CN117843659A - 雷帕霉素类似物和其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供化合物、其组合物和其使用方法。本发明涉及雷帕霉素类似物和其用途。

Description

雷帕霉素类似物和其用途
本申请是申请日为2019年6月17日，申请号为201980047384.3，发明名称为“雷帕霉素类似物和其用途”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及适用于调节mTORC1活性的化合物和方法。本发明还提供药学上可接受的组合物，其包含所提供的本发明化合物和在治疗各种病症中使用所述组合物的方法。
背景技术
mTOR复合体1(mTORC1)通过促进多种合成代谢过程(包括蛋白质、脂质和细胞器的生物合成)并且通过限制分解代谢过程(例如自体吞噬)来积极调控细胞生长和增殖。关于mTORC1功能的许多知识来自细菌大环内酯雷帕霉素的使用。在进入细胞后，雷帕霉素(rapamycin)结合到12kDa的FK506结合蛋白(FKBP12)并且与mTOR的FKBP12雷帕霉素结合域(FRB)相互作用，由此抑制mTORC1功能(Guertin,D.A.和Sabatini,D.M.Cancer Cell 12(1):9-22(2007))。相比于其对mTORC1的作用，FKBP12雷帕霉素无法物理地与mTOR复合体2(mTORC2)相互作用或对其进行急性抑制(亚宁托,E.(Janinto,E.)等人,自然-细胞生物学(Nat.Cell Bio.),6(11):1122-8(2004)；萨尔巴索夫,D.D.(Sarbassov,D.D.)等人,当代生物学(Curr.Biol.)14(14):1296-302(2004))。基于这些观测结果，mTORC1和mTORC2已经分别表征为对雷帕霉素敏感和对雷帕霉素不敏感复合体。然而，此范式可能不完全准确，因为慢性雷帕霉素治疗可在一些情况下通过阻断mTORC2组装而抑制其活性(萨尔巴索夫,D.D.等人,分子細胞(Mol.Cell),22(2):159-68(2006))。另外，最近报告表明重要的mTORC1功能对雷帕霉素的抑制具有抗性(朱,A.Y.(Choo,A.Y.)等人,美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.),105(45):17414-9(2008)；费尔德曼,M.E.(Feldman,M.E.)等人,PLOS生物学(PLoS Biol.),7(2):e38(2009)；加西亚-马丁内斯,J.M.(Garcia-Martinez,J.M.)等人,生物化学杂志(Biochem J.),421(1):29-42(2009)；索林,C.C.(Thoreen,C.C.)等人,生物化学杂志(J.Biol.Chem.),284(12):8023-32(2009))。因此，对mTORC1的选择性抑制将使涉及蛋白质合成和细胞代谢失调的疾病得以治疗。此外，此对调控mTORC1激活途径的详细理解，将使能够发现通过跨越mTORC1功能范围调节其活性来调控异常疾病过程的新策略。
许多疾病与由如上文所描述的事件触发的异常细胞反应相关。这些疾病包括但不限于自体免疫疾病、炎性疾病、骨骼疾病、代谢疾病、神经和神经退化性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症和哮喘、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)和激素相关疾病。
雷帕霉素复合体1标靶的机理(rapamycin complex 1，mTORC1)是感知多样化环境暗示的主生长调节剂，环境暗示例如生长因子、细胞应激以及营养物和能量水平。mTORC1在激活时使加强如mRNA翻译和脂质合成的合成代谢过程的底物磷酸化，并限制如自体吞噬的分解代谢过程。mTORC1失调出现于广泛的疾病范围中，包括糖尿病、癫痫、神经退化、免疫反应、遏制骨骼肌生长和癌症等(豪威尔,J.J.(Howell,J.J.)等人,生物化学学会学报(Biochem.Soc.Trans.),41:906-12(2013)；金,S.G.(Kim,S.G.)等人,分子与细胞(Molecular and cells),35(6):463-73(2013)；拉普兰特,M.(Laplante,M.)和萨巴蒂尼,D.M.(Sabatini,D.M.),细胞(Cell),149(2):274-93(2012))。
雷帕霉素最初作为由复活节岛土壤样品的吸水链霉菌产生的抗真菌代谢物被发现。随后，发现雷帕霉素在哺乳动物细胞中具有免疫抑制和抗增殖特性，激发了对鉴别出雷帕霉素作用模式的兴趣。雷帕霉素展示为S6K1磷酸化的强力抑制剂。同时，在酵母和动物细胞中鉴别出了雷帕霉素标靶(TOR)。雷帕霉素与12kDa FK506结合蛋白(FKBP12)形成多功能复合体，并且此复合体结合并且特异性地充当哺乳动物TOR(mTOR，也称为机理TOR)复合体1(mTORC1)的变构抑制剂。
mTOR生化和遗传分析已证实其存在于两种功能上不同的复合体中。mTORC1的核心组分由mTOR、哺乳动物致死sec-13蛋白8(mLST8)和TOR调控相关蛋白(Raptor)组成。额外组分包括含DEP域的mTOR相互作用蛋白(DEPTOR)和富含脯氨酸的Akt底物40kDa(PRAS40)。
mTOR复合体2(mTORC2)核心由mTOR、mTOR雷帕霉素不敏感伴侣(Rictor)、应激激活蛋白激酶相互作用蛋白1(mSIN1)和mLST8构成。观察到有rictor1/2(protor1/2)和DEPTOR的蛋白是额外调控组分。S6激酶1(S6K1)和真核抑制因子eIF4E结合蛋白1(4E-BP1)是mTORC1的两个充分表征底物，而AKT是mTORC2的充分表征底物(李,J.(Li,J.)等人,细胞代谢(Cell Met.),19(3):373-9(2014))。
因为FKBP12雷帕霉素不结合到mTORC2，所以最初认为雷帕霉素仅抑制mTORC1(萨尔巴索夫,D.D.等人,当代生物学,14(14):1296-302(2004))。然而，在2006年，已经表明雷帕霉素遏制mTORC2的组装和功能并且抑制pAkt(萨尔巴索夫,D.D.等人,分子細胞,22(2):159-68(2006))。在多个细胞系中比较雷帕霉素对Akt(mTORC2底物)的S473和S6K1(mTORC1底物)的T389的磷酸化的影响。在PC3、HEK-293T、HeLa和H460细胞中，用雷帕霉素进行的1或24小时治疗抑制了S6K1磷酸化，与对mTORC1的抑制一致。由雷帕霉素对S6K1选择性抑制应引起Akt磷酸化的增加，并且这确实是HeLa细胞中所报导的。然而，在PC3细胞中，药物很大程度上降低Akt磷酸化，表明雷帕霉素在此细胞系中不具有选择性。在HEK-293T细胞中观察到对pAKT的部分抑制。在约三分之一的细胞系中，雷帕霉素引起Akt磷酸化的强烈或部分抑制，而所述药物在其它细胞系中不影响或增加Akt磷酸化。对pAKT的抑制在24小时后也在初级和非转型细胞系，包括内皮细胞和肌肉细胞中观察到。雷帕霉素还展示出抑制体内pAkt，因为每日用药物处理持续1周的小鼠的胸腺、脂肪组织、心脏和肺中的Akt磷酸化降低。这些研究结果证实由雷帕霉素抑制Akt磷酸化是常见的并且发生于正常细胞系、癌细胞细胞系以及体内。
萨尔巴索夫等人得出结论，雷帕霉素和其类似物(CCI 779，RAD001也称为依维莫司(Everolimus)，AP23573)可以抑制某些细胞系和组织中的mTORC2功能。雷帕霉素介导的对Akt的抑制可以帮助解释药物的副作用。举例来说，雷帕霉素很大程度上抑制脂肪组织中的Akt磷酸化，在所述组织类型中被胰岛素刺激的Akt活性在遏制脂肪分解中起重要作用。在脂肪细胞中由雷帕霉素抑制Akt可使脂肪分解甚至在胰岛素存在下仍保持较高水平，使得血浆中游离脂肪酸累积，肝脏可使用所述累积的游离脂肪酸以产生甘油三酯，提供高脂血症分子机制，所述病症常见于用雷帕霉素治疗的患者中。
佩雷拉(Pereira)等人(分子与细胞内分泌学(Mol Cell Endocrinol.),355(1):96-105(2012))探索雷帕霉素对脂肪细胞中葡萄糖摄取和胰岛素信号传导蛋白的作用，所述脂肪细胞经由人类供体的脂肪活检获得。在治疗浓度(0.01μM)下，雷帕霉素通过减弱胰岛素信号传导降低人类脂肪细胞中的AKT(PKB)Ser473磷酸化并且降低葡萄糖摄取。
莱明(Lamming)等人(科学(Science),335(6076):1638-1643(2012))证实雷帕霉素破坏体内mTORC2，并且mTORC2是胰岛素介导遏制肝葡萄糖异生所需的。
在人类中展示类似结果。迪保罗(Di Paolo)等人公布在人类中的类似研究结果(JASN,17(8):2236-2244(2006))。其研究的主要目标是鉴于其在调控细胞生长和存活以及细胞对养分和生长因子的反应方面的关键作用，确定慢性暴露于雷帕霉素对AKT激活的影响。其发现mTOR抑制与基底和胰岛素诱导的AKT磷酸化的显著下调有关。AKT主要负责许多胰岛素代谢作用，且因此其得出结论，AKT激活抑制与肾移植接受者中胰岛素抗性的增加显著相关。
肯尼迪(Kennedy)等人最近回顾mTORC1和mTORC2在代谢和老化中的作用(细胞代谢,23(6):990-1003(2016))。
已出人意料地发现，所提供的化合物在很长一段时间(例如，8小时、24小时、30小时和48小时)内抑制mTORC1，但并不影响mTORC2(如通过其对pAKT的影响所测量的)。在存在足够大的基团下，预测这种新的活性在雷帕霉素和其类似物的C-7位置处。在此位置处的小取代，如OMe，正如在雷帕霉素、OEt、OBn中所见的，不会在24小时赋予相对于mTORC2的选择性。中等长度基团，如OCH2CH2OH或OCH2CH2CH2OH，在24小时展示相对于mTORC2的部分选择性，但仍展示一些程度的抑制。相比之下，较大基团，例如本发明的那些基团(例如I-19)，提供如通过对pAKT的影响所测量的相对于mTORC2的显著选择性。
此取代的位置对于所观察到的选择性也是至关重要的。例如，在位置43处引入较大取代不产生本申请中所要求的此唯一选择性特征。
出于清楚起见，下面再现雷帕霉素结构，其中标出了C-7和C-43位置。
在一些实施例中，本发明提供新颖雷帕霉素类似物，其为如通过pS6K测量的强效mTORC1抑制剂。与雷帕霉素和依维莫司不同，这些化合物不在较长时间点(例如24小时和48小时)抑制pAKT。与雷帕霉素相比，这些化合物还展示改良的溶解性和改良的药物动力学。
本发明中用作mTORC1抑制剂的化合物的活性可以在活体外、活体内或在细胞系中分析。活体外分析包括测定mTORC1抑制的分析。用于分析本发明中用作mTORC1抑制剂的化合物的详细条件为本领域的普通技术人员所熟知。此类方法详细地描述于刘(Liu)等人,癌症研究(Cancer Research),73(8):2574-86(2013)和刘等人,J.生物化学(BiologicalChemistry)287(13):9742-52(2012)。
发明内容
现在已发现本发明化合物和其药学上可接受的组合物作为抑制剂mTORC1抑制剂是有效的。此类化合物具有通式I：
或其药学上可接受的盐，其中环A和R1如本文所定义和描述。
本发明化合物和其药学上可接受的组合物适用于治疗各种与mTORC1相关的疾病、病症或病状。此类疾病、病症或病状包括本文中所描述的疾病、病症或病状。
附图说明
图1展示在用雷帕霉素或本发明化合物(I-40)处理PC3细胞24小时和48小时之后进行的两种蛋白质印迹之间的比较。对于雷帕霉素和I-40两者，染色指示在两个时间点对mTORC1路径的强抑制。如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的，相比之下，mTORC2路径虽然在24和48小时由雷帕霉素抑制，但未由I-40抑制。
图2展示在用雷帕霉素或本发明化合物(I-40)处理PC3细胞30分钟、15分钟或5分钟之后进行的三种蛋白质印迹的比较。对于雷帕霉素和I-40两者，染色指示对mTORC1路径的时间依赖性抑制。
图3展示在用雷帕霉素、坦罗莫司(temsirolimus)、依维莫司、地磷莫司(ridaforolimus)或本发明化合物(I-118)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所有化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及由I-118对mTORC1的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，雷帕霉素、坦罗莫司、依维莫司和地磷莫司展示对mTORC2路径的剂量依赖性抑制，而I-118不抑制mTORC2路径，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图4展示在用本发明的雷帕霉素或化合物(I-106、I-113和I-118)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制并且不抑制4E-BP1磷酸化。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图5展示在用本发明的雷帕霉素或化合物(I-117、I-102、I-103和I-39)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制并且不抑制4E-BP1磷酸化。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图6展示在用本发明的雷帕霉素或化合物(I-117、I-99、I-100和I-101)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素I-117、I-100和I-101，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-99，为对mTORC1路径的明显浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图7展示在用雷帕霉素或本发明化合物(I-117)处理PC3细胞24之后进行的蛋白质印迹。染色指示由所测试的两种化合物对mTOCR1路径的强抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图8展示在用本发明的雷帕霉素或化合物(I-39、I-101和I-99)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和I-39，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-101和I-99，为对mTORC1路径的显著浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图9展示在用本发明的雷帕霉素或化合物(I-98和I-97)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和I-98，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-101和I-99，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图10展示在用本发明的雷帕霉素或化合物(I-96和I-100)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的所有化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图11展示在用雷帕霉素、依维莫司或本发明化合物(I-7)处理PC3细胞90分钟之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-7，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图12展示在用雷帕霉素、依维莫司或本发明化合物(I-7)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-7，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图13展示在用依维莫司或本发明化合物(I-40和I-117)处理Jurkat细胞24小时之后进行的两种蛋白质印迹。对于所测试的所有化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图14展示在用依维莫司或本发明化合物(I-40、I-7和I-117)处理结节性硬化症(TSC2)阴性(TSC-/-)MEF细胞90分钟之后进行的两种蛋白质印迹。对于依维莫司、I-40和I-117，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-7，为对mTORC1路径的明显浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图15展示在用依维莫司或本发明化合物(I-40、I-7和I-117)处理结节性硬化症2(TSC2)阳性(TSC+/+)MEF细胞90分钟之后进行的两种蛋白质印迹。对于依维莫司和I-40，染色指示对mTORC1路径的强抑制，对于I-117，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制，以及对于I-7，为对mTORC1路径的明显浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图16展示在用依维莫司或本发明化合物(I-40、I-7和I-117)处理TSC-/-MEF细胞24小时之后进行的两种蛋白质印迹。对于依维莫司、I-40和I-117，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-7，为对mTORC1路径的明显浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图17展示在用依维莫司或本发明化合物(I-40和I-7)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的两种蛋白质印迹。对于依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，对于I-40，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制，以及对于I-7，为对mTORC1路径的适中浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图18展示在用依维莫司、雷帕霉素或本发明化合物(I-2和I-92)处理TSC-/-MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司、雷帕霉素和I-2，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-92，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。
图19展示在用依维莫司、雷帕霉素或本发明化合物(I-2和I-92)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司、雷帕霉素，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-2和I-92，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图20展示在用依维莫司或本发明化合物(I-20、I-40和I-36)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-20、I-40和I-36，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图21展示在用依维莫司或本发明化合物(I-35、I-7和I-26)处理TSC/MEF+/+细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-35、I-7和I-26，为对mTORC1路径的适中浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图22展示在用依维莫司或本发明化合物(I-9、I-97和I-98)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，对于I-9、I-97和I-98，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图23展示在用依维莫司或本发明化合物(I-91)处理TSC+/+MEF细胞90分钟之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和I-91，染色指示对mTORC1路径的强抑制。有趣的是，I-91呈现出一些对mTORC2的抑制，如Akt磷酸化抑制所展现的。
图24展示在用依维莫司或本发明化合物(I-91)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和I-91，染色指示对mTORC1路径的强抑制。有趣的是，I-91呈现出一些对mTORC2的抑制，如Akt磷酸化抑制所展现的。
图25展示在用依维莫司或本发明化合物(I-105)处理TSC+/+MEF细胞90分钟之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和I-105，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图26展示在用依维莫司或本发明化合物(I-105)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于雷帕霉素和I-105，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图27展示在用依维莫司或本发明化合物(I-2和I-92)处理PC3细胞24小时之后进行的两种蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制并且不抑制4E-BP1磷酸化。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图28展示在用依维莫司或本发明化合物(I-105)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制并且不抑制4E-BP1磷酸化。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图29展示在用依维莫司或本发明化合物(I-90和I-110)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司和I-90，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-110，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图30展示在用依维莫司或本发明化合物(I-115)处理TSC+/+MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-115，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图31展示在用依维莫司或本发明化合物(I-105、I-117、I-40和I-90)处理野生型MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于依维莫司，染色指示对mTORC1路径的强抑制，以及对于I-105、I-117、I-40和I-90，为对mTORC1路径的适度抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图32展示在用依维莫司或本发明化合物(I-105、I-117、I-40和I-90)处理野生型MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图33展示在用依维莫司或本发明化合物(I-85和I-83)处理野生型MEF细胞90分钟之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图34展示在用依维莫司或本发明化合物(I-85和I-83)处理野生型MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图35展示在用依维莫司或本发明化合物(I-85和I-83)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的每个化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。
图36展示在用依维莫司或本发明化合物(I-115)处理PC3细胞和野生型MEF细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于PC3细胞中所测试的每一化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制，对于WT MEF细胞中的依维莫司，为对mTORC1路径的强抑制，以及对于WT MEF细胞中的I-115，为对mTORC1路径的适度浓度依赖性抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图37展示在用依维莫司、本发明化合物(I-117)、短PEG、依维莫司与短PEG或I-117与短PEG来处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于单独的依维莫司和I-117以及与短PEG的组合，染色指示对mTORC1路径的强抑制。短PEG未单独展示对mTORC1或mTORC2的抑制。值得注意的是，本发明化合物不单独或与短PEG组合抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图38展示在用依维莫司或本发明化合物(I-71、I-73和I-75)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的所有化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图39展示在用依维莫司或本发明化合物(I-85和I-83)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的所有化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图40展示在用依维莫司或本发明化合物(I-65)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的两种化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图41展示在用依维莫司或本发明化合物(I-5、I-106和I-102)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的所有化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图42展示在用依维莫司或本发明化合物(I-75、I-71和I-62)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。对于所测试的所有化合物，染色指示对mTORC1路径的强抑制。值得注意的是，本发明的化合物不抑制mTORC2，如缺乏Akt磷酸化抑制所展现的。
图43展示对瘦型C57Bl/6小鼠的葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性测试的时程。
图44展示在用雷帕霉素、I-40或媒剂进行慢性治疗期间对瘦型C57Bl/6小鼠的腹膜内葡萄糖耐受性测试的结果。***P<0.001；****P<0.0001；单ANOVA和所有棒条指示平均值和SD。
图45展示在用雷帕霉素、I-40或媒剂进行慢性治疗期间，瘦型C57Bl/6小鼠的葡萄糖清除率的曲线下面积(AUC)。***P<0.001；t测试和所有棒条指示平均值和SD。
图46展示AKI/CKD小鼠模型的肾组织的天狼星红染色。
图47展示在用依维莫司、I-40、I-117或媒剂处理之后的AKI/CKD小鼠模型中的肾组织纤维化的面积百分比。t测试，与媒剂相比，*P＝0.02。
图48展示在用媒剂或I-40处理之后的AKI/CKD小鼠模型中的胶原蛋白I mRNA表达。**P<0.01，***P<0.001相对于假处理组；相对于媒剂。
图49展示在用媒剂或I-40处理之后的AKI/CKD小鼠模型中的胶原蛋白III mRNA表达。**P<0.01相对于假处理组；相对于媒剂。
图50展示在用媒剂或I-40处理之后的AKI/CKD小鼠模型中的纤维结合蛋白mRNA表达。**P<0.01相对于假处理组；相对于媒剂。
图51展示在用媒剂或I-40处理之后的AKI/CKD小鼠模型中由巨噬细胞渗透的肾组织区域。*P<0.05，***P<0.001相对于假处理组；相对于媒剂。
图52展示在用雷帕霉素、依维莫司、I-40或I-117处理之后，在同种异体MLR分析中IFN-γ产生的抑制百分比。
具体实施方式
1.本发明的某些实施例的一般描述：
在某些实施例中，本发明提供一种式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是雷帕霉素或其类似物(即，雷帕霉素类似物)的单价衍生物；
其中R1在雷帕霉素或其类似物的C-7羟基位置处连接到其上；
R1是任选经取代直链或支链饱和或不饱和单价C3-30烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地并且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-P(O)(R)2，或具有1-6个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6-18元饱和或部分不饱和杂环；或
R1选自式P-0：
其中：
指示与环A的连接点；
每一Z独立地为-O-、-S-、-NR-或-SO2-；
n是约2到约300；并且
每一R独立地为氢或任选经取代C1-6脂肪族基。
在一些实施例中，本发明提供除选自以下的化合物以外的式I化合物：
2.化合物和定义：
本发明化合物包括在本文中一般描述的化合物，并且通过本文中所公开的类别、子类和种类进一步说明。如本文中所用，除非另外指明，否则以下定义应适用。出于本发明的目的，化学元素是根据元素周期表，CAS版本，化学与物理手册(Handbook of Chemistryand Physics)，第75版来识别。此外，有机化学的一般原理描述于《有机化学(OrganicChemistry)》,托马斯索雷尔(Thomas Sorrell),大学科学书籍(University ScienceBooks),索萨利托(Sausalito):1999，以及《马奇高等有机化学(March's AdvancedOrganic Chemistry)》,第5版,编辑：史密斯M.B.(Smith,M.B.)和马奇J.(March,J.),约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons),纽约(New York):2001中，这些文献的全部内容特此以引用的方式并入。
如本文所使用，术语“脂肪族”或“脂肪族基”意指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，未分支)或分支链、经取代或未经取代的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但非芳香族(在本文中也称为“碳环”、“环脂肪族”或“环烷基”)的单环烃或双环烃，其与分子的其余部分具有单一连接点。除非另外说明，否则脂肪族基含有1-6个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基团含有1-5个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基含有1-4个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基含有1-3个脂肪族碳原子，且在其它实施例中，脂肪族基含有1-2个脂肪族碳原子。在一些实施例中，“环脂肪族”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳香族的单环C3-C6烃，所述烃具有与分子的其余部分的单一连接点。适合的脂肪族基团包括但不限于直链或支链的被取代或未被取代的烷基、烯基、炔基和其杂合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一种或多种(包含氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环的可取代氮，例如N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或NR+(如N取代的吡咯烷基中))。
如本文所用，术语“不饱和”意指部分具有一个或多个不饱和单元。
如本文中所用，术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和、直链或支链烃链”是指如本文中所定义的直链或支链的二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即，-(CH2)n-，其中n是正整数，优选地1到6、1到4、1到3、1到2或2到3。经取代的亚烷基链是其中一个或多个亚甲基氢原子经取代基置换的聚亚甲基。适合的取代基包含下文关于经取代的脂肪族基团所描述的那些取代基。
术语“亚烯基”是指二价烯基。被取代的亚烯基链是含有至少一个双键的聚亚甲基，其中一个或多个氢原子被取代基置换。适合的取代基包含下文关于经取代的脂肪族基团所描述的那些取代基。
术语“卤素”意指F、Cl、Br或I。
如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中单独或作为较大部分的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共五到十四个环成员的单环或双环系统，其中系统中的至少一个环是芳香族并且其中系统中的每个环含有3到7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳基环”互换使用。在本发明的某些实施例中，“芳基”是指芳香环系统，其包含但不限于苯基、联苯基、萘基、蒽基等，其可以具有一个或多个取代基。本文中所使用，在术语“芳基”的范围内还包含芳香族环与一个或多个非芳香族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、啡啶基或四氢萘基等。
单独或作为较大部分的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”，例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”是指具有5到10个环原子，优选5个、6个或9个环原子；在环阵列中共用6个、10个或14个π电子；并且除碳原子之外还具有一到五个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包含但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基及蝶啶基。如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括杂芳香族环与一个或多个芳基、环脂肪族或杂环基环稠合的基团，其中连接基团或点位于杂芳香族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮。杂芳基可以是单环或双环的。术语“杂芳基(heteroaryl)”可以与术语“杂芳基环(heteroaryl ring)”、“杂芳基(heteroaryl group)”或“杂芳香族(heteroaromatic)”互换使用，这些术语中的任一个都包含任选经取代环。术语“杂芳烷基”是指经杂芳基取代的烷基，其中烷基和杂芳基部分独立地任选经取代。
如本文所使用，术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基(heterocyclic radical)”和“杂环(heterocyclic ring)”可互换使用且是指稳定5到7元单环或7-10元双环杂环部分，其是饱和或部分不饱和的，且除了碳原子之外具有一个或多个、优选一到四个如上文所定义的杂原子。当作为杂环的环原子使用时，术语“氮”包括被取代的氮。作为一个实例，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或+NR(如N取代的吡咯烷基中)。
杂环可以在任何杂原子或碳原子处连接到其侧基，从而产生稳定结构，并且任何环原子可以任选地经取代。所述饱和或部分不饱和杂环基团的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、恶唑烷基、哌嗪基、二氧杂环己烷基、二氧戊环基、二氮呯基、恶氮呯基、噻环氮己三烯基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环基环(heterocyclyl ring)”、“杂环基(heterocyclic group)”、“杂环部分(heterocyclicmoiety)”和“杂环基(heterocyclic radical)”在本文中可互换使用，并且还包括杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或环脂肪族环稠合的基团，例如吲哚啉基、3H-吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基。杂环基可以是单环或双环的。术语“杂环基烷基”是指经杂环基取代的烷基，其中烷基和杂环基部分独立地任选地经取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”是指包括至少一个双键或三键的环部分。如本文所定义，术语“部分不饱和”意图涵盖具有多个不饱和位点的环，但并非意图包含芳基或杂芳基部分。
如本文所描述，本发明的化合物可含有“任选经取代”的部分。一般来说，术语“经取代”无论前面是否有术语“任选地”，都意指所指定部分的一个或多个氢经适合的取代基置换。除非另外指示，否则“任选经取代”基团可以在基团的每个可取代位置处具有合适的取代基，并且当任何既定结构中的一个以上位置可以经一个以上选自规定基团的取代基取代时，在每一位置处取代基可以是相同或不同的。本发明所设想的取代基组合优选是引起稳定或化学上可行的化合物的形成的那些取代基组合。如本文所用，术语“稳定”是指化合物在经历允许其产生、检测和在某些实施例中，其回收、纯化以及用于本文所公开的一个或多个目的时，基本上不发生改变。
在“任选经取代”基团的可取代碳原子上的合适单价取代基独立地是卤素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro，-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；-(CH2)0- 4SRo；-(CH2)0-4Ph，其可被取Ro代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可被取Ro代；-CH＝CHPh，其可被取Ro代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基，其可被取Ro代；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)Ro；-C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSiRo 3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SR-，SC(S)SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)NRo 2；-C(S)NRo 2；-C(S)SRo；-SC(S)SRo，-(CH2)0-4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2NRo 2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NH)NRo 2；-P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-OP(O)Ro 2；-OP(O)(ORo)2；SiRo 3；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(Ro)2，其中每个Ro可以如下文所定义被取代且独立地是氢、C1-6脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5-6元杂芳基环)，或5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，其具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子，或尽管上文有定义，但两个独立存在的Ro与其中间原子一起形成3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子，可以如下文所定义被取代。
Ro(或通过将两个独立存在的Ro与其中间原子连在一起所形成的环)上的合适的单价取代基独立地是卤素、-(CH2)0-2R·、-(卤基R·)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR·、-(CH2)0-2CH(OR·)2；-O(卤基R·)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R·、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR·、-(CH2)0-2SR·、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR·、-(CH2)0-2NR· 2、-NO2、-SiR· 3、-OSiR· 3、-C(O)SR·、-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)OR·或-SSR·，其中每个R·未被取代或在前面存在“卤基”的情况下，只被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。Ro的饱和碳原子上的适合的二价取代基包含＝O和＝S。
“任选经取代”基团的饱和碳原子上的适合二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中每个独立存在的R*选自氢、可以如下文所定义被取代的C1-6脂肪族基、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。结合到“任选经取代”基团的邻位可取代碳的适合二价取代基包括：-O(CR* 2)2-3O-，其中每个独立存在的R*选自氢、可以如下文所定义被取代的C1-6脂肪族基、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
R*的脂肪族基团上的合适的取代基包含卤素、-R·、-(卤基R·)、-OH、-OR·、-O(卤基R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中每一R·未经取代或在前面有“卤基”的情况下仅经一个或多个卤素取代，并且独立地为C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0- 1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳环。
“任选经取代”基团的可取代氮上的合适取代基包括 或/> 其中每个/>独立地是氢、可以如下文所定义被取代的C1-6脂肪族基、未被取代的-OPh、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或不管以上定义，两个独立存在的/>与其中间原子结合在一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单或双环。
的脂肪族基团上的适合的取代基独立地为卤素、-R·、-(卤基R·)、-OH、-OR·、-O(卤基R·)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR·、-NH2、-NHR·、-NR· 2或-NO2，其中每一R·未经取代或在前面有“卤基”的情况下，只经一个或多个卤素取代，且独立地为C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳环。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内适用于与人类和低等动物的组织接触而无不当毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域中众所周知。举例来说，S.M.伯格(S.M.Berge)等人在药物科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)，1977，66，1-19中详细描述了药学上可接受的盐，所述文献以引入的方式并入本文中。本发明化合物的药学上可接受的盐包括源自合适的无机和有机酸和碱的那些盐。药学上可接受的无毒性酸加成盐的实例是氨基与无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸)或有机酸(如乙酸、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用所属领域中所用的其它方法(如离子交换)形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
由适当的碱衍生的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包含钠、锂、钾、钙、镁等。另外的药学上可接受的盐包含在适当时使用抗衡离子(如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低级烷基磺酸盐和芳基磺酸盐)形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。
除非另外规定，否则本文中所描绘的结构还意图包括所述结构的所有异构(例如，对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如，关于每个不对称中心的R与S构形、Z与E双键异构体，以及Z与E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物都在本发明的范围内。除非另行说明，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。另外，除非另行说明，否则在此所描绘的结构也意指包括仅在存在一个或多个同位素增浓原子方面不同的化合物。举例来说，具有包括由氘或氚置换氢或由13C或14C增浓的碳置换碳的本发明结构的化合物在本发明的范围内。这类化合物适用作例如分析工具，用作生物分析中的探针，或用作根据本发明的治疗剂。
如本文中所使用，术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”，意指mTORC1活性在以下两个样品间的可测量变化：包含本发明化合物或其组合物和mTORC1的样品，以及在不存在所述化合物或其组合物的情况下包含mTORC1的等效样品。
3.例示性实施例的描述：
如上文所述，在某些实施例中，本发明提供一种式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A是雷帕霉素或其类似物(即，雷帕霉素类似物)的单价衍生物；
其中R1在雷帕霉素或其类似物的C-7羟基位置处连接到其上；并且
R1是任选经取代直链或支链饱和或不饱和单价C3-30烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地并且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-P(O)(R)2；或具有1-6个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6-18元饱和或部分不饱和杂环；或
R1选自式P-0：
其中：
指示与环A的连接点；
每一Z独立地为-O-、-S-、-NR-或-SO2-；
n是约2到约300；并且
每一R独立地为氢或任选经取代C1-6脂肪族基。
应了解，本说明书全篇所述的术语“雷帕霉素”和其结构意图涵盖雷帕霉素和其类似物。
出于清楚起见，下面再现所提供式II，其中所描绘的R1部分在C-7羟基位置处连接上。因此，本发明提供一种式II化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是任选经取代直链或支链饱和或不饱和单价C3-30烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地并且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-P(O)(R)2；或具有1-6个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6-18元饱和或部分不饱和杂环；或
R1选自式P-0：
其中：
指示与所述C-7羟基位置的连接点；
每一Z独立地为-O-、-S-、-NR-或-SO2-；
n是约2到约300；并且
每一R独立地为氢或任选经取代C1-6脂肪族基。
在一些实施例中，本发明提供一种式II-a或II-b的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中R1中的每一者如上文所定义且在本文中描述于类别和子类中。
应了解，本说明书全篇所述的术语“雷帕霉素”和其结构意图涵盖雷帕霉素和其类似物。因此，在某些实施例中，环A为雷帕霉素。在一些实施例中，环A为依维莫司。在一些实施例中，环A为坦罗莫司。在一些实施例中，环A为地磷莫司。在一些实施例中，环A为优米莫司(Umirolimus)。
以上所列举的雷帕霉素的类似物(即，雷帕霉素类似物)用于范例且并不意图限制本发明。
如上文所定义的，R1是任选经取代直链或支链饱和或不饱和单价C3-30烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地并且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-或具有1-6个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6-18元饱和或部分不饱和杂环。
在某些实施例中，R1是任选经取代直链或支链饱和或不饱和单价C3-30烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地并且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-P(O)(R)2。在一些实施例中，R1是任选经取代分支链饱和单价烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-P(O)(R)2。在一些实施例中，R1是任选经取代直链不饱和单价烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地并且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-P(O)(R)2。在一些实施例中，R1是任选经取代分支链不饱和单价烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地且独立地被以下各者置换：-N(R)-、-N(R)C(O)-、-C(O)N(R)-、-N(R)S(O)2-、-S(O)2N(R)-、-O-、-C(O)-、-OC(O)-、-C(O)O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-P(O)(R)2。在一些实施例中，R1是任选经取代直链饱和单价烃链，其中R1的一个或多个亚甲基单元任选地并且独立地被-O-置换。
在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>
在一些实施例中，R1是
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在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1/>在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>
在某些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>
在一些实施例中，R1是
在某些实施例中，R1具有式P-0：
其中：
指示与环A的连接点；
每一Z独立地为-O-、-S-、-NR-或-SO2-；
n是约2到约300；并且
每个R独立地是氢或任选经取代C1-6脂肪族基。
在一些实施例中，n是约2到约10；约10到约20；约20到约30；约30到约40；约40到约50；约50到约60；约60到约70；约70到约80；约80到约90；约90到约100；约110到约120；约120到约130；约140到约150；约150到约160；约170到约180；约180到约190；约190到约200；200到约210；约210到约220；约220到约230；约230到约240；约240到约250；约250到约260；约260到约270；约270到约280；约280到约290；或约290到约300。
在一些实施例中，R1是其中n和R如本文所述。/>
在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>
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在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是
在一些实施例中，R1是
在某些实施例中，R1是具有1-6个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的6-18元饱和或部分不饱和杂环。
在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>在一些实施例中，R1是/>
在一些实施例中，R1选自下表1中所描绘的那些。
在某些实施例中，R独立地为氢或选自C1-6脂肪族的任选经取代基团。在一些实施例中，R是氢。在一些实施例中，R为甲基。在一些实施例中，R是乙基。在一些实施例中，R是丙基。在一些实施例中，R是
在一些实施例中，R选自下表1中所描绘的那些。
在一些实施例中，本发明提供一种式III化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式III-a或III-b的化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式IV化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式IV-a或IV-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式V化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式V-a或V-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式VI化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式VI-a或VI-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式VII化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式VII-a或VII-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式VIII化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式VIII-a或VIII-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式IX-a、IX-b、IX-c、IX-d、IX-e、IX-f或IX-g化合物：
/>
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式X-a、X-b、X-c、X-d、X-e、X-f或X-g化合物：
/>
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R1如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式XI-a、XI-b、XI-c、XI-d、XI-e、XI-f或XI-g化合物：
/>
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
P-0如本文中所描述。
在一些实施例中，本发明提供一种式XII化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R和n如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式XII-a或XII-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R和n如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式XIII化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R和n如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式XIII-a或XIII-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中：
R和n如本文所述。
在一些实施例中，本发明提供一种式XIV化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，本发明提供一种式XIV-a或XIV-b化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，本发明提供一种式XV化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，本发明提供一种式XV-a或XV-b化合物：
/>
或其药学上可接受的盐。
雷帕霉素以商品名(通用名称，西罗莫司(sirolimus))出售，且以其抗增殖和免疫抑制活性而闻名。雷帕霉素被FDA批准用于预防移植排斥反应，并用于涂层支架以防止再狭窄。除雷帕霉素已证实的益处外，众所周知雷帕霉素与许多严重副作用相关。此类副作用包括葡萄糖耐受性降低和胰岛素敏感性降低的糖尿病样症状。此外，已报导，雷帕霉素激活Akt信号传导路径(包括Akt和ERK的激活)，由此增加患者癌症风险。
如本文所使用，短语“单独的雷帕霉素”意图用以比较本发明化合物与作为替代方案的雷帕霉素或其类似物。
在一些实施例中，所提供的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、XII、XIII、XIV或XV化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式II-a、III-a、IV-a、V-a、VI-a、VII-a、VIII-a、XII-a、XIII-a、XIV-a或XV-a化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式II-b、III-b、IV-b、V-b、VI-b、VII-b、VIII-b、XII-b、XIII-b、XIV-b或XV-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施例中，所提供的式IX-a、IX-b、IX-c、IX-d、IX-e、IX-f或IX-g化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施例中，所提供的式X-a、X-b、X-c、X-d、X-e、X-f或X-g化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施例中，所提供的式XI-a、XI-b、XI-c、XI-d、XI-e、XI-f或XI-g化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施例中，所提供的式II-a或II-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式III-a或III-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式IV-a或IV-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式V-a或V-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式VI-a或VI-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式VII-a或VII-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式VIII-a或VIII-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式XII-a或XII-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式XIII-a或XIII-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式XIV-a或XIV-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。在一些实施例中，所提供的式XV-a或XV-b化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施例中，当所提供的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、XII、XIII、XIV或XV化合物施用到患者时，产生的副作用严重程度比施用雷帕霉素时更少和/或更小。
在一些实施例中，当所提供的式IX-a、IX-b、IX-c、IX-d、IX-e、IX-f或IX-g化合物施用到患者时，产生的副作用严重程度比施用雷帕霉素时更少和/或更小。
在一些实施例中，当所提供的式X-a、X-b、X-c、X-d、X-e、X-f或X-g化合物施用到患者时，产生的副作用严重程度比施用雷帕霉素时更少和/或更小。
在一些实施例中，所提供的式XI-a、XI-b、XI-c、XI-d、XI-e、XI-f或XI-g化合物在施用到患者时，产生的副作用严重程度比施用雷帕霉素时更少和/或更小。
本发明的示范性化合物阐述于下表1中。
表1.示例性化合物
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在一些实施例中，本发明提供一种上表1中阐述的化合物或其药学上可接受的盐。应了解，本发明还提供在以上表1中阐述的化合物，作为在C7位置处的外消旋混合物或其药学上可接受的盐。此外，应了解，以上表1中阐述的化合物，作为C7羟基位置处的外消旋混合物，可通过各种方法(例如，手性色谱法)分离成非对映异构体。
4.用途、配制物和施用
药学上可接受的组合物
根据另一实施例，本发明提供一种组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂。本发明组合物中的化合物的量使得有效可测量地抑制生物样品或患者中的mTORC1。在某些实施例中，本发明组合物中的化合物的量使得有效可测量地抑制生物样品或患者中的mTORC1。在某些实施例中，配制本发明组合物用于向需要所述组合物的患者施用。在一些实施例中，本发明组合物被配制成用于向患者经口施用。
如本文中所用，术语“患者”意指动物，优选地是哺乳动物，并且最优选地是人类。
术语“药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂”是指不会破坏一起调配的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒剂。可以在本发明的组合物中使用的药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
本发明的组合物可以经口、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入式药盒(implanted reservoir)施用。如本文中所用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物经口、经腹膜内或经静脉内施用。本发明组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域中已知的技术使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂还可以为在无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如呈在1,3-丁二醇中的溶液形式。可以采用的可接受的媒剂和溶剂是水、林格氏溶液(Ringer's solution)和等张氯化钠溶液。另外，常规地采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。
出于此目的，可以采用任何温和不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。例如油酸的脂肪酸和其甘油酯衍生物如天然药学上可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油，尤其呈其聚氧乙基化形式)般适用于制备可注射剂。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或常用于配制药学上可接受的剂型(包括乳液及悬浮液)的类似分散剂。出于配制之目的，也可以使用其它常用的表面活性剂(例如吐温(Tween)、斯潘(Span))和常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型中的其它乳化剂或生物可用性增进剂。
本发明的药学上可接受的组合物可以任何经口可接受剂型经口施用，所述剂型包含但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口使用的片剂的情况下，常用的载剂包括乳糖和玉米淀粉。典型地还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口施用，适用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当口服使用需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂合并。必要时，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，本发明的药学上可接受的组合物可以按用于经直肠施用的栓剂形式施用。这些栓剂可通过将药剂与适合的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固体但在直肠温度下是液体并且因此将在直肠中熔融以释放药物。所述物质包括可可脂、蜂蜡以及聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物还可以局部施用，尤其当治疗目标包括通过局部施用容易达到的区域或器官(包括眼睛、皮肤或下部肠道的疾病)时。容易制备适用于这些区域或器官中的每一着的局部配制物。
对下部肠道的局部施用可以直肠栓剂配制物(参见上文)或以合适的灌肠剂配制物实现。也可以使用局部经皮贴片。
对于局部施用来说，所提供的药学上可接受的组合物可以含有悬浮或溶解于一种或多种载剂中的活性组分的适合软膏形式配制。用于本发明化合物的局部施用的载剂包括但不限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可替代地，所提供的药学上可接受的组合物可以含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载剂中的活性组分适合的洗剂或乳膏形式配制。合适的载剂包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
对于眼科使用，所提供的药学上可接受的组合物可以在存在或不存在如苯扎氯铵的防腐剂情况下，配制为于pH经调整的等张无菌生理食盐水中的微粉化悬浮液或优选配制为于pH值经调整的等张无菌生理食盐水中的溶液。或者对于眼科使用，药学上可接受的组合物可在如矿脂的软膏中配制。
本发明的药学上可接受的组合物还可以通过经鼻雾剂或吸入施用。所述组合物根据药物配制领域中所熟知的技术制备，并且可以采用苯甲醇或其它适合防腐剂、增强生物可用性的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂，以于生理食盐水中的溶液形式制备。
最优选地，配制本发明的药学上可接受的组合物以用于经口投药。所述配制物可以与或不与食物一起施用。在一些实施例中，本发明的药学上可接受的组合物在不存在进食的情况下施用。在其它实施例中，本发明的药学上可接受的组合物与食品一起施用。
可以与载剂物质组合以产生呈单一剂型的组合物的本发明化合物的量将根据所治疗的宿主、特定施用模式而变化。优选地，应该配制所提供的组合物以使得可以向接受这些组合物的患者施用剂量介于0.01-100毫克/千克体重/天之间的抑制剂。
还应了解，针对任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、整体健康状况、性别、饮食、投药时间、排泄率、药物组合以及治疗医师的判断和所治疗特定疾病的严重程度。组合物中本发明化合物的量还将取决于组合物中的特定化合物。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
如本文所用，术语“治疗(treatment/treat/treating)”是指逆转、减轻如本文所描述的疾病或病症或其一种或多种症状，延迟其发作，或抑制其进展。在一些实施例中，治疗可在已出现一种或多种症状后施用。在其它实施例中，治疗可以在不存在症状的情况下施用。举例来说，治疗可以在症状发作之前向易感个体(例如，根据症状病史和/或根据遗传学或其它易感性因素)施用。还可以在症状已经消退之后继续进行治疗，例如以预防或延迟其复发。
所提供的化合物为mTORC1抑制剂且因此可用于治疗与mTORC1活性相关的一种或多种病症。因此，在某些实施例中，本发明提供一种用于治疗mTORC1介导的病症的方法，所述方法包含向有需要的患者施用本发明化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
如本文中所用，如本文中所用的术语“mTORC1介导的”病症、疾病和/或病状意指已知mTORC1起作用的任何疾病或其它有害的病状。因此，本发明的另一个实施例涉及治疗一种或多种已知mTORC1起作用的疾病或减轻其严重程度。在某些实施例中，mTORC1介导的病症、疾病和/或病状选自由Matt Kaeberlin,Scientifica,第2013卷，文章编号849186所描述的那些。
本文所述的方法包括用于治疗受试者的癌症的方法。如在此情况下所使用的，“治疗”意指缓解或改善癌症的至少一个症状或临床参数。举例来说，治疗能够引起肿瘤大小或生长速率减小。在所有受试者中，治疗无需治愈癌症或促成100％时间的缓解。
如本文中所用的术语“癌症”是指细胞具有自主生长能力，即，以迅速增殖的细胞生长为特征的异常状态或病状。所述术语意图包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，不管组织病理学类型或侵袭阶段。如本文中所用的术语“肿瘤”是指多个癌细胞，例如癌细胞块。
能够使用本文所述的方法治疗或诊断的癌症包括各个器官系统的恶性肿瘤，如影响肺、乳房、甲状腺、淋巴、胃肠道和泌尿生殖道的恶性肿瘤，以及腺癌，包括恶性肿瘤，如大部分结肠癌、肾细胞癌、前列腺癌和/或睾丸肿瘤、非小细胞肺癌、小肠癌以及食道癌。
在一些实施例中，使用本文所述的方法来治疗或诊断受试者的癌瘤。术语“癌瘤”是本领域所知的并且是指上皮或内分泌组织的恶性肿瘤，包括呼吸系统癌、胃肠系统癌、泌尿生殖系统癌、睾丸癌、乳腺癌、前列腺癌、内分泌系统癌以及黑素瘤。在一些实施例中，癌症是肾癌或黑素瘤。示范性癌瘤包括从子宫颈、肺、前列腺、乳房、头颈部、结肠以及卵巢组织形成的那些。所述术语还包括癌肉瘤，例如，其包括由癌组织和肉瘤组织组成的恶性肿瘤。“腺癌”是指衍生自腺组织的癌瘤或其中肿瘤细胞形成可辨认的腺结构。
术语“肉瘤”是本领域所知的并且是指间充质衍生的恶性肿瘤。
在一些实施例中，本文所述的方法所治疗的癌症是相对于正常组织或同一组织的其它癌症来说，mTORC1水平增加或mTORC1的表达或活性增加的癌症；可以使用本领域中已知并且本文中所述的方法来鉴别那些癌症。在一些实施例中，所述方法包括获得包含癌症细胞的样品，测定样品中的mTORC1活性，并且施用如本文所描述的治疗(例如所提供的mTORC1抑制剂)。在一些实施例中，癌症是本文展示的癌症具有增加的mTORC1活性水平的癌症。
在一些实施例中，本发明提供一种用于治疗一种或多种病症、疾病和/或病状的方法，其中所述病症、疾病或病状包含但不限于细胞增殖性病症。
细胞增殖性病症
本发明的特征在于用于诊断和预后细胞增殖性病症(例如癌症)和通过抑制mTORC1活性治疗这些病症的方法和组合物。本文所述的细胞增殖性病症包括例如癌症、肥胖症以及增殖依赖性疾病。此类病症可以使用本领域中已知的方法诊断。
癌症
癌症包括但不限于白血病(例如急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、急性成骨髓细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性骨髓单核细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如霍奇金病(Hodgkin's disease)或非霍奇金病)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)、多发性骨髓瘤、重链疾病以及实体肿瘤，如肉瘤和癌瘤(例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓质癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤(Wilm'stumor)、子宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤以及成视网膜细胞瘤)。在一些实施例中，癌症是黑素瘤或乳腺癌。
纤维化疾病
特发性肺部纤维化(IPF).PI3K路径在纤维化病灶，即IPF中的主要病变中激活。mTOR激酶抑制剂GSK2126458减少IPF衍生的肺成纤维细胞中的PI3K路径信号传导和功能反应，并且mTOR抑制降低IPF患者模型中的胶原蛋白表达。在肺纤维化博莱霉素(bleomycin)模型中，雷帕霉素治疗抗纤维化，并且雷帕霉素还通过活体外的成纤维细胞降低α平滑肌肌动蛋白和纤维结合蛋白的表达。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗特发性肺纤维化(IPF)(参见默瑟,P.F.(Mercer,P.F.)等人,Thorax.,71(8):701-11(2016)；帕特尔,A.S.(Patel,A.S.)等人,公共科学图书馆·综合(PLoS One)7(7):e41394(2012))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的特发性肺纤维化(IPF)的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
肾纤维化.mTORC1在成肌纤维细胞，即肾纤维化中的主要病原性细胞类型中激活。在肾纤维化(UUO)的鼠类模型中用雷帕霉素抑制mTOR，降低纤维化标记物的表达和减少小管间质损伤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗肾纤维化(参见江,L.(Jiang,L.)等人,美国肾脏学会期刊(J Am Soc Nephrol),24(7):1114-26(2013)；吴,M.J.(Wu,M.J.)等人,肾脏国际(Kidney International),69(11):2029-36(2006)；陈,G.(Chen,G.)等人,公共科学图书馆·综合7(3):e33626(2012)；刘,C.F.(Liu,C.F.)等人,临床和调查医学(Clin Invest Med),37(34):E142-53(2014))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的肾纤维化的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗硬皮病(参见密特拉,A.(Mitra,A.)等人,皮肤病学研究杂志(J Invest Dermatol.)135(11):2873-6(2015))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的硬皮病的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗肥大性疤痕和瘢痕瘤疾病(参见赛德,F.(Syed,F.)等人,美国病理学杂志(Am J Pathol.)181(5):1642-58(2012))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的肥大性疤痕和瘢痕瘤疾病的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗心脏纤维化(参见亚诺,T.(Yano,T.)等人,分子与细胞心脏病学杂志(J Mol Cell Cardiol.)91:6-9(2016))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的心脏纤维化的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
其它增殖性疾病
其它增殖性疾病包括例如肥胖症、良性前列腺增生、牛皮癣、异常角质化、淋巴组织增生病症(例如淋巴系统细胞异常增殖的病症)、慢性类风湿性关节炎、动脉硬化、再狭窄以及糖尿病性视网膜病。特此以引用的方式并入的增殖性疾病包括美国专利第5,639,600号和第7,087,648号中所描述的那些。
其它病症
其它病症包括溶酶体贮积病，包括但不限于庞贝病(Pompe disease)、戈谢病(Gaucher disease)、粘多糖病、多种硫酸酯酶缺乏症；神经退化性疾病，如帕金森病(Parkinson'sdisease)、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、亨丁顿舞蹈症(Huntington's disease)、α1-抗胰蛋白酶缺乏症和脊髓延髓肌肉萎缩。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗哮喘(参见华,W.(Hua,W.)等人,呼吸道疾病学(Respirology),20(7):1055-65(2015))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的哮喘的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗溶酶体贮积病(参见萨迪耶洛,M.(Sardiello,M.),纽约科学院年鉴(Annals of the New York Academy ofSciences),1371(1):3-14(2016)；阿瓦德,O.(Awad,O.)等人,人类分子遗传学(Hum MolGenet.)24(20):5775-88(2015)；斯潘皮纳托,C.(Spampanato,C.)等人,EMBO分子医学(EMBO Mol Med.),5(5):691-706(2013)；麦地那,D.L.(Medina,D.L.)等人,发育细胞(DevCell.),21(3):421-30(2011))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的溶酶体贮积病的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗帕金森病(参见德克雷萨克,M.(Decressac,M.)等人,美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci U S A.),110(19):E1817-26(2013))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的帕金森病的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗阿尔茨海默病(参见策略波利托,V.A.(Polito,V.A.)等人,EMBO分子医学6(9):1142-60(2014))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的阿尔茨海默病的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗亨丁顿舞蹈症(参见恒美,T.(Tsunemi,T.)等人,科学转化医学杂志(Sci Transl Med.),4(142):142ra97(2012))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的亨丁顿舞蹈症的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，抑制mTORC1活性的方法用于治疗α1-抗胰蛋白酶缺乏症(参见帕斯托,N.(Pastore,N.)等人,EMBO分子医学,5(3):397-412(2013))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的α1-抗胰蛋白酶缺乏症的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗脊髓延髓肌肉萎缩(参见科尔特斯,C.J.(Cortes,C.J.)等人,自然-神经科学(Nat Neurosci.),17(9):1180-9(2014))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的脊髓延髓肌肉萎缩的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施例中，本发明化合物结合到FKBP12以形成复合体。在一些实施例中，本发明化合物与FKBP12之间的复合体与mTOR的FK506雷帕霉素结合域相互作用。
在一些实施例中，本发明化合物结合FKBP12且干扰FRAP与FKBP12之间的蛋白质-蛋白质相互作用。在一些实施例中，本发明化合物的R1基团与FRAP和FKBP12相互作用。
本发明提供作为mTORC1活性抑制剂的化合物，并且如通过pS6K抑制(mTORC1活性的量度)和pAKT激活(mTORC2活性的量度)所测量的，展示为相对于mTORC2选择性抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物相对于mTORC2选择性抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物不会可测量地抑制mTORC2。在一些实施例中，所提供的化合物的pAKT激活IC50>10μM。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>10倍。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>20倍。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>50倍。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>100倍。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>150倍。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>200倍。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>500倍。在一些实施例中，所提供的化合物抑制mTORC1相对于mTORC2的选择性>1,000倍。
在一些实施例中，所提供的化合物在长期治疗或暴露之后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在约24小时治疗或暴露后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在约36小时治疗或暴露之后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在约48小时治疗或暴露后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在约72小时治疗或暴露后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在约96小时治疗或暴露后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在约120小时治疗或暴露后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在约144小时治疗或暴露后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在治疗或暴露约一周之后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。在一些实施例中，所提供的化合物在治疗或暴露超过约一周之后相对于mTORC2选择性地抑制mTORC1。
在一些实施例中，所提供的化合物的免疫抑制性比现有雷帕霉素类似物低。在一些实施例中，所提供的化合物的免疫抑制性比雷帕霉素低。在一些实施例中，所提供的化合物的免疫抑制性比依维莫司低。在一些实施例中，所提供的化合物的免疫抑制性比坦罗莫司低。在一些实施例中，所提供的化合物的免疫抑制性比地磷莫司低。在一些实施例中，所提供的化合物的免疫抑制性比优米莫司低。
在一些实施例中，所提供化合物遏制干扰素γ(IFN-γ)产生的作用小于雷帕霉素类似物。在一些实施例中，所提供化合物遏制IFN-γ产生的作用小于雷帕霉素。在一些实施例中，所提供化合物遏制IFN-γ产生的作用小于依维莫司。在一些实施例中，所提供化合物遏制IFN-γ产生的作用小于坦罗莫司。在一些实施例中，所提供化合物遏制IFN-γ产生的作用小于地磷莫司。在一些实施例中，所提供化合物遏制IFN-γ产生的作用小于优米莫司。
在一些实施例中，所提供的化合物降低已损坏的组织中的纤维化生物标记物的表达。在一些实施例中，所提供的化合物降低已损坏的组织中的胶原蛋白I(COL1A2)的表达。在一些实施例中，所提供的化合物降低已损坏的组织中的胶原蛋白III(COL3A1)的表达。在一些实施例中，所提供的化合物降低已损坏的组织中的纤维结合蛋白(FN1)的表达。
在一些实施例中，所提供的化合物降低免疫细胞浸润受损组织的倾向。在一些实施例中，所提供的化合物降低巨噬细胞浸润受损组织的倾向。
在一些实施例中，所提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性比雷帕霉素类似物低。在一些实施例中，所提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性比雷帕霉素低。在一些实施例中，所提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性比依维莫司低。在一些实施例中，所提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性比坦罗莫司低。在一些实施例中，所提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性比地磷莫司低。在一些实施例中，所提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性比优米莫司低。在一些实施例中，所提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性不显著大于单独安慰剂或媒剂诱导的葡萄糖耐受性。
因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗与mTORC1相关联的病症的方法，其包含向患者施用抑制mTORC1的化合物，其中所述化合物不抑制mTORC2。此类化合物可以用于其中雷帕霉素和雷帕霉素类似物在动物模型中或在人类疾病环境中展现益处的适应症。此类适应症包括：
治疗代谢疾病(2型糖尿病中的肥胖症和胰岛素抗性).mTORC1路径的抑制使得酵母、苍蝇和小鼠寿命延长，且热限制改善了寿命和胰岛素敏感性。已提议下面的机制通过调北mTORC1激活起作用。雷帕霉素诱导的胰岛素抗性已展示通过抑制mTORC2来介导，并且选择性mTORC1抑制剂预测改善胰岛素敏感性和葡萄糖稳态。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗代谢疾病(2型糖尿病中的肥胖症和胰岛素抗性)(参见宇,Z.(Yu,Z.)等人,老年医学期刊系列A-生物学和医学科学(JGerontol ABiol Sci Med Sci),70(4),410-20(2015)；富奥克,W.C.(Fok,W.C.)等人,衰老细胞(Aging Cell)13(2):311-9(2014)；岑,M.(Shum,M.)等人,糖尿病学(Diabetologia),59(3):592-603(2016)；莱明,D.W.(Lamming,D.W.)等人,科学335(6076):1638-43(2012))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的代谢疾病(2型糖尿病中的肥胖症和胰岛素抗性)的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
神经纤维瘤.神经纤维瘤1型(NF1)由NF1基因中的突变引起。其蛋白质产物、神经纤维瘤蛋白充当肿瘤抑制剂并且最终产生组成性mTOR上调。已展示mTOR抑制剂减小肿瘤大小且诱导NF1相关丛状神经纤维瘤的抗增殖作用。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗神经纤维瘤病(参见弗朗兹,D.N.(Franz,D.N.)等人,最新神经学与神经科学报告(Curr Neurol Neurosci Rep.),12(3):294-301(2012)；瓦林,J.(Varin,J.)等人,肿瘤标靶(Oncotarget.),7:35753-67(2016))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的神经纤维瘤的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
心肌病和骨骼肌营养不良、埃-德型肌营养不良模型(Emery-Dreifuss musculardystrophy model)(LMNA-/-).LMNA中的突变产生数种人类疾病，包括肢带肌营养不良(LGMD1B)、埃-德型肌营养不良(EDMD2/3)、扩张型心肌症(DCM)和传导系统疾病(CMD1A)、脂质营养不良、腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease)和早年衰老综合症(Hutchinson-Gilford progeria syndrome，HGPS)。Lmna-/-小鼠具有较高mTORC1活性和用雷帕霉素对Lmna-/-小鼠的短期治疗引起mTORC1信号传导减少、心脏和骨骼肌功能改进和存活率增加约50％。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗心肌病和骨骼肌营养不良(参见拉莫斯,F.(Ramos,F.)等人,科学转化医学杂志(Sci Transl Med.),4(144):144ra103(2012)；Bonne,G.&Quijano-Roy,S.,Handb Clin Neurol.,113:1367-76(2013))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的心肌病和骨骼肌营养不良的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
利氏综合症(Leigh syndrome).Ndufs4基因敲除(KO)小鼠用作利氏综合症的模型并且呈现mTORC1过度激活和代谢缺陷。用雷帕霉素治疗Ndufs4 KO小鼠延长寿命，改善与此疾病相关的代谢和神经缺陷。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗利氏综合症(参见约翰逊,S.C.(Johnson,S.C.)等人,科学,342(6165):1524-8(2013))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的利氏综合症的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
肿瘤学.已在鼠类癌症模型和癌症患者中展示mTOR抑制具有抗肿瘤活性。敏感癌症类型的实例包括但不限于肝细胞癌、乳腺癌、套细胞淋巴瘤、肺癌、结节硬化症和肺淋巴管平滑肌增生症。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗癌症和肿瘤病症(参见伊拉甘,E.(Ilagan,E.)和曼宁,B.D.(manning,B.D.),癌症趋势(Trends Cancer),2(5):241-51(2016))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的癌症和肿瘤病症的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
非酒精性脂肪性肝炎(NASH).本发明提供诱导自体吞噬来清除降解的细胞质蛋白的抑制剂，并且NASH疾病表征为肝脏中脂质沉积物、发炎和纤维化。mTORC1路径的抑制诱导自体吞噬并且下调SREBP-1以减少脂质生物合成，从而减少脂质储存。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)(参见普里,P.(Puri,P.)和钱德拉,A.(Chandra,A.),临床与实验肝病杂志(J Clin ExpHepatol),4(1):51-9(2014))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
结节性硬化症(TSC)和肺淋巴管平滑肌增生症(LAM).mTOR调节失败对于遗传性病症结节性硬化症复合体(TSC)和相关肺病、肺淋巴管平滑肌增生症(LAM)的发病机理是致命的。两种疾病都由TSC1或TSC2的突变引起，引起mTORC1下游的信号传导的不当活性。TSC患者在许多器官(包括脑部)中患上非恶性肿瘤，而LAM患者(大多女性)在某些器官或组织(尤其肺、淋巴结和肾脏)中累积有异常肌样细胞。雷帕霉素类似物、依维莫司和西罗莫司目前分别由美国FDA批准用于治疗TSC和LAM。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗结节性硬化症和肺淋巴管平滑肌增生症(参见万德,S.A.(Wander,S.A.)等人,临床研究杂志(J.Clin.Invest.),121(4):1231-41(2011)；塔韦拉-达席尔瓦,A.M.(Taveira-DaSilva,A.M.)和莫斯,J.,J.(Moss,J.,J.)临床流行病学(Clin Epidemiol.),7:249-57(2015))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的结节性硬化症和肺淋巴管平滑肌增生症的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
老化和衰老疾病.雷帕霉素遏制哺乳动物TORC1复合体，其调节翻译并且延长不同物种(包括小鼠)寿命。展示雷帕霉素抑制老化细胞的促炎性表型。随着年龄的推移，老化细胞累积，老化相关分泌表型(SASP)会破坏组织且促成与年龄相关的病变，包括癌症。mTOR的抑制通过老化细胞遏制炎性细胞因子的分泌。雷帕霉素降低包括IL6的细胞因子含量并且遏制膜结合的细胞因子IL1A的翻译。减少的IL1A减轻控制SASP的NF-κB转录活性。因此，mTORC1抑制剂可能通过抑制与老化相关的发炎来缓解与年龄相关的病变，包括晚期癌症。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来用于治疗老化和衰老疾病(参见拉伯格,R.M.(Laberge,R.M.)等人,自然-细胞生物学(Nature Cell Biology),17(8):1049-61(2015)；纳卡雷利,T.(Nacarelli,T.)等人,自由基生物学与医学(Free RadicBiol Med.),95:133-54(2016))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的老化和衰老疾病的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
糖尿病性肾病和1型糖尿病和2型糖尿病肾相关并发症.糖尿病性肾病是1型和2型糖尿病的肾并发症，其影响至多几乎40％的患有糖尿病的人。葡萄糖高含量迫使肾脏超负荷工作以过滤血液，导致肾脏损伤。研究表明，mTOR路径在患有糖尿病性神经病变的患者中被高度激活，且可能由于慢性高浓度葡萄糖而在病理性变化和肾功能中发挥作用。此外，mTOR抑制可减弱高胰岛素血症。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗糖尿病性肾病或1型糖尿病和2型糖尿病肾相关并发症(参见莫里,H.(Mori,H.)等人,生物化学与生物物理研究通讯(Biochem.Res.Commun.)384(4):471-5(2009))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的糖尿病性肾病或1型糖尿病和2型糖尿病肾相关并发症的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
多囊肾病.多囊肾病(PKD)表征为最终导致肾衰竭的破坏性肾囊肿的出现和累积。PKD可为常染色体显性(ADPKD)或隐性(ARPKD)。已在ADPKD和ARPKD中观察到功能失调性mTOR信号传导路径。因此，mTORC1路径的正常化可以缓解囊肿的发展和疾病的进展。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗PKD(参见托雷斯,V.E.(Torres,V.E.)等人,美国肾脏病学会临床杂志(Clin.J.Am.Soc.Nephrol.)5(7):1312-29(2010))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的PKD的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。在一些实施例中，PKD为常染色体显性的。在一些实施例中，PKD为常染色体隐性的。
局灶节段性肾小球硬化(FSGS)和与肾硬化相关的其它疾病.在美国，FSGS是引起终末期肾病(ESRD)的最常见原发性肾小球病症。随着疾病进展，在鲍曼氏囊(Bowman'scapsule)和足状突细胞覆盖的肾小球基底膜表面区域中足状突细胞不匹配。研究已展示，足状突细胞大小控制由mTOR调节并且mTOR激活有助于疾病进展。此外，已展示组成性mTORC1激活在小鼠基因敲减实验中引起FSGS样病变。因此，mTORC1抑制可能通过正常化或增加自体吞噬活性来缓解(FSGS)或与肾硬化相关的其它疾病。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗FSGS或与肾硬化相关的其它疾病(参见Zschiedrich,S.等人,美国肾脏病学会临床杂志28(7):2144-57(2017))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的FSGS或与肾硬化相关的其它疾病的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
年龄相关性黄斑变性.年龄相关性黄斑变性(AMD)是由黄斑中光感受器死亡表征的失明的主要病因。AMD进展的可能机制包括氧化应激，产生蛋白质和功能失调性细胞器的沉积物，引起视网膜色素上皮肥大、去分化和最终萎缩。mTOR涉及视网膜色素上皮的去分化。因此，mTORC1抑制可以通过阻断肥大和去分化来缓解AMD。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗年龄相关性黄斑变性(参见科洛索娃,N.G.(Kolosova,N.G.)等人,美国病理学杂志(Am.J.Path.)181(2):472-7(2012)，以及Zhen,C.和Vollrath,D.,Aging 3(4):346-47(2011))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的年龄相关性黄斑变性的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
糖尿病性黄斑水肿.糖尿病性黄斑水肿(DME)是患有糖尿病的人失明的主要病因，影响大致35％的患有糖尿病的人。研究表明，DME的发病机理是涉及各种细胞因子和趋化因子的炎性疾病。慢性发炎和氧化应激可促成DME进展。因此，mTORC1的抑制可以通过减小炎性反应来缓解DME症状和进展。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗DME(参见冈本,T.(Okamoto,T.)等人,公共科学图书馆·综合,(11)(1):e0146517,https://doi.org/10.1371/ journal.pone.0146517(2016))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的DME的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
糖尿病性视网膜病变.糖尿病性视网膜病变(DR)是在成人中占约5％失明的常见眼病，且与慢性高血糖和胰岛素信号传导路径缺陷相关。DR患者遭受由慢性高血糖引起的发炎、反应性氧物质和内质网应激对视网膜血管和神经元的持续损伤。显著地，雷帕霉素已展示阻断胰岛素诱导的缺氧诱导因子-1(HIF-1)和视网膜细胞老化的作用，并且诱导自体吞噬，并且可有益于促进新生血管的细胞凋亡和阻止血管生成。因此，mTORC1的抑制可以通过减少发炎和抑制病原性信号传导路径来缓解DR症状和进展。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗DR(参见迪罗莎,M.(DiRosa,M.)等人,当代神经药理学(Curr.Neuropharmacol.)14(8):810-25(2016))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的DR的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
青光眼.青光眼是与衰老和眼内压升高相关的常见视神经病变，且为不可逆失明的主要病因。研究表明，自体吞噬作用的mTOR依赖性失调可以是所述疾病进展的一个因素。因此，mTORC1的抑制可以通过正常化或增加自体吞噬来减缓进程或缓解青光眼。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗青光眼(参见波特,K.(Porter,K.)等人,生物化学与生物物理学报(Biochim.Biophys.Acta.)1852(3):379-85(2014))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的青光眼的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
恢复免疫功能.已展示mTORC1抑制降低程序性死亡-1(PD-1)受体在CD4+和CD8+T淋巴细胞中的表达，促进T细胞信号传导。因此，mTORC1抑制可以通过改善适应性免疫反应来恢复免疫功能。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来恢复免疫功能(参见曼尼克,J.B.(Mannick,J.B.)等人,科学转化医学杂志(Sci.Trans.Med.)6(268):ppra179(2014))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种恢复有需要的患者的免疫功能的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
治疗呼吸道和/或尿道感染.mTORC1抑制可以通过上调抗病毒基因表达和反应来减少感染。因此，mTORC1抑制可增强患者免疫系统防御呼吸道和/或尿道感染的能力。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗呼吸道和/或尿道感染。(参见曼尼克,J.B.等人,科学转化医学杂志10(449):eaaq1564(2018))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种恢复有需要的患者的免疫功能的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
心脏衰竭.mTORC1活性对于响应于应激的心脏肥大是必不可少的，但会由于梗塞后的心脏重塑而引起心脏紊乱。mTORC1的抑制减少响应于压力过载的心脏重塑和心脏衰竭。因此，mTORC1的抑制可减少罹患心肌受到损害的患者的心脏衰竭。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗心脏衰竭(参见夏雷塔,S.(Sciarretta,S.)等人,循环研究(Circ.Res.)122(3):489-505(2018))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的心脏衰竭的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
骨关节炎.骨关节炎(OA)是引起软骨丧失和关节发炎的慢性退化性疾病。mTOR可在胶原蛋白稳态和软骨重塑中发挥显著作用。因此，mTORC1的抑制可以通过使软骨转化正常化来减缓进展或缓解骨关节炎症状。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗骨关节炎(参见帕尔,B.(Pal,B.)等人,药物研发(Drugs R&D),15(1):27-36(2017))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者中的骨关节炎的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
肺动脉高血压.肺动脉高血压(PAH)是与增加肺血管阻力相关的进行性致命疾病。肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移涉及动脉壁增厚进展，加剧血管收缩。因此，mTORC1的抑制可以通过减少血管重塑来缓解PAH。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗PAH(参见马,X.(Ma,X.)等人,交互式心胸外科(Interact.Cardiovasc.Thorac.Surg.)25(2):206-11(2017))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的PAH的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
慢性阻塞性肺病.减少的自体吞噬使得蛋白质和其它细胞物质的累积，所述蛋白质和其它细胞物质加快患有慢性阻塞性肺病(COPD)的患者的细胞老化。因此，mTORC1的抑制可以通过正常化或增加自体吞噬来减缓进程或缓解COPD症状。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗COPD(参见藤井,S.(Fujii,S.)等人,肿瘤免疫学(Oncoimmunology)1(5):630-41(2012))。因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗有需要的患者的COPD的方法，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在mTORC抑制可为有益的情况下的额外治疗适应症是：心血管疾病(急性冠状动脉综合症)、用到洗脱支架的冠状动脉闭塞、多囊肾病和与囊肿形成或囊肿生成相关的肾病)、神经纤维瘤、与TSC1和/或TSC2突变相关的癫痫、多囊肝、先天性厚甲症、脆性X综合征、家族性遗传性共济失调(Friedrich ataxia)、普-杰二氏综合症(Peutz-Jeghers syndrome)、眼睛疾病(包括新血管年龄相关性黄斑变性)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿、包括肺纤维化的成纤维细胞生长、肾功能不全/纤维化、代谢综合症、免疫系统疾病(包括免疫老化)、狼疮肾炎、慢性免疫血小板减少症、多发性硬化症、包括淋巴瘤的癌症、与TSC1/2突变相关的肿瘤、与TSC1/2突变相关的血管肌脂瘤、乳腺癌、肝细胞癌、白血病、神经胶质瘤、腺样囊性癌症、老化、自闭症和血管类风湿性关节炎。
在一些实施例中，使用抑制mTORC1活性的方法来治疗心血管疾病(急性冠状动脉综合症)、用到洗脱支架的冠状动脉闭塞、多囊肾病、神经纤维瘤、与TSC1和/或TSC2突变相关的癫痫、多囊肝、先天性厚甲症、脆性X综合征、家族性遗传性共济失调、普-杰二氏综合症、眼睛疾病(包括新血管年龄相关性黄斑变性)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿、包括肺纤维化的成纤维细胞生长、肾功能不全/纤维化、代谢综合症、免疫系统疾病(包括免疫老化)、狼疮肾炎、慢性免疫血小板减少症、多发性硬化症、包括淋巴瘤的癌症、与TSC1/2突变相关肿瘤、与TSC1/2突变相关的血管肌脂瘤、乳腺癌、肝细胞癌、白血病、神经胶质瘤、腺样囊性癌症、老化、自闭症和血管类风湿性关节炎。
因此，在一些实施例中，本发明提供一种治疗以下疾病的方法：心血管疾病(急性冠状动脉综合症)、用到洗脱支架的冠状动脉闭塞、多囊肾病、神经纤维瘤、与TSC1和/或TSC2突变相关的癫痫、多囊肝、先天性厚甲症、脆性X综合征、家族性遗传性共济失调、普-杰二氏综合症、眼睛疾病(包括新血管年龄相关性黄斑变性)、葡萄膜炎、糖尿病性黄斑水肿、包括肺纤维化的成纤维细胞生长、肾功能不全/纤维化、代谢综合症、免疫系统疾病(包括免疫老化)、狼疮肾炎、慢性免疫血小板减少症、多发性硬化症、包括淋巴瘤的癌症、与TSC1/2突变相关的肿瘤、与TSC1/2突变相关的血管肌脂瘤、乳腺癌、肝细胞癌、白血病、神经胶质瘤、腺样囊性癌症、老化、自闭症和血管类风湿性关节炎，在有需要的患者中，其包含向所述患者施用所提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
本发明的药学上可接受的组合物可以经口、经直肠、非经肠、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏或滴剂)、经颊、作为经口或鼻喷雾等向人类和其它动物施用，取决于所治疗感染的严重程度。在某些实施例中，本发明化合物可经口或非经肠以每天约0.01mg/kg到约50mg/kg并且优选约1mg/kg到约25mg/kg受试者体重的剂量水平一天一或多次施用，以获得所需治疗效果。
用于经口投药的液体剂型包含但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物外，液体剂型还可以含有所属领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯和其混合物。除惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂，如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可根据已知技术使用适合分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以为无毒非经肠可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈在1,3-丁二醇中的溶液形式。可以采用的可接受媒剂和溶剂中有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，常规地采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于此目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包含合成单甘油酯或二甘油酯。此外，在可注射剂制备中使用脂肪酸，例如油酸。
可注射配制物可以例如通过经由细菌截留过滤器过滤或通过并入灭菌剂来灭菌，呈可以在使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式。
为了延长本发明化合物的作用，通常需要皮下或肌肉内注射的化合物缓慢吸收。这可以通过使用具有较差水溶解度的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，溶解速率又可以取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒剂中来实现非经肠施用的化合物形式的延迟吸收。通过形成化合物在生物可降解聚合物(如聚丙交酯-聚乙交酯)中的微胶囊基质来制备可注射积存形式。取决于化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物的释放速率。其它可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将化合物截留于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备积存可注射配制物。
用于经直肠或经阴道施用的组合物优选是可以通过将本发明化合物与适合的无刺激性赋形剂或载剂(如可可脂、聚乙二醇，或在环境温度下是固体但在体温下是液体并且因此在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物的栓剂蜡)混合而制备的栓剂。
用于经口投药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒。在此类固体剂型中，活性化合物与以下各者混合：至少一种惰性药学上可接受的赋形剂或载剂，如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂，如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液迟延剂，如石蜡；f)吸收促进剂，如季铵化合物；g)湿润剂，如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。
还可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。固体剂型片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及颗粒剂可以用包衣和外壳(例如肠溶包衣和药物配制领域中众所周知的其它包衣)来制备。其可以任选地含有乳浊剂，并且还可以具有使其任选在肠道某一部分中以延迟方式仅释放或优先释放活性成分的组成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。还可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
活性化合物还可呈与如上文所提及的一种或多种赋形剂的微胶囊化形式。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂以及颗粒的固体剂型可以用包衣和外壳(如肠溶衣、释放控制包衣以及药物配制技术中众所周知的其他包衣)来制备。在这些固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂(如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。正常实践时，这些剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的附加物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包括缓冲剂。其可以任选地含有乳浊剂，并且还可以具有使其任选在肠道某一部分中以延迟方式仅释放或优先释放活性成分的组成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部或经皮施用本发明化合物的剂型包含软膏、糊剂、乳膏、乳剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载剂和任何所需的防腐剂或缓冲剂按要求混合。眼科配制物、滴耳剂和滴眼剂也涵盖在本发明范围内。另外，本发明涵盖了使用经皮贴片，其具有提供化合物向身体的控制传递的额外优点。所述剂型可以通过将化合物溶解或分配于适当介质中制得。还可以使用吸收增强剂来增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制速率。
如本文中所用，术语“生物样品”包括但不限于细胞培养物或其提取物；由哺乳动物获得的活组织检查物质或其提取物；和血液、唾液、尿液、粪便、精液、眼泪或其它体液或其提取物。
在其它实施例中，本发明提供一种用于治疗有需要的患者的由mTORC1介导的病症的方法，所述方法包含向所述患者施用根据本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。此类病症详细描述于本文中。
取决于待治疗的特定病状或疾病，通常施用以治疗所述病状的其它治疗剂也可以存在于本发明组合物中。如本文所用，通常施用以治疗特定疾病或病状的其它治疗剂被称为“适于所治疗的疾病或病状”。
本发明的化合物也可以有利地与其它抗增生性化合物组合使用。所述抗增生性化合物包括但不限于芳香酶抑制剂；抗雌激素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性化合物；烷化化合物；组蛋白脱乙酰基酶抑制剂；诱发细胞分化过程的化合物；环加氧酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗赘生性抗代谢物；铂化合物；靶向/减小蛋白质或脂质激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合物；靶向、减小或抑制蛋白质或脂质磷酸酶的活性的化合物；高那瑞林(gonadorelin)促效剂；抗雄激素；甲硫胺酸胺基肽酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；双膦酸盐；生物反应调节剂；抗增生性抗体；肝素酶抑制剂；Ras致癌同功异型物的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液科恶性疾病的化合物；靶向、减小或抑制Flt-3的活性的化合物；Hsp90抑制剂，如来自Conforma Therapeutics的17-AAG(17-烯丙基胺基格尔德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基胺基乙基胺基-17-去甲氧基-格尔德霉素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、CNF1010；替莫唑胺纺锤体驱动蛋白抑制剂，如来自葛兰素史克(GlaxoSmithKline)的SB715992或SB743921，或来自CombinatoRx的潘他米丁(pentamidine)/氯丙嗪；MEK抑制剂，如来自阿莱生物制药公司(Array BioPharma)的ARRY142886、来自阿斯特拉捷利康公司(AstraZeneca)的AZD6244、来自辉瑞(Pfizer)的PD181461和甲酰四氢叶酸。如本文所用，术语“芳香酶抑制剂”涉及一种抑制雌激素产生，例如底物雄烯二酮和睾酮分别转化为雌酮和雌二醇的化合物。所述术语包含但不限于类固醇，尤其阿他美坦(atamestane)、依西美坦(exemestane)和福美司坦(formestane)；和尤其非类固醇，尤其胺鲁米特(aminoglutethimide)、罗谷亚胺(roglethimide)、吡鲁米特(pyridoglutethimide)、曲洛司坦(trilostane)、睾内酯(testolactone)、酮康唑(ketokonazole)、伏罗唑(vorozole)、法屈唑(fadrozole)、阿那曲唑(anastrozole)和来曲唑(letrozole)。依西美坦以商品名AromasinTM出售。福美司坦以商品名LentaronTM出售。法屈唑以商品名AfemaTM出售。阿那曲唑以商品名ArimidexTM出售。来曲唑以商品名FemaraTM或FemarTM出售。胺鲁米特以商品名OrimetenTM出售。包括为芳香酶抑制剂的化学治疗剂的本发明的组合尤其适用于治疗激素受体阳性肿瘤，如乳房肿瘤。
如本文中所用，术语“抗雌激素”涉及一种在雌激素受体水平上拮抗雌激素效应的化合物。所述术语包括但不限于他莫昔芬(tamoxifen)、氟维司群(fulvestrant)、雷诺昔酚(raloxifene)和雷诺昔酚盐酸盐。他莫昔芬以商品名NolvadexTM出售。雷诺昔酚盐酸盐以商品名EvistaTM出售。氟维司群可以商品名FaslodexTM施用。包括为抗雌激素的化学治疗剂的本发明的组合尤其适用于治疗雌激素受体阳性肿瘤，如乳房肿瘤。
如本文所用的术语“抗雄激素”涉及任何能够抑制雄激素的生物效应的物质且包括但不限于比卡鲁胺(bicalutamide)(CasodexTM)。如本文中所用，术语“性腺释素激动剂”包括但不限于阿巴瑞克(abarelix)、戈舍瑞林(goserelin)和乙酸戈舍瑞林。戈舍瑞林可以商品名ZoladexTM施用。
如本文中所用，术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于拓扑替康(topotecan)、吉马替康(gimatecan)、伊立替康(irinotecan)、喜树碱(camptothecian)和其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱结合物PNU-166148。伊立替康可以例如以其出售形式，例如以商品名CamptosarTM施用。拓扑替康以商品名HycamptinTM出售。
如本文所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环霉素，如小红莓(doxorubicin)(包括脂质调配物，如CaelyxTM)、道诺霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、艾达霉素(idarubicin)和奈莫柔比星(nemorubicin)，蒽醌米托蒽醌(mitoxantrone)和洛索蒽醌(losoxantrone)，及鬼臼毒素依托泊苷(etoposide)和替尼泊甙(teniposide)。依托泊苷以商品名EtopophosTM出售。替尼泊甙以商品名VM 26-Bristol出售。小红莓以商品名AcriblastinTM或AdriamycinTM出售。表柔比星以商品名FarmorubicinTM出售。艾达霉素以商品名ZavedosTM出售。米托蒽醌以商品名Novantron出售。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定化、微管去稳定化化合物和微管蛋白(microtublin)聚合抑制剂，其包含但不限于紫杉烷，如太平洋紫杉醇和多烯紫杉醇；长春花生物碱，如长春碱或硫酸长春碱、长春新碱或硫酸长春新碱和长春瑞宾(vinorelbine)；迪斯德莫来(discodermolide)；秋水仙碱(cochicine)和埃博霉素(epothilone)和其衍生物。太平洋紫杉醇以商品名TaxolTM出售。多烯紫杉醇以商品名TaxotereTM出售。硫酸长春碱以商品名Vinblastin R.PTM出售。硫酸长春新碱以商品名FarmistinTM出售。
如本文所用，术语“烷基化剂”包含但不限于环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑(melphalan)或亚硝基脲(BCNU或格立得(Gliadel))。环磷酰胺以商品名CyclostinTM出售。异环磷酰胺以商品名HoloxanTM出售。
术语“组蛋白脱乙酰基酶抑制剂”或“HDAC抑制剂”涉及抑制组蛋白脱乙酰基酶并且具有抗增生活性的化合物。此包括但不限于辛二酰苯胺氧肟酸(SAHA)。
术语“抗赘生性抗代谢物”包括但不限于5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他滨(capecitabine)、吉西他滨(gemcitabine)、DNA去甲基化合物(诸如5-氮杂胞苷(5-azacytidine)和地西他滨(decitabine))、甲胺喋呤(methotrexate)和依达曲沙(edatrexate)以及叶酸拮抗剂(如培美曲唑(pemetrexed))。卡培他滨以商品名XelodaTM出售。吉西他滨以商品名GemzarTM出售。
如本文中所用，术语“铂化合物”包括但不限于卡铂(carboplatin)、顺铂(cis-platin)、顺铂(cisplatinum)和奥沙利铂(oxaliplatin)。卡铂可以例如以其出售形式，例如以商品名CarboplatTM施用。奥沙利铂可以例如以其出售形式，例如以商品名EloxatinTM施用。
如本文所用，术语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性；或蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；或其它抗血管生成化合物”包括但不限于蛋白质酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，如a)靶向、降低或抑制血小板衍生生长因子受体(PDGFR)的活性的化合物，如靶向、降低或抑制PDGFR的活性的化合物，尤其抑制PDGF受体的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼(imatinib)、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向、减小或抑制成纤维细胞生长因子受体(FGFR)的活性的化合物；c)靶向、减小或抑制胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)的活性的化合物，如靶向、减小或抑制IGF-IR的活性的化合物，尤其抑制IGF-I受体的激酶活性的化合物，或靶向IGF-I受体或其生长因子的细胞外域的抗体；d)靶向、减小或抑制Trk受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物，或ephrin B4抑制剂；e)靶向、减小或抑制AxI受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物；f)靶向、减小或抑制Ret受体酪氨酸激酶的活性的化合物；g)靶向、减小或抑制Kit/SCFR受体酪氨酸激酶的活性的化合物，如伊马替尼；h)靶向、减小或抑制C-kit受体酪氨酸激酶(其是PDGFR家族的一部分)的活性的化合物，如靶向、减小或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶家族的活性的化合物，尤其抑制c-Kit受体的化合物，如伊马替尼；i)靶向、减小或抑制c-Abl家族的成员、其基因融合产物(例如BCR-Abl激酶)和突变体的活性的化合物，如靶向、减小或抑制c-Abl家族成员和其基因融合产物的活性的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼或尼罗替尼(nilotinib)(AMN107)；PD180970；AG957；NSC 680410；PD173955，来自帕克戴维(ParkeDavis)；或达沙替尼(dasatinib)(BMS-354825)；j)靶向、减小或抑制丝氨酸/苏氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)和Raf家族的成员、MEK、SRC、JAK/pan-JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt、Ras/MAPK、PI3K、SYK、TYK2、BTK和TEC家族的成员、和/或周期素依赖性激酶家族(CDK)的成员的活性的化合物，包括星形孢菌素衍生物，如米哚妥林(midostaurin)；其它化合物的实例包括UCN-01、沙芬戈(safingol)、BAY 43-9006、苔藓虫素(Bryostatin)1、哌立福新(Perifosine)；伊莫福新(llmofosine)；RO 318220和RO 320432；GO 6976；lsis 3521；LY333531/LY379196；异喹啉(isochinoline)化合物；FTIs；PD184352或QAN697(P13K抑制剂)或AT7519(CDK抑制剂)；k)靶向、减小或抑制蛋白质酪氨酸激酶抑制剂的活性的化合物，如靶向、减小或抑制蛋白质酪氨酸激酶抑制剂(包括甲磺酸伊马替尼(GleevecTM)或tyrphostin)的活性的化合物，如Tyrphostin A23/RG-50810；AG 99；Tyrphostin AG 213；Tyrphostin AG 1748；Tyrphostin AG 490；Tyrphostin B44；Tyrphostin B44(+)对映异构体；Tyrphostin AG 555；AG 494；Tyrphostin AG 556、AG957和adaphostin(4-{[(2,5-二羟苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410，adaphostin)；l)靶向、减小或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(EGFR1、ErbB2、ErbB3、ErbB4，呈均聚或杂二聚体形式)和其突变体的活性的化合物，如靶向、减小或抑制表皮生长因子受体家族的活性的化合物，尤其是抑制EGF受体酪氨酸激酶家族的成员，如EGF受体、ErbB2、ErbB3和ErbB4，或与EGF或EGF相关配体结合的化合物、蛋白质或抗体、CP 358774、ZD 1839、ZM 105180；曲妥珠单抗(trastuzumab)(HerceptinTM)、西妥昔单抗(cetuximab)(ErbituxTM)、易瑞沙(Iressa)、特罗凯(Tarceva)、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3，以及7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向、减小或抑制c-Met受体的活性的化合物，如靶向、减小或抑制c-Met的活性的化合物，尤其是抑制c-Met受体的激酶活性的化合物，或靶向c-Met的胞外结构域或与HGF结合的抗体；n)靶向、减小或抑制一个或多个JAK家族成员(JAK1/JAK2/JAK3/TYK2和/或泛JAK)的激酶活性的化合物，包括但不限于PRT-062070、SB-1578、巴瑞替尼(baricitinib)、帕瑞替尼(pacritinib)、莫罗替尼(momelotinib)、VX-509、AZD-1480、TG-101348、托法替尼(tofacitinib)和鲁索利替尼(ruxolitinib)；o)靶向、减小或抑制PI3激酶(PI3K)的激酶活性的化合物，包括但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕昔布(buparlisib)、皮特里昔布(pictrelisib)、PF-4691502、BYL-719、达妥昔布(dactolisib)、XL-147、XL-765和艾德昔布(idelalisib)；以及q)靶向、减小或抑制刺猬蛋白(Hh)的信号传导效应或平滑受体(SMO)途径的化合物，包括但不限于环巴胺、维莫德吉(vismodegib)、伊曲康唑(itraconazole)、伊莫德吉(erismodegib)和IPI-926(萨瑞德吉(saridegib))。
如本文所用、术语“PI3K抑制剂”包含但不限于具有针对磷脂酰肌醇-3-激酶家族中的一种或多种酶的抑制活性的化合物、包含但不限于PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3K-C2α、PI3K-C2β、PI3K-C2γ、Vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101和p87。适用于本发明的PI3K抑制剂的实例包含但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕昔布、皮克特昔布、PF-4691502、BYL-719、达妥昔布、XL-147、XL-765和艾德昔布。
如本文中所用的术语“Bcl-2抑制剂”包括但不限于对B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)具有抑制活性的化合物，包括但不限于ABT-199、ABT-731、ABT-737、阿朴棉子酚(apogossypol)、艾森塔(Ascenta)的泛Bcl-2抑制剂、姜黄素(和其类似物)、双重Bcl-2/Bcl-xL抑制剂(无限制药公司(Infinity Pharmaceuticals)/诺华制药公司(NovartisPharmaceuticals))、根纳三思(Genasense)(G3139)、HA14-1(和其类似物；参见WO 2008/118802)、那维克拉(navitoclax)(和其类似物，参见美国专利第7,390,799号)、NH-1(沈阳药科大学(Shenayng Pharmaceutical University))、奥巴克拉(obatoclax)(和其类似物，参见WO 2004/106328)、S-001(誉衡药业(Gloria Pharmaceuticals))、TW系列化合物(密歇根大学(Univ.of Michigan))以及维奈妥拉(venetoclax)。在一些实施例中，Bcl-2抑制剂是小分子治疗剂。在一些实施例中，Bcl-2抑制剂是肽模拟物。
如本文所用，术语“BTK抑制剂”包含但不限于具有针对布鲁顿氏酪氨酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase，BTK)的抑制活性的化合物，包含但不限于AVL-292和依鲁替尼。
如本文所用，术语“SYK抑制剂”包含但不限于具有针对脾酪氨酸激酶(SYK)的抑制活性的化合物，包含但不限于PRT-062070、R-343、R-333、伊赛利尔(Excellair)、PRT-062607和福他替尼(fostamatinib)。
BTK抑制化合物和可通过所述化合物与本发明化合物的组合治疗的病状的其它实例可以见于WO 2008/039218和WO 2011/090760中，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。
SYK抑制化合物和可通过此类化合物与本发明化合物组合治疗的病状的其它实例可以见于WO 2003/063794、WO 2005/007623和WO 2006/078846中，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。
PI3K抑制化合物和可通过此类化合物与本发明化合物的组合治疗的病状的其它实例可以见于WO 2004/019973、WO 2004/089925、WO 2007/016176、美国专利第8,138,347号、WO 2002/088112、WO 2007/084786、WO 2007/129161、WO 2006/122806、WO 2005/113554和WO 2007/044729，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。
JAK抑制化合物和可通过此类化合物与本发明化合物组合治疗的病状的其它实例可以见于WO 2009/114512、WO 2008/109943、WO 2007/053452、WO 2000/142246和WO 2007/070514中，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文中。
其它抗血管生成化合物包括具有例如与蛋白质或脂质激酶抑制无关的另一针对其活性的机制的化合物，例如沙利度胺(ThalomidTM)和TNP-470。
适用于与本发明化合物组合使用的蛋白酶体抑制剂的实例包括但不限于硼替佐米、戒酒硫(disulfiram)、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)、盐孢菌素A、卡非唑米(carfilzomib)、ONX-0912、CEP-18770和MLN9708。
靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物例如为磷酸酶1抑制剂、磷酸酶2A抑制剂或CDC25抑制剂，如冈田井酸(okadaic acid)或其衍生物。
诱发细胞分化过程的化合物包括但不限于视黄酸、α-γ-或δ-生育酚或α-γ-或δ-生育三烯酚。
如本文中所用，术语环加氧酶抑制剂包括但不限于Cox-2抑制剂，5-烷基取代的2-芳氨基苯乙酸和衍生物，如塞内昔布(CelebrexTM)、罗非昔布(rofecoxib)(VioxxTM)、依托昔布(etoricoxib)、伐地考昔(valdecoxib)或5-烷基-2-芳氨基苯乙酸，如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯基乙酸，罗美昔布(lumiracoxib)。
如本文中所用，术语“双膦酸盐”包括但不限于依替膦酸(etridonic acid)、氯膦酸(clodronic acid)、替鲁膦酸(tiludronic acid)、帕米膦酸(pamidronic acid)、阿仑膦酸(alendronic acid)、伊班膦酸(ibandronic acid)、利塞膦酸(risedronic acid)和唑来膦酸(zoledronic acid)。依替膦酸以商品名DidronelTM出售。氯膦酸以商品名BonefosTM出售。替鲁膦酸以商品名SkelidTM出售。帕米膦酸以商品名ArediaTM出售。阿仑膦酸以商品名FosamaxTM出售。伊班膦酸以商品名BondranatTM出售。利塞膦酸以商品名ActonelTM出售。唑来膦酸以商品名ZometaTM出售。术语“mTOR抑制剂”涉及抑制哺乳动物的雷帕霉素(rapamycin)标靶(mTOR)并且具有抗增生活性的化合物，如西罗莫司(sirolimus)依维莫司(everolimus)(CerticanTM)、CCI-779和ABT578。
如本文所用，术语“肝素酶抑制剂”是指靶向、减少或抑制硫酸肝素降解的化合物。所述术语包括但不限于PI-88。如本文中所用，术语“生物反应调节剂”是指淋巴激素或干扰素。
如本文所用的术语“Ras致癌同功异型物(如H-Ras、K-Ras或N-Ras)的抑制剂”是指靶向、减小或抑制Ras的致癌活性的化合物；例如“法呢基转移酶抑制剂”，如L-744832、DK8G557或R115777(ZarnestraTM)。如本文所用，术语“端粒酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物。靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物尤其是抑制端粒酶受体的化合物，如端粒酶素(telomestatin)。
如本文所用的术语“甲硫氨酸氨肽酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物。靶向、降低或抑制甲硫胺酸胺基肽酶活性的化合物包括但不限于苯胍麦(bengamide)或其衍生物。
如本文所用，术语“蛋白酶体抑制剂”是指靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物。靶向、减小或抑制蛋白酶体活性的化合物包括但不限于硼替佐米(VelcadeTM)和MLN341。
如本文中所用的术语“基质金属蛋白酶抑制剂”或(“MMP”抑制剂)包括但不限于胶原蛋白肽模拟和非肽模拟抑制剂、四环素衍生物，例如氧肟酸盐肽模拟抑制剂巴马司他(batimastat)和其具有口服生物利用率的类似物马立马司他(marimastat)(BB-2516)、普啉司他(prinomastat)(AG3340)、美他司他(metastat)(NSC 683551)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B或AAJ996。
如本文中所用，术语“用于治疗血液科恶性疾病的化合物”包括但不限于FMS样酪氨酸激酶抑制剂，其是靶向、减小或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)的活性的化合物；干扰素，1-β-D-阿糖呋喃胞嘧啶(ara-c)和白消安(bisulfan)；和ALK抑制剂，其是靶向、减小或抑制多形性淋巴瘤激酶的化合物。
靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物尤其为抑制Flt-3R受体激酶家族成员的化合物、蛋白或抗体，如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
如本文所用的术语“HSP90抑制剂”包括但不限于靶向、降低或抑制HSP90的固有ATP酶(ATPase)活性的化合物通过泛素蛋白酶体路径降解、靶向、降低或抑制HSP90客户蛋白的化合物。靶向、减小或抑制HSP90的固有ATP酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白质或抗体，如17-烯丙基氨基、17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)(一种格尔德霉素衍生物)；其它格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素(radicicol)；和HDAC抑制剂。
如本文所用的术语“抗增生性抗体”包括但不限于曲妥珠单抗(HerceptinTM)、曲妥珠单抗-DM1、爱必妥(erbitux)、贝伐单抗(bevacizumab)(AvastinTM)、利妥昔单抗(rituximab)PRO64553(抗CD40)以及2C4抗体。抗体意指完整单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2种完整抗体形成的多特异性抗体以及抗体片段，只要其展现所需生物活性。
为治疗急性骨髓性白血病(AML)，本发明的化合物可以与标准白血病疗法组合，尤其与用于治疗AML的疗法组合使用。特定来说，本发明的化合物可以与例如法呢基转移酶抑制剂和/或其它适用于治疗AML的药物，如道诺霉素、阿霉素(Adriamycin)、Ara-C、VP-16、替尼泊甙、米托蒽醌、艾达霉素、卡铂(Carboplatinum)和PKC412组合施用。
其它抗白血病化合物包括例如Ara-C，一种嘧啶类似物，它是脱氧胞苷的2'-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。也包含次黄嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)和磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)的嘌呤类似物。靶向、减小或抑制如丁酸钠和辛二酰苯胺氧肟酸(SAHA)的组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂的活性的化合物抑制被称为组蛋白脱乙酰基酶的酶的活性。具体的HDAC抑制剂包括MS275、SAHA、FK228(以前的FR901228)、曲古抑菌素A(Trichostatin A)和美国专利第6,552,065号中所公开的化合物，包括但不限于N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，和N-羟基-3-[4-[(2-羟乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，尤其乳酸盐。如本文所用的生长抑素(somatostatin)受体拮抗剂是指靶向、处理或抑制生长抑素受体的化合物，如奥曲肽(octreotide)和SOM230。肿瘤细胞破坏方法是指如电离辐射的方法。上下文中提及的术语“电离辐射”意指以电磁射线(如X射线和γ射线)或粒子(如α和β粒子)形式进行的电离辐射。电离辐射提供于(但不限于)放射疗法中，且在本领域中已知(参见黑尔曼(Hellman),肿瘤学原理与实践中放射疗法原理，癌症(Principles of Radiation Therapy,Cancer,in Principles andPractice of Oncology),德维塔(Devita)等人编,第4版,第1卷,第248-275页(1993))。
也包含EDG结合剂和核糖核苷酸还原酶抑制剂。如本文所用，术语“EDG结合剂”是指一类调节淋巴细胞再循环的免疫抑制剂，如FTY720。术语“核糖核苷酸还原酶抑制剂”是指嘧啶或嘌呤核苷类似物，其包含但不限于氟达拉滨和/或胞嘧啶阿糖胞苷(ara-C)、6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨(cladribine)、6-巯基嘌呤(尤其针对ALL与ara-C组合)和/或喷司他丁(pentostatin)。核糖核苷酸还原酶抑制剂尤其是羟基脲或2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物。
还尤其包括VEGF的那些化合物、蛋白质或单克隆抗体，如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪丁二酸盐；AngiostatinTM；EndostatinTM；邻氨基苯甲酸酰胺；ZD4190；ZD6474；SU5416；SU6668；贝伐单抗；或抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体，如rhuMAb和RHUFab，VEGF适体，如玛曲供(Macugon)；FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgGI抗体、安吉酶(Angiozyme)(RPI 4610)和贝伐单抗(AvastinTM)。
如本文所用，光动力疗法是指使用某些称作光敏化合物的化学品治疗或预防癌症的疗法。光动力疗法的实例包括用例如VisudyneTM和卟吩姆钠(porfimer sodium)的化合物治疗。
如本文所用，血管生成抑制性类固醇是指阻断或抑制血管生成的化合物，如阿奈可他(anecortave)、曲安西龙(triamcinolone)、氢化可的松、11-α-表氢化皮质醇(11-α-epihydrocortisol)、脱氧皮醇(cortexolone)、17α-羟基孕酮(17α-hydroxyprogesterone)、皮质酮(corticosterone)、去氧皮质酮、睾酮、雌酮和地塞米松。
含有皮质类固醇的植入物是指如氟新龙(fluocinolone)和地塞米松的化合物。
其它化学治疗化合物包括但不限于植物碱、激素化合物和拮抗剂；生物反应调节剂，优选为淋巴因子或干扰素；反义寡聚核苷酸或寡聚核苷酸衍生物；shRNA或siRNA；或混杂化合物或具有其它或未知作用机制的化合物。
以代码号、通用或商标名鉴别的活性化合物的结构可以从标准概要《摩克索引(The Merck Index)》的现行版本或从数据库，例如专利国际(Patents International)(例如IMS世界公开(IMS World Publications))获得。
本发明化合物还可以与已知治疗方法(例如施用激素或辐射)组合使用。在某些实施例中，提供的化合物用作放射增敏剂，尤其用于治疗对于放射疗法展现不良敏感性的肿瘤。
本发明化合物可以单独或与一种或多种其它治疗化合物组合施用，可能的组合疗法采用固定组合形式或交错或彼此独立地提供本发明化合物和一种或多种其它治疗化合物的施用，或组合施用固定组合和一种或多种其它治疗化合物。可以此外或另外施用本发明化合物，尤其与化学疗法、放射疗法、免疫疗法、光电疗法、手术干预或这些的组合组合以用于肿瘤疗法。如上文所描述，正如其它治疗策略的情形下的辅助疗法，长期疗法也是同样可能的。其他可能治疗为在肿瘤消退后维持患者的状况的疗法或甚至化学预防疗法(例如，对处于风险中的患者)。
那些额外的药剂可以与含有本发明化合物的组合物分开施用，作为多次给药方案的一部分。或者，那些药剂可以是单一剂型的一部分，在单一组合物中与本发明化合物一起混合。如果作为多次给药方案的一部分施用，那么两种活性剂可以同时、依次或彼此间隔一定时间段(通常彼此间隔在五小时以内)提供。
如本文所用，术语“组合(combination)”、“组合(combined)”以及相关术语是指同时或依次施用根据本发明的治疗剂。举例来说，本发明化合物可以与另一治疗剂以分开的单位剂型同时或依序或一起以单一单位剂型形式施用。因此，本发明提供一种包含本发明化合物、其它治疗剂和药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂的单一单位剂型。
本发明化合物和可以与载剂物质组合产生单一剂型的其它治疗剂(在包含如上所述的其它治疗剂的那些组合物中)的量将取决于所治疗的宿主和特定投药模式而变化。优选地，应配制本发明组合物以使得可以施用剂量介于0.01-100毫克/千克体重/天之间的本发明化合物。
在包含额外治疗剂的那些组合物中，所述额外治疗剂和本发明化合物可以协同地起作用。因此，此类组合物中额外治疗剂的量将低于仅使用那种治疗剂的单一疗法中所需的量。在所述组合物中，可以施用剂量介于0.01-1,000微克/千克体重/天之间的额外治疗剂。
存在于本发明组合物中的额外治疗剂的量将不大于通常将以包括所述治疗剂作为唯一活性剂的组合物形式施用的量。优选地，本发明所揭示的组合物中额外治疗剂的量将在通常存在于包含那种药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中的量的约50％到100％范围内。
在一些实施例中，与本发明化合物组合施用的额外治疗剂为另一mTOR抑制剂。在一些实施例中，额外mTOR抑制剂通过结合mTOR的催化活性位点抑制mTOR。此类额外mTOR抑制剂的实例包括：达妥昔布，8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氢-咪唑[4,5-c]喹啉-2-酮(WO 2006/122806)；vistusertib(AZD2014；WO2009/153597)；AZD8055(WO 2009/153597；XL388(美国专利申请公开案2010/0305093)；萨帕塞替(sapanisertib)(MLN0128；INK128；WO 2015/051043)；DS3078；apitolisib(GDC0980；WO 2008/070740)；omipalisib(GSK-2126458；WO 2008/14446)；NVP-BGT226(长,K.Y.(Chang,K.Y.)等人,临床癌症研究(Clin.Cancer Res.)17(22):7116-26(2011))；voxtalisib(XL765；SAR245409；WO 2007/044813)；PF04691502(WO 2008/032162)；吉达昔布(gedatolisib)(PF05212384；PKI-587；WO 2009/143313)；SF1126(WO 2004/089925)；GSK1059615(WO 2007/136940)；BI-860585；OSI 027(WO 2007/061737)；VS 5584(WO 2010/114484)；CC-223(WO 2010/062571)；DCBCI-0901(李,Y.E.(Lee,Y.E.)等人,分子癌症治疗(Mol.Canc.Thera.)12(11月增刊):Abstract nr C270(2013)):)；LY3023414(WO 2012/097039)；P529(WO 2007/133249)；panulisib(P7170；WO 2012/007926)；DS-7423(岸日,T.(Kashiyama,T.)等人,公共科学图书馆·综合9(2):e87220(2014))；PWT33567甲磺酸盐(VCD-597；WO 2010/110685)；ME-344(NV-128；纳瓦罗,P.(Navarro,P.)等人,细胞报告(Cell Rep.)15(12):2705-18(2016))；ABTL0812(WO 2010/106211)；WYE-132；EXEL-3885(欧洲癌症杂志增刊(Eur J Cancer Suppl.)6(12):Abst322(2008))；EXEL-4431(欧洲癌症杂志增刊6(12):Abst 322(2008))；AR-mTOR-26(第101届美国癌症研究协会(Am AssocCancer Res，AACR)年会(华盛顿特区(Washington,D.C.)四月17-21日)2010,Abst 4484)；NV-128(A.B.艾尔维罗(A.B.Alvero)等人,分子癌症治疗学(Mol Cancer Ther.)10(8):1385-93(2011))；沙利霉素(salinomycin)(VS-507；古普塔,P.B.(Gupta,P.B.)等人,细胞138(4):645-59(2009))；BN-107；BN-108；WAY-600；WYE-687；WYE-354(于,K.(Yu,K.)等人,癌症研究69(15):6232-40(2009))；Ku-063794(加西亚-马丁内斯,J.M.(Garcia-Martinez,J.M.)等人,生物化学杂志(Biochem.J.)421(1):29-42(2009))；torkinib(PP242；阿普塞尔,B.(Apsel,B.)等人,自然·化学与生物学(Nat.Chem.Biol.)4(11):691-99(2008))；PP30；CZ415(REF)；INK1069；EXEL-2044；EXEL-7518；SB2158；SB2280；AR-mTOR-1(华莱士,E.M.(Wallace,E.M.)等人,分子癌症治疗8(12月增刊):Abst.B267(2009))。
本文中提及任何特定额外mTOR抑制剂还包含其任何药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、溶剂合物、水合物和多晶型物。
还可以将本发明化合物或其药物组合物并入用于包覆可植入医疗装置的组合物中，所述可植入医疗装置如假肢、人工瓣膜、人造血管、支架和导管。血管支架例如已用于克服再狭窄(损伤后血管壁再变窄)。然而，使用支架或其它可植入装置的患者有形成凝块或血小板激活的风险。可以通过用包含激酶抑制剂的药学上可接受的组合物预包覆所述装置来预防或减轻这些不合需要的作用。用本发明化合物包覆的可植入装置是本发明的另一个实施例。
例证
如以下实例中所描绘，在某些示例性实施例中，化合物根据以下一般程序制备。应了解，尽管一般方法描绘本发明的某些化合物的合成，但以下一般方法和本领域的一般技术人员已知的其它方法可应用于如本文所描述的所有化合物和这些化合物中的每一者的子类和物质中(也参见伦戈,J.I.(Luengo,J.I.)等人,化学生物学(Chem.Biol.),2(7):471-81(1995)；和格林菲尔德,A.A.(Grinfeld,A.A.)等人,四面体通讯(Tet.Lett.),35(37):6835-38(1994))。
实验部分中所用缩写的列表。
CH3CN：乙腈
DCE：二氯乙烷
DCM：二氯甲烷
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲亚砜
ESI：电喷雾电离
EtOAc：乙酸乙酯
EtOH：乙醇
h：小时
HBr：氢溴酸
HF：氟化氢
HND-8：酸性离子交换树脂(例如大孔树脂(Amberlyst))H2O：水
HPLC：高效液相色谱
MeOH：甲醇
min:minutes
mL：毫升
mM：毫摩尔浓度
mmol：毫摩尔
MS：质谱分析
N2：氮气
NaHCO3：碳酸氢钠
NaI：碘化钠
NaN3：叠氮化钠
NaOH：氢氧化钠
Na2SO4：硫酸钠
NH4Cl：氯化铵
NMR：核磁共振
℃：摄氏度
prep-HPLC：制备型高效液相色谱
PPh3：三苯膦
p-TsOH：对甲苯磺酸
rt：室温
TEA：三乙胺
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
实例1：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-28,I-29和I-30)：
合成流程：
程序和表征：
在25℃下将2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(5mL)添加到雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)于THF(15mL)中的溶液中。搅拌所得混合物2小时，然后添加到冰冷饱和NaHCO3水溶液中并且用EtOAc(30mL×3)萃取。合并有机层，接着经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩。粗物质通过反相色谱(CH3CN/纯水：7:3)纯化，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-28：0.19g，33.7％产率)。MS(EI+,m/z):1054.4[M+Na]+。将1.5g这种物质送去进行手性分离，其提供I-29(0.6mg)和I-30(0.2g)。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CD-TB016)
柱大小：0.46cm I.D.×15cm L
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AD CP-HPLC-05
I-29:1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41-6.20(m,2H),6.13(dd,J＝15.0,10.3Hz,1H),5.92(dd,J＝32.7,11.0Hz,1H),5.51(dd,J＝15.1,8.9Hz,1H),5.41(d,J＝9.9Hz,1H),5.27(d,J＝5.3Hz,1H),5.13(dd,J＝26.5,20.5Hz,1H),4.85(s,1H),4.19(t,J＝8.9Hz,1H),3.92(d,J＝36.4Hz,1H),3.80-3.51(m,12H),3.50-3.24(m,12H),2.87-2.51(m,6H),2.29(t,J＝34.7Hz,2H),2.12-1.87(m,5H),1.84-1.66(m,13H),1.53-1.15(m,9H),1.15-0.77(m,18H),0.65(dt,J＝20.2,10.1Hz,1H)。
实例2：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮三氟乙酸盐(I-39)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙醇：
将氢溴酸(86.21g，1.07mmol，115mL)添加到2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(100g，665.90mmol)于甲苯(1.15L)中的溶液中，且在回流下搅拌所得混合物18小时，接着丢弃水层。有机层用NaOH水溶液洗涤，在真空中浓缩，接着通过硅胶色谱(MeOH:DCM＝1:20)纯化，获得呈液体形式的2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙醇(20g，14％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.83(t,J＝6.2Hz,2H),3.77-3.72(m,2H),3.69(s,4H),3.64-3.61(m,2H),3.49(t,J＝6.1Hz,2H),2.51(t,J＝6.1Hz,1H)。
步骤2：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮：
在室温下将2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙醇(0.12g，0.547mmol，2mL)添加到雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.5g，2.73mmol)于THF(7mL)中的溶液中，且搅拌所得混合物2小时。然后添加冰冷NaHCO3水溶液并且用EtOAc(30mL×3)萃取混合物。有机相经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩。所得粗物质通过反相色谱(CH3CN/纯水＝7:3)纯化，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(0.2g，33.4％产率，1HNMR展示雷帕霉素杂质)。MS(EI+,m/z):1116.4[M+Na]+。
步骤3：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮：
在60℃下将NaN3(1.07g，16.44mmol)、NaI(0.33g，2.19mmol)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-溴乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(0.6g，0.548mmol)于DMF(10mL)中的溶液搅拌1.5小时。反应物接着通过EtOAc(50mL)淬灭，且混合物用NH4Cl水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在真空中浓缩。所得粗物质通过反相色谱(CH3CN/纯水＝4:1)纯化，获得呈黄色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(0.3g，51.8％产率)。MS(EI+,m/z):1079.4[M+Na]+。
步骤4：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮三氟乙酸盐：
将三苯膦(0.186g，0.7mmol)缓慢添加到(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(0.25g，0.24mmol)于THF(5mL)三苯膦的溶液中。在60℃下搅拌所得溶液2小时，且接着添加0.05mL水，且在室温下搅拌混合物6小时，接着浓缩。所得粗物质通过反相色谱(CH3CN/0.02％ TFA于水中(2:3)纯化，获得(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-43-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45,55-二羟基-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-39：0.035g，14％产率)。MS(EI+,m/z):1031.4[M+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.82(s,3H),6.42(dd,J＝33.7,19.3Hz,2H),6.25-6.09(m,2H),5.46(dd,J＝14.7,9.7Hz,1H),5.28(s,1H),5.08(d,J＝10.1Hz,1H),5.00-4.92(m,1H),4.08-3.92(m,2H),3.78(d,J＝11.6Hz,1H),3.63-3.38(m,16H),3.36-3.08(m,12H),2.99(dd,J＝22.3,17.1Hz,2H),2.87-2.73(m,2H),2.37(dd,J＝17.9,8.4Hz,1H),2.30-1.75(m,4H),1.7-1.49(m,15H),1.51-1.01(m,6H),1.01-0.65(m,18H),0.63-0.56(m,1H)。
实例3：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41R,43S,46S,47R,48R,57S)-47,57-二羟基-45-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-46-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-36)：
合成流程：
程序和表征：
在室温下将2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(1.06g，5.47mmol，5mL)添加到雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.21g，1.09mmol)于THF(15mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物2小时，然后添加到冰冷饱和NaHCO3水溶液中并且用EtOAc(30mL×3)萃取。合并有机层并经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。通过反相色谱法纯化粗物质(CH3CN/纯水＝3:2)，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41R,43S,46S,47R,48R,57S)-47,57-二羟基-45-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-46-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-36：0.15g，25.5％产率)。MS(EI+,m/z):1098.4[M+H]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40-5.92(m,4H),5.73-5.35(m,3H),5.25-5.05(m,2H),4.31-4.12(m,1H),3.97(dd,J＝25.7,6.3Hz,1H),3.87-3.53(m,15H),3.52-3.17(m,11H),2.99-2.46(m,6H),2.36-1.93(m,9H),1.90-1.54(m,13H),1.52-1.17(m,9H),1.15-0.81(m,18H),0.68-0.58(m,1H)。
实例4：合成(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43R,45S,47R,48S,49R,50R,59S)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-35)：
合成流程：
程序和表征：
在室温下将2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(0.08g，0.33mmol，2mL)添加到雷帕霉素(0.3g，0.328mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.31g，1.64mmol)于THF(6mL)中的溶液中。在室温下搅拌所得混合物2小时，然后添加到冰冷饱和NaHCO3水溶液中并且用EtOAc(20mL×3)萃取。合并有机层，且接着经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩。粗物质通过反相色谱(CH3CN/纯水：3:2)纯化，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43R,45S,47R,48S,49R,50R,59S)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-35：0.06g，16.3％产率)。MS(EI+,m/z):1042.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42-5.81(m,4H),5.58-4.81(m,4H),4.31-4.11(m,1H),4.01-3.51(m,22H),3.49-3.13(m,11H),3.01-2.43(m,6H),2.29(t,J＝30.6Hz,2H),2.15-1.88(m,7H),1.76-1.55(m,12H),1.51-1.18(m,9H),1.15-0.74(m,18H),0.66(dd,J＝23.9,12.0Hz,1H)。
实例5：合成(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35R,37S,39S,40S,41R,42R,52S)-39-(2,3-二羟基丙氧基)-41,52-二羟基-40-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-64,65-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-25)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：(24E,26E,28E,29E,32R,33S,34R,35R,37R,39S,41S,42S,44R,45R,55S)-41-[(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基]-44,55-二羟基-42-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-32,33,34,35,46,47-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮：
在室温下，将(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)m乙醇(1mL)添加到雷帕霉素(0.2g，0.22mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.1g，0.547mmol)于THF(3mL)中的溶液中。在室温下搅拌所得混合物2小时，然后添加到冰冷饱和NaHCO3水溶液中并且用EtOAc(20mL×2)萃取。合并有机层，且接着经Na2SO4干燥，过滤，且在真空中浓缩。通过反相色谱(CH3CN/纯水：7:3)纯化粗物质，获得呈白色固体状的(24E,26E,28E,29E,32R,33S,34R,35R,37R,39S,41S,42S,44R,45R,55S)-41-[(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基]-44,55-二羟基-42-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-32,33,34,35,46,47-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(0.07g，32％产率)。MS(EI+,m/z):1036.4[M+Na]+。
步骤2：(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35R,37S,39S,40S,41R,42R,52S)-39-(2,3-二羟基丙氧基)-41,52-二羟基-40-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-64,65-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-25)：
将4-甲基苯磺酸吡啶(0.037g，0.148mmol)添加到(24E,26E,28E,29E,32R,33S,34R,35R,37R,39S,41S,42S,44R,45R,55S)-41-[(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基]-44,55-二羟基-42-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-32,33,34,35,46,47-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(0.05g，0.05mmol)于MeOH(2mL)的溶液中。在室温下搅拌混合物18小时。在蒸发甲醇之后，用NaHCO3饱和水溶液中和残余物。混合物接着用EtOAc(10mL×3)萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥且浓缩，其中用通过反相色谱(CH3CN/纯水＝1:1)纯化所得粗物质，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35R,37S,39S,40S,41R,42R,52S)-39-(2,3-二羟基丙氧基)-41,52-二羟基-40-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-64,65-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-25：0.005g，10％产率)。MS(EI+,m/z):996.5[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.21-5.97(m,4H),5.77-4.78(m,5H),4.53-4.12(m,2H),4.05-3.11(m,19H),3.07-2.88(m,2H),2.65-2.5(m,4H),2.39-1.91(m,7H),1.89-1.69(m,12H),1.52-1.20(m,9H),1.17-0.76(m,18H),0.73-0.61(m,1H)。
实例6：合成(21E,23E,25E,26E,42R,43S,44R,45R,47S,49S,51S,52S,53R,54R,63R)-53,63-二羟基-51-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-52-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-54-甲氧基-42,43,44,45,55,56-六甲基-74,75-二氧杂-64-氮杂三环三十六烷-21,23,25(55),26(56)-四烯-57,58,59,60,61-五酮(I-24)：
合成流程：
程序和表征：
在室温下搅拌雷帕霉素(0.5g，547mmol)和2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(0.2g，0.547mmol，3mL)以及对甲苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)于THF(15mL)中的溶液3小时，接着用EtOAc(30mL×3)淬灭。合并的有机层用冰冷饱和NaHCO3溶液洗涤且浓缩。通过反相色谱法纯化所得粗物质(CH3CN/纯水＝7:3)，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,42R,43S,44R,45R,47S,49S,51S,52S,53R,54R,63R)-53,63-二羟基-51-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-52-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-54-甲氧基-42,43,44,45,55,56-六甲基-74,75-二氧杂-64-氮杂三环三十六烷-21,23,25(55),26(56)-四烯-57,58,59,60,61-五酮(I-24：0.13g，19％)。MS(EI+,m/z):1275.6[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.45-5.80(m,4H),5.57-5.05(m,4H),4.85-4.08(m,2H),3.90-3.50(m,34H),3.47-3.24(m,13H),2.97-2.44(m,7H),2.39-2.06(m,2H),2.03-1.84(m,6H),1.78-1.58(m,13H),1.53-1.16(m,9H),1.14-0.78(m,18H),0.67-0.53(m,1H)。
实例7：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,38S,41S,43S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-42-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-43-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-23)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：三氟甲烷磺酸2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基乙酯：
在N2下将2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基乙醇(4g，22.69mmol)和DIPEA(3.81g，29.49mmol，5.14mL)于DCM(50mL)中的混合物冷却到0℃，接着添加三氟甲烷磺酸三氟甲基磺酰酯(7.04g，24.95mmol)，且在0℃下搅拌所得混合物1小时。用EtOAc(200mL)稀释反应物，接着用饱和NaHCO3(200mL)、水(200mL)、盐水(200mL)洗涤，且接着有机层经Na2SO4干燥，过滤且在真空中浓缩，得到三氟甲烷磺酸2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基乙酯(5.5g，78.6％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.50-4.42(t,2H),3.85-3.80(t,2H),0.84-0.78(s,9H),0.00(s,6H)。
步骤2：(27E,29E,31E,32E,36R,37S,38R,39R,40S,43S,44S,45S,47R,48R,57R)-45-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-[2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基乙氧基]-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-44,48-di甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-67,68-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-27,29,31(49),32(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮：
将雷帕霉素(2g，2.19mmol)和DIPEA(2.26g，17.50mmol，3.05mL)溶解于甲苯(60mL)中，接着加热到60℃。随后在N2下添加三氟甲烷磺酸2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基乙酯(5.40g，17.50mmol)，接着在60℃下搅拌16小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(100mL)中，且接着用EtOAc(150mL×3)萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，接着在真空中浓缩。残余物接着通过反相色谱(CH3CN/纯水＝4:1)纯化，得到呈无色油状的(27E,29E,31E,32E,36R,37S,38R,39R,40S,43S,44S,45S,47R,48R,57R)-45-[(1R)-2-
[(1S,2R,3R)-3-[2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基乙氧基]-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-44,48-二甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-67,68-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-27,29,31(49),32(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(0.75g，32％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1095.5[M+Na]+。
步骤3：(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,35S,38S,39S,40S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮：
在20℃下将TEA·3HF(4.65g，28.87mmol)和(27E,29E,31E,32E,36R,37S,38R,39R,40S,43S,44S,45S,47R,48R,57R)-45-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-[2-[叔丁基(二甲基)硅烷基]乙氧基]-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-44,48-二甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-67,68-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-27,29,31(49),32(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(3.05g，2.89mmol)于THF(50mL)中的溶液搅拌2小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(100mL)中，接着用EtOAc(150mL×3)萃取。合并有机层且用水和盐水洗涤，接着在真空中浓缩。通过反相色谱(CH3CN/纯水：7:3)纯化残余物，得到呈白色固体状的(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,35S,38S,39S,40S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(1.5g，54％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):980.5[M+Na]+.
步骤4：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,38S,41S,43S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-42-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-43-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-23)：
在20℃下将(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,35S,38S,39S,40S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(0.5g，0.52mmol)、2-(2-羟基乙氧基)乙醇(2.77g，26.09mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.54g，3.13mmol)于THF(6mL)中的混合物搅拌2小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(30mL)中并且用EtOAc(50mL×3)萃取。合并有机层，且接着用水和盐水洗涤，接着在真空中浓缩。通过反相色谱(CH3CN/纯水：1:1)纯化残余物，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,38S,41S,43S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-42-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-43-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-23：0.1g，19％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1054.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.63-5.86(m,4H),5.70-5.00(m,4H),4.87-4.15(m,2H),4.02-3.54(m,14H),3.50-3.26(m,11H),3.24-3.02(m,3H),2.76-2.46(m,3H),2.38-1.86(m,8H),1.84-1.54(m,14H),1.47(m,3H),1.25(m,6H),1.00(m,16H),0.69(dt,J＝34.1,12.1Hz,1H)。
实例8：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,40S,43S,45S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-44-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-32)：
合成流程：
程序和表征：
在20℃下搅拌依维莫司(3.92g，26.09mmol)与对甲苯磺酸水合物(0.45g，2.61mmol)于THF(10mL)中的混合物2小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(30mL)中并且用EtOAc(50mL×3)萃取。合并有机层，且接着用水和盐水洗涤，接着在真空中浓缩。通过反相色谱(CH3CN/纯水：1:1)纯化残余物，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,40S,43S,45S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-44-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-45-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-32：0.155g，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1098.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.49-5.83(m,4H),5.67-5.35(m,2H),5.33-5.01(m,2H),4.92-4.08(m,2H),4.05-3.51(m,17H),3.52-3.23(m,11H),3.23-3.01(m,3H),2.66(m,4H),2.40-1.95(m,5H),1.95-1.55(m,17H),1.52-1.13(m,9H),1.13-0.79(m,16H),0.71(dd,J＝23.8,11.9Hz,1H)。
实例9：合成(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,42S,45S,47S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-46-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-22)：
合成流程：
程序和表征：
在20℃下搅拌依维莫司(0.5g，0.52mmol)、2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(2.03g，10.44mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.54g，3.13mmol)于THF(6mL)中的混合物2小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(30mL)中并且用EtOAc(50mL*3)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，然后在真空中浓缩。通过反相色谱(CH3CN/纯水：1:1)纯化残余物，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,42S,45S,47S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-46-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-22：0.1g，17％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1043.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.71-5.78(m,4H),5.77-5.01(m,4H),4.65-3.88(m,3H),3.87-3.50(m,20H),3.50-3.00(m,14H),2.77-1.95(m,11H),1.89-1.53(m,13H),1.53-0.79(m,27H),0.76-0.62(m,1H)。
实例10：合成(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,39S,42S,44S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-43-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-27)：
合成流程：
程序和表征：
在20℃下搅拌雷帕霉素(1g，1.09mmol)、2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙醇(8.98g，54.69mmol)和对甲苯磺酸水合物(0.94g，5.47mmol)于THF(20mL)中的混合物2小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(50mL)中并且用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，然后在真空中浓缩。通过反相色谱(CH3CN/纯水：4:1)纯化残余物，得到呈白色固体状的(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,39S,42S,44S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-43-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-27：0.16g，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1068.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.50-5.81(m,4H),5.73-5.05(m,4H),4.85-3.98(m,3H),3.90-3.10(m,27H),3.02-2.24(m,7H),1.98(m,6H),1.82-1.55(m,13H),1.54-1.16(m,9H),1.16-0.78(m,17H),0.75-0.59(m,1H)。
实例11：合成(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,35S,38S,40S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39-(3-羟基丙氧基)-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(I-34)：
合成流程：
程序和表征：
在20℃下搅拌雷帕霉素(0.5g，0.55mmol)、丙烷-1,3-二醇(13.13g，172.48mmol，12.5mL)和对甲苯磺酸水合物(0.47g，2.74mmol)于THF(37.5mL)中的混合物2小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(100mL)中并且用EtOAc(100mL×3)萃取。合并有机层且用水和盐水洗涤，接着在真空中浓缩。通过反相色谱(CH3CN/纯水：7:3)纯化残余物，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,35S,38S,40S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39-(3-羟基丙氧基)-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(0.15g，29％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):980.3[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.58-5.84(m,4H),5.72-4.83(m,4H),4.65-4.06(m,2H),4.03-3.63(m,5H),3.62-3.05(m,12H),3.03-2.40(m,6H),2.42-1.91(m,7H),1.89-1.56(m,17H),1.53-1.27(m,6H),1.25-0.76(m,19H),0.62(m,1H)。
实例12：合成(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35R,37S,40S,41R,42R,51S)-41,51-二羟基-39-(2-羟基乙氧基)-40-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-62,63-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-38)：
合成流程：
程序和表征：
在10℃下，将对甲苯磺酸水合物(0.31g，1.64mmol)添加到雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和乙二醇(3mL)于THF(10mL)中的混合物中。在10℃下搅拌所得混合物17小时，然后用EtOAc(100mL)稀释反应混合物并且使用NaHCO3饱和水溶液(约50mL)调节到pH 9。在真空中浓缩有机层，接着通过反相色谱法纯化残余物(CH3CN/纯水＝5.5:4.5)。然后通过冻干去除溶剂，产生呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35R,37S,40S,41R,42R,51S)-41,51-二羟基-39-(2-羟基乙氧基)-40-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-62,63-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(0.05g，9％产率)。MS(EI+,m/z):966.3[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.47-5.91(m,4H),5.60-5.13(m,4H),4.85-3.92(m,3H),3.88-3.68(m,4H),3.60-3.53(m,1H),3.46-3.29(m,10H),3.25-3.19(m,1H),2.97-2.84(m,2H),2.76-2.53(m,4H),2.35-1.83(m,8H),1.80-1.64(m,12H),1.53-1.16(m,9H),1.14-0.82(m,18H),0.67-0.57(m,1H)。
实例13：合成(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45R,47S,50S,51R,52R,61S)-51,61-二羟基-49-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-50-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-33)：
合成流程：
程序和表征：
在15℃下将对甲苯磺酸水合物(0.19g，1.02mmol)添加到雷帕霉素(0.31g，0.34mmol)与六乙二醇(2mL)于THF(6mL)中的混合物中。在15℃下搅拌所得混合物17小时，然后用EtOAc(200mL)稀释反应混合物并且使用NaHCO3饱和水溶液(约100mL)调节到pH 9。在真空浓缩中有机层。通过反相色谱法纯化残余物(CH3CN/纯水＝3:2)。然后通过冻干去除溶剂。获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45R,47S,50S,51R,52R,61S)-51,61-二羟基-49-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-50-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-33：0.21g，51％产率)。MS(EI+,m/z):1186.8[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.39-5.94(m,4H),5.55-5.14(m,4H),4.93-3.75(m,2H),3.73-3.71(m,2H),3.67-3.55(m,22H),3.48-3.44(m,1H),3.41-3.16(m,12H),2.98-2.86(m,2H),2.75-2.69(m,2H),2.59-2.44(m,1H),2.34-2.21(m,1H),2.11-1.97(m,4H),1.90(s,3H),1.78-1.54(m,13H),1.50-1.12(m,9H),1.08-0.83(m,18H),0.71-0.62(m,1H)。
实例14：合成(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37R,39S,42S,43R,44R,53S)-43,53-二羟基-41-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-42-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-64,65-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-47,48,49,50,51-五酮(I-18)：
合成流程：
程序和表征：
在10℃下将对甲苯磺酸水合物(0.187g，0.98mmol)添加到雷帕霉素(0.3g，0.33mmol)与二乙二醇(2mL)于THF(6mL)中的混合物中。在10℃下搅拌所得混合物17小时，然后用EtOAc(100mL)稀释反应混合物并且使用NaHCO3饱和水溶液(约50mL)调节到pH 9。在真空下浓缩有机层。通过反相纯化残余物(CH3CN/纯水＝3:2)。通过冻干去除溶剂，产生呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37R,39S,42S,43R,44R,53S)-43,53-二羟基-41-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-42-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-64,65-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-47,48,49,50,51-五酮(I-18：0.126g，37％产率)。MS(EI+,m/z):1010.7[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40-5.95(m,4H),5.55-5.14(m,4H),4.85-4.17(m,2H),4.05-3.57(m,10H),3.53-3.15(m,12H),2.97-2.89(m,2H),2.76-2.48(m,4H),2.36-1.84(m,7H),1.79-1.56(m,14H),1.49-1.14(m,9H),1.10-0.81(m,18H),0.70-0.61(m,1H)。
实例15：合成(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,36R,38S,41S,42R,43R,53S)-42,53-二羟基-40-[3-羟基-2-(羟基甲基)丙氧基]-41-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(I-31)：
合成流程：
程序和表征：
在15℃下将对甲苯磺酸水合物(0.31g，1.64mmol)添加到雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(0.58g，5.47mmol)于THF(10mL)中的混合物中。在15℃下搅拌所得混合物17小时，然后用EtOAc(100mL)稀释反应混合物并且使用NaHCO3饱和水溶液(约50mL)调节到pH 9。在真空下浓缩有机层。通过反相色谱法纯化残余物(CH3CN/纯水＝3:2)。溶剂通过冻干去除，产生呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,36R,38S,41S,42R,43R,53S)-42,53-二羟基-40-[3-羟基-2-(羟基甲基)丙氧基]-41-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(I-31：0.054g，9％产率)。MS(EI+,m/z):1010.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.37-5.96(m,4H),5.56-5.15(m,4H),4.86-4.17(m,2H),3.85-3.47(m,10H),2.96-2.91(m,2H),2.75-2.58(m,3H),2.35-2.22(m,3H),2.11-1.94(m,6H),1.84-1.46(m,23H),1.35-1.12(m,9H),1.11-0.88(m,18H),0.67-0.65(m,1H)。
实例16：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-21)：
合成流程：
程序和表征：
在15℃下将对甲苯磺酸水合物(0.62g，3.28mmol)添加到雷帕霉素(1g，1.09mmol)和2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙醇(1.99g，10.94mmol)于THF(20mL)中的混合物中。在15℃下搅拌所得混合物17小时，然后用EtOAc(100mL)稀释反应混合物并且使用NaHCO3饱和水溶液(约50mL)调节到pH 9。在真空下浓缩有机层。通过反相色谱法纯化残余物(CH3CN/纯水＝3:2)。通过冻干去除溶剂，产生呈黄色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-21：0.15g，0.133mmol，12％产率)。MS(EI+,m/z):1086.4[M+Na]+。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.39-5.95(m,4H),5.54-5.19(m,4H),4.81-4.17(m,2H),3.96-3.73(m,4H),3.59-3.14(m,12H),2.96-2.55(m,14H),2.35-1.87(m,6H),1.81-1.59(m,13H),1.53-1.13(m,11H),1.16-0.84(m,18H),0.71-0.63(m,1H)。
实例17：合成合成(21E,23E,25E,26E,42R,43S,44R,45R,47S,49S,51S,52S,53R,54R,63R)-53,63-二羟基-51-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-52-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-54-甲氧基-42,43,44,45,55,56-六甲基-74,75-二氧杂-64-氮杂三环三十六烷-21,23,25(55),26(56)-四烯-57,58,59,60,61-五酮(I-26)：
/>
合成流程：
程序和表征：
将对甲苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)缓慢添加到雷帕霉素(0.5g，0.55mmol)和2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(3.57g，10.94mmol)于THF(10mL)中的溶液中。在20℃下搅拌所得溶液17小时且接着浓缩。残余物通过反相色谱(CH3CN/纯水＝7:3)纯化，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,42R,43S,44R,45R,47S,49S,51S,52S,53R,54R,63R)-53,63-二羟基-51-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-52-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-54-甲氧基-42,43,44,45,55,56-六甲基-74,75-二氧杂-64-氮杂三环三十六烷-21,23,25(55),26(56)-四烯-57,58,59,60,61-五酮(I-26：0.16g，24％产率)。MS(EI+,m/z):1230.6[M+Na]+。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46-5.74(m,4H),5.61-4.74(m,4H),4.05-4.5(m,2H),4.02-3.51(m,35H),3.43-3.16(m,14H),2.99-2.42(m,8H),2.4-1.6(m,7H),1.61-1.1(m,12H),1.13-0.79(m,18H),0.74-0.61(m,1H)。
实例19：合成(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[R-2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-119)和(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[S-2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-120)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮：
向雷帕霉素(2g，2.19mmol)、2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(4mL)于THF(30mL)中的混合物中添加HND-8(240mg，2.19mmol)，且在N2下在50℃下搅拌反应物4小时，接着过滤且浓缩。所得粗产物经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝3:1)纯化，得到呈浅黄色固体状的(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(0.6g，27％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1024.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.56-5.82(m,4H),5.47(ddd,J＝37.4,17.7,9.4Hz,2H),5.31-5.06(m,2H),4.82-4.50(m,1H),4.32-3.94(m,2H),3.92-3.71(m,2H),3.70-3.44(m,8H),3.43-3.26(m,12H),3.20(dd,J＝27.0,16.2Hz,1H),3.00-2.22(m,7H),2.18-1.56(m,19H),1.54-1.25(m,7H),1.24-0.81(m,19H),0.67(dd,J＝23.8,11.9Hz,1H)。
步骤2：合成(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[R-2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-119)和(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[S-2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-120)：
(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(0.095g，0.095mmol)经由制备型手性HPLC纯化，得到均呈白色固体状的(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[R-2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-119：13.2mg，14％产率)和(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[S-2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-120：18.1mg，19％产率)。
以下列出手性分离方法：
仪器：Gilson-281
柱：CHIRALPAK IC 20×250mm,10um(Daicel)
柱温：35℃
移动相：n-己烷:乙醇＝60:40
流动速率：50ml/min
检测波长：214nm
循环时间：18min
样品溶液：95mg溶解于7ml甲醇中
注射量：0.5ml(装载：7.1mg/注射)
I-119:ESI-MS(EI+,m/z):1024.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-5.92(m,4H),5.75-5.05(m,4H),4.49(s,1H),4.28(s,1H),4.15(d,J＝10.9Hz,1H),3.99(t,J＝13.3Hz,1H),3.88-3.73(m,1H),3.69-3.46(m,8H),3.45-3.29(m,11H),3.22(dd,J＝10.1,6.5Hz,2H),2.99-2.77(m,3H),2.68(dt,J＝28.5,11.1Hz,3H),2.61-2.22(m,4H),2.05(ddd,J＝21.5,15.3,7.5Hz,5H),1.88-1.65(m,12H),1.53-1.30(m,7H),1.17-0.78(m,19H),0.73-0.57(m,1H)。
I-120:ESI-MS(EI+,m/z):1024.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.43-6.18(m,2H),6.13(dd,J＝15.0,10.0Hz,1H),5.91(dd,J＝31.6,10.6Hz,1H),5.56-5.36(m,2H),5.27(d,J＝4.9Hz,1H),5.16(dt,J＝18.2,9.1Hz,1H),4.78(s,1H),4.20(dd,J＝21.1,11.1Hz,1H),3.96-3.71(m,3H),3.70-3.43(m,9H),3.42-3.26(m,14H),2.98-2.87(m,1H),2.77-2.62(m,3H),2.58(dd,J＝16.9,6.3Hz,1H),2.34(d,J＝13.4Hz,2H),2.15-1.84(m,5H),1.83-1.64(m,7H),1.34(dddd,J＝22.7,19.4,18.1,9.1Hz,12H),1.16-0.80(m,19H),0.66(dt,J＝16.8,8.4Hz,1H)。
实例20：合成(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,36S,39S,41S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40-[[(2S,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二氧杂环己烷-2-基]甲氧基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-118)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(S)-1-(苯甲氧基)-3-氯丙-2-醇：
在室温下搅拌(2R)-2-(氯甲基)环氧乙烷(1g 10.81mmol)和苯基甲醇(2.34g21.62mmol)于DCE(10mL)中的溶液1小时，然后冷却到0℃，缓慢添加醚合三氟化硼(76.7mg，0.54mmol)。使反应混合物升温到室温，搅拌过夜，然后回流2小时。在冷却后，将反应混合物用10％ NaHCO3水溶液稀释且用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。所得残余物经由硅胶色谱(PE:EtOAc＝10:1)纯化，得到呈无色油状的所要产物(1.8g，86％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):218.1[M+H2O]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.36-7.27(m,5H),4.64(s,2H),3.99-3.95(m,1H),3.64-3.55(m,4H),2.75(d,J＝6.0Hz,1H)。
步骤2：合成4-甲基苯磺酸(S)-2-((S)-1-(苯甲氧基)-3-氯丙-2-基氧基)-3-羟基丙酯：
在室温下搅拌4-甲基苯磺酸(2S)-1-苯甲氧基-3-氯-丙-2-醇(6g，29.9mmol)和[(2S)-环氧乙烷-2-基]甲酯(6.83g，29.9mmol)于DCE(100mL)中的溶液1小时，然后冷却到0℃，并且缓慢添加醚合三氟化硼(254.6mg，1.79mmol)。使反应物升温到室温，在室温下搅拌过夜，回流2小时，然后冷却到室温。添加EtOAc(100mL)和水(50mL)。分离各层，且水层进一步用EtOAc(100mL×2)萃取。合并的有机层接着用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在真空下浓缩。通过硅胶色谱(含8％ EtOAc的PE)纯化所得残余物，获得呈无色油状的[(2S)-2-[(1S)-1-(苯甲氧基甲基)-2-氯-乙氧基]-3-羟基-丙基]4-甲基苯磺酸盐(4.4g，34％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):429.1[M+H]+。
步骤3：合成((2R,5R)-5-(苯甲氧基甲基)-1,4-二氧杂环己烷-2-基)甲醇：
在室温下搅拌[(2S)-2-[(1S)-1-(苯甲氧基甲基)-2-氯-乙氧基]-3-羟基-丙基]4-甲基苯磺酸盐(0.78g，1.82mmol)、NaOH(0.22g，5.46mmol)于H2O(10mL)中的溶液2.5小时，接着在90℃下加热4小时，冷却到室温且搅拌过夜，接着在90℃下再加热2小时。反应混合物用1N HCl水溶液酸化且用DCM(100mL×3)萃取。合并的有机层用NaHCO3水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，获得呈无色油状的[(2R,5R)-5-(苯甲氧基甲基)-1,4-二氧杂环己烷-2-基]甲醇(4.4g，41％产率)。在不进行进一步纯化的情况下使用此物质。ESI-MS(EI+,m/z):239.1[M+H]+。
步骤4：合成((2R,5R)-1,4-二氧杂环己烷-2,5-二基)二甲醇：
向[(2R,5R)-5-(苯甲氧基甲基)-1,4-二氧杂环己烷-2-基]甲醇(2.4g，10mmol)于MeOH(30mL)中的溶液中添加Pd/C(0.86g)。使混合物在室温下在氢气气囊下搅拌过夜，然后通过短硅藻土塞过滤，用乙醇洗涤。在减压下浓缩合并的有机洗涤，得到呈油状物的(2R,5R)-1,4-二氧杂环己烷-2,5-二基)二甲醇(1.2g，74％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):149.2[M+H]+。
步骤5：合成(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,36S,39S,41S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40-[[(2S,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二氧杂环己烷-2-基]甲氧基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-118)：
在25℃下向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(0.471g，2.73mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加[(2R,5R)-5-(羟基甲基)-1,4-二氧杂环己烷-2-基]甲醇(0.81g，5.47mmol)。在室温下搅拌2小时之后，反应物用冷NaHCO3水溶液淬灭且用EtOAc(50mL×2)萃取。合并的有机层然后经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝65:35)纯化，接着经由硅胶色谱(己烷：DCM:EtOAc:MeOH＝8:8:3:1)纯化，获得呈白色固体状的(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,36S,39S,41S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40-[[(2S,5S)-5-(羟基甲基)-1,4-二氧杂环己烷-2-基]甲氧基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-118：80mg，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1052.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46-5.86(m,4H),5.69-5.06(m,4H),4.16(ddd,J＝56.1,52.0,39.5Hz,3H),3.94-3.49(m,10H),3.48-3.11(m,12H),3.08-2.46(m,7H),2.40-1.93(m,7H),1.73(dd,J＝16.9,10.5Hz,13H),1.52-1.17(m,8H),1.16-0.79(m,18H),0.65(d,J＝17.5Hz,1H)。
实例21：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-116)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-117)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮：
使依维莫司(1g，1.04mmol)于THF(15mL)中的溶液用N2脱气，在0℃下添加对甲苯磺酸(0.895g，5.20mmol)，接着添加2-(2-羟基乙氧基)乙醇(2.8mL)。在0℃下在N2下搅拌所得混合物0.5小时，接着在25℃下搅拌3小时。将反应物倒入饱和NaHCO3(40mL)中，用EtOAc(30mL)萃取，用水(30mL×2)和盐水(40mL)洗涤，接着经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。所得残余物通过正相硅胶色谱(MeOH:DCM＝1:15)纯化，接着反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝7:3)获得呈浅黄色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(0.43g，40％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1053.9[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.47-5.85(m,4H),5.40(ddd,J＝99.7,51.9,29.1Hz,4H),4.80(d,J＝22.0Hz,1H),4.23(d,J＝42.5Hz,1H),4.05-3.54(m,13H),3.52-3.01(m,14H),2.67(ddd,J＝46.8,27.3,6.8Hz,4H),2.17(dd,J＝82.0,45.9Hz,6H),1.70(dt,J＝21.0,15.8Hz,12H),1.34(dd,J＝105.2,26.3Hz,11H),1.15-0.79(m,18H),0.76-0.64(m,1H)。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-116)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-117)：
将90mg(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且获得所产生的差向异构体：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-116：14mg，16％产率)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-117：15mg，17％产率)，皆呈白色固体状。
以下列出手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：5.0cm I.D.×25cm L
溶液浓度：11.5mg/ml
注射：10ml
移动相：己烷/EtOH＝50/50(V/V)
流动速率：60ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-116:ESI-MS(EI+,m/z):1054.0[M+Na]+.1H NMR(500MHz,,CDCl3)δ6.42-5.90(m,4H),5.79(ddd,J＝51.6,30.9,16.6Hz,1H),5.54-5.08(m,4H),5.03-4.88(m,1H),4.74(d,J＝61.6Hz,1H),4.28(dd,J＝57.6,29.0Hz,2H),3.99(dd,J＝26.5,6.0Hz,1H),3.89-3.55(m,12H),3.54-2.96(m,15H),2.87-2.47(m,4H),2.38-1.92(m,8H),1.86-1.67(m,11H),1.51-1.30(m,6H),1.14-0.80(m,18H),0.76-0.64(m,1H)。
I-117:ESI-MS(EI+,m/z):1053.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,,CDCl3)δ6.41-6.22(m,2H),6.13(dd,J＝15.1,10.1Hz,1H),5.94(dd,J＝22.3,10.8Hz,1H),5.52(dt,J＝18.4,9.2Hz,1H),5.41(d,J＝9.9Hz,1H),5.27(d,J＝5.3Hz,1H),5.12(dt,J＝46.3,5.6Hz,1H),4.83(s,1H),4.23-4.14(m,1H),3.91-3.52(m,15H),3.49-3.25(m,12H),3.23-3.03(m,3H),2.94-2.80(m,1H),2.65(ddd,J＝23.4,16.9,6.0Hz,3H),2.39-2.15(m,2H),2.16-1.85(m,5H),1.82-1.64(m,10H),1.47(dd,J＝26.8,15.9Hz,5H),1.38-1.16(m,6H),1.10(d,J＝6.8Hz,3H),1.07-1.03(m,3H),1.00(t,J＝6.8Hz,3H),0.94(d,J＝6.6Hz,3H),0.88(ddd,J＝34.0,16.9,5.0Hz,6H),0.71(dd,J＝23.9,11.8Hz,1H)。
实例22：合成(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-114)和(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-115)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮：
在20℃下搅拌依维莫司(1g，1.04mmol)、2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(4.05g，20.87mmol)和对甲苯磺酸(0.898g，5.22mmol)于THF(20mL)中的混合物2小时。然后将混合物倒入冷NaHCO3(30mL)中，用EtOAc(50mL×3)萃取，且合并的有机层用水和盐水洗涤，接着经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。所得残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝6:4)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(0.25g，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1142.4[M+Na]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.41-5.85(m,4H),5.78(s,1H),5.60-4.98(m,4H),4.22(t,J＝27.1Hz,1H),3.97(dd,J＝17.7,6.4Hz,1H),3.87-3.54(m,21H),3.51-3.03(m,15H),2.72-2.45(m,3H),2.28(s,6H),2.16-1.96(m,4H),1.89-1.56(m,10H),1.51-1.17(m,8H),1.17-0.81(m,18H),0.78-0.62(m,1H)。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-114)和(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-115)：
将1.5g(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷：DCM：EtOAc:MeOH＝8:8:3:1.2)纯化，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-114：300mg，20％产率)和(21E,23E,25E,26E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-47-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(51),26(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(I-115：563mg，38％产率)。
手性分析条件：
柱：CHIRALPAK IC-3(IC30CE-NJ008)
柱大小：0.46cm I.D.×15cm L
注射：20.0ul
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT
I-114:ESI-MS(EI+,m/z):1142.5[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42-5.91(m,4H),5.60-5.08(m,4H),4.19(dd,J＝43.8,32.6Hz,1H),3.96(dd,J＝27.1,6.3Hz,1H),3.85-3.54(m,21H),3.53-3.01(m,12H),2.93-2.80(m,1H),2.75-2.45(m,3H),2.30(d,J＝12.1Hz,1H),2.03(dd,J＝37.0,32.8Hz,13H),1.84-1.69(m,12H),1.50-1.18(m,5H),1.16-0.82(m,18H),0.71(dt,J＝23.8,12.1Hz,1H)。
I-115:ESI-MS(EI+,m/z):1142.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.36(dd,J＝14.7,10.9Hz,1H),6.23(dd,J＝14.7,10.6Hz,1H),6.10(dd,J＝15.0,10.5Hz,1H),5.92(dd,J＝45.2,10.5Hz,1H),5.61(s,1H),5.43(dd,J＝15.6,9.6Hz,2H),5.21(d,J＝5.4Hz,1H),5.10(dd,J＝9.9,5.9Hz,1H),4.20(d,J＝4.5Hz,1H),4.10-3.95(m,1H),3.84(d,J＝5.0Hz,1H),3.80-3.49(m,21H),3.48-3.13(m,12H),3.11-3.01(m,1H),2.73-2.50(m,3H),2.34-2.19(m,2H),2.01(ddd,J＝62.0,34.6,28.2Hz,12H),1.80-1.54(m,10H),1.51-1.37(m,5H),1.35-1.12(m,6H),1.05(dd,J＝6.4,5.0Hz,6H),0.97(d,J＝6.5Hz,3H),0.93(d,J＝6.6Hz,3H),0.91-0.82(m,6H),0.74-0.67(m,1H)。
实例23：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-(5-羟基苯氧基)-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-113)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-(5-羟基苯氧基)-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-113)：
向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)和戊-1,5-二醇(3mL)。在室温下搅拌所得溶液2小时，然后倒入NaHCO3水溶液中并且用EtOAc萃取。将有机层浓缩且通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O10％到72％产率)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-(5-羟基苯氧基)-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-113：150mg，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1008.0[M+Na]+.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ6.42-5.82(m,4H),5.58-5.37(m,2H),5.32-5.02(m,2H),4.78(t,J＝25.9Hz,1H),4.31-4.08(m,1H),4.00-3.53(m,5H),3.53-3.05(m,12H),2.99-2.80(m,2H),2.77-2.51(m,3H),2.48-2.23(m,2H),2.15-1.89(m,4H),1.89-1.16(m,32H),1.15-0.78(m,18H),0.65(dt,J＝24.1,12.0Hz,1H)。
实例24：合成(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-111)和(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-112)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮：
在25℃下向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(0.471g，2.73mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲醇(2.25g，10.9mmol)。在室温下搅拌所得混合物2小时，然后倒入冰冷NaHCO3水溶液中并且用EtOAc萃取。有机层接着经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。所得残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝7:3)纯化，获得呈白色固体状的(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(70mg，11％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1110.5[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41-5.82(m,4H),5.54-5.04(m,4H),4.72(d,J＝22.1Hz,1H),4.35-4.09(m,1H),3.92-3.51(m,18H),3.48-3.03(m,14H),2.99-2.51(m,5H),2.34(d,J＝13.4Hz,1H),2.04(d,J＝62.6Hz,4H),1.72(ddd,J＝43.8,30.6,28.9Hz,12H),1.53-1.17(m,10H),1.14-0.81(m,18H),0.70-0.62(m,1H)。
步骤2：合成(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-112)和(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-111)：
将(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(170mg)经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.5)纯化，(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-112：55mg，32％产率)和(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-45-(1,4,7,10-四氧杂环十二烷-2-基甲氧基)-72,73-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-111：11mg，6％产率)，皆呈白色固体状。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CE-OL002)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：100.0ul
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT CP-HPLC-06
I-112:ESI-MS(EI+,m/z):1109.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40-6.03(m,3H),5.90(dd,J＝37.1,9.8Hz,1H),5.54-5.06(m,4H),4.71(d,J＝22.4Hz,1H),4.20(t,J＝20.9Hz,1H),3.93-3.52(m,17H),3.50-3.24(m,11H),3.14-3.02(m,1H),2.93(dt,J＝31.2,12.0Hz,1H),2.63(tdd,J＝17.0,14.2,5.5Hz,3H),2.37-2.18(m,2H),1.94(ddd,J＝31.3,24.3,22.1Hz,5H),1.71(dt,J＝22.5,10.1Hz,11H),1.51-1.17(m,13H),1.15-0.81(m,18H),0.67(dd,J＝23.7,11.9Hz,1H)。
I-111:1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46-5.78(m,4H),5.75-5.14(m,4H),4.58(d,J＝31.9Hz,1H),4.21(d,J＝66.8Hz,1H),3.87-3.47(m,16H),3.43-3.14(m,10H),2.94(s,1H),2.80-2.54(m,3H),2.26(ddd,J＝110.3,80.5,42.6Hz,6H),1.81-1.49(m,18H),1.46-1.25(m,10H),1.18-0.77(m,18H),0.72-0.61(m,1H)。
实例25：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-109)和(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-110)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮：
在20℃下搅拌依维莫司(0.5g，0.522mmol)、2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(3.92g，26.09mmol)和对甲苯磺酸单水合物(0.45g，2.61mmol)于THF(10mL)中的混合物2小时。然后将混合物倒入冰冷NaHCO3(30mL)且用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，接着经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将所得残余物经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝6.5:3.5)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(0.155g，28％)。ESI-MS(EI+,m/z):1098.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42-5.87(m,4H),5.63-5.34(m,2H),5.32-5.00(m,2H),4.85(s,1H),4.35-4.09(m,1H),4.05-3.49(m,18H),3.49-3.01(m,14H),2.66(dddd,J＝31.3,24.8,21.2,13.0Hz,4H),2.33(d,J＝12.0Hz,2H),2.06(dd,J＝39.9,10.6Hz,3H),1.77-1.53(m,13H),1.51-1.14(m,10H),1.14-0.81(m,18H),0.71(dd,J＝23.8,11.9Hz,1H)。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-110)和(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-109)：
将170mg(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.8)纯化，获得(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-110：37mg，21％产率)和(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-109：33mg，19％产率)，皆呈白色固体状。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CE-OL002)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：30.0ul
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT CP-HPLC-06
I-110:ESI-MS(EI+,m/z):1098.0[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41-6.18(m,2H),6.12(dd,J＝15.0,10.3Hz,1H),5.93(dd,J＝33.7,10.6Hz,1H),5.47(ddd,J＝33.0,20.8,9.5Hz,2H),5.26(d,J＝5.6Hz,1H),5.13(dt,J＝21.8,10.8Hz,1H),4.88(s,1H),4.19(t,J＝9.3Hz,1H),3.94-3.52(m,19H),3.49-3.25(m,12H),3.24-3.02(m,3H),2.76(ddd,J＝26.2,16.6,10.3Hz,3H),2.57(dd,J＝17.0,6.3Hz,1H),2.29(t,J＝26.2Hz,2H),2.16-1.85(m,6H),1.74-1.53(m,10H),1.53-1.16(m,9H),1.15-1.01(m,8H),1.01-0.82(m,10H),0.71(dd,J＝23.9,12.0Hz,1H)。
I-109:ESI-MS(EI+,m/z):1098.0[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43-5.90(m,4H),5.62-5.02(m,5H),4.24(d,J＝63.6Hz,1H),3.97(dd,J＝21.5,6.8Hz,1H),3.86-3.50(m,18H),3.45-3.01(m,14H),2.73-2.46(m,3H),2.39-1.94(m,6H),1.91-1.69(m,10H),1.50-1.31(m,12H),1.16-0.85(m,18H),0.69(d,J＝11.7Hz,1H)。
实例26：合成(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮(I-107)：(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮(I-108)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮：
在20℃下搅拌雷帕霉素(2g，2.19mmol)、1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲醇(3.83g，15.31mmol)和对甲苯磺酸单水合物(1.88g，10.94mmol)于THF(10mL)中的溶液2小时。然后将混合物倒入冰冷NaHCO3(50mL)中并且用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，接着在真空中干燥且所得残余物经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝8:2)纯化，得到呈白色固体状的(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮(80mg，2.6％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1154.0[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.16(tdt,J＝40.0,33.8,20.7Hz,4H),5.54-5.03(m,4H),4.21(t,J＝22.5Hz,1H),3.90-3.46(m,22H),3.44-3.04(m,12H),2.74(dddd,J＝27.8,22.2,13.7,4.7Hz,5H),2.37-1.56(m,22H),1.50-1.16(m,8H),1.13-0.81(m,18H),0.67(dd,J＝23.8,11.9Hz,1H)。
步骤2：合成(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮(I-108)和(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮(I-107)：
将130mg(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.5)纯化，获得(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮(I-108：18mg，13％产率)和(30E,32E,34E,35E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-47-(1,4,7,10,13-五氧杂环十五烷-2-基甲氧基)-75,76-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-30,32,34(52),35(53)-四烯-54,55,56,57,58-五酮(I-107：16mg，12％产率)，皆呈白色固体状。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CE-OL002)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：100.0ul
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT CP-HPLC-06
I-108:ESI-MS(EI+,m/z):1153.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.31(dt,J＝
25.1,14.5Hz,2H),6.17-6.08(m,1H),5.95(s,1H),5.55-5.37(m,2H),5.26(s,1H),5.16(d,J＝4.4Hz,1H),4.71(d,J＝28.0Hz,1H),4.19(s,1H),3.93-3.48(m,25H),3.44-3.26(m,12H),3.20-3.03(m,1H),2.94(dd,J＝16.5,7.7Hz,1H),2.70(dd,J＝17.9,12.1Hz,3H),2.56(d,J＝17.0Hz,1H),2.33(d,J＝12.0Hz,2H),2.13-1.84(m,5H),1.81-1.67(m,8H),1.50-1.17(m,8H),1.14-0.81(m,20H),0.67(dd,J＝23.6,11.9Hz,1H)。
I-107:ESI-MS(EI+,m/z):1153.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40-5.95(m,4H),5.58-5.11(m,4H),4.30-4.12(m,1H),3.88-3.51(m,25H),3.42-3.12(m,12H),2.99-2.53(m,5H),2.50-1.90(m,5H),1.83-1.65(m,14H),1.44-1.30(m,8H),1.12-0.76(m,18H),0.74-0.62(m,1H)。
实例27：合成(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,52R)-40-[双(羟基甲基)磷酰基甲氧基]-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(I-106)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成双(羟基甲基)磷酰基甲醇：
在60℃下将Ba(OH)2(8.43g，49.23mmol)溶解于50mL蒸馏水中。将四(羟甲基)硫酸鏻(20g，49.23mmol)逐滴添加到溶液中，接着在60℃下搅拌4小时。在经由离心去除BaSO4之后，缓慢添加过氧化氢(30％溶液，98.45mmol)，且在室温下搅拌所得反应5小时。混合物用氯仿洗涤，接着通过在减压(6.5g，94％产率)下去除水获得的呈油状物的所要产物。ESI-MS(EI+,m/z):141.1[M+H]+.1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ5.35(bs,3H),3.97(s,6H)。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,52R)-40-[双(羟基甲基)磷酰基甲氧基]-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(I-106)：
在25℃下搅拌雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)、双(羟甲基)磷酰基甲醇(0.766g，5.47mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)于THF(20mL)中的混合物4小时。添加EtOAc(100mL)和水(50mL)。水层用EtOAc(100mL×2)萃取，且合并的有机层用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，接着经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。所得残余物经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝7:3)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,52R)-40-[双(羟基甲基)磷酰基甲氧基]-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(I-106：50mg，9％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1043.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.47-5.91(m,4H),5.58-5.08(m,4H),4.51-3.63(m,12H),3.59-3.16(m,14H),2.80(d,J＝138.1Hz,6H),2.38-1.91(m,8H),1.50-0.77(m,35H),0.67(d,J＝9.0Hz,1H)。
实例28：合成(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-104)和(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-105)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮：
依维莫司(5g，5.22mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(15mL)于THF(80mL)中的混合物用N2脱气，接着在50℃下加热。添加HND-8(600mg)，且在N2下在50℃下搅拌所得混合物4小时，接着过滤且用EtOAc稀释。在浓缩之后，残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O 0％至100％产率)纯化，得到呈白色固体状的(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(1.5g，27％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1068.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.40-5.85(m,4H),5.56-5.36(m,2H),5.21(ddd,J＝16.0,11.7,5.6Hz,2H),4.21(dd,J＝25.8,15.5Hz,2H),3.94-3.26(m,28H),3.25-3.02(m,4H),2.76-2.40(m,3H),2.34(d,J＝13.3Hz,2H),2.19-2.06(m,2H),2.01-1.67(m,13H),1.54-1.30(m,7H),1.15-0.81(m,18H),0.72(dd,J＝23.1,11.7Hz,1H)。
步骤2：合成(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-105)和(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-104)：
将120mg(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮经由制备型手性HPLC纯化，获得(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-105：17mg，20％产率)和(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-104：15mg，16％产率)，皆呈白色固体状。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：2.5cm I.D.×25cm L,10μm
样品溶液：14mg/ml于移动相中
注射：15ml
移动相：己烷/EtOH＝50/50(V/V)
流动速率：60ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-105:ESI-MS(EI+,m/z):1068.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.19(m,2H),6.13(dd,J＝15.1,10.0Hz,1H),5.91(dd,J＝33.0,10.5Hz,1H),5.56-5.38(m,2H),5.27(d,J＝5.0Hz,1H),5.15(dt,J＝15.2,7.6Hz,1H),4.76(s,1H),4.18(d,J＝5.6Hz,1H),3.93-3.25(m,30H),3.24-3.03(m,3H),2.72(dd,J＝16.7,5.6Hz,2H),2.57(dd,J＝16.8,6.5Hz,1H),2.34(d,J＝13.9Hz,2H),2.13-1.84(m,6H),1.82-1.67(m,7H),1.47(dd,J＝24.1,16.7Hz,4H),1.25(ddd,J＝24.1,20.2,10.0Hz,7H),1.14-0.81(m,18H),0.72(dd,J＝23.9,12.1Hz,1H)。
I-104:ESI-MS(EI+,m/z):1068.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.19(m,4H),5.56-5.36(m,2H),5.28-5.07(m,2H),4.83(d,J＝4.9Hz,4H),4.28(s,1H),4.21-4.09(m,1H),4.04-3.51(m,15H),3.46-3.29(m,11H),3.27-2.91(m,5H),2.76-2.42(m,3H),2.31(d,J＝11.3Hz,2H),2.18-1.70(m,13H),1.53-1.19(m,8H),1.16-0.84(m,18H),0.76-0.60(m,1H)。
实例29：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-9)和
(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-102)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮：
在15℃下向雷帕霉素(1g，1.09mmol)、2-[2-(2-羟甲基硫基)乙基硫基]乙醇(2g，10.94mmol)于THF(20mL)中的混合物中添加4-甲基苯磺酸单水合物(0.62g，3.28mmol)。在15℃下搅拌所得混合物17小时，接着用EtOAc(100mL)稀释且使用NaHCO3饱和水溶液(约50mL)调节到pH 9。接着浓缩有机层，并且通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝6:4)纯化残余物，得到呈黄色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(150mg，12％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1086.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.39-5.95(m,4H),5.54-5.19(m,4H),4.81-4.17(m,2H),3.96-3.73(m,4H),3.59-3.14(m,12H),2.96-2.55(m,14H),2.35-1.87(m,6H),1.81-1.59(m,13H),1.53-1.13(m,11H),1.16-0.84(m,18H),0.71-0.63(m,1H)。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-102)：
在0℃下向(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(170mg，0.16mmol)于甲醇(8mL)中的溶液中添加过硫酸氢钾(393mg，0.64mmol)。使所得混合物升温到10℃并且搅拌5小时。过滤反应物，接着经由反相色谱(C18，使用5-60％乙腈-水)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-102,30mg，17％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1150.8[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40-5.90(m,4H),5.57-5.08(m,5H),4.14(s,4H),3.68(tdd,J＝37.6,33.2,11.6Hz,11H),3.48-3.13(m,20H),2.95(s,2H),2.68(dd,J＝36.4,30.5Hz,5H),2.37-1.70(m,12H),1.31(dd,J＝78.6,46.8Hz,7H),1.13-0.81(m,18H),0.67(d,J＝11.9Hz,1H)。
步骤3：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-95)：
将90mg(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮经由制备型手性HPLC纯化，呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-95：15mg，16％产率)。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CD-NA012)
柱大小：0.46cm I.D.×15cm L
注射：10.0ul
移动相：EtOH＝100％
流动速率：0.5ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AD CP-HPLC-06
I-95:ESI-MS(EI+,m/z):1150.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.32(td,J＝
24.8,14.8Hz,2H),6.13(dd,J＝14.9,9.9Hz,1H),5.98(dd,J＝22.1,10.3Hz,1H),5.56-5.31(m,2H),5.26(d,J＝5.4Hz,1H),5.14(d,J＝4.1Hz,1H),4.86(s,1H),4.16(dd,J＝11.9,5.5Hz,3H),3.92-3.49(m,11H),3.44-3.17(m,15H),2.93(dd,J＝14.1,5.5Hz,1H),2.78-2.50(m,5H),2.36-2.17(m,2H),2.01(ddd,J＝21.5,18.0,9.0Hz,5H),1.84-1.65(m,11H),1.49-1.16(m,12H),1.14-0.82(m,14H),0.66(dd,J＝23.8,12.0Hz,1H)。
实例29：合成3-[2,2-双(2-氰基乙氧基甲基)-3-[[(21E,23E,25E,26E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,62R)-52,62-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-56,57,58,59,60-五氧代-76,77-二氧杂-67-氮杂三环三十六烷-21,23,25(54),26(55)-四烯-50-基]氧基]丙氧基]丙腈(I-101)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(1-甲基-2,6,7-三氧杂二环[2.2.2]辛-4-基)甲醇：
在回流下向2,2-双(羟甲基)丙烷-1,3-二醇(20g，146.9mmol)和4-甲基苯磺酸(0.25g，1.47mmol)于甲苯(200mL)中的溶液中添加1,1,1-三乙氧基乙烷(27mL，146.9mmol)。然后在130℃下搅拌反应物直到溶液变澄清为止，添加几滴TEA并且在仍热的同时过滤反应物。冷却滤液，接着浓缩，得到呈无色晶体状的(1-甲基-2,6,7-三氧杂二环[2.2.2]辛-4-基)甲醇(20g，85％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ4.79(t,J＝5.3Hz,1H),3.85(s,6H),3.22(d,J＝5.3Hz,2H),1.29(s,3H)。
步骤2：合成4-(苯甲氧基甲基)-1-甲基-2,6,7-三氧杂二环[2.2.2]辛烷：
将固体(1-甲基-2,6,7-三氧杂二环[2.2.2]辛-4-基)甲醇(1.5g，9.37mmol)添加到精细供电的KOH(2.47g，44mmol)和BnBr(1.86g，10.86mmol)于DMSO(5mL)中的搅拌悬浮液中。在室温下搅拌所得溶液1小时，然后倒入冰水中并且用EtOAc萃取，干燥，过滤并且浓缩。残余物经由硅胶色谱(EtOAc:PE＝1:10)纯化，得到呈淡黄色固体状的4-(苯甲氧基甲基)-1-甲基-2,6,7-三氧杂二环[2.2.2]辛烷(1.5g，64％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):251.1[M+H]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.36-7.25(m,5H),4.45(s,2H),4.01(s,6H),3.19(s,2H),1.45(s,3H)。
步骤3：合成2-(苯甲氧基甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇：
在室温下搅拌4-(苯甲氧基甲基)-1-甲基-2,6,7-三氧杂二环[2.2.2]辛烷(2g，8mmol)和氯化氢(2mL，2M于水中)于THF(20mL)中的溶液过夜，接着通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝1:3)浓缩和纯化，得到呈浓黄色油状的2-(苯甲氧基甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(1.3g，72％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):227.1[M+H]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.36-7.26(m,5H),4.48(s,2H),3.68(s,6H),3.46(s,2H),3.40(bs,3H)。
步骤4：合成3-[2-(苯甲氧基甲基)-3-(2-氰基乙氧基)-2-(2-氰基乙氧基甲基)丙氧基]丙腈：
向2-(苯甲氧基甲基)-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(4.9g，21.66mmol)和KOH(98mg,1.75mmol)的混合物中缓慢添加丙烯腈(11.49g，216.56mmol)，确保内部反应温度不超过30℃。然后在室温下搅拌混合物过夜，用1N HCl水溶液中和且用EtOAc(200mL)萃取。合并的有机层用水洗涤两次，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，获得呈黄色固体状的3-[2-(苯甲氧基甲基)-3-(2-氰基乙氧基)-2-(2-氰基乙氧基甲基)丙氧基]丙腈(7g，84％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):386.3[M+H]+。
步骤5：合成3-[2,2-双(2-氰基乙氧基甲基)-3-羟基-丙氧基]丙腈：
向3-[2-(苯甲氧基甲基)-3-(2-氰基乙氧基)-2-(2-氰基乙氧基甲基)丙氧基]丙腈(5g，12.97mmol)于MeOH(50mL)中的溶液中添加Pd/C(1.59g)。在室温下在氢气的气囊下搅拌混合物过夜，接着通过硅藻土垫过滤且用乙醇洗涤。浓缩所得溶液以提供呈无色油状的3-[2,2-双(2-氰基乙氧基甲基)-3-羟基-丙氧基]丙腈(2.6g，68％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):296.2[M+H]+。
步骤6：合成3-[2,2-双(2-氰基乙氧基甲基)-3-[[(21E,23E,25E,26E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,62R)-52,62-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-56,57,58,59,60-五氧代-76,77-二氧杂-67-氮杂三环三十六烷-21,23,25(54),26(55)-四烯-50-基]氧基]丙氧基]丙腈(I-101)：
在-40℃下向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)于DCM(30mL)中的溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(2.4mL)。在-40℃下搅拌反应物10分钟，然后添加3-[2,2-双(2-氰基乙氧基甲基)-3-羟基-丙氧基]丙腈(0.48g，1.64mmol)。在再搅拌1小时之后，将反应物用DCM(3ml)稀释且倒入冷NaHCO3水溶液中。有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝8:2)纯化残余物，得到呈白色固体状的3-[2,2-双(2-氰基乙氧基甲基)-3-[[(21E,23E,25E,26E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,62R)-52,62-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-56,57,58,59,60-五氧代-76,77-二氧杂-67-氮杂三环三十六烷-21,23,25(54),26(55)-四烯-50-基]氧基]丙氧基]丙腈(I-101：80mg，12％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1198.8[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42-5.87(m,4H),5.35(ddd,J＝120.9,41.2,32.5Hz,4H),4.24(dd,J＝29.5,16.4Hz,2H),3.98(d,J＝4.2Hz,1H),3.87-3.60(m,7H),3.56-3.01(m,18H),2.88(d,J＝59.1Hz,2H),2.74-2.42(m,9H),2.34(s,2H),2.23-1.84(m,5H),1.82-1.65(m,13H),1.53-1.22(m,10H),1.16-0.84(m,18H),0.72-0.61(m,1H)。
实例30：合成(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-100)和
(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46R,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-64)和(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46S,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-65)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成7-((2-(苯甲氧基)乙氧基)甲基)-1,13-二苯基-2,5,9,12-四氧杂十三烷：
在0℃下向2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(2g，18.85mmol)于THF(30mL)中的溶液中添加氢化钠(9.05g，376.93mmol)。并且将反应物加热到50℃持续1小时，然后冷却到室温。2-接着添加溴乙氧基甲基苯(40.54g，188.47mmol)，且混合物加热到65℃持续17小时。反应物用冰水(50mL)淬灭，然后用EtOAc(50mL×2)萃取。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，干燥，过滤，浓缩且接着通过硅胶色谱(PE:EtOAc＝20:1)纯化，得到呈无色液体状的2-[3-(2-苯甲基氧基乙氧基)-2-(2-苯甲基氧基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基甲基苯(5g，52％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):509.0[M+H]+。
步骤2：合成2,2'-(2-((2-羟基乙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基)二乙醇：
向2-[3-(2-苯甲基氧基乙氧基)-2-(2-苯甲基氧基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基甲基苯(2g，3.93mmol)于MeOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(2.41g)。在室温下在氢的气囊下搅拌混合物过夜。然后将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且接着用乙醇洗涤。在减压下浓缩所得溶液，得到2,2'-((2-((2-羟基乙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(乙-1-醇)(0.92g，98％产率)。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ3.65(dd,J＝5.7,3.4Hz,6H),3.53-3.48(m,12H),2.22-2.14(m,1H)。
步骤3：合成(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-100)：
向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和4-甲基苯磺酸(0.47g，2.73mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙醇(1.3g，5.47mmol)。在25℃下搅拌混合物2小时，然后倒入冰冷NaHCO3水溶液中并且用EtOAc萃取。有机层经干燥、过滤且浓缩。残余物通过反相色谱(C18,CH3CN:H2O：7:3)，接着硅胶色谱(DCM:MeOH＝15:1)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-100,150mg，25％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1142.0[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.21(dddd,J＝32.0,27.8,21.3,10.2Hz,3H),6.05-5.84(m,1H),5.57-5.36(m,2H),5.29-4.97(m,2H),4.83(s,1H),4.20(dd,J＝36.3,30.2Hz,1H),4.01-3.66(m,6H),3.62-3.22(m,29H),3.00-2.43(m,9H),2.36-1.85(m,9H),1.77-1.51(m,6H),1.52-1.17(m,9H),1.16-0.79(m,18H),0.65(dt,J＝21.9,11.0Hz,1H)。
步骤4：合成(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46S,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-65)和(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46R,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-64)：
将140mg(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:1)纯化，获得(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46S,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-65：35.2mg，25％产率)和(21E,23E,25E,26E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46R,47S,48R,49R,59R)-48,59-二羟基-46-[2-[3-(2-羟基乙氧基)-2-(2-羟基乙氧基甲基)丙氧基]乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-71,72-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-21,23,25(50),26(51)-四烯-52,53,54,55,56-五酮(I-64:16mg，11％产率)，皆呈白色固体状。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：2.5cm I.D.×25cm L
溶液浓度：1.4mg/ml
注射：7ml
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：30ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-65:ESI-MS(EI+,m/z):1142.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.18(m,2H),6.13(dd,J＝14.9,10.1Hz,1H),5.93(dd,J＝23.9,11.0Hz,1H),5.54-4.89(m,6H),4.80(s,1H),4.18(d,J＝6.0Hz,1H),3.90(s,1H),3.80-3.66(m,5H),3.63-3.48(m,11H),3.47-3.21(m,11H),2.99-2.47(m,6H),2.38-2.15(m,3H),2.14-1.85(m,5H),1.84-1.64(m,12H),1.46(dd,J＝28.7,18.7Hz,5H),1.35-1.15(m,7H),1.15-0.81(m,18H),0.66(dd,J＝23.7,11.8Hz,1H)。
I-64:ESI-MS(EI+,m/z):1142.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.34-5.86(m,4H),5.41(ddd,J＝54.0,26.4,18.2Hz,2H),5.16(dd,J＝9.6,5.0Hz,2H),4.88(s,1H),4.20(d,J＝11.0Hz,1H),4.14-4.02(m,1H),3.93(d,J＝3.9Hz,1H),3.87-3.72(m,1H),3.64(d,J＝4.4Hz,4H),3.57-3.36(m,14H),3.36-3.22(m,8H),3.21-3.11(m,1H),2.92-2.33(m,8H),2.32-2.11(m,3H),2.11-1.85(m,5H),1.82-1.63(m,11H),1.48-1.25(m,9H),1.09-0.72(m,18H),0.66-0.50(m,1H)。
实例31：合成(21E,23E,25E,26E,48R,49S,50R,51R,53S,55S,58S,59R,60R,69R)-59,69-二羟基-57-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-58-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-60-甲氧基-48,49,50,51,61,62-六甲基-80,81-二氧杂-70-氮杂三环三十六烷-21,23,25(61),26(62)-四烯-63,64,65,66,67-五酮(I-98)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,48R,49S,50R,51R,53S,55S,58S,59R,60R,69R)-59,69-二羟基-57-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-58-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-60-甲氧基-48,49,50,51,61,62-六甲基-80,81-二氧杂-70-氮杂三环三十六烷-21,23,25(61),26(62)-四烯-63,64,65,66,67-五酮(I-98)：
向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和4-甲基苯磺酸(0.47g，2.73mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(2.51g，5.47mmol)并且在25℃下搅拌混合物2小时。然后将反应物倒入NaHCO3水溶液中，然后用EtOAc萃取所述水溶液。有机层接着经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过反相色谱法纯化残余物(CH3CN:纯水＝7:3)，得到呈稠油状的(21E,23E,25E,26E,48R,49S,50R,51R,53S,55S,58S,59R,60R,69R)-59,69-二羟基-57-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-58-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-60-甲氧基-48,49,50,51,61,62-六甲基-80,81-二氧杂-70-氮杂三环三十六烷-21,23,25(61),26(62)-四烯-63,64,65,66,67-五酮(I-98：115mg，15％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1362.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40-5.83(m,4H),5.55-5.35(m,2H),5.32-5.03(m,2H),4.31-4.10(m,1H),3.93(dd,J＝70.7,6.3Hz,1H),3.78-3.15(m,53H),2.97-2.41(m,5H),2.32(s,2H),2.15-1.55(m,18H),1.52-1.16(m,10H),1.14-0.81(m,18H),0.73-0.58(m,1H)。
实例32：合成N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-81)和N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-74)和N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-75)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-81)：
在0℃下向依维莫司(0.5g，0.52mmol)于THF(10mL)中的脱气溶液中添加对甲苯磺酸(0.45g，2.61mmol)和N-甲基氨基甲酸2-羟乙酯(2.80mL)。在0℃下在N2下搅拌所得混合物0.5小时，然后升温23℃并且搅拌3小时。将混合物倒入用EtOAc(30mL)萃取的饱和NaHCO3(40mL)中。有机层用水(30mL×2)、盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝10:1)纯化，接着经由反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝7:3)额外纯化，得到呈白色固体状的N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-81：100mg，18％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1067.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.50-5.91(m,4H),5.58-4.97(m,4H),4.70(s,1H),4.51(d,J＝40.4Hz,1H),4.33-4.02(m,3H),3.93-3.62(m,6H),3.61-3.00(m,13H),2.86-2.46(m,6H),2.40-2.22(m,2H),2.18-1.69(m,22H),1.58-1.25(m,7H),1.24-0.79(m,18H),0.79-0.62(m,1H)。
步骤2：合成N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-75)和N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-74)：
将120mg 2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙基N-甲基氨基甲酸酯经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.6)纯化，得到N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-75：18mg，15％产率)和N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-42-基]氧基]乙酯(I-74：20mg，16％产率)，皆呈白色固体状。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：5.0cm I.D.×25cm L
溶液浓度：2.4mg/ml
注射：8ml
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：30ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-75:ESI-MS(EI+,m/z):1067.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.33(dt,J＝24.4,14.6Hz,2H),6.13(dd,J＝15.0,9.9Hz,1H),5.93(dd,J＝24.5,10.6Hz,1H),5.52(dd,J＝15.0,8.8Hz,1H),5.41(d,J＝10.2Hz,1H),5.35(t,J＝4.7Hz,1H),5.27(d,J＝5.3Hz,1H),5.16(d,J＝4.9Hz,1H),4.75(s,1H),4.29-4.07(m,3H),3.93-3.63(m,6H),3.62-3.47(m,3H),3.46-3.25(m,11H),3.23-3.01(m,3H),2.79(d,J＝4.9Hz,3H),2.74-2.62(m,2H),2.57(dd,J＝16.5,6.4Hz,1H),2.34(d,J＝12.7Hz,2H),2.25-2.19(m,1H),2.08(s,1H),1.93(dd,J＝30.0,22.7Hz,5H),1.83-1.65(m,7H),1.55-1.42(m,5H),1.28(s,6H),1.15-0.83(m,18H),0.72(dd,J＝23.6,12.0Hz,1H)。
I-74:ESI-MS(EI+,m/z):1067.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.50-5.95(m,4H),5.60-4.96(m,5H),4.59-3.96(m,4H),3.95-3.66(m,6H),3.64-2.97(m,15H),2.95-2.65(m,6H),2.59(d,J＝11.0Hz,1H),2.51-1.95(m,5H),1.78(q,J＝6.8Hz,12H),1.55-1.29(m,11H),1.15-0.83(m,18H),0.69(dd,J＝23.6,11.5Hz,1H)。
实例33：合成(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-63)和(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39R,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-57)和(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-58)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成二苯甲酸(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5-四羟基己烷-1,6-二基酯：
在0℃下向(2R,3R,4R,5R)-己烷-1,2,3,4,5,6-六醇(10.0g，54.89mmol，1.0当量)于吡啶(25.39g，548.9mmol，10.0当量)中的溶液中添加氯化苄(7.72g，54.89mmol，1.0当量)。然后在室温下搅拌反应混合物16小时，用H2O(200mL)稀释且用DCM(150mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，且通过反相色谱(CH3CN:H2O＝40％～60％产率)纯化，得到呈白色固体状的二苯甲酸(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5-四羟基己烷-1,6-二基酯(4.7g，22％产率)。
ESI-MS(EI+,m/z):391.1[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.07-8.00(m,4H),7.66(t,J＝7.4Hz,2H),7.54(t,J＝7.7Hz,4H),5.09(d,J＝6.1Hz,2H),4.60-4.48(m,4H),4.28(dd,J＝11.2,6.2Hz,2H),3.87(dt,J＝6.1,5.3Hz,2H),3.77(t,J＝8.6Hz,2H)。
步骤2：合成((4R,4'R,5R,5'R)-2,2,2',2'-四甲基-4,4'-二(1,3-二氧戊环)-5,5'-二基)双(亚甲基)二苯甲酸酯和((4R,4aR,8R,8aR)-2,2,6,6-四甲基四氢-[1,3]二氧杂环己烯基[5,4-d][1,3]二氧杂环二烯-4,8-二基)双(亚甲基)二苯甲酸酯：
在28℃下搅拌[(2R,3R,4R,5R)-6-苯甲酰氧基-2,3,4,5-四羟基-己基]苯甲酸酯(5g,12.81mmol)和对TsOH(1.22g，6.40mmol)于2,2-二甲氧基丙烷(50mL)中的溶液10小时。用EtOAc(100mL×3)萃取所得混合物。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱(EtOAc:PE＝1:10到1:2)纯化，得到[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(苯甲酰氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲基苯甲酸酯(2.4g，40％产率)和[(4R,4aR,8R,8aR)-4-(苯甲酰氧基甲基)-2,2,6,6-四甲基-4,4a,8,8a-四氢-[1,3]二氧杂环己二基[5,4-d][1,3]二氧杂环二烯-8-基]甲基苯甲酸酯1.2g，20％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):493.2[M+Na]+。
苯甲酸[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(苯甲酰氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲酯：1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.98(dd,J＝11.6,4.5Hz,4H),7.67(dd,J＝11.7,4.3Hz,2H),7.55(t,J＝7.7Hz,4H),4.42-4.33(m,4H),4.08-3.94(m,4H),1.33(s,6H),1.26(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.52,133.44,129.47,129.15,128.78,100.61,67.89,67.60,64.25,24.24,23.45。
苯甲酸[(4R,4aR,8R,8aR)-4-(苯甲酰氧基甲基)-2,2,6,6-四甲基-4,4a,8,8a-四氢-[1,3]二氧杂环己二烯基[5,4-d][1,3]二氧杂环己烯-8-基]甲酯：1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.03-7.92(m,4H),7.67(dd,J＝10.6,4.3Hz,2H),7.54(t,J＝7.7Hz,4H),4.57(dd,J＝11.1,5.9Hz,2H),4.53-4.44(m,4H),4.39(dd,J＝11.5,7.3Hz,2H),1.43(s,6H),1.29(s,6H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ165.45,133.42,129.52,129.17,128.75,108.39,74.49,73.77,64.17,27.04,25.27。
步骤3：合成((4R,4'R,5R,5'R)-2,2,2',2'-四甲基-4,4'-二(1,3-二氧戊环)-5,5'-二基)二甲醇：
在29℃下将[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(苯甲酰氧基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲基苯甲酸酯(8.5g，18.07mmol)和K2CO3(7.48g，54.20mmol)于THF(25mL)和CH3OH(25mL)中的混合物搅拌18小时。浓缩反应物且接着经由硅胶色谱(EtOAc/PE＝1:1)纯化，获得呈白色固体状的[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(羟基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲醇(3.2g，68％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):285.1[M+Na]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.73(t,J＝5.8Hz,2H),3.71(t,J＝5.6Hz,2H),3.55-3.35(m,6H),1.29(s,6H),1.23(s,6H)。
步骤4：合成(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,49R,50R,61R)-49,61-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-[[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(羟基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]-50-甲氧基-34,35,36,37,51,52-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-25,27,29(51),30(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮：
在-40℃下向雷帕霉素(0.5g，0.547mol)于DCM(16mL)中的溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(1.2mL)。在搅拌10分钟之后，添加[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(羟基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲醇(0.43g，1.64mmol)，且将反应物在-30℃下搅拌1.5小时，接着用DCM(10mL)稀释且倒入冷NaHCO3水溶液中。有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。所得残余物经由反相色谱(C18，CH3CN/H2O＝7:3)纯化，得到呈白色固体状的(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,49R,50R,61R)-49,61-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-[[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(羟基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]-50-甲氧基-34,35,36,37,51,52-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-25,27,29(51),30(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(150mg，24％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1166.4[M+Na]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.52-5.69(m,4H),5.48-5.10(m,4H),4.51(d,J＝40.1Hz,1H),4.23(s,1H),3.94(dd,J＝26.3,5.8Hz,4H),3.52-3.12(m,13H),2.98-2.45(m,8H),2.41-2.17(m,2H),2.00(s,3H),1.76(dt,J＝29.0,14.4Hz,15H),1.50-1.31(m,24H),1.14-0.77(m,18H),0.62(d,J＝12.1Hz,1H)。
步骤5：合成(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-63)：
向(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,49R,50R,61R)-49,61-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-[[(4R,5R)-5-[(4R,5R)-5-(羟基甲基)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]-50-甲氧基-34,35,36,37,51,52-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-25,27,29(51),30(52)-四烯-53,54,55,56,57-五酮(500mg，0.437mmol)于1,4-二氧杂环己烷(6mL)和H2O(6mL)的溶液中添加Dowex 50W-X8(1.0g)并且在50℃下搅拌所得混合物24小时，接着通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝4:6)过滤和纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-63：70mg，15％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1086.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.51-5.91(m,4H),5.61-4.98(m,5H),4.24(d,J＝22.2Hz,1H),3.78(dd,J＝34.1,28.6Hz,9H),3.59-3.17(m,19H),3.00-2.49(m,5H),2.38-2.22(m,1H),2.05(d,J＝33.7Hz,3H),1.82-1.68(m,11H),1.29(ddd,J＝46.4,34.9,8.8Hz,12H),1.09-0.77(m,18H),0.70-0.56(m,1H)。
步骤6：合成(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-58)和(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39R,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-57)：
将90mg(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:1)纯化，得到(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-58：15mg，17％)和(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39R,40S,41R,42R,55R)-41,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-39-[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-五羟基己氧基]-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-45,46,47,48,49-五酮(I-57：8mg，9％产率)，皆呈白色固体状。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC-3(IC30CE-NJ008)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：50.0ul
移动相：己烷/EtOH＝50/50(V/V)
流动速率：0.8ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT CP-HPLC-06
I-58:ESI-MS(EI+,m/z):1086.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.45-5.93(m,4H),5.59-4.88(m,5H),4.23(d,J＝26.4Hz,1H),4.00-3.48(m,14H),3.46-3.23(m,11H),2.93(d,J＝6.8Hz,2H),2.79-2.49(m,3H),2.38-1.84(m,8H),1.66(t,J＝14.8Hz,9H),1.50-1.17(m,11H),1.16-0.79(m,18H),0.64(dd,J＝23.7,11.8Hz,1H)。
I-57:ESI-MS(EI+,m/z):1086.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.49-5.98(m,4H),5.52-5.11(m,5H),4.32-4.23(m,1H),4.08-3.11(m,14H),3.05-2.43(m,9H),2.37-1.95(m,8H),1.91-1.53(m,17H),1.46-0.54(m,30H)。
实例34：合成(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-78)和(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,49R,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-72)和(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,49S,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-73)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙醇：
在0℃下向2-(2-羟基乙氧基)乙醇(50g，471.2mmol)于吡啶(49.6mL)中的溶液中添加叔丁基-氯-二苯基硅烷(30g，109.2mmol)。在室温下搅拌所得溶液1小时，然后倒入水(300mL)中并且用EtOAc(300mL×3)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过硅胶色谱(EtOAc:PE＝1:8)纯化所得残余物，得到呈无色油状的2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙醇(29.9g，80％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):367.2[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74-7.64(m,4H),7.46-7.33(m,6H),3.81(t,J＝5.2Hz,2H),3.73-3.66(m,2H),3.63-3.54(m,4H),2.32(d,J＝3.5Hz,1H),1.06(s,9H)。
步骤2：合成三氟甲烷磺酸2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙酯：
在N2下在0℃下，向2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙醇(7.6g，22mmol)和DIPEA(5.76mL)于DCM(50mL)中的溶液中添加三氟甲基磺酰基1,1-二氟乙烷磺酸酯(3.92mL)。混合物接着用DCM(150mL)稀释，用饱和NaHCO3(150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)洗涤。有机层接着经无水Na2SO4干燥，过滤且在真空下浓缩，得到呈棕色油状的三氟甲烷磺酸2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙酯(10.21g，97％产率)，其不经任何进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69-7.66(m,4H),7.43-7.36(m,6H),4.58(t,J＝4.8Hz,2H),3.83-3.80(m,4H),3.64-3.61(t,J＝5.6Hz,2H),1.05(s,9H)。
步骤3：合成(35E,37E,39E,40E,50R,51S,52R,53R,55S,57S,59S,60S,61R,62R,71R)-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-61,71-二羟基-59,62-二甲氧基-50,51,52,53,63,64-六甲基-81,82-二氧杂-73-氮杂三环三十六烷-35,37,39(63),40(64)-四烯-65,66,67,68,69-五酮：
在60℃下搅拌依维莫司(2g，2.09mmol)、三氟甲烷磺酸2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙酯(9.95g，20.87mmol)和N-乙基-N-异丙基-丙烷-2-胺(5.82mL)于甲苯(50mL)中的混合物18小时，接着倒入冰冷NaHCO3(60mL)中。用EtOAc(40mL)萃取反应混合物，且有机层用水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，接着经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱(PE:EA＝5:1到3:1)纯化，得到呈黄色固体状的(35E,37E,39E,40E,50R,51S,52R,53R,55S,57S,59S,60S,61R,62R,71R)-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-61,71-二羟基-59,62-二甲氧基-50,51,52,53,63,64-六甲基-81,82-二氧杂-73-氮杂三环三十六烷-35,37,39(63),40(64)-四烯-65,66,67,68,69-五酮(1.7g，63％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1307.5[M+Na]+。
步骤4：合成(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44,47-二甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮：
向(35E,37E,39E,40E,50R,51S,52R,53R,55S,57S,59S,60S,61R,62R,71R)-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-61,71-二羟基-59,62-二甲氧基-50,51,52,53,63,64-六甲基-81,82-二氧杂-73-氮杂三环三十六烷-35,37,39(63),40(64)-四烯-65,66,67,68,69-五酮(322mg，0.251mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加HF吡啶(248.5mg，2.51mmol)。在室温下搅拌所得溶液3小时，然后倒入NaHCO3饱和水溶液中并且用EtOAc萃取。将有机层浓缩且经由硅胶色谱(丙酮:PE＝1:3)纯化，得到呈浅黄色固体状的(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44,47-二甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(114mg，44％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1069.3[M+Na]+。
步骤5：合成(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-78)：
在20℃下将(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44,47-二甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(0.95g，0.908mmol)、2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(2mL)和对甲苯磺酸(0.78g，4.54mmol)于THF(20mL)中的混合物搅拌2小时。将反应物倒入异冷饱和NaHCO3水溶液(30mL)中并且用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，接着经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝6.5:1)浓缩和纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-78：0.317g，30％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1186.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.39-5.95(m,4H),5.59-5.34(m,2H),5.26-5.09(m,2H),4.81(s,1H),4.29-4.15(m,1H),4.00-3.49(m,28H),3.48-3.34(m,9H),3.16-3.0(m,4H),2.80-2.52(m,3H),2.34-2.20(m,2H),2.07-1.88(m,4H),1.79-1.72(m,5H),1.66(s,3H),1.51-1.38(m,4H),1.37-1.22(m,7H),1.21-0.84(m,20H),0.76-0.64(m,1H)。
步骤6：合成(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,49S,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-73)和(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,49R,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-72)：
将330mg(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮经由制备型手性HPLC纯化，和且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:1)纯化，得到(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,49S,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-73：77mg，23％产率)和(21E,23E,25E,26E,40R,41S,42R,43R,45S,47S,49R,50S,51R,52R,61R)-51,61-二羟基-49-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-50-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-52-甲氧基-40,41,42,43,53,54-六甲基-72,73-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-21,23,25(53),26(54)-四烯-55,56,57,58,59-五酮(I-72：50mg，15％产率)，皆呈白色固体状。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：2.5cm I.D.×25cm L
溶液浓度：6.5mg/ml
注射：7ml
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：40ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-73:ESI-MS(EI+,m/z):1186.6[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.06(m,3H),5.92(dd,J＝29.5,10.8Hz,1H),5.55-5.37(m,2H),5.26(d,J＝5.2Hz,1H),5.14(d,J＝4.3Hz,1H),4.80(s,1H),4.23(d,J＝24.9Hz,1H),3.90(s,1H),3.81-3.22(m,36H),3.19-2.99(m,3H),2.78-2.48(m,3H),2.33(d,J＝12.4Hz,2H),2.10-1.87(m,5H),1.76-1.55(m,13H),1.46(s,4H),1.39-1.18(m,5H),1.15-0.81(m,18H),0.71(dd,J＝23.5,11.7Hz,1H)。
I-72:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-5.92(m,4H),5.61-5.04(m,5H),4.24(d,J＝53.9Hz,2H),3.99(dd,J＝13.8,6.9Hz,1H),3.83-2.90(m,36H),2.75-2.46(m,3H),2.16(ddd,J＝109.4,53.2,24.9Hz,7H),1.86-1.69(m,7H),1.52-1.16(m,17H),1.15-0.80(m,18H),0.66(dd,J＝23.9,11.6Hz,1H)。
实例35：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-91)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯：
在0℃下在N2气氛下，向氢化钠(12.49g，520.5mmol)于DMF(150mL)中的浆液中添加含2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙醇(5g，34.7mmol)的DMF(10mL)。搅拌混合物1小时，然后逐滴添加2-溴乙氧基甲基苯(18.66g，86.75mmol)。在室温下搅拌混合物20小时，接着用水(50mL)淬灭并且用EtOAc(80mL)萃取。有机层用水(50mL×3)、盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物经由硅胶色谱(PE:EA＝25:1到20:1)纯化，得到呈无色液体状的2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(8.1g，84％产率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.37-7.26(m,5H),4.57(s,2H),3.90(q,J＝8.8Hz,2H),3.79(dd,J＝5.6,3.5Hz,2H),3.71-3.61(m,6H)。
步骤2：合成2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]：
向2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(0.5g，1.8mmol)于CH3OH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(0.43g)且在H2气氛下在室温(20℃)下搅拌反应物20小时。经由过滤去除Pd/C，且所得滤液浓缩且通过硅胶色谱(DCM:CH3OH＝50:1)纯化，得到呈无色油状的2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.30g，89％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.91(q,J＝8.7Hz,2H),3.80(dd,J＝5.6,3.4Hz,2H),3.75(d,J＝4.0Hz,2H),3.70(dd,J＝5.5,3.5Hz,2H),3.62(dd,J＝5.2,3.9Hz,2H),2.23(t,J＝5.7Hz,1H(OH)).19F NMR(376MHz,CDCl3,(三氟甲基苯作为标准)δ-74.33(t,J＝8.8Hz)。
步骤3：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮：
在0℃下向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-五酮(0.1g，0.11mmol)于THF(5mL)中的脱气溶液添加对甲苯磺酸(94mg，0.547mmol)和2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.2g，1.09mmol)。在23℃下在N2下搅拌所得混合物5小时，然后倒入饱和NaHCO3(40mL)中，然后用EtOAc(30mL)萃取。有机层用水(30mL×2)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝0％到65％产率)纯化残余物，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-91：30mg，26％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1093.5[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.38-5.90(m,4H),5.46-5.05(m,4H),4.5-4.4(m,1H),4.21-4.11(m,2H),3.91-3.52(m,6H),3.34-3.25(m,8H),3.07(s,1H),2.84-2.59(m,5H),2.31-1.91(m,6H),1.77-1.54(m,22H),1.43-1.19(m,10H),1.04-0.80(m,16H),0.60(q,J＝12Hz,1H)。
实例36：合成(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-92)和
(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-90)和(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-89)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成三氟甲烷磺酸2-甲氧基乙酯：
将2-甲氧基乙醇(3g，39.42mmol)和DIPEA(10.30mL，59.14mmol)于DCM(60mL)中的溶液在N2下冷却到0℃，且逐滴添加三氟甲磺酸酐(7.28mL，43.37mmol)。在0℃下搅拌混合物2小时，接着用DCM(50mL)稀释。有机层用饱和NaHCO3(50mL)、水(50mL)、盐水(50mL)干燥，接着经无水Na2SO4干燥，过滤，且在真空下浓缩，获得呈棕色油状的三氟甲烷磺酸2-甲氧基乙酯。所述产物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.62-4.58(t,J＝4.4Hz 2H),3.70-3.65(t,J＝4.4Hz,2H),3.39(s,3H)。
步骤2：合成(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-41,44-二甲氧基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-32,33,34,35,45,46-六甲基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-23,25,27(45),28(46)-四烯-47,48,49,50,51-五酮：
在58℃下搅拌雷帕霉素(2g，2.19mmol)、三氟甲烷磺酸2-甲氧基乙酯和N-乙基-N-异丙基-2-胺(6.48mL，37.19mmol)于甲苯(60mL)中的混合物18小时，接着用EtOAc(100mL)稀释，倒入冰冷饱和NaHCO3(150mL)，用冰冷水(250mL)、盐水(200mL)洗涤两次，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质经由硅胶色谱(丙酮:PE＝1:6)纯化，得到呈淡棕色固体状的(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-41,44-二甲氧基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-32,33,34,35,45,46-六甲基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-23,25,27(45),28(46)-四烯-47,48,49,50,51-五酮(0.53g，25％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):994.5[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.11(m,3H),5.96(m,1H),5.58-5.40(m,2H),5.29-5.14(m,2H),4.80(s,1H),4.18(m,1H),3.75-3.64(m,5H),5.59-3.50(m,3H),3.46-3.43(m,4H),3.38-3.30(m,6H),3.17-3.05(m,4H),2.80-2.56(m,3H),2.06-1.92(m,4H),1.86-1.75(m,6H),1.69-1.59(m,10H),1.51-1.42(m,5H),1.31-1.15(m,8H),1.11-1.04(m,6H),1.00-0.83(m,10H),0.72(q,J＝12Hz,1H)。
步骤3：合成(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-92)：
将(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-41,44-二甲氧基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-32,33,34,35,45,46-六甲基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-23,25,27(45),28(46)-四烯-47,48,49,50,51-五酮(0.45g，0.463mmol)于THF(25mL)中的溶液用N2脱气，在0℃下添加4-甲基苯磺酸(0.4g，2.31mmol)，随后添加2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(4mL)。在0℃下在N2下搅拌所得混合物0.5小时，接着在25℃下搅拌3小时。将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(50mL)中，用EtOAc(80mL×2)萃取，有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤且在真空下浓缩。残余物经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O 10～75％产率)纯化，得到呈白色固体状的(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-92：0.11g 22％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1082.5[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.32-5.99(m,3H),5.89-5.78(m,1H),5.48-5.07(m,4H),4.70-4.51(m,1H),4.20-4.10(m,1H),3.83-3.76(m,1H),3.73-3.62(m,3H),3.57-5.43(m,8H),3.41-3.37(m,4H),3.35-3.21(m,12H),3.14-3.97(m,3H),2.68-2.45(m,3H),2.24(m,2H),1.99-1.81(m,4H),1.68-1.52(m,15H),1.44-1.34(m,4H),1.26-1.14(m,5H),1.05-0.94(m,8H),0.92-0.77(m,10H),0.65(q,J＝12Hz,1H)。
步骤4：合成(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-90)和(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-89)：
将1.16g(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.3)纯化，获得(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-90：340mg，28％产率)和(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-89：135mg，11％产率)，皆呈白色固体状。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：2.5cm I.D.×25cm L
溶液浓度：2.5mg/ml
注射：3ml
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：30ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-90:ESI-MS(EI+,m/z):1082.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.40-6.22(m,2H),6.14(dt,J＝15.0,9.8Hz,1H),5.90(dd,J＝32.4,10.7Hz,1H),5.56-5.32(m,2H),5.27(d,J＝5.0Hz,1H),5.16(d,J＝4.2Hz,1H),4.77(s,1H),4.18(d,J＝5.9Hz,1H),3.87(s,1H),3.80-3.24(m,29H),3.22-3.01(m,3H),2.72(dd,J＝16.9,5.8Hz,2H),2.57(dd,J＝16.8,6.4Hz,1H),2.30(t,J＝21.1Hz,2H),1.93(ddd,J＝26.1,21.2,9.8Hz,6H),1.82-1.64(m,8H),1.50(dd,J＝22.1,10.9Hz,6H),1.37-1.15(m,6H),1.15-0.82(m,18H),0.71(q,J＝8.0,20.0Hz,1H)。
I-89:ESI-MS(EI+,m/z):1082.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.41-5.93(m,4H),5.59-5.37(m,2H),5.20(dd,J＝23.8,19.2Hz,2H),4.55(d,J＝10.4Hz,1H),4.28(s,1H),4.15(d,J＝10.2Hz,1H),4.00(d,J＝3.7Hz,1H),3.91-3.27(m,28H),3.27-2.85(m,5H),2.76-2.24(m,5H),2.18-1.55(m,14H),1.54-1.20(m,10H),1.16-0.82(m,18H),0.75-0.61(m,1H)。
实例37：合成(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-86)和(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-85)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯：
在0℃下在N2下向氢化钠(12.49g，520.5mmol)于DMF(150mL)中的浆液中添加含2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙醇(5g，34.7mmol)的DMF(10mL)。在0℃下搅拌混合物1小时，然后逐滴添加2-溴乙氧基甲基苯(18.66g，86.75mmol)并且在室温下搅拌反应物20小时。混合物用水(50mL)淬灭并且用EtOAc(80mL)萃取。有机层用水(50mL×3)、盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物经由硅胶色谱(PE:EtOAc＝25:1到20:1)纯化，获得呈无色液体状的2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(8.1g，83.9％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.37-7.26(m,5H),4.57(s,2H),3.90(q,J＝8.8Hz,2H),3.79(dd,J＝5.6,3.5Hz,2H),3.71-3.61(m,6H)。
步骤2：合成2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]：
向2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(0.5g，1.80mmol)于CH3OH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(436.45mg)。然后在H2气氛下在室温下搅拌此混合物20小时，过滤并且浓缩滤液并且经由硅胶色谱(DCM:CH3OH＝50:1)纯化，获得呈无色油状的2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.30g，89％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.91(q,J＝8.7Hz,2H),3.80(dd,J＝5.6,3.4Hz,2H),3.75(d,J＝4.0Hz,2H),3.70(dd,J＝5.5,3.5Hz,2H),3.62(dd,J＝5.2,3.9Hz,2H),2.23(t,J＝5.7Hz,1H(OH)).19F NMR(376MHz,CDCl3,(三氟甲基)苯作为标准)δ-74.33(t,J＝8.8Hz)。
步骤3：合成(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-86)：
将依维莫司(0.5g，0.52mmol)于THF(5mL)中的溶液脱气，在0℃下添加对甲苯磺酸(0.45g，2.61mmol)，接着添加2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.98g，5.22mmol)。在0℃下在N2下搅拌所得混合物0.5小时，接着在23℃下搅拌6小时，倒入饱和NaHCO3(40mL)中并且用EtOAc(30mL)萃取。有机层用水(30mL×2)、盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O 0％到70％产率)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-86：0.08g，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1136.5[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.44-5.88(m,4H),5.73-5.06(m,4H),4.52-4.32(m,1H),4.22-4.12(m,1H),3.91-3.81(m,2H),3.71-3.51(m,6H),3.42-3.21(m,16H),3.13-2.98(m,4H),2.63-2.42(m,4H),2.32-2.14(m,2H),2.05-1.93(m,3H),1.86-1.55(m,16H),1.44-1.35(m,4H),1.24-1.15(m,5H),1.06-0.78(m,17H),0.65-0.51(m,1H)。
步骤4：合成(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-85)：
将100mg(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮经由制备型手性HPLC纯化，其得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-85：14.3mg，14.3％产率)。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：5.0cm I.D.×25cm L
溶液浓度：2.4mg/ml
注射：5ml
移动相：己烷/EtOH＝70/30(V/V)
流动速率：30ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-85:ESI-MS(EI+,m/z):1136.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.06(m,3H),5.92(dd,J＝30.3,10.3Hz,1H),5.56-5.06(m,5H),4.74(s,1H),4.18(d,J＝5.7Hz,1H),3.94-3.83(m,2H),3.82-3.51(m,12H),3.49-3.25(m,11H),3.22-3.03(m,2H),2.72(dd,J＝16.6,5.5Hz,2H),2.57(dd,J＝17.0,6.5Hz,1H),2.34(d,J＝12.4Hz,2H),2.25-2.18(m,1H),2.13-1.85(m,5H),1.69(dd,J＝35.2,8.9Hz,10H),1.47(dd,J＝20.5,13.6Hz,5H),1.26(s,7H),1.15-0.81(m,18H),0.71(dd,J＝23.9,12.0Hz,1H)。
实例38：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-91)和(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-85)和
(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮：
/>
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇：
2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇同实例37。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-91)：
在-40℃下将雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)于DCM(20mL)中的溶液脱气，并且添加三氟乙酸(1.67mL)。在搅拌10分钟之后。添加2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.2g，1.09mmol)。在-40℃下再搅拌混合物40分钟。然后倒入冰冷NaHCO3(60mL水溶液)，用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝65:35)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-91：85mg，15％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1092.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.45-5.76(m,4H),5.40(ddd,J＝24.9,15.2,8.0Hz,2H),5.25-4.99(m,2H),4.57-4.01(m,3H),3.98-3.45(m,7H),3.43-2.99(m,11H),2.95-2.37(m,6H),2.26(d,J＝13.9Hz,2H),2.08-1.76(m,6H),1.75-1.52(m,14H)1.48-1.10(m,10H),1.07-0.74(m,18H),0.60(dd,J＝23.5,12.0Hz,1H)。
步骤3：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-126)：
将159mg(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮经由制备型手性HPLC纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-125：48.5mg，30％产率)和(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-126:43mg，27％产率)。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：5.0cm I.D.×25cm L
溶液浓度：3.0mg/ml
注射：3ml
移动相：己烷/EtOH＝70/30(V/V)
流动速率：30ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-125:ESI-MS(EI+,m/z):1092.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.36-6.13(m,2H),6.06(dd,J＝15.0,10.0Hz,1H),5.85(dd,J＝29.4,10.8Hz,1H),5.49-5.37(m,1H),5.33(d,J＝10.0Hz,1H),5.20(d,J＝4.6Hz,1H),5.08(t,J＝11.7Hz,1H),4.68(s,1H),4.11(d,J＝5.8Hz,1H),3.94-3.64(m,7H),3.63-3.46(m,5H),3.42-3.18(m,12H),2.93-2.79(m,2H),2.71-2.43(m,4H),2.27(d,J＝11.8Hz,2H),2.08-1.85(m,6H),1.83-1.61(m,11H),1.48-1.21(m,8H),1.08-0.74(m,18H),0.65-0.54(m,1H)。
I-126:ESI-MS(EI+,m/z):1092.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.41-6.07(m,3H),6.00-5.81(m,1H),5.56-5.05(m,4H),4.75(s,1H),4.18(d,J＝5.8Hz,1H),3.98-3.52(m,11H),3.50-3.22(m,12H),2.95(d,J＝8.6Hz,1H),2.77-2.50(m,4H),2.38-2.16(m,2H),2.12-1.83(m,5H),1.69(dd,J＝39.3,11.0Hz,12H),1.49-1.17(m,11H),1.15-0.80(m,18H),0.74-0.60(m,1H)。
实例39：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-88)和
(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-82)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-83)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成O-[2-(2-苯甲基氧基乙氧基)乙基]甲基磺酰基甲烷硫代酸酯
向装备有磁性搅拌棒的两颈1000mL圆底烧瓶中馈入2-(2-苯甲氧乙氧基)乙醇(12g，61.2mmol)和苯甲基(三乙基)氯化铵(1.0g，4.87mmol)。经由滴液漏斗添加50％氢氧化钠水溶液(141mL)。在搅拌混合物10分钟之后，逐滴添加CS2(141mL，2.34mol)，接着添加碘甲烷(22.0g，154mmol)。在室温下搅拌混合物3小时。添加水(100mL)。去除有机层，并且用CH2Cl2(100mL×3)萃取水相。合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤且浓缩。残余物经由硅胶色谱(EtOAc:PE＝1:3)纯化，获得呈黄色油状的O-[2-(2-苯甲基氧基乙氧基)乙基]甲基磺酰基甲烷硫代酸酯(16.8g，95％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):308.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.32(dt,J＝18.3,6.8Hz,5H),4.74-4.62(m,2H),4.50(s,2H),3.85-3.72(m,2H),3.60(ddd,J＝8.7,6.2,3.6Hz,4H),2.56(s,3H)。
步骤2：合成2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯：
在-78℃下向1,3-二溴-5,5-二甲基-咪唑啉-2,4-二酮(29.95g，104.75mmol)于DCM(150mL)中的悬浮液中添加(HF)9/Py吡啶鎓聚(氟化氢)(49.36mL，209.49mmol)和O-[2-(2-苯甲氧乙氧基)乙基]甲基磺基甲烷硫代酸酯(10g，34.92mmol)，并且在-50℃下将混合物搅拌2小时。将混合物倒入NaHCO3和NaHSO3的水溶液中，经无水Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，接着经由硅胶色谱(PE:EtOAc＝25:1)纯化，得到粗产物。然后，粗物质经由硅胶色谱(PE:EtOAc＝100:1到50:1到40:1)进一步纯化，获得呈无色液体状的2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(3.6g，39％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):287.1[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37-7.22(m,5H),4.57(s,2H),4.10(t,J＝4.8Hz,2H),3.75(t,J＝4.8Hz,2H),3.72-3.62(m,4H)。
步骤3：合成2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙醇：
向2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(3.4g，12.87mmol)于CH3OH(60mL)中的溶液中添加Pd/C(3.13g)。然后在H2气氛下在室温下搅拌此混合物20小时，过滤，浓缩，接着通过硅胶色谱(DCM:CH3OH＝50:1)纯化，得到呈无色液体状的2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙醇(1.87g，83％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.11-4.03(m,2H),3.69(dt,J＝4.4,2.3Hz,4H),3.61-3.54(m,2H),2.75(t,J＝5.9Hz,1H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-61.11(s).
步骤4：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-88)：
在0℃下，向依维莫司(0.5g，0.52mmol)于THF(30mL)中的脱气溶液中添加对甲苯磺酸(0.45g，2.61mmol)，接着添加2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙醇(0.91g，5.22mmol)。在0℃下在N2下搅拌所得混合物0.5小时，接着在23℃下搅拌6小时。将反应物倒入饱和NaHCO3(40mL)中并且用EtOAc(30mL)萃取。有机层用水(30mL×2)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下在室温下浓缩。残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝0％到70％产率)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-88：141mg，24％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1122.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.39-5.88(m,4H),5.73-5.05(m,5H),4.52-3.83(m,5H),3.70-3.50(m,6H),3.43-3.21(m,8H),3.12-2.93(m,4H),2.80-2.44(m,4H),2.31-2.16(m,4H),2.05-1.59(m,20H),1.43-1.34(m,4H),1.21-1.09(m,6H),1.01-0.78(m,17H),0.62-0.51(m,1H)。
步骤5：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-83)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-82)：
将130mg(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮经由制备型手性HPLC纯化，得到(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-82：19mg，14.6％产率)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(三氟甲氧基)乙氧基]乙氧基]-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-83：12mg，9.2％产率)，皆呈白色固体状。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CE-OL002)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：40.0ul
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT CP-HPLC-07
I-82:ESI-MS(EI+,m/z):1122.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43-5.83(m,4H),5.57-5.13(m,5H),4.31-4.04(m,3H),3.91-3.53(m,11H),3.49-3.00(m,19H),2.76-2.52(m,3H),2.25(dd,J＝34.2,26.6Hz,3H),2.12-1.96(m,5H),1.75(dd,J＝35.2,24.7Hz,8H),1.52-1.34(m,8H),1.15-0.79(m,18H),0.72(d,J＝12.1Hz,1H)。
I-83:ESI-MS(EI+,m/z):1122.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.54-6.41(m,1H),6.18(tdd,J＝29.7,22.4,12.7Hz,3H),5.82-5.68(m,1H),5.46-5.30(m,2H),5.19(dd,J＝25.5,20.6Hz,2H),4.62-4.40(m,1H),4.21(d,J＝18.4Hz,1H),3.94(dd,J＝34.8,4.5Hz,1H),3.83-3.62(m,4H),3.59(d,J＝3.3Hz,1H),3.50-2.95(m,13H),2.62(dt,J＝55.5,38.6Hz,2H),2.42-2.17(m,3H),2.16-1.57(m,24H),1.54-1.27(m,10H),1.12-0.80(m,18H),0.71-0.62(m,1H)。
实例40：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-87)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-79)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-80)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯：
在氮气气氛下，混合三氟甲磺酸银(19.64g，76.44mmol)、三氟甲烷磺酸锂(3.97g，25.48mmol)、1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮鎓双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸)(18.05g，50.96mmol)和氟化钾(5.92g，101.92mmol)。随后在N2气氛下按此顺序添加2-(2-苯甲基氧基乙氧基)乙醇(5g，25.48mmol)、三甲基(1,1,2,2,2-五氟乙基)硅烷(14.69g，76.44mmol)、EtOAc(20mL)、三氟甲基苯(20mL),和2-氟吡啶(7.42g，76.44mmol)。在N2气氛下在30℃下搅拌反应混合物60小时，接着通过硅胶塞过滤(用EtOAc洗脱)。收集滤液且浓缩。残余物经由硅胶色谱(PE:EtOAc＝25:1)纯化，获得呈淡黄色液体状的2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(2.5g，31％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36-7.24(m,5H),4.56(s,2H),4.17-4.11(m,2H),3.76-3.72(m,2H),3.71-3.65(m,2H),3.65-3.60(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-90.77(s),-86.02(s)。
步骤2：合成2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙醇：
向2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(0.757g，2.41mmol)于CH3OH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(0.58g)。在H2气氛下在室温下搅拌混合物20小时，接着过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱(DCM:CH3OH＝50:1)纯化，获得呈无色液体状的2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.5g，93％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.13-4.06(m,2H),3.69(dd,J＝5.4,4.1Hz,4H),3.54(dd,J＝5.2,3.9Hz,2H),2.47(s,1H).19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-86.21(d,J＝1.2Hz),-90.98(d,J＝1.2Hz)。
步骤3：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-87)：
在0℃下向依维莫司(0.5g，0.52mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸(0.45g，2.61mmol)，随后添加2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.58g，2.61mmol)。在0℃下在N2下搅拌所得混合物0.5小时，接着在22℃下搅拌6小时，倒入饱和NaHCO3(40mL)且用EtOAc(30mL)萃取。有机层用水(30mL×2)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下在室温下浓缩。残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝0％到70％产率)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-87：40mg，7％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1172.3[M+Na]+.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.45-5.95(m,4H),5.79-5.13(m,5H),4.59-4.17(m,3H),3.98-3.59(m,8H),3.50-3.28(m,10H),3.20-3.00(m,5H),2.89-2.49(m,4H),2.37-2.22(m,4H),2.10-1.61(m,20H),1.51-1.23(m,8H),1.06-0.85(m,16H),0.71-0.63(m,1H)。
步骤4：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-80)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-79)：
将95mg(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮送去进行手性分离，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-80：7.2mg，7.5％产率)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-43-[2-[2-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-79：5.1mg，5.3％产率)。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：5.0cm I.D.×25cm L
溶液浓度：0.79mg/ml
注射：5ml
移动相：己烷/EtOH＝70/30(V/V)
流动速率：30ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-80:ESI-MS(EI+,m/z):1150.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-5.80(m,4H),5.58-5.05(m,5H),4.74(s,1H),4.24-4.08(m,3H),3.92-3.51(m,10H),3.48-3.24(m,12H),3.13(ddd,J＝24.2,17.1,11.3Hz,3H),2.64(ddd,J＝23.4,16.8,6.0Hz,3H),2.42-2.15(m,3H),2.14-1.88(m,6H),1.84-1.64(m,14H),1.54-1.39(m,5H),1.17-0.81(m,18H),0.71(dd,J＝23.8,12.1Hz,1H)。
I-79:ESI-MS(EI+,m/z):1172.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-5.90(m,4H),5.54-5.03(m,6H),4.31-3.96(m,5H),3.88-3.01(m,22H),2.94-2.37(m,5H),2.39-1.94(m,7H),1.68(dd,J＝28.2,19.2Hz,8H),1.52-1.31(m,6H),1.14-1.00(m,6H),0.97-0.62(m,19H)。
实例41：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-76)和(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-66)和(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-67)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成三氟甲烷磺酸2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙酯：
在N2下将2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙醇(4.3g，14.31mmol)和DIPEA(2.77g，21.47mmol)于DCM(40mL)中的溶液冷却到0℃，且逐滴添加三氟甲磺酸酐(4.44g，15.74mmol)。在0℃下搅拌混合物2小时，接着用DCM(50mL)稀释，用饱和NaHCO3(50mL)、水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤。有机层接着经MgSO4干燥，过滤，且在真空下浓缩，获得呈棕色油状的三氟甲烷磺酸2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙酯(6.19g，99％产率)。此不经任何进一步纯化即用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66(dd,J＝7.9,1.5Hz,4H),7.45-7.38(m,6H),4.56(t,J＝4.4Hz,2H),3.91(t,J＝4.4Hz,2H)。
步骤2：合成(35E,37E,39E,40E,48R,49S,50R,51R,53S,55S,57S,58S,59R,60R,69R)-58-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59,69-二羟基-57,60-二甲氧基-48,49,50,51,61,62-六甲基-79,80-二氧杂-71-氮杂三环三十六烷-35,37,39(61),40(62)-四烯-63,64,65,66,67-五酮：
在45℃下搅拌依维莫司(1.5g，1.57mmol)、三氟甲烷磺酸2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙酯和DIPEA(3.27mL,18.78mmol)于甲苯(20mL)中的溶液18小时。然后将混合物倒入冰冷饱和NaHCO3(50mL)中，用冰水(60mL)、盐水(50mL)洗涤两次，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。混合物经由硅胶色谱纯化(PE:EtOAc＝5:1到2:1，接着PE:丙酮＝4:1)，获得呈棕色固体状的(35E,37E,39E,40E,48R,49S,50R,51R,53S,55S,57S,58S,59R,60R,69R)-58-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59,69-二羟基-57,60-二甲氧基-48,49,50,51,61,62-六甲基-79,80-二氧杂-71-氮杂三环三十六烷-35,37,39(61),40(62)-四烯-63,64,65,66,67-五酮(1.15g，59％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1263.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62-7.60(m,4H),7.35-7.28(m,6H),6.35-5.80(m,4H),5.51-5.09(m,4H),4.75(s,1H),4.37-4.02(m,2H),3.87-3.49(m,11H),3.37-3.26(m,8H),3.10-2.96(m,5H),2.76-2.48(m,3H),2.28-2.21(m,2H),1.98-1.90(m,3H),1.67-1.39(m,18H),1.26-1.08(m,7H),1.04-0.76(m,26H),0.64(q,J＝11.2Hz,1H)。
步骤3：合成(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,45-二甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮：
将(35E,37E,39E,40E,48R,49S,50R,51R,53S,55S,57S,58S,59R,60R,69R)-58-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[2-[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基乙氧基]乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59,69-二羟基-57,60-二甲氧基-48,49,50,51,61,62-六甲基-79,80-二氧杂-71-氮杂三环三十六烷-35,37,39(61),40(62)-四烯-63,64,65,66,67-五酮(1.15g，0.93mmol)溶解于THF(10mL)中。添加氢氟化吡啶(0.437mL，1.85mmol)，且在室温下搅拌混合物3小时。混合物用EtOAc(30mL)稀释，用饱和NaHCO3(水溶液，40mL×2)洗涤直到pH 10，接着用水洗涤直到成为中性盐水(40mL)，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物经由硅胶色谱(PE:丙酮＝4:1到2:1)纯化，获得呈白色固体状的(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,45-二甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(680mg，73％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1024.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.35-5.80(m,4H),5.51-5.09(m,4H),4.75(s,1H),4.37-4.02(m,2H),3.87-3.49(m,11H),3.37-3.26(m,8H),3.10-2.96(m,5H),2.76-2.48(m,3H),2.28-2.21(m,2H),1.98-1.90(m,3H),1.67-1.39(m,18H),1.26-1.08(m,7H),1.04-0.76(m,17H),0.64(q,J＝11.2Hz,1H)。
步骤4：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-76)：
在N2下在0℃下向(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,45-二甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(0.65g，0.65mmol)于THF(6mL)中的溶液中添加对TsOH(0.56g，3.24mmol)，接着添加2-(2-羟基乙氧基)乙醇(1.38g，12.97mmol)。在0℃下搅拌所得混合物10分钟，接着在20℃下搅拌2小时。将混合物倒入饱和NaHCO3(40mL)中并且用EtOAc(30mL)萃取。有机层用水(30mL×2)、盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下在室温下浓缩。残余物经由硅胶色谱(PE:EtOAc＝50％到100％ EtOAc，接着到DCM:CH3OH＝95:5到90:10)纯化，接着通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝50:50)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-76：140mg，20％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1098.5[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.31-5.80(m,4H),5.46-4.74(m,5H),4.21-4.11(m,2H),3.68-3.56(m,18H),3.4-3.14(m,12H),3.03-2.97(m,2H),2.68-2.39(m,5H),2.28-2.25(d,2H),1.73-1.55(m,18H),1.40-1.14(m,8H),1.03-0.79(m,16H),0.64(q,J＝11.2Hz,1H)。
步骤5：合成(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-67)和(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-66)：
将140mg(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:1)再纯化，得到(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-67：25.3mg，18.1％产率)和(21E,23E,25E,26E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(49),26(50)-四烯-51,52,53,54,55-五酮(I-66：34mg，24.3％产率)，皆呈白色固体状。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CD-OL002)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：100.0ul
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AD CP-HPLC-08
I-67:ESI-MS(EI+,m/z):1098.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.49-6.19(m,2H),6.13(dd,J＝15.0,9.8Hz,1H),5.94(dd,J＝24.3,10.5Hz,1H),5.58-5.45(m,1H),5.41(d,J＝9.8Hz,1H),5.37-5.24(m,1H),5.13(t,J＝10.8Hz,1H),4.80(s,1H),4.19(t,J＝8.7Hz,1H),3.92-3.52(m,16H),3.51-3.25(m,11H),3.25-2.99(m,3H),2.72(dd,J＝16.9,5.6Hz,2H),2.57(dd,J＝16.8,6.3Hz,1H),2.39-2.18(m,2H),1.95(ddd,J＝29.6,22.0,10.2Hz,6H),1.83-1.40(m,15H),1.37-1.16(m,8H),1.15-0.82(m,18H),0.71(dd,J＝24.0,12.0Hz,1H)。
I-66:ESI-MS(EI+,m/z):1098.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.45-5.92(m,4H),5.52-4.75(m,5H),4.31-3.92(m,3H),3.88-3.54(m,16H),3.51-3.13(m,13H),3.07(s,2H),2.87-2.42(m,4H),2.38-1.55(m,12H),1.51-1.29(m,15H),1.13-0.72(m,18H),0.69-0.58(m,1H)。
实例42：合成(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-43-己氧基-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-103)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-43-己氧基-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-103)：
向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和己-1-醇(56mg，0.547mmol)于THF(10mL)中的溶液中缓慢添加4-甲基苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)。在20℃下在N2下搅拌所得溶液2小时，然后将混合物倒入冰冷NaHCO3水溶液中并且用EtOAc(30mL)萃取。有机层经干燥、过滤且浓缩。残余物接着经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝78:22)纯化，得到呈白色固体状的(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-43-己氧基-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-103：72mg，13％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1006.0[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.44-5.85(m,4H),5.60-5.07(m,4H),4.77(s,1H),4.29-3.98(m,2H),3.76-3.67(m,1H),3.46-3.28(m,10H),3.23-3.03(m,2H),3.02-2.77(m,2H),2.69(m,3H),2.36(d,J＝32.6Hz,2H),2.17-1.90(m,4H),1.66-1.44(m,22H),1.35-1.21(m,11H),1.17-0.84(m,22H),0.72-0.65(m,1H)。
实例43：合成(21E,23E,25E,26E,44R,45S,46R,47R,49S,51S,54S,55R,56R,65R)-55,65-二羟基-53-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-54-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-56-甲氧基-44,45,46,47,57,58-六甲基-76,77-二氧杂-66-氮杂三环三十六烷-21,23,25(57),26(58)-四烯-59,60,61,62,63-五酮(I-99)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,44R,45S,46R,47R,49S,51S,54S,55R,56R,65R)-55,65-二羟基-53-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-54-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-56-甲氧基-44,45,46,47,57,58-六甲基-76,77-二氧杂-66-氮杂三环三十六烷-21,23,25(57),26(58)-四烯-59,60,61,62,63-五酮(I-99)：
向依维莫司(0.5g，0.52mmol)和2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(3.41g，10.44mmol)于THF(15mL)中的溶液中缓慢添加4-甲基苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)。在22℃下在N2下搅拌所得混合物18小时，接着用水溶液淬灭。NaHCO3(30mL)且用EtOAc(60mL×3)萃取。合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，且在真空下浓缩。残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝70:30)纯化，得到(21E,23E,25E,26E,44R,45S,46R,47R,49S,51S,54S,55R,56R,65R)-55,65-二羟基-53-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-54-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-56-甲氧基-44,45,46,47,57,58-六甲基-76,77-二氧杂-66-氮杂三环三十六烷-21,23,25(57),26(58)-四烯-59,60,61,62,63-五酮(I-99：93mg，14％产率)呈白色固体状的。ESI-MS(EI+,m/z):1274.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42-5.82(m,4H),5.64-5.06(m,4H),4.81(s,1H),4.30-4.08(m,1H),3.81-3.53(m,35H),3.46-3.26(m,12H),3.22-3.05(m,4H),2.76-2.65(m,2H),2.39-2.22(m,2H),2.14-1.97(m,3H),1.75-1.55(m,13H),1.52-1.39(m,4H),1.30-1.13(m,6H),1.08-0.82(m,17H),0.76-0.65(m,1H)。
实例44：合成(21E,23E,25E,26E,46R,47S,48R,49R,51S,53S,56S,57R,58R,67R)-57,67-二羟基-55-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-56-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-58-甲氧基-46,47,48,49,59,60-六甲基-78,79-二氧杂-68-氮杂三环三十六烷-21,23,25(59),26(60)-四烯-61,62,63,64,65-五酮(I-97)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,46R,47S,48R,49R,51S,53S,56S,57R,58R,67R)-57,67-二羟基-55-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-56-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-58-甲氧基-46,47,48,49,59,60-六甲基-78,79-二氧杂-68-氮杂三环三十六烷-21,23,25(59),26(60)-四烯-61,62,63,64,65-五酮(I-97)：
在10℃下向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸(0.47g，2.73mmol)和九甘醇(2.27g，5.47mmol)。在30℃下在N2下搅拌反应物18小时，接着用水溶液淬灭。NaHCO3且用EtOAc(60mL×3)萃取。经合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝63:37)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,46R,47S,48R,49R,51S,53S,56S,57R,58R,67R)-57,67-二羟基-55-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-56-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-58-甲氧基-46,47,48,49,59,60-六甲基-78,79-二氧杂-68-氮杂三环三十六烷-21,23,25(59),26(60)-四烯-61,62,63,64,65-五酮(I-97：111mg，16％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1318.9[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.50-5.79(m,4H),5.64-5.06(m,4H),4.89(d,J＝53.5Hz,1H),4.51-3.94(m,2H),3.75-3.18(m,46H),3.02-2.86(m,2H),2.82-2.61(m,3H),2.39-2.18(m,2H),2.20-1.91(m,6H),1.78-1.54(m,16H),1.51-1.19(m,11H),1.09-0.82(m,17H),0.74-0.62(m,1H)。
实例45：合成(21E,23E,25E,26E,50R,51S,52R,53R,55S,57S,60S,61R,62R,71R)-61,71-二羟基-59-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-62-甲氧基-50,51,52,53,63,64-六甲基-82,83-二氧杂-72-氮杂三环三十六烷-21,23,25(63),26(64)-四烯-65,66,67,68,69-五酮(I-96)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,50R,51S,52R,53R,55S,57S,60S,61R,62R,71R)-61,71-二羟基-59-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-62-甲氧基-50,51,52,53,63,64-六甲基-82,83-二氧杂-72-氮杂三环三十六烷-21,23,25(63),26(64)-四烯-65,66,67,68,69-五酮(I-96)：
在0℃下向雷帕霉素(0.2g，0.22mmol)和4-甲基苯磺酸(0.19g，1.09mmol)于THF(6mL)中的溶液中添加2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(1.10g，2.19mmol)，且在20℃下搅拌反应物2小时，随后倒入饱和NaHCO3(30mL)且用EtOAc(40mL×3)萃取。经合并的有机层用水(40mL)、盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝51:49)纯化残余物，获得呈无色油状的(21E,23E,25E,26E,50R,51S,52R,53R,55S,57S,60S,61R,62R,71R)-61,71-二羟基-59-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-60-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-62-甲氧基-50,51,52,53,63,64-六甲基-82,83-二氧杂-72-氮杂三环三十六烷-21,23,25(63),26(64)-四烯-65,66,67,68,69-五酮(I-96：61mg，20％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1408.0[M+Na]+.1HNMR(500MHz,CDCl3)δ6.41-5.84(m,4H),5.61-5.08(m,4H),4.79(s,1H),4.32-4.05(m,1H),3.89-3.46(m,44H),3.46-3.16(m,12H),2.98-2.50(m,7H),2.32(s,2H),2.15-1.89(m,4H),1.82-1.68(m,8H),1.56-1.16(m,14H),1.12-0.82(m,18H),0.74-0.56(m,1H)。
实例46：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-77)和
(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮和(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43R,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-77)：
将雷帕霉素(0.3g，0.313mmol)和2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙醇(0.9g，6.26mmol)于THF(9mL)中的溶液冷却到0℃且添加对TsOH(0.27g，1.57mmol)。在35℃下在N2下搅拌所得混合物5小时，然后倒入冰冷NaHCO3中且用EtOAc(40mL×3)萃取。合并的有机层用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥，过滤且浓缩。残余物经由反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝57:43)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-77：0.063g，19％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1092.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.55-5.88(m,4H),5.72-5.03(m,4H),4.78(s,1H),4.63-4.34(m,1H),4.32-4.09(m,1H),4.00-2.81(m,21H),2.77-2.43(m,3H),2.41-2.17(m,2H),2.18-1.93(m,3H),1.93-1.54(m,18H),1.54-1.14(m,10H),1.13-0.79(m,16H),0.78-0.63(m,1H)。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-71)和(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43R,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-70)：
将100mg(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.3)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-71：16mg，16％产率)和(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43R,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-五酮(I-70：8mg，8％产率)。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：2.5cm I.D.×25cm L
溶液浓度：2.0mg/ml
注射：7ml
移动相：己烷/EtOH＝70/30(V/V)
流动速率：40ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-71:ESI-MS(EI+,m/z):1092.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.41-6.20(m,2H),6.13(dd,J＝15.1,9.7Hz,1H),5.93(dd,J＝22.9,10.3Hz,1H),5.58-5.45(m,1H),5.41(d,J＝9.8Hz,1H),5.27(d,J＝5.2Hz,1H),5.19-5.03(m,1H),4.78(s,1H),4.19(dd,J＝13.9,5.9Hz,1H),3.95-3.63(m,10H),3.63-3.53(m,2H),3.52-3.25(m,11H),3.24-3.01(m,3H),2.72(dd,J＝16.8,5.8Hz,2H),2.58(dd,J＝16.8,6.3Hz,1H),2.31(t,J＝23.5Hz,2H),2.15-1.40(m,18H),1.27(ddd,J＝32.5,16.2,6.3Hz,8H),1.15-0.81(m,18H),0.70(dt,J＝17.8,9.0Hz,1H)。
I-70:ESI-MS(EI+,m/z):1092.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.43-5.90(m,4H),5.56-5.08(m,5H),4.33-3.99(m,3H),3.95-3.63(m,8H),3.62-3.02(m,18H),2.89-1.97(m,12H),1.76(dd,J＝31.4,24.8Hz,8H),1.40(ddd,J＝39.2,29.5,12.0Hz,9H),1.14-0.79(m,18H),0.76-0.61(m,1H)。
实例47：合成4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-69)和
4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-61)和4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-62)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成4-羟基-N,N-二甲基丁酰胺：
在10℃下搅拌四氢呋喃-2-酮(5g，58.1mmol)和N-甲基甲胺(43.64g，290.4mmol，90mL)的混合物18小时，去除溶剂，且接着冻干，获得呈无色油状的4-羟基-N,N-二甲基-丁酰胺(6.9g，91％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):132.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.67(t,J＝5.8Hz,2H),3.04(s,3H),2.96(s,3H),2.49(t,J＝6.9Hz,2H),1.94-1.84(m,2H)。
步骤2：合成4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-69)：
在0℃下在N2下向依维莫司(0.3g，0.313mmol)于THF(9mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸(0.27g，1.57mmol)和4-羟基-N,N-二甲基-丁酰胺(0.82g，6.26mmol)。使混合物升温到35℃且搅拌18小时，接着倒入冰冷NaHCO3中且用EtOAc(20mL×3)萃取。合并的有机层用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝55:45)纯化，得到呈白色固体状的4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-69：0.05g，15％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1079.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.52-5.78(m,4H),5.67-5.05(m,4H),4.75(s,1H),4.48-4.09(m,2H),4.04-3.51(m,7H),3.52-3.12(m,12H),3.12-2.88(m,7H),2.82-2.27(m,6H),2.22-1.53(m,23H),1.54-1.13(m,10H),1.12-0.80(m,15H),0.79-0.61(m,1H)。
步骤3：合成4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-62)和4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-61)：
将120mg 4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺经由制备型手性HPLC纯化，得到4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-62：34.3mg，29％产率)和4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-61：24.2mg，20％产率)，皆呈白色固体状。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC
柱大小：5.0cm I.D.×25cm L
溶液浓度：1mg/ml
注射：5ml
移动相：EtOH＝100％
流动速率：50ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
I-62:ESI-MS(EI+,m/z):1079.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.30(tt,J＝34.4,17.0Hz,2H),6.13(dd,J＝14.9,10.0Hz,1H),5.91(dd,J＝28.8,10.6Hz,1H),5.51(dd,J＝15.0,8.9Hz,1H),5.45-5.37(m,1H),5.27(d,J＝5.4Hz,1H),5.17(d,J＝4.4Hz,1H),4.75(s,1H),4.19(d,J＝4.9Hz,1H),3.88(s,1H),3.82-3.64(m,5H),3.62-3.52(m,2H),3.47-3.25(m,11H),3.24-3.14(m,2H),3.10(d,J＝7.0Hz,1H),3.01(s,3H),2.94(s,3H),2.71(dd,J＝16.7,5.7Hz,2H),2.55(dd,J＝16.8,6.6Hz,1H),2.44-2.25(m,4H),2.14-1.63(m,17H),1.33(ddd,J＝40.8,27.4,12.3Hz,11H),1.14-0.83(m,18H),0.71(dd,J＝23.8,11.9Hz,1H)。
I-61:ESI-MS(EI+,m/z):1079.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.43-5.88(m,4H),5.65-5.08(m,5H),4.33-4.08(m,2H),3.94-3.52(m,6H),3.49-3.31(m,8H),3.30-3.12(m,8H),3.09-2.81(m,8H),2.75-2.26(m,6H),2.10(d,J＝63.9Hz,3H),1.88-1.65(m,14H),1.35(dt,J＝49.7,11.3Hz,9H),1.18-0.81(m,18H),0.77-0.60(m,1H)。
实例48：合成4-[[(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-69,70-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-44-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-68)和
4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-59)和4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-60)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成4-羟基-N,N-二甲基丁酰胺：
在0℃下，向甲胺(5.41g，174.24mmol)于水(30mL)中的溶液中逐滴添加四氢呋喃-2-酮(5g，58.08mmol)。在5℃下搅拌混合物2小时，接着浓缩且冻干，得到呈稠液体状的4-羟基-N-甲基-丁酰胺(6.5g，95.5％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):118.3[M+H]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.02(s,1H),3.69(t,J＝5.7Hz,2H),2.81(d,J＝4.8Hz,3H),2.36(t,J＝6.8Hz,2H),1.88(dt,J＝12.2,6.1Hz,2H)。
步骤2：合成4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-68)：
在N2下将依维莫司(1g，1.04mmol)和4-羟基-N-甲基-丁酰胺(2.45g，20.87mmol)于THF(30mL)中的溶液冷却到0℃且添加对甲苯磺酸(0.9g，5.22mmol)。使反应物升温到35℃，且搅拌18小时，接着倒入饱和NaHCO3(150mL)且用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机层用水(80mL)、盐水(80mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过反相色谱法(C18，80g，CH3CN:H2O＝37:33)纯化，得到呈白色固体状的4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-68：0.14g，13％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1065.3[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.50-5.85(m,4H),5.78-4.96(m,5H),4.78(s,1H),4.33-4.03(m,2H),3.98-3.64(m,5H),3.63-3.49(m,2H),3.49-2.90(m,13H),2.90-2.48(m,6H),2.41-1.94(m,7H),1.93-1.54(m,18H),1.53-1.11(m,10H),1.11-0.80(m,16H),0.78-0.54(m,1H)。
步骤3：合成4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-60)和4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-59)：
将130mg 4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.8)纯化，提供4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-60：25mg，19％产率)和4-[[(22E,24E,26E,27E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-22,24,26(47),27(48)-四烯-43-基]氧基]-N-甲基-丁酰胺(I-59：36mg，27％产率)，皆呈白色固体状。
手性分析方法：
柱：CHIRALPAK IC-3(IC30CE-NJ008)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：50.0ul
移动相：己烷/EtOH＝50/50(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT CP-HPLC-06
I-60:ESI-MS(EI+,m/z):1065.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.32(ddd,J＝31.4,14.8,10.2Hz,2H),6.13(dd,J＝15.1,9.9Hz,1H),6.00-5.85(m,1H),5.69(s,1H),5.51(dd,J＝14.9,9.0Hz,1H),5.41(d,J＝9.9Hz,1H),5.27(d,J＝5.7Hz,1H),5.13(dt,J＝48.5,24.3Hz,1H),4.77(s,1H),4.18(d,J＝5.7Hz,1H),3.92-3.63(m,6H),3.61-3.50(m,2H),3.46-3.25(m,10H),3.22-3.00(m,3H),2.79(dd,J＝4.8,2.2Hz,3H),2.72(dd,J＝16.9,5.5Hz,2H),2.55(dd,J＝16.8,6.5Hz,1H),2.38-2.14(m,4H),2.12-1.91(m,4H),1.89-1.62(m,15H),1.52-1.11(m,13H),1.10-1.01(m,6H),1.00-0.81(m,9H),0.71(dd,J＝23.6,12.1Hz,1H)。
I-59:ESI-MS(EI+,m/z):1065.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.37-5.81(m,4H),5.66(d,J＝15.6Hz,1H),5.60-4.89(m,4H),4.16(ddd,J＝31.9,15.6,5.8Hz,2H),3.93-3.42(m,8H),3.38-2.95(m,12H),2.89-2.39(m,7H),2.37-1.89(m,9H),1.83-1.60(m,13H),1.45-1.05(m,11H),1.03-0.73(m,18H),0.62(dd,J＝23.9,12.1Hz,1H)。
实例49：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-94)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-94)：
在20℃下在N2下向雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)和2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(1.72g，11.49mmol，3mL)。搅拌所得溶液2小时，然后倒入饱和NaHCO3(80mL)且用EtOAc(60mL×3)萃取。合并的有机层用水(60mL)、盐水(60mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝75:25)纯化，得到呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-94：125mg，22％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1054.5[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.44-5.87(m,4H),5.52-5.12(m,4H),4.90(s,1H),4.34-4.11(m,1H),4.05-3.83(m,1H),3.80-3.53(m,13H),3.50-3.22(m,12H),3.01-2.49(m,6H),2.39-1.87(m,6H),1.82-1.68(m,8H),1.44-1.15(m,13H),1.11-0.85(m,18H),0.71-0.57(m,1H)。
实例50：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-93)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-93)：
7.0g差向异构体混合物(实例49；I-94)经由制备型手性HPLC纯化，获得呈白色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-93：1.113g，16％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1054.4[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41-5.92(m,4H),5.63(ddd,J＝23.1,15.1,8.2Hz,1H),5.47(dd,J＝29.9,10.3Hz,1H),5.30-5.00(m,2H),4.33-4.12(m,2H),3.97(dd,J＝18.9,6.6Hz,1H),3.86-3.48(m,14H),3.44-3.22(m,10H),2.97-2.88(m,1H),2.82(s,1H),2.74-2.46(m,3H),2.30(d,J＝14.3Hz,2H),2.21-1.91(m,5H),1.86-1.57(m,11H),1.50-1.22(m,12H),1.16-0.81(m,18H),0.66(dt,J＝23.8,11.7Hz,1H)。
实例51：合成(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46S,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-121)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42S,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮：
在室温下，向依维莫司(1g，1.04mmol)于DCM(50mL)中的溶液中逐滴添加Ti(OiPr)4(0.89g，3.13mmol)。反应混合物变成浅黄色。30分钟后，将溶液倒入含有1N HCl(50mL)和EtOAc(50mL)的非均质混合物的分液漏斗中。有机层用NaHCO3饱和水溶液(30mL)、H2O(50mL)、盐水(50mL)依序洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且在真空下浓缩。残余物通过硅胶色谱(己烷:丙酮＝2:1)纯化，获得呈浅黄色固体状的(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42S,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-五酮(380mg，38％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.44(dt,J＝13.9,10.3Hz,2H),6.33-6.06(m,3H),5.54-4.85(m,5H),4.48(t,J＝5.3Hz,1H),4.10-3.91(m,2H),3.89-3.79(m,1H),3.62(d,J＝11.5Hz,1H),3.54-3.41(m,5H),3.38-3.28(m,8H),3.19(dt,J＝11.9,7.6Hz,4H),3.10-2.92(m,6H),2.71(t,J＝14.8Hz,1H),2.43-1.78(m,6H),1.75-1.44(m,10H),1.38-0.90(m,14H),0.89-0.67(m,13H),0.66-0.56(m,1H)。
步骤2：合成(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-121)：
在N2下在50℃下向28epi-依维莫司(0.2g，0.208mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(0.99mL,8.35mmol)于环丁砜(5mL)中的溶液中添加HND-8(35mg)。在50℃下搅拌所得溶液4小时，过滤且用水(30mL)和EtOAc(30mL)稀释。有机层用水(10mL×3)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物经由反相色谱(C18，CH3CN:H2O＝6.5:3.5)纯化，得到呈白色固体状的(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-五酮(I-121：60mg，27％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1068.1[M+Na]+.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ6.57-6.35(m,2H),6.31-5.88(m,3H),5.61-5.38(m,1H),5.28-4.82(m,4H),4.47(t,J＝5.3Hz,1H),3.98(dd,J＝40.4,6.9Hz,2H),3.88-3.73(m,2H),3.59-3.40(m,12H),3.30(dd,J＝12.1,8.2Hz,4H),3.26-3.14(m,8H),3.08-2.92(m,3H),2.85-2.62(m,2H),2.43-2.22(m,2H),2.19-1.82(m,6H),1.79-1.45(m,9H),1.32(dd,J＝58.1,21.2Hz,5H),1.19-0.92(m,10H),0.90-0.57(m,15H)。
实例52：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-127)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-128)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-129)：
合成流程：
程序和表征：
步骤1：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-127)：
向28-epi-雷帕霉素(0.2g，0.22mmol；参见实例52)和2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(0.436mL,3.28mmol)于环丁砜(5mL)中的溶液中添加HND-8(30mg)并且在50℃下搅拌混合物5小时。在冷却后，反应物用EtOAc(50mL)稀释，过滤，用水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过反相色谱(C18，CH3CN:H2O为0到70％产率)纯化残余物，得到呈浅黄色固体状的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-127：60mg，26％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1054.4[M+Na]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.61-6.32(m,2H),6.30-5.98(m,3H),5.65-5.38(m,1H),5.28-4.89(m,4H),4.68-4.53(m,2H),4.11-3.91(m,2H),3.89-3.71(m,2H),3.54-3.44(m,9H),3.44-3.40(m,3H),3.31-3.28(m,4H),3.27-3.11(m,6H),2.86-2.66(m,3H),2.20-1.82(m,7H),1.80-1.58(m,13H),1.42-1.06(m,9H),1.05-0.68(m,18H),0.56(dd,J＝23.8,12.0Hz,1H)。
步骤2：合成(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-128)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-129)：
将130mg(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮经由制备型手性HPLC纯化，且所得差向异构体经由硅胶色谱(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0到3:3:1:0.8)纯化，提供(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-128：28mg，21.5％产率)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45S,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-五酮(I-129：22mg，16.9％产率)，皆呈白色固体状。
手性分离方法：
柱：CHIRALPAK IC(IC00CE-WF029)
柱大小：0.46cm I.D.×25cm L
注射：10.0ul
移动相：己烷/EtOH＝60/40(V/V)
流动速率：1.0ml/min
波长：UV 254nm
温度：35℃
HPLC装备：Shimadzu LC-20AT CP-HPLC-09
I-128:ESI-MS(EI+,m/z):1054.2[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.56-6.22(m,2H),6.14(dd,J＝15.0,10.3Hz,1H),6.00(dd,J＝17.9,11.0Hz,1H),5.61-5.46(m,1H),5.46-5.32(m,1H),5.29-5.12(m,2H),4.70(s,1H),4.15-4.04(m,1H),3.99-3.88(m,1H),3.86-3.52(m,13H),3.51-3.25(m,11H),3.01-2.60(m,5H),2.52(dd,J＝16.7,7.1Hz,2H),2.39-1.87(m,7H),1.74(dt,J＝13.3,8.7Hz,8H),1.63-1.16(m,13H),1.14-0.78(m,18H),0.67(dd,J＝23.8,12.0Hz,1H)。
I-129:ESI-MS(EI+,m/z):1054.1[M+Na]+.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46-5.89(m,4H),5.60-4.93(m,5H),4.15(dd,J＝50.5,20.8Hz,2H),3.97-3.15(m,25H),3.06-2.43(m,8H),2.39-1.69(m,16H),1.54-1.19(m,10H),1.13-0.79(m,18H),0.66(dd,J＝23.6,11.7Hz,1H)。
实例53：αLISA Ultra pS6K1分析
检定方案
1.种子MCF-7细胞于康宁(Corning)3701板中并培育20～24小时。将在每孔36μL培养基中接种12,000～16,000个细胞。
2.用新制培养基更换培养基且再培育2小时。
3.通过HAMILTON将12μL(4X)化合物添加到细胞板中。最终DMSO浓度为0.5％。培育90分钟。
4.通过HAMILTON的抽吸38μL，每孔10μL静止。
5.使用HAMILTON添加10μL 2X溶解缓冲液；孔中的总体积是20μL。使细胞震荡30分钟。用塑料箔覆盖板并且将板存储在-80℃直至分析。
6.在室温下的细胞裂解物并且将10μL裂解物转移到分析板(Optiplate-384)。
7.将5μL受体珠粒添加到分析板中并且培育2小时
8.添加5μL供体珠粒并且培育2小时
9.通过EnSpire多模板读取器对所述板计数
表2：关键试剂/供应器
实例54：αLISA Ultra pAKT分析
检定方案：
1.MCF-7细胞于康宁3701培养板中并且培育20～24小时。将在每孔36μL培养基中接种16,000～20,000个细胞。
2.用新制培养基更换培养基且培育再90分钟。
3.通过HAMILTON将12μL(4X)化合物添加到细胞板中。最终DMSO浓度为0.5％。培育2小时。
4.通过HAMILTON的抽吸38μL，每孔10μL静止。
5.使用HAMILTON添加10μL 2X溶解缓冲液；孔中的总体积是20μL。使细胞震荡30分钟。用塑料箔覆盖板并且将板存储在-80℃直至分析。
6.在室温下的细胞裂解物并且将10μL裂解物转移到分析板(Optiplate-384)。
7.将5μL受体珠粒添加到分析板中并且培育2小时
8.添加5μL供体珠粒并且培育2小时
9.通过EnSpire多模板读取器对所述板计数
表3：关键试剂/供应器
实例55：在24小时和48小时时间点的基于蛋白质印迹的pS6K1和pAKT分析
检定方案
1.将六个孔板接种500,000个PC3个细胞/孔并培育20～24小时。
2.将化合物添加到细胞板中。培育24到48小时。
4.将板放在冰上且经由抽吸去除培养基。用1mL 1×PBS洗涤孔且接着完全抽吸。
5.添加110μL 1％曲拉通溶解缓冲液(Triton Lysis Buffer)，且剧烈刮擦每一孔。
6.将细胞均匀性转移到冰上的1.5mL埃彭道夫管(eppendorf tube)中，并且在4℃下以10,000rpm旋转10分钟。
7.利用布拉德福分析(Bradford assay)定量所得细胞裂解物的蛋白质浓度，且在具有1×MES缓冲液的4-12％ Bis/Tris凝胶上经由蛋白质印迹分析样品。
8.将凝胶在50V下转移到膜上持续100分钟，用奥德赛填充缓冲液(OdysseyBlocking buffer)阻断30分钟，接着在旋转器上在4℃下与主要抗体(pS6K1 T389兔或pAktS473兔)一起培育过夜。
9.用TBS-T洗涤膜3次，在每次洗涤之间培育5分钟，接着与二级抗体(LiCorIRDye800驴抗兔)一起培育至少30分钟。
10.用TBS-T洗涤膜3次，在每次洗涤之间培育5分钟。
11.接着在室温下将凝胶与PBS一起培育5分钟，接着使用Li-Cor成像。
代表性蛋白质印迹的结果概述于图1中。用雷帕霉素(0.1μM和0.01μM)或I-40(1μM、0.1μM、0.01μM和0.001μM)处理PC3细胞24小时和48小时。清楚地表明在24和48小时两种情况下，对于雷帕霉素和I-40两者，pS6K1显著减少，表明mTORC1路径的抑制。重要的是，I-40在24或48小时下不降低pAkt的水平。相比之下，雷帕霉素展现在24和48小时均抑制S6K1磷酸化(S473)，指示mTORC2路径抑制。
额外代表性蛋白质印迹和其中评估的化合物的结果概述于图2到图42中。所采用的方法基本上类似于上文所描述的那些方法。在PC3细胞、Jurkat细胞、野生型小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)细胞、结节性硬化症2(TSC2)阴性(TSC-/-)MEF细胞和结节性硬化症2(TSC2)阳性(TSC+/+)MEF细胞中评估化合物。细胞与本发明化合物一起培育各种时间段(例如5分钟、15分钟、30分钟、90分钟、24小时或48小时)，并且根据已知方法(如本文所描述的那些方法)评估。
表4展示在pS6K1和pAKT分析中本发明的所选择化合物的抑制活性(IC50)和其在100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中的溶解性。化合物编号对应于表1中的化合物编号。
相对于mTORC2选择性抑制mTORC1的本发明化合物(并且在至少24小时内保留选择性)由表4的“在24小时内mTORC1选择性”栏中的“是”指示。在24小时标记下不具有选择性的化合物由表4的“在24小时内mTORC1选择性”栏中的“否”指示。相对于mTORC2，对mTORC1抑制部分保留选择性的化合物由表4的“在24小时内mTORC1选择性”栏中的“部分”指示。“N/A”表示“未检定的”。
表示“+”的化合物呈现小于30μM的可溶性(x<30μM)。表示“++”的化合物呈现溶解大于或等于30μM且小于60μM(30μM≤x<60μM)。表示“+++”的化合物呈现大于或等于60μM的溶液数(60μM≤x)。
表示“A”的化合物呈现低于0.1nM的IC50(x<0.1nM)。表示“B”的化合物呈现大于或等于0.1nM且小于1nM(0.1nM≤x<1.0nM)的IC50。表示“C”的化合物呈现大于或等于1.0nM且小于10nM的IC50(1.0nM≤x<10nM)。表示“D”的化合物呈现大于或等于10nM并且具有大于100nM的IC50(10nM≤x<100nM)。表示为“E”的化合物呈现大于或等于100nM的IC50(100nM≤x)。
表4：例示性化合物的分析数据
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实例56：药物动力学特性
在C57Bl/6小鼠中评估本发明化合物的药物动力学特性并且与雷帕霉素比较。动物在施用I-40或雷帕霉素(1mg/kg IV、10mg/kg PO或2mg/kg IP)之前空腹隔夜。在施用化合物之后，以时间间隔使动物流血长达48小时。来自每个小鼠的全血以肉眼方式收集在聚丙烯试管中并且立即离心。为了HPCL分析，迅速地制备经分离血浆的等分试样。药物动力学研究的结果概述于表5中。化合物I-40展示与雷帕霉素相比改进的口服生物可用性，以及与雷帕霉素相比更低的清除率、更长的半衰期、增加的Cmax和增加的AUC。
表5：雷帕霉素和I-40的小鼠药物动力学特性的比较
实例57：评定对瘦型C57Bl/6小鼠用I-40进行慢性治疗对葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性的影响
将C57Bl/6小鼠(n＝12；8周龄)随机分组并且在施用化合物或媒剂前四(4)天测量基线测量值(重量、空腹葡萄糖和空腹胰岛素)。然后用I-40(10mg/kg PO)、雷帕霉素(10mg/kg IP)或媒剂(PO或IP)处理动物19天。在第7天和第14天，对动物进行称重并且评估进食后葡萄糖和进食后胰岛素含量。在第14天使动物空腹过夜，并且在第15天评估空腹胰岛素和腹膜内葡萄糖耐受性测试(ipGTT)。在第19天，在化合物或媒剂施用之后一(1)小时处死动物。采集组织,用于评估化合物含量和药效学。研究时程概述于图43中。
在图44和图45中概述ipGTT的结果。简单来说，如升高的葡萄糖含量所展示的，与Vh R相比，慢性雷帕霉素处理持续15天诱使C57Bl/6小鼠的葡萄糖耐受不良。相比而言，I-40不诱使葡萄糖耐受不良。
实例58：评定I-40、I-117和依维莫司对急性肾病/铬肾病(AKI/CKD)小鼠模型的作用
将C57Bl/6小鼠(n＝15；雄性；10周龄)随机分组。在点击7天之后，进行IR或假手术。使小鼠恢复一(1)天，且开始于第2天的接受IR手术的动物被施用媒剂、依维莫司(10mg/kg PO)、I-40(10mg/kg PO)或I-117(10mg/kg PO)。在第9天，进行单侧肾切除(Unx)手术或假手术。在第29天，处死动物。
通过PAS、马松三色法(Masson's trichrome staining)或天狼星红评估肾脏组织学。天狼星红染色的结果概述于图46和图47中。简单来说，与媒剂相比，I-40展示肾脏纤维化的显著减少。
肾组织mRNA分析发炎和纤维化标记物(TGFβ、胶原蛋白I、胶原蛋白III、CCCTC结合因子(CTCF)、纤维结合蛋白(FN)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的qPCR)。
评估胶原蛋白I、胶原蛋白IV、α-SMA、4-羟基壬烯醛(4-HNE)和F4/80巨噬细胞的免疫组织化学。
评估血浆的化合物水平并且评估肾脏组织的药效学。
在肾脏中纤维化标记物和巨噬细胞浸润的表达的结果概述于图48到图51中。简单来说，I-40显著降低胶原蛋白I、胶原蛋白III和纤维结合蛋白mRNA的表达。此外，I-40显著减少巨噬细胞向肾脏中的浸润。
实例59：评定对同种混合淋巴细胞反应中的IFN-γ产生的影响
评估雷帕霉素、依维莫司、I-40和I-117对IFN-γ产生在同种异体混合淋巴细胞反应的影响(例如埃莱夫切里亚迪斯,T(Eleftheriadis,T)等人,国际分子医学杂志(Int.J.Mol.Med.),37(5):1412-20(2016)https://doi.org/10.3892/ijmm.2016.2547)。IC50值概括于下表6和图52中。I-40和I-117不抑制IFN-γ产生，而雷帕霉素和依维莫司显著抑制IFN-γ产生。
表6：IFN-γ抑制
雷帕霉素 依维莫司 I-40 I-117
IC50(nM) 2.4 15.2 >3000 >3000

Claims (4)

1.一种化合物，其为
或其立体异构体、互变异构体、溶剂合物、水合物或多晶型物。
2.一种化合物，其为
3.一种化合物，其为
或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、溶剂合物、水合物或多晶型物。
4.权利要求3所述的化合物，其为
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