

S oH 1-102

OH O MAR - o DO ô >. o ló ks a" mol) — Ss Ss OH 9 =, q N O. ==

HO H

O X 1-103 oH O MAR ; ss o, o NS o W É 1? HO r Y N O. TE dO H “ o Tr 1-104 oH O o. o À RN o RW PP SH 9 HO % Y N O. E fo H “ o Ta 1-105

OH O o ô " o Õ& ss mm ro IA, S So Sd N o = Ho H O x zo

HO PL OH 1-106 oH O MAR y o. o. o À Ns mo >: Ar Ss 2% NX N o. = à O" H ô do $ Ro) o 1-107

OH O mA o, els mol >" P SS : np? o, NS N o. = o HÁ do

EA

GQ o 1-108

OH O MARA ss —o, o [o ss PP ES o HO % Y N O. = à O H “ o 4

OH 1-109

OH O —-o o A Ro A)" “ SS PP : n? HO % Y N o. = do H “ o “

OH 1-110

OH O MAR o Oo ô >. o [o ss mo > — NR sn? & NX N o. = do H. Po

E çC O o) 1111

OH O —o. o À Ns mol >: ., SW sn? = NY N o. = o HÁ Po 8 Cc O o 1-112 oH O —o, ô N Ds Ho 2 SS : H o % NX N o. = o H

À

OH 1-113 oH O o, o [o so PP SH ? HO % Y N o. = à O H “ o 4

OH 1-114

OH O —O õ », o d+ as eÁ IN S : o

PP SH HO T % Y N O. ==

O H O “ o “

OH 1-115 OoH O o. o À No a" A IA, NS PP : pn? HO % Y N O. = à O H ê ó Sí

OH 1-116 oH O o o à A) "O, Ss PP : 1? Ho % Y N o. = o H & Sí

OH 117

OH O —Oo, ô . o d o INS Cc Oo

SH : % NX N o = Ho H O Ox fo o ow 1-118

OH O —o, o [o ss ro DA, S ds H o % q N fe) = do Hi “ o T2 1-119 oH O —o, ô > o O ss mo > "O S dd H o Zz O W N o. = o H O “ o Ta 1-120

OH O MAR A - o —Oo Õ ». o [o o a mo > —- SW ses H o =, N N O. ==

HO H O “ Oo Ta 1-121 oH O —o, o dA " a o IA, NS s nn? =, N N O. = do H “ Oo ú

OH 1-122

OH O MA - ss —o. o [x o " IA, S rr : n? HO o Y N o. =

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[00163] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto estabelecido na Tabela 1, acima, ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo. Será apreciado que a presente invenção também fornece um composto estabelecido na Tabela 1, acima, como uma mistura racêmica na posição C7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Além disso, será apreciado que os compostos estabelecidos na Tabela 1, acima, como misturas racêmicas na posi- ção C7 hidroxila podem ser separados em diastereômeros por vários métodos, por exemplo, cromatografia quiral.

4. Usos, Formulação e Administração Composições farmaceuticamente aceitáveis

[00164] De acordo com outra modalidade, a invenção fornece uma composição que compreende um composto desta invenção ou um de- rivado farmaceuticamente aceitável do mesmo e um portador, adjuvan- te ou veículo farmaceuticamente aceitável. A quantidade de composto em composições desta invenção é tal que é eficaz para mensuravelmen- te inibir MTORC1, em uma amostra biológica ou em um paciente. Em certas modalidades, a quantidade de composto em composições desta invenção é tal que é eficaz para mensuravelmente inibir MTORC1, em uma amostra biológica ou in um paciente. Em certas modalidades, uma composição desta invenção é formulada para administração a um paciente em necessidade de tal composição. Em algumas modalida- des, uma composição desta invenção é formulada para administração oral a um paciente.

[00165] O termo “paciente,” como usado aqui, significa um animal, preferivelmente um mamífero e mais preferivelmente um humano.

[00166] O termo “portador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a um portador atóxico, adjuvante, ou veículo que não destrói a atividade farmacológica do composto com o qual é for- mulado. Portadores, adjuvantes ou veículos farmaceuticamente acei- táveis que podem ser usados nas composições desta invenção inclu-

em, porém não estão limitados a, permutadores de íons, alumina, es- tearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, tais como albumina de soro humano, substâncias tampão como fosfatos, glicina , ácido sórbi- co, sorbato de potássio, misturas de glicerídeos parciais de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, hidrogênio fosfato dissódico, hidrogênio fosfato de po- tássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinilpirrolidona, substâncias à base de celulose, polieti- lenoglicol, carboximetilcelulose sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloco de polietileno-polioxipropileno, polietilenoglicol e gordura de lã.

[00167] As composições da presente invenção podem ser adminis- tradas, oralmente, parenteralmente, por spray de inalação, topicamen- te, retalmente, naalmente, bucalmente, vaginalmente ou por meio de um reservatório implantado. O termo "parenteral" como usado aqui in- clui injeção subcutânea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, in- tra-sinovial, intraesternal, intratecal, intra-hepática, intralesional e intra- craniana ou técnicas de infusão. Preferivelmente, as composições são oralmente administradas, intraperitoneal ou intravenosamente. As for- mas injetáveis estéreis das composições desta invenção podem ser uma suspensão aquosa ou oleaginosa. Estas suspensões podem ser formuladas de acordo com técnicas conhecidas na técnica usando agentes dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão ade- quados. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução injetável estéril ou suspensão em um diluente ou solvente não tóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3- butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução isotônica de clo- reto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como solvente ou meio de suspensão.

[00168] Para este propósito, qualquer óleo fixo suave pode ser em- pregado, incluindo monoglicerídeos sintéticos ou diglicerídeos. Os áci- dos graxos, tais como o ácido oleico e seus derivados glicerídeos, são úteis na preparação de injetáveis, como são os óleos naturais farma- ceuticamente aceitáveis, tais como o azeite de oliva ou óleo de mamo- na, principalmente em suas versões polioxietiladas. Essas soluções ou suspensões de óleo também podem conter um diluente ou dispersante de álcool de cadeia longa, tal como carboximetilcelulose ou agentes dispersantes similares que são comumente usados na formulação de formas farmacêuticas farmaceuticamente aceitáveis, incluindo emul- sões e suspensões. Outros tensoativos comumente usados, tais como Tweens, Spans e outros agentes emulsificantes ou potencializadores de biodisponibilidade que são comumente usados na fabricação de sólidos, líquidos ou outras formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis também podem ser usados para os propósitos da formula- ção.

[00169] Composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem ser oralmente administradas em qualquer forma de dosagem oralmente aceitável incluindo, porém não limitada à, cápsulas, com- primidos, suspensões ou soluções aquosas. No caso de comprimidos para uso oral, os veículos comumente usados incluem lactose e amido de milho. Agentes lubrificantes, tal como o estearato de magnésio, também são normalmente adicionados. Para administração oral na forma de cápsula, os diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando suspensões aquosas são requeridas para uso oral, o ingrediente ativo é combinado com emulsificantes e agentes de sus- pensão. Se desejado, certos adoçantes, aromatizantes ou agentes de coloração também podem ser adicionados.

[00170] Alternativamente, composições farmaceuticamente aceitá- veis desta invenção podem ser administradas na forma de supositórios para administração retal. Estes podem ser preparados misturando o agente com um excipiente não irritante adequado que é sólido em temperatura ambiente, mas líquido em temperatura retal e, portanto, derreterá no reto para liberar o medicamento. Tais materiais incluem manteiga de cacau, cera de abelha e polietileno glicóis.

[00171] “Composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem também ser administradas topicamente, especialmente quando o alvo de tratamento inclui áreas ou órgãos facilmente acessíveis por aplicação tópica, incluindo doenças do olho, da pele ou do trato intes- tinal inferior. As formulações tópicas adequadas são prontamente pre- paradas para cada uma dessas áreas ou órgãos.

[00172] A aplicação tópica para o trato intestinal inferior pode ser realizada em uma formulação de supositório retal (veja acima) ou em uma formulação de enema adequada. Emplastros topicamente trans- dérmicos também podem ser usados.

[00173] Para aplicações tópicas, composições farmaceuticamente aceitáveis fornecidas podem ser formuladas em uma pomada adequa- da contendo o componente ativo suspenso ou dissolvido em um ou mais veículos. Os veículos para administração tópica de compostos desta invenção incluem, porém não estão limitados a, óleo mineral, vaselina líquida, vaselina branca, propilenoglicol, polioxietileno, com- posto de polioxipropileno, cera emulsificante e água. Alternativamente, composições farmaceuticamente aceitáveis fornecidas podem ser for- muladas em uma loção ou creme adequado contendo os componentes ativos suspensos ou dissolvidos em um ou mais veículos farmaceuti- camente aceitáveis. Os veículos adequados incluem, porém não estão limitados a, óleo mineral, monoestearato de sorbitano, polissorbato 60, cera de ésteres cetílicos, álcool cetearílico, 2 octildodecanol, álcool benzílico e água.

[00174] Para uso oftálmico, composições farmaceuticamente acei-

táveis fornecidas, podem ser formuladas como suspensões microniza- das em solução salina estéril isotônica, pH ajustado, ou, preferivelmen- te, como soluções em solução salina isotônica, pH estéril ajustado, se- ja com ou sem um conservante, tal como o cloreto de benzilalcônio. Alternativamente, para usos oftálmicos, as composições farmaceuti- camente aceitáveis podem ser formuladas em uma pomada, tal como o petrolato.

[00175] “Composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem também ser administradas por aerossol nasal ou inalação. Tais composições são preparadas de acordo com técnicas bem conhecidas na técnica de formulação farmacêutica e podem ser preparadas como soluções em solução salina, empregando álcool benzílico ou outros conservantes adequados, promotores de absorção para aumentar a biodisponibilidade, fluorocarbonetos e/ou outros agentes solubilizantes ou dispersantes convencionais.

[00176] Mais preferivelmente, composições farmaceuticamente acei- táveis desta invenção são formuladas para administração oral. Tais formulações podem ser administradas com ou sem comida. Em algu- mas modalidades, composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção são administradas sem comida. Em outras modalidades, composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção são admi- nistradas com comida.

[00177] A quantidade dos compostos da presente invenção que po- de ser combinada com os materiais portadores para produzir uma composição em uma forma de dosagem única irá variar dependendo do hospedeiro tratado, do modo particular de administração. De prefe- rência, as composições fornecidas devem ser formuladas de modo que uma dosagem entre 0,01 - 100 mg / kg de peso corporal/dia do inibidor possa ser administrada a um paciente recebendo estas com- posições.

[00178] Deve também ser entendido que uma dosagem e regime de tratamento específicos para qualquer paciente em particular depende- rá de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto es- pecífico empregado, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combinação de fármacos e o julgamento do médico assistente e a gravidade da doença específica a ser tratada. A quantidade de um composto da presente invenção na composição também dependerá do composto particular na composi- ção. Usos de Compostos e Composições Farmaceuticamente Aceitá- veis

[00179] Como usado aqui, os termos “tratamento,” “tratar,” e “trata- mento” referem-se à reversão, alívio, retardo do início de, ou inibição do progresso de uma doença ou distúrbio, ou um ou mais sintomas dos mesmos, como descrito aqui. Em algumas modalidades, o trata- mento pode ser administrado após um ou mais sintomas se desenvol- verem. Em outras modalidades, o tratamento pode ser administrado na ausência de sintomas. Por exemplo, o tratamento pode ser adminis- trado a um indivíduo suscetível antes do início dos sintomas (por exemplo, à luz de uma história de sintomas e/ou à luz de fatores gené- ticos ou outros de suscetibilidade). O tratamento pode também ser continuado após a resolução dos sintomas, por exemplo para prevenir ou retardar a sua recorrência.

[00180] Os compostos fornecidos são inibidores de MTORC1 e são, portanto, úteis no tratamento de um ou mais distúrbios associados à atividade de mMTORC1. Desse modo, em certas modalidades, a pre- sente invenção fornece um método para o tratamento de um distúrbio mediado por MTORC1 compreendendo a etapa de administrar a um paciente em necessidade do mesmo um composto da presente inven- ção, ou composição farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00181] “Como usado aqui, os termos distúrbios, doenças e/ou con- dições "mediadas por MTORC1" como usado aqui significa qualquer doença ou outra condição nociva, na qual MTORC1, é conhecido de- sempenhar um papel. Consequentemente, outra modalidade da pre- sente invenção refere-se ao tratamento ou redução da gravidade de uma ou mais doenças, nas quais MTORC1 é conhecido desempenhar um papel. Em certas modalidades, um distúrbio, doença e/ou condição mediada por mMTORC1 é selecionado dentre aqueles descritos por Matt Kaeberlin, Scientifica, vol. 2013, Artigo ID 849186.

[00182] Os métodos descritos aqui incluem métodos para o trata- mento de câncer em um indivíduo. Como usado aqui, “tratar” significa mitigar ou melhorar pelo menos um sintoma ou parâmetro clínico do câncer. Por exemplo, um tratamento pode resultar na redução do ta- manho do tumor ou da taxa de crescimento. Um tratamento não ne- cessita curar o câncer ou causar remissão 100% das vezes, em todos os indivíduos.

[00183] Como usado aqui, o termo “câncer” refere-se às células com capacidade de crescimento autônomo, isto é, um estado ou con- dição anormal caracterizada por crescimento celular de proliferação rápida. O termo é destinado a incluir todos os tipos de crescimentos cancerígenos ou processos oncogênicos, tecidos metastáticos ou célu- las transformadas de forma maligna, tecidos ou órgãos, independen- temente do tipo histopatológico ou estágio de invasão. O termo “tumor” como usado aqui refere-se às células cancerosas, por exemplo, uma massa de células cancerosas.

[00184] Cânceres que podem ser tratados ou diagnósticos usando os métodos descritos aqui incluem doenças malignas de vários siste- mas de órgãos, tais como afetando pulmão, mama, tireoide, trato lin- foide, gastrointestinal e genitourinário, bem como adenocarcinomas que incluem doenças malignas, tal como a maioria do cólon cânceres,

carcinoma de células renais, câncer da próstata e/ou tumores testicu- lares, carcinoma de células não pequenas do pulmão, câncer do intes- tino delgado e câncer esofágico.

[00185] Em algumas modalidades, os métodos descritos aqui são usados para tratar ou diagnosticar um carcinoma em um indivíduo. O termo “carcinoma” é reconhecido na técnica e refere-se às malignida- des de tecidos epiteliais ou endócrinos, incluindo carcinomas do sis- tema respiratório, carcinomas do sistema gastrointestinal, carcinomas do sistema geniturinário, carcinomas testiculares, carcinomas de ma- ma, carcinomas prostáticos, carcinomas do sistema endócrino e mela- nomas. Em algumas modalidades, o câncer é carcinoma renal ou me- lanoma. Carcinomas exemplares incluem aqueles que se formam a partir de tecido do colo do útero, pulmão, próstata, mama, cabeça e pescoço, cólon e ovário. O termo também inclui carcinossarcomas, por exemplo, que incluem tumores malignos compostos por tecidos carci- nomatosos e sarcomatosos. Um “adenocarcinoma” refere-se a um carcinoma derivado de tecido glandular ou no qual as células tumorais formam estruturas glandulares reconhecíveis.

[00186] O termo “sarcoma” é reconhecido na técnica e refere-se aos tumores malignos de derivação mesenquimal.

[00187] Em algumas modalidades, os cânceres que são tratados pelos métodos descritos aqui são cânceres que têm níveis aumenta- dos de mMTORC1 ou uma expressão ou atividade aumentada de mMTORC1 em relação aos tecidos normais ou a outros cânceres dos mesmos tecidos; métodos conhecidos na técnica e descritos aqui po- dem ser usados para identificar tais cânceres. Em algumas modalida- des, os métodos incluem a obtenção de uma amostra compreendendo células do câncer, determinando a atividade de MTORC1 na amostra e administrando um tratamento como descrito aqui (por exemplo, um inibidor de MTORC1 fornecido). Em algumas modalidades, o câncer é aquele que é mostrado aqui como tendo níveis aumentados de ativi- dade de mMTORC1.

[00188] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para tratar um ou mais distúrbios, doenças e/ou condições em que o distúrbio, doença ou condição inclui, porém não está limitado a, um distúrbio proliferativo celular. Doenças Proliferativas Celulares

[00189] A presente invenção apresenta métodos e composições para o diagnóstico e prognóstico de distúrbios proliferativos celulares (por exemplo, câncer) e o tratamento destes distúrbios pela inibição da atividade de MTORC1. Os distúrbios proliferativos celulares descritos aqui incluem, por exemplo, câncer, obesidade e doenças dependentes de proliferação. Tais distúrbios podem ser diagnosticados usando mé- todos conhecidos na técnica. Câncer

[00190] Os cânceres incluem, sem limitação, leucemias (por exem- plo, leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia monocítica aguda, leuce- mia mielocítica aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia mielocítica crônica, leucemia mielocítica crônica, leucemia linfocítica crônica), po- licitemia vera, linfoma (por exemplo, doença de Hodgkin ou doença não Hodgkin), macroglobulinemia de Waldenstrom, mieloma múltiplo, doença de cadeia pesada e tumores sólidos, tais como sarcomas e carcinomas (por exemplo, fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarco- ma, condrossarcoma, sarcoma osteogênico, cordoma, angiossarcoma, endoteliossarcoma, linfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomi- ossarcoma, carcinoma de cólon, câncer pancreático, câncer de mama, câncer ovariano, câncer de próstata, carcinoma da célula escamosa,

carcinoma da célula basal, adenocarcinoma, carcinoma das glândulas sudoríparas, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, ade- nocarcinoma papilar, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carci- noma broncogênico, carcinoma de células renais, hepatoma, carcino- ma do ducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionário, tumor de Wilm, câncer cervical, câncer uterino, câncer testicular, car- cinoma pulmonar, carcinoma pulonar de células pequenas, carcinoma da bexiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neu- roma acústico, oligodendroglioma, schwannoma, meningioma, mela- noma e retobinobinoma). Em algumas modalidades, o câncer é mela- noma ou câncer de mama. Doenças Fibróticas

[00191] Fibrose pulmonar idiopática (IPF). A via de PISK é ativada em focos fibróticos, as lesões cardinais na FPI. O inibidor da cinase mMTOR GSK2126458 reduz a sinalização da via de PISK e as respos- tas funcionais em fibroblastos pulmonares derivados de IPF e a inibi- ção de mMTOR reduz a expressão de colágeno em modelos de pacien- tes com FPI. No modelo de bleomicina de fibrose pulmonar, o trata- mento com rapamicina é antifibrótico, e a rapamicina também diminui a expressão de actina de músculo a-liso e fibronectina pelos fibroblas- tos in vitro.

[00192] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar a fibrose pulmonar idiopática (IPF) (veja, Mercer, PF et al., Thorax., 71 (8): 701-11 (2016); Patel, AS, et al, PLoS One, 7 (7): e41394 (2012)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de fibrose pulmonar idiopática (FPI), em um paciente que precisa fazer o mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00193] Fibose Renal. MTORC1 é ativado em miofibroblastos, um dos principais tipos de células patogênicas na fibrose renal. A inibição de mTOR com rapamicina em modelo murino de fibrose renal (UUO), atenuou a expressão de marcadores de fibrose e dano tubulointerstici- al.

[00194] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a fibrose renal (veja, Jiang, L., et al., J Am Soc Nephrol, 24(7): 1114-26 (2013); Wu, MJ et a/l., Kidney International, 69(11): 2029-36 (2006); Chen, G. et al., PLoS One, 7 (3): e33626 (2012); Liu, CF et al., Clin Invest Med, 37 (34): E142-53 (2014)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da fibrose renal, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de ad- ministrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.

[00195] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a esclerodermia (veja, Mitra, A., et al., J Invest Dermatol. 135(11): 2873-6 (2015)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da esclerodermia, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00196] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar a cicatriz hipertrófica e a doença queloi- de (veja, Syed, F., et al., Am J Pathol. 181 (5): 1642-58 (2012)). Con- sequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção forne- ce um método de tratamento da cicatrização hipertrófica e da doença queloide, em um paciente em necessidade do mesmo, compreenden- do a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00197] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a fibrose cardíaca (veja, Yano, T., et al., J Mol Cell Cardiol. 91: 6-9(2016)). Consequentemente, em al- gumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tra- tamento da fibrose cardíaca, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Outras Doenças Proliferativas

[00198] Outras doenças proliferativas incluem, por exemplo, obesi- dade, hiperplasia prostática benigna, psoríase, queratinização anormal, distúrbios linfoproliferativos (por exemplo, um distúrbio em que há prolife- ração anormal de células do sistema linfático), artrite reumatoide crônica, arteriosclerose, restenose e retinopatia diabética. As doenças proliferati- vas que são aqui incorporadas por referência incluem aquelas descritas nas Patentes norte americanas nºs 5.639.600 e 7.087.648. Outros Distúrbios

[00199] Outros distúrbios incluem doenças de armazenamento |i- sossomal, incluindo, porém não limitado à, doença de Pompe, doença de Gaucher, mucopolissacaridose, deficiência de sulfatase múltipla; doenças neurodegenerativas, tais como doença de Parkinson, doença de Alzheimer, doença de Huntington, deficiência de alfa1-antitripsina e atrofia muscular bulbar espinhal.

[00200] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar asma (veja, Hua, W., et al., Respi- rology, 20(7): 1055-65 (2015)). Consequentemente, em algumas mo- dalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da asma, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00201] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar uma doença de armazenamento lisos- somal (veja, Sardiello, M., Annals of the New York Academy of Scien- ces, 1371(1): 3-14 (2016); Awad, O., et al., Hum Mol Genet. 24 (20): 5775-88 (2015); Spampanato, C., et al., EMBO Mol Med,., 5 (5): 691- 706(2013); Medina, DL, et a/., Dev Cell., 21(3): 421-30(2011)). Conse- quentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma doença de armazenamento lisos- somal, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00202] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar doença de Parkinson (veja, De- cressac, M., et al., Proc Natl Acad Sci US A., 110(19): E1817-26 (2013)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da doença de Parkinson, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal far- maceuticamente aceitável do mesmo.

[00203] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar a doença de Alzheimer (veja, Polito, V.A., et al., EMBO Mol Med. 6(9): 1142-60(2014)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da doença de Alzheimer, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido pacien- te um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00204] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de mMTORC1 é usado para tratar a doença de Huntington (veja, Tsunemi, T., et al., Sci Transl Med., 4(142): 142ra97 (2012)). Conse- quentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da doença de Huntington, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00205] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a deficiência de alfa-1-antitripsina (veja, Pastore, N. et al., EMBO Mol Med,, 5 (3): 397-412 (2013)). Con- sequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção forne- ce um método de tratamento da deficiência de alfai-antitripsina, em um paciente com necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo.

[00206] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de mMTORC1 é usado para tratar a atrofia muscular bulbar espinhal (veja, Cortes, C.J., et al., Nat Neurosci., 17 (9): 1180-9 (2014)). Con- sequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção forne- ce um método de tratamento da atrofia muscular bulbar espinhal, em um paciente que necessita do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo.

[00207] Em algumas modalidades, um composto da presente in- venção liga-se a FKBP12 para formar um complexo. Em algumas mo- dalidades, o complexo entre um composto da presente invenção e FKBP12 interage com o domínio de ligação FK506-rapamicina de mTOR.

[00208] Em algumas modalidades, um composto da presente in- venção liga-se a FKBP12 e interfere na interação proteína-proteína entre FRAP e FKBP12. Em algumas modalidades, o grupo R' de um composto da presente invenção interage com FRAP e FKBP12.

[00209] A presente invenção fornece compostos que são inibidores da atividade de mMTORC1 e foram mostrados inibir seletivamente mMTORC1 sobre mMTORC2 como medido pela inibição de pS6K (uma medida da atividade de MTORC1) e ativação de pAKT (uma medida da atividade de MTORC2). Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 seletivamente mais do que mMTORC2. Em algumas modalidades, um composto fornecido não inibe mensuravel- mente mMTORC2. Em algumas modalidades, um composto fornecido tem um ICso de ativação de pAKT de >10 UM. Em algumas modalida- des, um composto fornecido inibe MTORC1 com seletividade 10 vezes superior a MTORC2. Em algumas modalidades, um composto forneci- do inibe MTORC1 com seletividade 20 vezes superior ao mMTORC?2. Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 com seletividade 50 vezes maior que MTORC2. Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 com seletividade 100 vezes superior ao MTORC2. Em algumas modalidades, um composto forne- cido inibe MTORC1 com seletividade 150 vezes superior ao MTORC?2. Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 com seletividade 200 vezes maior que mMTORC2. Em algumas modalida- des, um composto fornecido inibe MTORC1 com seletividade 500 ve- zes maior que MTORC2. Em algumas modalidades, um composto for- necido inibe MTORC1 com seletividade de 1.000 vezes em relação ao mMTORC?2.

[00210] Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe mMTORC1 seletivamente mais do que MTORC?2 após o tratamento crô- nico ou exposição. Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 seletivamente mais do que MTORC?2 após cerca de 24 horas de tratamento ou exposição. Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe mMTORC1 seletivamente mais do que mMTORC? após cerca de 36 horas de tratamento ou exposição. Em al- gumas modalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 seletiva-

mente mais do que MTORC?2 após cerca de 48 horas de tratamento ou exposição. Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe mMTORC1 seletivamente mais do que mMTORC?2 após cerca de 72 ho- ras de tratamento ou exposição. Em algumas modalidades, um com- posto fornecido inibe MTORC1 seletivamente mais do que mMTORC2 após cerca de 96 horas de tratamento ou exposição. Em algumas mo- dalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 seletivamente mais do que MTORC?2 após cerca de 120 horas de tratamento ou exposi- ção. Em algumas modalidades, um composto fornecido inibe MTORC1 seletivamente mais do que MTORC?2 após cerca de 144 horas de tra- tamento ou exposição. Em algumas modalidades, um composto forne- cido inibe MTORC1 seletivamente mais do que MTORC2 após cerca de uma semana de tratamento ou exposição. Em algumas modalida- des, um composto fornecido inibe mMTORC1 seletivamente mais do que mTORC?2 após mais de cerca de uma semana de tratamento ou exposição.

[00211] Em algumas modalidades, um composto fornecido é menos imunossupressor do que os rapálogos existentes. Em algumas moda- lidades, um composto fornecido é menos imunossupressor do que a rapamicina. Em algumas modalidades, um composto fornecido é me- nos imunossupressor do que o everolimo. Em algumas modalidades, um composto fornecido é menos imunossupressor do que o tensiroli- mo. Em algumas modalidades, um composto fornecido é menos imu- nossupressor do que o ridaforolimo. Em algumas modalidades, um composto fornecido é menos imunossupressor do que umirolimo.

[00212] Em algumas modalidades, um composto fornecido suprime a produção de interferon gama (IFN-y) menos do que rapálogos. Em algumas modalidades, um composto fornecido suprime menos a pro- dução de IFN-y do que a rapamicina. Em algumas modalidades, um composto fornecido suprime menos a produção de IFN-y do que o everolimo. Em algumas modalidades, um composto fornecido suprime a produção de IFN-y menor do que o tensirolimo. Em algumas modali- dades, um composto fornecido suprime a produção de IFN-y menor do que ridaforolimo. Em algumas modalidades, um composto fornecido suprime a produção de IFN-y menor do que umirolimo.

[00213] Em algumas modalidades, um composto fornecido diminui a expressão de biomarcadores de fibrose em tecidos danificados. Em algumas modalidades, um composto fornecido diminui a expressão do colágeno | (COL1A2) no tecido que foi danificado. Em algumas moda- lidades, um composto fornecido diminui a expressão do colágeno III (COL3A1) no tecido que foi danificado. Em algumas modalidades, um composto fornecido diminui a expressão de fibronectina (FN1) no teci- do que foi danificado.

[00214] Em algumas modalidades, um composto fornecido diminui a propensão das células imunológicas de se infiltrarem no tecido dani- ficado. Em algumas modalidades, um composto fornecido diminui a propensão das células macrófagos de se infiltrarem no tecido danifica- do.

[00215] Em algumas modalidades, um composto fornecido induz menos tolerância à glicose do que rapálogos. Em algumas modalida- des, um composto fornecido induz menor tolerância à glicose do que a rapamicina. Em algumas modalidades, um composto fornecido induz menos tolerância à glicose do que o everolimo. Em algumas modali- dades, um composto fornecido induz menos tolerância à glicose do que o tensirolimo. Em algumas modalidades, um composto fornecido induz menos tolerância à glicose do que o ridaforolimo. Em algumas modalidades, um composto fornecido induz menos tolerância à glicose do que umirolimo. Em algumas modalidades, um composto fornecido não induz tolerância à glicose significativamente mais do que um pla- cebo ou veículo sozinho.

[00216] Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de um distúrbio associado a mMTORC1, compreendendo a administração ao paciente de um com- posto que inibe mMTORC1, em que o referido composto não inibe mMTORC?2. Estes compostos podem ser empregados para indicações em que a rapamiíicina e rapálogos demonstraram um benefício em mo- delos animais ou em um cenário de doença humana. Estas indicações incluem:

[00217] Tratamento de doenças metabólicas (obesidade e resistên- cia à insulina em Diabetes Tipo 2). A inibição da via de MTORC1 leva ao prolongamento da expectativa de vida em leveduras, mosca e ca- mundongo, e a restrição calórica melhora a longevidade e a sensibili- dade à insulina. O mecanismo subjacente foi proposto para funcionar pela regulação da ativação de MTORC1. Foi demonstrado que a resis- tência à insulina induzida por rapamicina é mediada pela inibição de mMTORC? e o inibidor seletivo de MTORC1 pode melhorar a sensibili- dade à insulina e a homeostase da glicose.

[00218] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar doenças metabólicas (obesidade e resistência à insulina em diabetes tipo 2) (veja, Yu, Z., et al., J Geron- tol A Biol Sci Med Sci, 70(4), 410-20 (2015); Fok, WC, et al., Aging Cell 13 (2): 311-9 (2014); Shum, M,, et a/., Diabetologia, 59 (3): 592-603 (2016); Lamming, DW, et a/., Science 335 (6076): 1638-43 (2012)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de doenças metabólicas (obesidade e resistência à insulina no diabetes tipo 2), em um paciente em neces- sidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável faça o mesmo.

[00219] Neurofibromatose. Neurofibromatose tipo 1 (NF1) é causa-

da por mutações no gene NF1. Seu produto proteico, a neurofibromi- na, funciona como supressor de tumor e, por sua vez, produz a suprar- regulação constitutiva de MTOR. Foi demonstrado que os inibidores de mMTOR reduzem o tamanho do tumor e induzem ao efeito antiprolifera- tivo no neurofibroma plexiforme associado a NF1.

[00220] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de mMTORC1 é usado para tratar a neurofibromatose (veja, Franz, DN, et al., Curr Neurol Neurosci Rep., 12 (3): 294-301 (2012); Varin, J., et al., Oncotarget., 7: 35753-67 (2016)). Consequentemente, em algu- mas modalidades, a presente invenção fornece um método de trata- mento da neurofibromatose, em um paciente que precisa do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um com- posto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00221] —Cardiomiopatia e distrofia muscular esquelética, modelo de distrofia muscular de Emery-Dreifuss (LMNA“”). Mutações em LMNA resultam em várias doenças humanas, incluindo distrofia muscular de cintura escapular (LGMD1B), distrofia muscular Emery-Dreifuss (EDMD?2/3), cardiomiopatia dilatada (DCM) e doença do sistema de condução (CMD1A), lipodistrofia, Charcot-Marie-Tooth e síndrome de de Hutchinson-Gilford progeria (HGPS). Camundongos Lmna” têm atividade de MTORC1 elevada e o tratamento de curto prazo com ra- pamicina em camundongos Lmna” resulta em sinalização de mMTORC1 reduzida, função muscular cardíaca e esquelética melhorada e sobrevivência aumentada em — 50%.

[00222] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar cardiomiopatia e distrofia muscular es- quelética (veja, Ramos, F., et al., Sci Trans! Med., 4 (144): 144ra103 (2012); Bonne, G. & Quijano-Roy, S., Handb Clin Neurol., 113: 1367- 76 (2013)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de cardiomiopatia e distro-

fia muscular esquelética, em um paciente com necessidade do mes- mo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00223] Síndrome de Leigh. Camundongos de nocaute (KO) Ndufs4 são usados como modelo da síndrome de Leigh e apresentam hipera- tivação de MTORC1 e defeitos metabólicos. O tratamento de camun- dongos Ndufs4 KO com rapamicina prolonga a vida útil, melhora o de- feito metabólico e neurológico associado a esta doença.

[00224] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de mMTORC1 é usado para tratar a síndrome de Leigh (veja, John- son, S.C., et al., Science, 342(6165): 1524-8(2013)). Consequente- mente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um mé- todo de tratamento da síndrome de Leigh, em um paciente em neces- sidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal do mesmo farmaceuticamente aceitável.

[00225] Oncologia. A inibição de MTOR com rapálogos demonstrou ter atividade antitumoral em modelos de câncer de murino e em paci- entes com câncer. Exemplos de tipos de câncer sensíveis incluem, porém não estão limitados ao, carcinoma hepatocelular, câncer de mama, linfomas de células do manto, carcinoma de pulmão, esclerose tuberosa e linfangioleiomiomatose.

[00226] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar câncer e distúrbios oncológicos (veja, llagan, E. & manning, B.D., Trends Cancer, 2(5): 241-51(2016)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de câncer e distúrbios oncológicos, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal far- maceuticamente aceitável do mesmo.

[00227] —Esteato-hepatite não alcoólica (NASH). A presente inven- ção fornece inibidores que induzem a autofagia para limpar proteínas citoplasmáticas degradadas e doença NASH é caracterizada por de- pósitos de lipídios, inflamação e fibrose no fígado. A inibição da via de mMTORC1 induz à autofagia e desregula SREBP-1 para diminuir a bi- ossíntese de lipídios para reduzir o armazenamento de lipídios.

[00228] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar a esteato-hepatite não alcoólica (NASH) (veja, Puri, P. & Chandra, A., J Clin Exp Hepatol, 4(1): 51-9 (2014)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da esteato-hepatite não alcoólica (NASH), em um paciente com necessidade do mesmo, compreenden- do a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00229] Esclerose tuberosa (TSC) e linfangioleiomiomatose (LAM). A falha na regulação de mTOR é crítica para a patogênese do comple- xo de distúrbio herdado, esclerose tuberosa (TSC) e doença pulmonar relacionada, linfangioleiomiomatose (LAM). Ambas as doenças são causadas por mutações de TSC1 ou TSC2 levando àa atividade ina- dequada de sinalização a jusante de MTORC1. Pacientes com TSC desenvolvem tumores não malignos em muitos órgãos, incluindo o cé- rebro, enquanto pacientes com LAM, principalmente mulheres, acumu- lam células anormais similares a músculos em certos órgãos ou teci- dos, especialmente os pulmões, nódulos linfáticos e rins. Os rapálo- gos, everolimo e sirolimo, são atualmente aprovados para o tratamento de TSC e LAM, respectivamente, pelo FDA dos EUA.

[00230] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar esclerose tuberosa e linfangiolei- omiomatose (veja, Wander, SA, et al., J. Clin. Invest., 121(4): 123141 (2011); Taveira-DaSilva, AM & Moss, J., J. Clin Epidemiol., 7:249-

57(2015)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de esclerose tuberosa e linfangioleiomiomatose, em um paciente com necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administração ao referido paciente de um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00231] Senescência e doenças do envelhecimento. A rapamicina suprime o complexo de TORC1 de mamífero, que regula a tradução, e prolonga a vida útil em diversas espécies, incluindo ratos. A rapamici- na mostrou inibir o fenótipo pró-inflamatório das células senescentes. À medida que as células senescentes se acumulam com a idade, o fenótipo secretor associado à senescência (SASP) pode romper teci- dos e contribuir para patologias relacionadas à idade, incluindo câncer. A inibição de MTOR suprimiu a secreção de citocinas inflamatórias pe- las células senescentes. A rapamicina reduziu os níveis de citocinas incluindo IL6 e suprimiu a tradução da citocina IL1A ligada à membra- na. ILI1A reduzido diminui a atividade transcricional de NF-KB, que con- trola o SASP. Desse modo, os inibidores de MTORC1 podem melhorar patologias relacionadas com a idade, incluindo câncer em idade avan- çada, suprimindo a inflamação associada à senescência.

[00232] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a senescência e doenças do enve- lhecimento (veja, Laberge, RM, et a/., Nature Cell Biology, 17 (8): 1049-61 (2015); Nacarelli, T., et al., Free Radic Biol Med., 95: 133-54 (2016)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da senescência e das do- enças do envelhecimento, em um paciente em necessidade do mes- mo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00233] Nefropatia diabética e complicações relacionadas aos rins de diabetes tipo 1 e diabetes tipo 2. A nefropatia diabética é uma com-

plicação renal do diabetes tipo 1 e 2, afetando cerca de 40% das pes- soas com diabetes. Altos níveis de glicose forçam os rins a trabalhar excessivamente para filtrar o sangue, resultando em danos aos rins. Estudos sugerem que a via de MTOR é altamente ativada em pacien- tes com neuropatia diabética e pode desempenhar um papel nas alte- rações patológicas e na disfunção renal devido à glicose crônica ele- vada. Além disso, a inibição de MTOR pode atenuar a hiperinsuline- mia.

[00234] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a nefropatia diabética ou compli- cações relacionadas aos rins do diabetes tipo 1 e diabetes tipo 2 (veja, Mori, H., et al., Biochem. Res. Commun. 384(4): 471-5(2009)). Conse- quentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da nefropatia diabética ou complicações re- nais da diabetes tipo 1 e diabetes tipo 2 em um paciente com necessi- dade do mesmo, compreendendo a etapa de administração ao referido paciente de um composto fornecido ou farmaceuticamente sal aceitá- vel do mesmo.

[00235] Doença renal policística. A doença renal policística (PKD) é caracterizada pelo desenvolvimento e acúmulo de cistos renais destru- tivos que eventualmente resultam em insuficiência renal. PKD pode ser autossômica dominante (ADPKD) ou recessiva (ARPKD). A via de sinalização de mMTOR disfuncional foi observada em ADPKD e AR- PKD. Desse modo, a normalização da via de MTORC1 pode melhorar o desenvolvimento de cistos e a progressão da doença.

[00236] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar PKD (veja, Torres, VE, et a/., Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 5(7): 1312-29(2010)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tra- tamento de PKD em um paciente que precisa do mesmo, compreen-

dendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto forne- cido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas mo- dalidades, PKD é autossômico dominar. Em algumas modalidades, PKD é autossômico recessivo.

[00237] —Glomeruloesclerose segmentar focal (GESF) e outras do- enças associadas à esclerose renal. GESF é o distúrbio glomerular primário mais comum que causa doença renal em estágio terminal (ESRD) nos Estados Unidos. À medida que a doença progride, ocorre uma incompatibilidade de células podocitárias na cápsula de Bowman e a área de superfície da membrana basal glomerular que elas cobrem. Estudos demonstraram que o controle do tamanho dos podócitos é regu- lado por MTOR e que a ativação de MTOR contribui para a progressão da doença. Além disso, a ativação constitutiva de MTORC1 demons- trou causar lesões similares à FSGS em experimentos de knockdown em camundongos. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode melhorar (GESF) ou outras doenças associadas à esclerose renal, normalizan- do ou aumentando a atividade autofágica.

[00238] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar GESF ou outras doenças associa- das à esclerose renal (veja, Zschiedrich, S. et al., J. Am. Soc. Nephrol. 28(7): 2144-57(2017)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da GESF ou outras doenças associadas à esclerose renal em um paciente com ne- cessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao refe- rido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitá- vel do mesmo.

[00239] —“Degeneração macular relacionada à idade. A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma das principais causas de cegueira caracterizada pela morte de fotorreceptores na mácula. Os possíveis mecanismos de progressão da DMRI incluem estresse oxi-

dativo levando a depósitos de proteínas e organelas disfuncionais, le- vando à hipertrofia do epitélio pigmentar da retina, desdiferenciação e eventual atrofia. MTOR está implicado na desdiferenciação do epitélio pigmentar da retina. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode melho- rar a DMRI ao bloquear a hipertrofia e a desdiferenciação.

[00240] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar a degeneração macular relacionada à idade (veja, Kolosova, NG, et al., Am. J. Path. 18 (2):472-7 (2012) e Zhen, C. & Vollrath, D., Aging 3(4):346-47 (2011)). Consequentemen- te, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da degeneração macular relacionada à idade em um paciente que precisa fazer o mesmo, compreendendo a etapa de ad- ministrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.

[00241] Edema macular diabético. O edema macular diabético (EMD) é uma das principais causas de cegueira em pessoas com dia- betes, afetando aproximadamente 35% das pessoas com diabetes. Estudos sugerem que a patogênese do DME é uma doença inflamató- ria envolvendo várias citocinas e quimiocinas. O estresse oxidativo e inflamatório crônico pode contribuir para a progressão do DME. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode melhorar os sintomas e a progres- são do DME ao diminuir a resposta inflamatória.

[00242] Em algumas modalidades, o método de inibir a atividade de mMTORC1 é usado para tratar DME (veja, Okamoto, T., et al, PLOS ONE, (11)(1): e0146517, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0146517 (2016)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de DME em um paciente que precisa do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao re- ferido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente acei- tável do mesmo.

[00243] Retinopatia diabética. A retinopatia diabética (RD) é uma doença ocular comum, responsável por — 5% da cegueira em adultos e está associada à hiperglicemia crônica e defeitos nas vias de sinaliza- ção da insulina. Os pacientes com DR sofrem lesões persistentes nos vasos sanguíneos da retina e neurônios por inflamação, espécies rea- tivas de oxigênio e estresse no retículo endoplasmático causado por hiperglicemia crônica. Significativamente, a rapamicina demonstrou bloquear a ação do fator-1 indutível por hipóxia induzida por insulina (HIF-1) e senescência de células da retina, e induz à autofagia, e pode ser benéfica na promoção da apoptose dos vasos sanguíneos nascen- tes e na prevenção da angiogênese. Desse modo, a inibição de mMTORC1 pode melhorar os sintomas e a progressão de DR ao diminu- ir a inflamação e inibir as vias de sinalização patogênica.

[00244] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar DR (veja, Di Rosa, M., et al., Curr. Neuropharmacol. 14(8): 810-25 (2016)). Consequentemente, em al- gumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tra- tamento de DR em um paciente que precisa fazer o mesmo, compre- endendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto for- necido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00245] Glaucoma. Glaucoma é uma neuropatia óptica comum as- sociada ao envelhecimento e à elevação da pressão intraocular, e é a principal causa de cegueira irreversível. Estudos sugerem que a des- regulação da autofagocitose dependente de mMTOR pode ser um fator na progressão da doença. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode retardar a progressão ou melhorar o glaucoma normalizando ou au- mentando a autofagia.

[00246] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar o glaucoma (veja, Porter, K., et al., Biochim. Biophys. Acta. 1852 (3):379-85 (2014)). Consequentemente,

em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento do glaucoma em um paciente que precisa do mesmo, com- preendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal do mesmo farmaceuticamente aceitável.

[00247] Restauração da função imunológica. Foi demonstrado que a inibição de MTORC1 reduz a expressão do receptor de morte pro- gramada-1 (PD-1) em linfócitos T CD4* e CD8*, promovendo a sinali- zação de células T. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode restau- rar a função imunológica, melhorando a resposta imune adaptativa.

[00248] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para restaurar a função imunológica (veja, Mannick, J.B., et al., Sci. Trans. Med. 6 (268):ppra179 (2014)). Conse- quentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para restaurar a função imunológica em um paciente que precisa do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00249] Tratamento de infecções respiratórias e/ou urinárias. A ini- bição de MTORC1 pode reduzir as infecções por aumento da expres- são e resposta do gene antiviral. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode aumentar a capacidade do sistema imunológico de um paciente de se defender contra infecções do trato respiratório e/ou urinário.

[00250] Em algumas modalidades, o método de inibição da atividade de mTORC1 é usado para tratar infecções do trato respiratório e/ou uri- nário. (veja, Mannick, J.B., et al., Sci. Trans. Med. 10(449): eaag1564 (2018)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método para restaurar a função imunológica em um paciente que precisa do mesmo, compreendendo a etapa de ad- ministrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.

[00251] Insuficiência cardíaca. A atividade do MTORC1 é essencial para a hipertrofia cardíaca em resposta ao estresse, porém pode levar a distúrbios cardíacos como resultado da remodelação cardíaca após o infarto. A inibição de MTORC1 reduz a remodelação cardíaca e a insuficiência cardíaca em resposta à sobrecarga de pressão. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode diminuir a insuficiência cardíaca em pacientes que sofreram danos ao miocárdio.

[00252] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a insuficiência cardíaca (veja, Sci- arretta, S. et al., Circ. Res. 122 (3): 489-505 (2018)). Consequente- mente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um mé- todo de tratamento da insuficiência cardíaca em um paciente que pre- cisa do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00253] Osteoartrite. A osteoartrite (OA) é uma doença crônico- degenerativa que resulta em perda de cartilagem e inflamação das ar- ticulações. O MTOR pode desempenhar um papel significativo na ho- meostase do colágeno e na renovação e remodelação da cartilagem. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode retardar a progressão ou melhorar os sintomas da osteoartrite ao normalizar a renovação da cartilagem.

[00254] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de mMTORC1 é usado para tratar a osteoartrite (veja, Pal, B., et al., Drugs R&D, 15(1):27-36 (2017))). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da osteoartrite em um paciente que precisa do mesmo, compreenden- do a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00255] Hipertensão arterial pulmonar. A hipertensão arterial pul-

monar (HAP) é uma doença progressiva e fatal associada ao aumento da resistência vascular pulmonar. A proliferação e migração das célu- las do músculo liso arterial pulmonar estão implicadas na progressão do espessamento da parede arterial, exacerbando a vasoconstrição. Desse modo, a inibição de MTORC1 pode aliviar a PAH, reduzindo a remodelação vascular.

[00256] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar HAP (veja, Ma, X., et a/., Interact. Cardiovasc. Thorac. Surg. 25(2): 206-11 (2017)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da HAP é um paciente que precisa do mesmo, compreen- dendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto forne- cido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00257] Doença pulmonar obstrutiva crônica. A redução da autofa- gia resulta no acúmulo de proteínas e outros materiais celulares que aceleram a senescência celular em pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). Desse modo, a inibição de MTORC1 pode retardar a progressão ou melhorar os sintomas da DPOC normalizan- do ou aumentando a autofagia.

[00258] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de MTORC1 é usado para tratar a DPOC (veja, Fujii, S., et al., On- coimmunology 1(5):630-41 (2012)). Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento da DPOC em um paciente que precisa fazer o mesmo, compreenden- do a etapa de administrar ao referido paciente um composto fornecido ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00259] As indicações terapêuticas adicionais em que a inibição de mMTORC pode ser benéfica são: doença cardiovascular (síndrome co- ronariana aguda), oclusões coronárias com eluindo stents, doença re- nal policística e doença renal associada com formação de cisto ou cis-

togênese), neurofibromatose, epilepsia associada. com mutações TSC1 e/ou TSC2, fígado policístico, paquioníquia congênita, síndrome do X frágil, ataxia de Friedrich, síndrome de Peutz-Jeghers, doença ocular incluindo degeneração macular neovascular relacionada à ida- de, uveite, edema macular diabético, crescimento de fibroblastos inclu- indo fibrose pulmonar, insuficiência renal/fibrose, síndrome metabólica, doenças do sistema imunológico incluindo senescência imunológica, nefrite lúpica, trombocitopenia imune crônica, esclerose múltipla, cân- cer incluindo linfoma, tumores associados com mutações TSC1/2, an- giomiolipoma associado com mutações de TSC1/2, câncer de mama, câncer hepatocelular, leucemia, glioma, carcinoma adenoide cístico, senescência, autismo e artrite reumatoide vascular.

[00260] Em algumas modalidades, o método de inibição da ativida- de de mMTORC1 é usado para tratar doenças cardiovasculares (sín- drome coronariana aguda), oclusões coronárias com stents de eluição, doença renal policística, neurofibromatose, epilepsia associada. com mutações de TSC1 e/ou TSC2, fígado policístico, paquioníquia congê- nita, síndrome do X frágil, ataxia de Friedrich, síndrome de Peutz- Jeghers, doença ocular incluindo degeneração macular neovascular relacionada à idade, uveiíte, edema macular diabético, crescimento de fibroblastos incluindo fibrose pulmonar, insuficiência renal/fibrose, sín- drome metabólica, doenças do sistema imunológico incluindo senes- cência imunológica, nefrite lúpica, trombocitopenia imune crônica, es- clerose múltipla, câncer incluindo linfoma, tumores associados com mutações de TSC1/2, angiomiolipoma associado com mutações de TSC1/2, câncer de mama, câncer hepatocelular, leucemia, glioma, carcinoma adenoide cístico, senescência, autismo e artrite reumatoide vascular.

[00261] —“Consequentemente, em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de doenças cardiovascula-

res (síndrome coronariana aguda), oclusões coronárias com stents de eluição, doença renal policística, neurofibromatose, epilepsia associa- da. com mutações TSC1 e/ou TSC2, fígado policístico, paquioníquia congênita, síndrome do x frágil, ataxia de Friedrich, síndrome de Peutz-Jeghers, doença ocular incluindo degeneração macular neovas- cular relacionada à idade, uveiíte, edema macular diabético, cresci- mento de fibroblastos incluindo fibrose pulmonar, insuficiência re- nal/fibrose, síndrome metabólica, doenças do sistema imunológico in- cluindo senescência imunológica, nefrite lúpica, trombocitopenia imune crônica, esclerose múltipla, câncer incluindo linfoma, tumores associa- dos com mutações deTSC1/2, angiomiolipoma associado com muta- ções de TSC1/2, câncer de mama, câncer hepatocelular, leucemia, glioma, carcinoma adenoide cístico, senescência, autismo e artrite reumatoide vascular, em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um com- posto ou farmaceuticamente sal aceitável do mesmo.

[00262] “Composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem ser administradas a humanos e outros animais oralmente, re- talmente, parenteralmente, intracisternalmente, intravaginalmente, in- traperitonealmente, topicamente (tal como em pós, pomadas, ou colí- rios), bucal, tal como um spray oral ou nasal, ou similares, dependen- do da gravidade da infecção a ser tratada. Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser administrados por oral ou parente- ralmente em níveis de dosagem de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 50 mg/kg e preferivelmente de cerca de 1 mg/kg a cerca de 25 mg/kg, do indivíduo peso corporal por dia, uma ou mais vezes ao dia, para obter o efeito terapêutico desejado.

[00263] As formas farmacêuticas líquidas para administração oral incluem, porém não estão limitadas às, emulsões, microemulsões, so- luções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis.

Além dos compostos ativos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comumente usados na técnica, como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsifi- cantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, dimetilformamida, óleos (em particular, óleo de se- mente de algodão, amendoim, milho, gérmen, azeite, mamona e óleos de gergelim), glicerol, álcool tetra-hidrofurfurílico, polietileno glicóis e óleos graxos ésteres ácidos de sorbitano, e misturas dos mesmos. Além dos diluentes inertes, as composições orais também podem in- cluir adjuvantes, tais como agentes umectantes, agentes emulsionan- tes e de suspensão, adoçantes, aromatizantes e agentes perfumantes.

[00264] As preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquo- sas ou oleaginosas injetáveis estéreis podem ser formuladas de acor- do com a técnica conhecida usando agentes dispersantes ou umectan- tes e agentes de suspensão adequados. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução injetável estéril, suspensão ou emulsão em um diluente ou solvente não tóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, tal como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados são água, a solução de Ringer, U.S.P. e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como solven- te ou meio de suspensão. Para tal propósito, qualquer óleo fixo brando pode ser empregado, incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos como o ácido oleico são usados na preparação de injetáveis.

[00265] As formulações injetáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção bacteriana, ou pela incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas ou dispersas em água es-

téril ou outro meio injetável estéril antes do uso.

[00266] Afim de prolongar o efeito de um composto da presente invenção, muitas vezes é desejável retardar a absorção do composto da injeção subcutânea ou intramuscular. Isso pode ser realizado pelo uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com baixa solubilidade em água. A taxa de absorção do composto em se- guida depende de sua taxa de dissolução que, por sua vez, pode de- pender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativamente, a absorção retardada de uma forma composta administrada parenteral- mente é realizada pela dissolução ou suspensão do composto em um veículo de óleo. As formas de depósito injetáveis são feitas pela for- mação de matrizes microencapsuladas do composto em polímeros biodegradáveis, como polilactídeo-poliglicólido. Dependendo da pro- porção do composto para o polímero e da natureza do polímero em- pregado, a taxa de liberação do composto pode ser controlada. Exem- plos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli (ortoésteres) e poli (anidridos). As formulações injetáveis de depósito são também preparadas aprisionando o composto em lipossomas ou microemul- sões que são compatíveis com tecidos corporais.

[00267] As composições para administração retal ou vaginal são preferivelmente supositórios que podem ser preparados misturando os compostos desta invenção com excipientes ou veículos não irritantes adequados, tais como manteiga de cacau, polietileno glicol ou uma cera de supositório que são sólidos em temperatura ambiente, porém líquidos em temperatura corporal e, portanto, derrete no reto ou cavi- dade vaginal e libera o composto ativo.

[00268] As formas de dosagem sólidas para administração oral in- cluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto ativo é misturado com pelo menos um excipiente ou carreador inerte farmaceuticamente aceitável, como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou a) enchimentos ou extenso- res, tais como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido silí- cico, b) ligantes, como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarose e acácia, c) umectantes, como glicerol, d) agentes desintegrantes, tais como ágar, carbonato de cál- cio, batata ou amido de tapioca, ácido algínico, certos silicatos e car- bonato de sódio, e) agentes retardadores de solução, como parafina, f) aceleradores de absorção, como compostos de amônio quaternário, g) agentes umectantes, tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoes- tearato de glicerol, h) absorventes, tais como caulino e argila de ben- tonita e i) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, lauril sulfato de sódio e mistu- ras do mesmo. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma farmacêutica também pode conter agentes de tamponamento.

[00269] “Composições sólidas de um tipo similar também podem ser empregadas como enchimentos em cápsulas de gelatina mole e dura usando excipientes, tais como lactose ou açúcar do leite, bem como polietilenoglicóis de alto peso molecular e similares. As formas de do- sagem sólida de comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e conchas, tais como reves- timentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Eles podem conter opcionalmente agen- tes opacificantes e podem também ser de uma composição que libe- ram o(s) ingrediente(s) ativo(s) apenas, ou preferencialmente, em uma determinada parte do trato intestinal, opcionalmente, de forma retarda- da. Exemplos de composições de incorporação que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. Composições sólidas de tipo similar também podem ser empregadas como enchimentos em cápsu- las de gelatina mole e dura usando excipientes como lactose ou açú- car do leite, bem como polietilenoglicóis de alto peso molecular e simi-

lares.

[00270] Os compostos ativos também podem estar na forma micro- encapsulada com um ou mais excipientes, como mencionado acima. As formas de dosagem sólida de comprimidos, drágeas, cápsulas, pí- lulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e conchas, tais como revestimentos entéricos, revestimentos de controle de libe- ração e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formula- ção farmacêutica. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto ati- vo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte, tal como sacarose, lactose ou amido. Estas formas de dosagem também podem compreender, como é prática normal, substâncias adicionais além dos diluentes inertes, por exemplo, lubrificantes para comprimidos e outros auxiliares para comprimidos, tais como estearato de magnésio e celu- lose microcristalina. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas farmacêuticas também podem conter agentes de tamponamen- to. Eles podem conter opcionalmente agentes opacificantes e podem também ser de uma composição que liberam o(s) ingrediente(s) ati- vo(s) apenas, ou preferencialmente, em uma determinada parte do tra- to intestinal, opcionalmente, de forma retardada. Exemplos de compo- sições de incorporação que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras.

[00271] As formas de dosagem para administração tópica ou trans- dérmica de um composto desta invenção incluem pomadas, pastas, cremes, loções, géis, pós, soluções, sprays, inalantes ou adesivos. O componente ativo é misturado sob condições estéreis com um veículo farmaceuticamente aceitável e quaisquer conservantes ou tampões necessários, quando necessário. Formulação oftálmica, gotas otológi- cas e colírios são também contemplados no escopo desta invenção. Além disso, a presente invenção contempla o uso de adesivos trans- dérmicos, que têm a vantagem de fornecer liberação controlada de um composto para o corpo. Estas formas farmacêuticas podem ser feitas dissolvendo ou dispensando o composto no meio adequado. Os real- çadores de absorção também podem ser usados para aumentar o flu- xo do composto através da pele. A taxa pode ser controlada fornecen- do uma membrana controladora da taxa ou dispersando o composto em uma matriz de polímero ou gel.

[00272] O termo “amostra biológica”, como usado aqui, inclui, sem limitação, culturas de células ou extratos das mesmas; material biopsi- ado obtido de mamífero ou extratos do mesmo; e sangue, saliva, urina, fezes, sêmen, lágrimas, ou outros fluidos corporais ou extratos dos mesmos.

[00273] Em outras modalidades, a presente invenção fornece um método para o tratamento de um distúrbio mediado por MTORC1 em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa de administrar ao referido paciente um composto de acordo com a pre- sente invenção ou composição farmaceuticamente aceitável do mes- mo. Tais distúrbios são descritos em detalhes aqui.

[00274] “Dependendo da condição particular, ou doença, a ser trata- da, agentes terapêuticos adicionais que são normalmente administra- dos para tratar tal condição, podem também estar presentes nas com- posições desta invenção. Como usado aqui, os agentes terapêuticos adicionais que são normalmente administrados para tratar uma parti- cular doença, ou condição, são conhecidos como “apropriados para a doença, ou condição, sendo tratada.”

[00275] Um composto da invenção invenção pode também ser usa- do para aproveitar em combinação com outros compostos antiprolife- rativos. Tais compostos antiproliferativos incluem, porém não estão limitados aos, inibidores de aromatase; antiestrogênios; inibidores da topoisomerase |; inibidores da topoisomerase Il; compostos ativos de microtúbulos; compostos de alquilação; inibidores da histona desaceti-

lase; compostos que induzem aos processos de diferenciação celular; inibidores da ciclo-oxigenase; Inibidores de MMP; inibidores de mTOR; antimetabólitos antineoplásicos; compostos de platina; compostos que têm como alvo, diminuem a atividade de uma proteína ou cinase lipídi- ca e outros compostos ant-angiogênicos; compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de uma proteína ou fosfatase lipídica; agonistas de gonadorelina; antiandrogênios; inibidores da me- tionina aminopeptidase; inibidores de metaloproteinase de matriz; bis- fosfonatos; modificadores de resposta biológica; anticorpos antiprolifera- tivos; inibidores da heparanase; inibidores de isoformas oncogênicas Ras; inibidores da telomerase; inibidores de proteassoma; compostos usados no tratamento de doenças malignas hematológicas; compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de Flt-3; Inibidores de Hsp90, tais como 17-AAG (17-alilaminogeldanamicina, NSC330507), 17-DMAG (17-dimetilaminoetilamino-17-demetóxi-geldanamicina, NSC707545), IPI-504, CNF1010, CNF2024, CNF1010 da Conforma Therapeutics; temozolomida (TemodalO); inibidores da proteína do fu- so da cinesina, tais como SB715992 ou SB743921 da GlaxoSmithKli- ne, ou pentamidina/clorpromazina da CombinatoRx; inibidores de MEK, tais como ARRY 142886 de Array BioPharma, AZD6244 da As- trazeneca, PD181461 da Pfizer e leucovorina.

O termo "inibidor de aromatase" como usado aqui refere-se a um composto que inibe a produção de estrogênio, por exemplo, a conversão dos substratos an- drostenediona e testosterona em estrona e estradiol, respectivamente.

O termo inclui, porém não está limitado aos esteroides, especialmente atamestano, exemestano e formestano e, em particular, não esteroi- des, especialmente aminoglutetimida, rogletimida, piridoglutetimida, trilostano, testolactona, cetoconazol, vorozol, fadrozol, anastrozol e letrozol.

Exemestano é comercializado sob o nome comercial Aroma- sin'""., Formestano é comercializado sob o nome comercial Lentaron'“.

Fadrozol é comercializado sob o nome comercial Afema'Y. Anastrozol é comercializado sob o nome comercial Arimidex'Y. Letrozol é comer- cializado sob os nomes comerciais Femara!"Y ou Femar'"“., Aminoglu- tetimida é comercializada sob o nome comercial Orimeten'". Uma combinação da invenção que compreende um agente quimioterapêuti- co que é um inibidor de aromatase é particularmente útil para o trata- mento de tumores positivos de receptor de hormônio, tais como tumo- res de mama.

[00276] O termo "antiestrogênio" como usado aqui refere-se a um composto que antagoniza o efeito dos estrogênios no nível do receptor de estrogênio. O termo inclui, porém não está limitado a, tamoxifeno, fulvestrante, raloxifeno e cloridrato de raloxifeno. Tamoxifeno é comer- cializado sob o nome comercial Nolvadex'Y. Cloridrato de raloxifeno é comercializado sob o nome comercial Evista'"". Fulvestrant pode ser administrado com o nome comercial Faslodex'"". Uma combinação da invenção compreendendo um agente quimioterápico que é um anties- trogênio é particularmente útil para o tratamento de tumores positivos para receptor de estrogênio, tal como tumores de mama.

[00277] O termo "antiandrogênio" como usado aqui refere-se a qualquer substância que é capaz de inibir os efeitos biológicos dos hormônios androgênicos e inclui, porém não está limitado à, bicaluta- mida (Casodex'“). O termo "agonista de gonadorelina" como usado aqui inclui, porém não está limitado a, abarelix, goserelina e acetato de goserelina. Goserelina pode ser administrada com o nome comercial Zoladex“,

[00278] O termo "inibidor da topoisomerase |" como usado aqui in- clui, porém não está limitado a, topotecano, gimatecano, irinotecano, camptotecano e seus análogos, 9-nitrocamptotecina e o conjugado macromolecular camptotecina PNU-166148. O irinotecano pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca registrada Camptosar"". Topotecan é comer- cializado sob o nome comercial Hycamptin'"Y.

[00279] O termo "inibidor da topoisomerase Il" como usado aqui in- clui, porém não está limitado às, antraciclinas, tais como a doxorrubici- na (incluindo formulação lipossomal, tal como Caelyx'Y), daunorrubici- na, epirrubicina, idarrubicina e suborrubicina, as antraquinonas mito- xantrona e losoxantrona e as podofilotoxinas etoposídeo e teniposí- deo. Etoposídeo é comercializado sob o nome comercial Etopophos'Y. Teniposídeo é comercializado sob o nome comercial VM 26-Bristol Doxorrubicina é comercializada sob o nome comercial Acriblastin'y ou Adriamycin'Y. Epirubicina é comercializada sob o nome comercial Farmorubicin'Y, Idarubicina é comercializada sob o nome comercial Zavedos'Y. Mitoxantrona é comercializada sob o nome comercial No- vantron.

[00280] O termo "agente ativo de microtúbulo" refere-se aos com- postos estabilizadores de microtúbulos, desestabilizadores de microtú- bulos e inibidores de polimerização de microtublina incluindo, porém não limitado a taxanos, tais como paclitaxel e docetaxel; alcaloides de vinca, tais como vinblastina ou sulfato de vinblastina, sulfato de vincris- tina ou vincristina e vinorelbina; discodermolidos; cochicina e epotilo- nas e derivados dos mesmos. Paclitaxel é comercializado sob o nome comercial Taxol'Y. Docetaxel é comercializado sob o nome comercial Taxotere'", Sulfato de vinblastina é comercializado sob o nome co- mercial Vinblastin R.PTY. Sulfato de vincristina é comercializado sob o nome comercial FarmistinTY.

[00281] O termo "agente de alquilação" como usado aqui inclui, po- rém não está limitado a, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan ou nitros- soureia (BCNU ou Gliadel). Ciclofosfamida é comercializada sob o nome comercial Ciclostin'Y. Ifosfamida é comercializada sob o nome comercial Holoxan'"“.

[00282] O termo "inibidores da histona desacetilase" ou "inibidores de HDAC" refere-se aos compostos que inibem a histona desacetilase e que possuem atividade antiproliferativa. Isto inclui, porém não está limitado a, ácido suberoilanilida hidroxâmico (SAHA).

[00283] O termo "antimetabólito antineoplásico" inclui, porém não está limitado à, 5-fluorouracil ou 5-FU, capecitabina, gencitabina, Compostos desmetiladores de DNA, tal como 5-azacitidina e decitabi- na, metotrexato e edatrexato, e antagonistas do ácido fólico, tal como pemetrexed. Capecitabina é comercializada sob o nome comercial Xe- loda'". Gencitabina é comercializada sob o nome comercial Gemzar'"“,

[00284] O termo "composto de platina" como usado aqui inclui, po- rém não está limitado a, carboplatina, cis-platina, cisplatina e oxalipla- tina. Carboplatina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob o nome commercial Carbo- plat'v“. Oxaliplatina pode ser administrada, por exemplo, na forma co- mo ela é comercializada,, por exemplo, sob o nome comercial Eloxati- na'“,

[00285] O termo "compostos que têm como alvo/diminuem uma ati- vidade de proteína ou cinase lipídica; ou uma proteína ou atividade da fosfatase lipídica; ou outros compostos antiangiogênicos" como usado aqui inclui, porém não está limitado à, proteína tirosina cinase e/ou ini- bidores de serina e/ou treonina cinase ou inibidores de cinase lipídica, tais como a) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem uma atividade dos receptores de fator de crescimento derivados de plaque- tas (PDGFR), tais como compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de PDGFR, compostos especialmente que inibem o receptor de PDGF, tal como um derivado de N-fenil-2-pirimidina- amina, tais como imatinibe, SU101, SU6668 e GFB-111; b) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade dos receptores do fator de crescimento dos fibroblastos (FGFR); c) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade do receptor | do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-IR), tais como compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de IGF-IR, especial- mente compostos que inibem uma atividade de cinase de receptor IGF-lI, ou anticorpos que têm como alvo o domínio extracelular de IGF- | receptor ou seus fatores de crescimento; d) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade da família da tirosina cinase de receptor de Trk, ou inibidores da efrina B4; e) compostos que têm co- mo alvo, diminuem ou inibem a atividade da família da tirosina cinase de receptor de Axl; f) compostos que têm como alvo, diminuem ou ini- bem a atividade da tirosina cinase de receptor de Ret; g) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade da tirosina cinase de receptor de Kit/SCFR, tal como o imatinibe; h) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade das tirosina cinases de re- ceptor de C-kit, que fazem parte da família PDGFR, tais como com- postos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade da família tirosina cinase de receptor de c-Kit, especialmente compostos que ini- bem o receptor de c-Kit receptor, tal como imatinibd; i) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de membros da família c-Abl, seus produtos de genofusão (por exemplo, BCR-AbI cinase) e mutantes, tais como compostos que têm como alvo, diminuem ou ini- bem a atividade de membros da família c-Abl e seus produtos de fusão gênica, tal como um derivado de N-fenil-2-pirimidina-amina, tal como imatinibe ou nilotinibe (AMN107); PD180970; AG957; NSC 680410; PD173955 de ParkeDavis; ou dasatinibe (BMS-354825); j|) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade dos membros da proteína cinase C (PKC) e família Raf de serina/treonina cinases, membros da família MEK, SRC, JAK/pan-JAK, FAK, PDK1, PKB/AKt, Ras/MAPK, PI3K, SYK, TYK2, BTK e TEC, e/ou membros da família cinase dependente de ciclina (CDK), incluindo derivados de estauros- porina, tal como midostaurina; exemplos outros compostos incluem UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Briostatina 1, Perifosina; Ilmofosina; RO 318220 e RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; compostos de isoquinolina; FTIs; PD184352 ou QAN697 (um inibidor de P13K) ou AT7519 (inibidores de CDK); k) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de inibidores de proteína tirosina cinase, tais como compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de inibidores de proteína tirosina cinase incluem mesilato de imatinibe (Gleevec'“Y) ou tirfostina tal tirfostina A23/RG-50810; AG 99; Tirfostina AG 213; Tirfostina AG 1748; Tirfostina AG 490; Tirfostina B44; enantiômero de Tirfostina B44 (+); Tirfostina AG 555; AG 494; Tirfostina AG 556, AG957 e adamantil éster de ácido (4-f[(2,5- di- hidroxifenil)|]MmetilJamino)-benzoico de adafostina; NSC 680410, adafos- tina); |) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade da família de fator de crescimento epidérmico de tirosina cinases re- ceptoras (EGFR; ErbB2, ErbB3, ErbB4 as homo- ou heterodimers) e seus mutantes, tais como compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade da família de receptor de crescimento epidérmico são especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem membros da família de tirosina cinase de receptor de EGF, tais como receptor de EGF, ErbB2, ErbB3 e ErbB4 ou ligam-se a EGF ou ligan- tes relacionados a EGF, CP 358774, ZD 1839, ZM 105180; trastuzu- mabe (HerceptinTY), cetuximabe (ErbituxTY), Iressa, Tarceva, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6,3 ou E7,6,3, e derivados de 7H-pirrolo-[2,3-d]pirimidina; m) com- postos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade do recep- tor de c-Met, tais como compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de c-Met, especialmente compostos que inibem a atividade de cinase de c-Met receptor, ou antibodies that target the ex-

tracellular domain of c-Met ou bind to HGF, n) compostos que têm co- mo alvo, diminuem ou inibem a atividade de cinase de one ou more JAK family members (JAK1I/JAK2/JAK3/TYK2 e/ou pan-JAK), incluin- do, porém não limitado a PRT-062070, SB-1578, baricitinibe, pacritini- be, momelotinibe, VX-509, AZD-1480, TG-101348, tofacitinibe, e ruxo- litinibe; 0) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a ativi- dade de cinase de PI3 cinase (PI3SK) incluindo, porém não limitado a ATU-027, SF-1126, DS-7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, buparlisibe, pictrelisibe, PF-4691502, BYL-719, dactolisibe, XL-147, XL-765, e idelalisibe; e; e q) compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem os efeitos de sinalização de proteína hedgehog (Hh) ou vias do receptor suavizado (SMO), incluindo, porém não limitado à ci- clopamina, vismodegibe, itraconazol, erismodegibe e IPI-926 (saride- gibe).

[00286] O termo “inibidor de PISK" como usado aqui inclui, porém não está limitado aos compostos que têm atividade inibitória contra uma ou mais enzimas na família fosfatidilinositol-3-cinase, incluindo, porém não limitado a PlI3Ka, PI3Ky, PISKô, PISKB, PISK-C20a, PISK- C26B, PISK-C2y, Vps34, p110-a, p110-B, p110-y, p110-5, p85-a, p85-B, p55-y, p150, p101, e p8ê7. Exemplos de inibidores de PI3K úteis nesta invenção incluem, porém não estão limitados a ATU-027, SF-1126, DS-7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, buparlisibe, pictrelisi- be, PF-4691502, BYL-719, dactolisibe, XL-147, XL-765, e idelalisibe.

[00287] O termo “inibidor de Bcl-2" como usado aqui inclui, porém não está limitado aos compostos que têm atividade inibitória contra proteína de linfoma de célula B 2 (Bcl-2), incluindo porém não limitado a ABT-199, ABT-731, ABT-737, apogossipol, inibidores de pan-Bcl-2 de Ascenta, curcumina (e análogos da mesma), inibidores duais Bcl-2/Bcl- xL (Infinity Pharmaceuticals/Novartis Pharmaceuticals), Genasense (G3139), HA14-1 (e análogos do mesmo; veja, WO 2008/118802), na-

vitoclax (e análogos do mesmo, veja, Patente norte america nº 7,390,799), NH-1 (Shenayng Pharmaceutical University), obatoclax (e análogos do mesmo, veja, WO 2004/106328), S-001 (Gloria Pharma- ceuticals), compostos de série TW (Univ. of Michigan), e venetoclax. Em algumas modalidades, o inibidor de Bcl-2 é uma pequena molécula terapêutica. Em algumas modalidades, o inibidor de Bcl-2 é um pepti- domimético.

[00288] O termo “inibidor de BTK” como usado aqui inclui, porém não está limitado aos compostos que têm atividade inibitória contra Tirosina Cinase de Bruton (BTK), incluindo, porém não limitado a AVL- 292 e ibrutinibe.

[00289] O termo “inibidor de SYK" como usado aqui inclui, porém não está limitado a compostos que têm atividade inibitória contra spleen tyrosine cinase (SYK), incluindo porém não limitado a PRT- 062070, R-343, R-333, Excellair, PRT-062607, e fostamatinib.

[00290] Outros exemplos de compostos inibitórios de BTK, e condi- ções tratáveis por tais compostos em combinação com compostos desta invenção podem ser encontrados no WO 2008/039218 e WO 2011/090760, a totalidade dos quais é incorporada aqui por referência.

[00291] Outros exemplos de compostos inibitórios de SYK, e condi- ções tratáveis por tais compostos em combinação com compostos desta invenção podem ser encontrados no WO 2003/063794, WO 2005/007623, e WO 2006/078846, a totalidade dos quais é incorpora- da aqui por referência.

[00292] Outros exemplos de compostos inibitórios de PISK, e condi- ções tratáveis por tais compostos em combinação com compostos desta invenção podem ser encontrados no WO 2004/019973, WO 2004/ 089925, WO 2007/016176, Patente norte americana nº 8.138.347, WO 2002/088112, WO 2007/084786, WO 2007/129161, WO 2006/122806, WO 2005/113554, e WO 2007/044729 as totalidades dos quais são incorporadas aqui por referência.

[00293] Outros exemplos de compostos inibitórios de JAK, e condi- ções tratáveis por tais compostos em combinação com compostos desta invenção podem ser encontrados em WO 2009/114512, WO 2008/ 109943, WO 2007/053452, WO 2000/142246, e WO 2007/070514, a totalidade dos quais é incorporada aqui por referência.

[00294] Outros compostos antiangiogênicos incluem compostos tendo outro mecanismo para sua atividade, por exemplo, não relacio- nado à inibição de proteína ou cinase lipídica, por exemplo, talidomida (ThalomidTY) e TNP-470.

[00295] “Exemplos de inibidores proteassoma úteis para uso em combinação com compostos da invenção incluem, porém não estão limitados a bortezomibe, disulfiram, epigalocatecin-3-galato (EGCG), salinosporamida A, carfilzomibe, ONX-0912, CEP-18770, e MLN9708.

[00296] “Compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a ati- vidade de uma proteína ou fosfatase lipídica são, por exemplo, inibido- res de fosfatase 1, fosfatase 2A, ou CDC25, tal ácido ocadaico ou um derivado do mesmo.

[00297] “Compostos which induce cell differentiation processes in- cluem, porém não estão limitados a, retinoic acid, a- y- ou d- tocophe- rol ou a- y- ou ó-tocotrienol.

[00298] O termo “inibidor de ciclo-oxigenase” como usado aqui in- clui, porém não está limitado a, inibidores de Cox-2, ácido 2-arilamino- fenilacético substituído por 5-alquila e derivados, tais como celecoxibe (Celebrex'Y), rofecoxibe (Vioxx"Y), etoricoxibe, valdecoxibe ou um ácido 5-alquil-2-arilaminofenilacético, tal como ácido 5-metil-2-(2'-cloro- 6'-fluoroanilino)fenil acético, lumiracoxibe.

[00299] O termo "bisphosphonates" como usado aqui inclui, porém não está limitado a, etridonic, clodronic, tiludronic, pamidronic, alen- dronic, ibandronic, risedronic e zoledronic acid. Ácido etridrônico é co-

mercializado sob o nome comercial DidronelY. Ácido clodrônico é co- mercializado sob o nome comercial Bonefos'Y. Ácido tiludrônico é co- mercializado sob o nome comercial Skelid?Y. Ácido pamidrônico é co- mercializado sob o nome comercial Aredia"Y. Ácido alendrônico é co- mercializado sob o nome comercial Fosamax'Y. Ácido ibandrônico é comercializado sob o nome comercial Bondranat'Y. Ácido risedrônico é comercializado sob o nome comercial Actonel"Y. Ácido zoledrônico é comercializado sob o nome comercial Zometa'"“. O termo "inibidores de mTOR" refere-se aos compostos que inibem o mamífero alvo de rapamicina (mMTOR) e que possuem atividade antiproliferativa, tais co- mo sirolimo (Rapamune6O), everolimo (Certican'TY), CCI-779 e ABT578.

[00300] O termo "inibidor de heparanase" como usado aqui refere- se aos compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a degrada- ção de sulfato de heparina. O termo inclui, porém não está limitado a, PI-88. O termo "modificador de resposta biológica" como usado aqui refere-se a uma linfocina ou interferons.

[00301] O termo "inibidor de isoformas oncogênicas de Ras", tais como H-Ras, K-Ras, ou N-Ras, como usado aqui refere-se aos com- postos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de Ras; por exemplo, um "inibidor de farnesil transferase" tal como L-744832, DK8G557 ou R115777 (Zarnestra'Y). O termo "inibidor de telomerase" como usado aqui refere-se aos compostos que têm como alvo, dimi- nuem ou inibem a atividade de telomerase. Compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de telomerase são especialmen- te compostos que inibem o receptor de telomerase, tal como telomes- tatina.

[00302] O termo "inibidor da metionina aminopeptidase" como usa- do aqui refere-se aos compostos que têm como alvo, diminuem ou ini- bem a atividade de metionina aminopeptidase. Compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade de metionina aminopepti-

dase incluem, porém não estão limitados a, bengamida ou um deriva- do da mesma.

[00303] O termo "inibidor de proteassoma" como usado aqui refere- se aos composto que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade do proteassoma. Os compostos que têm como alvo, diminuem ou ini- bem a atividade do proteassoma incluem, porém não estão limitados a, Bortezomibe (Velcade'“Y) e MLN 341.

[00304] O termo "inibidor de metaloproteinase de matriz" ou (inibi- dor de "MMP") como usado aqui inclui, porém não se limita aos, inibi- dores peptidomiméticos e não peptidomiméticos de colágeno, deriva- dos de tetraciclina, por exemplo, inibidor peptidomimético. de hidroxa- mato, batimastate e seu análogo oralmente biodisponível, marimastate (BB-2516), prinomastate (AG3340), metastate (NSC 683551) BMS- 279251 , BAY 12-9566, TAA211 , MMI270B ou AAJ996.

[00305] O termo "compostos usados no tratamento de malignidades hematológicas" como usado aqui incluem, mas não estão limitados a, inibidores de tirosina cinase do tipo FMS, que são compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade dos receptores de tirosina cinase do tipo FMS (FIt-3R); interferon, 1-B-D-arabinofuransilcitosina (ara-c) e bissulfano; e inibidores de ALK, que são compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a cinase de linfoma anaplásico.

[00306] “Compostos que têm como alvo, dimunem ou inibem a ativi- dade de receptores da tirosina cinase do tipo FMS (FIt-3R) são espe- cialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem membros da família da cinase do receptor FIt-3R, tais como PKC412, midostaurina, um derivado de estaurosporina, SU11248 e MLN518.

[00307] O termo "inibidores de HSP90" como usado aqui inclui, po- rém não está limitado a, compostos que têm como alvo, que diminun- em ou inibem a atividade intrínseca de ATPase de HSP90; degradam, direcionam, diminuem ou inibem as proteínas cliente HSP90 através da via do proteossoma da ubiquitina. Compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade intrínseca da ATPase de HSP90 são especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem a ativi- dade ATPase de HSP90, tal como 17-alilamino, 17-desmetoxigelda- namicina (17AAG), um derivado da geldanamicina; outros compostos relacionados com a geldanamicina; inibidores de radicicol e HDAC.

[00308] O termo "anticorpos antiproliferativos" como usado aqui in- clui, porém não estão limitados a, trastuzumabe (HerceptinTY), tras- tuzumabe-DM1, erbitux, bevacizumabe (AvastinTY), rituximabe (Ritu- xanO), PROS4553 (anti-CD40) e anticorpo 2C4. Por anticorpos enten- de-se anticorpos monoclonais intactos, anticorpos policlonais, anticor- pos multiespecíficos formados a partir de pelo menos 2 anticorpos in- tactos e fragmentos de anticorpos, contanto que exibam a atividade biológica desejada.

[00309] Para o tratamento de leucemia mieloide aguda (AML), os compostos da presente invenção podem ser usados em combinação com terapias de leucemia padrão, especialmente em combinação com terapias usadas para o tratamento de AML. Em particular, os compos- tos da presente invenção podem ser administrados em combinação com, por exemplo, inibidores de farnesil transferase e/ou outros fárma- cos úteis para o tratamento de AML, tais como Daunorrubicina, Adria- micina, Ara-C, VP-16, Teniposídeo, Mitoxantrona , Idarrubicina, carbo- platina e PKC412.

[00310] Outros compostos anti-leucêmicos incluem, por exemplo, Ara-C, um análogo da pirimidina, que é a 2'-alfa-hidróxi ribose (arabi- nosídeo) derivada da desoxicitidina. É também incluído o análogo de purina de hipoxantina, 6-mercaptopurina (6-MP) e fosfato de fludarabi- na. Os compostos que têm como alvo, diminuem ou inibem a atividade dos inibidores da histona desacetilase (HDAC), tais como butirato de sódio e ácido suberoilanilida hidroxâmico (SAHA), inibem a atividade das enzimas conhecidas como histona desacetilases. Inibidores de HDAC específicos incluem MS275, SAHA, FK228 (anteriormente FR901228), Tricostatina A e compostos descritos na Patente norte americana nº 6.552.065 incluindo, porém não limitados a, N-hidróxi-3- [4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-i1)-etil]- amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e N-hidróxi-3-[4-[(2- hidroxietil)(2-(1H-indol-3-il)etil]--amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, especialmente, o sal de lactato. Antagonistas do receptor de somatostatina como usado aqui referem-se a compostos que têm como alvo, tratam ou inibem o receptor de somatostatina, tais como octreotida, e SOM230. Aborda- gens de danificação de células tumorais referem-se às abordagens, tal como radiação ionizante. O termo "radiação ionizante" referida acima e aqui em diante significa radiação ionizante que ocorre tanto como raios eletromagnéticos (tais como raios X e raios gama) quanto partículas (tais como partículas alfa e beta). A radiação ionizante é fornecida em, porém não limitada à, terapia de radiação e é conhecida na técnica (veja, Hellman, Principles of Radiation Therapy, Cancer, in Principles e Practice of Oncology, Devita et a/l., Eds., 4º Edição, Vol. 1, pp. 248-275 (1993)).

[00311] São também incluídos os ligantes de EDG e os inibidores da ribonucleotídeo redutase. O termo “ligantes de EDG” como usado aqui refere-se a uma classe de imunossupressores que modulam a recirculação de linfócitos, tal como FTY720. O termo “inibidores de ri- bonucleotídeo redutase” refere-se à pirimidina ou análogos de nucleo- sídeo de purina incluindo, porém não limitados à, fludarabina e/ou ara- binosídeo de citosina (ara-C), 6-tioguanina, 5-fluorouracil, cladribina, 6- mercaptopurina (especialmente em combinação com ara-C contra ALL) e/ou pentostatina. Inibidores de ribonucleotídeo reductase são especialmente derivados de hidroxiureia ou 2-hidróxi-1H-isoindol-1 ,3-

diona.

[00312] São também incluídos, em particular, aqueles compostos, proteínas ou anticorpos monoclonais de VEGF, tal como 1-(4-cloroa- nilino)-4-(4-piridilmetil )ftalazina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, succinato de 1-(4-cloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalazina; Angiostatin'Y“; Endostatin'"; amidas de ácido antranílico; ZD4190; ZD6474; SU5S416; SU6668; bevacizumabe; ou anticorpos anti-VEGF ou anticorpos de receptor anti-VEGF, tais como rhuMAb e RHUFab, aptâmero de VEGF, tal como, inibidores de Macugon; FLT-A4, inibido- res de FLT-3, anticorpo de IgGI VEGFR-2, Angiozima (RPI 4610) e Bevacizumabe (AvastinT“Y).

[00313] A terapia fotodinâmica, como usado aqui, refere-se à tera- pia que usa certos produtos químicos conhecidos como compostos fotossensibilizadores para tratar ou prevenir o câncer. Exemplos de terapia fotodinâmica incluem o tratamento com compostos, tal como Visudyne'"Y e porfímero de sódio.

[00314] Esteroides angiostáticos como usado aqui referem-se aos compostos que bloqueiam ou inibem a angiogênese, como, por exem- plo, anecortave, triancinolona, hidrocortisona, 11-a-epi-hidrocortisol, cortexolona, 17a-hidroxiprogesterona, corticosterona, desoxicorticoste- rona, testosterona, estrasetona e dexametasterona.

[00315] Implantes contendo corticosteroides referem-se aos com- postos, tais como fluocinolona e dexametasona.

[00316] Outros compostos quimioterapêuticos incluem, porém não estão limitados a, alcaloides vegetais, compostos hormonais e antago- nistas; modificadores da resposta biológica, preferivelmente linfocinas ou interferons; oligonucleotídeos antissenso ou derivados de oligonu- cleotídeos; ShnRNA ou siRNA; ou compostos diversos ou compostos com outro ou mecanismo de ação desconhecido.

[00317] A estrutura dos compostos ativos identificados por números de código, nomes genéricos ou comerciais pode ser retirada da edição real do compêndio padrão "The Merck Index" ou de bancos de dados, por exemplo, Patentes Internacionais (por exemplo, IMS World Publi- cations).

[00318] Um composto da presente invenção também pode ser usa- do em combinação com com processos terapêuticos conhecidos, por exemplo, a administração de hormônios ou radiação. Em certas moda- lidades, um composto fornecido é usado como radiossensibilizador, principalmente no tratamento de tumores que apresentam baixa sensi- bilidade à radioterapia.

[00319] “Um composto da presente invenção pode ser administrado sozinho ou em combinação com um ou mais outros compostos tera- pêuticos, possível terapia de combinação adotando a forma de combi- nações fixas ou a administração de um composto da invenção e um ou mais outros compostos terapêuticos sendo escalonados ou adminis- trados independentemente uns dos outros, ou a administração combi- nada de combinações fixas e um ou mais outros compostos terapêuti- cos. Um composto da presente invenção pode, além de ou adicional- mente, ser administrado especialmente para terapia de tumor em combinação com quimioterapia, radioterapia, imunoterapia, fototerapia, intervenção cirúrgica ou uma combinação destes. A terapia de longo prazo é igualmente possível como a terapia adjuvante no contexto de outras estratégias de tratamento, como descrito acima. Outros trata- mentos possíveis são a terapia para manter o estado do paciente após a regressão do tumor, ou mesmo a terapia quimiopreventiva, por exemplo em pacientes de risco.

[00320] Aqueles agentes adicionais podem ser administrados sepa- radamente de uma composição contendo o composto da invenção, como parte de um regime de dosagem múltipla. Alternativamente, aqueles agentes podem fazer parte de uma única forma de dosagem,

misturados com um composto desta invenção em uma única composi- ção. Se administrados como parte de um regime de dosagem múltipla, os dois agentes ativos podem ser submetidos simultânea, sequencial- mente ou dentro de um período de tempo um do outro, normalmente dentro de cinco horas um do outro.

[00321] Como usado aqui, o termo “combinação”, “combinado” e termos relacionados referem-se à administração simultânea ou se- quencial de agentes terapêuticos de acordo com esta invenção. Por exemplo, um composto da presente invenção pode ser administrado com outro agente terapêutico simultânea ou sequencialmente em for- mas de dosagem unitária separadas ou juntos em uma forma de do- sagem unitária única. Consequentemente, a presente invenção forne- ce uma forma de dosagem de unidade única compreendendo um composto da presente invenção, um agente terapêutico adicional e um portador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[00322] A quantidade tanto de um composto inventivo quanto de um agente terapêutico adicional (nas composições que compreendem um agente terapêutico adicional, como descrito acima) que podem ser combinados com os materiais transportadores para produzir uma for- ma de dosagem única irão variar dependendo do hospedeiro tratado e do modo particular de administração. De preferência, as composições desta invenção devem ser formuladas de modo que uma dosagem en- tre 0,01 - 100 mg/kg de peso corporal/dia de um composto da inven- ção possa ser administrada.

[00323] Nas composições que compreendem um agente terapêuti- co adicional, tal agente terapêutico adicional e o composto desta in- venção podem agir sinergicamente. Portanto, uma quantidade de agente terapêutico adicional em tais composições será menor do que a necessária em uma monoterapia utilizando apenas aquele agente terapêutico. Em tais composições, pode ser administrada uma dosa-

gem entre 0,01 - 1.000 ug/kg de peso corporal/dia de agente terapêuti- co adicional.

[00324] A quantidade do agente terapêutico adicional presente nas composições desta invenção não será maior do que a quantidade que normalmente seria administrada em uma composição compreendendo tal agente terapêutico como o único agente ativo. De preferência, uma quantidade de agente terapêutico adicional nas composições presen- temente descritas variará de cerca de 50% a 100% da quantidade normalmente presente em uma composição que compreende tal agen- te como o único agente terapeuticamente ativo.

[00325] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional administrado em combinação com com um composto da presente in- venção é outro inibidor de MTOR. Em algumas modalidades, o inibidor de mTOR adicional inibe mTOR ligando o sítio ativo catalítico de mMTOR. Exemplos de tais inibidores adicionais de MTOR incluem: dac- tolisib, 8-(6-metóxi-piridin-3-il)-3-metil-1-(4-piperazin-1-il-3-trifluorome- til-fenil)-1,3-di-hidro-imidazo[4,5-c]quinolin-2-ona (WO 2006/122806), vistusertibe (AZD2014; WO 2009/153597);, AZD8055 (WO 2009/ 153597; XL388 (Publicação de Pedido de Patente norte americana 2010/0305093); sapanisertibe (MLNO0128; INK128; WO 2015/051043); DS3078; apitolisibe (GDCO0980; WO 2008/070740); omipalisibe (GSK- 2126458; WO 2008/14446); NVP-BGT226 (Chang, K.Y., et al., Clin. Cancer Res. 17(22): 7116-26 (2011)); voxtalisibe (XL765; SAR245409; WO 2007/044813); PFO4691502 (WO 2008/032162); gedatolisibe (PFO5212384; PKI-587; WO 2009/143313); SF1126 (WO 2004/ 089925); GSK1059615 (WO 2007/136940); BI-860585; OSI 027 (WO 2007/061737); VS 5584 (WO 2010/114484); CC-223 (WO 2010/ 062571); DCBCI-0901 (Lee, Y.E., et al., Mol. Canc. Thera. 12(11 Suppl): Resumo nr C270 (2013)):); LY3023414 (WO 2012/097039); P529 (WO 2007/133249); panulisibe (P7170; WO 2012/007926); DS-

7423 (Kashiyama, T., et al., PLoS One 9(2): e87220 (2014)); mesilato de PWT33567 (VCD-597; WO 2010/110685); ME-344 (NV-128; Na- varro, P., et al., Cell Rep. 15(12):2705-18 (2016)); ABTLO812 (WO 2010/106211); WYE-132; EXEL-3885 (Eur J Cancer Suppl. 6(12): Abst 322 (2008)); EXEL-4431 (Eur J Cancer Suppl. 6(12): Abst 322 (2008)); AR-mMTOR-26 (101st Annu Meet Am Assoc Cancer Res (AACR) (Abril 17-21, Washington, D.C.) 2010, Abst 4484); NV-128 (A.B. Alvero et al., Mol Cancer Ther. 10(8): 1385-93 (2011)); salinomicina (VS-507; Gupta, P.B., et a/., Cell 138(4): 645-59 (2009)); BN-107; BN-108; WAY- 600; WYE-687; WYE-354 (Yu, K,., et al., Cancer Res. 69(15): 6232-40 (2009)); Ku-063794 (Garcia-Martinez, J.M., et al., Biochem. J. 421(1): 29-42 (2009)); torcinibe (PP242; Apsel, B., et al/., Nat. Chem. Biol. 4(11): 691-99 (2008)); PP30; CZ415 (REF); INKI069; EXEL-2044; EXEL-7518; SB2158; SB2280; AR-MTOR-1 (Wallace, E.M,, et a/l., Mol. Canc. Thera. 8(12 Suppl): Resumo B267 (2009)).

[00326] A referência a qualquer inibidor de MTOR adicional particu- lar aqui também compreende quaisquer sais, estereoisômeros, tautôme- ros, solvatos, hidratos e polimorfos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

[00327] Os compostos desta invenção, ou composições farmacêuti- cas do mesmo modo, também podem ser incorporados em composi- ções para revestimento de um dispositivo médico implantável, tais co- mo próteses, válvulas artificiais, enxertos vasculares, stents e catete- res. Os stents vasculares, por exemplo, têm sido usados para superar a reestenose (estreitamento da parede do vaso após a lesão). No en- tanto, pacientes que usam stents ou outros dispositivos implantáveis correm o risco de formação de coágulos ou ativação de plaquetas. Es- tes efeitos indesejáveis podem ser evitados ou mitigados por pré- revestimento do dispositivo com uma composição farmaceuticamente aceitável compreendendo um inibidor de cinase. Dispositivos implan-

táveis revestidos com um composto desta invenção são outra modali- dade da presente invenção.

EXEMPLIFICAÇÃO

[00328] Como descrito nos Exemplos abaixo, em certas modalida- des exemplares, os compostos são preparados de acordo com os se- guintes procedimentos gerais. Será apreciado que, embora os méto- dos gerais representem a síntese de certos compostos da presente invenção, os seguintes métodos gerais, e outros métodos conhecidos por alguém versado na técnica, podem ser aplicados a todos os com- postos e subclasses e espécies de cada um destes compostos, como descrito aqui (veja também, Luengo, J.l. et al., Chem. Biol., 2(7): 471- 81 (1995); e Grinfeld, A.A. et a/l., Tet. Lett., 35(37): 6835-38 (1994)). Lista de abreviações usadas na seção experimental. CH3CN: acetonitrila DCE: dicloroetano DCM: diclorometano DIPEA: N, N-di-isopropiletilamine DMF: N N-dimetilformamida DMSO: dimetil sulfóxido ESI: ionização por eletrovaporização EtOAc: acetato de etila EtOH: ethanol h: horas HBr: brometo de hidrogênio HF: brometo de fluoreto HND-ê8: resina de permuta de íon acídico (por exemplo, Amberlyst) H20: água HPLC: cromatografia líquida de alto desempenho MeOH: metanol min: minutos mL: mililitros mM: milimolar mmol: milimoles EM: especrometria de massa N>2: gás de nitrogênio NaHCO:;: bicarbonato de sódio Nal: lodeto de sódio NahNs: azida de sódio NaOH: hidróxido de sódio Na2SO:: sulfato de sódio NHLCI: cloreto de amônio RMN: Resonância Magnética Nuclear ºC: graus Celsius prep-HPLC: cromatografia líquida preparativa de alto desempenho PPh:: trifenilfosfina p-TsOH: ácido para toluenossulfônico ta: temperatura ambiente TEA: trietilamina TFA: ácido trifluoracético THF: tetra-hidrofurano Exemplo 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R, 418,448,45R,46R,558S)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxi]l-44-[(18S)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67 -dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-28, 1-29 e 1-30):

OH O oH O o, o ks o, o ók o NO O % N. O,,, = N O,, = a O. o DB LL o x x oH oH 1-28 1-29 oH O AA o o. O. ss or OA, S to V N. O, ==

IO o x oH 1-30 Esquema sintético:

oHOo dO “ o pTSOH o o NS o NA oH THE 206, 3h A NS 33% NÃ o, = õ &

EN QUE rol) a) %3 separação quiral

CE NÃ o, = 128 kh : Lo, om o ou o o. : o) A. o, | o ó o DAS, CO S o o. o Õ, k 130 k 12o S N do Ls Procedimentos e caracterização:

[00329] 2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletanol (5 mL) foi adicionado a uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e hidrato de ácido p- toluenossulfônico (0,52 g, 2,73 mmols) em THF (15 mL) a 25 ºC. À mistura resultante foi agitada durante 2 horas, em seguida adicionada a uma solução gelada de NaHCO3 aquoso saturado e extraída com EtOAc (30 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas, em seguida se- cadas sobre Na2SO:, filtradas, e concentradas em vácuo. O material cru foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura: 7:3) para obter (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39R,418,44S, 45R,46R,558)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-44- [18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -46-metó- Xi-34,35,36,37,47 48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo-hexatriacon-

ta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-28: 0.19 9, 33,7% de produção) como um sólido branco. EM (El*, m/z): 1054,4 [M+Na]*. 1,5 g deste material foi enviado para separação quiral que forneceu 1-29 (0.6 mg) e 1-30 (0.2 g).

[00330] O método de separação quiral: Coluna : CHIRALPAK IC (ICOOCD-TB016) Tamanho da coluna : 0,46 cm 1.D. x 15 cm L Fase móvel : Hexano/EtOH = 60/40 (V/V) Taxa de fluxo : 1,0 ml/min Comprimento de onda : UV 254 nm Temperatura : 35 ºC Equipamento de HPLC : Shimadzu — LC-20ADCP- HPLC-05

[00331] 1-29::H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 8,20 (m, 2H), 6,13 (dd, J = 15,0, 10,3 Hz, 1H), 5,92 (dd, J = 32,7, 11,0 Hz, 1H), 5,51 (dd, J = 15,1, 8,9 Hz, 1H), 5,41 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,13 (dd, J = 26,5, 20,5 Hz, 1H), 4,85 (s, 1H), 4,19 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 36,4 Hz, 1H), 3,80 — 3,51 (m, 12H), 3,50 — 3,24 (m, 12H), 2,87-2,51 (m, 6H), 2,29 (t, J = 34,7 Hz, 2H), 2,12 1,87 (m, 5H), 1,84 — 1,66 (m, 13H), 1,53 — 1,145 (m, 9H), 1,45 — 0,77 (m, 18H), 0,65 (dt, J = 20,2, 10,1 Hz, 1H).

Exemplo 2: Síntese de sal de ácido (21E,23E,25E,26E,34R,35S, 36R,37R,39R,418,44S8,45R,46R,558)-43-[2-[2-(2-aminoetóxi)etóxi] etóxi]-45,55-di-hidróxi-44-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66, 67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona trifluoroacético (1-39):

OH O

AR Y ES o o O ss nro > 7 Na SW CC % SS co “ço O, 5 For

IND 1-39 Esquema sintético: 2% PA X Ho . o, o X fo .

EEE E SE A SE

FALO XT LTL, e, O À K í a” So Ro: Db 139 DONO Procedimentos e caracterização: Etapa 1: 2-(2-(2-bromoetóxi)etóxi)etanol :

[00332] Brometo de hidrogênio (88,21 g, 1,07 mmols, 115 mL) foi adicionado a uma solução de 2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletanol (100 g, 665,90 mmols) em tolueno (1,15 L) e a mistura resultante foi agitada em refluxo durante 18 horas, em seguida a camada aquosa foi des- cartada. A camada orgânica foi lavada com solução de NaOH aquoso, concentrada em vácuo, em seguida purificada por cromatografia em sílica-gel (MeOH:DCM = 1:20) para obter 2-[2-(2-bromoetóxi)etóxi] etanol (20 g, 14% de produção) como um líquido. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 3,83 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 3,77 — 3,72 (m, 2H), 3,69 (s, 4H), 3,64 — 3,61 (m, 2H), 3,49 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,51 (t, J = 6,1 Hz, 1H). Etapa 2: (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39R,418,448,45R,46R, 558)-43-[2-[2-(2-bromoetóxi)etóxiletóxi]l-45,55-di-hidróxi-44-[(1S)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-65,66-dioxa-5S6-azatriciclohexatriacon- ta-21,23,25(47), 26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona:

[00333] 2-[2-(2-bromoetóxi)etóxiletanol (0,12 g, 0,547 mmolis, 2 mL) foi adicionado a uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,5 g, 2,73 mmols) em THF (7 mL) em temperatura ambiente e a mistura resultante foi agitada duran- te 2 horas. Solução aquosa de NaHCO3 gelada foi em seguida adici- onada e a mistura foi extraída com EtOAc (30 mL x 3). A fase orgânica foi em seguida secada sobre Na>2SO:, filtrada, e concentrada em vá- cuo. O material cru resultante foi purificada por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 7:3) para obter (21E,23E,25E,26E,34R, 358,36R,37R,39R,418,448S,45R,46R,558)-43-[2-[2-(2-bromoetóxi) etóxi] etóxil-45,55-di-hidróxi-44-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47 ,48-hexametil-65,66-dioxa- B6-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52, 53-pentona (0,2 g, 33,4% de produção, *HRMN mostra uma impureza de rapamicina) como um sólido branco. EM (El*, m/z): 1116,4 [M+Na]

Etapa 3: (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,418S,44S,45R,46R, 558)-43-[2-[2-(2-azidoetóxi)etóxiletóxi]l-45,55-di-hidróxi-44-[(1S)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-68,69-dioxa-59-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona:

[00334] Uma solução de NaN;3 (1,07 g, 16,44 mmolis), Nal (0,33 9, 2,19 mmoIs) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,418,448, 45R,46R,558)-43-[2-[2-(2-bromoetóxi) etóxiletóxil-45,55-di-hidróxi-44- [[18)-2-[[18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metó- Xi-34,35,36,37,47 48-hexametil-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriacon- ta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (0,6 g, 0,548 mmols) em DMF (10 mL) foi agitada a 60 ºC durante 1,5 horas. A rea- ção foi em seguida extinta por EtOAc (50 mL) e a mistura enxaguada com solução aquosa de NHaCI (20 mL), secada sobre Na2S0O:, filtrada e concentrada em vácuo. O material cru resultante foi purificada por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 4:1) para obter (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R,418,44S,45R,46R,558)-43- [2-[2-(2-azidoetóxi) etóxiletóxil-45,55-di-hidróxi-44-[(18)-2-[(18,3R,4R)- 4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48 -hexametil-68,69-dioxa-59-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26 (48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (0,3 g, 51,8% de produção) co- mo um sólido amarelo claro. EM (El*, m/z): 1079,4[M+Na]*. Etapa 4: sal de ácido (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S, 445,45R,46R,558)-43-[2-[2-(2-aminoetóxi)etóxiletóxi]-45,55-dihidróxi -44-[(18)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-57-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona trifluoroacético:

[00335] Trifenilfosfina (0,186 g, 0,7 mmols) foi adicionada lentamen- te a uma solução de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R,418S,

448 ,A45R,46R,558)-43-[2-[2-(2-azidoetóxi)etóxiletóxi]l-45,55-di-hidróxi- 44-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47 48-hexametil-68,69-dioxa-59-azatriciclo-hexa- triaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona — (0,25 9, 0,24 mmols) em THF (5 mL) trifenilfosfina.

A solução resultante foi agitada a 60ºC durante 2 horas, e em seguida 0,05 mL de água foi adicionado e a mistura agitada em temperatura ambiente durante 6 horas, em seguida concentrada.

O material cru resultante foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH3;CN/ 0,02% de TFA em água (2:3) para obter (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39R,418,44S, 45R,46R,558)-43-[2-[2-(2-aminoetóxi) etóxiletóxil-45,55-di-hidróxi-44- [[18)-2-[[18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-me- tóxi-34,35,36,37,47 48-hexametil-66,67 -dioxa-57 -azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-39: 0,035 g, 14% de produção) como um sólido branco.

EM (El*, m/z): 1031,4[M+H]*. *H RMN (500 MHz, DMSO-ds) 5 7.82 (s, 3H), 6,42 (dd, J=33,7, 19.3 Hz, 2H), 8,25 — 6,09 (m, 2H), 5,46 (dd, J = 14,7, 9,7 Hz, 1H), 5,28 (s, 1H), 5,08 (d, JU = 10,1 Hz, 1H), 5,00 — 4,92 (m, 1H), 4,08 — 3,92 (m, 2H), 3,78 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,63 — 3,38 (m, 16H), 3,36 — 3,08 (m, 12H), 2,99 (dd, J = 22,3, 17,1 Hz, 2H), 2,87 — 2,73 (m, 2H), 2,37 (dd, J = 17,9, 8,4 Hz, 1H), 2,30-1,75(m, 4H), 1,7-1,49 (m, 15H), 1,51 — 1,01 (m, 6H), 1,01— 0,65 (m, 18H), 0,63 — 0,56 (m, 1H). Exemplo 3: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,378,38R,39R,41R, 438,468S,47R,48R,57S)-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-[2-(2-hidroxie- tóxi)etóxiletóxiletóxi]-46-[(18S)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil] -48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil- 68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)- tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-36):

OH O o, * Y ES —o. o x o mo > o SW sã NX N O, = o O OH Moo 1-36 Esquema sintético:

HO oH O ( oH O o. “Ê Ô : Ç o "CO Ô | TE . o & . pTSOH mo. . o À so ro) Y o Ss ? THF, 23ºC, 2h ro) o s ca? NY N 25% o? OS N O., = $ N O. = 1:36 Procedimentos e caracterização:

[00336] 2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletanol (1,06 g 5,47 mmols, 5 mL) foi adicionado a uma solução de rapamicina (0,5 9, 0,547 mmols) e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,21 g, 1,09 mmols) em THF (15 mL) em temperatura ambiente. A mistura de rea- ção foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida adicionada uma solução gelada de NaHCO3 aquoso saturado e extra- ída com EtOAc (30 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas e secadas sobre Na>2SO:, filtradas e concentradas. O cru foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 3:2) para obter (21E,23E,25E,26E,36R, 378S,38R,39R,41R,438,46S,47R,48R,57S)-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-[2- (2-hidroxietóxi) etóxiletóxiletóxi]l-46-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-

pentona (1-36: 0,15 g, 25,5% de produção) como um sólido branco. EM (El*, m/z): 1098,4[M+H]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,40 — 5,92 (m, 4H), 5,73 — 5,35 (m, 3H), 5,25 — 5,05 (m, 2H), 4,31 — 4,12 (m, 1H), 3,97 (dd, J = 25,7, 6,3 Hz, 1H), 3,87 — 3,53 (m, 15H), 3,52 — 3.17 (m, 11H), 2,99 — 2,46 (m, 6H), 2,36 — 1,93 (m, 9H), 1,90 — 1,54 (m, 13H), 1,52 — 1,17 (m, 9H), 1,45 0.81 (m, 18H), 0,68 — 0,58 (m, 1H). Exemplo 4: Síntese de (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43R, 458,47R,48S,49R,50R,59S)-49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-[2-(2-hidro- xietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxi]l-48-[(18S)-2-[(1S8,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-50-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexa- metil-70,71-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)- tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (1-35):

OH O o, “TO o Ú = mol > 7 "o º RW ce N. O,, = O Ao ot 1-35 Esquema sintético: o Ú E S o ' o ô& s OX NS ma = | DO o, EN e as Procedimentos e caracterização:

[00337] 2-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletanol (0,08 q, 0,33 mmols, 2 mL) foi adicionado a uma solução de rapamicina (0,3 9, 0,328 mmols) e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,31 g, 1,64 mmols) em THF (6 mL) em temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida adi- cionada uma solução gelada de NaHCO;3 aquoso saturado e extraída com EtOAc (20 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas e em seguida secadas sobre Na2SO:, filtradas, e concentradas em vácuo. O material cru foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/ água pura: 3:2) para obter (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R, 41R,43R, 458,47R,48S,49R,50R,59S)-49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxi- etóxi)etóxiletóxiletóxiletóxi]l-48-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-5S0-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexametil-70,71- dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)-tetraeno-53,54, 55,56,57-pentona (1-35: 0,06 g, 16,3% de produção) como um sólido branco. EM (El*, m/z): 1042,4[M+Na] *. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5.81 (m, 4H), 5,58 — 4,81 (m, 4H), 4,31 — 4,11 (m, 1H), 4,01 — 3,51 (m, 22H), 3,49 — 3,13 (m, 11H), 3,01 — 2,43 (m, 6H), 2,29 (t, J = 30,6 Hz, 2H), 2,15 — 1,88 (m, 7H), 1,76 — 1,55 (m, 12H), 1,51 — 1,18 (m, 9H), 1,15 — 0,74 (m, 18H), 0,66 (dd, J = 23,9, 12,0 Hz, 1H). Exemplo 5: Síntese de (21E,23E,25E,26E,30R,318,32R,33R,35R, 378,39S,40S,41R,42R,528)-39-(2,3-di-hidroxipropóxi)-41,52-di-hi- dróxi-40-[(18)-2-[(1S8,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-42-metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil-64,65-dioxa-53-azatrici- clo-hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pen- tona (1-25): oH O o, CT ó : - " SS

CE N. O,,. = o O. todo 1-25 Esquema sintético:

oH O o els mo > ” “e Ss No OH p-TsOH É + SD” THF, 20ºC, 3h CÊ % Y 32% N O,, = o & oH O oH O PR - o O o o. o Ns o. o Ns ro) ' =o s mo) ' “o > S % Ni PPTS, MeOH » o, N N O,, = 10% N O,, = fel O. dO O. o 1-25 Pos o oH Procedimentos e caracterização: Etapa 1: (24E,26E,28E,29E,32R,33S,34R,35R,37R,398,418,428,44R, 45R,558)-41-[(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)netóxi]-44,55-di-hidróxi- 42-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 45-metóxi-32,33,34,35,46,47-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-24,26,28(46),29(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona:

[00338] (2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metanol (1 mL) foi adicionado a uma solução de rapamicina (0,2 g, 0,22 mmols) e hidrato de ácido p- toluenossulfônico (0,1 g, 0,547 mmols) em THF (3 mL) em temperatura ambiente. A mistura resultante agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida adicionada uma solução gelada de NaHCO3 aquo- so saturado e extraída com EtOAc (20 mL x 2). As camadas orgânicas foram combinadas e em seguida secadas sobre Na2SO:, filtradas, e concentradas em vácuo. O cru foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura: 7:3) para obter (24E,26E,28E,29E,32R, 33S,34R,35R,37R,398,418,428,44R,45R,558)-41-[(2,2-dimetil-1,3-di- oxolan-4-il)metóxi]-44,55-di-hidróxi-42-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-32,33,34,35,46,47-hexametil-

66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-24,26,28(46),29(47)-tetraeno- 48,49,50,51,52-pentona (0,07 g, 32% de produção) como um sólido branco. EM (El*, m/z): 1036,4[M+Na]*. Etapa 2: (21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35R,37S,398S,40S,41R,42R,52S) -39-(2,3-di-hidroxipropóxi)-41,52-di-hidróxi-40-[(18)-2-[(1S8,3R,4R)- 4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-metóxi-30,31,32,33, 43,44-hexametil-64,65-dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25 (43), 26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-25):

[00339] ácido 4-metilbenzenossulfônico-piridina (0,037 g, 0,148 mmols) foi adicionado a uma solução de (24E,26E,28E,29E,32R,33S, 34R,35R,37R,398S,418,428,44R,45R,558)-41-[(2,2-dimetil-1,3-dioxo- lan-4-il)metóxi]-44,55-di-hidróxi-42-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-32,33,34,35,46,47-hexametil- 66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-24,26,28(46),29(47)-tetraeno- 48,49,50,51,52-pentona (0,05 g, 0,05 mmols) em MeOH (2 mL). A mis- tura foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas. Após a evaporação de metanol, o resíduo foi neutralizado com NaHCO; aquo- so saturado. A mistura foi em seguida extraída com EtOAc (10 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas, secadas sobre Na2SO., e concentradas com o material cru resultante purificado por cromato- grafia de fase reversa (CH;CN/água pura = 1:1) para fornecer (21E,23E,25E,26E,30R,318S,32R,33R,35R,37S,39S,40S,41R,42R,528S) -39-(2,3-di-hidroxipropóxi)-41,52-di-hidróxi-40-[(18)-2-[(1S8,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-metóxi-30,31,32,33,43,44- hexametil-64,65-dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(43),26 (44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-25: 0,005 g, 10% de produ- ção) como um sólido branco. EM (El*, m/z): 996,5[M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 8,21-5,97 (m, 4H), 5,77 — 4,78 (m, 5H), 4,53 — 4,12 (m, 2H), 4,05 — 3,11 (m, 19H), 3,07 — 2,88 (m, 2H), 2.65-2,5 (m,

4H), 2,39 — 1,91 (m, 7H), 1,89 — 1,69 (m, 12H), 1,52 — 1,20 (m, 9H), 1,17 — 0,76 (m, 18H), 0,73 — 0,61 (m, 1H). Exemplo 6: Síntese de (21E,23E,25E,26E,42R,43S,44R,45R,478, 498,518,528S,53R,54R,63R)-53,63-di-hidróxi-51-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2- (2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l-52-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -5S4-metóxi- 42,43,44,45,55,56-hexametil-74,75-dioxa-64-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(55),26(56)-tetraeno-57,58,59,60,61-pentona (1-24): oH O o, o Ô& ss CCZ ) N O,, TE o AI 1-24 Esquema sintético: or 2 O E É maio O E OZ and (rezo & nd x Ss” FS Co ê P d & Procedimentos e caracterização:

[00340] “Uma solução de rapamicina (0,5 g, 547 mmols) e 2-[2-[2-[2- [2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletanol (0,2 g, 0,547 mmolis, 3 mL) e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,52 9, 2,73 mmols) em THF (15 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas, em seguida extinta com EtOAc (30 mL x 3). As camadas orgâni-

cas combinadas foram lavadas com solução gelada de NaHCO; satu- rado e concentradas. O material cru resultante foi purificado por cro- matografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 7:3) para obter (21E,23E,25E,26E,42R,43S,44R,45R,478,498,518,528,53R,54R,63R) -53,63-di-hidróxi-51-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxi] etóxiletóxiletóxiletóxi]l-52-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-54-metóxi-42,43,44,45,55,56-hexametil-74,75-dioxa- 64-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(55),26(56)-tetraeno-57,58,59,60, 61-pentona (1-24: 0,13 g, 19%) como um sólido branco. EM (El*, m/z):

1275.6[M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,45 — 5.80 (m, 4H), 5,57 — 5,05 (m, 4H), 4,85 — 4,08 (m, 2H), 3,90 — 3,50 (m, 34H), 3,47 — 3,24 (m, 13H), 2,97 — 2,44 (m, 7H), 2,39 — 2,06 (m, 2H), 2,03 — 1,84 (m, 6H), 1,78 — 1,58 (m, 13H), 1,53 — 1,16 (m, 9H), 1,14 — 0,78 (m, 18H), 0,67-0,53 (m, 1H). Exemplo 7: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,38S, 418,438,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-42-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]- 43-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)-2-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil] -46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67 -dioxa-56-aza- triciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53- pentona (1-23):

OH O o, o x " os So

HO OCO Y N O,, == o o d, d 1-23

Esquema sintético: DIPEA, ThO DIPEA Ho TBS nom ge 1h TBsO MN OT! , Rapamieihã cena 6o%C, teh 79% | 32% “ oH DA o o, Num as o 3 LO A o " TEA 3HF PP - o —THF20ºC 2h TBSO o 54% N o, LL % oo

O Pn oH o, OD k o, Y o oH O to o 6 p-TSOH 2 à o Í + S THF, 20 ºC, 2h no V S ' dos 19% O, SS oro

O oH O o, o óks SO i ão Ss Ho o Y N O, = à O 123 LL d Procedimentos e caracterização Etapa 1: trifluorometanosulfonato de 2-[terc-butil(dimetil)silil] oxi- etila:

[00341] “Uma mistura de 2-[terc-butil(dimetil)sililJoxietanol (4 g, 22,69 mmols) e DIPEA (3,81 g, 29,49 mmols, 5,14 mL) em DCM (50 mL) foi resfriada para O ºC sob N>, em seguida trifluorometanosulfonato de trifluorometilsulfonila (7,04 g, 24,95 mmols) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada a O ºC durante 1 hora. A reação foi diluída com EtOAc (200 mL) em seguida lavada com NaHCO; saturado (200 mL),

água (200 mL), salmoura (200 mL), e em seguida a camada orgânica foi secada sobre Na2SO:, filtrada, e concentrada em vácuo para forne- cer trifluorometanosulfonato de 2-[terc-butil(dimetil)sililJoxietila (5,5 9, 78,6% de produção) como um óleo marrom. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 4,50 — 4,42 (t, 2H), 3,85 — 3,80 (t, 2H), 0,84 — 0,78 (s, 9H), 0,00 (s, 6H). Etapa 2: (27E,29E,31E,32E,36R,37S,38R,39R,408,438,448,458,47R, 48R,57R)-45-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-[2-[terc-butil(dimetil)sililJoxie- tóxil-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47,57-di-hidróxi-44,48-di- metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-67,68-dioxa-59-azatriciclo- hexatriaconta-27,29,31(49),32(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona:

[00342] “Rapamicina (2 g, 219 mmols) e DIPEA (2,26 g, 17,50 mmols, 3,05 mL) foram dissolvidos em tolueno (60 mL) em seguida aquecidos para 60 “ºC. Trifluorometanosulfonato de 2-[terc- butil(dimetil)sililJoxietila (5,40 g, 17,50 mmols)was em seguida adicio- nada under N>, em seguida agitada a 60 ºC durante 16 horas. A mistu- ra foi vertida em NaHCO; saturado gelado (100mL) e em seguida ex- traída com EtOAc (150 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, em seguida concentradas em vácuo. O resíduo foi em seguida purificado por cromatografia de fase reversa (CH3CN/água pura = 4:1) para fornecer (27E,29E,31E,32E,36R, 378,38R,39R, 408, 438, 448 ,458,47R,48R,57R)-45-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-[2-[terc-butil — (dime- til)siliJjoxietóxi]l-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47,57-di-hidróxi-44,48- dimetóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-67,68-dioxa-59-azatriciclo- hexatriaconta-27,29,31(49),32(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (0,75 g, 32% de produção) como um óleo incolor. ESI-EM (El*, m/z): 1095,5 [M+Na]*. Etapa 3: (22E,24E,26E,27E,31R,328,33R,34R,358,388S,39S,40S, 42R,43R,52R)-42,52-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-hidro-

xietóxi)-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-39,43-dimetóxi-31,32,33, 34,44,45-hexametil-62,63-dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta-22,24, 26(44),27(45)-tetraeno-46,47,48,49,50-pentona:

[00343] Uma solução de TEA:3SHF (4,65 g, 28,87 mmols) e (27E,29E, 31E,32E,36R,37S,38R,39R,40S,43S,44S,458,47R,48R,57R)-45-[(1R)- 2-[(18,2R,3R)-3-[2-[terc-butil(dimetil)sililJetóxi]-2-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-47,57-di-hidróxi-44,48-dimetóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil- 67 ,68-dioxa-59-azatriciclo-hexatriaconta-27,29,31(49),32(50)-tetraeno- 51,52,53,54,55-pentona (3,05 g, 2,89 mmols) em THF (50 mL) foi agi- tada a 20 ºC durante 2 horas. A mistura foi vertida em NaHCO; satu- rado gelado (100mL) em seguida extraída com EtOAc (150 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com água e sal- moura, em seguida concentradas em vácuo. O resíduo foi purificada por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura: 7:3) para forne- cer (22E,24E,26E,27E,31R,328S,33R,34R,358S,38S,39S,40S ,42R,43R,52R) -42,52-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)-2-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-39,43-dimetóxi-31,32,33,34,44,45-hexametil- 62,63-dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(44),27(45)-tetraeno- 46,47 ,48,49,50-pentona (1,5 g, 54% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 980,5 [M+Na]*. Etapa 4: (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,38S,418,43S,45R, 46R,55R)-45,55-di-hidróxi-42-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-43-[(1R)-2- [(1S,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo-he- xatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (I- 23):

[00344] Uma mistura de (22E,24E,26E,27E,31R,328,33R,34R, 358, 38S,39S,40S 42R,43R, 52R)-42,52-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-

3-(2-hidroxietóxi)-2-metóxi-ciclo-hexil] -1-metil-etil]-39,43-dimetóxi-31, 32,33,34,44 45-hexametil-62,63-dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta- 22,24,26(44),27(45)-tetraeno-46,47,48,49,50-pentona (0,5 g, 0,52 mmols), 2-(2-hidroxietóxi)etanol (2,77 g, 26,09 mmols) e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,54 g, 3,13 mmols) em THF (6 mL) foi agitada a 20 ºC durante 2 horas. A mistura foi vertida em NaHCO; saturado gelado (30 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas e em seguida lavadas com água e salmoura, em seguida concentradas em vácuo. O resíduo foi purificada por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 1:1) para fornecer (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,388S,418,43S, 45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-42-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-43-[(1R)-2- [[18,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47 48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (l- 23: 0,1 g, 19% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1054,4 [M+Na]". *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6.63 — 5.86 (m, 4H), 5,70 — 5,00 (m, 4H), 4,87 — 4,15 (m, 2H), 4,02 — 3,54 (m, 14H), 3,50 — 3,26 (m, 11H), 3,24 — 3,02 (m, 3H), 2,76 — 2,46 (m, 3H), 2,38 — 1,86 (m, 8H), 1,84 — 1,54 (m, 14H), 1,47 (m, 3H), 1,25 (m, 6H), 1,00 (m, 16H), 0,69 (dt, J = 34,1, 12,1 Hz, 1H).

Exemplo 8: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,40S, 438,458,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-44-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxi]l-45-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)-2-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil] -48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil- 68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)- tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-32):

OoH O PN ol los o) “o Ss ne CC XY N fo = o? o h

NS O. Lo 1-32 Esquema sintético: Fe.

AVEIA CA O AAA ho, O Ç 28% PAS à 182 s o Lp rocedimentos e caracterização:

[00345] Uma mistura de everolimo (3,92 g, 26,09 mmols) e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,45 g, 2,61 mmols) em THF (10 mL) foi agitada a 20 ºC durante 2 horas. A mistura foi vertida em NaHCO; sa- turado gelado (30 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas foram combinadas e em seguida lavadas com água e sal- moura, em seguida concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 1:1) para for- necer (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,408S,43S,458,47R,48R,57R)- 47,57-di-hidróxi-44-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-45-[(1R)-2-

[[18,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48- metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (l- 32: 0,155 g, 28% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El”, m/z): 1098,4 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,49 — 5,83 (m, 4H), 5,67 — 5,35 (m, 2H), 5,33 — 5,01 (m, 2H), 4,92 — 4,08 (m, 2H), 4,05 — 3,51 (m, 17H), 3,52 — 3,23 (m, 11H), 3,23 — 3,01 (m, 3H), 2,66 (m, 4H), 2,40 — 1,95 (m, 5H), 1,95 — 1,55 (m, 17H), 1,52 — 1,13 (m, 9H), 1,13 — 0,79 (m, 16H), 0,71 (dd, J = 23,8, 11,9 Hz, 1H).

Exemplo 9: Síntese de (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,42S, 458,478,49R,50R,59R)-49,59-di-hidróxi-46-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxiletóxi]l-47-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)-2-metó- xi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-5S0-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexametil- 70,71-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)-tetra- eno-53,54,55,56,57-pentona (1-22):

OH O o. o O ss A) 7 o SS ne CO Y N O,, = oO O. à

N O. d, & 1-22

Esquema sintético: oH O no OA ou o, ; . DER S o E FOX “O br o. * Procedimentos e caracterização: ”

[00346] Uma mistura de everolimo (0,5 g, 0,52 mmols), 2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletanol (2,03 g, 10,44 mmols) e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,54 g, 3,13 mmols) em THF (6 mL) foi agitada a ºC durante 2 h. A mistura foi vertida em NaHCO; saturado gelado (30 mL) e extraída com EtOAc (50 mL*3). As camadas orgânicas com- binadas foram lavadas com água, salmoura, em seguida concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH3CN/água pura = 1:1) para fornecer (21E,23E,25E,26E,38R,39S, 40R,41R,428,458,478,49R,50R,59R)-49,59-di-hidróxi-46-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxil-47-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-(2-hidroxietóxi)- 2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-5SO0-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexa- metil-70,7 1-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)- tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (1-22: 0,1 g, 17% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1043,4 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6.71 — 5,78 (m, 4H), 5,77 — 5,01 (m, 4H), 4,65 — 3,88 (m, 3H), 3,87 — 3,50 (m, 20H), 3,50 — 3,00 (m, 14H), 2,77 — 1,95 (m, 11H), 1,89 — 1,53 (m, 13H), 1,53 — 0,79 (m, 27H), 0,76 — 0,62 (m, 1H). Exemplo 10: Síntese de (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,39S, 428,448,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3- hidróxi-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-43-[2-[2-(2- metoxietóxi)etóxiletóxi]l-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-

57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno- 50,51,52,53,54-pentona (1-27):

OH O —o, o O o

DX o N N O, = oO | 2

W o | 1-27 Esquema sintético: 2 o 2 A . o, . o ê " oH o o d& a oO so ” R ô Pp-TSOH mol > " e ES es s THF,20 ºC, 2h - 2 NX N. o ' N o 14% N. O,, =

O À 27 L, p

S Procedimentos e caracterização:

[00347] Uma mistura de rapamicina (1 g, 1,09 mmolis), 2-[2-(2- metoxietóxi)etóxiletanol (8,98 g, 54,69 mmols) e hidrato de ácido p- toluenossulfônico (0,94 g, 5,A7 mmols) em THF (20 mL) foi agitada a ºC durante 2 horas. A mistura foi vertida em NaHCO; saturado ge- lado (50 mL) e extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgâni- cas combinadas foram lavadas com água, salmoura, em seguida con- centradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 4:1) para fornecer (22E,24E,26E,27E, 35R,36S,37R,38R,39S,428S,44S,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-44- [[1R)-2-[(18,2R,3R)-3-hidróxi-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47- metóxi-43-[2-[2-(2-metoxietóxi)etóxiletóxi]l-35,36,37,38,48,49-hexametil -66,67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetra- eno-50,51,52,53,54-pentona (1-27: 0,16 g, 14% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1068,4 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,50 — 5,81 (m, 4H), 5,73 — 5,05 (m, 4H), 4,85 — 3,98 (m, 3H), 3,90 — 3,10 (m, 27H), 3,02 — 2,24 (m, 7H), 1,98 (m, 6H), 1,82 — 1,55 (m, 13H), 1,54 — 1,16 (m, 9H), 1,16 — 0,78 (m, 17H), 0,75 — 0,59 (m, 1H). Exemplo 11: Síntese de (21E,23E,25E,26E,31R,328,33R,34R,35S, 38S,40S,42R,43R,52R)-42,52-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3- hidróxi-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-39-(3-hidroxipropóxi)-43- metóxi-31,32,33,34,44,45-hexametil-63,64-dioxa-53-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(44),26(45)-tetraeno-46,47,48,49,50-pentona (1-34):

OH O —o, Í o O o rol) ss “Oo Ss ba N O, = oO O. x 1-34

Esquema sintético: o, TP Cc? “ES A " Na v 6 o. À Ns so) $ 2 ÀS pTSOH xo A o */ THF,20º%,2h SA NY N o, LL H 29% aC O, = do: É oO o.

E

OH Procedimentos e caracterização:

[00348] Uma mistura de rapamicina (0,5 g, 0,55 mmols), propano- 1,3-diol (13,13 g, 172,48 mmols, 12,5 mL), e hidrato de ácido p- toluenossulfônico (0,47 g, 2,74 mmols) em THF (37,5 mL) foi agitada a 20 ºC durante 2 horas. A mistura foi vertida em NaHCO; saturado ge- lado (100 mL) e extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgâ- nicas foram combinadas e lavadas com água e salmoura, em seguida concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 7:3) para fornecer (21E,23E,25E, 26E,31R, 328,33R,34R,358,38S,40S,42R,43R,52R)-42,52-di-hidróxi- 40-[(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-hidróxi-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-39- (3-hidroxipropóxi)-43-metóxi-31,32, 33,34,44 45-hexametil-63,64- dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(44),26(45)-tetraeno- 46,47 ,48,49,50-pentona (0,15 g, 29% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 980,3 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCIs) 6,58 — 5,84 (m, 4H), 5,72 — 4,83 (m, 4H), 4,65 — 4,06 (m, 2H), 4,03 — 3,63 (m, 5H), 3,62 — 3,05 (m, 12H), 3,03 — 2,40 (m, 6H), 2,42 — 1,91 (m, 7H), 1,89 — 1,56 (m, 17H), 1,53 — 1,27 (m, 6H), 1,25 — 0,76 (m, 19H), 0,62 (m, 1H).

Exemplo 12: Síntese de (21E,23E,25E,26E,30R,318,32R,33R,35R, 378,40S8,41R,42R,518)-41,51-di-hidróxi-39-(2-hidroxietóxi)-40-[(1S)- 2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -42-metó- x1i-30,31,32,33,43,44-hexametil-62,63-dioxa-52-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(43),26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-38): o, ” N C R "

OA A HO so o com N C O, SS > dHo 5 dor 1-38 Esquema sintético: 200 o o, NR . o, GS > R a to : E) ao w ro OD ' Dn“ a “ nome! $

A NE oHo' & 9% 1-38 dos Procedimentos e caracterização:

[00349] Hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,31 g, 1,684 mmols) foi adicionado a uma mistura de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e eti- leno glicol (3 mL) em THF (10 mL) a 10 ºC. A mistura resultante foi agi- tada a 10 ºC durante 17 horas, em seguida a mistura de reação foi di- luída com EtOAc (100 mL) e ajustada para o pH 9 usando solução de NaHCO; aquoso saturado (cerca de 50 mL). A camada orgânica foi concentrada em vácuo, em seguida o resíduo foi purificado por croma- tografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 5,5: 4,5). O solvente foi em seguida removido por liofilização produzindo (21E,23E,25E,26E, 30R,318,32R,33R,35R,37 S,40S,41R,42R,51S)-41,51-di-hidróxi-39-(2- hidroxietóxi)-40-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-42-metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil-62,63-dioxa-52- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49- pentona (0,05 g, 9% de produção) como um sólido branco. EM (El”, m/z): 966,3 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,47-5,91 (m, 4H), 5,60-5,13 (m, 4H), 4,85-3,92 (m, 3H), 3,88-3,68 (m, 4H), 3,60-3,53 (m, 1H), 3,46-3,29 (m, 10H), 3,25-3,19 (m, 1H), 2,97-2,84 (m, 2H), 2,76- 2,53 (m, 4H), 2,35-1,83 (m, 8H), 1,80-1,64 (m, 12H), 1,53-1,16 (m, 9H), 1,14-0,82 (m, 18H), 0,67-0,57 (m, 1H). Exemplo 13: Síntese de (21E,23E,25E,26E,40R,418,42R,43R,45R, 478,50S,51R,52R,618)-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxi- etóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l-50-[(18S)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi- 3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-52-metóxi-40,41,42,43,53,54-he- xametil-72,73-dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(53),26 (54)-tetraeno-55,56,57,58,59-pentona (1-33):

OH O —o. o . ss ro») 7 o SW

SS N O, = dO o. d .

LL . Aenos 1-33

Esquema sintético: Ho

SEASTPESTAS US Ô P Amo ) ras Nor Procedimentos e caracterização:

[00350] Hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,19 g, 1,02 mmols) foi adicionado a uma mistura de rapamicina (0,31 g, 0,34 mmols) e he- xaetileno glicol (2 mL) em THF (6 mL) a 15 ºC. A mistura resultante foi agitada a 15 ºC durante 17 horas, em seguida a mistura de reação foi diluída com EtOAc (200 mL) e ajustada para o pH 9 usando solução de NaHCO; aquoso saturado (cerca de 100 mL). A camada orgânica foi concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 3:2). O solvente foi em seguida removido por liofilização. (21E,23E,25E,26E,40R,41S ,42R43R 45R, 47S,50S8,51R,52R,61S)-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxietó- xi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxil-5O-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metó- xi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-52-metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72, 73-dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(53),26(54)-tetraeno- 55,56,57,58,59-pentona (1-33: 0,21 g, 51% de produção) foi obtida co- mo um sólido branco. EM (El*, m/z): 1186.8 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,39-5,94 (m, 4H), 5,55-5,14 (m, 4H), 4,93-3,75 (m, 2H), 3,73-3,71 (m, 2H), 3,67-3,55 (m, 22H), 3,48-3,44 (m, 1H), 3,41- 3,16 (m, 12H), 2,98-2,86 (m, 2H), 2,75-2,69 (m, 2H), 2,59-2,44 (m, 1H), 2,34-2,21 (m, 1H), 2,11-1,97 (m, 4H), 1,90 (s, 3H), 1,78-1,54 (m, 13H), 1,50-1,12 (m, 9H), 1,08-0,83 (m, 18H), 0,71-0,62 (m, 1H).

Exemplo 14: Síntese de (21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37R, 398S,428,43R,44R,538)-43,53-di-hidróxi-41-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]- 42-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 44-metóxi-32,33,34,35,45,46-hexametil-64,65-dioxa-54-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(45),26(46)-tetraeno-47,48,49,50,51-pentona (1-18): a oH o AP IO oo. MZ ” N o. o O OH = Êo É SS 1 [e

O

HO o 1-18 Esquema sintético: 7 PP OH o, S oH o S o —O, a —O., > " í ” o 6 HO . O o SORA Or : p-TsSOH aos o THF o do É dHo 5 118 LL d Procedimentos e caracterização:

[00351] Hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,187 g, 0,98 mmols) foi adicionado a uma mistura de rapamicina (0,3 g, 0,33 mmols) e dieti- leno glicol (2 mL) em THF (6 mL) a 10 ºC. A mistura resultante foi agi- tada a 10 ºC durante 17 horas, em seguida a mistura de reação foi di- luída com EtOAc (100 mL) e ajustada para o pH 9 usando solução de

NaHCO; aquoso saturado (cerca de 50 mL). A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por fase reversa (CH3;CN/água pura = 3:2). Os solventes foram removidos por liofiliza- ção, produzindo (21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37R,39S 428, 43R,44R,53S)-43,53-di-hidróxi-41-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-42-[(1S)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-44-metóxi-32, 33,34,35,45,46-hexametil-64,65-dioxa-5S4-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(45),26(46)-tetraeno-47,48,49,50,51-pentona (1-18: 0,126 9, 37% de produção) como um sólido branco. EM (El*, m/z2): 1010,7 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,40-5,95 (m, 4H), 5,55-5,14 (m, 4H), 4,85-4,17 (m, 2H), 4,05-3,57 (m, 10H), 3,53-3,15 (m, 12H), 2,97- 2,89 (m, 2H), 2,76-2,48 (m, 4H), 2,36-1,84 (m, 7H), 1,79-1,56 (m, 14H), 1,49-1,14 (m, 9H), 1,10-0,81 (m, 18H), 0,70-0,61 (m, 1H). Exemplo 15: Síntese de (21E,23E,25E,26E,31R,328,33R,34R,36R, 38S8,418,42R,43R,538)-42,53-di-hidróxi-40-[3-hidróxi-2-(hidroxi- metil)propóxi]-41-[(18S)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-43-metóxi-31,32,33,34,44,45-hexametil-65,66- dioxa-54-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(44),26(45)-tetraeno- 46,47,48,49,50-pentona (1-31):

OH O o, elas

OSS TX Ea) N O, = oO O. 1-31

Esquema sintético: Pr OH oH O o FR Ç MARION o, Oo Ô “" o 6 “o o & ss o E + no p-TSOH mol > o Ss o Ss * TA, Z o. cl no || OH OH THF Lo " fo) 9% " x 131 A

OH OH Procedimentos e caracterização:

[00352] Hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,31 g, 1,684 mmols) foi adicionado a uma mistura de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e 2- (hidroximetil) propano-1,3-diol (0,58 g, 5,4A7 mmols) em THF (10 mL) a 15 ºC. A mistura resultante foi agitada a 15 ºC durante 17 horas, em seguida a mistura de reação foi diluída com EtOAc (100 mL) e ajusta- da para o pH 9 usando solução de NaHCO; aquoso saturado (cerca de 50 mL). A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 3:2). O solvente foi removido por liofilização, produzindo (21E,23E,25E,26E, 31R,32S, 33R,34R,36R,38S,41S,42R,43R,53S)-42,53-di-hidróxi-40-[3- hidróxi-2-(hidroximetil) propóxi]-41-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]--43-metóxi-31,32,33,34,44,45-hexametil- 65,66-dioxa-5S4-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(44),26(45)-tetraeno- 46,47 ,48,49,50-pentona (1-31: 0,054 g, 9% de produção) como um só- lido branco. EM (El*, m/z): 1010,4 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 6,37-5,96 (m, 4H), 5,56-5,15 (m, 4H), 4,86-4,17 (m, 2H), 3,85-3,47 (m, 10H), 2,96-2,91 (m, 2H), 2,75-2,58 (m, 3H), 2,35-2,22 (m, 3H), 2,11-1,94 (m, 6H), 1,84-1,46 (m, 23H), 1.35-1,12 (m, 9H), 1,11-0,88 (m, 18H), 0,67-0,65 (m, 1H).

Exemplo 16: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R, 39R, 418,448,45R,46R,558)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsul- fanil)etilsulfanylI]Jetóxi]-44-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil] -46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil- 66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-21):

OH O MA ; ss —o o O o mol > ss “o S % N N O, = o o 2 à si oH 1-21 Esquema sintético: OoH O P N oH o "OS õ ” . o > " O " Do " » so (>) | Oo s Ho EN "Ro pTSOH 7 SN Ni o ss $ FT, N O, = V o À S THF do o. O,, Rs 12% 7 dos Procedimentos e caracterização:

[00353] Hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,62 g, 3,28 mmols) foi adicionado a uma mistura de rapamicina (1 g, 1,09 mmols) e 2-[2- (2-hidroxietilsulfanil)etilsulfanilJetanol (1,99 g, 10,94 mmoIs) em THF

(20 mL) a 15 ºC. A mistura resultante foi agitada a 15 ºC durante 17 horas, em seguida a mistura de reação foi diluída com EtOAc (100 mL) e ajustada para o pH 9 usando solução de NaHCO; aquoso saturado (cerca de 50 mL). A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 3:2). Os solventes foram removidos por liofilização produzindo (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R,41S8,448,45R,46R,55S)- 45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsulfanil )etilsulfanilJetóxil-44-[(1S)- 2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi -Ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47 ,48-hexametil-66,67- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-21: 0,15 g, 0,133 mmols, 12% de produção) como um sólido amarelo. EM (El*, m/z): 1086,4 [M+Na]*. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,39-5,95 (m, 4H), 5,54-5,19 (m, 4H), 4,81-4,17 (m, 2H), 3,96-3,73 (m, 4H), 3,59-3,14 (m, 12H), 2,96-2,55 (m, 14H), 2,35-1,87 (m, 6H), 1,81-1,59 (m, 13H), 1,53-1,13 (m, 11H), 1,16-0,84 (m, 18H), 0,71-0,63 (m, 1H). Exemplo 17: Síntese de Síntese de (21E,23E,25E,26E,42R,43S,44R, 45R,478,498,518,528,53R,54R,63R)-53,63-di-hidróxi-51-[2-[2-[2-[2- [2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l-52-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -5S4-metóxi- 42,43,44,45,55,56-hexametil-74,75-dioxa-64-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(55),26(56)-tetraeno-57,58,59,60,61-pentona (1-26):

OH O o, IEL. - SS

CC N O, = dO o AAA 1-26

Esquema sintético:

HO | oH O Ny : oH O ' MAR ". o o MOSES mo (> A» “o SW Pp pTsOH no 2 o S : + NJ —=—" o, R A? Y O THF,23%, 2h N o, —, N O... = ? 24% o Fo Sd > Aoi Ny 26 o & Procedimentos e caracterização:

[00354] Hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,52 g, 2,73 mmols) foi adicionado lentamente a uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,55 mmols) e 2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxil etó- xiletanol (3,57 g, 10,94 mmols) em THF (10 mL). A solução resultante foi agitada a 20 ºC durante 17 horas e em seguida concentrada. O re- síduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (CH;CN/água pura = 7:3) para obter (21E,23E,25E,26E,42R,438S,44R,45R,478, 498S,518,528S,53R,54R,63R)-53,63-di-hidróxi-51-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxil-52-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-54-metóxi-42,43,44,45, 55,56- hexametil-74,75-dioxa-64-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(55),26(56) -tetraeno-57, 58,59,60,61-pentona (1-26: 0,16 g, 24% de produção) como um sólido branco.MS (El*, m/z): 1230,6[M+Nal]*. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,46 — 5,74 (m, 4H), 5,61 — 4,74 (m, 4H), 4,05-4,5 (m, 2H), 4,02 — 3,51 (m, 35H), 3,43 — 3,16 (m, 14H), 2,99 — 2,42 (m, 8H), 2,4-1,6 (m, 7H), 1,61-1,1 (m, 12H), 1,43 — 0,79 (m, 18H), 0,74 — 0,61 (m, 1H).

Exemplo 19: Síntese de (22E,24E,26E,27E,33R,348S,35R,36R,38S, 408,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hi- dróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-42-[R-2-(2-meto- xietóxi)etóxil-33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatri- ciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52- pentona (1-119) e (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S, 44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -45-metóxi-42-[S-2-(2-metoxietóxi) etóxil-33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo-hexa- triaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-120): oH O oH O —o õ. " AR SS. " o > Oo. o AN E) "o Ss PS) Ao o SE 2 % N oc NY N O,, = N O,, Io o à IO” ô. L L % * & 1-119 1-120 Esquema sintético: ES aa = ES | : | LL ; > 4 separação quiral AD E O ES " o y o

CX X 1120 S mm 4h Procedimentos e caracterização:

Etapa 1: Síntese de (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi -3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-42-[2-(2-metoxietóxi) etóxil-33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo-hexa- triaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona :

[00355] A uma mistura de rapamicina (2 g, 2,19 mmols), 2-(2-meto- xietóxi)etanol (4 mL) em THF (30 mL) foi adicionado HND-8 (240 mg, 2,19 mmols) e reação agitada a 50 ºC durante 4 h sob N2, em seguida filtrada e concentrada. O produto cru resultante foi purificada por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH3;CN: H2O = 3:1) para forne- cer (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)- 44 ,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-45-metóxi-42-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-33,34,35,36,46,47- hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46), 27(47)- tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (0,6 g, 27% de produção) como um só- lido amarelo claro. ESI-EM (El*, m/z): 1024,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,56 — 5,82 (m, 4H), 5,47 (ddd, J = 37,4, 17.7, 9,4 Hz, 2H), 5,31 — 5,06 (m, 2H), 4,82 — 4,50 (m, 1H), 4,32 — 3,94 (m, 2H), 3,92 — 3,71 (m, 2H), 3,70 — 3,44 (m, 8H), 3,43 — 3,26 (m, 12H), 3,20 (dd, J = 27,0, 18,2 Hz, 1H), 3,00 — 2,22 (m, 7H), 2,18 — 1,56 (m, 19H), 1,54 — 1,25 (m, 7H), 1,24 — 0,81 (m, 19H), 0,67 (dd, J = 23,8, 11,9 Hz, 1H). Etapa 2: Síntese de (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-4-hidró- xi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-42-[R-2-(2-metoxie- tóxi)etóxil-33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-119) e (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R, 54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-42-[S-2-(2-metoxietóxi)etóxi]- 33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo-hexatri-

aconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-120):

[00356] (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45 R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo -hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-42-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-33,34,35,36, 46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46), 27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (0,095 g, 0,095 mmols) foi purificada por meio de HPLC quiral prep para fornecer (22E,24E,26E, 27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi- 43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45- metóxi-42-[R-2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-33,34,35,36,46,47-hexametil- 64 ,65-dioxa-55-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno- 48,49,50,51,52-pentona (1-119: 13,2 mg, 14% de produção) e (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S ,40S,43S,44R,45R,54R)- 44 ,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-45-metóxi-42-[S-2-(2-metoxietóxi)etóxil-33,34,35,36,46,47- hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27 (47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-120: 18,1 mg, 19% de produ- ção), ambos como sólidos brancos.

[00357] O método de separação quiral é listado abaixo: Instrumento : Gilson-281 Coluna : CHIRALPAK IC 20x250mm, 10um (Daicel) Column temperatura : 35ºC Fase móvel : n-Hexano:Etanol = 60:40 Taxa de fluxo : 50 ml/min Comprimento de onda de detecção : 214 nm Tempo de ciclo : 18min Solulção de amostra : 95 mg dissolvidos em 7ml de Metanol Volume de injeção : 0,5 ml (carga: 7,1 mg/injeção)

[00358] 1-119: ESI-EM (El*, m/z): 1024,4 [M+Na]". *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,92 (m, 4H), 5,75 — 5,05 (m, 4H), 4,49 (s, 1H),

4.28 (s, 1H), 4,15 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 3,99 (t, J = 13,3 Hz, 1H), 3,88 — 3,73 (m, 1H), 3,69 — 3,46 (m, 8H), 3,45 — 3,29 (m, 11H), 3,22 (dd, J = 10,1, 6,5 Hz, 2H), 2,99 — 2,77 (m, 3H), 2,68 (dt, J = 28.5, 11,1 Hz, 3H), 2,61 — 2,22 (m, 4H), 2,05 (ddd, J = 21,5, 15,3, 7,5 Hz, 5H), 1,88 — 1,65 (m, 12H), 1,53 — 1.380 (m, 7H), 1,47 — 0,78 (m, 19H), 0,73 — 0,57 (m, 1H).

[00359] 1-120: ESI-EM (El*, m/z): 1024,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,43 — 6,18 (m, 2H), 6,13 (dd, J = 15,0, 10,0 Hz, 1H), 5,91 (dd, J = 31,6, 10,6 Hz, 1H), 5,56 — 5,36 (m, 2H), 5,27 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 5,16 (dt, J = 18.2, 9.1 Hz, 1H), 4,78 (s, 1H), 4.20 (dd, JU = 21,1, 11,1 Hz, 1H), 3,96 — 3,71 (m, 3H), 3,70 — 3,43 (m, 9H), 3,42 — 3,26 (m, 14H), 2,98 — 2,87 (m, 1H), 2,77 — 2,62 (m, 3H), 2,58 (dd, J = 16.9, 6,3 Hz, 1H), 2,34 (d, J = 13,4 Hz, 2H), 2,15 — 1,84 (m, 5H), 1,83 — 1,64 (m, 7H), 1.34 (dddd, J = 22,7, 19,4, 18,1, 9.1 Hz, 12H), 1,46 — 0,80 (m, 19H), 0,66 (dt, J = 16.8, 8,4 Hz, 1H). Exemplo 20: Síntese de (23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,36S, 39S,418S,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-41-[(1R)-2-[(1S8,2R,3R)-3- hidróxi-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-40-[[(28S,5S)-5-(hidroxi- metil)-1,4-dioxan-2-il]metóxi]-46-metóxi-32,33,34,35,47,48-hexa- metil-68,69-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(47),28(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-118):

OH O o o [x o

PE CE a N O, = qo x “ou 1-118 Esquema sintético:

or ST VORA EE, oH O DÁ Os ou DE memo RE da EE VIE “oO “ouPro cedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (S)-1-(benzilóxi)-3-cloropropan-2-ol:

[00360] Uma solução de (2R)-2-(clorometil)oxirano (1 g, 10,81 mmols) e fenilmetanol (2,34 g, 21,62 mmols) em DCE (10 mL) foi agi- tada em ta durante 1h, em seguida resfriada para O ºC, eterato de tri- fluoreto de boro (76,7 mg, 0,54 mmols) foi adicionado lentamente. À mistura de reação foi deixada aquecer para ta, agitada durante a noite em seguida refluxada durante 2 h. Sob resfriamento, a mistura de rea- ção foi diluída com solução aquosa de NaHCO; a 10% e extraída com EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram seca- das sobre Na2SO;. anidroso, filtradas, e concentradas. O resíduo resul- tante foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (PE: EtO- Ac= 10: 1) para fornecer o produto desejado (1,8 g, 86% de produção) como um óleo incolor. ESI-EM (El*, m/z): 218,1 [M+H2O]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 7,36-7,27 (m, 5H), 4,64 (s, 2H), 3,99-3,95 (m, 1H), 3,64-3,55 (m, 4H), 2,75 (d, J = 6,0 Hz, 1H). Etapa 2: Síntese de 4-metilbenzenossulfonato de (S)-2-((S)-1- (benzilóxi)-3-cloropropan-2-ilóxi)-3-hidroxipropila:

[00361] Uma solução de (2S)-1-benzilóxi-3-cloro-propan-2-ol (6 9, 29,9 mmols) e 4-metilbenzenossulfonato de [(2S)-oxiran-2-il]metila (6,83 g, 29,9 mmols) em DCE (100 mL) foi agitada em ta durante 1h,

em seguida resfriada para 0ºC e eterato de trifluoreto de boro (254,6 mg, 1,79 mmols) foi adicionado lentamente. A reação foi aquecida pa- ra ta, agitada em ta durante a noite, refluxada durante 2h, em seguida resfriada para ta. EtOAc (100 mL) e água (50 mL) foram adicionados. As camadas foram separadas e a camada aquosa também extraída com EtOAc (100 mL x 2) As camadas orgânicas combinadas foram em seguida lavadas com água (2 x 50 mL) e salmoura (50 mL), secadas sobre Na2SO. anidroso, filtradas e concentradas sob vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em sílica-gel (8% de EtOAc em PE) para fornecer [(28S)-2-[(1S)-1-(benziloximetil)-2-cloro-etóxi]-3- hidróxi-propil] 4-metilbenzenossulfonato de (4,4 g, 34% de produção) como um óleo incolor. ESI-EM (El*, m/z): 429,1 [M+H]*. Etapa 3: Síntese de ((2R,5R)-5-(benziloximetil)-1,4-dioxan-2-il) me- tanol:

[00362] “Uma solução de 4-metilbenzenossulfonato de [(2S)-2-[(1S)- 1-(benziloximetil)-2-cloro-etóxi]-3-hidróxi-propil] (0,78 g, 1,82 mmolis), NaOH (0,22 g, 5,46 mmols) in H2O (10 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 2,5 h, em seguida aquecida a 90ºC durante 4 h, res- friada para ta e agitada durante a noite, em seguida aquecida a 90 ºC durante mais 2 h. A mistura de reação foi acidificada com solução aquosa de HCl a 1N e extraída com DCM (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de NaHCO; aquo- So, secadas sobre Na2SOa. anidroso, filtradas e concentradas para ob- ter [(2R,5R)-5-(benziloximetil)-1,4-dioxan-2-il]|metanol (4,4 g, 41% de produção) como um óleo incolor. Este material foi usado sem outra purificação. ESI-EM (El*, m/z): 239,1 [M+H]". Etapa 4: Síntese de ((2R,5R)-1,4-dioxano-2,5-di-il)dimetanol:

[00363] A uma solução de [(2R,5R)-5-(benziloximetil)-1,4-dioxan-2- illmetanol (2,4 g,10 mmols) em MeOH (30mL) foi adicionado Pd/C (0,86g). A mistura foi deixada agitar em ta durante a noite sob um ba-

lão de hidrogênio, em seguida filtrada através de um curte tampão de celite, lavagem com etanol. As lavagens orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer (2R,5R)-1,4- dioxano-2,5-di-il)dimetanol (1,2 g, 74% de produção) como um óleo. ESI-EM (El*, m/z): 149,2 [M+H]*. Etapa 5: Síntese de (23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,36S, 398,418,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-41-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3- hidróxi-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-40-[[(2S,5S)-5-(hidroxi- metil)-1,4-dioxan-2-ilJmetóxi]-46-metóxi-32,33,34,35,47,48-hexa- metil-68,69-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(47),28(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-118):

[00364] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e hidra- to de ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,471 g, 2,73 mmols) em THF (15 mL) foi adicionado [(2R,5R)-5-(hidroximetil)-1,4-dioxan-2-il]metanol (0,81 g, 5,A7 mmols) a 25 ºC. Após agitar em ta durante 2 h, a reação foi extinta com solução fria de NaHCO; aquos e extraída com EtOAc (50 mLx 2). As camadas orgânicas combinadas foram em seguida se- cadas sobre Na2SO. anidroso, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O = 65:35) seguida por meio de cromatografia em sílica-gel (hexano:DCM:EtOAc:MeOH = 8:8:3:1) para obter (23E,25E,27E,28E, 32R,33S,34R,35R,36S,39S,418,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-41- [(1R)-2-[(18,2R,3R)-3-hidróxi-2-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-40-[[(2S, 58)-5-(hidroximetil)-1,4-dioxan-2-il]metóxi]l-46-metóxi-32,33,34,35,47, 48-hexametil-68,69-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(47), 28(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-118: 80 mg, 14% de produ- ção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1052,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,46 — 5,86 (m, 4H), 5,69 — 5,06 (m, 4H), 4,16 (ddd, J = 56,1, 52,0, 39.5 Hz, 3H), 3,94 — 3,49 (m, 10H), 3,48 — 3,11 (m, 12H), 3,08 — 2,46 (m, 7H), 2,40 — 1,93 (m, 7H), 1,73 (dd, J =

16.9, 10,5 Hz, 13H), 1,52 — 1,17 (m, 8H), 1,16 — 0,79 (m, 18H), 0,65 (d, J=17,5 Hz, 1H). Exemplo 21: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39S, 418,43R,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxietóxi) etóxi]l-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-116) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R, 37R,398,418,43S,44S,45R,46R, 55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2- hidroxietóxi)etóxi]-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48- hexametil-66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-117): 2a Cc WAV O Ss “x NO &

FIST FAS y Y > + 1-116 117 Esquema sintético: so o o S o Coasean” “ L O, SS > - do o o O ES separação quiral bL +

Ti oH O ÃO - o ô : * uno o " ó . O, VOSDUHO OX Bar) SS a. aU E 3X » Y Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,398,41S, 448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-414- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatri- ciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53- pentona:

[00365] “Uma solução de everolimo (1 g, 1,04 mmols) em THF (15 mL) foi desgaseificada com N2. Ácido p-toluenossulfônico (0,895 g, 5,20 mmols) foi adicionado a O ºC seguido por 2-(2-hidroxietóxi)etanol! (2,8 mL). A mistura resultante foi agitada a 0ºC durante 0,5 h sob N,., em seguida a 25ºC durante 3 h. A reação foi vertida em NaHCO; satu- rado (40 mL), extraída com EtOAc (30 mL), lavada com água (30 mL x 2) e salmoura (40 mL) em seguida secada sobre Na2SO. anidroso, fil- trada e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por normal phase cromatografia em sílica-gel (MeOH: DCM = 1:15) em seguida cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN: H2O= 7: 3) para obter (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S,418,448S 45R,46R,55R)- 45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- (2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil|-46-metóxi- 34,35,36,37 47 ,48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (0,43 g, 40% de produção) como um sólido amarelo claro. ESI-EM (El*, m/2):1053,9 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 56,47 — 5,85 (m, 4H), 5,40 (ddd, J

= 99,7, 51,9, 29,1 Hz, 4H), 4,80 (d, J = 22,0 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 42,5 Hz, 1H), 4,05 — 3,54 (m, 13H), 3,52 — 3,01 (m, 14H), 2,67 (ddd, J = 46,8, 27,3, 6,8 Hz, 4H), 2,17 (dd, J = 82,0, 45,9 Hz, 6H), 1,70 (dt, J = 21,0, 15,8 Hz, 12H), 1.34 (dd, JU = 105,2, 26,3 Hz, 11H), 1,15 — 0,79 (m, 18H), 0,76 — 0,64 (m, 1H). Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S, 43R,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]- 44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51, 52,53-pentona (1-116) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S, 418,438,44S8,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxietóxi) etóxil-44-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-117):

[00366] 90 mg de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,398S,418, 448 ,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxietóxi)etóxil-44- [[1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resul- tantes foram obtidos: (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S 418, 43R,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-44- [[1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (l- 116: 14 mg, 16% de produção) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R, 37R,398,418,43S,448S ,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-(2-hidroxi- etóxi)etóxil-44-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-

hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa- B6-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51, 52,53-pentona (1-117: 15 mg, 17% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00367] O método de separação quiral é listado abaixo: Coluna : CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 5,0 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 11,5 mg/ml Injeção : 10ml Fase móvel : Hexano/EtoH=50/50(V/V) Taxa de fluxo : 60 mIl/min Comprimento de onda : UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00368] 1-116: ESI-EM (El*, m/2):1054,0 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, , CDCI3) 5 6,42 — 5,90 (m, 4H), 5,79 (ddd, J = 51,6, 30,9, 16.6 Hz, 1H), 5,54 — 5,08 (m, 4H), 5,03 — 4,88 (m, 1H), 4,74 (d, J = 61,6 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 57,6, 29,0 Hz, 2H), 3,99 (dd, J = 26,5, 6,0 Hz, 1H), 3,89 — 3,55 (m, 12H), 3,54 — 2,96 (m, 15H), 2,87 — 2,47 (m, 4H), 2,38 — 1,92 (m, 8H), 1,86 — 1,67 (m, 11H), 1,51 — 1.30 (m, 6 H), 1,14 — 0,80 (m, 18H), 0,76 — 0,64 (m, 1H).

[00369] 1I-117: ESI-EM (El*t, m/2):1053,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, , CDCI3) 5 6,41 — 8,22 (m, 2H), 6,13 (dd, J = 15,1, 10,1 Hz, 1H), 5,94 (dd, J = 22,3, 10,8 Hz, 1H), 5,52 (dt, J = 18,4, 9,2 Hz, 1H), 5,41 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,12 (dt, JU = 46,3, 5,6 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 4.23 — 4,14 (m, 1H), 3,91 — 3,52 (m, 15H), 3,49 — 3,25 (m, 12H), 3,23 — 3,03 (m, 3H), 2,94 — 2,80 (m, 1H), 2,65 (ddd, J = 23,4, 16,9, 6,0 Hz, 3H), 2,39 — 2,15 (m, 2H), 2,16 — 1,85 (m, 5H), 1,82 — 1,64 (m, 10H), 1,47 (dd, J = 26,8, 15,9 Hz, 5H), 1,38 — 1,16 (m, 6H), 1,10 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,07 — 1,03 (m, 3H), 1,00 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,88 (ddd, J = 34,0, 16,9, 5,0 Hz, 6H), 0,71

(dd, J = 23,9, 11,8 Hz, 1H). Exemplo 22: Síntese de (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S, 458,47R,48S,49R,50R,59R)-49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-(2-hidroxi- etóxi)etóxiletóxiletóxi]l-48-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-50-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexa- metil-70,71-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)- tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (1-114) e (21E,23E,25E,26E,38R, 39S,40R,41R,43S8,458,478,488S,49R, —50R,59R)-49,59-di-hidróxi-47- [2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l etóxil-48-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-4- (2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-5S0-metóxi-38,39, 40,41,51,52-hexametil-70,71-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(51),26(52)-tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (1-115): oH O OH Q nO Y o "AA " se O o ô Ro Ho o fo) s " . o SON A ) —r Ss O E S A o N N O,,. = HO" o ã O O. O.

L RX ten) HO AÇO 1-114 1-115 Esquema sintético:

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AS E VR seme = gq DOS e) to o EO RA E al OL À O 4 Fretaato, SNS CCZ on) Teo ES * É to ns TO ma E

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: : Síntese de (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,438,45S, 48S,49R,50R,59R)-49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etó- xiletóxiletóxil-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-50-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexametil- 70,71-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)-tetra- eno-53,54,55,56,57-pentona:

[00370] Uma mistura de everolimo (1 g, 1,04 mmolis), 2-[2-[2-(2-hidro- xietóxi)etóxiletóxiletanol (4,05 g, 20,87 mmols) e ácido p-toluenossul- fônico (0,898 g, 5,22 mmols) em THF (20 mL) foi agitada a 20 ºC for 2 h. A mistura foi em seguida vertida em NaHCO; saturado frio (30 mL), extraída com EtOAc (50 mL x 3) e as camadas orgânicas combinadas com água e salmoura em seguidas secada sobre Na2SOa. anidroso, filtradas e concentradas. O resíduo resultante foi purificado por croma- tografia de fase reversa (C18, CH;CN: H2O= 6:4) para fornecer (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,438S,458,48S,49R,50R,59R)- 49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxi]l-48-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-50- metóxi-38,39,40,41,51,52-hexametil-70,71-dioxa-60-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)-tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (0,25 g, 21% de produção) como sólido branco. ESI-EM (EI”*, m/2):1142,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 5,85 (m, 4H), 5,78 (s, 1H), 5,60 — 4,98 (m, 4H), 4,22 (t, J = 27,1 Hz, 1H), 3,97 (dd, J = 17,7, 6,4 Hz, 1H), 3,87 — 3,54 (m, 21H), 3,51 — 3,03 (m, 15H), 2,72 — 2,45 (m, 3H), 2,28 (s, 6H), 2,16 — 1,96 (m, 4H), 1,89 — 1,56 (m, 10H), 1,51 — 1,47 (m, 8H), 1,47 — 0,81 (m, 18H), 0,78 — 0,62 (m, 1H). Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,438,45S, 47R,48S,49R,50R,59R)-49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxiletóxil-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi -ciclo-hexil]-1-metil-etil]-50-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexametil-

70,71-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)- tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (1-114) e (21E,23E,25E,26E,38R, 398,40R,41R,438,458,47S,48S,49R,50R, 59R)-49, 59-di-hidróxi-47- [2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxi]l-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4- (2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-50-metóxi- 38,39,40,41,51,52-hexametil-70,71-dioxa-60-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(51), 26(52)-tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (1-115) :

[00371] 1,5 g de (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,438,45S, 48S,49R,50R,59R)-49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi] etóxiletóxi]l-48-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-5S0-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexametil-70,7 1-dioxa- 60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)-tetraeno-53,54,55, 56,57-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica- gel (hexano:DCM:EtOAc:MeOH = 8:8:3:1,2) para obter (21E,23E,25E, 26E,38R,39S,40R,41R,43S,458,47R,48S,49R,50R,59R)-49,59-di- hidróxi-47-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxil-48-[(1R)-2-[(1S,3R, 4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-50-metóxi- 38,39,40,41,51,52-hexametil-70,7 1-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(51),26(52)-tetraeno-53,54,55,56,57-pentona (1-114: 300 mg, 20% de produção) e (21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,458S, 478 488 ,49R,50R,59R)-49,59-di-hidróxi-47-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxiletóxi]l-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-5S0-metóxi-38,39,40,41,51,52-hexametil-70,71- dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(51),26(52)-tetraeno- 53,54,55,56,57-pentona (1-115: 563 mg, 38% de produção) como um sólido brancos.

[00372] “Condições de análise quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC-3(IC3OCE-NJ008)

Tamanho da coluna: 0,46 cm 1.D. x 15 cm L Injeção: 20,0 ul Fase móvel: Hexano/EtoH=60/40(V/V) Taxa de fluxo: 1,0 ml/min Comprimento de onda: UV 254nm Temperatura: 35 ºC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20AT

[00373] 1-114: ESI-EM (El*t, m/2):1142,5 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,91 (m, 4H), 5,60 — 5,08 (m, 4H), 4,19 (dd, J = 43,8, 32,6 Hz, 1H), 3,96 (dd, J = 27,1, 6,3 Hz, 1H), 3,85 — 3,54 (m, 21H), 3,53 — 3,01 (m, 12H), 2,93 — 2,80 (m, 1H), 2,75 — 2,45 (m, 3H), 2,30 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 2,03 (dd, J = 37,0, 32,8 Hz, 13H), 1,84 — 1,69 (m, 12H), 1,50 — 1,48 (m, 5H), 1,16 — 0,82 (m, 18H), 0,71 (dt, J = 23,8, 12,1 Hz, 1H).

[00374] 1-115: ESI-EM (El*t, m/2):1142,4 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,36 (dd, J = 14,7, 10,9 Hz, 1H), 8,23 (dd, J = 14,7, 10,6 Hz, 1H), 6,10 (dd, J = 15,0, 10,5 Hz, 1H), 5,92 (dd, J = 45,2, 10,5 Hz, 1H), 5,61 (s, 1H), 5,43 (dd, J = 15,6, 9.6 Hz, 2H), 5,21 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 5,10 (dd, J = 9,9, 5,9 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,10 — 3,95 (m, 1H), 3,84 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 3,80 — 3,49 (m, 21H), 3,48 — 3,13 (m, 12H), 3,11 — 3,01 (m, 1H), 2,73 — 2,50 (m, 3H), 2,34 — 2,19 (m, 2H), 2,01 (ddd, J = 62,0, 34,6, 28.2 Hz, 12H), 1,80 — 1,54 (m, 10H), 1,51 — 1,37 (m, 5H), 1,35 — 1,12 (m, 6H), 1,05 (dd, J = 6,4, 5,0 Hz, 6H), 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,91 — 0,82 (m, 6H), 0,74 — 0,67 (m, 1H).

Exemplo 23: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S, 408,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-(5-hidroxipentóxi)-45- metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-65,66-dioxa-55-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona

(1-113):

OH O o. o ANS : 2 NV N. O, = o o. e 1-113 Esquema sintético: oH O ” o o o d& -. N : 5) » a Ho mo > r o o q no O so SÍ . : PTSOH, THF Ce es 0-25ºC,3h O" o. o 28% "o. O zo 113 CAS [o oxPr ocedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,348,35R,36R,388,40S, 438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidró- xi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-(5-hidroxipentóxi)-45-metó- xXi-33,34,35,36,46,47-hexametil-65,66-dioxa-55-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-113):

[00375] Auma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) em THF (10 mL) foi adicionado hidrato de ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,52 g, 2,73 mmols) e pentano-1,5-diol (3 mL). A solução resultante foi agi- tada em ta durante 2 h, em seguida vertida em solução fria de NaHCO; aquoso e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi con- centrada e purificada por cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O de 10% a 72% de produção) para fornecer (21E,23E,25E, 26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S ,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-

43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42- (5-hidroxipentóxi)-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-65,66-dioxa- B5-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno- 48,49,50,51,52-pentona (1-113: 150 mg, 28% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/2):1008.0 [M+Na]*. *HRMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,82 (m, 4H), 5,58 — 5,37 (m, 2H), 5,32 — 5,02 (m, 2H), 4,78 (t, J = 25,9 Hz, 1H), 4,31 — 4,08 (m, 1H), 4,00 — 3,53 (m, 5H), 3,53 — 3,05 (m, 12H), 2,99 — 2,80 (m, 2H), 2,77 — 2,51 (m, 3H), 2,48 — 2,23 (m, 2H), 2,15 — 1,89 (m, 4H), 1,89 — 1,16 (m, 32H), 1,45 — 0,78 (m, 18H), 0,65 (dt, J = 24,1, 12,0 Hz, 1H).

Exemplo 24: Síntese de (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S, 438,45R,46S,48R,49R,58R)-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-36,37,38,39, 50,51-hexametil-45-(1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2-ilmetóxi)-72,73- dioxa-59-azatriciclo-hexatriaconta-28,30,32(50),33(51)-tetraeno- 52,53,54,55,56-pentona (1-111) e (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R, 39R,418,438,458,46S,48R,49R,58R)-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -49-metóxi- 36,37,38,39,50,51-hexametil-45-(1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2- ilmetóxi)-72,73-dioxa-59-azatriciclo-hexatriaconta-28,30,32(50),33 (51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-112): oH O PAR VÃ o : mA o ll. CO o > OC o > & - Lo Lo) 111 1-112 Esquema sintético:

» LÃ 4 o, ô. . o, | E o A 2) D o B o ” o TEOHHO, THF Y

SA À

CO o o o o Ho o, Ô. . o, ô. . meomgão a O OC DN % % o.

PV À “O O Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 46S,48R,49R,58R)-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi -3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-36,37,38,39,50,51- hexametil-45-(1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2-ilmetóxi)-72,73-dioxa- 59-azatriciclo-hexatriaconta-28,30,32(50),33(51)-tetraeno- 52,53,54,55,56-pentona:

[00376] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e hidra- to de ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,471 g, 2,73 mmols) em THF (15 mL) foi adicionado 1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2-ilmetano!l (2,25 9, 10,9 mmols) a 25 ºC. A mistura resultante foi agitada em ta durante 2 h, em seguida vertida em solução aquosa de NaHCO; gelada e extraí- da com EtOAc. A camada orgânica foi em seguida em seguida secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN:H2O = 7:3) para obter (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,418,438,46S,48R, 49R,58R)-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-36,37,38,39,50,51-hexametil-45- (1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2-ilmetóxi)-72,73-dioxa-59-azatriciclo-

hexatriaconta-28,30,32(50),33(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (70 mg, 11% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z2):1110,5 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 5,82 (m, 4H), 5,54 — 5,04 (m, 4H), 4,72 (d, J = 22,1 Hz, 1H), 4,35 — 4,09 (m, 1H), 3,92 — 3,51 (m, 18H), 3,48 — 3,03 (m, 14H), 2,99 — 2,51 (m, 5H), 2,34 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 2,04 (d, J = 62,6 Hz, 4H), 1,72 (ddd, J = 43,8, 30,6, 28,9 Hz, 12H), 1,53 — 1,17 (m, 10H), 1,14 — 0,81 (m, 18H), 0,70 — 0,62 (m, 1H).

Etapa 2: Síntese de (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S, 438,458,46S,48R,49R,58R)-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)- 4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-36,37,38,39, 50,51-hexametil-45-(1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2-ilmetóxi)-72,73- dioxa-59-azatriciclo-hexatriaconta-28,30,32(50),33(51)-tetraeno- 52,53,54,55,56-pentona (1-112) e (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R, 39R,418,438,45R,46S,48R,49R,58R)-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi- 36,37,38,39,50,51-hexametil-45-(1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2- ilmetóxi)-72,73-dioxa-59-azatriciclo-hexatriaconta- 28,30,32(50),33(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-111):

[00377] (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,418,438S,46S,48R,49 R,58R)-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-36,37,38,39,50,51-hexametil-45- (1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2-ilmetóxi)-72,73-dioxa-59-azatriciclo- hexatriaconta-28,30,32(50),33(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (170 mg) foi purificada por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexa- no:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:0,5) para obter (28E,30E,32E,33E,36R, 378S,38R,39R,418,43S,45S,46S ,48R,49R,58R)-48,58-di-hidróxi-46- [[1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49- metóxi-36,37,38,39,50,51-hexametil-45-(1,4,7,10-tetraoxaciclododec-2-

ilmetóxi)-72,73-dioxa-59-azatriciclo-hexatriaconta-28,30,32(50),33(51)- tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-112: 55 mg, 32% de produção) e (28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,418,43S,45R,46S,48R,49R,58R )-48,58-di-hidróxi-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-36,37,38,39,50,51-hexametil-45-(1,4,7,10- tetraoxaciclododec-2-ilmetóxi)-72,73-dioxa-59-azatriciclo- hexatriaconta-28,30,32(50),33(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1I- 111: 11 mg, 6% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00378] Método de análise quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC(ICOOCE-OL002) Tamanho da coluna : 0,46 cm 1.D. x 25 cm L Injeção: 100,0 ul Fase móvel : Hexano/EtoH=60/40 (V/V) Taxa de fluxo : 1,0 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20ATº CP-HPLC-06

[00379] 1-112: ESI-EM (El*t, m/2):1109,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,40 — 6,03 (m, 3H), 5,90 (dd, J = 37,1, 9.8 Hz, 1H), 5,54 — 5,06 (m, 4H), 4,71 (d, JU = 22,4 Hz, 1H), 4,20 (t, J = 20,9 Hz, 1H), 3,93 — 3,52 (m, 17H), 3,50 — 3,24 (m, 11H), 3,14 — 3,02 (m, 1H), 2,93 (dt, J = 31,2, 12,0 Hz, 1H), 2,63 (tdd, J = 17,0, 14,2, 5,5 Hz, 3H), 2,37 — 2,18 (m, 2H), 1,94 (ddd, J = 31,3, 24,3, 22,1 Hz, 5H), 1,71 (dt, J = 22,5, 10,1 Hz, 11H), 1,51 — 1,17 (m, 13H), 1,45 — 0,81 (m, 18H), 0,67 (dd, J = 23,7, 11,9 Hz, 1H).

[00380] 1-111: *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,46 — 5,78 (m, 4H), 5,75 — 5,14 (m, 4H), 4,58 (d, J = 31,9 Hz, 1H), 4,21 (d, J = 66,8 Hz, 1H), 3,87 — 3,47 (m, 16H), 3,43 — 3,14 (m, 10H), 2,94 (s, 1H), 2,80 — 2,54 (m, 3H), 2,26 (ddd, J = 110,3, 80,5, 42,6 Hz, 6H), 1,81 — 1,49 (m, 18H), 1,46 — 1,25 (m, 10H), 1,48 — 0,77 (m, 18H), 0,72 — 0,61 (m, 1H).

Exemplo 25: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R, 39R,418,438,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxi]-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexa- metil-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)- tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-109) e (21E,23E,25E,26E,36R, 378S,38R,39R,418,43S,458,46S,47R,48R,57R)-47,57 -di-hidróxi-45- [2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37, 38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-110): OoH O oH O MA s o MOO o. o óÃos o ds " o) “o o RL SO - “o SS - NS no CO Y Ho CO 1 Y N o. — o Õ.

L d, y y Às Los 1-109 1-110 Esquema sintético: » E LL.

mas ÃO EM o E um S Av sm AV X. X Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 468,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi] etóxil-46-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno- 51,52,53,54,55-pentona:

[00381] Uma mistura de everolimo (0,5 g, 0,522 mmols), 2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletano! (3,92 g, 26,09 mmols) e mono-hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,45 g, 2,61 mmols) em THF (10 mL) foi agitada a ºC durante 2 h. A mistura foi em seguida vertida em NaHCO; satu- rado gelado (30 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura em segui- da secadas sobre Na2SOa. anidroso, filtradas e concentradas. O resí- duo resultante foi purificado por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O= 6,5: 3,5) para fornecer (21E,23E,25E,26E,36R, 378S,38R,39R,418,438S,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxil-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil- 68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno- 51,52,53,54,55-pentona (0,155 g, 28%) como sólido branco. ESI-EM (El*, m/2): 1098,4 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,87 (m, 4H), 5,63 — 5,34 (m, 2H), 5,32 — 5,00 (m, 2H), 4,85 (s, 1H), 4,35 — 4,09 (m, 1H), 4,05 — 3,49 (m, 18H), 3,49 — 3,01 (m, 14H), 2,66 (dddd, J

= 31,3, 24,8, 21,2, 13,0 Hz, 4H), 2,33 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,06 (dd, J = 39,9, 10,6 Hz, 3H), 1,77 — 1,53 (m, 13H), 1,51 — 1,14 (m, 10H), 1,14 — 0,81 (m, 18H), 0,71 (dd, JU = 23,8, 11,9 Hz, 1H). Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 458,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxi]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil- 68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)- tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-110) e (21E,23E,25E,26E,36R, 378S,38R,39R,418,438,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45- [2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxil-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hidro- xietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49, 50-hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25 (49), 26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-109):

[00382] 170 mg de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,418S, 438 ,46S ,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi] etóxil-46-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55- pentona purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros re- sultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexa- no:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:0,8) para obter (21E,23E,25E,26E,36R, 378S,38R,39R,418,43S,458,46S ,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2- [2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]-46-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)- 3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexame- til-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25 (49),26(50)-tetra- eno-51,52,53,54,55-pentona (1-110: 37 mg, 21% de produção) e (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,418,43S,45R,46S,47R,48R,57R )-47,57-di-hidróxi-45-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-46-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-

metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (l- 109: 33 mg, 19% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00383] Método de análise quiral: Coluna: CHIRALPAK IC(ICOOCE-OL002) Tamanho da coluna: 0,46 cm 1.D. x 25 cm L Injeção: 30,0 ul Fase móvel: Hexano/EtoH=60/40(V/V) Taxa de fluxo: 1,0 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura: 35 ºC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20ATº CP-HPLC-06

[00384] 1-110: ESI-EM (El*, m/2):1098,0 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 6,18 (m, 2H), 6,12 (dd, J = 15,0, 10,3 Hz, 1H), 5,93 (dd, J = 33,7, 10,6 Hz, 1H), 5,47 (ddd, J = 33,0, 20,8, 9,5 Hz, 2H), 5,26 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,13 (dt, J = 21,8, 10,8 Hz, 1H), 4,88 (s, 1H), 4,19 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 3,94 — 3,52 (m, 19H), 3,49 — 3,25 (m, 12H), 3,24 — 3,02 (m, 3H), 2,76 (ddd, J = 28,2, 16,6, 10,3 Hz, 3H), 2,57 (dd, J = 17,0, 6,3 Hz, 1H), 2,29 (t, J = 28,2 Hz, 2H), 2,16 — 1,85 (m, 6H), 1,74 — 1,53 (m, 10H), 1,53 — 1,16 (m, 9H), 1,45 — 1,01 (m, 8H), 1,01 — 0,82 (m, 10H), 0,71 (dd, J = 23,9, 12,0 Hz, 1H).

[00385] 1-109: ESI-EM (El*, m/2):1098,0 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,43 — 5,90 (m, 4H), 5,62 — 5,02 (m, 5H), 4,24 (d, J = 63,6 Hz, 1H), 3,97 (dd, J = 21,5, 6,8 Hz, 1H), 3,86 — 3,50 (m, 18H), 3,45 — 3,01 (m, 14H), 2,73 — 2,46 (m, 3H), 2,39 — 1,94 (m, 6H), 1,91 — 1,69 (m, 10H), 1,50 — 1,31 (m, 12H), 1,16 — 0,85 (m, 18H), 0,69 (d, J = 11,7 Hz, 1H). Exemplo 26: Síntese de (30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S, 458,47R,48S,50R,51R,60R)-50,60-di-hidróxi-48-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)- 4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-51-metóxi-

38,39,40,41,52,53-hexametil-47-(1,4,7,10,13- pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)-75,76-dioxa-61-azatriciclo- hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)-tetraeno-54,55,56,57,58-pentona (1-107): (30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S8,458,47S8,48S,50R,51R,60R) -50,60-di-hidróxi-48-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-51-metóxi-38,39,40,41,52,53-hexametil-47-(1,4,7, 10,13-pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)-75,76-dioxa-61-azatrici- clo-hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)-tetraeno-54,55, 56,57,58-pen- tona (1-108):

OH O oH O . R AR o TS í o, ô& s o, o % SS o a. mol >" — Ss ol > “o SR > o % XY o õ do o Oo . o E) XP xP 1-107 1-108 Esquema sintético: o, o Ô& a "o eo. rol" "o A p-TsOH H;yO, THF N Pr, =. WO $ 25%. 2 " & o OS o. = RC 2a A : Co

” . K À . . ADS x À o separação quiral O SS A - & . dk C 1 108 A Ho7 Pr o. GR Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S8S,45S, 48S,50R,51R,60R)-50,60-di-hidróxi-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidró- xi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-51-metóxi-38,39,40,41,52,53- hexametil-47-(1,4,7,10,13-pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)- 75,76-dioxa-61-azatriciclo-hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)- tetraeno-54,55,56,57,58-pentona:

[00386] Uma solução de rapamicina (2 g, 2,19 mmols), 1,4,7,10,13- pentaoxaciclopentadec-2-ilmetanol (3,83 g, 15,831 mmols) e mono- hidrato de ácido p-toluenossulfônico (1,88 g, 10,94 mmols) em THF (10 mL) foi agitada a 20 ºC durante 2 h. A mistura foi em seguida verti- da em NaHCO; saturado gelado (50 mL) e extraída com EtOAc (100 mL* 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, em seguida secadas em vácuo e o resíduo resultante purifi- cado por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN:H20= 8:2) para fornecer (30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,458,488, 50R,51R,60R)-50,60-di-hidróxi-48-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-51-metóxi-38,39,40,41,52,53-hexametil- 47-(1,4,7,10,13-pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)-75,76-dioxa-61- azatriciclo-hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)-tetraeno-54,55,56,57,58- pentona (80 mg, 2,6% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/2):1154,0 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,16 (tdt, JU = 40,0, 33,8, 20,7 Hz, 4H), 5,54 — 5,03 (m, 4H), 4,21 (t, J = 22,5 Hz, 1H),

3,90 — 3,46 (m, 22H), 3,44 — 3,04 (m, 12H), 2,74 (dddd, J = 27.8, 22,2, 13,7, 4,7 Hz, 5H), 2,37 — 1,56 (m, 22H), 1,50 — 1,16 (m, 8H), 1,13 — 0,81 (m, 18H), 0,67 (dd, J = 23,8, 11,9 Hz, 1H). Etapa 2: Síntese de (30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S8S,45S, 47S,48S,50R,51R,60R)-50,60-di-hidróxi-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-51-metóxi-38,39,40,41, 52,53-hexametil-47-(1,4,7,10,13-pentaoxaciclopentadec-2- ilmetóxi)-75,76-dioxa-61-azatriciclo-hexatriaconta-30,32,34(52),35 (53)-tetraeno-54,55,56,57,58-pentona (1-108) e (30E,32E,34E,35E, 38R,398S,40R,41R,438,458,47R,48S,50R, 51R,60R)-50,60-di-hidróxi- 48-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 51-metóxi-38,39,40,41,52,53-hexametil-47-(1,4,7,10,13- pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)-75,76-dioxa-61-azatriciclo- hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)-tetraeno-54,55,56,57,58-pentona (1-107):

[00387] 130 mg de (30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,438S,45S, 48S,50R,51R,60R)-50,60-di-hidróxi-48-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-51-metóxi-38,39,40,41,52,53-hexametil- 47-(1,4,7,10,13-pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)-75,76-dioxa-61- azatriciclo-hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)-tetraeno-54,55,56,57,58- pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epíme- ros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexano:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:0,5) para obter (30E,32E,34E, 35E,38R,39S,40R,41R,43S,458,478,48S,50R,51R,60R)-50,60-di- hidróxi-48-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-51-metóxi-38,39,40,41,52,53-hexametil-47-(1,4,7,10,13- pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)-75,76-dioxa-61-azatriciclo- hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)-tetraeno-54,55,56,57,58-pentona (1I- 108: 18 mg, 13% de produção) e (30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R, 41R,438,458,47R,48S,50R,51R,60R)-50,60-di-hidróxi-48-[(1R)-2-[(1S,

3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-51-metóxi-38,39,40, 41,52,53-hexametil-47-(1,4,7,10,13-pentaoxaciclopentadec-2-ilmetóxi)- 75,76-dioxa-61-azatriciclo-hexatriaconta-30,32,34(52),35(53)-tetraeno- 54,55,56,57,58-pentona (1-107: 16 mg, 12% de produção), ambos co- mo sólidos brancos.

[00388] Método de análise quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC(ICOOCE-OL002) Tamanho da coluna : 0,46 cm 1.D. x 25 cm L Injeção: 100,0 ul Fase móvel : Hexano/EtoH=60/40(V/V) Taxa de fluxo : 1,0 ml/min Comprimento de onda : UV 254 nm Temperatura : 35 oC Equipamento de HPLC : Shimadzu LC-20ATº CP-HPLC-06

[00389] 1-108: ESI-EM (El*, m/2):1153,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,31 (dt, J = 25,1, 14,5 Hz, 2H), 6,17 — 6,08 (m, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,55 — 5,37 (m, 2H), 5,26 (s, 1H), 5,16 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 28,0 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 3,93 — 3,48 (m, 25H), 3,44 — 3,26 (m, 12H), 3,20 — 3,03 (m, 1H), 2,94 (dd, J = 16,5, 7,7 Hz, 1H), 2,70 (dd, J = 17,9, 12,1 Hz, 3H), 2,56 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 2,33 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,13 — 1,84 (m, 5H), 1,81 — 1,67 (m, 8H), 1,50 — 1,17 (m, 8H), 1,14 — 0,81 (m, 20H), 0,67 (dd, J = 23,6, 11,9 Hz, 1H).

[00390] 1-107: ESI-EM (El*, m/2):1153,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,40-5,95 (m, 4H), 5,58-5,11 (m, 4H), 4,30 — 4,12 (m, 1H), 3,88-3,51 (m, 25H), 3,42-3,12 (m, 12H), 2,99 — 2,53 (m, 5H), 2,50 — 1,90 (m, 5H), 1,83 — 1,65 (m, 14H), 1,44 — 1,30 (m, 8H), 1,12 — 0,76 (m, 18H), 0,74 — 0,62 (m, 1H).

Exemplo 27: Síntese de (21E,23E,25E,26E,31R,328,33R,34R,36S, 38S,418,42R,43R,52R)-40-[bis(hidroximetil) fosforilmetóxi]-42,52-di-hidróxi-41-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-

metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-43-metóxi-31,32,33,34,44,45- hexametil-65,66-dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(44),26(45)-tetraeno-46,47,48,49,50-pentona (1-106):

OH O o o O ss Ce N O, = fa O. Ho td ou 1-106 Esquema sintético: , SS oH o O, " O o EIS os Ba(OH)>, HO, Cor pTSOH “o e Í e O a em A E) 9 PAO) % 1106 FAR ou Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de Bis(hidroximetil)fosforilmetano!:

[00391] “Ba(OH)>: (8,43 g, 49,23 mmols) foi dissolvido em 50 mL de água destilada a 60 “ºC. Sulfato de tetracis(hidroximetil)fosfônio (20 g, 49,23 mmols) foi adicionado gota a gota à solução que foi em seguida agitada a 60 ºC durante 4 h. Após BaSO, ser removido por meio de centrifugação, peróxido de hidrogênio (solução a 30%, 98,45 mmols) foi adicionado lentamente e a reação resultante agitada em temperatu- ra ambiente durante 5 h. A mistura foi lavada com clorofórmio, em se- guida o produto desejado obtido por remoção da água sob pressão reduzida (6,59, 94% de produção) como um óleo. ESI-EM (EI, m/2): 141,1 [M+H]*. *HRMN (500 MHz, DMSO-d6): 5 5,35 (bs, 3H), 3,97

(s, 6H). Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,31R,328S,33R,34R,36S,38S, 418,42R,43R,52R)-40-[bis(hidroximetil)fosforilmetóxi]-42,52-di- hidróxi-41-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-43-metóxi-31,32,33,34,44,45-hexametil-65,66-dioxa-53- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(44),26(45)-tetraeno-46,47,48,49, 50-pentona (1-106):

[00392] “Uma mistura de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols), bis(hidro- ximetil)fosforilmetanol (0,766 g, 5,A7 mmols) e hidrato de ácido 4- metilbenzenossulfônico (0,52 g, 2,73 mmols) em THF ( 20 mL) foi agi- tada a 25ºC durante 4h. EtOAc (100 mL) e água (50 mL) foram adicio- nados. A camada orgânica foi extraída com EtOAc (100 mL x 2) e as camadas orgânicas combinadas com água (2 x 50 mL) e salmoura (50 mL), em seguida secadas sobre Na2SO. anidroso, filtradas e concentra- das. O resíduo resultante foi purificado por meio de cromatografia de fa- se reversa (C18, CH;CN:H2O= 7:3) para fornecer (21E,23E,25E, 26E, 31R,328,33R,34R,36S,38S,418,42R,43R,52R)-40-[bis(hidroximetil) fosforilmetóxi]-42,52-di-hidróxi-41-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-43-metóxi-31,32,33,34,44,45-hexametil- 65,66-dioxa-53-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(44),26(45)-tetraeno- 46,47 ,48,49,50-pentona (1-106: 50 mg, 9% de produção) como um só- lido branco. ESI-EM (El*, m/2):1043,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,47 — 5,91 (m, 4H), 5,58 — 5,08 (m, 4H), 4,51 — 3,63 (m, 12H), 3,59 — 3,16 (m, 14H), 2,80 (d, J = 138,1 Hz, 6H), 2,38 — 1,91 (m, 8H), 1,50 — 0,77 (m, 35H), 0,67 (d, J= 9,0 Hz, 1H). Exemplo 28: Síntese de (22E,24E,26E,27E,35R,368S,37R,38R, 408,428,44R,458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(1S,3R, 4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi- 44-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67- dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-

50,51,52,53,54-pentona (1-104) e (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R, 38R,40S,428,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47- metóxi-44-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-35,36,37,38,48,49-hexametil- 66,67 -dioxa-57 -azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)- tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-105): OH O OoH O nm ss OR o no Rn ô ss no o À Ne o > " "“" NAO ' o SR NO “o s > 2 v & Y N. O, = N O, == dO ó. oO o. k d * N 1-104 1-105 Esquema sintético: oH O OH O AAA , AR AA, o, o x e fel —o. o A ss FO o Ss g HND+8, THF JOY o SE E o, DS me Cc a N. O,,. = 27% N O... = FANS ” EO

L oH O OH O NM O oo O [x o, o - a -o o - " chiral separation SO - “o s SO A “o S TA no CO W nO o. DS N O, = N O, = LL o

1.105 1.104 * *

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S, 458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2- metoxietóxi)etóxil-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52, 53,54-pentona:

[00393] Uma mistura de everolimo (5 g, 5,22 mmols) e 2-(2- metoxietóxi)etanol (15 mL) em THF (80 mL) foi desgaseificada com N., em seguida aquecida a 50 ºC. HND-8 (600 mg) foi adicionado e a mis- tura resultante agitada a 50ºC durante 4 h sob N>, em seguida filtrada e diluída com EtOAc. Após concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH3;CN: H2O from 0%-100% de produção) para fornecer (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S, 428 ,458 ,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2- metoxietóxi)etóxi]l-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53,54- pentona (1,5 g, 27% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/2): 1068,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,40 — 5,85 (m, 4H), 5,56 — 5,36 (m, 2H), 5,21 (ddd, J = 16,0, 11,7, 5,6 Hz, 2H), 4,21 (dd, J = 25,8, 15,5 Hz, 2H), 3,94 — 3,26 (m, 28H), 3,25 — 3,02 (m, 4H), 2,76 — 2,40 (m, 3H), 2,34 (d, J = 13,3 Hz, 2H), 2,19 — 2,06 (m, 2H), 2,01 — 1,67 (m, 13H), 1,54 — 1,30 (m, 7H), 1,45 — 0,81 (m, 18H), 0,72 (dd, J = 23,1, 11,7 Hz, 1H). Etapa 2: Síntese de (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S, 448,458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2- metoxietóxi)etóxil-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57-aza- triciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-

pentona (1-105) e (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R, 458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hi- droxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2- metoxietóxi)etóxil-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno- 50,51,52,53,54-pentona (1-104):

[00394] 120 mg de (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,408S, 428, 458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidro- xietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2-metoxie- tóxi)etóxil-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep para obter (22E,24E, 26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,428,448S,458,46R,47R,56R)-46,56-di- hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2-metoxietóxi)etóxil-35,36,37,38,48,49- hexametil-66,67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27 (49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-105: 17 mg, 20% de produ- ção) e (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,428,44R,458 ,46R, 47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]- 35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta- 22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-104: 15 mg, 16% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00395] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 2,5 cm 1.D. x 25 cm L, 10um Solução de amostra: 14 mg/ml em Fase móvel Injeção: 15 ml Fase móvel : Hexano/EtoH=50/50(V/V) Taxa de fluxo : 60 ml/min

Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00396] 1-105: ESI-EM (El*, m/2):1068,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 6,19 (m, 2H), 6,13 (dd, J = 15,1, 10,0 Hz, 1H), 5,91 (dd, J = 33,0, 10,5 Hz, 1H), 5,56 — 5,38 (m, 2H), 5,27 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,15 (dt, J = 15,2, 7,6 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,18 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,93 — 3,25 (m, 30H), 3,24 — 3,03 (m, 3H), 2,72 (dd, J = 16,7, 5,6 Hz, 2H), 2,57 (dd, J = 16,8, 6,5 Hz, 1H), 2,34 (d, J = 13,9 Hz, 2H), 2,13 — 1,84 (m, 6H), 1,82 — 1,67 (m, 7H), 1,47 (dd, J = 24,1, 16,7 Hz, 4H), 1,25 (ddd, J = 24,1, 20,2, 10,0 Hz, 7H), 1,14 — 0,81 (m, 18H), 0,72 (dd, J = 23,9, 12,1 Hz, 1H).

[00397] 1-104: ESI-EM (El*, m/2):1068,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,19 (m, 4H), 5,56 — 5,36 (m, 2H), 5,28 — 5,07 (m, 2H), 4,83 (d, J = 4,9 Hz, 4H), 4,28 (s, 1H), 4,21 — 4,09 (m, 1H), 4,04 — 3,51 (m, 15H), 3,46 — 3,29 (m, 11H), 3,27 — 2,91 (m, 5H), 2,76 — 2,42 (m, 3H), 2,31 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,18 — 1,70 (m, 13H), 1,53 — 1,19 (m, 8H), 1,16 — 0,84 (m, 18H), 0,76 — 0,60 (m, 1H). Exemplo 29: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R, 39S,418,43S,448S,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2- hidroxietilsulfonil)etilsulfonilJetóxi]-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-70,71-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-95) e (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R,418,448,45R,46R,55S)- 45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsulfonil)etilsulfonilJetóxi]-44- [(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-70,7 1-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-102):

OH O o. fe s oH O " o > o RAN Ho "o SR o, El. í

SOMOS OX CE o N o, = 2 S o! FU X WS, os | > 4 * SL Ls oH 1-95 1-102 Esquema sintético: “. oH R o d, . Dd " al O E - s TesoHHO Ho Rx . — At) E N 12% O, A E. dos AO o Rapamycin oH O oH O AR o me - » : o, ô& . ? . o x " A º o) Ns Ss no Es) 3 Oxone, MeOH O Ni = — P CÊ P OD 0-10%, 5h N o. = N o or 17% 1 " O. 1102 h * Ly oH oH O o Õ s A ok. O) o s Chiral separation » o. SN — o N. O, =

IO À 28 2 195 oH

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R, 418,448,45R,46R,558)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsul- fanil)etilsulfanilJetóxi]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil- 66,67-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona:

[00398] A uma mistura de rapamicina (1 g, 1,09 mmols), 2-[2-(2- hidroxietilsulfanil)etilsulfanilJetano! (2 g, 10,94 mmols) em THF (20 mL) foi adicionado mono-hidrato de ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,62 g, 3,28 mmols) a 15 ºC. A mistura resultante foi agitada a 15 ºC duran- te 17 h, em seguida diluída com EtOAc (100 mL) e ajustada para o pH 9 usando solução de NaHCO; aquoso saturado (cerca de 50 mL). À camada orgânica foi em seguida concentrada e o resíduo purificada por cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O = 6:4) para forne- cer (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39R,418,448,A5R,46R,55S)- 45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsulfanil )etilsulfanilJetóxil-44-[(1S)- 2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]|-46-metóxi- 34,35,36,37 47 ,48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (150 mg, 12% de produção) como um sólido amarelo. ESI-EM (El*, m/2):1086,4 [M+Na] *. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,39-5,95 (m, 4H), 5,54-5,19 (m, 4H), 4,81-4,17 (m, 2H), 3,96-3,73 (m, 4H), 3,59-3,14 (m, 12H), 2,96-2,55 (m, 14H), 2,35-1,87 (m, 6H), 1,81-1,59 (m, 13H), 1,53-1,13 (m, 11H), 1,16-0,84 (m, 18H), 0,71-0,63 (m, 1H). Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R, 418,448,45R,46R,558)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietil- sulfonil)etilsulfonilJetóxi]l-44-[(18)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48- hexametil-70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-

21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-102):

[00399] A uma solução de (21E,23E,25E,26E,34R,35S, 36R,37R,39R,418,44S ,45R,46R,558)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2- hidroxietilsulfanil )etilsulfanilJetóxi]l-44-[(18S)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47 ,48-hexametil- 66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (170 mg, 0,16 mmols) em metanol (8 mL) foi adicionada oxona (393 mg, 0,64 mmols) a O ºC. A mistura resultante foi deixada aquecer para 10 ºC e agitada durante 5 h. A reação foi fil- trada em seguida purificada por meio de cromatografia de fase reversa (C18, usando uma mistura a 5-60% de acetonitrila-água) para fornecer (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39R,418,44S,45R,46R,558S)- 45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsulfonil )etilsulfonilJetóxi]l-44-[(1S)- 2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]|-46-metóxi- 34,35,36,37 47 ,48-hexametil-70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-102, 30 mg, 17% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/2):1150,8 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,40 — 5,90 (m, 4H), 5,57 — 5,08 (m, 5H), 4,14 (s, 4H), 3,68 (tdd, J = 37,6, 33,2, 11,6 Hz, 11H), 3,48 — 3,13 (m, 20H), 2,95 (s, 2H), 2,68 (dd, J = 36,4, 30,5 Hz, 5H), 2,37 — 1,70 (m, 12H), 1,31 (dd, J = 78,6, 46,8 Hz, 7H), 1,43 — 0,81 (m, 18H), 0,67 (d, J = 11,9 Hz, 1H). Etapa 3: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S, 438,44S8,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsulfo- nil)etilsulfonilJetóxi]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil- 70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-95):

[00400] 90 mg de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39R,418S, 448 ,45R,46R,558)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-

hidroxietilsulfonil )etilsulfonilJetóxi]l-44-[(18)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47 ,48-hexametil- 70,7 1-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep para fornecer (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R, 37R,398,41S,4 38,448 ,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietilsulfonil) etilsulfonilJetóxi]l-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-70,71-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53- pentona (1-95: 15 mg, 16% de produção) como um sólido branco.

[00401] “Método de análise quiral: Coluna: CHIRALPAK IC(ICOOCD-NA012) Tamanho da coluna: 0,46 cm 1.D. x 15 cm L Injeção: 10,0 ul Fase móvel: EtoH=100% Taxa de fluxo: 0,5 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura: 35 ºC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20AD CP-HPLC-06

[00402] 1-95: ESI-EM (El*, m/2):1150,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,32 (td, J = 24,8, 14,8 Hz, 2H), 6,13 (dd, J = 14,9, 9,9 Hz, 1H), 5,98 (dd, J = 22,1, 10,3 Hz, 1H), 5,56 — 5,31 (m, 2H), 5,26 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,16 (dd, J = 11,9, 5,5 Hz, 3H), 3,92 — 3,49 (m, 11H), 3,44 — 3,17 (m, 15H), 2,93 (dd, J = 14,1, 5,5 Hz, 1H), 2,78 — 2,50 (m, 5H), 2,36 — 2,17 (m, 2H), 2,01 (ddd, J=21,5, 18,0, 9,0 Hz, 5H), 1,84 — 1,65 (m, 11H), 1,49 — 1,16 (m, 12H), 1,14 — 0,82 (m, 14H), 0,66 (dd, J = 23,8, 12,0 Hz, 1H).

Exemplo 29: Síntese de 3-[2,2-bis(2-cianoetoximetil)-3-[[(21E,23E, 25E,26E,41R,428,43R,44R,468,48S,518,52R,53R,62R)-52,62-di- hidróxi-51-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-

metil-etil]-53-metóxi-41,42,43,44,54,55-hexametil-56,57,58,59,60- pentaoxo-76,77-dioxa-67-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(54),26 (55)-tetraen-50-ilJóxilpropóxi]propanonitrila (1-101): “o SN OH DN ND: o O A

OR Ho NY Ss o N O,, > dro O. o SR » C. Queen 1-101 Esquema sintético: OH OBn TV ” PTSOH, TEA & Br KOH, BnBr & Hei SL" ' FIO totuene 190%0,24h V : SS DES tio A TARA

CN CN HO om KoH “ CN Pdc,H % CN VT +RON —> d DA 1 FA HO n 24h nn, 24h OBnN Be Bn 67% ne OH mn OH R o On O Lô o” E o TFA, DOM O ea SS -40ºC, 1h 12% N, P N O, SS HO" O, 1101 (Sa GC e

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (1-metil-2,6,7-trioxabiciclo[2,2.2]octan-4- il)metanol:

[00403] A uma solução de 2,2-bis(hidroximetil)propano-1,3-diol (20 g, 146,9 mmols) e ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,25 g, 1,47 mmols) em tolueno (200 mL) foi adicionado 1,1,1-trietoxietano (27 mL, 146,9 mmols) em refluxo. A reação foi em seguida agitada a 130 ºC até a solução tornar-se clara, algumas gotas de TEA foram adiciona- dos e a reação filtrada enquanto ainda quente. O filtrado foi resfriado, em seguida concentrado para fornecer (1-metil-2,6,7- trioxabiciclo[2,2.2]octan-4-il) metanol (20 g, 85% de produção) como cristais incolores. 'HRMN (500 MHz, DMSO-d6): 5 4,79 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 3,85 (s, 6H), 3,22 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 1,29 (s, 3H). Etapa 2: Síntese de 4-(benziloximetil)-1-metil-2,6,7- trioxabiciclo[2,2.2]octano:

[00404] —(1-metil-2,6,7-trioxabiciclo[2,2.2]octan-4-il) metanol sólido (1,5 g, 9,37 mmols) foi adicionado a uma suspensão agitada de KOH finamente emp ó (2,47 g, 44 mmols) e BnBr (1,86 g, 10,86 mmols) em DMSO (5 mL). A solução resultante foi agitada em ta durante 1h, em seguida vertida em água gelada e extraída com EtOAc, secada, filtra- da e concentrada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica gel (EtOAc:PE = 1:10) para fornecer 4-(benziloximetil)-1- metil-2,6,7-trioxabiciclo[2,2.2]octano (1,5 g, 64% de produção) como um sólido amarelo claro. ESI-EM (El*, m/2):251,1 [M+H]". *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 7,36-7,25 (m, 5H), 4,45 (s, 2H), 4,01 (s, 6H), 3,19 (s, 2H), 1,45 (s, 3H). Etapa 3: Síntese de 2-(benziloximetil)-2-(hidroximetil)propano-1,3- diol:

[00405] Uma solução de 4-(benziloximetil)-1-metil-2,6,7- trioxabiciclo[2,2.2]octano (2 g, 8 mmols) e cloreto de hidrogênio (2 mL,

2M em água) em THF (20 mL) foi agitada em ta durante a noite em seguida concentrada e purificada por cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN:HO = 1:3) para fornecer 2-(benziloximetil)-2- (hidroximetil)oropano-1,3-diol (1,3 g, 72% de produção) como um óleo amarelo claro. ESI-EM (El*, m/z): 227,1 [M+H]". *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 7,36-7,26 (m, 5H), 4,48 (s, 2H), 3,68 (s, 6H), 3,46 (s, 2H), 3,40 (bs, 3H). Etapa 4: Síntese de 3-[2-(benziloximetil)-3-(2-cianoetóxi)-2-(2- cianoetoximetil) propóxilpropanonitrila:

[00406] A uma mistura de 2-(benziloximetil)-2-(hidroximetil)propano- 1,3-diol (4,9 g, 21,686 mmols) e KOH (98 mg,1,75 mmol ) foi lentamente adicionada acrilonitrila (11,49 g, 216,56 mmols), garantindo que a tem- perature interna da reação não excedesse 30ºC. A mistura foi em se- guida agitada durante a noite em temperatura ambiente, neutralizada com solução aquosa de HCl a 1 N e extraída com EtOAc (200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com pa- gua, secadas sobre Na2SO. anidroso, filtradas e concentradas para obter 3-[2-(benziloximetil)-3-(2-cianoetóxi)-2-(2- cianoetoximetil)propóxilpropanonitrila (7 g, 84% de produção) como um sólido amarelo. ESI-EM (El*, m/z): 386,3 [M+H]*. Etapa 5: Síntese de 3-[2,2-bis(2-cianoetoximetil)-3-hidróxi- propóxilpropanonitrila:

[00407] A uma solução de 3-[2-(benziloximetil)-3-(2-cianoetóxi)-2- (2-cianoetoximetil)propóxilpropanonitrila (5 g, 12,97 mmols) em MeOH (50mL) foi adicionado Pd/C (1,59 g). A mistura foi agitada em tempera- tura ambiente durante a noite sob um balão de hidrogênio em seguida filtrada através de uma almofada de celite e lavada com etanol. A so- lução resultante foi concentrada para fornecer 3-[2,2-bis(2- cianoetoximetil)-3-hidróxi-propóxilpropanonitrila (2,6 g, 68 % de produ-

ção) como um óleo incolor. ESI-EM (El*, m/z): 298,2 [M+H]*. Etapa 6: Síntese de 3-[2,2-bis(2-cianoetoximetil)-3- [[(21E,23E,25E,26E,41R,428,43R,44R,468,488,518,52R,53R,62R)- 52,62-di-hidróxi-51-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-53-metóxi-41,42,43,44,54,55-hexametil- 56,57,58,59,60-pentaoxo-76,77-dioxa-67-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(54), 26(55)-tetraen-50-ilJóxilpropóxi]lpropanonitrila (1-101):

[00408] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) em DCM (30 mL) foi adicionado ácido 2,2,2-trifluoroacético (2,4 mL) a -40 ºC. A reação foi agitada a -40 ºC durante 10 min, em seguida 3-[2,2- bis(2-cianoetoximetil)-3-hidróxi-propóxilpropanonitrila (0,48 g, 1,64 mmols) foi adicionada. Após agitar durante mais 1h, a reação foi diluí- da com DCM (3ml) e vertida em uma solução fria de NAHCO; aquoso. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO:, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de fase reversa (C18, CH;CN:H2O = 8:2) para fornecer 3-[2,2- bis(2-cianoetoximetil)-3- [[(21E,23E,25E,26E,41R,428,43R,44R,468,488,518,52R,53R,62R)- 52,62-di-hidróxi-51-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-53-metóxi-41,42,43,44,54,55-hexametil-56,57,58,59,60- pentaoxo-76,77-dioxa-67-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(54),26(55)-tetraen-50-ilJóxilpropóxilpropanonitrila (1-101: 80 mg, 12% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1198,8 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,87 (m, 4H), 5,35 (ddd, J = 120,9, 41,2, 32,5 Hz, 4H), 4,24 (dd, J = 29,5, 16,4 Hz, 2H), 3,98 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,87 — 3,60 (m, 7H), 3,56 — 3,01 (m, 18H), 2,88 (d, J = 59,1 Hz, 2H), 2,74 — 2,42 (m, 9H), 2,34 (s, 2H), 2,23 — 1,84 (m, 5H), 1,82 — 1,65 (m, 13H), 1,53 — 1,22 (m, 10H), 1,16 — 0,84 (m, 18H), 0,72 — 0,61 (m, 1H). Exemplo 30: Síntese de

(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,428,448,478S,48R,49R,59R)- 48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]-47-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51- hexametil-71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(50),26(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-100) e (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,428,448S,46R,47S8,48R,49R,59R )-48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]-47-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51- hexametil-71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(50),26(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-64) e (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S8,448,46S,47S,48R,49R,59R) -48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]-47-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51- hexametil-71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(50),26(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-65):

oH O o o és " SS CE a N O, = O o. db oo o & 1-100 oH O te à Y » oH O o, ld mA A o a“ o, ô. NS ro) Do s -O SO 7 7 o, N eNZ e S NA 0, nd O OS o N o, =

FA o LL oo Lago Ô o OH & 1-64 1-65 Esquema sintético: Br OBn ou Ç C Pd/C, H; TT + C À Near As à, THF, 65ºC, 17h n, 24h á 52% ' Bro? E MOBN 98%

PM OH FR o ou eos Doi E A TSOH,THF — HO es l &— chiral separation 25%, 2h Ho EMO n5% NR Y >". Ss

HO O, 1-100

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HO HO

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 7-((2-(benzilóxi)etóxi)metil)-1,13-difenil-2,5,9, 12-tetraoxatridecano:

[00409] A uma solução de 2-(hidroximetil)propano-1,3-diol (2 9, 18,85 mmols) em THF (30 mL) a O ºC foi adicionado hidreto de sódio (9,05 g, 376,93 mmolis). e a reação aquecida para 50ºC durante 1 h, em seguida resfriada para ta. 2-bromoetoximetilbenzeno (40,54 9, 188,47 mmols) foi em seguida adicionado e a mistura aquecidos para 65 ºC durante 17 h. A reação foi extinta com água gelada (50 mL), em seguida, esta foi extraída com EtOAc (50 mL x 2). As camadas orgâni- cas foram lavadas com salmoura (100 mL), secadas, filtradas, concen- tradas e em seguida purificadas por cromatografia em sílica-gel (PE:EtOAC' = / 20:1) para fornecer 2-[3-(2-benziloxietóxi)-2-(2- benziloxietoximetil)propóxiletoximetilbenzeno (5 g, 52% de produção) como um óleo incolor. ESI-EM (El*, m/z): 509,0 [M+H]*. Etapa 2: Síntese de 2,2-(2-((2-hidroxietóxi)metil)propano-1,3-di- il)bis(óxi)dietanol:

[00410] Auma solução de 2-[3-(2-benziloxietóxi)-2-(2-benziloxietoxi- metil)propóxiletoximetilbenzeno (2 g, 3,93 mmols) em MeOH (20 mL) foi adicionado Pd/C (2,41 g). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite sob um balão de hidrogênio. A mistura de reação foi em seguida filtrada através de uma almofada de celite e que foi em seguida lavada com etanol. A solução resultante foi concentra- da sob pressão reduzida para fornecer 2,2'-((2-((2-hidroxietóxi)metil) propano-1,3-di-il)bis(Óxi))bis(etan-1-01) (0,92 g, 98% de produção). 1HRMN (500 MHz, CDCI3) 5 3,65 (dd, J = 5,7, 3,4 Hz, 6H), 3,53 — 3,48 (m, 12H), 2,22-2,14 (m, 1H). Etapa 3: Síntese de (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,428,44S, 478, 48R,49R,59R)-48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-

metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51- hexametil-71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(50),26 (51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-100):

[00411] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,47 g, 2,73 mmols) em THF (10 mL) foi adicionado 2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2-hidroxietoximetil)propóxiletano! (1,3 g, 5,A7 mmols). A mistura foi agitada a 25 ºC durante 2 h, em se- guida vertida em solução gelada de NaHCO; aquoso e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada, filtrada e concentrada. O resí- duo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH3;CN: H20: 7:3) seguido por cromatografia em sílica-gel (DCM:MeOH = 15:1) para fornecer (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S, 448 ,478 48R,49R,59R)-48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]l-47-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51-hexametil- 71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(50),26(51)-tetraeno- 52,53,54,55,56-pentona (1-100, 150 mg, 25% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1142,0 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 8,21 (dddd, J = 32,0, 27.8, 21,3, 10,2 Hz, 3H), 6,05 — 5,84 (m, 1H), 5,57 — 5,36 (m, 2H), 5,29 — 4,97 (m, 2H), 4,83 (s, 1H), 4,20 (dd, J = 36,3, 30,2 Hz, 1H), 4,01 — 3,66 (m, 6H), 3,62 — 3,22 (m, 29H), 3,00 — 2,43 (m, 9H), 2,36 — 1,85 (m, 9H), 1,77 — 1,51 (m, 6H), 1,52 - 1,17 (m, 9H), 1,46 — 0,79 (m, 18H), 0,65 (dt, J = 21,9, 11,0 Hz, 1H). Etapa 4: Síntese de (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,428,44S, 468,47S,48R,49R,59R)-48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2- (2-hidroxietoximetil)propóxiletóxil-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi- 37,38,39,40,50,51-hexametil-71,72-dioxa-60-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(50), 26(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-65) e

(21E,23E,25E,26E,37R,38S, 39R,40R,428,448,46R,47S,48R,49R,59R )-48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51- hexametil-71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(50), 26(51)-tetraeno-52,53,54,55,56-pentona (1-64):

[00412] 140 mg de (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,428 448, 478 ,48R,49R,59R)- 48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]l-47-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51-hexametil- 71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(50),26(51)-tetraeno- 52,53,54,55,56-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexano:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:1) para obter (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,428 448 ,46S,478 ,48R,49R,59R) -48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]l-47-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51-hexametil- 71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(50),26(51)-tetraeno- 52,53,54,55,56-pentona (1-65: 35,2 mg, 25% de produção) e (21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,428 448 ,46R,478,48R,49R,59R )-48,59-di-hidróxi-46-[2-[3-(2-hidroxietóxi)-2-(2- hidroxietoximetil)propóxiletóxi]l-47-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-49-metóxi-37,38,39,40,50,51-hexametil- 71,72-dioxa-60-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(50),26(51)-tetraeno- 52,53,54,55,56-pentona (1-64:16 mg, 11% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00413] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC

Tamanho da coluna : 2,5 cm |.D. x 25cmL Concentração da solução: 1,4 mg/ml Injeção : Tml Fase móvel : Hexano/EtoH=60/40(V/V) Taxa de fluxo : 30 ml/min Comprimento de onda : UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00414] 1-65: ESI-EM (El*, m/z): 11424 [M+Na]". *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 6,18 (m, 2H), 6,13 (dd, J = 14,9, 10,1 Hz, 1H), 5,93 (dd, J = 23,9, 11,0 Hz, 1H), 5,54 — 4,89 (m, 6H), 4,80 (s, 1H), 4,18 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,90 (s, 1H), 3,80 — 3,66 (m, 5H), 3,63 — 3,48 (m, 11H), 3,47 — 3,21 (m, 11H), 2,99 — 2,47 (m, 6H), 2,38 — 2,15 (m, 3H), 2,14 — 1,85 (m, 5H), 1,84 — 1,64 (m, 12H), 1,46 (dd, J = 28.7, 18.7 Hz, 5H), 1,35 — 1,45 (m, 7H), 1,45 — 0,81 (m, 18H), 0,66 (dd, J = 23,7, 11,8 Hz, 1H).

[00415] 11-64: ESI-EM (El, m/z): 11424 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,34 — 5,86 (m, 4H), 5,41 (ddd, J = 54,0, 26,4, 18.2 Hz, 2H), 5,16 (dd, J = 9,6, 5,0 Hz, 2H), 4,88 (s, 1H), 4,20 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,14 — 4,02 (m, 1H), 3,93 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,87 — 3,72 (m, 1H), 3,64 (d, J = 4,4 Hz, 4H), 3,57 — 3,36 (m, 14H), 3,36 — 3,22 (m, 8H), 3,21 — 3,11 (m, 1H), 2,92-2,33 (m, 8H), 2,32 — 2,11 (m, 3H), 2,11 — 1,85 (m, 5H), 1,82 — 1,63 (m, 11H), 1,48 — 1,25 (m, 9H), 1,09 — 0,72 (m, 18H), 0,66 — 0,50 (m, 1H). Exemplo 31: Síntese de (21E,23E,25E,26E,48R,49S,50R,51R,53S, 558,58S,59R,60R,69R)-59,69-di-hidróxi-57-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2- (2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]- 58-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 60-metóxi-48,49,50,51,61,62-hexametil-80,81-dioxa-70-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(61),26(62)-tetraeno-63,64,65,66,67-pentona (1-98):

OH O

MAR Y E —o. o Ô Ro mol >" " NS e H o z % N N fo) = o H % o

S

OH 1-98 Esquema sintético: oH 2 : oH O 2 OH O MA ” ? DAS o. fe s P z . o > O Pe o o ” mol > o & ? o so So eTsoH x? Y ? a? Y THF.n,2h N S O., = o Sei. Or 7 1-98 o rf lo Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,48R,49S,50R,51R,538,55S, 58S,59R,60R,69R)-59,69-di-hidróxi-57-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]- 58-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 60-metóxi-48,49,50,51,61,62-hexametil-80,81-dioxa-70-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(61),26(62)-tetraeno-63,64,65,66,67-pentona (1-98):

[00416] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e ácido

4-metilbenzenossulfônico (0,47 g, 2,73 mmols) em THF (15 mL) foi adicionado 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]letóxiletóxi] etóxiletóxiletóxiletóxiletanol (2,51 g, 5,A7 mmols) e a mistura agitada a ºC durante 2 h.

A reação foi em seguida vertida em em uma solu- ção fria de NaHCO; aquoso, que foi em seguida extraída com EtOAc.

A camada orgânica foi em seguida secada sobre Na2SO:, filtrada e concentrada.

O resíduo foi purificado por cromatografia de fase rever- sa (CH;CN: águapura= 7:3) para fornecer (21E,23E,25E,26E,48R,49S, 50R,51R,53S,558S,58S,59R,60R,69R)-59,69-di-hidróxi-57-[2-[2-[2-[2- [2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l etó- xiletóxil-58-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-8O-metóxi-48,49,50,51,61,62-hexametil-80,81-dioxa-70-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(61),26(62)-tetraeno-63,64,65,66,67-pentona (1I- 98: 115 mg, 15% de produção) como um óleo espesso.

ESI-EM (El*, m/z): 1362,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,40 — 5,83 (m, 4H), 5,55-5,35 (m, 2H), 5,32 — 5,03 (m, 2H), 4,31 — 4,10 (m, 1H), 3,93 (dd, J = 70,7, 6,3 Hz, 1H), 3,78 — 3,15 (m, 53H), 2,97 — 2,41 (m, 5H), 2,32 (s, 2H), 2,15 — 1,55 (m, 18H), 1,52 — 1,16 (m, 10H), 1,14 — 0,81 (m, 18H), 0,73 — 0,58 (m, 1H). Exemplo 32: Síntese de N-metilcarbamato de 2-[[(22E,24E,26E, 27E,33R,348,35R,36R,38S,40S,438,44R,45R,55R)-44,55-di-hidróxi- 43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-48,49,50,51,52- pentaoxo-67,68-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27 (47)-tetraen-42-ilJóxiJetila (1-81) e N-metilcarbamato de 2-[[(22E, 24E,26E,27E,33R,34S8,35R,36R,38S,40S,42R,438S,44R,45R,55R)- 44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil] -45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil- 48,49,50,51,52-pentaoxo-67,68-dioxa-57 -azatriciclo-hexatriaconta- 22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxiJetila (1I-74) e N-metilcarbamato de 2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S8,428,43S,44R, 45R,55R)-44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)- 3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -45-metóxi-33,34,35,36,46,47- hexametil-48,49,50,51,52-pentaoxo-67,68-dioxa-57-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxiletila (1-75): oH O o, ol dos > ' “Oo s Ne 7 & Y N O,, = o Dl o

AN

N 1-81

OH O OH O o. o A Ns o. e ANN

FOME FOR OX no CO XW HO Oo XY N. O,,. J == N. O,,. = o ô. fa fe)

L L PN AN

H H 1-74 |-75 Esquema sintético:

e S OH AO, o | Í As + Everoimus — PE e O o É sesta, O THF, 0-1, 3.5h 18% N P Y O, o

HO O. 181 L Ar

N ÇA fo ft fo e O SO NR . e O NS Rs NL O, O NA O,, O BHO | Sho 7

À V | 174 175 Av Áxv Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S, 408,438,44R,45R,55R)-44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35, 36,46,47-hexametil-48,49,50,51,52-pentaoxo0-67,68-dioxa-57-azatri- ciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxiJetil N- metilcarbamato (1-81):

[00417] A uma solução desgaseificada de everolimo (0,5 g, 0,52 mmols) em THF (10 mL) a 0ºC, foram adicionados ácido p-toluenos- sulfônico (0,45 g, 2,61 mmols) e 2-hidroxietil N-metilcarbamato (2,80 mL). A mistura resultante foi agitada a O ºC durante 0,5 h sob N2, em seguida aquecida a 23ºC e agitada durante 3h. A mistura foi vertida em NaHCO; saturado (40 mL) que foi extraída com EtOAc (30 mL). À camada orgânica foi lavada com água (30 mL *x 2), salmoura (40 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel (DCM:MeOH = 10:1), em seguida adicionalmente purificada por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O = 7:3) para fornecer N-metilcarbamato de 2- [[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,438,44R,45R,55R)- 44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-48,49,50,51,52- pentaoxo-67,68-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)- tetraen-42-iljóxiletila (1-81: 100 mg, 18% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1067,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 6,50-5,91 (m, 4H), 5,58 — 4,97 (m, 4H), 4,70 (s, 1H), 4,51 (d, J = 40,4 Hz, 1H), 4,33 — 4,02 (m, 3H), 3,93 — 3,62 (m, 6H), 3,61 — 3,00 (m, 13H), 2,86 — 2,46 (m, 6H), 2,40 — 2,22 (m, 2H), 2,18-1,69 (m, 22H), 1,58-1,25 (m, 7H), 1,24 — 0,79 (m, 18H), 0,79 — 0,62 (m, 1H). Etapa 2: Síntese de 2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S, 408,428,438,44R,45R,55R)-44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33, 34,35,36,46,47-hexametil-48,49,50,51,52-pentaoxo0-67,68-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxi]Jetil N-metilcarbamato (1-75) e 2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R, 388,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(1S,3R, 4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi- 33,34,35,36,46,47-hexametil-48,49,50,51,52-pentaox0-67,68-dioxa- 57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxi] etil N-metilcarbamato (1-74):

[00418] 120 mg de 2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S, 408,43S,44R,45R,55R)-44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36, 46,47-hexametil-48,49,50,51,52-pentaoxo-67,68-dioxa-57-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxiletil — N-metilcarba- mato foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexa- no:DCM:EtOAc:MeOH= 3:3:1:0,6) para fornecer N-metilcarbamato de

2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,348,35R,36R,38S,40S,428,43S,44R,45R, 55R)-44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil- 48,49,50,51,52-pentaox0-67,68-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta- 22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxiletila (1-75: 18 mg, 15% de produ- ção) e N-metilcarbamato de 2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R, 38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(1S,3R, 4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33, 34,35,36,46,47-hexametil-48,49,50,51,52-pentaoxo0-67,68-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraen-42-ilJóxiletila — (l- 74: 20 mg, 16% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00419] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 5,0 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 2,4 mg/ml Injeção : 8 ml Fase móvel : Hexano/EtoH=60/40(V/V) Taxa de fluxo : 30 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00420] 11-75: ESI-EM (El*, m/z): 1067,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,33 (dt, J = 24,4, 14,6 Hz, 2H), 6,13 (dd, J = 15,0, 9,9 Hz, 1H), 5,93 (dd, J = 24,5, 10,6 Hz, 1H), 5,52 (dd, J = 15,0, 8,8 Hz, 1H), 5,41 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 5,35 (t, J = 4,7 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,29 — 4,07 (m, 3H), 3,93 — 3,63 (m, 6H), 3,62 — 3,47 (m, 3H), 3,46 — 3,25 (m, 11H), 3,23 — 3,01 (m, 3H), 2,79 (d, J = 4,9 Hz, 3H), 2,74 — 2,62 (m, 2H), 2,57 (dd, J = 16,5, 6,4 Hz, 1H), 2,34 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 2,25 — 2,19 (m, 1H), 2,08 (s, 1H), 1,93 (dd, J = 30,0, 22,7 Hz, 5H), 1,83 — 1,65 (m, 7H), 1,55 — 1,42 (m, 5H), 1,28 (s, 6H), 1,15 — 0,83 (m, 18H), 0,72 (dd, J = 23,6, 12,0 Hz, 1H).

[00421] 1-74: ESI-EM (El*, m/2): 1067,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,50-5,95 (m, 4H), 5,60 — 4,96 (m, 5H), 4,59 — 3,96 (m, 4H), 3,95 — 3,66 (m, 6H), 3,64 — 2,97 (m, 15H), 2,95 — 2,65 (m, 6H), 2,59 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,51 — 1,95 (m, 5H), 1,78 (q, J = 6,8 Hz, 12H), 1,55 — 1,29 (m, 11H), 1,15 — 0,83 (m, 18H), 0,69 (dd, J = 23,6, 11,5 Hz, 1H). Exemplo 33: Síntese de (21E,23E,25E,26E,30R,318,32R,33R,35S, 378,40S,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -42-metóxi-30,31,32,33, 43,44-hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidróxi-hexóxi]- 70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)- tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-63) e (21E,23E,25E,26E,30R,3 18,32R,33R,358,37S,39R,40S,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi-40- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42- metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6- penta-hidróxi-hexóxi]-70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(43),26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-57) e (21E,23E,25E,26E,30R,318,32R,33R,358,37S,39S,40S,41R,42R,55R) -41,55-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-42-metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil-39- [(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidróxi-hexóxi]-70,71-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)-tetraeno- 45,46,47,48,49-pentona (1-58): OoH O o, "e õ C s so)" Ns º ' RN

CE Dé no OH oH 1-63

OH O OH O — õ — o, õ o o A Ns " o Re rol) "o PO) o DS o W O N N O, = N O,,, = oO fe) oO o. novo Hot OH nom so Hof soH oH OH 1-57 1-58 Esquema sintético:

oH OH oH BnCI o 8 2H O pPTSOH NA" Py,1t, 16h SAE 28º, 10h ôH OH 22% OH OH 9 60% 4 dO o o SS + x ÃO” o. o fon OL x o Ho, o So K2COz Es TFA O E pá MeoH 280, 18h H 1 OT Dem, 30%, 1.5h

AN oH O oH O o. de o, FC oO" ZA & mol)" o SE oO W ResinH" 7 O, W N. O, =/ 1,4-dioxane/H2O, N. . = O” 50º, 18h o. 8 163 no

NS OH Hs ES HOT: oH

OH O OH O MAR Y E MA - ES o, o ANS o o A Ne BN o SE oO" O SE chiral separation O NS o SN N. fo = N. fo = IO à. O” E noso noso 58 nor OH 7 nor soH

H H Legenda do esquema Dioxano Separação quiral Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de dibenzoato de (2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5-tetra- hidróxi-hexano-1,6-di-ila:

[00422] A uma solução de (2R,3R,4R,5R)-hexano-1,2,3,4,5,6- hexaol (10,0 g, 54,89 mmols, 1,0 eq) sm piridina (25,39 g, 548,9 mmols, 10,0 eq) a 0 ºC foi adicionado cloreto de benzila (7,72 g, 54,89 mmols, 1,0 eq). A mistura de reação foi em seguida agitada em tempe- ratura ambiente durante 16 h, diluída com H2O (200 mL) e extraída com DCM (150 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram la- vadas com salmoura (100 mL), secadas sobre Na2SO:, filtradas, con- centradas, e purificadas por cromatografia de fase reversa (CH3CN:H2O = 40%-60% de produção) para fornecer (2R,3R,4R,5R)- 2,3,4,5-tetra-hidróxi-hexano-1,6-di-il dibenzoato (4,7 g, 22% de produ- ção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 391,1 [M+H]*. *HRMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 8,07 — 8,00 (m, 4H), 7,66 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 7,54 (t, J = 7,7 Hz, 4H), 5,09 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 4,60 — 4,48 (m, 4H), 4,28 (dd, J = 11,2, 8,2 Hz, 2H), 3,87 (dt, J = 6,1, 5,3 Hz, 2H), 3,77 (t, J = 8,6 Hz, 2H). Etapa 2: Síntese de ((4R,4'R,5R,5'R)-2,2,2',2"-tetrametil-4,4"-bi(1,3- dioxolano)-5,5"-di-il)bis(metileno) dibenzoato e ((4R,4aR,8R,8aR)- 2,2,6,6-tetrametiltetra-hidro-[1, 3]dioxino[5,4-d][1,3]dioxina-4,8-di- il)bis(metileno) dibenzoato:

[00423] “Uma solução de benzoato de [(2R,3R,4R,5R)-6-benzoylóxi- 2,3,4,5-tetrahidróxi-hexil] (5 g, 12,81 mmols) e p-TsOH (1,22 g, 6,40 mmols) em 2,2-dimetoxipropano (50 mL) foi agitada a 28ºC durante 10 h. A mistura resultante foi extraída com EtOAc (100 mL x 3). As cama- das orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO. anidroso, fil- tradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc:PE = 1:10 a 1:2) para fornecer tanto benzoato de [(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(benzoiloximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]- 2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]metila (2,4 g, 40% de produção) quanto benzoato de [(4R,4aR,8R,8aR)-4-(benzoiloximetil)-2,2,6,6-tetrametil- 4,4a,8,8a-tetra-hidro-[1,3]dioxino[5,4-d][1,3]dioxin-8-il]metila 1,2 g, 20% de produção) como sólidos brancos. ESI-EM (El*, m/z): 493,2 [M+Na]*.

[00424] Benzoato de [(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(benzoiloximetil)-2,2-

dimetil-1,3-dioxolan-4-i1]-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]metila: 1HRMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 7,98 (dd, J = 11,6, 4,5 Hz, 4H), 7,67 (dd, J = 11,7, 4,3 Hz, 2H), 7,55 (t, J = 7,7 Hz, 4H), 4,42 — 4,33 (m, 4H), 4,08 — 3,94 (m, 4H), 1,33 (s, 6H), 1,26 (s, 6H). *?C RMN (101 MHz, DMSO-d6s) 165,52, 133,44, 129,47, 129,15, 128.78, 100,61, 67.89, 67,60, 64,25, 24,24, 23,45.

[00425] Benzoato de [(4R,4aR,8R,8aR)-4-(benzoiloximetil)-2,2,6,6- tetrametil-4,4a,8,8a-tetra-hidro-[1,3]dioxino[5,4-d][1,3Jdioxin-8-il]metila: 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6s): 58,03 — 7,92 (m, 4H), 7,67 (dd, J = 10,6, 4,3 Hz, 2H), 7,54 (t, J = 7,7 Hz, 4H), 4,57 (dd, J = 11,1, 5,9 Hz, 2H), 4,53 — 4,44 (m, 4H), 4,39 (dd, J = 11,5, 7,3 Hz, 2H), 1,43 (s, 6H), 1,29 (s, 6H). *9C RMN (101 MHz, DMSO-ds) 5 165,45, 133,42, 129,52, 129,17, 128,75, 108,39, 74,49, 73,77, 64,17, 27,04, 25,27. Etapa 3: Síntese de ((4R,4'R,5R,5'R)-2,2,2',2"-tetrametil-4,4"-bi(1,3- dioxolane)-5,5"-di-il)dimetanol:

[00426] Uma mistura de benzoato de [(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5- (benzoiloximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1]-2,2-dimetil-1,3-dioxolan- 4-illmetila (8,5 g, 18,07 mmols) e K2CO;3 (7,48 g, 54,20 mmols) em THF (25 mL) e CH3OH (25 mL) foi agitada a 29 ºC durante 18 h. A re- ação foi concentrada e em seguida purificada por meio de cromatogra- fia em sílica-gel (EtOAc/PE= 1:1) para fornecer [(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5- (hidroximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1]-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4- illmetano! (3,2 g, 68% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 285,1 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,73 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,71 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,55 — 3,35 (m, 6H), 1,29 (s, 6H), 1,23 (s, 6H). Etapa 4: Síntese de (25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S, 44S,49R,50R,61R)-49,61-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-43-[[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5- (hidroximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]-2,2-dimetil-1,3-

dioxolan-4-ilJmetóxi]l-50-metóxi-34,35,36,37,51,52-hexametil-72,73- dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta-25,27,29(51),30(52)-tetraeno- 53,54,55,56,57-pentona:

[00427] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mol) em DCM (16 mL) foi adicionado ácido 2,2,2-trifluoroacético (1,2 mL) a -40ºC. Após agitar durante 10 minutos [(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(hidroximetil)- 2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1]-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]metanol (0,43 9, 1,64 mmols) foi adicionado e a reação foi agitada a -30ºC durante 1,5 h, em seguida diluída com DCM (10 mL) e vertida em uma solução de NaHCO; aquoso frio. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por meio de cromatografia de fase re- versa (C18, CH;CN/H2O = 7:3) para fornecer (25E,27E,29E,30E,34R, 358,36R,37R,39S,418,44S,49R,50R,61R)-49,61-di-hidróxi-44-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-43-[[(4R,5R)-5- [(4R,5R)-5-(hidroximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1]-2,2-dimetil-1,3- dioxolan-4-il]Jmetóxi]l-50-metóxi-34,35,36,37,51,52-hexametil-72,73- dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta-25,27,29(51),30(52)-tetraeno- 53,54,55,56,57-pentona (150 mg, 24% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1166,4 [M+Na]*. *HRMN (400 MHz, CDCI3) 6,52 — 5,69 (m, 4H), 5,48 — 5,10 (m, 4H), 4,51 (d, J = 40,1 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 3,94 (dd, J = 26,3, 5,8 Hz, 4H), 3,52 — 3,12 (m, 13H), 2,98 — 2,45 (m, 8H), 2,41 — 2,17 (m, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,76 (dt, J = 29,0, 14,4 Hz, 15H), 1,50 — 1,31 (m, 24H), 1,14 — 0,77 (m, 18H), 0,62 (d, J = 12,1 Hz, 1H). Etapa 5: Síntese de (21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S, 378S,40S8,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-metóxi- 30,31,32,33,43,44-hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-penta- hidróxi-hexóxi]l-70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-

21,23,25(43), 26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-63):

[00428] A uma solução de (25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R, 398S,418,44S,49R,50R,61R)-49,61-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-43-[[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5- (hidroximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1]-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4- illmetóxi]l-50-metóxi-34,35,36,37,51,52-hexametil-72,73-dioxa-62- azatriciclo-hexatriaconta-25,27,29(51),30(52)-tetraeno-53,54,55,56,57- pentona (500 mg, 0,437 mmols) em 1,4-dioxano (6 mL) e H2O (6 mL) foi adicionado Dowex 50W-X8 (1,0 g) e a mistura resultante agitada a 50 ºC durante 24 h, em seguida filtrada e purificada por cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN:H2O = 4:6) para fornecer (21E,23E,25E, 26E,30R,318,32R,33R,358,37S,40S,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi- 40-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42- metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6- penta-hidróxi-hexóxi]l-70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23, 25(43),26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-63: 70 mg, 15% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1086,4 [M+Na]*. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,51 — 5,91 (m, 4H), 5,61 — 4,98 (m, 5H), 4,24 (d, J = 22,2 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 34,1, 28,6 Hz, 9H), 3,59 — 3,17 (m, 19H), 3,00 — 2,49 (m, 5H), 2,38 — 2,22 (m, 1H), 2,05 (d, J = 33,7 Hz, 3H), 1,82 — 1,68 (m, 11H), 1,29 (ddd, J = 46,4, 34,9, 8,8 Hz, 12H), 1,09 — 0,77 (m, 18H), 0,70 — 0,56 (m, 1H). Etapa 6: Síntese de (21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S, 378,39S,40S,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)- 4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-metóxi-30,31,32,33, 43,44-hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidróxi-hexóxi]- 70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)- tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-58) e (21E,23E,25E,26E,30R, 318,32R,33R,358,37S,39R,40S,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi-40- I(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-

metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6- penta-hidróxi-hexóxi]l-70,71-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(43), 26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (1-57):

[00429] 90 mg de (21E,23E,25E,26E,30R,318,32R,33R,358S,37S, 408S,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil- 39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidróxi-hexóxi]l-70,71-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49- pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epíme- ros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexano:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:1) para fornecer (21E,23E, 25E,26E,30R,318,32R,33R,358,37S,39S,40S,41R,42R,55R)-41,55-di- hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-42-metóxi-30,31,32,33,43,44-hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)- 2,3,4,5,6-penta-hidróxi-hexóxi]l-70,71-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)-tetraeno-45,46,47,48,49-pentona (I- 58: 15 mg, 17%) e (21E,23E,25E,26E,30R,318,32R,33R,35S,37S, 39R,40S,41R,42R,55R)-41,55-di-hidróxi-40-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42-metóxi-30,31,32,33,43,44- hexametil-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidróxi-hexóxi]l-70,71- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(43),26(44)-tetraeno- 45,46,47,48,49-pentona (1-57: 8 mg, 9% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00430] Método de análise quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC-3(IC3OCE-NJ008) Tamanho da coluna: 0,46 cm 1.D. x 25 cm L Injeção: 50,0 ul Fase móvel: Hexano/EtoH=50/50(V/V) Taxa de fluxo: 0,8 ml/min Comprimento de onda: UV 254nm

Temperatura: 35 oC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20ATº CP-HPLC-06

[00431] 1-58: ESI-EM (El*, m/z): 1086,3 [M+Na]". *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,45 — 5,93 (m, 4H), 5,59 — 4,88 (m, 5H), 4,23 (d, J = 26,4 Hz, 1H), 4,00 — 3,48 (m, 14H), 3,46 — 3,23 (m, 11H), 2,93 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 2,79 — 2,49 (m, 3H), 2,38 — 1,84 (m, 8H), 1,66 (t, J = 14,8 Hz, 9H), 1,50 — 1,17 (m, 11H), 1,416 — 0,79 (m, 18H), 0,64 (dd, J = 23,7, 11,8 Hz, 1H).

[00432] 1-57: ESI-EM (El, m/z): 1086,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,49- 5,98 (m, 4H), 5,52- 5,11 (m, 5H), 4,32- 4,23 (m, 1H), 4,08 — 3,11 (m, 14H), 3,05 — 2,43 (m, 9H), 2,37 — 1,95 (m, 8H), 1,91 — 1,53 (m, 17H), 1,46 — 0,54 (m, 30H). Exemplo 34: Síntese de (21E,23E,25E,26E,40R,418,42R,43R, 458,478,50S,51R,52R,61R)-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2-hidroxie- tóxi)etóxiletóxi]-50-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxi]-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-52-metóxi-40,41,42, 43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(53),26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59-pentona (1-78) e (21E, 23E,25E,26E,40R,418,42R,43R,458,47S,49R,508,51R,52R,61R)- 51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-50-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-52-metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73- dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(53),26(54)-tetraeno- 55,56,57,58,59-pentona (1-72) e (21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R, 43R,458,478,49S,50S,51R,52R,61R)-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-50-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidro- xietóxi)etóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-52-metóxi- 40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62-azatriciclo-hexatri- aconta-21,23,25(53),26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59-pentona (1-73):

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DOER OR Vs s J o Ss Ao XD) ; Ss o O, z ds Ss .- O, Ss o O. & Vo LL Too % O. O. Los Ls |-72 -73 Esquema sintético: ee, ” a % Po cor no, i > ” ue MNA omes OP a ——— x % Pi % fo Sh dt. AIH PR AM des Á O

DS % * &. Fon POSSO A PO ud LO SP a AO Tr ” A, Dz, gn TS é / ( 2 ; ( legenda do esquema Toluene Piridina Separação quiral

TA Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 2-[2-[terc-butil(difenil)sililJoxietóxi]etanol:

[00433] A uma solução de 2-(2-hidroxietóxi)etanol (50 g, 471,2 mmols) em piridina (49.6 mL) a O ºC foi adicionado terc-butil-cloro- difenil-silano (30 g, 109,2 mmols). A solução resultante foi agitada em ta durante 1h, em seguida vertida em água (300 mL) e extraída com EtOAc (300mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram seca- das sobre Na2SO;. anidroso, filtradas, e concentradas. O resíduo resul-

tante foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc:PE = 1:8) para fornecer 2-[2-[terc-butil(difenil )siliJoxietóxiletanol (29,9 g, 80% de produção) como um óleo incolor. ESI-EM (El*, m/z): 367,2 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 7,74 — 7,64 (m, 4H), 7,46 — 7,33 (m, 6H), 3,81 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,73 — 3,66 (m, 2H), 3,63 — 3,54 (m, 4H), 2,32 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 1,06 (s, 9H). Etapa 2: Síntese de trifluorometanosulfonato de 2-[2-[terc-butil (difenil)sililJoxietóxiletila:

[00434] A uma solução de 2-[2-[terc-butil(difenil)siliJoxietóxiletano] (7,6 g, 22 mmols) e DIPEA (5,76 mL) em DCM (50 mL) a O ºC, sob N,., foi adicionado 1,1-difluoroetanosulfonato de trifluorometilsulfonila (3,92 mL) A mistura foi em seguida diluída com DCM (150 mL), lavada com NaHCO; saturado (150 mL), água (150 mL) e salmoura (150 mL). À camada orgânica foi em seguida secada sobre Na2SO. anidroso, filtra- da e concentrada sob vácuo para fornecer 2-[2-[terc-butil(difenil)silil] oxietóxiletil trifluorometanosulfonato de (10,21 g, 97% de produção) como um óleo marrom que foi usado usado sem qualquer outra purifi- cação. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 7,69-7,66 (m, 4H), 7,43-7,36 (m, 6H), 4,58 (t, J = 4,8Hz, 2H), 3,83-3,80 (m, 4H), 3,64-3,61 (t, J = 5,6Hz, 2H), 1,05 (s, 9H). Etapa 3: Síntese de (35E,37E,39E,40E,50R,51S,52R,53R,558,57S, 59S8,60S,61R,62R,71R)-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-[2-[terc-butil (difenil)sililJoxietóxiletóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 61,71-di-hidróxi-59,62-dimetóxi-50,51,52,53,63,64-hexametil-81,82- dioxa-73-azatriciclo-hexatriaconta-35,37,39(63),40(64)-tetraeno- 65,66,67,68,69-pentona:

[00435] Uma mistura de everolimo (2 g, 2,09 mmols), trifluorometa- nosulfonato de 2-[2-[terc-butil(difenil )siliJoxietóxiletila (9,95 g, 20,87 mmols) e N-etil-N-isopropil-propan-2-amine (5,82 mL) em tolueno (50 mL) foi agitada a 60ºC durante 18 h, em seguida vertida em NaHCO;3 saturado gelado (60 mL). A mistura de reação foi extraída com EtOAc (40 mL) e a camada orgânica lavada com água (50 mL x 3) e salmoura (50 mL) em seguida secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada e concen- trada. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel (PE:EA = 5:1 a 3:1) para fornecer (35E,37E,39E,40E,50R,518S,52R,53R,558, 578,598S,60S,61R,62R,71R)-60-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-[2-[2-[2-[terc- butil(difenil )siliJoxietóxiletóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 61,7 1-di-hidróxi-59,62-dimetóxi-50,51,52,53,63,64-hexametil-81,82- dioxa-73-azatriciclo-hexatriaconta-35,37,39(63) 40(64)-tetraeno- 65,66,67,68,69-pentona (1,7 g, 63% de produção) como sólido ama- relo. ESI-EM (El*, m/z): 1307,5 [M+Na]*. Etapa 4: Síntese de (22E,24E,26E,27E,35R,368S,37R,38R,40S, 428,448,458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxil-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-44,47-dimetóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno- 50,51,52,53,54-pentona:

[00436] A uma solução de (35E,37E,39E,40E,50R,518,52R,53R, 558,578,598,60S,61R,62R,71R)-60-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-[2-[2- [terc-butil(difenil )silil Joxietóxiletóxiletóxi]-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-61,71-di-hidróxi-59,62-dimetóxi-50,51,52,53,63,64-hexametil- 81,82-dioxa-73-azatriciclo-hexatriaconta-35,37,39(63) 40(64)-tetraeno- 65,66,67,68,69-pentona (322 mg, 0,251 mmols) em THF (10 mL) foi adicionada piridina de HF (248.5 mg, 2,51 mmols). A solução resultan- te foi agitada em ta durante 3h, em seguida vertida em NaHCO; aquo- so saturado e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi concentrada e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (acetona:PE = 1:3) para fornecer (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S, 428,448,458 46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- [2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]letóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-44,47-

dimetóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (114 mg, 44% de produção) como sólido amarelo claro. ESI-EM (El*, m/z): 1069,3 [M+Na]*.

Etapa 5: Síntese de (21E,23E,25E,26E,40R,418,42R,43R,458,47S, 508S,51R,52R,61R)-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxil-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-52- metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(53), 26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59-pentona (1-78):

[00437] Uma mistura de (22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,408 ,428,448 458 ,46R,47R,56R) -46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxil-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-44,47- dimetóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (0,95 g, 0,908 mmolis), 2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletanol (2 mL) e ácido p-toluenossulfônico (0,78 g, 4,54 mmols) em THF (20 mL) foi agitada a ºC durante 2 h. A reação foi vertida em NaHCO; aquoso, saturado, gelado (30 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x 3). As camadas orgâ- nicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, em seguida concentradas e purificadas por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O = 6,5:1) para fornecer (21E,23E,25E,26E ,40R 418, 42R,43R,458,478,508,51R,52R,61R)-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxil-5O0-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-52-metóxi- 40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(53),26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59-pentona (1-78: 0,317 9, 30% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1186,4

[M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,39-5,95 (m, 4H), 5,59-5,34 (m, 2H), 5,26-5,09 (m, 2H), 4,81 (s, 1H), 4,29-4,15 (m, 1H), 4,00-3,49 (m, 28H), 3,48-3,34 (m, 9H), 3,16-3,0 (m, 4H), 2,80-2,52 (m, 3H), 2,34- 2,20 (m, 2H), 2,07-1,88 (m, 4H), 1,79-1,72 (m, 5H), 1,66(s, 3H), 1,51- 1,38 (m, 4H), 1,37-1,22 (m, 7H), 1,21-0,84 (m, 20H), 0,76-0,64 (m, 1H). Etapa 6: Síntese de (21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R, 43R,458,478,498,50S,51R,52R,61R)-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxil-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-52- metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(53), 26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59-pentona (1-73) e (21E,23E,25E,26E,40R,418,42R,43R,458,47S,49R,508S,51R,52R,61R )-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-50-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxil-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-52-metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73- dioxa-62-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(53),26(54)-tetraeno- 55,56,57,58,59-pentona (1-72):

[00438] 330 mg de (21E,23E,25E,26E,40R,418,42R,43R,458,478,508,51R,52R,61R)- 51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-5O0-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-52-metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(53),26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59- pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epíme- ros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexano:DCM:EtOAc:MeOH= 3:3:1:1) para fornecer (21E,23E,25E,26E,40R,418,42R,43R,458,478,498,508S,51R,52R,61R) -51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-5O0-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-

metil-etil]-52-metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(53),26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59- pentona (1-73: 77 mg, 23% de produção) e (21E,23E,25E,26E,40R,418,42R,43R,458,478,49R,508,51R,52R,61R )-51,61-di-hidróxi-49-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-5O0-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-52-metóxi-40,41,42,43,53,54-hexametil-72,73-dioxa-62- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(53),26(54)-tetraeno-55,56,57,58,59- pentona (1-72: 50 mg, 15% de produção), ambos como sólidos bran- cos.

[00439] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 2,5 cm |.D. x 25cmL Concentração da solução: 6,5 mg/ml Injeção : 7ml Fase móvel : Hexano/EtoH=60/40 (V/V) Taxa de fluxo : 40 ml/min Comprimento de onda : UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00440] 1-73: ESI-EM (El*, m/z): 1186,6 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 6,06 (m, 3H), 5,92 (dd, J = 29,5, 10,8 Hz, 1H), 5,55 — 5,37 (m, 2H), 5,26 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,23 (d, J = 24,9 Hz, 1H), 3,90 (s, 1H), 3,81 — 3,22 (m, 36H), 3,19 — 2,99 (m, 3H), 2,78 — 2,48 (m, 3H), 2,33 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 2,10 — 1,87 (m, 5H), 1,76 — 1,55 (m, 13H), 1,46 (s, 4H), 1,39 — 1,18 (m, 5H), 1,45 — 0,81 (m, 18H), 0,71 (dd, J = 23,5, 11,7 Hz, 1H).

[00441] —1-72: *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,92 (m, 4H), 5,61 — 5,04 (m, 5H), 4,24 (d, J = 53,9 Hz, 2H), 3,99 (dd, J = 13,8, 6,9 Hz, 1H), 3,83 — 2,90 (m, 36H), 2,75 — 2,46 (m, 3H), 2,16 (ddd, J = 109,4, 53,2, 24,9 Hz, 7H), 1,86 — 1,69 (m, 7H), 1,52 — 1,46 (m, 17H), 1,15

0,80 (m, 18H), 0,66 (dd, J = 23,9, 11,6 Hz, 1H). Exemplo 35: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)- 44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2-[2- (2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]l-65,66-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-91): Ho O nm AS Y 2 o O õ S "o O A 0 no N Ro > HO $

O o e 1-91 Esquema sintético: Br NaH, DMF Po o. Pd/C, Ho, CHOH FEMOFOH + O. om 2on PES TO 20%, 20h 84% 89% o N Ho o. WU 6 : PTSOH, THF A o. + E s sOH, BEM Non O o o s—..— o V 26%

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Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi] etoximetilben- zeno:

[00442] A uma pasta fluida de hidreto de sódio (12,49 g, 520,5 mmols) em DMF (150 mL) foi adicionado 2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etano| (5 g, 34,7 mmols) em DMF (10 mL) sob atmosfera de N2 a 0 ºC. A mis- tura foi agitada durante 1h, em seguida 2-bromoetoximetilbenzeno (18,66 g, 86,75 mmols) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agita- da em temperatura ambiente durante 20 h, em seguida extinta com água (50 mL) e extraída com EtOAc (80 mL). A camada orgânica foi lavada com água (50 mL x 3), salmoura (50 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (PE:EA = 25:1 a 20:1) para forne- cer 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletoximetilbenzeno (8,1 g, 84% de produção) como um líquido incolor. 1H RMN (400MHz, CDCI3): 5 7,37 — 7,26 (m, 5H), 4,57 (s, 2H), 3,90 (q, J=8,8 Hz, 2H), 3,79 (dd, J = 5,6, 3,5 Hz, 2H), 3,71 — 3,61 (m, 6H). Etapa 2: Síntese de 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]:

[00443] A uma solução de 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi] etoximetil- benzeno (0,5 g, 1,8 mmols) em CH3OH (10 mL) foi adicionado Pd/C (0,43 g) e a reação agitada sob atmosfera de H2 em temperatura am- biente (20ºC) durante 20 h. O Pd/C foi removido por meio de filtragem e o filtrado resultante concentrado e purificado por cromatografia em sílica-gel (DCM:CH3;OH = 50:1) para fornecer 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi) etóxiletanol (0,30 g, 89% de produção) como óleo incolor. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 3,91 (q, J = 8.7 Hz, 2H), 3,80 (dd, J = 5,6, 3,4 Hz, 2H), 3,75 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 3,70 (dd, J = 5,5, 3,5 Hz, 2H), 3,62 (dd, J = 5,2, 3,9 Hz, 2H), 2,23 (t, J = 5,7 Hz, 1H (OH)). **F RMN (376 MHz, CDCIz, (triluorometilbenzeno como padrão) ô - 74,33 (t, J= 8,8 Hz). Etapa 3: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,

36R,388,408S,43S,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(1S,3R, 4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35, 36,46,47-hexametil-42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]-65,66- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno- 48,49,50,51,52-pentona:

[00444] A uma solução desgaseificada de (22E,24E,26E,27E,29R, 308S,31R,32R,34S,36S,38S,398S 40R, — 41R,50R)-40,50-di-hidróxi-39- [(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-38,41- dimetóxi-29,30,31,32,42,43-hexametil-60,61-dioxa-51-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(42),27(43)-tetraeno-44,45,46,47 ,48-pentona (0,1 g, 0,11 mmols) em THF (5 mL) a O ºC foi adicionado ácido p- toluenossulfônico (94 mg, 0,547 mmols) e 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi) etóxiletanol (0,2 g, 1,09 mmols). A mistura resultante foi agitada a 23ºC durante 5 h sob N27 em seguida vertida em NaHCO; saturado (40 mL), em seguida extraída com EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi lavada com água (30 mL x 2), salmoura (20 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C1g, CH3CN:H2O0 = 0% a 65% de pro- dução) para fornecer (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 438 ,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil- 42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]l-65,66-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (l- 91: 30 mg, 26% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El”, m/z): 1093,5 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ó 6,38-5,90 (m, 4H), 5,46-5,05 (m, 4H), 4,5-4,4 (m, 1H), 4,21-4,11 (m, 2H), 3,91-3,52 (m, 6H), 3,34-3,25 (m, 8H), 3,07 (s, 1H), 2,84-2,59 (m, 5H), 2,31-1,91 (m, 6H), 1,77-1,54 (m, 22H), 1,43-1,19 (m, 10H), 1,04-0,80 (m, 16H), 0,60 (q, J = 12Hz, 1H). Exemplo 36: Síntese de (23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,

438,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxi- etóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo- hexil]-1-metil-etil]-36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67-dioxa-58-aza- triciclo-hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53,54,55- pentona (1-92) e (23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,418,438S,458,46S,47R,48R,57R) -47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]-46-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67 -dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-90) e (23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,418,43S,45R,46S,47R,48R,57R )-47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]-46-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67 -dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-89): " OH N o bin St Do À O $ ” O /7o Y DS o N O,,, SS > dho > $

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É Legenda do esquema Toluene Etapas Separação quiral Procedimentos e caracterização:

Etapa 1: Síntese de trifluorometanosulfonato de 2-metoxietila:

[00445] Uma solução de 2-metoxietanol (3 g, 39,42 mmols) e DI- PEA (10,30 mL, 59,14 mmols) em DCM (60 mL) foi resfriada para 0 ºC sob N,, e anidrido trifluorometanossufônico (7,28 mL, 43,37 mmols,) adicionado gota a gota. A mistura foi agitada a O ºC durante 2 h, em seguida diluída com DCM (50 mL). A camada orgânica foi lavada com NaHCO; saturado (50 mL), água (50 mL), salmoura (50 mL), em se- guida secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada, e concentrada sob vá- cuo para fornecer trifluorometanosulfonato de 2-metoxietila como óleo marrom. Isto foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. *H RMN (400 MHz, CDCI3) à 4,62 — 4,58 (t, J=4,4Hz 2H), 3,70 — 3,65 (t, J=4,4Hz, 2H), 3,39 (s, 3H). Etapa 2: Síntese de (23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S, 418,428,43R,44R,53R)-43,53-di-hidróxi-41,44-dimetóxi-42-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo-hexil]-1-metil-etil]-32, 33,34,35,45,46-hexametil-62,63-dioxa-54-azatriciclo-hexatriaconta- 23,25,27(45), 28(46)-tetraeno-47,48,49,50,51-pentona:

[00446] Uma mistura de rapamicina (2 g, 2,19 mmolis), trifluorome- tanosulfonato de 2-metoxietila e N-etil-N-isopropil-propan-2-amina (6,48 mL, 37,19 mmols) em tolueno (60 mL) foi agitada a 58ºC durante 18 h, em seguida diluída com EtOAc (100 mL), vertida em NaHCO; saturado gelado (150 mL), lavada com água gelada duas vezes (250 mL), salmoura (200 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada e concentrada. O cru foi purificado por meio de cromatografia em sílica- gel (acetona:PE = 1:6) para fornecer (23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R, 35R,378,398S,418,428,43R, 44R,53R)-43,53-di-hidróxi-41,44-dimetóxi- 42-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo-hexil]-1-metil- etil]-32,33,34,35,45,46-hexametil-62,63-dioxa-5S4-azatriciclo- hexatriaconta-23,25,27(45),28(46)-tetraeno-47,48,49,50,51-pentona (0,53 g, 25% de produção) como um sólido marrom claro. ESI-EM (El*,

m/z): 994,5 [M+Na] *. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ó 6,42-6,11 (m, 3H), 5,96 (m, 1H), 5,58-5,40 (m, 2H), 5,29-5,14 (m, 2H), 4,80 (s, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,75-3,64 (m, 5H), 5,59-3,50 (m, 3H), 3,46-3,43 (m, 4H), 3,38- 3,30 (m, 6H), 3,17-3,05 (m, 4H), 2,80-2,56 (m, 3H), 2,06-1,92 (m, 4H), 1,86-1,75 (m, 6H), 1,69-1,59 (m, 10H), 1,51-1,42 (m, 5H), 1,31-1,15 (m, 8H), 1,11-1,04 (m, 6H), 1,00-0,83 (m, 10H), 0,72 (q, J = 12Hz, 1H). Etapa 3: Síntese de (23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 468,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxietóxi) etóxil-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo- hexil]-1-metil-etil]-36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno- 51,52,53,54,55-pentona (1-92):

[00447] Uma solução de (23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R, 378,39S 418,428,43R, 44R,53R)-43,53-di-hidróxi-41,44-dimetóxi-42- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 32,33,34,35,45,46-hexametil-62,63-dioxa-5S4-azatriciclo-hexatriaconta- 23,25,27(45),28(46)-tetraeno-47,48,49,50,51-pentona (0,45 g, 0,463 mmols) em THF (25 mL) foi desgaseificada com N,, ácido 4-metilben- zenossulfônico (0,4 g, 2,31 mmols) foi adicionado a O ºC, seguido por 2-(2-metoxietóxi)etanol (4 mL). A mistura resultante foi agitada a 0 ºC durante 0,5 h sob N2, em seguida a 25ºC durante 3 h. A mistura foi ver- tida em NaHCO; saturado gelado (50 mL), extraída com EtOAc (80 mL x 2), a camada orgânica foi lavada com água (100 mL), salmoura (100 mL) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O from 10%-75% de produção) para fornecer (23E,25E,27E,28E,36R,37S, 38R,39R,41S, 438 ,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxie- tóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi) ciclo- hexil]-1-metil-etil]-36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-

pentona (1-92: 0,11 g 22% de produção) como um sólido branco. ESI- EM (El*, m/z): 1082,5 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ó 6,32-5,99 (m, 3H), 5,89-5,78 (m, 1H), 5,48-5,07 (m, 4H), 4,70-4,51 (m, 1H), 4,20- 4,10 (m, 1H), 3,83-3,76 (m, 1H), 3,73-3,62 (m, 3H), 3,57-5,43 (m, 8H), 3,41-3,37 (m, 4H), 3,35-3,21 (m, 12H), 3,14-3,97 (m, 3H), 2,68-2,45 (m, 3H), 2,24 (m, 2H), 1,99-1,81 (m, 4H), 1,68-1,52 (m, 15H), 1,44-1,34 (m, 4H), 1,26-1,14 (m, 5H), 1,05-0,94 (m, 8H), 0,92-0,77 (m, 10H), 0,65 (q, J = 12Hz, 1H). Etapa 4: Síntese de (23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S, 438,458,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-me- toxietóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi) ciclo-hexil]-1-metil-etil]-36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67-dioxa- 58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53, 54,55-pentona (1-90) e (23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 45R,468,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxi- etóxi)etóxil-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo- hexil]-1-metil-etil]-36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53,54, 55-pentona (1-89):

[00448] 1,16 g de (23E,25E,27E,28E,36R,37S, 38R,39R,418,43S, 468 ,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxietóxi) etóxil-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-3-metóxi-4-(2-metoxietóxi) ciclo-hexil]-1- metil-etil]-36,37,38,39,49,50-hexametil-66,67-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resul- tantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexano: DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:0,3) para obter (23E,25E,27E,28E,36R, 378S,38R,39R,418,43S,458,46S ,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-48- metóxi-45-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-3-metóxi-4- (2-metoxietóxi)ciclo-hexil]-1-metil-etil]-36,37,38,39,49,50-hexametil-

66,67 -dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(49),28(50)-tetraeno- 51,52,53,54,55-pentona (1-90: 340 mg, 28% de produção) e (23E,25E, 27E,28E,36R,37S,38R,39R,418,438S,45R,46S ,47R,48R,57R)-47,57-di- hidróxi-48-metóxi-45-[2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-3- metóxi-4-(2-metoxietóxi)ciclo-hexil]-1-metil-etil]-36,37,38,39,49,50- hexametil-66,67-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta- 23,25,27(49),28(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-89: 135 mg, 11% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00449] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 2,5 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 2,5 mg/ml Injeção : 3 ml Fase móvel : Hexano/EtoH=60/40 (V/V) Taxa de fluxo : 30 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00450] —1-90: ESI-EM (El*, m/z): 1082,4 [M+Na]*.'H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,40 — 8,22 (m, 2H), 6,14 (dt, JU = 15,0, 9.8 Hz, 1H), 5,90 (dd, J = 32,4, 10,7 Hz, 1H), 5,56 — 5,32 (m, 2H), 5,27 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,18 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 3,87 (s, 1H), 3,80 — 3,24 (m, 29H), 3,22 — 3,01 (m, 3H), 2,72 (dd, J = 16,9, 5,8 Hz, 2H), 2,57 (dd, J = 16,8, 6,4 Hz, 1H), 2,30 (t, J = 21,1 Hz, 2H), 1,93 (ddd, J = 26,1, 21,2, 9.8 Hz, 6H), 1,82 — 1,64 (m, 8H), 1,50 (dd, J = 22,1, 10,9 Hz, 6H), 1,37 — 1,45 (m, 6H), 1,15 — 0,82 (m, 18H), 0,71 (q, J=8,0, 20,0 Hz, 1H).

[00451] 1-89: ESI-EM (El*, m/z): 1082,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 5,93 (m, 4H), 5,59 — 5,37 (m, 2H), 5,20 (dd, J = 23,8, 19,2 Hz, 2H), 4,55 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,28 (s, 1H), 4,15 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,00 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 3,91 — 3,27 (m, 28H), 3,27 —

2,85 (m, 5H), 2,76 — 2,24 (m, 5H), 2,18 — 1,55 (m, 14H), 1,54 — 1,20 (m, 10H), 1,16 — 0,82 (m, 18H), 0,75 — 0,61 (m, 1H). Exemplo 37: Síntese de (21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S, 428,458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi- 35,36,37,38,48,49-hexametil-44-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi] etóxi]l-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(48),26(49)- tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-86) e (21E,23E,25E,26E,35R, 36S,37R,38R,40S,428,448S,458S,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-47-metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-44-[2-[2-(2,2,2-trifluoro- etóxi)etóxiletóxi]-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(48),26(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-85): A N Ho y DONS O. s o —ô to AO) so ' Y NY s NE % Fo > AO o

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FRECLO 1-86 “. OH SN o ban S Do | ma Mo HA “O E ” 1 . ADA, " o NY RW Odo 9 6 do te HO e? SS NO X NY Ss O,, SS do e dro Y Fx & f Ao Íd o Reco FCO 1-85 1-124 Esquema sintético:

A oH , En EB" NaH, DMF RMSP o ReTOT o 0ºC-rt,20h : O 84% “ oH RN o V ol E Y" On. » —o Pd/C, Hz, CH;OH FRCMOMTO Mon + HO, O E) Í 20ºC,20h o 89% jo) N o, LL DN HO" o o 2, OH q - bu o o | 7 " hiral tic P-TSOH, THF END OD io RW chral separato 0ºC-25 ºC, 6h o 14% N. P X [7 SS 186 ONO Ss o 2 OH, FCO CO oH V o DNS br, s o 6 On. o —o "a s Ho. E) "HO O E ' UDO SÁ Ss o e SW o NA o, “ N O. LO dor" = oho ô S 1124 SS 185 o o

FCO FCO Legenda do esquema Separação quiral

TA Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi] etoximetilben- zeno:

[00452] A uma pasta fluida de hidreto de sódio (12,49 g, 520,5 mmols) em DMF (150 mL) foi adicionado 2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etano| (5 g, 34,7 mmols) em DMF (10 mL) sob N? a 0 ºC. A mistura foi agitada a 0 ºC durante 1h, em seguida 2-bromoetoximetilbenzeno (18,66 9, 86,75 mmols) foi adicionado gota a gota e a reação agitada em tempe-

ratura ambiente durante 20 h. A mistura foi extinta por água (50 mL) e extraída com EtOAc (80 mL). A camada orgânica foi lavada com água (50 mL x 3), salmoura (50 mL), secada sobre Na2SO;. anidroso, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (PE:EtOAc = 25:1 a 20:1) para obter 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi) etóxiletoximetilbenzeno (8,1 g, 83,9% de produção) como um líquido incolor. *H RMN (400MHz, CDCI3): 5 7,37 — 7,26 (m, 5H), 4,57 (s, 2H), 3,90 (q, Jy = 8,8 Hz, 2H), 3,79 (dd, J = 5,6, 3,5 Hz, 2H), 3,71 — 3,61 (m, 6H). Etapa 2: Síntese de 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]:

[00453] A uma solução de 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi] etoximetil- benzeno (0,5 g, 1,80 mmols) em CH3OH (10 mL) foi adicionado Pd/C (436,45 mg). Esta mistura foi em seguida agitada sob atmosfera de H2 em temperatura ambiente durante 20 h, filtrada e o filtrado concentra- do e purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (DCM: CH3OH= 50: 1) para obter 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletano! (0,30 g, 89% de produção) como óleo incolor. *H RMN (400 MHz, CDCI3) à 3,91 (q, J = 8.7 Hz, 2H), 3,80 (dd, J = 5,6, 3,4 Hz, 2H), 3,75 (d, J= 4,0 Hz, 2H), 3,70 (dd, J = 5,5, 3,5 Hz, 2H), 3,62 (dd, J = 5,2, 3,9 Hz, 2H), 2,23 (t, J = 5,7 Hz, 1H (OH) ). *?F RMN (376 MHz, CDCl, (trifluorome- til)benzeno como padrão) ô - 74,33 (t, J= 8,8 Hz). Etapa 3: Síntese de (21E,23E,25E,26E,35R,368S,37R,38R,40S, 428,458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35,36,37, 38,48,49-hexametil-44-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]-67,68- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(48),26(49)-tetraeno- 50,51,52,53,54-pentona (1-86):

[00454] “Uma solução de everolimo (0,5 g, 0,52 mmols) em THF (5 mL) foi degaseificada, ácido p-toluenossulfônico (0,45 g, 2,61 mmolis) foi adicionado a O ºC seguido por 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletano|

(0,98 g, 5,22 mmols). A mistura resultante foi agitada a 0ºC durante 0,5 h sob N>, em seguida a 23 ºC durante 6 h, vertida em NaHCO; sa- turado (40 mL) e extraída com EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi lavada com água (30 mL x 2), salmoura (40 mL), secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O re- síduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O de 0% a 70% de produção) para fornecer (21E,23E,25E, 26E,35R,36S,37R,38R,408S,428,458, 46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi- 45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-47-metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-44-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetó- xi)etóxiletóxil-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(48),26 (49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-86: 0,08 g, 14% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1136,5 [M+Na]*. *H RMN (400MHz, CDCI3): ô 6,44-5,88 (m, 4H), 5,73-5,06 (m, 4H), 4,52-4,32 (m, 1H), 4,22-4,12 (m, 1H), 3,91-3,81 (m, 2H), 3,71-3,51 (m, 6H), 3,42- 3,21 (m, 16H), 3,13-2,98 (m, 4H), 2,63-2,42 (m, 4H), 2,32-2,14 (m, 2H), 2,05-1,93 (m, 3H), 1,86-1,55 (m, 16H), 1,44-1,35 (m, 4H), 1,24-1,15 (m, 5H), 1,06-0,78 (m, 17H), 0,65-0,51 (m, 1H). Etapa 4: Síntese de (21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S, 428,448,458,46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35, 36,37,38,48,49-hexametil-44-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]- 67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(48),26(49)- tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-85):

[00455] 100 mg de (21E,23E,25E,26E,35R,368S,37R,38R,408S,42S, 458, 46R,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35,36,37,38, 48,49-hexametil-44-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi) etóxiletóxil-67,68-dioxa- 58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(48),26(49)-tetraeno-50,51,52,53, B4-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep que forne-

ceu (21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,428,448S 458 ,46R,47R, 56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil- 44-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]l-67,68-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(48),26(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (l- 85: 14,3 mg, 14,3% de produção) como um sólido branco.

[00456] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 5,0 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 2,4 mg/ml Injeção : 5 ml Fase móvel : Hexano/EtoH=70/30(V/V) Taxa de fluxo : 30 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00457] 11-85: ESI-EM (El*, m/2): 1136,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 6,06 (m, 3H), 5,92 (dd, J = 30,3, 10,3 Hz, 1H), 5,56 — 5,06 (m, 5H), 4,74 (s, 1H), 4,18 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,94 — 3,83 (m, 2H), 3,82 — 3,51 (m, 12H), 3,49 — 3,25 (m, 11H), 3,22 — 3,03 (m, 2H), 2,72 (dd, J = 16,6, 5,5 Hz, 2H), 2,57 (dd, J = 17,0, 6,5 Hz, 1H), 2,34 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 2,25 — 2,18 (m, 1H), 2,13 — 1,85 (m, 5H), 1,69 (dd, J = 35,2, 8,9 Hz, 10H), 1,47 (dd, J = 20,5, 13,6 Hz, 5H), 1,26 (s, 7H), 1,145 — 0,81 (m, 18H), 0,71 (dd, J = 23,9, 12,0 Hz, 1H). Exemplo 38: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R, 36R,38S, 408,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -45-metóxi-33,34,35,36, 46,47-hexametil-42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]-65,66- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno- 48,49,50,51,52-pentona (1-91) e (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R, 36R,38S,40S,428,43S,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-

[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -45-metóxi- 33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi] etóxi]l-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)- tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-85) e (21E,23E,25E,26E,33R, 348,35R,36R,38S,40S,42R,438S,44R,45R,54R) -44,54-di-hidróxi-43- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45- metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi) etóxiletóxi]-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46), 26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona:

OH O o, e óks Ho ão RW

CE N fo) = o H x O ?

FE 1-91 ma N oH “e, ú Ho bit o o | EANES ND

OA DRAX Ho o Ss no es SE NÃ. Rn e) àHro 5 oro É

É SJ Fo FCO 1-125 1-126 Esquema sintético:

“a S oH bu bio | E) F.C OP Nor + Rapamycin ão sr a ea S q Tea 15% Yo Y SS 191 É

FCO À “Ao 2x OH b. - Ã O Ló " b. « o ” " $ " o nO o. LD ea o o kV Ono 5 dor" 5 > 1-125 J 1-126 É FCO Reco Legenda do esquema Rapamicina Separação quiral Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletanol:

[00458] 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletanol foi igual ao Exemplo

37. Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S, 408,438S,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36, 46,47-hexametil-42-[2-[2-(2,2, 2-trifluoroetóxi)etóxi] etóxil-65,66- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno- 48,49,50,51,52-pentona (1-91):

[00459] “Uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) em DCM (20 mL) foi degaseificada a -40ºC , e ácido trifluoroacético (1,67 mL) foi adicionado. Após agitar durante 10 min. 2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)

etóxiletanol (0,2 g, 1,09 mmols) foi adicionado. A mistura foi agitada a - 40 ºC durante mais 40min., em seguida vertida em NaHCO; gelado (aq. 60mL), lavada com água (20mL), salmoura (20mL), secada sobre MgSO:, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de fase reversa (C18, CH;CN:H2O = 65:35) para fornecer (21E, 23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-di- hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2-[2-(2,2,2-trifluoro- etóxi)etóxiletóxi]l-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25 (46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-91: 85 mg, 15% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1092,4 [M+Na]”. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,45 — 5,76 (m, 4H), 5,40 (ddd, J = 24,9, 15,2, 8,0 Hz, 2H), 5,25 — 4,99 (m, 2H), 4,57 — 4,01 (m, 3H), 3,98 — 3,45 (m, 7H), 3,43 — 2,99 (m, 11H), 2,95 — 2,37 (m, 6H), 2,26 (d, J = 13,9 Hz, 2H), 2,08 — 1,76 (m, 6H), 1,75-1,52 (m, 14 H) 1,48 — 1,10 (m, 10H), 1,07 — 0,74 (m, 18H), 0,60 (dd, J = 23,5, 12,0 Hz, 1H). Etapa 3: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 42R,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46, 47-hexametil-42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]l-65,66-dioxa- 56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50, 51,52-pentona(1-126):

[00460] 159 mg de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 438 ,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil- 42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi] etóxil-65,66-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep para fornecer (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S ,40S,428,438S ,44R,45R,54R) -44 ,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-

1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2-[2-(2,2,2- trifluoroetóxi)etóxiletóxil-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-125: 48.5 mg, 30% de produção) e (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 42R,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47- hexametil-42-[2-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxiletóxi]l-65,66-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52- pentona (1-126:43 mg, 27% de produção) como um sólido branco.

[00461] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 5,0 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 3,0 mg/ml Injeção : 3 ml Fase móvel : Hexano/EtoH=70/30(V/V) Taxa de fluxo : 30 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00462] 1-125: ESI-EM (El*, m/z): 1092,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,36 — 6,13 (m, 2H), 6,06 (dd, J = 15,0, 10,0 Hz, 1H), 5,85 (dd, J = 29,4, 10,8 Hz, 1H), 5,49 — 5,37 (m, 1H), 5,33 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,20 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,08 (t, J = 11,7 Hz, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,11 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 3,94 — 3,64 (m, 7H), 3,63 — 3,46 (m, 5H), 3,42 — 3,18 (m, 12H), 2,93 — 2,79 (m, 2H), 2,71-2,43 (m, 4H), 2,27 (d, J = 11,8 Hz, 2H), 2,08-1,85 (m, 6H), 1,83 — 1,61 (m, 11H), 1,48 — 1,21 (m, 8H), 1,08 — 0,74 (m, 18H), 0,65 — 0,54 (m, 1H).

[00463] 1-126: ESI-EM (El*, m/z): 1092,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 6,07 (m, 3H), 6,00 — 5,81 (m, 1H), 5,56 — 5,05 (m, 4H), 4,75 (s, 1H), 4,18 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 3,98 — 3,52 (m, 11H), 3,50 — 3,22 (m, 12H), 2,95 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 2,77 — 2,50 (m, 4H),

2,38 — 2,16 (m, 2H), 2,12 — 1,83 (m, 5H), 1,69 (dd, J = 39,3, 11,0 Hz, 12H), 1,49 — 1,17 (m, 11H), 1,45 — 0,80 (m, 18H), 0,74 — 0,60 (m, 1H). Exemplo 39: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39S, 418,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletóxi]- 66,67 -dioxa-57 -azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-88) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,418,43R,448,45R,46R,55R )-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48- hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi)etóxi]letóxi]-66,67-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51, 52,53-pentona (1-82) e (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R, 37R,39S, 418,438,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletóxi]- 66,67 -dioxa-57 -azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-83): e oH b.. ss o a) - * nO? o.

L N oro S vs Re 1-88

7 oH “ oH RN o R o y O 3oOY y . D SN

BN EA o o

N Y N X O,, O, FX 5 FÊ o '

Ô l Í ne ne 1-82 1-83 Esquema sintético: Br CHal, CS>, Ss AN PMN oH NaOH (aq. whw=50%) Aeon + VT 25ºC, 3h o àb 95% i HF)a, DOM Pd/C, H2, CH3ZOH PDA DON AA OR Hom Po TF: + Everolimus -78ºC--50º, 2h 28ºC, 20h 39% 83% . S OH V J " chiral PTSOH, THE Or So Í oO separation 0ºC-25º, 6h e O E o SS 24% NV o

N X O,

FA POA o. 188 SÍ o ee . oH ZA oH XY R a R Oo bo |" bum o 6 Ho. so ORA O ER "

CN OO o o N. % N " X SUAS dd 122 PAO É 183 SJ o e. O neo Legenda de esquema Everolimo Separação quiral

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de O-[2-(2-benziloxietóxi)etil] metilsulfanilmeta- notioato:

[00464] Um frasco de base redonda de 1000 mL de dois gargalos equipado com uma barra de agitação magnética foi carregado com 2- (2-benziloxietóxi)etanol (12 g, 61,2 mmols) e cloreto de ben- zil(trietil)amônio (1,0 g, 4,87mmols). Uma solução aquosa a 50% de hidróxido de sódio (141 mL) foi adicionado por meio de um funil de go- tejamento. Após a mistura foi agitada durante 10 min, CS2 (141 mL, 2,34 mol) foi adicionado gota a gota, seguido por iodometano (22,09, 154 mmolis). A mistura foi agitada durante 3 h em temperatura ambien- te. Água (100 mL) foi adicionada. A camada orgânica foi removida, e a fase aquosa foi extraída com CH2Cl2 (100 mL x 3). As camadas orgâ- nicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 100 mL), secadas sobre MgSO:, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc:PE = 1:3) para obter O-[2- (2-benziloxietóxi)etil] metilsulfanilmetanoticato (16,8 g, 95% de produ- ção) como um óleo amarelo. ESI-EM (El*, m/z): 308,9 [M+Na]*. 'H RMN (500 MHz, DMSO-ds) ô 7,32 (dt, J = 18,3, 6,8 Hz, 5H), 4,74 — 4,62 (m, 2H), 4,50 (s, 2H), 3,85 — 3,72 (m, 2H), 3,60 (ddd, J = 8.7, 8,2, 3,6 Hz, 4H), 2,56 (s, 3H). Etapa 2: Síntese de 2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletoximetilbenzeno:

[00465] A uma suspensão de 1,3-dibromo-5,5-dimetil-imidazolidina- 2,4-diona (29,95 g, 104,75 mmols) em DCM (150 mL) foi adicionado (HF)y/Py poli (fluoreto de hidrogênio) de piridínio (49,36 mL, 209,49 mmols,) e O-[2-(2-benziloxietóxi)etil] metilsulfanilmetanotioato (10 9, 34,92 mmols) a -78 ºC, e a mistura foi agitada a -50 ºC durante 2h. À mistura foi vertida em uma solução aquosa de NaHCO;3 e NaHSO;, secada sobre Na2sO. anidroso, filtrada, e concentrada, em seguida purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (PE:EtOAc = 25:1)

para fornecer o produto cru. Em seguida o cru foi também purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (PE:EtOAc = 100:1 a 50:1 a 40:1) para obter 2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletoximetilbenzeno (3,6 9, 39% de produção) como um líquido incolor. ESI-EM (El*, m/z): 287,1 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 7,37-7,22 (m, 5H), 4,57 (s, 2H), 4,10 (t, J = 4,8Hz, 2H), 3,75 (t, J = 4,8Hz, 2H), 3,72 — 3,62 (m, 4H). Etapa 3: Síntese de 2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletanol:

[00466] A uma solução de 2-[2-(trifluorometóxi)etóxi] etoximetilben- zeno (3,4 g, 12,87 mmols) em CH3OH (60 mL) foi adicionado Pd/C (3,13 g). Esta mistura foi em seguida agitada sob atmosfera de H2 em temperatura ambiente durante 20 h, filtrada, concentrada em seguida purificada por cromatografia em sílica-gel (DCM: CH3OH= 50: 1) para fornecer 2-[2-(trifluorometóxi)etóxi] etanol (1,87 g, 83% de produção) como um líquido incolor. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 4,11 — 4,03 (m, 2H), 3,69 (dt, J = 4,4, 2,3 Hz, 4H), 3,61-3,54 (m, 2H), 2,75 (t, J = 5,9 Hz, 1H). *?*F RMN (376 MHz, CDCI3) 5 -61,11 (s). Etapa 4: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S, 418,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletóxi]- 66,67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-88):

[00467] A uma solução desgaseificada de everolimo (0,5 g, 0,52 mmols) em THF (30 mL) foi adicionado ácido p-toluenossulfônico (0,45 g, 261 mmols) a O “C seguido por 2-[2-(triluorometóxi)etóxiletano] (0,91 g, 5,22 mmols). A mistura resultante foi agitada a O ºC durante 0,5 h sob N>, em seguida a 23ºC durante 6 h. A reação foi vertida em NaHCO; saturado (40 mL) e extraída com EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi lavada com água (30 mL x 2), salmoura (20 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida em temperatura ambiente. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN: H2O = 0% to 70% de produção) para fornecer (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S, 418,44S 45R,46R, 55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47 ,48-hexametil- 43-[2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletóxi]l-66,67-dioxa-57-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (l- 88: 141 mg, 24% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El”, m/z): 1122,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 6,39-5,88 (m, 4H), 5,73-5,05 (m, 5H), 4,52-3,83(m, 5H), 3,70-3,50 (m, 6H), 3,43-3,21 (m, 8H), 3,12-2,93 (m, 4H), 2,80-2,44 (m, 4H), 2,31-2,16 (m, 4H), 2,05-1,59 (m, 20H), 1,43-1,34 (m, 4H), 1,21-1,09 (m, 6H), 1,01-0,78 (m, 17H), 0,62-0,51 (m, 1H). Etapa 5: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S, 418,438,44S8,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletóxi]- 66,67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetra- eno-49,50,51,52,53-pentona (1-83) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S, 36R,37R,398,418,43R,44S, 45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)- 2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi) etóxiletóxi]l-66,67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25 (47), 26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-82):

[00468] 130 mg de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S 418, 448 ,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidro- xietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48- hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi) etóxiletóxil-66,67-dioxa-57-aza- triciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53- pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep para fornecer

(21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S,418,43R,44S8,45R,46R,55R )-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2- [2-(triluorometóxi)etóxiletóxi]-66,67-dioxa-57-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-82: 19 mg, 14,6% de produção) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S, 438 ,448 ,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37, 47 48-hexametil-43-[2-[2-(trifluorometóxi)etóxiletóxi]l-66,67-dioxa-57- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53- pentona (1-83: 12 mg, 9,2% de produção), ambos como sólidos bran- cos.

[00469] Método de análise quiral: Coluna: CHIRALPAK IC(ICOOCE-OL002) Tamanho da coluna: 0,46 cm 1.D. x 25 cm L Injeção: 40,0 ul Fase móvel: Hexano/EtoH =60/40(V/V) Taxa de fluxo: 1,0 ml/min Comprimento de onda: UV 254nm Temperatura: 35 ºC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20ATº CP-HPLC-07

[00470] 11-82: ESI-EM (El*, m/z): 11224 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,43 — 5,83 (m, 4H), 5,57 — 5,13 (m, 5H), 4,31 — 4,04 (m, 3H), 3,91 — 3,53 (m, 11H), 3,49 — 3,00 (m, 19H), 2,76 — 2,52 (m, 3H), 2,25 (dd, JU = 34,2, 26,6 Hz, 3H), 2,12 — 1,96 (m, 5H), 1,75 (dd, J = 35,2, 24,7 Hz, 8H), 1,52 — 1,34 (m, 8H), 1,15 — 0,79 (m, 18H), 0,72 (d, J=12,1 Hz, 1H).

[00471] 11-83: ESI-EM (El*, m/z): 11224 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,54 — 6,41 (m, 1H), 6,18 (tdd, J = 29,7, 22,4, 12,7 Hz, 3H), 5,82 — 5,68 (m, 1H), 5,46 — 5,30 (m, 2H), 5,19 (dd, J = 25,5, 20,6

Hz, 2H), 4,62 — 4,40 (m, 1H), 4,21 (d, J = 18,4 Hz, 1H), 3,94 (dd, J = 34,8, 4,5 Hz, 1H), 3,83 — 3,62 (m, 4H), 3,59 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 3,50 — 2,95 (m, 13H), 2,62 (dt, J = 55,5, 38,6 Hz, 2H), 2,42 — 2,17 (m, 3H), 2,16 — 1,57 (m, 24H), 1,54 — 1,27 (m, 10H), 1,12 — 0,80 (m, 18H), 0,71 — 0,62 (m, 1H). Exemplo 40: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39S, 418,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36, 37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletóxi]- 67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-87) e (21E,23E,25E,26E,34R, 358,36R,37R,39S,418,43R,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2- pentafluoroetóxi)etóxil etóxil-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-79) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,418,438S,448S,45R,46R,55R) -45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil] -46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-43- [2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletóxi]l-67,68-dioxa-58-azatri- ciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53- pentona (1-80): PP N oH o À “ o 5 " o

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F 1-87

7 oH DN o Pm Ho Y Sl E" D IA e bro o 6 | Yº RS o s < A o, DN NOR X . SS O,,

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F F 1-79 1-80 Esquema sintético: e Fç AgOTRLIOTLKF Fr - idi o. F MA ou + TVS Je 2-fluoropyridine (OO o RE EtOAc, F F Trifluoromethylbenzene, 30ºC, 60h 31% Õ F Pp-TSOH, THF Pd/C, Hz, CH;OH aca Moe No E + Everolimus F 0 ºC-25 ºC, 6h 28º, 20h F 93% 7% PP o,

XY Ho. io Ms o A A chiral o separation o N o, L N oro sf 187 E F o

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FF FF Po PAO

F F Legendas da figura: fluoropiridina — trifluorometilbenzeno — everolimo

— separação quiral Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxi] etoxime- tilbenzeno:

[00472] Sob uma atmosfera de nitrogênio, sulfonato de trifluorome- tano de prata (19,64 g, 76,44 mmols), sulfonato de trifluorometano de lítio (3,97 g, 25,48 mmols), 1-(clorometil)-4-fluoro-1,4-diazoniabiciclo [2,2.2]octano bis(tetrafluoroborato) (18,05 g, 50,96 mmols) e fluoreto de potássio (5,92 g, 101,92 mmols) foram misturado. 2-(2-benziloxi- etóxi)etanol (5 g, 25,48 mmols), trimetil(1,1,2,2,2-pentafluoroetil)silano (14,69 g, 76,44 mmols), EtOAc (20 mL), trifluorometilbenzeno (20 mL), e 2-fluoropiridina (7,42 g, 76,44 mmols) foram em seguida adicionados sob atmosfera de N> nesta ordem. A mistura de reação foi agitada sob atmosfera de N2 durante 60 h a 30 ºC em seguida filtrada através de um tampão de sílica (eluindo com EtOAc). O filtrado foi coletado e concentrado. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (PE:EtOAc = 25:1) para obter 2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoro- etóxi)etóxiletoximetilbenzeno (2,5 g, 31% de produção) como um líqui- do amarelo claro. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 7,36 — 7,24 (m, 5H), 4,56 (s, 2H), 4,17 — 4,11 (m, 2H), 3,76 — 3,72 (m, 2H), 3,71 — 3,65 (m, 2H), 3,65 — 3,60 (m, 2H). 1ºF RMN (376 MHz, CDCI3) ô -90,77 (s), -86,02 (s). Etapa 2: Síntese de 2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletanol:

[00473] A uma solução de 2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxi] etoximetilbenzeno (0,757 g, 2,41 mmols) em CH3OH (10 mL) foi adici- onado Pd/C (0,589). A mistura foi agitada sob atmosfera de H2 em temperatura ambiente durante 20 h, em seguida filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel (DCM:CH;OH = 50:1) para obter 2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletanol (0,5 9, 93% de produção) como um óleo incolor. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ô

4,13 — 4,06 (m, 2H), 3,69 (dd, J = 5,4, 4,1 Hz, 4H), 3,54 (dd, J = 5,2, 3,9 Hz, 2H), 2,47 (s, 1H). **F RMN (376 MHz, CDCI3) ó -88,21 (d, J = 1,2 Hz), -90,98 (d, J = 1,2 Hz). Etapa 3: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S8S,36R,37R,39S,41S, 448S,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-4-(2-hi- droxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36, 37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletóxi]- 67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-87):

[00474] A uma solução de everolimo (0,5 g, 0,52 mmols) em THF (10 mL) foi adicionado ácido p-toluenossulfônico (0,45 g, 2,61 mmols) a 0 ºC, seguido por 2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletanol (0,58 g, 2,61 mmols). A mistura resultante foi agitada a O ºC durante 0,5 h sob N,, em seguida a 22 ºC durante 6 h, vertida em NaHCO; saturado (40 mL) e extraída com EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi lavada com água (30 mL x 2), salmoura (20 mL), secada sobre Na2SOa. ani- droso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida em temperatura ambiente. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN: HO = 0% a 70% de produção) para fornecer (21E,23E,25E,26E, — 34R,358,36R,37R,39S,418,44S,45R,46R,55R)- 45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2- [2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletóxi]l-67,68-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (l- 87: 40 mg, 7% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El, m/z): 1172,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,45-5,95 (m, 4H), 5,79-5,13 (m, 5H), 4,59-4,17 (m, 3H), 3,98-3,59 (m, 8H), 3,50-3,28 (m, 10H), 3,20-3,00 (m, 5H), 2,89-2,49 (m, 4H), 2,37-2,22 (m, 4H), 2,10- 1,61 (m, 20H), 1,51-1,23 (m, 8H), 1,06-0,85 (m, 16H), 0,71-0,63 (m, 1H).

Etapa 4: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S8S,36R,37R,39S,41S, 438,44S8,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi) etóxiletóxi]l-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47), 26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-80) e (21E,23E,25E,26E, 34R,358,36R,37R,398S,418,43R,44S8,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi- 44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2- pentafluoroetóxi)etóxi] etóxil-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-79):

[00475] 95 mg de (21E,23E,25E,26E, 34R,358,36R,37R,398,418S, 448 ,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]|-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2- pentafluoroetóxi)etóxiletóxil-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona foram enviados para separação quiral para obter (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R, 37R,398,418,43S,44S 45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoro- etóxi)etóxiletóxi]l-67,68-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-80: 7,2 mg, 7,5% de produção) e (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R, 398 418, 43R,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37, 47 48-hexametil-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-pentafluoroetóxi)etóxiletóxil-67,68- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-79: 5,1 mg, 5,3% de produção) como um sólido branco.

[00476] Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 5,0 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 0,79 mg/ml Injeção : 5 ml Fase móvel : Hexano/EtoH=70/30(V/V) Taxa de fluxo : 30 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00477] 1-80: ESI-EM (El*, m/z): 1150,3 [M+H]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,80 (m, 4H), 5,58 — 5,05 (m, 5H), 4,74 (s, 1H), 4,24 — 4,08 (m, 3H), 3,92 — 3,51 (m, 10H), 3,48 — 3,24 (m, 12H), 3,13 (ddd, J = 24,2, 17,1, 11,3 Hz, 3H), 2,64 (ddd, J = 23,4, 16,8, 6,0 Hz, 3H), 2,42 — 2,15 (m, 3H), 2,14 — 1,88 (m, 6H), 1,84 — 1,64 (m, 14H), 1,54 — 1,39 (m, 5H), 1,17 — 0,81 (m, 18H), 0,71 (dd, J = 23,8, 12,1 Hz, 1H).

[00478] 1-79: ESI-EM (El*, m/z): 1172,3 [M+Na]". *H RMN (400 MHz, CDCI3) à 6,42 — 5,90 (m, 4H), 5,54 — 5,03 (m, 6H), 4,31 — 3,96 (m, 5H), 3,88 — 3,01 (m, 22H), 2,94 — 2,37 (m, 5H), 2,39 — 1,94 (m, 7H), 1,68 (dd, J = 28.2, 19,2 Hz, 8H), 1,52 — 1,31 (m, 6H), 1,14 — 1,00 (m, 6H), 0,97 — 0,62 (m, 19H). Exemplo 41: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S, 438,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]- 46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno- 51,52,53,54,55-pentona (1-76) e (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R, 39R,418,438,458,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-(2- hidroxietóxi)etóxi]-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi) etó- xil-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-

hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49), 26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-66) e (21E,23E,25E,26E, 36R,37S,38R,39R,418,438,458,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi- 45-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-46-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxie- tóxi)etóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -48-metóxi-36,37,38,39, 49,50-hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25 (49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-67): “, OH SN o br o ô | oh q Á* DS o o N O,, e > T dHo oH À a

OH 1-76 e OH FR o OH + o 5 ” o, o Or. ss —Oo a. DOR o k s ” F On. o o o o SW DO E. o NM V o o SS Oo N S A S o N o. o os SS o N o y q dHo X do AS oH O. oH O. LT À o ' %

DF OH 1-66 1-67

Esquema sintético: Tf7O, DIPEA, DCM OTBDPS YR DIPEA, toluene po4 oTBDPS Tea O Ton + Everolimas 299% 59% " OH o, OH > R Db R OH bue o Ló | bu o 6 | $ OR Ace Ron O No q NY SS 20%, 3h N Vs so ? 73% fo) NA " X o. NA o À on k Fa TI Tv Vo > 'OTBDPS PANO À oH OA ” OH x o d “ o 6 |

OX OX pTSON, THE C NY — Chiralseparation PTSORTHE, o 20ºC, 2h O. N o % 20% kl Yo Ty D oH O 4 176 À

OH “o oH P OH X ? NY p b. UU o 6 . b. " Oo " x es Ss iN NY SS o N N o NV O. O, o. N Voe A EA 'oH O N 'oH AS 167 À 166 L OH Do legenda do esquema Everolimo Toluene Separação quiral Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 2-[terc-butil(difenil)sililJoxietil trifluorometa- nosulfonato:

[00479] Uma solução de 2-[terc-butil(difenil)silijoxietanol (4,3 9,

14,31 mmols) e DIPEA (2,77 g, 21,47 mmols) em DCM (40 mL) foi res- friada para O ºC sob N> e anidrido trifluorometanossulfônico (4,44 9, 15,74 mmols) adicionado gota a gota. A mistura foi agitada a O ºC du- rante 2h, em seguida diluída com DCM (50 mL), lavada com NaHCO; saturado (50 mL), água (50 mL x 3), e salmoura (50 mL). A camada orgânica foi em seguida secada sobre MgSO:, filtrada, e concentrada sob vácuo para fornecer trifluorometanosulfonato de 2-[terc- butil(difeni!)siliJoxietila (6,19 g, 99% de produção) como um óleo mar- rom. Este foi usado na etapa seguinte sem qualquer outra purificação. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 7,66 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 4H), 7,45-7,38 (m, 6H), 4,56 (t, J = 4,4Hz, 2H), 3,91 (t, J = 4,4Hz, 2H). Etapa 2: Síntese de (35E,37E,39E,40E,48R,49S,50R,51R,53S, 558,57S,58S, 59R,60R,69R)-58-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-[2-[terc- butil(difenil)sililJoxietóxiletóxi]-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 59,69-di-hidróxi-57,60-dimetóxi-48,49,50,51,61,62-hexametil-79,80- dioxa-71-azatriciclo-hexatriaconta-35,37,39(61),40(62)-tetraeno- 63,64,65,66,67-pentona:

[00480] Uma solução de everolimo (1,5 g, 1,57 mmols), trifluorome- tanosulfonato de 2-[terc-butil(difenil)siliJjoxietila e DIPEA (3,27 mL, 18,78 mmols) em tolueno (20 mL) foi agitada a 45 ºC durante 18 h. À mistura foi em seguida vertida em NaHCO; saturado gelado (50 mL), lavada com água gelada duas vezes (60 mL), salmoura (50 mL), seca- da sobre Na2SO. anidroso, filtrada, e concentrada. A mistura foi purifi- cada por meio de cromatografia em sílica-gel (PE:EtOAc = 5:1 a 21, em seguida PE: acetona = 4:1) para obter (35E,37E,39E,40E ,48R,49S, 50R,51R,538S,558,578S,58S,59R,60R,69R)-58-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- [2-[2-[terc-butil(difenil )silil Joxietóxiletóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-59,69-di-hidróxi-57,60-dimetóxi-48,49,50,51,61,62-hexametil- 79,80-dioxa-7 1-azatriciclo-hexatriaconta-35,37,39(61),40(62)-tetraeno- 63,64,65,66,67-pentona (1,15 g, 59% de produção) como um sólido marrom. ESI-EM (El*, m/z): 1263,4 [M+Na]". *H RMN (400 MHz, CDCI3) à 7,62-7,60 (m, 4H), 7,35-7,28 (m, 6H), 6,35-5,80 (m, 4H), 5,51-5,09 (m, 4H), 4,75 (s, 1H), 4,37-4,02 (m, 2H), 3,87-3,49 (m, 11H), 3,37-3,26 (m, 8H), 3,10-2,96 (m, 5H), 2,76-2,48 (m, 3H), 2,28-2,21 (m, 2H), 1,98-1,90 (m, 3H), 1,67-1,39 (m, 18H), 1,26-1,08 (m, 7H), 1,04- 0,76 (m, 26H), 0,64 (q, J = 11,2Hz, 1H). Etapa 3: Síntese de (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 428,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2- (2-hidroxietóxi)etóxil-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42,45- dimetóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona:

[00481] (35E,37E,39E,40E,48R,49S,50R,51R,538S,558,578,588S,59 R,60R,69R)-58-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-[2-[terc- butil(difenil )siliJoxietóxiletóxi]-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-59,69-di- hidróxi-57,60-dimetóxi-48,49,50,51,61,62-hexametil-79,80-dioxa-71- azatriciclo-hexatriaconta-35,37,39(61),40(62)-tetraeno-63,64,65,66,67- pentona (1,15 g, 0,93 mmols) foi dissolvida em THF (10 mL). Hidrofluo- reto de piridínio (0,437 mL, 1,85 mmols,) foi adicionado e a mistura agitada durante 3 h em temperatura ambiente. A mistura foi diluída com EtOAc (30 mL), lavada com NaHCO; saturado (aq., 40 mL x 2) até o pH 10, em seguida lavada com água até o neutro, salmoura (40mL), secada sobre Na2SO,. anidroso, filtrada, e concentrada. O re- síduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (PE:acetona = 4:1 to 2:1) para obter (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R, 36R,38S,40S,428,43S,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 42,45-dimetóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55- azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52- pentona (680 mg, 73% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1024,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 6,35-5,80 (m,

4H), 5,51-5,09 (m, 4H), 4,75 (s, 1H), 4,37-4,02 (m, 2H), 3,87-3,49 (m, 11H), 3,37-3,26 (m, 8H), 3,10-2,96 (m, 5H), 2,76-2,48 (m, 3H), 2,28- 2,21 (m, 2H), 1,98-1,90 (m, 3H), 1,67-1,39 (m, 18H), 1,26-1,08 (m, 7H), 1,04-0,76 (m, 17H), 0,64 (q, J = 11,2Hz, 1H). Etapa 4: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 468,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-46- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno- 51,52,53,54,55-pentona (1-76):

[00482] A uma solução de (22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R, 38S,40S,428,43S 44R, 45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(1S,3R, 4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-42,45- dimetóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-64,65-dioxa-55-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(46),27(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (0,65 g, 0,685 mmols) em THF (6 mL) sob N? a 0ºC foram adicionados p-TsOH (0,56 g, 3,24 mmols) seguido por 2-(2-hidroxietóxi)etanol (1,38 9, 12,97 mmols). A mistura resultante foi agitada a 0ºC durante 10 min, em seguida a 20ºC durante 2 h. A mistura foi vertida em sat.NaHCO;3 (40 mL) e extraída com EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi lavada com água (30 mL x 2), salmoura (40 mL), secada sobre Na2SOa. ani- droso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida em temperatura ambiente. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica- gel (PE:EtOAc= 50% a 100% de EtOAc, em seguida a DCM:CH;OH= 95:5 a 90:10) em seguida purificada por cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O = 50: 50) para fornecer (21E,23E,25E,26E,36R, 378,38R,39R,418,43S, 46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-(2- hidroxietóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil- 68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno-

51,52,53,54,55-pentona (1-76: 140 mg, 20% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1098.5 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) ô 6,31-5,80 (m, 4H), 5,46-4,74(m, 5H), 4,21-4,11 (m, 2H), 3,68- 3,56 (m, 18H), 3,4-3,14 (m, 12H), 3,03-2,97 (m, 2H), 2,68-2,39 (m, 5H), 2,28-2,25 (d, 2H), 1,73-1,55 (m, 18H), 1,40-1,14 (m, 8H), 1,03-0,79 (m, 16H), 0,64 (q, J = 11,2Hz, 1H). Etapa 5: Síntese de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S, 438,458,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-(2-hidroxietóxi) etóxil-46-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil- 68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)- tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-67) e (21E,23E,25E,26E ,36R,37S,38R,39R,418,438,458,46S,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi- 45-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2- hidroxietóxi)etóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi- 36,37,38,39,49, 50-hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(49), 26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-66):

[00483] 140 mg de (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 468 ,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-46- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55- pentona purificada por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resul- tantes repurificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexa- no:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:1) para fornecer (21E,23E,25E, 26E,36R, 378S,38R,39R,418,43S,458,46S ,47R,48R,57R)-47,57-di- hidróxi-45-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]l-46-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)-4-[2-(2- hidroxietóxi)etóxi]l-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-48-metóxi- 36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-

21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55-pentona (1-67: 25,3 mg, 18,1% de produção) e (21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,418,43S, 458,468S ,47R,48R,57R)-47,57-di-hidróxi-45-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-46- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-48-metóxi-36,37,38,39,49,50-hexametil-68,69-dioxa-58-aza- triciclo-hexatriaconta-21,23,25(49),26(50)-tetraeno-51,52,53,54,55- pentona (1-66: 34 mg, 24,3% de produção), ambos como sólidos bran- cos.

[00484] “Método de análise quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC(ICOOCD-OL002) Tamanho da coluna: 0,46 cm 1.D. x 25 cm L Injeção: 100,0 ul Fase móvel: Hexano/EtoH=60/40(V/V) Taxa de fluxo: 1,0 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura: 35 ºC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20AD CP-HPLC-08

[00485] 1-67: ESI-EM (El*, m/z): 10984 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,49 — 6,19 (m, 2H), 6,13 (dd, J = 15,0, 9.8 Hz, 1H), 5,94 (dd, J = 24,3, 10,5 Hz, 1H), 5,58 — 5,45 (m, 1H), 5,41 (d, J= 9.8 Hz, 1H), 5,37 — 5,24 (m, 1H), 5,13 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,19 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 3,92 — 3,52 (m, 16H), 3,51 — 3,25 (m, 11H), 3,25 — 2,99 (m, 3H), 2,72 (dd, J = 16,9, 5,6 Hz, 2H), 2,57 (dd, J = 16,8, 6,3 Hz, 1H), 2,39 — 2,18 (m, 2H), 1,95 (ddd, J = 29.6, 22,0, 10,2 Hz, 6H), 1,83 — 1,40 (m, 15H), 1,37 — 1,46 (m, 8H), 1,15 — 0,82 (m, 18H), 0,71 (dd, J = 24,0, 12,0 Hz, 1H).

[00486] 1-66: ESI-EM (El*, m/z): 1098,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,45 — 5,92 (m, 4H), 5,52 — 4,75 (m, 5H), 4,31 — 3,92 (m, 3H), 3,88 — 3,54 (m, 16H), 3,51 — 3,13 (m, 13H), 3,07 (s, 2H), 2,87 — 2,42 (m, 4H), 2,38 — 1,55 (m, 12H), 1,51 — 1,29 (m, 15H), 1,413 — 0,72

(m, 18H), 0,69 — 0,58 (m, 1H). Exemplo 42: Síntese de (22E,24E,26E,27E,34R,358,36R,37R,39S, 418,438,44S8,45R,46R,55R)-43-hexóxi-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil] -46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatria- conta-22,24,26(47),27(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-103):

OH O 1, SS Y RS —o. o x e rol II, S % N N O, = dO ONO 1-103 Esquema sintético: oH O —o, o & ss so >" o SE Au | PTSOHHO - o% N THF, 20 ºC, 2h N O, — 13% o o. oH O —Oo, o O ss mol > "O SW : o, N N. O, == oe OQ 1103 Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (22E,24E,26E,27E,34R,35S8S,36R,37R,39S,41S, 438,44S8,45R,46R,55R)-43-hexóxi-45,55-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(1S, 3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35, 36,37,47,48-hexametil-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-

22,24,26(47),27(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-103):

[00487] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) e he- xan-1-ol (56 mg, 0,547 mmols) em THF (10 mL) foi adicionado hidrato de ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,52 g, 2,73 mmols) lentamente. À solução resultante foi agitada a 20ºC durante 2h sob N>2, em seguida a mistura foi vertida em NaHCO; aquoso gelado e extraída com EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi secada, filtrada e concentrada. O resí- duo foi em seguida purificado por meio de cromatografia de fase re- versa (C18, CH;CN:H2O = 78:22 ) para fornecer (22E,24E,26E,27E, 34R,358,36R,37R,398,418,43S,44S ,45R,46R,55R)-43-hexóxi-45,55- di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47 ,48-hexametil-65,66-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (l- 103: 72 mg, 13% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1006,0 [M+Na]*. *H RMN(500 MHz, CDCI3) 5 6,44 — 5,85 (m, 4H), 5,60 — 5,07 (m, 4H), 4,77 (s, 1H), 4,29 — 3,98 (m, 2H), 3,76 — 3,67 (m, 1H), 3,46 — 3,28 (m, 10H), 3,23 — 3,03 (m, 2H), 3,02 — 2,77 (m, 2H), 2,69 (m, 3H), 2,36 (d, J = 32,6 Hz, 2H), 2,17 — 1,90 (m, 4H), 1,66 — 1,44 (m, 22H), 1,35 — 1,21 (m, 11H), 1,47 — 0,84 (m, 22H), 0,72-0,65 (m, 1H). Exemplo 43: Síntese de (21E,23E,25E,26E,44R,458,46R,47R,49S, 518,54S,55R,56R,65R)-55,65-di-hidróxi-53-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l-54-[(1R)-2-[(1S, 3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-56- metóxi-44,45,46,47,57,58-hexametil-76,77-dioxa-66-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(57),26(58)-tetraeno-59,60,61,62,63-pentona (1-99):

OH O a, * - ES o ô fr o x oo DA, c PP : nn? HO fr % Y N o. = do H % o “

OH 1-99 Esquema sintético: s Sí OH O o —Oo õ >. o O Ns o >) o SS + S PTSA.H,O P : o o THF, 22ºC, 18h, N, HO fo) Y q 14% N O, = o Ho E > al

OH

OH O Oo õ s ' o x oo ol ) " SW PP ES > HO % N N o. = do H % 199 o 4

OH

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,44R,458,46R,47R,49S, 518,54S,55R,56R,65R)-55,65-di-hidróxi-53-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxi] etóxiletóxil-54-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-56-metóxi-44,45,46,47,57,58-hexametil- 76,77-dioxa-66-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(57),26(58)- tetraeno-59,60,61,62,63-pentona (1-99):

[00488] A uma solução de everolimo (0,5 g, 0,52 mmols) e 2-[2-[2- [2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletanol (3,41 g, 10,44 mmols) em THF (15 mL) foi adicionado hidrato de ácido 4- metilbenzenossulfônico (0,52 g, 2,73 mmols) lentamente. A mistura resultante foi agitada a 22 ºC durante 18 h sob N> em seguida extinta com NaHCO; aquoso (30 mL) e extraída com EtOAc (60 mLx*x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL), salmoura (50 mL), secadas sobre Na2SO. anidroso, filtradas, e con- centradas sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de fa- se reversa (C18, CH;3CN:H2O = 70:30) para fornecer (21E,23E,25E, 26E,44R,458,46R,47R,498,518,548S,55R,56R,65R)-55,65-di-hidróxi- 53-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxi] etóxil-54-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-5S6-metóxi-44,45,46,47,57,58-hexametil-76,77-dioxa-66- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(57),26(58)-tetraeno-59,60,61,62,63- pentona (1-99: 93 mg, 14% de produção) como um sólido branco. ESI- EM (El*, m/z): 1274,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,42 — 5,82 (m, 4H), 5,64 — 5,06 (m, 4H), 4,81 (s, 1H), 4,30 — 4,08 (m, 1H), 3,81 — 3,53 (m, 35H), 3,46 — 3,26 (m, 12H), 3,22 — 3,05 (m, 4H), 2,76 — 2,65 (m, 2H), 2,39 — 2,22 (m, 2H), 2,14 — 1,97 (m, 3H), 1,75 — 1,55 (m, 13H), 1,52 — 1,39 (m, 4H), 1,30 — 1,13 (m, 6H), 1,08 — 0,82 (m, 17H), 0,76 — 0,65 (m, 1H).

Exemplo 44: Síntese de (21E,23E,25E,26E,46R,47S,48R,49R,518S, 538,56S,57R,58R,67R)-57,67-di-hidróxi-55-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi] etóxiletóxi]l-56-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-58-metóxi-46,47,48,49,59,60-hexametil-78,79-dioxa-68- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(59),26(60)-tetraeno- 61,62,63,64,65-pentona (1-97):

OH O o. o ds mol > "O, SS HH o EO, N N o. = o H

Á o

S

OH 1-97 Esquema sintético: OoH O —o, . o À Ns EMANA OH — PTSAHO rol») Es Soo Longo THF, 35ºC,18h, No % N POSSO 16% N O., =

O o OH O o, o Ns ro" “o s se H LEo, N N O. =

O H Ô ro7 A "&

OH

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,46R,47S8,48R,49R,51S, 538,56S,57R,58R,67R)-57,67-di-hidróxi-55-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxi] etóxiletóxiletóxiletóxi]-56-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-58-metóxi-46,47,48,49,59,60-hexametil- 78,79-dioxa-68-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(59), 26(60)- tetraeno-61,62,63,64,65-pentona (1-97):

[00489] Auma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) em THF (15 mL) foram adicionados ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,47 9, 2,73 mmols) e nonaetileno glicol (2,27 g, 5,A7 mmols) a 10 ºC. A rea- ção foi agitada a 30ºC durante 18 h sob No em seguida extinta com NaHCO; aquoso e extraída com EtOAc (60 mL* 3). As camadas orgâ- nicas combinadas foram lavadas com água (50 mL), salmoura (50 mL), secadas sobre Na2SO., anidroso, filtradas e concentradas. O re- síduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O = 63:37) para fornecer (21E,23E,25E,26E,46R,478S 48R, 49R,518,538S,56S,57R,58R,67R)-57,67-di-hidróxi-55-[2-[2-[2-[2-[2-[2- [2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi] etóxil-56-[(1R)-2-[(18S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]-58-metóxi-46,47,48,49,59,60-hexametil-78,79-dioxa-68-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(59),26(60)-tetraeno-61,62,63,64,65-pentona (I- 97: 111 mg, 16% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El”*, m/z): 1318,9 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,50 — 5,79 (m, 4H), 5,64 — 5,06 (m, 4H), 4,89 (d, J = 53,5 Hz, 1H), 4,51 — 3,94 (m, 2H), 3,75 — 3,18 (m, 46H), 3,02 — 2,86 (m, 2H), 2,82 — 2,61 (m, 3H), 2,39 — 2,18 (m, 2H), 2,20 — 1,91 (m, 6H), 1,78 — 1,54 (m, 16H), 1,51 — 1,19 (m, 11H), 1,09 — 0,82 (m, 17H), 0,74 — 0,62 (m, 1H). Exemplo 45: Síntese de (21E,23E,25E,26E,50R,518,52R,53R,558S, 578,60S,61R,62R,71R)-61,71-di-hidróxi-59-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-

[2-(2-hidroxietóxi)etóxi]letóxi]letóxiletóxiletóxi] etóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l-60-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-62-metóxi-50,51,52,53,63,64- hexametil-82,83-dioxa-72-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25 (63), 26(64)-tetraeno-65,66,67,68,69-pentona (1-96):

OH O MAR ; ss —o. o O e mol >" > SS e H o 1 =, N N O. = o H O *“ o

OH 1-96 Esquema sintético: OoH O o, Õ. “ o. O. à o > EMPVP DN NVPPNOoH PTSA so) so s + EO) > CR) POA o

O O OoH O o, ô. Ss o D) Ô o > "N o SS ses H

CE N O. = do H Ô 16 *

OH

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,50R,51S,52R,53R,558,57S, 60S,61R,62R,71R)-61,71-di-hidróxi-59-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxi] etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-62-metóxi- 50,51,52,53,63,64-hexametil-82,83-dioxa-72-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(63), 26(64)-tetraeno-65,66,67,68,69-pentona (1-96):

[00490] A uma solução de rapamicina (0,2 g, 0,22 mmols) e ácido 4-metilbenzenossulfônico (0,19 g, 1,09 mmols) em THF (6 mL) foi adi- cionado 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxi] etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletanol (1,10 g, 2,19 mmolis) a 0 ºC e a rea- ção foi agitada a 20 ºC durante 2 h, em seguida vertida em NaHCO; saturado (30 mL) e extraída com EtOAc (40 mL* 3). As camadas or- gânicas combinadas foram lavadas com água (40 mL), salmoura (40 mL), secadas sobre Na2SO., anidroso, filtradas e concentradas. O re- síduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN: H2O = 51:49) para obter (21E,23E,25E,26E,50R,518,52R,53R,558S, 578,60S,61R,62R,71R)-61,71-di-hidróxi-59-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2- (2-hidroxietóxi)etóxiletóxiletóxiletóxi] etóxiletóxiletóxiletóxiletóxiletóxi]l-BO-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-62-metóxi-50,51,52,53,63,64-hexametil- 82,83-dioxa-72-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(63),26(64)-tetraeno- 65,66,67,68,69-pentona (1-96: 61 mg, 20% de produção) como um óleo incolor. ESI-EM (El*, m/z): 1408,0 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 6,41 — 5,84 (m, 4H), 5,61 — 5,08 (m, 4H), 4,79 (s, 1H), 4,32 — 4,05 (m, 1H), 3,89 — 3,46 (m, 44H), 3,46 — 3,16 (m, 12H), 2,98 — 2,50 (m, 7H), 2,32 (s, 2H), 2,15 — 1,89 (m, 4H), 1,82 — 1,68 (m, 8H), 1,56 — 1,16 (m, 14H), 1,12 — 0,82 (m, 18H), 0,74 — 0,56 (m, 1H).

Exemplo 46: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S, 408,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35, 36,46,47-hexametil-42-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]-65,66-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51, 52-pentona (1-77) e (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,428,438S,44R,45R,54R) -44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil] -45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42- [2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona e (21E, 23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,428,43R,44R,45R,54R)- 44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil] -45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42- [2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona: oH O — AR í " :

IE N. o O, S = " 77 OH O oH O e o TEU. = RT EL. o BO "* " 1-70 1-71 Esquema sintético:

oH O Ho [2x oH NAO" e SS P P-TSOH.HZO o. SW O THF, 0º0-35%, 18h P À FC 19% N O, = O" . oH O no à ll. NAO " o 9º Ss Chiral separation oe & EX N O, = mm ç MNE: oH O oH O ADA» A MAR í s no Ô& s HR o > " ÃO " y o Ss O) so s : o N O NS oC Bond 7 Ç DN Net ro Po Mera Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R, 388,408S,43S8,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi- 33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2-(2,2, 2-trifluoroetóxi) etóxil-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)- tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-77):

[00491] Uma solução de rapamicina (0,3 g, 0,313 mmols) e 2- (2,2,2-trifluoroetóxi)etanol (0,9 g, 8,26 mmols) em THF (9 mL) foi res- friada para 0ºC e p-TsOH (0,27 g, 1,57 mmols) foi adicionado. A mistu- ra resultante foi agitada a 35 ºC durante 5h sob N> em seguida vertida em NaHCO; gelado e extraída com EtOAc (40 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL), salmoura (30 mL), secadas, filtradas, e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O = 57:43) pa- ra fornecer (21E,23E,25E,26E,33R,348S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,

45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil- 42-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatria- conta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-77: 0,063 g, 19% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1092,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,55 — 5,88 (m, 4H), 5,72 — 5,03 (m, 4H), 4,78 (s, 1H), 4,63 — 4,34 (m, 1H), 4,32 — 4,09 (m, 1H), 4,00 — 2,81 (m, 21H), 2,77 — 2,43 (m, 3H), 2,41 — 2,17 (m, 2H), 2,18 — 1,93 (m, 3H), 1,93 — 1,54 (m, 18H), 1,54 — 1,14 (m, 10H), 1,13-— 0,79 (m, 16H), 0,78 — 0,63 (m, 1H).

Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 428,438,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35, 36,46,47-hexametil-42-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi) etóxil-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)- tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (171) e (21E,23E,25E,26E,33R, 348,35R,36R,38S,40S,428,43R,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43- [(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil- etil]|-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2-(2,2,2-trifluoroe- tóxi)etóxil-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46), 26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-70):

[00492] 100 mg de (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 438 ,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidro- xietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47- hexametil-42-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi) etóxi]l-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)- tetraeno-48,49,50,51,52-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resultantes purificados por meio de croma- tografia em sílica-gel (hexano:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:0,3) para fornecer

(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S ,40S,428,438S ,44R,45R,54R) -44 ,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36,46,47-hexametil-42-[2- (2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]l-65,66-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta- 21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52-pentona (1-71: 16 mg, 16% de produção) e (21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S, 428 ,43R,44R,45R,54R)-44,54-di-hidróxi-43-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-45-metóxi-33,34,35,36, 46,47-hexametil-42-[2-(2,2,2-trifluoroetóxi)etóxi]l-65,66-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(46),26(47)-tetraeno-48,49,50,51,52- pentona (1-70: 8 mg, 8% de produção) como um sólido branco.

[00493] “Método de separação quiral: Coluna : CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 2,5 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 2,0 mg/ml Injeção : 7ml Fase móvel : Hexano/EtoH=70/30(V/V) Taxa de fluxo : 40 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00494] 11-71: ESI-EM (El*, m/z): 10924 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 8,20 (m, 2H), 6,13 (dd, J = 15,1, 9,7 Hz, 1H), 5,93 (dd, J = 22,9, 10,3 Hz, 1H), 5,58 — 5,45 (m, 1H), 5,41 (d, J= 9.8 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,19 — 5,03 (m, 1H), 4,78 (s, 1H), 4,19 (dd, J = 13,9, 5,9 Hz, 1H), 3,95 — 3,63 (m, 10H), 3,63 — 3,53 (m, 2H), 3,52 — 3,25 (m, 11H), 3,24 — 3,01 (m, 3H), 2,72 (dd, J = 16,8, 5,8 Hz, 2H), 2,58 (dd, J = 16,8, 6,3 Hz, 1H), 2,31 (t, J = 23,5 Hz, 2H), 2,15 — 1,40 (m, 18H), 1,27 (ddd, J = 32,5, 18,2, 6,3 Hz, 8H), 1,15 — 0,81 (m, 18H), 0,70 (dt, JU = 17,8, 9,0 Hz, 1H).

[00495] 1-70: ESI-EM (El*, m/z): 10924 [M+Na]*. H RMN (400

MHz, CDCI3) 5 6,43 — 5,90 (m, 4H), 5,56 — 5,08 (m, 5H), 4,33 — 3,99 (m, 3H), 3,95 — 3,63 (m, 8H), 3,62 — 3,02 (m, 18H), 2,89 — 1,97 (m, 12H), 1,76 (dd, J = 31,4, 24,8 Hz, 8H), 1,40 (ddd, J = 39,2, 29,5, 12,0 Hz, 9H), 1,14 — 0,79 (m, 18H), 0,76 — 0,61 (m, 1H). Exemplo 47: Síntese de 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R, 408,428,458,46R,47R,57R)-46,57 -di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi- 35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo-69,70-dioxa- B58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44-ilJóxi]- N,N-dimetil-butanamida (1-69) e 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,368S, 37R,38R,40S,428,44R,458,46R,47R,57 R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)- 2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 47-metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo- 69,70-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)- tetraen-44-ilJóxi]-N,N-dimetil-butanamida (1-61) e 4-[[(23E,25E, 27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,428,448,458,46R,47R,57 R)-46,57-di- hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52, 53,54-pentaoxo-69,70-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27 (48),28(49)-tetraen-44-il]Jóxi]-N, N-dimetil-butanamida (1-62): ”, o D x O, o o o - ES nO o.

L N oWo 5 . 1-69

P OH 2, oH o. o q o SN POSNIA S D A OS Do o Y Do so |” re) : HO MN Ss jo) s o o nO? DN N W O, Se O,, SS HO Y oro A > o 1-61 1-62 Esquema sintético: P NÃO o PTSA + ON 10º, 18h WA OH + Everolimus ———— o 91% | THF, 35ºC, 18h, Nº 15% m o

X o, ” 6 to) ] chiral o SW separation o NS O, O oWo O. 169 b o 2 oH PP OH — " A o o E) ” so ÁS É HO SÍ es Ss o o

NA N N Y o, LR O, SS Ho OO | d : O. O. 62 À rs h não ” o | legenda Everolimo Separação quiral

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 4-hidróxi-N, N-dimetilbutanamida:

[00496] Uma mistura de tetra-hidrofuran-2-ona (5 g, 58,1 mmols) e N-metilmetanamina (43,64 g, 290,4 mmols, 90 mL) foi agitada a 10 ºC durante 18 h, o solvente foi removido, e em seguida liofilizado para fornecer 4-hidróxi-N,N-dimetil-butanamida (6,9 g, 91% de produção) como um óleo incolor. ESI-EM (EI*, m/z): 132,3 [M+H]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) à 3,67 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,04 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 2,49 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 1,94 — 1,84 (m, 2H). Etapa 2: Síntese de 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R, 408,428,458,46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35, 36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53, 54-pentaoxo0-69,70-dioxa-58- azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44-ilJóxi]-N,N- dimetil-butanamida (1-69):

[00497] A uma solução de everolimo (0,3 g, 0,313 mmols) em THF (9 mL) a 0 ºC sob Nfoi adicionado ácido p-toluenossulfônico (0,27 9, 1,57 mmols) e 4-hidróxi-N, N-dimetil-butanamida (0,82 g, 8,26 mmols). A mistura foi aquecida para 35 ºC e agitada durante 18 h, em seguida vertida em NaHCO; gelado e extraída com EtOAc (20 mL x 3). As ca- madas orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL), sal- moura (30 mL), secadas sobre Na2SO. anidroso, filtradas, e concen- tradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH;CN:H20= 55:45) para fornecer 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R, 36S,37R,38R,40S,428,458,46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47- metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo-69,70- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44- iIJóxi]-N, N-dimetil-butanamida (1-69: 0,05 g, 15% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1079,4 [M+Na]*. *H RMN (400

MHz, CDCI3) 5 6,52 — 5,78 (m, 4H), 5,67 — 5,05 (m, 4H), 4,75 (s, 1H), 4,48 — 4,09 (m, 2H), 4,04 — 3,51 (m, 7H), 3,52 — 3,12 (m, 12H), 3,12 — 2,88 (m, 7H), 2,82 — 2,27 (m, 6H), 2,22 — 1,53 (m, 23H), 1,54 — 1,13 (m, 10H), 1,12 — 0,80 (m, 15H), 0,79 — 0,61 (m, 1H). Etapa 3: Síntese de 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S, 428,448,458,46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(1S8,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi- 35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaox0-69,70-dioxa- 58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44-ilJóxi]- N,N-dimetil-butanamida (1-62) e 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R, 38R,408,428,44R,458,46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47- metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo0-69,70- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44- ilJóxi]-N, N-dimetil-butanamida (1-61):

[00498] 120 mg de 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S, 428 ,458 ,46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35,36,37,38, 48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo-69,70-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44-ilJóxi]l-N N-dimetil- butanamida foram purificados por meio de HPLC quiral prep para for- necer 4-[[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,408,428,448, 458, 46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxie- tóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-35,36,37,38,48,49- hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo-69,70-dioxa-58-azatriciclo-hexa- triaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44-ilJóxi]l-N N-dimetil-butanamida (1-62: 34,3 mg, 29% de produção) e 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S, 37R,38R,40S,428,44R,458,46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47- metóxi-35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo-69,70-

dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44- ilJóxi]l-N, N-dimetil-butanamida (1-61: 24,2 mg, 20% de produção), am- bos como sólidos brancos.

[00499] “Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC Tamanho da coluna : 5,0 cm 1.D. x 25 cm L Concentração da solução: 1 mg/ml Injeção : 5 ml Fase móvel : EtoH=100% Taxa de fluxo : 50 ml/min Comprimento de onda: UV 254 nm Temperatura : 35 ºC

[00500] 1-62: ESI-EM (El*, m/z): 1079,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,30 (tt, J = 34,4, 17,0 Hz, 2H), 6,13 (dd, J = 14,9, 10,0 Hz, 1H), 5,91 (dd, J = 28,8, 10,6 Hz, 1H), 5,51 (dd, J = 15,0, 8,9 Hz, 1H), 5,45 — 5,37 (m, 1H), 5,27 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,19 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 3,88 (s, 1H), 3,82 — 3,64 (m, 5H), 3,62 — 3,52 (m, 2H), 3,47 — 3,25 (m, 11H), 3,24 — 3,14 (m, 2H), 3,10 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,01 (s, 3H), 2,94 (s, 3H), 2,71 (dd, J = 16,7, 5,7 Hz, 2H), 2,55 (dd, J = 16,8, 6,6 Hz, 1H), 2,44 — 2,25 (m, 4H), 2,14 — 1,63 (m, 17H), 1,33 (ddd, J = 40,8, 27,4, 12,3 Hz, 11H), 1,14 — 0,83 (m, 18H), 0,71 (dd, J = 23,8, 11,9 Hz, 1H).

[00501] 1-61: ESI-EM (El*, m/z): 1079,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,43 — 5,88 (m, 4H), 5,65 — 5,08 (m, 5H), 4,33 — 4,08 (m, 2H), 3,94 — 3,52 (m, 6H), 3,49 — 3,31 (m, 8H), 3,30 — 3,12 (m, 8H), 3,09 — 2,81 (m, 8H), 2,75 — 2,26 (m, 6H), 2,10 (d, J = 63,9 Hz, 3H), 1,88 — 1,65 (m, 14H), 1,35 (dt, J = 49,7, 11,3 Hz, 9H), 1,48 — 0,81 (m, 18H), 0,77 — 0,60 (m, 1H).

Exemplo 48: Síntese de 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,368S,37R,38R, 408,428,458,46R,47R,57R)-46,57-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi- 35,36,37,38,48,49-hexametil-50,51,52,53,54-pentaoxo-69,70-dioxa- B58-azatriciclo-hexatriaconta-23,25,27(48),28(49)-tetraen-44-ilJóxi]- N,N-dimetil-butanamida (1-68) e 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,358S,36R, 37R,398,418,43R,448,45R,46R,56R)-45,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-49,50,51,52,53-pentaoxo0-68,69- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)-tetraen-43- ilJóxi]-N-metil-butanamida (1-59) e 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S, 36R,37R,398S,418,438,448,45R,46R,56R)-45,56-di-hidróxi-44-[(1R)- 2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]- 46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-49,50,51,52,53-pentaoxo- 68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)- tetraen-43-ilJóxi]-N-metil-butanamida (1-60): “o, S OH,

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7 oH * o P oH o, o 5) O Q Or. o —o " E ” POMAR PODO es SS to so ” o ES NO? “ ea o O,, & N, %

À SAS 1-59 1-60 Esquema sintético: “ N oH Oo, " o ” o AO o " NY Di) > > o o 1 522 A OH+ everolimus E “o. = ) 295% H THF, 35ºC, 18h º A o. É» 13% 168 N >N o

H " S oH A N Ho : e O.. o o 6 " O, " o 6 P O À . so Ho. Esc " chiral Po NY SS o NY à) separation o no N No SS ) Yao >

OT SAS PANO O. so À so N » o D o legenda de esquema Everolimo Separação quiral Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de 4-hidróxi-N, N-dimetilbutanamida:

[00502] A uma solução de metilamina (5,41 g, 174,24 mmols) em água (30 mL) foi adicionado tetra-hidrofuran-2-ona (5 g, 58,08 mmols) gota a gota em O ºC. A mistura foi agitada a 5 ºC durante 2 h, em se-

guida concentrada e liofilizada para fornecer 4-hidróxi-N-metil-butana- mida (6,5 g, 95,5% de produção) como um líquido espesso. ESI-EM (El*, m/2): 118,3 [M+H]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,02 (s, 1H), 3,69 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,81 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 2,36 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,88 (dt, J = 12,2, 6,1 Hz, 2H). Etapa 2: Síntese de 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,358,36R,37R, 39S,418,448,45R,46R,56R)-45,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-49,50,51,52,53-pentaox0-68,69-dioxa- 58-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)-tetraen-43-ilJóxi]- N-metil-butanamida (1-68):

[00503] “Uma solução de everolimo (1 g, 1,04 mmols) e 4-hidróxi-N- metil-butanamida (2,45 g, 20,87 mmols) em THF (30 mL) foi resfriada para O ºC sob N.> e ácido p-toluenossulfônico (0,9 g, 5,22 mmols) adi- cionado. A reação foi aquecida para 35 ºC e agitada durante 18 h, em seguida vertida em NaHCO; saturado (150 mL) e extraída com EtOAc (100 mL*x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (80 mL), salmoura (80 mL), secadas sobre Na2SO. anidroso, fil- tradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, 80 g, CH;CN:H2O = 37:33) para fornecer 4- [[(22E,24E,26E,27E,34R,358,36R,37R,39S,418,448S 45R,46R,56R)- 45,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil- 49,50,51,52,53-pentaox0-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta- 22,24,26(47),27(48)-tetraen-43-ilJóxi]l-N-metil-butanamida (1-68: 0,14 9, 13% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1065,3 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,50 — 5,85 (m, 4H), 5,78 — 4,96 (m, 5H), 4,78 (s, 1H), 4,33 — 4,03 (m, 2H), 3,98 — 3,64 (m, 5H), 3,63 — 3,49 (m, 2H), 3,49 — 2,90 (m, 13H), 2,90 — 2,48 (m, 6H), 2,41 — 1,94 (m, 7H), 1,93 — 1,54 (m, 18H), 1,53 — 1,11 (m, 10H), 1,11 — 0,80 (m,

16H), 0,78 — 0,54 (m, 1H). Etapa 3: Síntese de 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,358S,36R,37R,39S, 418,438,448,45R,46R,56R)-45,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi- 34,35,36,37,47,48-hexametil-49,50,51,52,53-pentaox0-68,69-dioxa- 58-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)-tetraen-43-ilJóxi]- N-metil-butanamida (1-60) e 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,358,36R, 37R,398,418,43R,448,45R,46R,56R)-45,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2- [(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-49,50,51,52,53-pentaoxo0-68,69- dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)-tetraen-43- ilJóxi]-N-metil-butanamida (1-59):

[00504] 130 mg de 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,358,36R,37R,39S, 418,448S,45R,46R,56R)-45,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2- hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37, 47 ,48-hexametil-49,50,51,52,53-pentaoxo-68,69-dioxa-58-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)-tetraen-43-ilJóxil-N-metil-butana- mida foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resultantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexa- no:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:0,8) para fornecer 4-[[(22E,24E,26E, 27E,34R,358,36R,37R,398S,418,438S ,448S,45R,46R,56R)-45,56-di- hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil] -46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-49,50,51,52,53- pentaoxo-68,69-dioxa-58-azatriciclo-hexatriaconta- 22,24,26(47),27(48)-tetraen-43-ilJóxi]l-N-metil-butanamida (1-60: 25 mg, 19% de produção) e 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,358,36R,37R,39S, 418,A43R,448,45R,46R,56R)-45,56-di-hidróxi-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- (2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil|-46-metóxi-34,35,36, 37,47 A48-hexametil-49,50,51,52,53-pentaoxo-68,69-dioxa-58-azatrici- clo-hexatriaconta-22,24,26(47),27(48)-tetraen-43-ilJóxi]l-N-metil-butana-

mida (1-59: 36 mg, 27% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00505] — Método de análise quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC-3(IC3OCE-NJ008) Tamanho da coluna: 0,46 cm |.D. x25 cm L Injeção: 50,0 ul Fase móvel: Hexano/EtoH=50/50(V/V) Taxa de fluxo: 1,0 ml/min Comprimento de onda: UV 254nm Temperatura: 35 ºC Equipamento de HPLC: Shimadzu LC-20ATº CP-HPLC-06

[00506] 1-60: ESI-EM (El*, m/z): 1065,4 [M+Na]". *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,32 (ddd, J = 31,4, 14,8, 10,2 Hz, 2H), 6,13 (dd, J = 15,1, 9,9 Hz, 1H), 6,00 — 5,85 (m, 1H), 5,69 (s, 1H), 5,51 (dd, J = 14,9, 9,0 Hz, 1H), 5,41 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 5,13 (dt, J = 48.5, 24,3 Hz, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,18 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 3,92 — 3,63 (m, 6H), 3,61 — 3,50 (m, 2H), 3,46 — 3,25 (m, 10H), 3,22 — 3,00 (m, 3H), 2,79 (dd, J = 4,8, 2,2 Hz, 3H), 2,72 (dd, J = 16,9, 5,5 Hz, 2H), 2,55 (dd, J = 16,8, 6,5 Hz, 1H), 2,38 — 2,14 (m, 4H), 2,12 — 1,91 (m, 4H), 1,89 — 1,62 (m, 15H), 1,52 — 1,11 (m, 13H), 1,10 — 1,01 (m, 6H), 1,00 — 0,81 (m, 9H), 0,71 (dd, JU = 23,6, 12,1 Hz, 1H).

[00507] 1-59: ESI-EM (El*, m/z): 1065,4 [M+Na]". *H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 6,37 — 5,81 (m, 4H), 5,66 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 5,60 — 4,89 (m, 4H), 4,16 (ddd, J = 31,9, 15,6, 5,8 Hz, 2H), 3,93 — 3,42 (m, 8H), 3,38 — 2,95 (m, 12H), 2,89 — 2,39 (m, 7H), 2,37 — 1,89 (m, 9H), 1,83 — 1,60 (m, 13H), 1,45 — 1,05 (m, 11H), 1,03 — 0,73 (m, 18H), 0,62 (dd, J = 23,9, 12,1 Hz, 1H).

Exemplo 49: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39S, 418,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxi]l-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67 -dioxa-56-

azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52, 53-pentona (1-94):

OH O nu, Es Y FS —o, o O ss

DX % N N O, = oO | x 9 Mor 1-94 Esquema sintético: oH O MA s OH O o. o ô& Ns "o » HO a o, o dk. ? O) Tão S " PTSA OQ NY O) o Ss, (np CC o o sn o. THF, 0-20º%C, 2h ho H CC Pp X£o 22% o O, N O,, = ? q o % OH ç 194 R oH Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,398,41S, 448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi] etóxil-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1- metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51, 52,53-pentona (1-94):

[00508] A uma solução de rapamicina (0,5 g, 0,547 mmols) em THF (10 mL) a 20 ºC sob N> foram adicionados hidrato de ácido 4-metilben- zenossulfônico (0,52 g, 2,73 mmols) lentamente e 2-[2-(2-hidroxietóxi)

etóxiletano! (1,72 g, 11,49 mmols, 3 mL). A solução resultante foi agitada durante 2h, em seguida vertida em sat. NaHCO; (80 mL) e extraída com EtOAc (60 mLx*x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (60 mL), salmoura (60 mL), secadas sobre Na2SO. anidroso, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C-18, CH;CN:H2O = 75:25) para fornecer (21E,23E,25E, 26E,34R,358,36R,37R,398S,418,44S 45R,46R,55R)-45, 55-di-hidróxi-43- [2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-44-[(1R)-2-[(18S,3R, 4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37, — 47,48-hexametil- 66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47), — 26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-94: 125 mg, 22% de produção) como um sóli- do branco. ESI-EM (El*, m/z): 1054,5 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) à 6,44 — 5,87 (m, 4H), 5,52 — 5,12 (m, 4H), 4,90 (s, 1H), 4,34 — 4,11 (m, 1H), 4,05 — 3,83 (m, 1H), 3,80 — 3,53 (m, 13H), 3,50 — 3,22 (m, 12H), 3,01 — 2,49 (m, 6H), 2,39 — 1,87 (m, 6H), 1,82 — 1,68 (m, 8H), 1,44 — 1,145 (m, 13H), 1,11 — 0,85 (m, 18H), 0,71 — 0,57 (m, 1H). Exemplo 50: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R,37R,39S, 418,43R,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietó- xi)etóxiletóxi]-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metoxi-ciclo- hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-93): o O AA EX, Hot / o

GE A

X do: 1-93 Esquema sintético:

OH O oH O o, TX. o, <Q ô O rol) . % º ” NR sm O ' : e = o Al oO A o 193 o dr Ad, Legenda da figura: separação quiral Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S, 43R,448,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxil-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52, 53-pentona (1-93):

[00509] 7,0gda mistura epimérica (Exemplo 49; 1-94) foram purifi- cados por meio de HPLC quiral prep para obter (21E,23E,25E,26E, 34R,358,36R,37R,398S,418,43R,44S8,45R,46R,55R)-45,55-di-hidróxi- 43-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47 ,48-hexametil- 66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-93: 1,113 g, 16% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1054,4 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,41 — 5,92 (m, 4H), 5,63 (ddd, J = 23,1, 15,1, 8.2 Hz, 1H), 5,47 (dd, J = 29,9, 10,3 Hz, 1H), 5,30 — 5,00 (m, 2H), 4,33 — 4,12 (m, 2H), 3,97 (dd, J = 18,9, 6,6 Hz, 1H), 3,86 — 3,48 (m, 14H), 3,44 — 3,22 (m, 10H), 2,97 — 2,88 (m, 1H), 2,82 (s, 1H), 2,74 — 2,46 (m, 3H), 2,30 (d, J = 14,3 Hz, 2H), 2,21 — 1,91 (m, 5H), 1,86 — 1,57 (m, 11H), 1,50 — 1,22 (m, 12H), 1,46 — 0,81 (m, 18H), 0,66 (dt, J = 23,8, 11,7 Hz, 1H). Exemplo 51: Síntese de (22E,24E,26E,27E,35R,368S,37R,38R, 408,428,458,46S,47R,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-

4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44- [2-(2-metoxietóxi)etóxi]l-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa- 57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno- 50,51,52,53,54-pentona (1-121): oH O —o : o O ss

FO HO % Y N O,, = O | x [ 1-121 Esquema sintético: oH O oH O o, ol os o, o Ns AIH, NÇ nora com A NS NR : ih : - o O O.. > ” R O O, OD oH o o, ol ks ", e O cê À Sulfolane, 50ºC, 4h P LL 27% AS O. 1121 L * Legenda da figura: sulfolano, ta

Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S, 388,408S,418,428,43R,52R)-42,52-di-hidróxi-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)- 4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-40,43-dimetóxi- 31,32,33,34,44,45-hexametil-62,63-dioxa-53-azatriciclo-hexatria- conta-22,24,26(44),27(45)-tetraeno-46,47,48,49,50-pentona:

[00510] A uma solução de everolimo (1 g, 1,04 mmols) em DCM (50 mL) foi adicionado Ti(OiPr), (0,89 g, 3,13 mmols) gota a gota em ta. À mistura de reação tornou-se amarelo claro. Após 30 min, a solução foi vertida em um funil separatório contendo uma mistura heterogênea de HCI a 1N (50 mL) e EtOAc(50 mL). A camada orgânica foi sequenci- almente lavada com NaHCO; aquoso saturado (30 mL), H2O (50 mL), salmoura (50 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada e concen- trada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica- gel (hexano: acetona= 2:1) para obter (22E,24E,26E,27E,31R,32S, 33R,34R,36S,38S,40S,418,428,43R,52R)-42,52-di-hidróxi-41-[(1R)-2- [[18,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-40,43- dimetóxi-31,32,33,34,44,45-hexametil-62,63-dioxa-53-azatriciclo- hexatriaconta-22,24,26(44),27(45)-tetraeno-46,47,48,49,50-pentona (380 mg, 38% de produção) como um sólido amarelo claro. *H RMN (400 MHz, DMSO-d6s) 5 6,44 (dt, J = 13,9, 10,3 Hz, 2H), 6,33 — 6,06 (m, 3H), 5,54 — 4,85 (m, 5H), 4,48 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,10 — 3,91 (m, 2H), 3,89 — 3,79 (m, 1H), 3,62 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 3,54 — 3,41 (m, 5H), 3,38 — 3,28 (m, 8H), 3,19 (dt, J = 11,9, 7,6 Hz, 4H), 3,10 — 2,92 (m, 6H), 2,71 (t, J = 14,8 Hz, 1H), 2,43 — 1,78 (m, 6H), 1,75 — 1,44 (m, 10H), 1,38 — 0,90 (m, 14H), 0,89 — 0,67 (m, 13H), 0,66 — 0,56 (m, 1H). Etapa 2: Síntese de (22E,24E,26E,27E,35R,368S,37R,38R,40S, 428,45S,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-(2-hidroxi- etóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi-44-[2-(2-metoxi- etóxi)etóxil-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa-57-azatriciclo-

hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53,54-pentona (1-121):

[00511] A uma solução de 28-epi-everolimo (0,2 g, 0,208 mmols) e 2-(2-metoxietóxi)etanol (0,99 mL, 8,35 mmols) em sulfolano (5 mL) foi adicionado HND-8 (35 mg) a 50 “ºC sob N>. A solução resultante foi agitada a 50 ºC durante 4 h, filtrada e diluída com água (30 mL) e EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi lavada com água (10 mL x 3), salmoura (20 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada e concen- trada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de fase re- versa (C18, CH3;CN: H2O= 6,5: 3,5) para fornecer (22E,24E,26E,27E, 35R,368S,37R,38R,408S,428,45S,56R)-46,56-di-hidróxi-45-[(1R)-2-[(1S, 3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-47-metóxi- 44-[2-(2-metoxietóxi)etóxil-35,36,37,38,48,49-hexametil-66,67-dioxa- 57-azatriciclo-hexatriaconta-22,24,26(48),27(49)-tetraeno-50,51,52,53, 54-pentona (1-121: 60 mg, 27% de produção) como um sólido branco. ESI-EM (El*, m/z): 1068,1 [M+Na]*. *H RMN (500 MHz, DMSO-ds) 5 6,57 — 6,35 (m, 2H), 6,31 — 5,88 (m, 3H), 5,61 — 5,38 (m, 1H), 5,28 — 4,82 (m, 4H), 4,47 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 3,98 (dd, J = 40,4, 6,9 Hz, 2H), 3,88 — 3,73 (m, 2H), 3,59 — 3,40 (m, 12H), 3,30 (dd, J = 12,1, 8,2 Hz, 4H), 3,26 — 3,14 (m, 8H), 3,08 — 2,92 (m, 3H), 2,85 — 2,62 (m, 2H), 2,43 — 2,22 (m, 2H), 2,19 — 1,82 (m, 6H), 1,79 — 1,45 (m, 9H), 1,32 (dd, J=58,1,21,2 Hz, 5H), 1,19 — 0,92 (m, 10H), 0,90 — 0,57 (m, 15H). Exemplo 52: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358,36R, 37R,39S, 418,448,458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxi]-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67 -dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-127) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R, 37R,398,418,438,448,458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxi]-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-

ciclo-hexil]-1-metil-etil] -46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil- 66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)- tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-128) e (21E,23E,25E,26E,34R, 358,36R,37R,39S,418,43R,448,458S,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43- [2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3- metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48- hexametil-66,67 -dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47), 26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-129): oH o o, o Ne : o N N O,,, = oe 2 t Ri oH 1-127

OH O oH O MAR A - "” MOBO o. o ds o ô. " “ o > " ro») . o E) ES S S O. Di O. = foT [| = IO" Õ Oo O.

L X ? x dos oH 1-128 1-129

Esquema sintético: oH O

OH MMA $ o, o ANS o ro > "4 SS ? HND-8 j o WS ehiral separation + 28-EpiRapamycih' ——— Oo —— 6 50%, 5h os O, = 26% o o.

HO 127 x O. dos oH Oo oH o o, ES Y ES fr SS 7 ES o. ó. Ns o. ê. s ; o > . o NR rol >" "o Ss O) o SS No Y NO Y N. O,, = N. O,, = od | dE il ç 1129 q 128 NS NS O. O. dos dos legenda do esquema Rapamicina Separação quiral Procedimentos e caracterização: Etapa 1: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S, 418,448,458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxil-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52 ,53-pentona (1-127):

[00512] A uma solução de 28-epi-rapamicina (0,2 g, 0,22 mmol; ve- ja Exemplo 52) e 2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletanol (0,436 mL, 3,28 mmols) em sulfolano (5 mL) foi adicionado HND-8 (30 mg) e a mistura agitada a 50 ºC durante 5 h. Sob resfriamento, a reação foi diluída com

EtOAc (50 mL), filtrada, lavada com água (50 mL x 3) e salmoura (50 mL), secada sobre Na2SO. anidroso, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de fase reversa (C18, CH3CN:H2O de O a 70% de produção) para fornecer (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R, 37R,398S,418,44S,458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2- hidroxietóxi)etóxiletóxil-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi- ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67- dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-127: 60 mg, 26% de produção) como um sólido amarelo claro. ESI-EM (El*, m/z): 1054,4 [M+Na]*. *H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 6,61 — 6,32 (m, 2H), 6,30 — 5,98 (m, 3H), 5,65-5,38 (m, 1H), 5,28-4,89 (m, 4H), 4,68 — 4,53 (m, 2H), 4,11-3,91 (m, 2H), 3,89 — 3,71 (m, 2H), 3,54 — 3,44 (m, 9H), 3,44 — 3,40 (m, 3H), 3,31 — 3,28 (m, 4H), 3,27 — 3,11 (m, 6H), 2,86 — 2,66 (m, 3H), 2,20 — 1,82 (m, 7H), 1,80 — 1,58 (m, 13H), 1,42 — 1,06 (m, 9H), 1,05 — 0,68 (m, 18H), 0,56 (dd, J = 23,8, 12,0 Hz, 1H). Etapa 2: Síntese de (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S, 438,44S8,458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxil-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52, 53-pentona (1-128) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S, 36R,37R,39S,41S, 43R,448,458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi) etóxiletóxil-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]- 1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56- azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno- 49,50,51,52,53-pentona (1-129):

[00513] 130 mg de (21E,23E,25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S 418, 448, 458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxi] etó- Xi]-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-

46-metóxi-34,35,36,37,47,48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona foram purificados por meio de HPLC quiral prep e os epímeros resul- tantes purificados por meio de cromatografia em sílica-gel (hexa- no:DCM:EtOAc:MeOH = 3:3:1:0 a 3:3:1:0,8) para fornecer (21E,23E, 25E,26E,34R,358S,36R,37R,39S,418,43S,448S,458,46R,55R)-45,55-di- hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]l-44-[(1R)-2-[(18,3R,4R)-4- hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46-metóxi-34,35,36,37,47,48- hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo-hexatriaconta-21,23,25(47),26 (48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (1-128: 28 mg, 21,5% de produ- ção) e (21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,418,43R,44S8, 458,46R,55R)-45,55-di-hidróxi-43-[2-[2-(2-hidroxietóxi)etóxiletóxi]-44- [[1R)-2-[(18,3R,4R)-4-hidróxi-3-metóxi-ciclo-hexil]-1-metil-etil]-46- metóxi-34,35,36,37,47 48-hexametil-66,67-dioxa-56-azatriciclo- hexatriaconta-21,23,25(47),26(48)-tetraeno-49,50,51,52,53-pentona (l- 129: 22 mg, 16,9% de produção), ambos como sólidos brancos.

[00514] Método de separação quiral: Coluna: — CHIRALPAK IC(ICOOCE-WF029) Tamanho da coluna : 0,46 cm 1.D. x 25 cm L Injeção : 10,0 ul Fase móvel : Hexano/EtoH =60/40(V/V) Taxa de fluxo : 1,0 ml/min Comprimento de onda : UV 254 nm Temperatura : 35 ºC Equipamento de HPLC : Shimadzu LC-20ATCP-HPLC-09

[00515] 1-128: ESI-EM (El*, m/z): 1054,2 [M+Na] *. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,56 — 8,22 (m, 2H), 6,14 (dd, J = 15,0, 10,3 Hz, 1H), 6,00 (dd, J = 17,9, 11,0 Hz, 1H), 5,61 — 5,46 (m, 1H), 5,46 — 5,32 (m, 1H), 5,29 — 5,12 (m, 2H), 4,70 (s, 1H), 4,15 — 4,04 (m, 1H), 3,99 — 3,88 (m, 1H), 3,86 — 3,52 (m, 13H), 3,51 — 3,25 (m, 11H), 3,01 — 2,60 (m,

5H), 2,52 (dd, J = 16,7, 7,1 Hz, 2H), 2,39-1,87 (m, 7H), 1,74 (dt, J = 13,3, 8,7 Hz, 8H), 1,63 — 1,16 (m, 13H), 1,14 — 0,78 (m, 18H), 0,67 (dd, J=23,8, 12,0 Hz, 1H).

[00516] 1-129: ESI-EM (El*, m/z2): 1054,1 [M+Na] *. *H RMN (500 MHz, CDCI3) 5 6,46 — 5,89 (m, 4H), 5,60 — 4,93 (m, 5H), 4,15 (dd, J = 50,5, 20,8 Hz, 2H), 3,97 — 3,15 (m, 25H), 3,06 — 2,43 (m, 8H), 2,39 — 1,69 (m, 16H), 1,54 — 1,19 (m, 10H), 1,43 — 0,79 (m, 18H), 0,66 (dd, J = 23,6, 11,7 Hz, 1H). Exemplo 53: Ensaio AIphaLISA Ultra pS6K1 Protocolo de Ensaio

1. Semear as células MCF-7 em placa Corning 3701 e in- cubar durante 20 — 24 horas. 12.000 — 16.000 células serão semeadas em 36 uL de meio por cavidade.

2. Trocar o meio de cultura por meio fresco e incubar por mais 2 horas.

3. Adicionar 12 ul (4X) de compostos na placa de células por HAMILTON. A concentração final de DMSO é 0,5%. Incubar du- rante 90 minutos.

4. Aspirar 38 ul por HAMILTON, 10 uL de repouso por ca- vidade.

5. Adicionar 10 uL de tampão de lise 2X usando HAMIL- TON; o volume total nas cavidades é de 20 uL. Deixar as células agita- rem durante 30 min. Cobrir a placa com uma folha de plástico e arma- zenar a placa a -80 “ºC até a análise.

6. Descongelar o lisado celular em temperatura ambiente e transfirie 10 uL de lisado para a placa de ensaio (Optiplate-384).

7. Adicionar 5 ul de grânulos aceitadores na placa de en- saio e incubação durante 2 horas

8. Adicionar 5 ul de contas doadoras e incubar durante 2 horas

9. Contar a placa pelo Leitor de Placa EnSpire Multimode Tabela 2: Reagentes/Suprimentos principais cultura tecidual tratada Placas de armazenagem Em eu se e OptiPlate-384, Branca Opaque —384-cavidades | PerkinElmer 6007299 8210-14501 fa men fue Ju Kit de Ensaio AlphaLISA SureFire Ultra p-p70 S6 | PerkinElmer ALSU-PP70-A10K U0381 mam no fico fm | Exemplo 54: Ensaio AIphaLISA Ultra pAKT

[00517] — Protocolo de ensaio:

1. Células MCF-7 em placa Corning 3701 e incubar duran- te 20 — 24 horas. 16.000 — 20.000 células serão semeadas em 36 ul de meio por cavidade.

2. Trocar o meio de cultura por meio fresco e incubar du- rante mais 90 minutos.

3. Adicionar 12 ul (4X) de compostos na placa de células por HAMILTON. A concentração final de DMSO é de 0,5%. Incubar durante 2 horas.

4. Aspirar 38 ul por HAMILTON, 10 uL de repouso por ca- vidade.

5. Adicionar 10 ul de tampão de lise 2X usando HAMIL- TON; o volume total nas cavidades é de 20 uL. Deixar as células agita-

rem durante 30 min. Cobrir a placa com uma folha de plástico e arma- zenar a placa a -80 º C até a análise.

6. Descongelar o lisado celular em temperatura ambiente e transferir 10 ul de lisado para a placa de ensaio (Optiplate-384).

7. Adicionar 5 ul de grânulos aceitadores na placa de en- saio e incubação por 2 horas

8. Adicionar 5 ul de contas doadora e incubar durante 2 horas

9. Contar a placa pelo EnSpire Multimode Plate Reader Tabela 3: Reagentes/suprimentos principais cultura tecidual tratada Placas de armazenagem de . [Rpm o semeoe et as OptiPlate-384, White Opa- que 384-cavidades Micro- | PerkinElmer 6007299 8210-14501 Plate Kits de ensaio AlphaLISA SureFire Ultra p-Akt 1/2/3 | PerkinElmer ALSU-PAKT- U0329 (Ser473) B1oK

Exemplo 55: Ensaio de pS6K1 e pAKT com base em Western blot em pontos de tempo de 24 e 48 horas Protocolo de ensaio

1. Semear placa de seis cavidades com 500.000 células PC3 por cavidade e incubar durante 20 — 24 hora.

2. “Adicionar os compostos na placa de células. Incubar durante 24 a 48 horas.

4. A placa é colocada no gelo e o meio é removido por aspiração. As cavidades são lavadas com 1 mL de 1x PBS e em se- guida totalmente aspiradas.

5. 110 uL de Tampão de Lise Triton 1% são adicionados e cada cavidade é raspad vigorosamente.

6. Os homogeneizados celulares são transferidos para tubos eppendorf de 1,5 mL em gelo e centrifugados a 4 ºC durante 10 minutos a 10.000 rpm.

7. A concentração de proteína dos lisados celulares re- sultantes foi quantificada usando um ensaio de Bradford e as amostras executadas analisadas por meio de Western blot em géis Bis/Tris 4 a 12% com tampão MES 1x.

8. “Os géis foram transferidos para membranas a 50V du- rante 100 minutos, bloqueados com tampão Odyssey Blocking durante minutos, em seguida incubados durante a noite com anticorpo pri- mário (pS6K1 T389 Rabbit ou pAkt S473 Rabbit) durante uma noite a 4 ºC em um rotador.

9. As membranas foram lavadas 3X com TBS-T com uma incubação de 5 minutos entre cada lavagem, em seguida incubadas com anticorpo secundário (LiCor IRDye 800 Donkey Anti Rabbit) du- rante pelo menos 30 minutos.

10. As membranas foram lavadas 3X com TBS-T com in- cubação de 5 minutos entre cada lavagem.

11. Os géis foram em seguida incubados durante 5 minu- tos com PBS em temperatura ambiente, em seguida imageados usan- do um Li-Cor.

[00518] Os resultados para um Western blot representativo são su- mariados na FIG. 1. As células PC3 foram tratadas com rapamicina (0,1 UM e 0,01 UM) ou 1-40 (1 UM, 0,1 uM, 0,01 UM, e 0,001 UM) du- rante 24 e 48 horas. Os blots demonstram claramente uma redução significativa em pS6K1 para rapamicina e 1-40 em 24 e 48 horas, indi- cando inibição da via de MTORC1. É importante ressaltar que o 1-40 não reduziu os níveis de pAkt em 24 ou 48 horas. Ao contrário, a ra- pamicina exibiu inibição da fosforilação de S6K1 (S“”*) em 24 e 48 ho- ras, indicativo de inibição da via de MTORC?2.

[00519] Os resultados para Western blots representativos adicionais, e os compostos avaliados nestes, são sumariados na FIG. 2 a FIG. 42. Os métodos empregados foram substancialmente similares aos descri- tos acima. Os compostos foram avaliados em células PC3, células Jurkat, células de fibroblastos embrionários de camundongo selvagem (MEF), células MEF negativas (TSC”) de esclerose tuberosa 2 (TSC2), e células MEF positivas (TSC**) de esclerose tuberosa 2 (TSC2). As células foram incubadas com os compostos da presente invenção durante vários períodos de tempo (por exemplo, 5 minutos, minutos, 30 minutos, 90 minutos, 24 horas, ou 48 horas), e avalia- das de acordo com metodologias conhecidas, como as aqui descritas.

[00520] A Tabela 4 mostra a atividade inibitória (ICso) dos compostos selecionados desta invenção nos ensaios de pS6K1 e pAKT, e sua solu- bilidade em tampão de fosfato a 100 mM (pH 7,4). Os números dos compostos correspondem aos números dos compostos na Tabela 1.

[00521] Os compostos da presente invenção que inibem seletivamen- te MTORC1 mais que mMTORC? - e retêm seletividade durante pelo menos 24 horas - são indicados por "SIM" na coluna "MTORC1 seleti-

vo (Q 24 horas" da Tabela 4. Os compostos que não são seletivos na marca de 24 horas são indicados por "NÃO" na coluna "MTORC1 sele- tivo em 24 horas" da Tabela 4. Os compostos que retêm parcialmente a seletividade para a inibição de MTORC1 em relação a MTORC2 são indicados por "Parcial" na coluna "MTORC1 seletivo em 24 horas" da Tabela 4. "N/A" significa "não testado".

[00522] Os compostos denotados como "+" exibem solubilidades infe- riores a 30 uM (x <30uUM). Compostos denotados como “++” exibem solubilidades maiores em seguida ou iguais a 30UM e menores que 60 UM (30UM €< x <60UM). Compostos denotados "+++" exibem solubili- dades maiores que ou iguais a 60 uM (60 UM < x).

[00523] Compostos denotados como "A" exibiram um ICso inferior a 0,1 nM (x <O0,1nM). Compostos denotados “B” exibiram um ICso maior que ou igual a 0,1 nM e menor que 1 nM (0,1 NM < x <1,0 nM). Com- postos denotados como “C” exibiram um ICso maior que ou igual a 1,0 nM e menor que 10 nM (1,0 nM € x <10 nM). Compostos denotados como "D" exibiram um IC5o maior que ou igual a 10 nM e menor do que 100 nM (10 nM < x <100 nM). Compostos denotados “E” exibiram um IC5o maior que ou igual a 100 nM (100 nM < x). Tabela 4: Dados de Ensaio para Compostos Exemplares [Btmnas ae fere me e semen Número do (& 90 min: 90 min: seletivo (Q | aquosa em pH Composto 1C5o 1C5o 24 hrs 7,4 (uM)

E E

E Foo e Fo EEE

E E E NA Foo Ee sw RR ER RR a RR em NA

RR NE BN NA Re NE BN NA RN Bm NA

EEB em Bm

RB rem

EB ES LA A a ras BM NA

FEB ras BM NA ras em dm rr Bm Bee dm RE em RE em Ra Ee

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EB RR REINO CR A A

RR E 5 ER LA LL

RS LN LA LL Rs A LA LL

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E A LA LR Bee NE BIN NA

E E LA A BR e NE BIN NA

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PN BIN NA eee BN NA re NE BIN NA Be BIN NA

BN BIN NA 5 LN LA LR [RBS NE NO NA

RS LN LA LL [ER NAN NA

RS LR LA LL 5 A ER LA LL Rs LR LA LL Rs CA LA LL

RR NAN NA O ER LA LL

RS LN LA LL [RR NAN NA [RN NE NO NA [ES NE em NA

RS LN LA LL A RC LA LL RS CN LA LL RL LA

PS6K1 em MCF7 | pAKT em MCF7G | mTORC1 Solubilidade Número do (& 90 min: 90 min: seletivo (Q | aquosa em pH Composto 1C5so 1Cso 24 hrs 7,4 (UM) Fe Tm a FR a FE a FR Tm a FE o a FR Rm a FR o a Fm a Re a mm a me a msm a FE a me a Es a Es a me e Em e Re Exemplo 56: Propriedades farmacocinéticas

[00524] As propriedades farmacocinéticas dos compostos da pre- sente invenção foram avaliadas em camundongos C57BI/6 e compa- radas com rapamicina. Os animais jejuaram durante uma noite antes da administração de 1-40 ou rapamicina (1 mg/kg IV, 10 mg/kg PO, ou 2 mg/kg IP). Os animais foram sangrados em intervalos de tempo até 48 horas após a administração dos compostos. O sangue total de cada camundongo foi coletado individualmente em tubos de polipropileno e imediatamente centrifugado. Alíquotas do plasma separado foram prontamente preparadas para análise por HPCL. Os resultados dos estudos de farmacocinética estão sumariados na Tabela 5. O compos-

to 1-40 apresenta melhor biodisponibilidade oral em comparação à ra- pamicina, bem como menor clearance, meia-vida mais longa, aumento da Cmáx € aumento da AUC em comparação à rapamicina.

Tabela 5: Comparação de propriedades farmacocinéticas de rapamici- na e /-40 [o reeamens | CL (L/hr/Kg) [0054 0,276 ve o on 1 mg/kg IV AUCutima (heng/mL) | 17591 [3616 === AUCnF (heng/mL) [186393 = 3627 MRTNF (O) 59 e Trax (9) sa Cmax (ng/mL) 3287 [528 Ty Terminal (h mg/kg PO mn) 1 ACam (ngiml) 1296 22 | AUCnF (heng/mL) 31726 FO ma je Trax (9) os jar Cras (nglmb) asso em Ty Terminal (h [48 2 mg/kg IP (n) [126 AUCutima (heng/mL) | 16607 [2481 = AUCnF (heng/mL) 16937 ES FO [46 ssa Exemplo 57: Avaliação de Efeito de Tratamento crônico com 1-40 sobre Tolerância à Glicose e Sensibilidade à Insulina em Camun- dongos C57BI/6 magros Camundongos C57BlI/6 (n = 12; 8 semanas de idade) foram randomi- zados e as medições de linha de base (peso, glicose em jejum e insu- lina em jejum) foram medidas quatro (4) dias antes da administração dos compostos ou veículo. Os animais foram em seguida tratados com 1-40 (10 mg/kg PO), rapamicina (10 mg/kg IP) ou veículo (PO ou IP) durante 19 dias. Nos dias 7 e 14 os animais foram pesados e alimen- tados com glicose e os níveis de insulina foram avaliados. Os animais permaneceram em jejum durante a noite do dia 14 e no dia 15 em je- jum de insulina e foram avaliados em um teste de tolerância à glicose intraperitoneal (ipGTT). No dia 19 os animais foram sacrificados 1 (uma) hora após a administração do composto ou veículo. Os tecidos foram colhidos para avaliação dos níveis de compostos e farmacodi- nâmica. A evolução do tempo do estudo é sumariada na FIG. 43

[00525] Os resultados do ipPGTT são sumariados na FIG. 44 e FIG.

45. Resumidamente, o tratamento crônico com rapamíicina durante 15 dias induziu intolerância à glicose em camundongos C57BI/6, como caracterizada pelos níveis elevados de glicose em comparação com Vh R. Em comparação, 1-40 não induziu intolerância à glicose. Exemplo 58: Avaliação de Efeito de 1-40, |-117 e Everolimo no Mo- delo de Camundongo de Doença Renal Aguda/Doença Renal crô- nica (AKICKD) Camundongos C57BI/6 (n = 15; machos; 10 semanas de idade) foram randomizados. Após 7 7 dias de aclimatação, foi realizada IR ou simu- lação de cirurgia. Os camundongos foram permitidos se recuperarem por um (1) dia e começando no dia 2, aos animais que receberam a cirurgia de IR foram administrados o veículo, everolimo (10 mg/kg PO), 1-40 (10 mg/kg PO), ou 1-117 (10 mg/kg PO). No dia 9, foi realizada uninefrectomia (Unx) ou cirurgia simulada. No dia 29, os animais foram sacrificados.

[00526] A histologia renal foi avaliada por PAS, coloração tricrômica de Masson ou vermelho de Sirius. Os resultados para a coloração com vermelho de Sirus são sumariados na FIG. 46 e FIG. 47. Resumida- mente, 1-40 mostrou uma redução significativa da fibrose renal em comparação com o veículo.

[00527] —OmRNA do tecido renal foi analisado quanto aos marcado- res inflamatórios e fibróticos (PCR para TGFB, colágeno |, colágeno III, fator de ligação ao CCCTC (CTCF), fibronectina (FN), e alfa-actina de músculo liso (a-SMA)).

[00528] A imuno-histoquímica foi avaliada quanto colágeno |, colá- geno IV, a-SMA, 4-hidroxinonenal (4-HNE) e macrófago F4/80.

[00529] O plasma foi avaliado quanto aos níveis de compostos e o tecido renal foi avaliado quanto à farmacodinâmica.

[00530] Os resultados para a expressão de marcadores de fibrose e infiltração de macrófagos nos rins são sumariados na FIG. 48 a FIG.

51. Resumidamente, 1-40 reduziu significativamente a expressão de MRNA de colágeno |, colágeno Ill e fibronectina. Além disso, 1-40 di- minuiu significativamente a infiltração de macrófagos no rim.

[00531] Exemplo 59: Avaliação do efeito sobre a produção de IFN-y em reação alogênica de linfócitos mistos

[00532] O efeito da rapamicina, everolimo, 1-40, e 1-117 na produ- ção de IFN-y foi avaliado em uma reação alogênica mista de linfócitos (Por exemplo, Eleftheriadis, T. et a/., Int. J. Mol. Med.., 37 (5): 1412-20 (2016) https://doi.org/10,3892/ijmm.2018,2547). Os valores ICso são resumidos na Tabela 6, abaixo, e FIG. 52. Resumidamente, 1-40 e |- 117 não inibiram a produção de IFN-y, enquanto rapamicina e everoli- mo inibiram significativamente a produção de IFN-y.

Tabela 6: Inibição de IFN-y [— Pspamiaia TEveraimo THD TH

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula |: O: | ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: O anel A é um derivado monovalente de rapamicina ou um análogo da mesma; em que R' é ligado a ele na posição C7 hidroxila da rapa- micina ou um análogo da mesma; R' é uma cadeia C3.30 hidrocarboneto monovalente, satura- da ou insaturada, linear ou ramificada, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcionalmente e independentemente substituídos por -N(R)-, =-N(R)C(O)-, -C(O)N(R)- , -N(R)S(O)2—, -S(O)2aN(R)-, -O-, —C(O) —, -OC(O)-, -C(0)O-, —S-, —S(O)—, —S(O)2—, ou -P(O)(R)>; ou um anel heterocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroáto- mos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou en- xofre; ou R' é selecionado da Fórmula P-0: ÁEemzi—DoR P-0 em que: * indica o ponto de ligação ao anel A; cada Z é independentemente -O-, -S-, -NR-, ou -SO>-; n é de cerca de 2 a cerca de 300; e cada R é independentemente hidrogênio ou um grupo C1-6 alifático op- cionalmente substituído, contanto que referido composto seja diferen-

te de:

OH O 7 DS Y ES —o, o O ss mol >" — Ss s 4?

Z O X N Oo. = Ho H 9 MoH,

OH O MAR ; ss —o. o dx o mol >" >, SW A H o Z & NW N Oo. = O H Só dor HO , oe

OH O MAR : ss o, o O s mol DN" 7 SS d H o z O% N N o. = Ho H O Oro ovo

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteriza- do pelo fato de que anel A é selecionado de rapamicina e everolimo.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, carac- terizado pelo fato de que R? é uma cadeia C3-309 hidrocarboneto mono- valente, saturada ou insaturada, linear ou ramificada opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são op- cionalmente e independentemente substituídos por —N(R), -— N(R)C(O)-, -C(O)N(R)-, -N(R)S(0)2-, -S(O)2aN(R)-, -O-, —-C(O) —, —

OC(O)—, -C(0)O-, —S-, -S(O)--, —S(O)2—, ou -P(O)(R)>.

4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que R' é uma cadeia C3.30 hi- drocarboneto monovalente, saturada ou insaturada, linear ou ramifica- da, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de meti- leno de R' são opcionalmente e independentemente substituídos por — O- ou —S-.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R' é selecionado de Ao Ao AoA Aa o e si ot.

6. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, carac- terizado pelo fato de que R' é um anel heterocíclico saturado ou parci- almente insaturado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre.

7. Composto caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula Il:

OH O o Í o à Ns no > cs o Ss Ea) N O. = HO H Or

U ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R' é uma cadeia C3-30 hidrocarboneto monovalente, satu- rada ou insaturada, linear ou ramificada, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R' são opcionalmente e independentemente substituídos por -N(R)-, —=N(R)C(O)-, —-C(O)N(R)--

, -N(R)S(O)2—, -S(O)2aN(R)-, -O-, —C(O) —, -OC(O)-, -C(0)O-, —S-, —S(O)—, —S(O)2—, ou -P(O)(R)>; ou um anel heterocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroáto- mos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou en- xofre; ou R' é selecionado da Fórmula P-0: ÉEemszi—oR P-0 em que: * indica o ponto de ligação à posição C-7 hidroxila; cada Z é independentemente -O-, -S-, -NR-, ou -SO>-; n é de cerca de 2 a cerca de 300; e cada R é independentemente hidrogênio ou um grupo C1-8 alifático opcionalmente substituído.

8. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracteriza- do pelo fato de que R' é uma cadeia C3.30 hidrocarboneto monovalen- te, saturada ou insaturada, linear ou ramificada opcionalmente substi- tuída, em que uma ou mais unidades de metileno de R'* são opcional- mente e independentemente substituídos por -N(R)-, —-N(R)C(O)-, — C(O)N(R), —N(R)S(O).—, —S(O)N(R), -O-, —C(O) —, -OC(O)-., — C(0)O-, —S-, -S(O)-, —S(O)2—, ou -P(O)(R)>.

9. Composto de acordo com a reivindicação 7 ou 8, carac- terizado pelo fato de que R' é uma cadeia C3-39 hidrocarboneto mono- valente, saturada ou insaturada, linear ou ramificada, opcionalmente substituída, em que uma ou mais unidades de metileno de R* são op- cionalmente e independentemente substituídos por -O— ou —S-.

10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 7 a 9, caracterizado pelo fato de que R' é selecionado de Age mole Amos moto e Amei

11. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracteri- zado pelo fato de que R' é um anel heterocíclico saturado ou parcial- mente insaturado de 6 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroátomos in- dependentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio ou enxofre.

12. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que o referido composto é selecionado de qualquer uma das fórmulas Il, Il, IV, V, VI, VII, e VIII:

OH O —O õ à o d o mo (> ' 7 W E Oo

CH z %&% NX N o. = Ho H o O.

RO

U

OH O / MARES Ho o o O e A Ad o —— RW cs Oo “TH 2 O, N N O. = do H [x R ,

LU

OH O / MORE SEO SOS o z o > SW cs Oo Ho E O, N N O. = dio H O. Ro,

IV

OH O / MAR v RS à i À Õ. Ss de s o SS . o=AS " | SN ss Oo

SH O, N N fo) = do H Og ;

A

OH O / MAR - ES à A > fo) o ve ' o W .- oC > o RW

TH Z & N N fo) = o H O O.

RS

VI

OH O ; MAN ; ss Ho O o ANS o o W

SH Z & NW N O. = do H O. R$ and

VII

OH O Ho —o ô + a A o DO 20! “e RW ss Oo

TAH 2 O, N N O. = do H O. Ro

VII ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

13. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 12, ca- racterizado pelo fato de que o referido composto é selecionado de qualquer uma das Fórmulas Il-a, Il-b, Ill-a, e Ill-b:

OH O —O õ e o dx o mo (> 7 W E Oo

CH z %&% NX N o. = Ho Hi O O.

RW Il-a

OH O —O õ o o x o mo >" 7 W E Oo

SH z % N N o. = Ho H o O

RW Il-b

OH O / MAR ; ss o z HO o O o VA ao o o RW

SH z 2 N N O. = o Hi O Ox R , and Ill-a

OH O / AR “ d z >, Õ. os HO, 7 Oo N Es o o RW

E L &% N N O. =

HO H O O. Ro Ill-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1, 7, 12, ou 13, caracterizado pelo fato de que R' é selecionado de: tda ; der ATA — A or, Sou ;

VN o

POA ED DAE RINNS NH2 FF FF FF ; ol ; F , EF , F ; F À HOT H — no oH o - . 2 À. Ho OH nor oH oÊNT ON Êo NO ; H, o H , O NH, OH, OH,

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15. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 12, ca- racterizado pelo fato de que o referido composto é selecionado de qualquer uma das Fórmulas Xll-a, XIl-b, XIll-a, e XIll-b:

OH O o », o Ox ss mo > > SN cs Oo

SH Z & W N o. = o Hi

O Õ OR AIN ; Xll-a

OH O o », o Ox o mo > > SN cs Oo

SH Z & NW N o. = o H

O OR ANA ; Xll-b

OH O —Oo HO. , O. oo e "” o ” o o RW

SH 1 =Oo, N N O. = HO Hi o Õ OR rot "-) Xlll-a

OH O

MAR FS Ho TO o Ox SN

NAO E is nº

CE N O. = HO H ol Xill-b ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

16. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que o referido composto é selecionado daqueles descritos na Tabela 1.

17. Composição farmaceuticamente aceitável, caracteriza- da pelo fato de que compreende um composto como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 16, e um portador, adjuvante ou veí- culo farmaceuticamente aceitável.

18. Método para tratar uma doença, distúrbio ou condição mediada por MTORC em um paciente que necessita do mesmo, ca- racterizado pelo fato de que compreende administrar ao referido paci- ente o composto como definido em qualquer uma das características 1 a 16, ou uma composição farmacêutica do mesmo.

19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracteriza- do pelo fato de que a doença, distúrbio ou condição mediada por mMTORC é selecionado de: nefropatia diabética, complicações relacio- nadas aos rins de diabetes tipo 1 e diabetes tipo 2, doença renal poli- cística autossômica dominante (ADPKD), doença renal policística au- tossômica recessiva (ARPKD), doenças renais associadas com forma- ção de cisto ou cistogênese, glomeruloesclerose segmentar focal (FSGS) e outras doenças associadas com esclerose renal, laminopati- as, degeneração macular relacionada à idade (DMRI), edema macular diabético, retinopatia diabética, glaucoma, doença retinal relacionada à idade, senescência do sistema imunológico, infecções do trato respira- tório, infecções do trato urinário, insuficiência cardíaca, osteoartrite, hipertensão arterial pulmonar (HAP), e doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC).

20. Método de acordo com a reivindicação 18 ou 19, carac- terizado pelo fato de que também compreende administrar um agente terapêutico adicional em combinação com o referido composto.

21. Uso do composto ou composição como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio mediado por MTORC-em um paciente em necessidade do mesmo.