BR112020008570A2 - método de inspeção intraoral com o uso de informações para grupos de bactérias associados a índices clínicos - Google Patents

Abstract

[Problema] O fornecimento de um método de inspeção intraoral para determinar o estado de doença periodontal. [Solução] Um método de inspeção intraoral em que as intensidades de sinal de ácido nucleico derivado de espécies bacterianas intraorais presentes em uma amostra intraoral são medidas, as razões de presença das espécies bacterianas são calculadas a partir dos valores medidos das intensidades de sinal e o estado de doença periodontal é determinado com o uso dos valores calculados obtidos como índices. As razões de presença das espécies bacterianas servem como uma correlação entre a quantidade bacteriana de espécies bacterianas que aumentam com um aumento no número de bolsas periodontais e a quantidade bacteriana de espécies bacterianas que diminuem com um aumento no número de bolsas periodontais.

Description

“MÉTODO DE EXAME INTRAORAL COM O USO DE INFORMAÇÕES DE GRUPOS DE BACTÉRIAS ASSOCIADOS A ÍNDICES CLÍNICOS” Campo da Técnica

[0001] A presente invenção refere-se a um método de exame intraoral para determinar o estado de doença periodontal com uso de informações em um grupo bacteriano relacionado a índices clínicos. Antecedentes da técnica

[0002] A doença periodontal tem um aspecto de uma infecção bacteriana que envolve uma pluralidade de bactérias, e um aspecto de uma doença multifatorial que progride com o envolvimento de bactérias causativas (fatores bacterianos), imunidade (fatores hospedeiros), e hábitos de estilo de vida. Bactérias periodônticas são envolvidas no começo de doença.

[0003] Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis, Treponema denticola, Campylobacter — rectus, — Fusobacterium — nucleatum, Prevotella intermedia, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, e similares foram relatados como bactérias periodontopáticas (Literatura Não Patentária1 e 2). Dessas, três espécies bacterianas, a saber, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis, e Treponema denticola, são chamadas "complexo vermelho" e são relacionadas como importantes bactérias causativas de periodontite crônica. Sabe-se que a presença do "complexo vermelho" aumenta a malignidade de doença periodontal, e as bactérias que consistem no "complexo vermelho" são considerados como bactérias clinicamente importantes.

[0004] Adicionalmente ao supracitado, Aggregatibacter actinomycetemcomitans foi relatado como uma bactéria causativa de periodontitis invasiva, e Prevotella intermedia foi relatada como periodontite adolescente ou gestacional (Literatura Não Patentária1 e 2).

[0005] Como um teste bacteriano convencional para doença periodontal, foi relatado que há uma relação entre o valor total de três tipos de "complexo vermelho" bactérias em placa ou saliva e o estado (grau de progressão) da doença periodontal. Especificamente, é determinado quando a contagem bacteriana de pelo menos um dentre Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis, e Treponema denticola em relação à contagem bacteriana total é menor do que 0,5%, o grau de relação é "baixo", quando o mesmo é 0,5% ou mais e menor do que 5%, o grau de relação é "médio", e quando o mesmo é 0,5% ou mais, o grau de relação é "alto" (Literatura Não Patentária3).

[0006] Como um método para detectar bactérias periodontopáticas e calcular a contagem bacteriana, por exemplo, métodos que usam um método de cultura, PCR em tempo real, um sequenciador de próxima geração, e um microarranjo de DNA foram relatados. Mais especificamente, há também um relatório de detecção individual do número de células de Porphyromonas gingivalis e/ou células de Tannerella forsythensis (primeiramente Bacteroides forsythus) na saliva com uso de um método de PCR em tempo real (Literatura Patentária 1,3, e 4).

[0007] Adicionalmente, um método de T-RFLP foi também relatado, no qual o DNA genômico da flora bacteriana é recuperada, tratada com uma enzima de restrição, e a flora bacteriana é reconhecida das informações do DNA fragmentado com uso do grau de similaridade de padrão como um índice (Literatura Patentária 5). O relatório identifica padrões da flora bacteriana que se correlaciona com índices clínicos dentais. No entanto, informações na contagem bacteriana específica de cada bactéria individual não foi incluída, e nenhuma interpretação adicional foi alcançada. O método de T-RFLP pode representar a composição de uma comunidade bacteriana como um padrão de pico e pode realizar facilmente análise comparativa de uma pluralidade de amostras. Por outro lado, visto que cada pico não é necessariamente derivado de uma espécie bacteriana, a composição de comunidade bacteriana é difícil de entender (Literatura Não Patentária 4).

[0008] Nos últimos anos, o uso de sequenciadores de próxima geração foi mencionado como um método para entender a composição de um grupo bacteriano. Por exemplo, a Literatura Patentária 9 fornece um método para testar a flora bacteriana salivar determinando-se aleatoriamente as sequências de base de genes de RNA ribossômico da flora bacteriana em um espécime de saliva coletados de um indivíduo humano. Esse método de teste propõe um método para detectar doença de intestino inflamatório pela saliva. Como resultado de análise de UniFrac, o grupo saudável e o grupo de paciente de CD pode ser distinguido, enquanto, por outro lado, o teste t é repetido para cada bactéria individual para realizar um teste de diferença significativo, o que torna o processo de análise questionável.

[0009] Adicionalmente, como um método para detectar as cargas bacterianas de todas as bactérias, isto é, um método para detectar a carga bacteriana total, há um relatório de uso de um iniciador universal que seleciona uma região altamente conservada entre micro-organismos (Literatura Patentária 6 a 8). Em um exemplo com uso de um microarranjo de DNA, há um relatório de que 20 tipos de bactérias orais foram detectados ajustando-se um conjunto de iniciadores universais na etapa de PCR da preparação de amostra. (Literatura Não Patentária5 a 8).

[0010] Até agora, muitos exemplos foram relatados, no qual a contagem bacteriana de pelo menos uma bactéria de "complexo vermelho" é medida e usada como um índice de severidade de doença periodontal. No entanto, visto que doença periodontal é uma doença causada por uma pluralidade de bactérias, somente as mesmas informações que as obtidas pela medição de bolsa periodontal foi obtida na medição de uma variedade limitada de bactérias malignas. Adicionalmente, em relação aos índices para determinar efeitos terapêuticos da doença periodontal, os efeitos terapêuticos são basicamente determinados com base em informações clínicas obtidas através da experiência dos dentistas e, na maioria dos casos, informações na flora bacteriana não foram confirmadas.

[0011] Além disso, não houve índice de deterioração de doença periodontal no estágio inicial de doença periodontal. Portanto, a doença periodontal já progrediu pelo tempo que muitos pacientes notam que os mesmos têm doença periodontal, e mesmo se os mesmos começarem tratamento depois que os mesmos notam os sintomas de doença periodontal, o tratamento não é eficaz em muitos casos. Portanto, houve também uma necessidade de um método eficaz para prever a deterioração de doença periodontal. Há a seguir, exemplos específicos.

[0012] "Terapia periodontal de suporte (SPT)", que é cuidado profissional contínuo após o tratamento periodontal, é um tratamento essencial para manter uma "condição estável" e manter uma prognose favorável de tratamento periodontal. Atualmente, os critérios para transição a SPT em configurações clínicas são profundidade de bolsa de sondagem (PPD), sangramento em sondagem (BOP) e similares. Entretanto, se houver um índice para prever o progresso após a transição a SPT no futuro, isso será especialmente útil em determinar um plano de tratamento, mas nenhum critério claro foi estabelecido no presente (Literatura Não Patentária9).

[0013] Sob tais circunstâncias, como uma tentativa de estabelecer critérios, um método com uso de uma combinação de alanina aminotransferase (ALT) e a proporção da contagem bacteriana de P. gingivalis em relação à contagem bacteriana total de saliva e um método para medir a proporção de P. gingivalis em saliva e o titulador de anticorpo de soro contra P. gingivalis durante a reavaliação de tratamento em combinação foram examinados (Literatura Não Patentária10). Além disso, testes bacterianos orais são também esperados como índices preditivos (Literatura Não Patentária11). Por exemplo, Haffajee et al. Relatou que há uma relação entre as contagens bacterianas de A. actinomycetemcomitans e P. gingivalis e o risco de perda de fixação de 2 mm ou mais (Literatura Não Patentária1 e 2). No entanto, conforme mencionado acima, o número de espécies bacterianas testadas é limitado, e tais testes ainda não foram colocados em uso prático como índices preditivos. Lista de Citações Literatura de Patente

[0014] Literatura Patentária 1: Patente nº JP 4252812

[0015] Literatura Patentária 2: Publicação de Patente (Kokai) nº JP 2008-206516

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[0016] Literatura Patentária 3: Publicação de Patente (Kokai) nº JP 2004-229537

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[0017] Literatura Patentária 4: Documento nº WO2002/010444.

[0018] Literatura Patentária 5: Publicação de Patente (Kokai) nº JP 2011-193810

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[0019] Literatura Patentária 6: Documento nº WO03/106676

[0020] Literatura Patentária 7: Publicação de Patente (Kohyo) Nº JP 2004-504069

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[0021] Literatura Patentária 8: Publicação de Patente (Kokai) nº JP 2007-068431

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[0022] Literatura Patentária 9: Patente nº JP 5863035 Literatura de não patente

[0023] Literatura Não Patentária1: Socransky, S. S. et al. J ClinMicrobiol, 37, 1426- 30, 1999

[0024] Literatura Não Patentária 2: "Concept of Periodontal Treatment Using Bacterial Test" (em japonês), editado por Igaku Joho-sha, Ltd.: Masato Minabe, Toshiaki Yoshino, p. 3, publicado em junho de 2005

[0025] Literatura Não Patentária 3: "Clinical Guidelines for Antibacterial Therapy in Patients with Periodontal Disease" (em japonês), editado pela Sociedade Japanesa de Periodontologia

[0026] Literatura Não Patentária 4: "Human Health and Diseases Controlled by Indigenous Bacterial Flora" (em japonês), editado por YODOSHA CO., LTD.: Hiroshi Ohno, Syohei Hattori, p. 97, publicado em março de 2014

[0027] Literatura Não Patentária 5: Eberhard, J. et al. Oral Microbiol Immuno!l 2008; 23:21-8

[0028] Literatura Não Patentária 5: Shang, S et al. Pediatric Research 2005; 58: 143-148

[0029] Literatura Não Patentária 6: Topcuoglu, N. et al. J Clin Pediatr Dent 2013; 38: 155-60

[0030] Literatura Não Patentária 7: Topcuoglu, N. et al. Anaerobe2015; 35: 35-40

[0031] Literatura Não Patentária 8: Henne, K. et al. J Oral Microbiol 2014; 6: 25874

[0032] Literatura Não Patentária 9: Guidelines by the Japanese Society of Periodontology, "JSP Clinical Practice Guideline for the Periodontal Treatment, 2015"

[0033] Literatura Não Patentária 10: "Predicting Periodontitis Progression from Salivary Bacterial Test and Serum Antibody Titer Test" (em japonês): Journal of the Japanese Society of Periodontology, vol. 58 (2016) Nº 4, pp. 254-258

[0034] Literatura Não Patentária 11: “Possibility of Bacterial Test in Periodontal Disease" (em japonês): Journal of the Japanese Society of Periodontology, vol. 55

(2013), Nº. 4, pp. 294-299

[0035] Literatura Não Patentária 12: Haffajee AD, Socransky SS. Microbial etiological agents of destructive periodontal diseases. Periodontol 2000. junho de 1994; 5:78-111. Revisão. Sumário da Invenção Problema da Técnica

[0036] Conforme descrito acima, atualmente, há ainda insuficiência em informações para determinar índices preditivos e política de tratamento de deterioração de doença periodontal. Portanto, um objetivo da presente invenção é fornecer um método para determinar o estado de doença periodontal e efeitos terapêuticos da doença periodontal detectando-se e quantificando-se bactérias orais em detalhes por um método simples e similares. Solução para o Problema

[0037] Como resultado de estudos intensivos para solucionar os problemas acima, os presentes inventores constataram que o estado da doença periodontal pode ser determinado determinando-se a razão de abundância entre bactérias específicas (grupos) relacionadas às bactérias presentes em uma amostra oral. Isso levou à conclusão da presente invenção. Além disso, os presentes inventores constaram que condições patológicas com o mesmo valor de bolsa periodontal podem ser adicionalmente subdivididas e classificadas medindo-se coletivamente os grupos bacterianos orais principais (incluindo um grupo bacteriano relacionado à doença periodontal e um grupo bacteriano indígena) na placa e criando um modelo para determinar a deterioração de condições patológicas com base na razão de abundância do grupo bacteriano relacionado à doença periodontal e do grupo bacteriano indígena.

[0038] Além disso, os presentes inventores constaram que efeitos terapêuticos em doença periodontal, o progresso da doença periodontal, e similares podem ser determinados obtendo-se a razão de abundância entre bactérias específicas (grupos) presentes em uma amostra oral. Isso também levou à conclusão da presente invenção.

[0039] Especificamente, a presente invenção é conforme a seguir.

[0040] [1] Um método de exame intraoral para medir uma intensidade de sinal de um ácido nucleico a partir de um grupo bacteriano oral presente em uma amostra oral, calcular uma abundância do grupo bacteriano a partir de um valor medido da intensidade de sinal e determinar o estado da doença periodontal com o uso do valor calculado obtido como um índice, em que uma razão de abundância do grupo bacteriano mostra uma correlação entre uma carga bacteriana de uma espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e uma carga bacteriana de uma espécie bacteriana que diminui à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta.

[0041] [2] O método, de acordo com [1], em que o estado de doença periodontal é determinado mediante a comparação do valor calculado obtido com um valor de corte da abundância do grupo bacteriano.

[0042] [3] O método, de acordo com [1] ou [2], em que a abundância do grupo bacteriano é uma razão entre a carga bacteriana da espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

[0043] [4] O método, de acordo com [2] ou [3], em que o valor de corte é determinado com base em uma curva ROC criada a partir de um valor calculado obtido mediante o cálculo da abundância do grupo bacteriano a partir do valor medido da intensidade de sinal do ácido nucleico a partir do grupo bacteriano oral presente na amostra oral para padronização.

[0044] [5] O método, de acordo com qualquer um de [1] a [4], em que a razão de abundância de grupos bacterianos mostra uma correlação entre a carga bacteriana de espécie de Fusobacterium nucleatum e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

[0045] [6] O método, de acordo com qualquer um de [1] a [5], em que os seguintes (a) e (b) são usados como a razão de abundância de grupos bacterianos: (a) uma correlação entre a carga bacteriana da espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta (incluindo pelo menos uma espécie bacteriana além da espécie Fusobacterium nucleatum) e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta; e (b) uma correlação entre a carga bacteriana da espécie Fusobacterium nucleatum e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

[0046] [7] O método, de acordo com qualquer um de [1] a [6], em que a espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium nucleatum subsp. vincenti, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Filifactor alocis, Porphyromonas endodontalis, Eubacterium nodatum, Eubacterium saphenum, Treponema medium e Selenomonas sputigena.

[0047] [8] O método, de acordo com qualquer um de [1] a [7], em que a espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Prevotella nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundii |l, Selenomonas noxia, Prevotella denticola, Prevotella melaninogenica, Gemella sanguinis, Eubacterium sulci, Corynebacterium matruchotii, Rothia mucilaginosa, Porphyromonas catoniae, Solobacterium moorei, Neisseria — flavescens, Prevotella loeschei, Megasphaera micronuciformis, Actinomyces graevenitzii, Veillonella atypica, Prevotella pallens, Prevotella shahii, Porphyromonas pasteri, Veillonella rogosae, Alloprevotella spp. (A. rava, OT 308), Rothia dentocariosa, Granulicatella adiacens, Streptococcus salivarius, Haemophilus parainfluenzae e Streptococcus parasanguinis.

[0048] [9] O método, de acordo com qualquer um de [5] a [8], em que a espécie Fusobacterium nucleatum é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Fusobacterium nucleatum subsp vincenti, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp Animalis e Fusobacterium nucleatum subsp nucleatum.

[0049] [10] Um método de exame intraoral, caracterizado por medir uma intensidade de sinal de um ácido nucleico a partir de um grupo bacteriano oral presente em uma amostra oral, calcular uma abundância do grupo bacteriano a partir de um valor medido da intensidade de sinal, e correlacionar o valor calculado obtido com um estado ou progressão de doença periodontal ou efeitos terapêuticos na doença periodontal.

[0050] [11] O método, de acordo com [10], em que uma razão de abundância de grupos bacterianos e um estado da doença periodontal são correlacionados calculando-se uma razão de uma espécie bacteriana que aumenta como um valor de bolsa periodontal aumenta a uma espécie bacteriana que diminui à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e/ou uma espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal diminui.

[0051] [12] O método, de acordo com [10] ou [11], em que uma razão de abundância de grupos bacterianos e progressão de doença periodontal são correlacionados calculando-se uma razão de uma espécie bacteriana pertencentes ao gênero Fusobacterium que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta a uma espécie bacteriana que diminui à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e/ou uma espécie bacteriana que aumenta conforme um valor de bolsa periodontal diminui.

[0052] [13] O método, de acordo com qualquer um de [10] a [12], em que uma razão de abundância de grupos bacterianos e efeitos terapêuticos na doença periodontal é correlacionada comparando-se os seguintes valores de (a) e/ou (b) antes e após tratamento periodontal: (a) uma razão de uma espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e uma espécie bacteriana que diminui à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e/ou uma espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal diminui; e (bjuma razão de uma espécie bacteriana pertencente ao gênero Fusobacterium que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e uma espécie bacteriana que diminui à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e/ou uma espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal diminui.

[0053] [14] O método, de acordo com [12] ou [13], em que a espécie bacteriana pertencente ao gênero Fusobacterium é pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, e Fusobacterium periodonticum.

[0054] [15] O método, de acordo com qualquer um de [11] a [14], em que a espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta é pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, e Eikenella corrodens, e em que a espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e/ou espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal diminui é pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Prevotella nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundii Il, e Selenomonas noxia.

[0055] [16] O método, de acordo com qualquer um de [12] a [15], em que a espécie bacteriana pertencente ao gênero Fusobacterium é pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium “nucleatuâm subsp. nucleatuimy e Fusobacterium periodonticum, e em que a espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e/ou espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal diminui é pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Prevotella nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundii ||, e Selenomonas noxia. Efeitos Vantajosos da Invenção

[0056] De acordo com a presente invenção, um grande número de bactérias orais (incluindo bactérias relacionadas à doença periodontal e bactérias indígenas) pode ser coletivamente detectado e quantificado, e o estado de doença periodontal pode ser subdividido de modo a ser determinado conforme comparado com métodos convencionais. Além disso, de acordo com a presente invenção, o estado da doença periodontal, os efeitos terapêuticos na doença periodontal, a progressão da doença periodontal pode ser determinada, e as condições patológicas que têm o mesmo tamanho de bolsa periodontal podem ser adicionalmente subdivididas e classificadas. Adicionalmente, é possível determinar os efeitos terapêuticos e a condição estável sem o valor de bolsa periodontal. Além disso, no futuro, será também possível aprimorar o desempenho de modelo discriminante substituindo-se a espécie bacteriana usada para determinação.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0057] [Figura 1-1] A Figura 1-1 é um diagrama de dispersão de dados de medição de chip de DNA (razão de SN) de placa subgengival coletada de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). Cada diagrama foi descrito para 28 tipos individuais de bactérias montadas em um chip de DNA.

[0058] [Figura 1-2] A Figura 1-2 é um diagrama de dispersão de dados de medição de chip de DNA (razão de SN) de placa subgengival coletadas de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). Cada diagrama foi descrito para 28 tipos individuais de bactérias montadas em um chip de DNA.

[0059] [Figura 1-3] A Figura 1-3 é um diagrama de dispersão de dados de medição de chip de DNA (razão de SN) de placa subgengival coletada de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). Cada diagrama foi descrito para 28 tipos individuais de bactérias montadas em um chip de DNA.

[0060] [Figura 1-4] A Figura 1-4 é um diagrama de dispersão de dados de medição de chip de DNA (razão de SN) de placa subgengival coletadas de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). Cada diagrama foi descrito para 28 tipos individuais de bactérias montadas em um chip de DNA.

[0061] [Figura 1-5] A Figura 1-5 é um diagrama de dispersão de dados de medição de chip de DNA (razão de SN) de placa subgengival coletada de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). Cada diagrama foi descrito para 28 tipos individuais de bactérias montadas em um chip de DNA.

[0062] [Figura 1-6] A Figura 1-6 é um diagrama de dispersão de dados de medição de chip de DNA (razão de SN) de placa subgengival coletada de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). Cada diagrama foi descrito para 28 tipos individuais de bactérias montadas em um chip de DNA.

[0063] [Figura 1-7] A Figura 1-7 é um diagrama de dispersão de dados de medição de chip de DNA (razão de SN) de placa subgengival coletada de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). Cada diagrama foi descrito para 28 tipos individuais de bactérias montadas em um chip de DNA.

[0064] [Figura 2] A Figura 2 é um diagrama de dispersão dos índices de equilíbrio de grupo bacteriano (15 espécies de grupo de "bactérias positivamente correlacionadas" e 13 espécies do grupo de "bactérias negativamente correlacionadas") (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). A Figura mostra dados para 220 indivíduos.

[0065] [Figura 3] A Figura 3 é um histograma dos índices de equilíbrio de grupo bacteriano (conversão de LOG10) de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm (grupo sem doença e definição) e bolsa periodontal de 5 mm ou mais (grupo de doença e definição) (eixo geométrico vertical) e a frequência (eixo geométrico horizontal).

[0066] [Figura 4] A Figura 4 é um gráfico que mostra os resultados de análise de ROC de índices de equilíbrio.

[0067] [Figura 5] A Figura 5 é um diagrama de radar que mostra a razão de SN de cada espécie em uma amostra oral com um valor de bolsa periodontal de 4 mm e um valor de índice de equilíbrio (LOG10) de 1,516648. Os eixos geométricos do centro ao exterior são os índices de equilíbrio.

[0068] [Figura 6] A Figura 6 é um diagrama de dispersão dos índices de equilíbrio de grupo bacteriano (2 espécies de "bactérias de índice de progressão" e 13 espécies de "bactérias negativamente correlacionadas") (eixo geométrico vertical) e a profundidade de bolsa periodontal (Pd) (eixo geométrico horizontal). A Figura mostra dados para 220 indivíduos.

[0069] [Figura 7] A Figura 7 é um histograma dos índices de equilíbrio de grupo bacteriano (conversão de LOG10) de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm (grupo sem doença e definição) e bolsa periodontal de 5 mm ou mais (grupo de doença e definição) (eixo geométrico vertical) e a frequência (eixo geométrico horizontal).

[0070] [Figura 8] A Figura 8 é um gráfico que mostra os resultados de análise de ROC de índices de equilíbrio.

[0071] [Figura 9] A Figura 9 é um diagrama de radar que mostra a razão de SN de cada espécie em uma amostra oral com um valor de bolsa periodontal de 4 mm e um valor de índice de equilíbrio (LOG10) de 0.883. Os eixos geométricos do centro ao exterior são os índices de equilíbrio.

[0072] [Figura 10] A Figura 10 é um diagrama que mostra os resultados de determinar e subdividir o estado da doença periodontal.

[0073] [Figura 11-1] A Figura 11-1 é um diagrama de radar que mostra a razão de SN de cada bactéria em uma amostra oral no estado subdividido. Os eixos geométricos do centro ao exterior são os Índices de equilíbrio.

[0074] [Figura 11-2] A Figura 11-2 é um diagrama de radar que mostra a razão de SN de cada bactéria em uma amostra oral no estado subdividido. Os eixos geométricos do centro ao exterior são os Índices de equilíbrio.

[0075] [Figura 11-3] A Figura 11-3 é um diagrama de radar que mostra a razão de SN de cada bactéria em uma amostra oral no estado subdividido. Os eixos geométricos do centro ao exterior são os índices de equilíbrio.

[0076] [Figura 12] A Figura 12 é um gráfico que mostra os resultados de análise de ROC de índices de equilíbrio.

[0077] [Figura 13] A Figura 13 é um gráfico que mostra os resultados de análise de ROC de índices de equilíbrio.

[0078] [Figura 14] A Figura 14 é um diagrama de dispersão de índices de equilíbrio antes e após o tratamento, índices de equilíbrio e profundidade de bolsa periodontal.

[0079] [Figura 15] A Figura 15 é um diagrama de dispersão de índices de equilíbrio antes e após o tratamento, índices de equilíbrio, e profundidade de bolsa periodontal (criado a partir do número de cópia).

[0080] [Figura 16] A Figura 16 é um diagrama que mostra a razão relativa de cada bactéria de uma amostra oral obtida dos resultados de análise de sequenciador de próxima geração.

[0081] [Figura 17] A Figura 17 é um diagrama de dispersão de índices de equilíbrio e profundidade de bolsa periodontal.

[0082] [Figura 18] A Figura 18 é um histograma de dados em uma profundidade de bolsa periodontal de 1 a 3 mm e uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais dentre dados mostrados na Figura 17.

[0083] [Figura 19] A Figura 19 é um gráfico que mostra os resultados de análise de ROC. Descrição das Modalidades

[0084] Doravante, a presente invenção será descrita em detalhes. O escopo da presente invenção não é limitado a essas descrições e, diferente dos exemplos a seguir, o escopo da presente invenção pode ser apropriadamente modificado e implantado dentro de uma faixa que não afeta a essência da presente invenção. Todas as publicações citadas no presente relatório descritivo, por exemplo, antes da literatura da técnica, publicações, publicações de patente, e outra Literatura Patentária são incorporadas no presente documento a título de referência.

[0085] A presente invenção refere-se a um método de exame intraoral para medir uma intensidade de sinal de um ácido nucleico de um grupo bacteriano oral presente em uma amostra oral, calcular uma abundância do grupo bacteriano a partir de um valor medido da intensidade de sinal, e determinar o estado de doença periodontal com uso do valor calculado obtido como um índice. De acordo com a presente invenção, a abundância do grupo bacteriano mostra uma correlação entre a carga bacteriana de uma espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e a carga bacteriana de uma espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

[0086] Um aspecto específico do método de exame intraoral não é limitado, mas o método para medir uma contagem bacteriana em uma amostra oral será descrita no presente documento se focando em um método com uso de um chip de DNA.

[0087] As bactérias na amostra oral podem ser detectadas, medidas, e quantificadas por um método diferente do método com uso de um chip de DNA, por exemplo, o método de invasor, o método de PCR em tempo real, o método de PCR invasor, o método de sequenciamento de próxima geração, ou similares.

1. Sonda de oleonucleotídeo para detectar bactérias orais

[0088] De acordocom o método da presente invenção, um chip de DNA pode ser usado ao detectar bactérias orais em uma amostra oral coletadas de um indivíduo. Por exemplo, a sonda (um) a seguir e pelo menos uma das sondas (b) e (c) a seguir podem ser montadas no chip de DNA.

(a) Uma sonda que consiste em ácidos nucleicos que hibridizam especifica e separadamente com os genes de bactérias alvo de detecção (ou produtos de amplificação dos genes) (b) Sonda de índice de carga total que consiste em ácidos nucleicos que hibridizam com todos os genes bacterianos (ou produtos de amplificação dos genes) (c) Uma sonda que consiste em ácidos nucleicos que hibridizam específica e separadamente com um ou mais tipos de índices de carga absoluta

[0089] Adicionalmente, em geral, um chip de DNA é um termo geral para um substrato no qual sondas são dispostas. Além disso, nomes tais como chip de DNA e microarranjo de DNA usados no presente documento não são distinguidos entre si e são sinônimos.

(1) Bactérias orais submetidas à medição

[0090] No método de exame da presente invenção, bactérias orais submetidas à medição não são limitadas. No entanto, bactérias pertencentes às seguintes podem ser bactérias alvo de detecção: os gêneros Porphyromonas, Tannerella, Treponema, Prevotella, “Campylobacter, Fusobacterium, Streptococcus, Aggregatibacter, Capnocytophaga, Eikenella, Actinomyces, Veillonella, e Selenomonas, e mais os gêneros Pseudomonas, Haemophilus, Klebsiella, Serratia, Moraxella, Eubacterium, Parvimonas, Filifactor, Alloprevotella, Solobacterium, Rothia, Peptostreptococcus, Gemella, Corynebacterium, Neisseria, Granulicatella, e Megasphaera; e os gêneros do filo SR1.

[0091] Mais especificamente, por exemplo, as bactérias alvo de detecção são preferencialmente as espécies de bactérias | a seguir que são atualmente consideradas como associadas com doença periodontal e cáries: Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Fusobacterium periodonticum, —Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Eikenella corrodens, Streptococcus — gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundiill, e Selenomonas noxia; e mais Streptococcus sanguis, —Actinomyces viscosus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus mutans, Eubacterium nodatum, Parvimonas micra, Filifactor alocis, Streptococcus sobrinus, Porphyromonas pasteri, Veillonella atypica, Haemophilus parainfluenzae, Alloprevotella spp. (A. rava, OT 308), Streptococcus parasanguinis, Actinomyces israelii, Prevotella pallens, Prevotella loescheii, Prevotella histicola, Solobacterium moorei, Prevotella melaninogenica, Selenomonas sputigena, Rothia dentocariosa, Rothia mucilaginosa, Veillonella rogosae, Peptostreptococcus stomatis, Prevotella denticola, Porphyromonas endodontalis, Streptococcus salivarius, Actinomyces graevenitzii, Treponema medium, Treponema socranskii, Gemella sanguinis, Porphyromonas catoniae, Corynebacterium matruchotii, Eubacterium saphenum, Neisseria flavescens, Granulicatella adiacens, Eubacterium sulci, Megasphaera micronuciformis, Prevotella shahii, e SR1 sp. OT 345. Mais preferencialmente, as bactérias são espécie bacteriana com um claro aumento/diminuição em relação às condições patológicas.

[0092] Para o propósito de detectar a condição na cavidade oral, por exemplo, espécie bacteriana que aumenta e diminui claramente em conjunto com o valor de bolsa periodontal pode ser mencionado.

[0093] De acordo com a presente invenção, o "valor de bolsa periodontal" se refere ao valor de profundidade da bolsa periodontal (Pd). O termo "profundidade de bolsa periodontal" (Pd) se refere à distância da margem gengival à ponta de uma sonda periodontal quando a sonda é inserida na bolsa. Pd é digitalizado em unidades de 1 mm. O termo "sonda periodontal" conforme usado no presente documento significa um instrumento de medição de bolsa (periosonda).

[0094] O aumento/diminuição não é limitado a um padrão de aumento/diminuição, por exemplo, um padrão de um grupo bacteriano que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta ou um padrão de um grupo bacteriano que aumenta quando o valor de bolsa periodontal é pequeno, e então aumenta, cuja carga bacteriana é mantida quando o valor de bolsa periodontal se torna grande. Exemplos mais simples são um grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" e um grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta".

[0095] Um grupo de espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e um grupo de espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta podem ser confirmados por uma ferramenta com capacidade de medir a carga bacteriana (ou uma quantidade medida que é proporcional à carga bacteriana tais como a razão de SN). A ferramenta não é particularmente limitada e, por exemplo, um chip de DNA pode ser usada.

[0096] Quando um chip de DNA é usado para confirmação, uma amostra oral é medida com o chip de DNA, e então, uma coeficiente de correlação entre o valor de bolsa periodontal e a carga bacteriana de cada bactéria ou a quantidade medida tais como a razão de SN é calculada. Desse modo, as bactérias podem ser classificadas e identificadas como um grupo bacteriano que tem um coeficiente de correlação positivo e um grupo bacteriano que tem um coeficiente de correlação negativo. O valor absoluto do coeficiente de correlação para essas bactérias é preferencialmente 0,02 ou mais, mais preferencialmente 0,1 ou mais, ainda mais preferencialmente, 0,2 ou mais, com preferência particular, 0,4 ou mais, e, com máxima preferência, 0,6 ou mais quando o número de medições é 40 ou mais.

[0097] Quando com uso dos dados de erro corrigido experimentais para determinar o estado o doença periodontal, os dados de erro corrigido experimentais são também usados para classificação de grupos bacterianos.

[0098] Espécies bacterianas que aumentam à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta (doravante algumas vezes denominados como "bactérias positivamente correlacionadas") são bactérias que aumentam com a deterioração de doença periodontal. Exemplos conhecidos de tais espécies são Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, e Treponema denticola, que são usadas em testes bacterianos de doença periodontal existentes.

[0099] A espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatuim subsp. nucleatum, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Filifactor alocis, Porphyromonas endodontalis, Eubacterium nodatum, Eubacterium saphenum, Treponema medium e Selenomonas sputigena.

[0100] Desses, bactérias que aumentam quando o valor de bolsa periodontal é pequeno, e então aumenta, cuja carga bacteriana é mantida quando o valor de bolsa periodontal se torna grande são algumas vezes denominadas como "bactérias de Índice de progressão". Acredita-se que as "Bactérias de índice de progressão" desempenham uma função em conectar as "bactérias ruins" e "bactérias boas" descritas abaixo e servem como um índice de pré-estágio de deterioração de doença periodontal. Exemplos específicos de "bactérias de índice de progressão" incluem espécie de Fusobacterium nucleatum.

[0101] A espécie Fusobacterium nucleatum é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Fusobacterium nucleatum subsp vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp Animalis e Fusobacterium nucleatum subsp nucleatum.

[0102] Entretanto, um grupo bacteriano que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta pode ser doravante denominado como "bactérias ruins”. Exemplos específicos de "bactérias ruins" incluem espécie bacteriana diferentes da espécie de Fusobacterium nucleatum entre espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta. Por exemplo, pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Filifactor alocis, Porphyromonas endodontalis, Eubacterium nodatum, Eubacterium saphenum, Treponema medium, e Selenomonas sputigena podem ser mencionados.

[0103] Exemplos de espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta (doravante algumas vezes denominado como "bactérias negativamente correlacionadas") incluem algumas das espécies bacterianas pertencentes aos gêneros Streptococcus, Actinomyces, Veillonella, e similares.

[0104] As mesmas incluem: (i) espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta (isto é, deterioração de doença periodontal); (ii) espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal diminui (aprimoramento de doença periodontal); ou ambos (i) e (ii) acima. As espécies bacterianas que diminuem à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta pode ser doravante algumas vezes denominadas como "bactérias boas”.

[0105] Exemplos de espécies bacterianas que diminuem à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e/ou a espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal diminui incluem pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Prevotella nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces —odontolyticus, Veillonella parvula,y Actinomyces naeslundii ||,

Selenomonas noxia, Prevotella denticola, Prevotella melaninogenica, Gemella sanguinis, Eubacterium sulci, Corynebacterium matruchotii, Rothia mucilaginosa, Porphyromonas catoniae, Solobacterium moorei, Neisseria flavescens, Prevotella loescheii, Megasphaera micronuciformis, Actinomyces graevenitzii, Veillonella atypica, Prevotella pallens, Prevotella shahii, Porphyromonas pasteri, Veillonella rogosae, Alloprevotella spp. (A. rava, OT 308), Rothia dentocariosa, Granulicatella adiacens, Streptococcus salivarius, Haemophilus parainfluenzae e Streptococcus parasanguinis. (2) Sonda (a)

[0106] Na presente invenção, oligo DNA que pode ser usado como uma sonda (a) pode ser hibridizado com uma sequência de base de uma região específica bacteriana (uma região que tem uma sequência de base que muda dependendo do tipo bacteriano) da sequência de base de um ácido nucleico de uma bactéria oral. Aqui, o ácido nucleico pode ser qualquer um de DNA e RNA incluindo DNA cromossômico e DNA de plasmídeo, e não é limitado, mas DNA cromossômico é preferencial. Especificamente, um oligonucleotídeo usado como uma sonda na presente invenção tem capacidade de hibridizar com a sequência de base do gene de 16S rRNA no DNA cromossômico bacteriano oral.

[0107] É preferencial que as sondas que podem ser usadas na presente invenção sejam projetadas selecionando-se uma região que tem uma sequência de base específica a um tipo diferente de bactéria oral a ser detectada e projetando uma sequência de base da região. Em geral, ao projetar uma sonda, adicionalmente a selecionar uma região específica, é necessário que a temperatura de fusão (Tm) seja uniforme e que uma estrutura secundária seja difícil de se formar.

[0108] A sequência de base específica correspondente a cada espécie bacteriana oral pode ser encontrada por meio de, por exemplo, realizar alinhamento múltiplo e projetar sondas em diferentes regiões entre espécies. O algoritmo para alinhamento não é particularmente limitado, mas como um mais programa de análise específica, por exemplo, um programa tal como ClustalX1.8 pode ser usado. Os parâmetros usados para o alinhamento pode ser executado no estado padrão de cada programa,

mas pode ser ajustado conforme apropriado de acordo com o tipo de programa.

[0109] Entretanto, a especificidade de sonda pode ser uma especificidade que detecta coletivamente bactérias do mesmo gênero com base na especificidade de nível de gênero ou pode ser uma especificidade que pode ser detectada no nível de espécie individual. Sondas podem ser apropriadamente determinadas de acordo com o propósito de detecção bacteriano. Dependendo nível de especificidade de detecção, a espécie bacteriana que pode ser detectada pode ser limitada a uma espécie específica ou pode ser tomada como a soma (total) no nível de gênero. (3) Sonda (b)

[0110] Uma sonda de índice de carga total é uma sonda para capturar todas as bactérias em um espécime que pode ser amplificado com um par de iniciador específico. Ao detectar bactérias, é especificamente importante que a carga bacteriana total dos pontos de vista da proporção de bactérias alvo em relação às bactérias inteiras incluindo bactérias não alvo de detecção e a abundância geral de bactérias presentes em um espécime. As bactérias não alvo de detecção podem ser entendidas como a soma (total) das bactérias de tipos conhecidos que são conhecidos como presentes, mas podem não ser detectados, e bactérias de tipos desconhecidos que são conhecidos como presentes.

[0111] Demodo a detectar a carga bacteriana total, por exemplo, é possível medir a carga bacteriana total independentemente de um chip de DNA. Entretanto, a simplicidade da operação é aprimorada montando-se uma sonda, que é um índice da carga bacteriana total, no chip de DNA. Em relação às sondas, uma sequência de base comum a muitos tipos de espécie bacteriana pode ser usada a partir das sequências de base amplificadas pelo par iniciador. Quando tal sequência não pode ser encontrada, uma pluralidade de sequências relativamente comuns pode ser projetada e compreensivamente determinada como usada como a sonda de índice de carga total. A sonda de índice de carga total é preferencialmente uma sonda que hibridiza com um ácido nucleico a partir de uma bactéria contida em um espécime, especificamente, uma sonda que hibridiza com uma sequência de base comum em uma pluralidade de tipos de bactérias a ser detectada a partir da sequência de base amplificada pelo par de iniciador específico.

[0112] O índice de carga total geralmente aumenta devido ao fato de que isso representa a quantidade total de produtos de amplificação específicos a espécies individuais. Portanto, a intensidade de sinal de interesse pode exceder a faixa de intensidades de sinal detectáveis. De modo a evitar tal situação, é desejável limitar a quantidade de um espécime usado para hibridização. Alternativamente, ao projetar uma sonda, por exemplo, o valor de Tm da sonda é abaixado. Especificamente, é concebível reduzir o teor de GC ou encurtar o comprimento de sequência de sonda por si só.

[0113] Além disso, no tempo de hibridização, é possível reduzir a intensidade de sinal adicionando-se um ácido nucleico que atua de forma competitiva na hibridização entre o ácido nucleico amplificado e a sonda de índice de carga total. Exemplos de tal ácido nucleico incluem um ácido nucleico que tem uma sequência que é total ou parcialmente a mesma que a da sonda de índice de carga total, ou um ácido nucleico que tem total ou parcialmente uma sequência complementar da sonda de índice de carga total. (4) Sonda (c)

[0114] Uma sonda de índice de carga absoluta é uma sonda que hibridiza somente com um ácido nucleico correspondente a um índice de carga absoluta. No presente relatório descritivo, o índice de carga absoluta é um índice que indica a quantidade de um ácido nucleico que é adicionada a um espécime em uma quantidade fixada antes de uma reação de amplificação ou uma reação de hibridização. O índice de carga absoluta se refere a um ácido nucleico que pode ser certamente amplificado por uma reação de amplificação normal, e serve como um denominado controle positivo. Portanto, quando uma sonda específica ao índice de carga absoluta é montada em um chip de DNA, pode ser confirmado a partir dos resultados de detecção se a reação de amplificação, hibridização, ou similares foi apropriadamente realizado.

[0115] Em um caso no qual o índice de carga absoluta é adicionado antes de uma reação de amplificação, é necessário adicionar um par de iniciador específico para o Índice de carga absoluta a uma solução de reação. Em alguns casos, é também possível amplificar comumente a sonda com um par iniciador para bactérias. Além disso, de modo a alcançar a detecção independentemente de outros alvos de detecção por hibridização, é necessário selecionar uma sequência de base que tem baixa similaridade a ambas as bactérias alvo de detecção e bactérias não alvo de detecção.

[0116] Quando um tipo de índice de carga absoluta é definido, se a eficiência de amplificação ou eficiência de hibridização for ligeiramente aumentada ou diminuída, o coeficiente de correção pode ser calculado comparando-se as intensidades de sinal do índice de carga absoluta. Ao comparar dados de uma pluralidade de chips de DNA, as intensidades de sinal após a correção com o coeficiente de correção podem ser comparadas.

[0117] Aqui, exemplos específicos das sondas (a), (b), e (c) podem ser exemplificados na Tabela 1.

[0118] A Tabela 1 mostra exemplos de sondas específicas a bactérias individuais (SEQ ID NOS: 1 a 33).

[0119] Um exemplo da sonda de índice de carga total é apresentado na SEQ ID NO: 34.

[0120] Um exemplo da sonda de índice de carga absoluta é apresentado na SEQ ID NO: 35.

[0121] Um exemplo do índice de carga absoluta é apresentado na SEQ ID NO: 36.

[Tabela 1] SEQ ID NO: somas TA 7 Sonda de Campylobacter rectus 2 |GTCATAATTCTTTCCCAAGA

SEQ ID NO: e | Sonda de Campylobacter showae CAATGGGTATTCTTCTTGAT Sonda de Fusobacterium nucleatum

ANNA TAGTTATACAGTTTCCAACG subsp. vincentii Sonda de Fusobacterium nucleatum

CCAGTACTCTAGTTACACA subsp. polymorphum Sonda de Fusobacterium nucleatum jo TTTCTTTCTTCCCAACTGAA subsp. animalls 5 Sonda de Fusobacterium nucleatum 12 TACATTCCGAAAAACGTCAT subsp. nucleatum 7 Sonda de Fusobacterium periodonticum | TATGCAGTTTCCAACGCAA Sonda de Prevotella intermedia GGGTAAATGCAAAAAGGCA Sonda de Prevotella nigrescens CTTTATTCCCACATAAAAGC Sonda de Streptococcus constellatus — |AAGTACCGTCACTGTGTG Sonda de Aggregatibacter 17 GTCAATTTGGCATGCTATTA actinomycetemcomitans 1 Sonda de Campylobacter concisus CCCAAGCAGTTCTATGGT Sonda de Capnocytophaga gingivalis — | TACACGTACACCTTATTCOTT Sonda de Capnocytophaga ochracea — |CAACCATTCAAGACCAACA Sonda de Capnocytophaga sputigena 1 | TACACGTACACCTTATTCTT Sonda de Eikenella corrodens 2 CTCTAGCTATCCAGTTCAG Sonda de Streptococcus gordonii CACCCGTTCTTCTCTTACA Sonda de Streptococcus gordonii 1 CACCCGTTCTTCTCTTAC Sonda de Streptococcus intermedius ACAGTATGAACTTTCCATTCT Sonda de Streptococcus intermedius 1 | CAGTATGAACTTTCCATTCT Sonda de Streptococecus mitis 6 TCTCCCCTCTTGCACTCA Sonda de Streptococcus mitis bv 2 TCCCCTCTTGCACTCAAGT 29 Sonda de Actinomyces odontolyticus |ANGTCAGCCCGTACCCA

SEQ ID NO: Sonda de Veillonella parvula TATTCGCAAGAAGGCCTT Sonda de Actinomyces naeslundii | CCACCCACAAGGAGCAG Sonda de Selenomonas noxia 1 TTCGCATTAGGCACGTTC Sonda de Streptococcus mutans CACACGTTCTTGACTTAC Sonda de índice de carga total CGTATTACCGCGGCTGCTGGCAC Sonda de índice de carga absoluta CTATTCGACCAGCGATATCACTACGTAGGC

GTGAGAAGCCTACACAAACGTAACGTCAGGGC TAAGACAAACGCTAAC GGTACACCCTAGATGGGAGCTTGTAGCTAGAT CGCTAAGTCCTACCGA CATGTAGGCATACTCACGAAGGCAATTCCCTG AAAGCCTCGTCTTATC CCGAACTTGGCATCTGCTGATACGTCAGGTTG AACGCGTACATTTACC TGTCATGCGTGGGCCTTCTCCGAATAGCCTAC

GTAGTGATATCGCTGG 36 Índice de carga absoluta TCGAATAGGCGGATTGCTCATAAATGCACATTG

GCTAAGGCCCACGGA ACACGAATCACGTGAGATCACTTACTATTCGAC GGAACTACTATACGCA CCGGGACATGCAAGTAGCGTCCCACAAGCATA AGGAACTCTATACTCG CCATCTACGCAGCTACAGGGGATACACGTATG AGCGGTTACGAAGTAA AGCCGAGATAGAGCGGTCTTTAGAGAAAAAAC AGGATTAGATACCCTGG

TAGTCC <Projeto de iniciador>

[0122] No método de projeto de iniciador de acordo com a presente invenção, primeiro, pelo menos uma região variável que mostra a diversidade das bactérias a serem analisadas é selecionada, e uma região de projeto de iniciador universal altamente conservativo é selecionada antes e após a região variável selecionada para projetar uma sequência iniciadora. A região variável de interesse inclui, porém, sem limitação, o gene de 16S rRNA presente em todas as bactérias na sequência genômica. Do gene de 16S rRNA, é desejável alvejar o comprimento total ou uma ou mais regiões dentre regiões variáveis V1 a V9. Mais preferencialmente, é desejável alvejar as regiões variáveis V1 a V6. Ainda mais preferencialmente, é desejável alvejar as regiões variáveis V3 a V6. Sabe-se que a região variável do gene de 16S rRNA consiste nas regiões V1 a V9, que também foram especificadas.

[0123] Para avaliara conclusão dos iniciadores, um banco de dados que adquiriu uma ampla faixa de sequências genômicas bacterianas é utilizado. Exemplos específicos de tal banco de dados incluem RDP, NCBI, KEGG e MGDB. Como um exemplo, a sequência de iniciador universal projetada é inserida em "Combinação de Sonda" do banco de dados de RDP. Na lista de resultados, o número de combinações exatas na "Pesquisa Total" é obtida. Quanto mais próximo o número de combinações perfeitas é a "Busca Total", maior é a cobertura. Nesse tempo, como uma condição, "Tipo" pode ser selecionado para "Cepa”. Adicionalmente, "Isola" pode ser selecionado para "Fonte".

[0124] Ao projetar o índice de carga absoluta sequência e uma sequência iniciadora para amplificar a sequência, por exemplo, é possível usar a função RNDB1I9ETWEEN do software "EXCEL" (fabricado pela MICROSOFT), gerar aleatoriamente X números inteiros de 1 a 4 (XK é um número arbitrário), conectar os mesmos para criar um valor numérico de X dígitos que consiste somente em valores numéricos 1 a 4, e substituir valores numéricos 1 a 4 com qualquer um dentre A, G, C e T, obtendo assim sequências aleatórias. Por exemplo, substituindo-se 1 por A, 2 por T, 3 por C, e 4 por G, um grande número de sequências aleatórias baseadas nas X bases de ATGC pode ser obtido.

[0125] Dessas sequências, somente as sequências no qual a soma de Ge T é igual à soma de A e T são extraídas, e as sequências extraídas são pesquisadas por BLAST com um banco de dados tal como o GenBank do NCBI para selecionar uma sequência que inclui algumas sequências similares a um ácido nucleico biologicamente derivado.

[0126] De modo a tornar a eficiência de reação durante a reação de amplificação a mais constante possível, é desejável que o comprimento de base amplificado em uma bactéria alvo de detecção e o comprimento de base amplificado do índice de carga absoluta não têm uma grande diferença. Por exemplo, se o produto de amplificação da bactéria alvo de detecção for cerca de 500 bp, o produto de amplificação do índice de carga absoluta é preferencialmente cerca de 300 bp a 1.000 bp.

[0127] Entretanto, em um caso no qual o comprimento de cadeia amplificada é confirmado por eletroforese após a amplificação, é também possível projetar um produto de amplificação com um comprimento diferente daquele da bactéria alvo de detecção e detectar o produto de amplificação a partir do índice de carga absoluta em uma posição diferente da banda da bactéria alvo de detecção, confirmando assim o sucesso ou falha da reação de amplificação antes da hibridização.

[0128] Por fim, se o índice de carga absoluta no espécime for excessivamente alto em termos de concentração, competição com bactérias alvo de detecção em uma reação de amplificação pode se tornar intensa, e há uma possibilidade de que bactérias alvo de detecção, que devem ser detectadas, podem não ser detectadas. Portanto, é necessário ajustar apropriadamente a concentração de acordo com a aplicação.

[0129] Em um caso no qual um ácido nucleico derivado bacteriano e o índice de carga absoluta são amplificados separadamente, um método de multiplex que usa dois ou mais pares de iniciadores podem ser aplicados conforme necessário. Em contrapartida, se necessário, um método para permitir que um par comum compita com um par iniciador também pode ser aplicado.

[0130] Exemplos de sequências iniciadoras são mostradas na Tabela 2. Um par de iniciadores para amplificação bacteriana (SEQ ID NOS: 37 e 38) e um par de índice de carga absoluta iniciadores (SEQ ID NOS: 39 e 40) pode ser usado. Adicionalmente ao supracitado, os iniciadores mostrados na Tabela 3 também podem ser usados.

[Tabela 2]

SEQ Considerações

ID NO Iniciador dianteiro (para 37 Rótulo fluorescente em 5º | TECTACGGGAGGCAGCAGT amplificação bacteriana) 38 Iniciador Reverso (para CAGGGTATCTAATCCTGTTTGCT amplificação bacteriana) ACC Iniciador dianteiro (para

GAGAAGCCTACACAAACGTAAC 39 amplificação de índice de Rótulo fluorescente em 5' GTC carga absoluta) Iniciador Reverso (para amplificação de índice de CTCTAAMAGACCGCTCTATCTCGG carga absoluta) [Tabela 3]

SEQ Nome de iniciador Considerações Sequência

ID NO Cy5-Universal16S-FWD — | Rótulo fluorescente em 5' | TECTACGGGAGGCAGCAGT Cy5-Universal16S-FWD1 | Rótulo fluorescente em 5' | TECTACGGGAGGCAGCAG Cy5-Universal16S-FWD2 | Rótulo fluorescente em 5º |TCCTACGGGAGGCAGCA E Cy5-Universal16S-FWD3 | Rótulo fluorescente em 5º | TCCTACGGGAGGECAGC Cy5-Universal16S-FWD4 |Rótulo fluorescente em 5º |CCTACGGGAGECAGC las | Cy5-Universal16S-FWD5 |Rótulo fluorescente em 5º |CTACGGGAGGCAGCAG Cy5-Universal16S-FWD6 | Rótulo fluorescente em 5" | TACGGGAGGCAGCAG

AACAGGATTAGATACCCTGGTAG SidneyU RVS

TCC

GGTAGCAAACAGGATTAGATACC 49 Universal RVS2 2014 50 — |Universal RVS1 2016 CRAACAGGATTAGATACCCTG

SEQ Considerações Sequência

AACAGGATTAGATACCCTG

AACRGGATTAGATACCC ea O ueamentes <Projeto de Sonda>

[0131] Ao projetar uma sonda usada na presente invenção, o comprimento da sonda não é limitado, mas é preferenciamente 10 bases ou mais, mais preferencialmente, 16 a 50 bases, e ainda mais preferencialmente, 18 a 35 bases. Desde que o comprimento de uma sonda seja apropriado (dentro da faixa acima), a hibridização não específica (incompatibilidade) pode ser suprimida e tal sonda pode ser usada para detecção específica. Adicionalmente, é preferencial também confirmar Tm ao projetar uma sonda usada na presente invenção. Tm significa a temperatura na qual 50% de qualquer sequência de ácido nucleico hibridiza com sua sequência complementar. Para que o DNA ou RNA de modelo e a sonda formem uma sequência dupla e hibridizem entre si, a temperatura de hibridização precisa ser otimizada. Entretanto, se a temperatura abaixar excessivamente, uma reação não específica é propensa a ocorrer e, portanto, a temperatura é preferencialmente a mais alta possível.

[0132] Consequentemente, a Tm de um fragmento de ácido nucleico a ser projetado é um fator importante para hibridização. O software de projeto de sonda conhecido pode ser usado para confirmação de Tm, e exemplos de software usáveis na presente invenção incluem Sonda Quest (nome comercial registrado; DYNACOM Co., Ltd.). A confirmação de Tm também pode ser realizada por cálculo manual sem o uso de software. Nesse caso, uma fórmula de cálculo baseada no método de vizinho mais próximo, o método Wallance, o método de GC%, ou similares podem ser usados. Na sonda da presente invenção, a Tm média é preferencialmente, porém, sem limitação, cerca de 35 ºC a 70 ºC ou 45 “ºC a 60 ºC. Observe que outras condições que permitem que a sonda alcance hibridização específica incluem o teor de GC e similares, e as condições são conhecidas aos elementos versados na técnica.

[0133] Além disso, a sonda da presente invenção pode incluir uma sequência adicional tal como uma sequência de etiqueta. Um exemplo da sequência de etiqueta é uma sequência de espaçador tal como "AMAAAAA”. De acordo com o método da presente invenção, a sequência de base do ácido nucleico em posse pela bactéria oral a ser detectada não precisa ser a sequência de base por si só em cada caso, e uma parte da sequência de base pode ser mutada por deleção, substituição, inserção, ou similares. Portanto, um gene mutado que hibridiza com uma sequência complementar à sequência de base sob condições severas e tem uma função ou atividade derivada de cada sequência de base também pode ter a sequência de base do ácido nucleico a ser detectado. A sonda também pode ser projetada com base na sequência de base de tal gene mutado.

[0134] Especificamente, uma sonda a ser projetada inclui a sequência da sonda descrita acima (a). Adicionalmente, exemplos preferenciais dos mesmos incluem aqueles que incluem DNA com capacidade de hibridizar com um DNA que tem uma sequência de base complementar ao DNA acima sob condições severas e detectar pelo menos uma parte da sequência de base de um ácido nucleico a partir de uma bactéria oral. A sequência de base de tal DNA é uma sequência de base que é preferencialmente pelo menos 60%, mais preferencialmente, 80% ou mais, ainda mais preferencialmente, 90% ou mais, ainda mais preferencialmente, 95% ou mais, e com preferência particular, 97% ou mais de homólogos à sequência de base da sonda (a).

[0135] Quando a sonda é realmente usada para detecção, é necessário considerar a severidade na hibridização. Definindo-se a severidade a um grau denso a uma determinada extensão, mesmo se houverem regiões de sequência de nucleotídeos similares entre regiões específicas em cada ácido nucleico em várias bactérias orais, outras regiões diferentes podem ser distinguidas e hibridizadas. Quando as sequências de base entre as regiões específicas são quase diferentes, a severidade pode ser definida a um nível brando.

[0136] Tais condições de severidade incluem, por exemplo, hibridização a 50 ºC a 60 ºC sob as condições densas e hibridização a 30 ºC a 40 ºC sob as condições brandas. Para condições de hibridização, exemplos de condições severas incluem, por exemplo, "0,24 M Tris: HCI/0,24 M NaCl/0,05% de Tween-20, 40 ºC", "0,24 M Tris * HCVI/V0,24 M NaCl/0,05% de Tween-20, 37ºC" e "0,24 M Tris: HCI/0,24 M NaCl/0,05% de Tween-20, 30 ºC" e exemplos de mais condições severas incluem, por exemplo, "0,24 M Tris: HCIV0,24 M NaCl/0,05% de Tween-20, 5 ºC", "0,24 M Tris: HCI/0,24M NaCl/0,05% de Tween-20, 55 ºC" e "0.06 M Tris: HCI/0,06 M NaCl/0,05% de Tween- 20,60 ºC”.

[0137] Mais especificamente, há também um método no qual hibridização é realizada adicionando-se uma sonda e mantendo a mesma a 50 ºC por 1 hour ou mais, e então lavando a mesma em 0,24 M Tris: HCI/0.24 M NaCl/0,05% de Tween- quatro times por 20 minutos a 50 ºC, e lacando a mesma uma vez com 0,24 M Tris: HCI/0,24 M NaCl a 50 ºC por 10 minutos ao fim. Aumentando-se a temperatura durante hibridização ou lavagem, mais condições severas podem ser definidas. Um elemento versado na técnica pode definir as condições considerando-se várias condições tais como a concentração de sonda, o comprimento de sonda, e o tempo de reação, adicionalmente às condições tais como a concentração de sal de tampão e a temperatura. Para o procedimento detalhado do método de hibridização, "Molecular Cloning, A Laboratory Manual 4º ed”. (Cold Spring Harbor Press (2012), "Current Protocols in Molecular Biology" (John Wiley & Sons (1987-1997)), e similares podem ser referenciados.

[0138] Adicionalmente, o nucleotídeo que constitui a sonda usada na presente invenção pode ser qualquer um dentre DNA, RNA, ou PNA, e pode ser um híbrido de dois ou mais tipos de DNA, RNA e PNA. Por exemplo, a sonda pode ser preparada, por exemplo, por síntese química baseada em um método de síntese de oligonucleotídeo usual (purificação é realizada por HPLC ou similares). Também é possível usar um terminal quimicamente modificado ou intermediário do nucleotídeo acima.

2. Chip de DNA para Detectar Gene Bacteriano Oral Usado para Medir Carga Bacteriana Oral

[0139] Conforme descrito acima, um chip de DNA pode ser usado no método da presente invenção, e o chip de DNA tem uma pluralidade das várias sondas de oligonucleotídeo descritas na seção 1 acima que são dispostas em um substrato que serve como um suporte. Como a forma substrato que serve como um suporte, qualquer forma tal como uma placa fina (por exemplo, uma placa de vidro, placa de resina, ou placa de silicone), um formato de roda, microesferas, ou similares podem ser usados. Quando uma placa fina é usada como o suporte, sondas predeterminadas podem ser fixadas na placa plana em intervalos predeterminados por tipo (por exemplo, o método spotting; consultar Science 270, 467 a 470 (1995) ou similares). Também é possível sintetizar com sucesso sondas predeterminadas por tipo em posições específicas em uma placa plana (por exemplo, o método de fotolitografia; consultar Science 251, 767 a 773 (1991) ou similares).

[0140] Outras formas de suporte preferenciais incluem aquelas que usam fibras ocas. Ao usar fibras ocas como suporte, um chip de DNA obtido fixando-se uma sonda predeterminada a cada fibra oca por tipo, agrupando e fixando todas as fibras ocas, e então repetindo o corte na direção longitudinal das fibras (doravante, denominada como "chip de DNA do tipo fibra") pode ser preferencialmente exemplificada. Esse microarranjo pode ser descrito como um tipo de microarranjo preparado imobilizando- se ácidos nucleicos em um substrato de furo atravessante, e é também chamado de um denominado "chip de DNA do tipo furo atravessante" (consultar Patente nº JP 3510882).

[0141] O método de fixação das sondas ao suporte não é limitado, e qualquer modo de ligação pode ser usado. Além disso, fixação das sondas não é limitada à fixação direta ao suporte. Por exemplo, o suporte pode ser revestido antecipadamente com um polímero tal como polilisina e as sondas podem ser fixadas ao suporte tratado. Além disso, quando um corpo tubular tal como uma fibra oca é usada como o suporte, o corpo tubular pode ser configurado para reter um material similar a gel e uma sonda pode ser fixada ao material similar a gel. Doravante, um chip de DNA do tipo fibra, que é um aspecto do chip de DNA, será descrito em detalhes. Esse chip de DNA pode ser produzido através, por exemplo, das etapas a seguir (i) a (iv).

(i) Uma etapa de produzir um arranjo dispondo-se de modo tridimensional uma pluralidade de fibras ocas tais como as direções longitudinais das fibras ocas são a mesma direção (ii) Uma etapa de produzir um corpo de bloco incorporando-se o arranjo (iii) Uma etapa de introduzir uma solução polimerizável precursora de gel que contém uma sonda de oligonucleotídeo na porção oca de cada fibra oca do corpo de bloco para realizar uma reação de polimerização e mantendo o material similar a gel que contém a sonda na porção oca (iv) Uma etapa de afinar o corpo de bloco cortando-se o mesmo na direção que corta a direção longitudinal da fibra oca

[0142] O material usado para a fibra oca não é limitado, mas, por exemplo, materiais descritos na Publicação de Patente nº JP (Kokai) nº 2004-163211 A e similares são preferenciais.

[0143] As fibras ocas são dispostas de modo tridimensional de modo que seus comprimentos na direção longitudinal sejam os mesmos (etapa (i)).

[0144] Exemplos do método de disposição incluem um método para dispor uma pluralidade de fibras ocas em paralelo em um material similar à folha tal como uma folha adesiva em intervalos predeterminados para formar uma folha e enrolar a folha em um formato em espiral (consultar a Publicação de Patente nº JP (Kokai) Nº 11- 108928 A (1999)) e um método no qual duas placas perfuradas dotadas de uma pluralidade de furos em intervalos predeterminados são sobrepostas de modo que os furos sejam compatíveis, fibras ocas são permitidas a atravessar esses furos, e as duas placas perfuradas são abertas com um intervalo e temporariamente fixadas, e então, um material de resina curável é preenchido ao redor de cada fibra oca entre as duas placas porosas para cura (consultar a Publicação de Patente nº JP (Kokai) Nº 2001-133453 A). O arranjo produzido é embutido de modo que a disposição não seja perturbada (etapa (ii)).

[0145] Exemplos preferenciais do método de incorporação incluem um método no qual uma resina de poliuretano, uma resina epóxi, ou similares é despejada em uma lacuna entre fibras e um método no qual fibras são ligadas entre si por fusão térmica.

[0146] No arranjo incorporado, uma solução polimerizável precursora de gel (solução de formação de gel) que contém uma sonda de oligonucleotídeo é preenchida na parte oca de cada fibra oca, e uma reação de polimerização é realizada na parte oca (etapa (iii)). Como resultado, o material similar a gel ao qual a sonda é fixada pode ser retido na porção oca de cada fibra oca. A solução polimerizável precursora de gel é uma solução que contém uma substância reativa tal como um monômero polimerizável formador de gel, e a solução pode ser um material similar a gel realizando-se polimerização e reticulação do monômero ou similares. Exemplos de tal monômero incluem acrilamida, dimetilacrilamida, vinilpirrolidona e metilenebisacrilamida. Nesse caso, a solução pode conter um iniciador de polimerização ou similares. Depois de fixar a sonda na fibra oca, o corpo de bloco é cortado em seções finas em uma direção que corta a direção longitudinal da fibra oca (preferencialmente em uma direção ortogonal à mesma) (etapa (iv)). As seções finas obtidas desse modo podem ser usadas como um chip de DNA. A espessura do chip de DNA é preferencialmente cerca de 0,01 mm a 1 mm. O corpo de bloco pode ser cortado com, por exemplo, um micrótomo, um laser, ou similares. Exemplos preferenciais do chip de DNA do tipo fibra descrito acima incluem um chip de DNA (GenopalTY) fabricado pela Mitsubishi Chemical Corporation.

[0147] No chip de DNA do tipo fibra, as sondas podem ser dispostas de modo tridimensional no gel conforme descrito acima de modo que a estrutura tridimensional possa ser mantida. Portanto, conforme comparado com um chip de DNA plano no qual uma sonda é ligada a um vidro de deslizamento revestido em superfície, a eficiência de detecção é aumentada, e um teste extremamente sensível e reproduzível pode ser realizado. Além disso, o número de tipos de sondas disposto em um chip de DNA é preferencialmente 500 tipos ou menos, preferencialmente 250 tipos ou menos, e mais preferencialmente 100 tipos ou menos em um único chip de DNA. Limitando-se o número (tipo) de sondas dispostas desse modo em alguma extensão, torna-se possível detectar bactérias orais de interesse com maior sensibilidade. O tipo de sonda é distinguido pela sequência de base. Portanto, mesmo se sondas se originarem do mesmo gene, o mesmos são especificados como diferentes tipos a menos que não haja diferença entre suas sequências de base.

3. Detecção de Gene Bacteriano Oral

[0148] De acordo com o método da presente invenção, o método para detectar o gene de uma bactéria oral para medir a carga bacteriana do mesmo é, por exemplo, um método que inclui as etapas a seguir. (i) Uma etapa de uso de, como um espécime, uma amostra oral coletada de um indivíduo e extração de ácidos nucleicos no espécime (ii) Uma etapa de trazer os ácidos nucleicos extraídos em contato com a sonda de oligonucleotídeo supracitada da presente invenção ou do chip de DNA da presente invenção (iii) Uma etapa de calcular a razão de SN ou a carga bacteriana a partir da intensidade de sinal obtida do chip de DNA

[0149] Doravante, os detalhes do método de detecção serão descritos etapa por etapa. 1 Etapa (i)

[0150] Nessa etapa, uma amostra oral coletada de um indivíduo é usada como um espécime, e ácidos nucleicos de bactérias contidas no espécime são extraídos. O tipo da amostra oral a ser coletada não é particularmente limitado. Por exemplo, saliva, placa (placa subgengival e placa supragengival), revestimento de língua, colutório, e similares podem ser usados. Desses, placa é preferencial. Em particular, a placa subgengival coletada de um lugar em que bactérias periodontal são os mais inabitados é mais preferencial.

[0151] O método para coletar uma amostra intraoral não é particularmente limitado, e o mesmo pode ser apropriadamente selecionado dependendo do tipo de amostra. Por exemplo, em um caso no qual saliva é usada como uma amostra oral, exemplos do método incluem um método que usa um kit de coleta de saliva comercialmente disponível, um método para coletar saliva com um esfregaço na boca, e um método para coletar saliva diretamente em um recipiente.

[0152] Em um caso no qual a placa é usada como uma amostra oral, exemplos do método incluem escovação de superfície do dente e dente com uma escova de dente,

abrasão de superfície do dente com um cotonete, escovação interdental com uma escova interdental, e o método de ponto de papel. A placa é dissolvida ou suspensa emergindo-se uma escova de dente, esfregaço, escova interdental, ou ponto de papel usado para coletar a placa em água estéril, seguida por, por exemplo, agitação se for necessário. A solução obtida desse modo ou suspensão pode ser usada como um espécime. A quantidade da placa a ser coletada não é particularmente limitada e, por exemplo, a quantidade correspondente a um ponto de papel é suficiente. Quando revestimento de língua é usado como uma amostra oral, um método para esfregar a língua com um esfregaço pode ser usado. A placa é dissolvida ou suspensa com uso de um esfregaço usado para coletar a placa em água estéril. A solução obtida desse modo ou suspensão pode ser usada como um espécime. A quantidade de revestimento de língua coletado não é particularmente limitado e, por exemplo, a quantidade correspondente a um esfregaço é suficiente.

[0153] Em um caso no qual colutório é usado como uma amostra oral, um método no qual uma solução obtida contendo-se o colutório ou água na boca e coletar saliva junto com o colutório ou água em um recipiente é usado como uma amostra oral pode ser exemplificado. Exemplos do colutório incluem salino fisiológico esterilizado. Em seguida, a extração de ácidos nucleicos das bactérias presentes na amostra oral obtida é realizada. O método de extração não é limitado, e um método conhecido pode ser usado. Por exemplo, um método de extração automático com uso de um dispositivo, um método que usa um kit de extração de ácido nucleico comercialmente disponível, um método de interrupção de microesfera, um método para extração com fenol após tratamento de proteinase K, um método que usa cloroforme, ou um método de extração simples que inclui um método para aquecer e dissolver uma amostra oral pode ser exemplificado. Os mesmos podem ser combinados para tratamento. Adicionalmente, não é particularmente necessário extrair ácidos nucleicos do espécime, e o processo pode prosseguir para a próxima etapa.

[0154] Os ácidos nucleicos obtidos do espécime podem ser diretamente colocados em contato com um chip de DNA ou similares, ou uma região de sequência de base desejada pode ser amplificada por PCR ou similares, e o fragmento amplificado pode ser colocado em contato com o chip de DNA ou similares, sem nenhuma limitação. A região a ser amplificada com uso do ácido nucleico como um modelo é uma região que codifica a região de ácido nucleico incluindo a sequência de base da sonda usada na presente invenção ou o oligonucleotídeo disposto no chip de DNA. A região desejada a ser amplificada não é limitada e pode ser obtida com uso da sequência de base de uma região altamente conservada independentemente das espécies de bactérias orais e amplificada com uma mistura de muitos tipos de uma vez. A sequência de tal amplificação pode ser experimentalmente isolada e purificada, e a sequência de base do polinucleotídeo isolado pode ser analisada e determinada com base na sequência. Alternativamente, a sequência pode ser determinada in silico pesquisando-se uma sequência de base conhecida em vários bancos de dados e obtendo-se um alinhamento. O banco de dados de ácidos nucleicos ou aminoácidos não é particularmente limitado, mas, por exemplo, um banco de dados Taxonomy ou similares está disponível em DDBJ (Banco de Dados de DNA do Japão), EMBL (Laboratório de Biologia Molecular Europeu, EMBL biblioteca de dados de sequência de ácido nucleico), GenBank (Banco de dados de sequência Genética), e NCBI (Centro Nacional de Informações de Biotecnologia).

[0155] Especificamente, o local desejado a ser amplificado é preferencialmente o gene de RNA ribossômico (16S rRNA) em DNA cromossômico de uma bactéria oral. Exemplos preferenciais de iniciadores de PCR que pode ser usado para amplificação da região incluem aqueles nas Tabelas 2 (SEQ ID NOS: 37 e 38) e 3 (SEQ ID NOS: 41 a 53). A amplificação de ácidos nucleicos pelo método de PCR pode ser realizada de acordo com um método padrão.

[0156] O ácido nucleico extraído nessa etapa e um fragmento amplificado do mesmo podem ser rotulados apropriadamente e usados no processo de detecção após a hibridização. Especificamente, um método para rotular uma extremidade de um iniciador de POR com vários corantes de repórter, um método para incorporar um análogo de nucleotídeo reativo em uma reação de transcrição reversa, um método para incorporar um nucleotídeo rotulado com biotina e similares podem ser considerados. Além disso, é também possível rotular o ácido nucleico ou um fragmento do mesmo reagindo-se o mesmo com um reagente de rotulação fluorescente após a preparação. Como o reagente fluorescente, por exemplo, vários corantes de repórter (por exemplo, Cy5, Cy3, VIC, FAM, HEX, TET, fluoresceína, FITC, TAMRA, Texas red, e Yakima Yellow) podem ser usados. (2) Etapa (ii)

[0157] Nessa etapa, o ácido nucleico ou um fragmento amplificado do mesmo obtido na etapa (i) é colocado em contato com a sonda ou chip de DNA usado na presente invenção. Especificamente, uma solução de hibridização que contém o ácido nucleico ou similares é preparada, e o ácido nucleico ou similares no mesmo é ligada (hibridizada) a um sonda de oligonucleotídeo montada no chip de DNA. A solução de hibridização pode ser apropriadamente preparada com uso de uma solução de tampão tal como SDS ou SSC de acordo com um método padrão. A reação de hibridização pode ser realizada definindo-se apropriadamente as condições de reação (por exemplo, tipo de solução de tampão, pH, e temperatura) de modo que o ácido nucleico ou similares na solução de hibridização pode hibridizar com a sonda de oligonucleotídeo montada no chip de DNA sob condições severas. O termo "condições severas" conforme usado no presente documento se refere a condições no qual hibridização cruzada devido a sequências similares é improvável de ocorrer ou ácidos nucleicos hibridizados com cruzamento por sequências similares são dissociados. Especificamente, isso significa que as condições de lavagem do chip de DNA durante a reação de hibridização ou após a hibridização.

[0158] Por exemplo, assim como para as condições durante a reação de hibridização, a temperatura de reação é preferencialmente 35 ºC a 70 ºC, mais preferencialmente 40 ºC a 65 ºC, e o tempo de hibridização é preferencialmente cerca de 1 minuto a 16 horas. Assim como as condições de lavagem, o chip de DNA após a hibridização, a composição de solução de lavagem compreende preferencialmente 0,24 M Tris: HCI/0,24 M NaCl/0,05% de Tween-20, e a temperatura durante a lavagem é preferencialmente 35 ºC a 80 ºC ou 40 ºC a 65 ºC, mais preferencialmente 45 ºC a 60 ºC. Mais especificamente, as condições no qual a concentração de sal (sódio) é 48 a 780 mM e a temperatura é 37 ºC a 80 ºC são preferenciais, e as condições no qual a concentração de sal é 97,5 a 390 mM e a temperatura é 45 ºC a 60 ºC são mais preferenciais.

[0159] —Apósalavagem, a intensidade de detecção é medida para cada ponto com um aparelho com capacidade de detectar um rótulo tal como um ácido nucleico ligado a uma sonda. Por exemplo, em um caso no qual o ácido nucleico ou similares é rotulado de modo fluorescente, a intensidade de fluorescência pode ser medida com uso de vários dispositivos de detecção de fluorescência, tal como CRBIO (fabricado por Hitachi Software Engineering Co., Ltd.), arrayWoRx (fabricado por GE Healthcare), Affymetrix 428 Array Scanner (fabricado por Affymetrix, Inc.), GenePix, (Axon Instruments), ScanArray (PerkinElmer), e Genopal Reader (Mitsubishi Chemical Corporation). Em relação a esses dispositivos, no caso de um leitor de fluorescência, a leitura pode ser realizada, por exemplo, ajustando-se apropriadamente a saída de laser e a sensibilidade da unidade de detecção. No caso de um leitor do tipo câmera CCD, varredura pode ser realizada ajustando-se apropriadamente o tempo de exposição. O método de quantificação baseado no resultado de leitura é realizado por software de quantificação. O software de quantificação não é particularmente limitado e quantificação pode ser realizada com uso da média, mediano, ou similares das intensidades de fluorescência de pontos. Além disso, mediante quantificação, é preferencial realizar ajustes em consideração da precisão dimensional da faixa de ponto de um fragmento de DNA ou similares, com uso da intensidade de fluorescência de um ponto sem uma sonda como fundo. (3) Etapa (iii)

[0160] Nessa etapa, a carga bacteriana de uma bactéria alvo de detecção é calculada a partir da intensidade de sinal obtida pelo procedimento acima. Por exemplo, há um método para expressar a carga bacteriana como a razão de SN a partir da razão da intensidade de sinal de uma sonda para detectar uma bactéria alvo de detecção e a intensidade de sinal do fundo. Visto que a intensidade de sinal é proporcional à abundância de uma bactéria, a razão de SN pode ser usada como é para análise quando não é necessário calcular o número de cópia.

[0161] Alternativamente, é também possível usar um método no qual detecção é realizada sob uma pluralidade de condições mudando-se a concentração de DNA cromossômico de cada bactéria antecipadamente, o fator de conversão (curva de calibração) é obtido para calcular a concentração de DNA cromossômico para cada bactéria com base na intensidade de sinal obtida sob cada condição de concentração, e a concentração de DNA cromossômico é calculada a partir da intensidade de sinal obtida sob cada condição. Nesse caso, os resultados podem ser calculados como o número de cópia bacteriano.

[0162] Além disso, em cada caso, a intensidade de sinal e o número de cópia podem ser corrigidos considerando-se o coeficiente de correção para a intensidade de sinal de cada bactéria alvo de detecção no chip de DNA. A ordem de correção e conversão da intensidade de sinal/número de cópia não importa.

4. Determinação do Estado de Doença Periodontal

[0163] De acordo com a presente invenção, uma intensidade de sinal de um ácido nucleico de um grupo bacteriano oral presente em uma amostra oral é medida, uma abundância do grupo bacteriano a partir de um valor medido da intensidade de sinal é calculada, e o estado de doença periodontal é determinado com uso do valor calculado obtido como um índice.

[0164] Para medição de força de sinal de um ácido nucleico a partir de um grupo bacteriano oral presente em uma amostra oral, qualquer ferramenta pode ser usada. Conforme descrito na seção 3 acima, um método que usa um chip de DNA e outros métodos tal como um método que usa PCR em tempo real e um método que usa o método FISH pode ser exemplificado.

[0165] Exemplos de valores de medição de intensidade de sinal incluem a razão de SN obtida de um chip de DNA, o valor de Ct obtido por PCR em tempo real, e a intensidade de fluorescência obtida pelo método FISH.

[0166] A razão de abundância do grupo bacteriano significa uma correlação entre uma carga bacteriana de uma espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta (bactéria positivamente correlacionada) e uma carga bacteriana de uma espécie bacteriana que diminui à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta (bactéria negativamente correlacionada).

[0167] Exemplos de tal correlação incluem: uma razão da soma de cargas bacterianas de bactérias positivamente correlacionadas e a soma de cargas bacterianas de bactérias negativamente correlacionadas (cargas bacterianas X de bactérias positivamente correlacionadas/cargas bacterianas Z de bactérias correlacionadas negativas); um valor obtido subtraindo-se a soma das cargas bacterianas de bactérias positivamente correlacionadas da soma de cargas bacterianas de bactérias negativamente correlacionadas (cargas bacterianas X de bactérias negativamente correlacionadas - cargas bacterianas X de bactérias positivamente correlacionadas); uma razão de um valor obtido multiplicando-se a soma de cargas bacterianas de bactérias positivamente correlacionadas por um coeficiente predeterminado e um valor obtido multiplicando-se a soma de cargas bacterianas de bactérias negativamente correlacionadas por um coeficiente predeterminado (coeficiente 2X x cargas bacterianas de bactérias positivamente correlacionadas/coeficiente 2X x cargas bacterianas de bactérias negativamente correlacionadas); e uma soma de um valor obtido multiplicando-se a soma de cargas bacterianas de bactérias positivamente correlacionadas por um coeficiente positivo predeterminado e um valor obtido multiplicando-se a soma de cargas bacterianas de bactérias negativamente correlacionadas por um coeficiente negativo predeterminado (coeficiente positivo ZX x cargas bacterianas de bactérias positivamente correlacionadas + coeficiente negativo x cargas bacterianas de bactérias negativamente correlacionadas).

[0168] Quando o número de espécies de bactérias positivamente correlacionadas e o número de espécies de bactérias negativamente correlacionadas são diferentes, é preferencial corrigir os mesmos de modo que os resultados sejam calculados a partir do mesmo número de espécies bacterianas.

[0169] Por exemplo, depois de calcular a soma dos razões de SN de grupos de "bactérias positivamente correlacionadas", a razão de SN média de grupos de "bactérias positivamente correlacionadas" é calculada dividindo-se pelo número de tipos de grupos de "bactérias positivamente correlacionadas". De modo similar, depois de calcular a soma das razões de SN de grupos de "bactérias negativamente correlacionadas", a razão de SN média de grupos de "bactérias negativamente correlacionadas" é calculada dividindo-se pelo número de tipos de grupos de "bactérias negativamente correlacionadas".

[0170] Por fim, tomando-se a razão da razão de SN média de grupos de "bactérias positivamente correlacionadas" e a razão de SN média de grupos de "bactérias negativamente correlacionadas", um índice de equilíbrio pode ser obtido.

[0171] É preferencial usar, como a razão de abundância de grupos bacterianos, a razão entre a carga bacteriana de uma espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e a carga bacteriana de uma espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

[0172] O valor calculado da razão de abundância obtido desse modo é denominado como "índice de equilíbrio”.

[0173] O numerador e denominador para calcular o índice de equilíbrio são arbitrariamente determinados, e qualquer um pode ser o denominador ou numerador. Por exemplo, o denominador pode ser a razão de SN de um grupo de espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta, e o numerador pode ser a razão de SN de uma grupo de espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta. Alternativamente, o denominador pode ser a razão de SN de um grupo de espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta, e o numerador pode ser a razão de SN de uma grupo de espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

[0174] Em testes bacterianos convencionais, o estado de doença periodontal foi determinado detectando-se bactérias correspondentes a "bactérias ruins”. Visto que esses são de espécies bacterianas que aumentam depois que a bolsa periodontal cresceu em uma determinada extensão, foi possível obter somente informações após a deterioração. De acordo com a presente invenção, visto que o índice de equilíbrio é calculado com uso de um grupo bacteriano correspondente a "bactérias boas" de modo que o estado da doença periodontal seja determinado, um estado saudável também pode ser determinado.

[0175] Uma mais explicação detalhada é a seguinte.

[0176] A carga bacteriana de "bactérias ruins" é uma função monotonicamente crescente em relação ao valor de bolsa periodontal enquanto a carga bacteriana de "bactérias boas" é uma função monoliticamente decrescente em relação ao valor de bolsa periodontal.

[0177] Quando o eixo geométrico vertical mostra a carga bacteriana de "bactérias ruins" e o eixo geométrico horizontal mostra o valor de bolsa periodontal, pode não haver valor que permita determinação dentro de uma faixa de valores de bolsa periodontal de O mm a 3 mm.

[0178] Entretanto, quando o eixo geométrico vertical mostra o índice de carga bacteriana de "bactérias ruins"/carga bacteriana de "bactérias boas" e o eixo geométrico horizontal mostra o valor de bolsa periodontal, o ponto de infecção aparece claramente nessa função, que é vantajoso que a determinação possa ser realizada próxima ao ponto. Adicionalmente, há um valor que permite determinação dentro de uma faixa de valores de bolsa periodontal de O mm a 3 mm, e um estado saudável também pode ser determinado com base nesse valor.

[0179] Além disso, de acordo com a presente invenção, é preferencial determinar o estado de doença periodontal comparando-se o índice de equilíbrio com um valor de corte.

[0180] O valor de corte é um valor que tem uma função como um valor limítrofe ou um valor de referência da razão de abundância de grupos bacterianos (índice de equilíbrio).

[0181] Uma intensidade de sinal de um ácido nucleico de um grupo bacteriano oral presente em uma amostra oral para padronização é medido, uma abundância do grupo bacteriano a partir de um valor medido da intensidade de sinal é calculado, e uma curva ROC é criada com o valor calculado obtido (índice de equilíbrio). O valor de corte pode ser determinado a partir dessa curva ROC. O valor de corte é preferencialmente selecionado de modo que a distância da esquerda superior da curva ROC em uma Figura é pequena. No entanto, isso pode ser apropriadamente mudado dependendo do propósito (sensibilidade e especificidade necessárias).

[0182] O valor de corte também pode ser determinado por análise de cluster adicionalmente à curva ROC acima. Mais especificamente, é considerado que, quando análise de cluster é realizada pelo método de k-meio, o número ideal de agrupamentos é examinado e determinado pelo método elbow, ou o número de agrupamentos é automaticamente emitido com uso do método de x-meio, por exemplo, e então, o valor de corte é definido a um índice correspondente ao limite entre os agrupamentos.

[0183] Em um primeiro aspecto de criação de um modelo discriminante, o modelo pode ser um modelo discriminante com base na razão de abundância de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" e a abundância de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" (índice de equilíbrio)

[0184] Exemplos de várias bactérias são conforme descrito no item 1 acima.

[0185] Exemplos de a espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta não são particularmente limitados, mas incluem preferencialmente pelo menos um da espécie bacteriana diferente da espécie de Fusobacterium nucleatum (uma "bactéria de índice de progressão"). Especificamente, pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola,y Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Selenomonas sputigena, Treponema medium, —Eubacterium —saphenum, Eubacterium nodatum, Porphyromonas endodontalis, Filifactor alocis, Peptostreptococcus stomatis, e Treponema socranskii é preferencial, e pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter gracilis, “Campylobacter —rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Selenomonas sputigena, Treponema medium, — Eubacterium — saphenum, Eubacterium nodatum, Porphyromonas endodontalis, e Filifactor alocis é mais preferencial.

[0186] As espécies bacterianas usadas são preferencialmente 4 ou mais espécies, mais preferencialmente 8 ou mais espécies, ainda mais preferencialmente 12 ou mais espécies, e com preferência particular, 14 ou mais espécies. As espécies bacterianas usadas são preferencialmente 100 ou menos espécies, mais preferencialmente 75 ou menos espécies, ainda mais preferencialmente, 50 ou menos espécies, e com preferência particular, 25 ou menos espécies.

[0187] Exemplos da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta não são particularmente limitados. Especificamente, pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Streptococcus parasanguinis, Haemophilus parainfluenzae, Streptococcus Ssalivarius, Granulicatella adiacens, Rothia dentocariosa, Alloprevotella spp. (A. rava, OT 308), Veillonella rogosae, Porphyromonas pasteri, Prevotella shahii, Prevotella pallens, Veillonella atypica, Actinomyces graevenitzi, Megasphaera micronuciformis, Prevotella loescheii, Neisseria flavescens, Solobacterium moorei, Porphyromonas catoniae, Rothia mucilaginosa, Corynebacterium matruchotii, Eubacterium sulci, Gemella sanguinis, Prevotela — melaninogenica, — Prevotela — denticola, — Prevotella — nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundii Il, Selenomonas noxia, SR1 sp. OT 345, Parvimonas micra, Streptococcus sobrinus, Actinomyces israeli, e Prevotella histicola são preferenciais, e pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Streptococcus parasanguinis, Haemophilus parainfluenzae, Streptococcus salivarius, Granulicatella adiacens, Rothia dentocariosa, Alloprevotella spp. (A. rava, OT 308), Veillonella rogosae, Porphyromonas pasteri, Prevotella shahii, Prevotella pallens, Veillonella atypica, Actinomyces graevenitzi, Megasphaera micronuciformis, Prevotella loescheii, Neisseria flavescens, Solobacterium moorei, Porphyromonas catoniae, Rothia mucilaginosa, Corynebacterium matruchotii, Eubacterium sulci, Gemella sanguinis, Prevotella melaninogenica, Prevotella denticola, Prevotella nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis by 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundii Il, e Selenomonas noxia são mais preferenciais.

[0188] As espécies bacterianas usadas são preferencialmente 2 ou mais espécies, mais preferencialmente 10 ou mais espécies, e ainda mais preferencialmente, 20 ou mais espécies. As espécies bacterianas usadas são preferencialmente 100 ou menos espécies, mais preferencialmmente 75 ou menos espécies, ainda mais preferencialmente, 50 ou menos espécies, e com preferência particular, 25 ou menos espécies.

[0189] A abundância do grupo bacteriano é calculada a partir do valor medido da intensidade de sinal de um ácido nucleico a partir do grupo bacteriano presente em uma amostra de preparação oral para padronização com um estado conhecido de doença periodontal, e o valor de corte é obtido a partir do valor calculado (índice de equilíbrio).

[0190] Em seguida, ao determinar uma amostra com um estado desconhecido de doença periodontal, depois que os grupos bacterianos são coletivamente detectados, o Índice de equilíbrio é calculado da mesma maneira, e o valor calculado é comparado com o valor de corte, determinando assim o estado.

[0191] De acordo com o modelo discriminante do primeiro aspecto, uma amostra com um estado desconhecido de doença periodontal pode ser determinada em dois grupos com base no valor de corte.

[0192] Como exemplo, um modelo para determinar um estado de não doença e um estado de doença será descrito.

[0193] O estado de não doença e o estado de doença podem ser definidos conforme apropriado, mas o estado de não doença é definido no presente documento como tendo uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm e o estado de doença é definido no presente documento como tendo uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais. Em outras palavras, uma profundidade de bolsa periodontal de 4 mm corresponde a um estado para o qual é desconhecido se o estado é um estado de doença ou um estado de não doença.

[0194] Para amostras com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 a3mme amostras com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais, as intensidades de sinal de ácidos nucleicos de vários grupos bacterianos foram medidos, e a razão de abundância de vários grupos bacterianos foi calculado a partir do valor medido, obtendo assim um valor de corte do valor calculado (índice de equilíbrio). Em seguida, um índice de equilíbrio foi calculado da mesma maneira para amostras com uma profundidade de bolsa periodontal de 4 mm, e comparando-se isso com o valor de corte obtido acima, é possível para determinar se o grupo com uma profundidade de bolsa periodontal de 4 mm, cujo estado de doença foi desconhecido, é em um estado de não doença (similar ao grupo com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm) ou uma estado de doença (similar ao grupo com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm). O método da presente invenção é especialmente útil pelo fato de que torna possível determinar o grupo com uma profundidade de bolsa periodontal de 4 mm, o que foi convencionalmente difícil de determinar.

[0195] Em um segundo aspecto de criar um modelo discriminante, o modelo pode ser um modelo discriminante com base na razão de abundância de "bactérias de Índice de progressão (espécie de Fusobacterium nucleatum)" e "espécies bacterianas que diminuem à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta”. A "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" no primeiro aspecto é substituído pela espécie de Fusobacterium nucleatum que é uma "bactéria de índice de progressão”.

[0196] Exemplos de várias bactérias são conforme descrito no item 1 acima.

[0197] A espécie de Fusobacterium nucleatum não é particularmente limitada. Especificamente, pelo menos uma selecionada a partir do grupo que consiste em Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, e Fusobacterium nucleatum subsp. Polymorphum é preferencial, e pelo menos um ou duas selecionadas a partir do grupo que consiste em Fusobacterium nucleatum subsp. animali e Fusobacterium nucleatum subsp. Nucleatum são mais preferenciais.

[0198] As espécies bacterianas que diminuem à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta similares àquelas no primeiro aspecto são preferencialmente usadas.

[0199] Assim como no caso do modelo discriminante do primeiro aspecto, é possível para calcular o valor de corte, determinando assim os dois grupos.

[0200] De acordo com o modelo discriminante do segundo aspecto, o estado quando o valor de bolsa periodontal é pequeno pode ser mais bem capturado do que no primeiro aspecto.

[0201] Há um índice similar ao índice da presente invenção. Um exemplo é a razão da soma de cargas bacterianas de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, e Treponema denticola que são "bactérias ruins" e a carga bacteriana de Fusobacterium nucleatum que é uma bactéria de índice de progressão. Isso diferente da presente invenção pelo fato de que o índice da presente invenção é a razão do grupo de "bactérias ruins" e do grupo de "bactérias boas". De acordo com o índice da presente invenção, o curso de deterioração pode ser determinado mais claramente.

[0202] Uma mais explicação detalhada é a seguinte.

[0203] A carga bacteriana de "bactérias ruins" é uma função monotonicamente crescente em relação ao valor de bolsa periodontal enquanto a carga bacteriana de "bactérias boas" é uma função monoliticamente decrescente em relação ao valor de bolsa periodontal.

[0204] Em um caso no qual o eixo geométrico vertical mostra o índice da carga bacteriana de "bactérias ruins"/a carga bacteriana de "bactérias de índice de progressão" e o eixo geométrico horizontal mostra o valor de bolsa periodontal, a carga bacteriana de "bactérias ruins" é pequena em uma amostra no estado saudável e, como resultado, nenhuma bactéria ruim pode ser detectada. Em outras palavras, pode não haver valor que permita determinação dentro de uma faixa de valores de bolsa periodontal de O mm a 3 mm.

[0205] Entretanto, quando o eixo geométrico vertical mostra o índice de carga bacteriana de "bactérias ruins" ou "bactérias de índice de progressão"/carga bacteriana de "bactérias boas" e o eixo geométrico horizontal mostra o valor de bolsa periodontal, o ponto de infecção aparece claramente nessa função, que é vantajoso que a determinação possa ser realizada próxima ao ponto. Adicionalmente, há um valor que permite determinação dentro de uma faixa de valores de bolsa periodontal de O mm a 3 mm, e um estado saudável também pode ser determinado com base nesse valor.

[0206] Além disso, na presente invenção, (a) e (b) a seguir pode ser usado em combinação como a razão de abundância dos grupos bacterianos: (a) uma correlação entre a carga bacteriana da espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta (incluindo pelo menos uma espécie bacteriana além da espécie Fusobacterium nucleatum) e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta; e (b) uma correlação entre a carga bacteriana da espécie Fusobacterium nucleatum e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta. Quando um chip de DNA é usado, uma pluralidade de grupos bacterianos pode ser detectada de uma vez, e desse modo, uma pluralidade de índices de equilíbrio pode ser calculada ao mesmo tempo. Portanto, é possível determinar simultaneamente os dois índices de equilíbrio como eixos geométricos e classificar em 2 x 2 = 4 grupos.

[0207] A determinação do estado de doença periodontal obtida pela presente invenção é uma determinação de um estado estimado a partir da razão de SN proporcional à contagem bacteriana ou carga bacteriana, e não representa uma condição patológica precisa. Em outras palavras, um dentista precisa realizar um diagnóstico para uma condição patológica precisa. No entanto, de acordo com a presente invenção, visto é possível determinar independentemente do valor de bolsa periodontal, é possível detectar e tratar precocemente a doença periodontal a partir de um novo ponto de vista e contribuir para prevenção da doença.

5. Determinação de Efeitos Terapêuticos na Doença Periodontal

[0208] Tratamento se refere ao tratamento comumente realizado por dentistas e higienistas dentais no local dental. Exemplos de tratamento periodontal básico incluem controle de placa (instrução de escovação de dente), remoção de tártaro (escalonamento e planificação de raiz), e ajuste oclusal. Outro exemplo é tratamento cirúrgico que é realizado quando os resultados de testes de reavaliação após o tratamento periodontal indicam que a cura não é alcançada devido ao fato de que tártaro é profundo dentro da bolsa e não pode ser removido. Exemplos específicos de tratamento cirúrgico incluem cirurgia de retalho, terapia de regeneração de tecido periodontal, e cirurgia plástica (cirurgia plástica periodontal). Adicionalmente, "terapia periodontal de suporte (SPT)," que é cuidado profissional contínuo após o tratamento periodontal, é importante como um tratamento essencial para manter uma "condição estável" e manter uma prognose favorável de tratamento periodontal.

[0209] Efeitos terapêuticos na doença periodontal são determinados coletando-se um espécime antes e após o tratamento de doença periodontal e comparando e examinando dados.

[0210] A ideia mais básica é utilizar as informações clínicas do espécime e clarificar as bactérias que aumentaram ou diminuíram antes e após o tratamento, tornando possível assim determinar de forma objetiva os efeitos terapêuticos. Adicionalmente, os dados bacterianos após tratamento tornam possível clarificar as bactérias que foram difíceis de serem reduzidas pelo tratamento, e permitir tratamento específico.

[0211] De acordo com o método da presente invenção, efeitos terapêuticos na doença periodontal podem ser determinados a partir de uma pluralidade de índices de equilíbrio bacteriano realizando-se a determinação descrita em "4. Determinação de Estado de Doença Periodontal" acima antes e após o tratamento. Em particular, o estado de doença periodontal que mostra o mesmo valor de bolsa periodontal pode ser adicionalmente classificado em quatro categorias.

[0212] Em um caso no qual as informações do valor de bolsa periodontal são também levada em consideração, é possível determinar se a condição é estável. Por exemplo, mesmo se o valor de bolsa periodontal é 4 mm ou mais, pode ser considerado que a condição é estável se for determinado como "brando" pelo índice de equilíbrio descrito em "4. Determinação do Estado de Doença Periodontal" acima Por outro lado, mesmo se o valor de bolsa periodontal for 3 mm ou menos, pode ser determinado que o tratamento pode ser considerado se for determinado como "severo" pelo índice de equilíbrio.

[0213] Na descrição acima, a razão de SN de um chip de DNA foi usada como o valor medido indicando a carga bacteriana, mas qualquer valor que pode ser usado como um valor sinônimo com a razão de SN de um chip de DNA está dentro do escopo da presente invenção. Por exemplo, o número de cópia bacteriano convertido a partir da razão de SN de um chip de DNA, o número de cópia bacteriano quantificado por PCR em tempo real, sendo que o valor de Ct indica a carga bacteriana, o número de leituras obtidas como resultado de sequenciamento de próxima geração, e a porcentagem de quantidade relativa convertida a partir do número de leituras pode ser considerada.

6. Sonda de Oligonucleotídeo definida

[0214] A presente invenção fornece uma sonda de oligonucleotídeo para detectar bactérias orais que inclui DNAs de (a) ou (b) a seguir: (a) DNAs que consistem nas sequências de base apresentadas nas SEQ ID NOS: 1 a 31 (b) DNAs que são 90% ou mais idênticos às sequências de nucleotídeo apresentadas na SEQ ID NOS: 1 a 33 e hibridizam com uma sequência de nucleotídeo parcial do gene de 168 rRNA ou sua sequência complementar nos DNAs cromossômicos de bactérias orais.

[0215] Como a sonda usada na presente invenção, qualquer combinação de DNAs dentre os DNAs que têm 33 tipos de sequências de nucleotídeos apresentados em SEQ ID NOS: 1 a 33 podem ser usados. Por exemplo, dentre os DNAs que consistem nas sequências de nucleotídeo apresentadas nas SEQ ID NOS: 1 a 33, qualguer um tipo de DNA pode ser usado, dois tipos de DNA podem ser usados em combinação, 32 tipos de DNA podem ser usados em combinação, e 33 tipos de DNA podem ser usados em combinação.

[0216] Condições de Severidade para "hibridização" e similares são as mesmas que aquelas descritas acima.

[0217] Adicionalmente, exemplos de bactérias orais a serem detectadas incluem pelo menos uma bactéria pertencente a qualquer um dos gêneros Porphyromonas, Tannerella, Treponema, Prevotella, Campylobacter, Fusobacterium, Streptococcus, Aggregatibacter, Capnocytophaga, Eikenellay Actinomyces, Veillonellay e Selenomonas conforme descrito acima.

[0218] Além disso, a presente invenção fornece um microarranjo para detectar bactérias orais, nos quais a sonda de oligonucleotídeo definida descrita acima é disposta. De acordo com a presente invenção, como o microarranjo, aquele descrito em "2. Chip de DNA para Detectar Gene Bacteriano Oral Usado para Medir Carga Bacteriana Oral” pode ser usado

[0219] Doravante, a presente invenção será descrita em mais detalhes em referência aos Exemplos abaixo, mas a presente invenção não é limitada a isso.

EXEMPLOS [Exemplo 1-1]

[0220] Método para Determinar o Estado da Doença Periodontal

[0221] Detecção de bactérias Orais em Espécime de Placa Subgengival <Preparação de Espécime de Placa Subgengival>

[0222] No Hospital Dental da Universidade de Osaka, a placa subgengival foi coletada de 220 indivíduos masculinos e femininos na idade de 20 a 70 anos antes do tratamento de doença periodontal. Dois pontos de papel absorvente (ISO Color- Coded) nº 40 (fabricado por DENTSPLY MAILLEFER) foram inseridos em bolsas periodontais e colocados no presente documento por 30 segundos. Então, os pontos de papel foram colocados em um microtubo que contém 0,15 ml de água destilada estéril, e colocados em vórtice por 20 segundos. Os pontos de papel foram removidos com fórceps estéril e congelados e armazenados em -20 ºC até a detecção. <Aquisição de Informações Clínicas>

[0223] As informações clínicas de todos os espécimes foram digitalizadas de acordo com os seguintes critérios. Os quatro itens a seguir são índices que são amplamente usados na dentística.

(i) Profundidade de bolsa periodontal (Pd): Pd se refere à distância da margem gengival à ponta de uma sonda periodontal quando a sonda é inserida na bolsa. Pd foi digitalizada em unidades de 1 mm. O termo "sonda periodontal" conforme usado no presente documento significa um instrumento de medição de bolsa (periosonda).

(ii) Sangramento na Sondagem (BOP): BOP se refere à presença ou ausência de sangramento quando uma sonda periodontal é inserida na bolsa. O caso no qual não houve sangramento foi definido para 0, e o caso no qual houve sangramento foi definido para 1.

(iii) Índice Gengival (GI): GI se refere ao grau de inflamação gengival. O caso no qual não houve inflamação foi definido para O, o caso no qual houve inflamação branda foi definido para 1, o caso no qual houve inflamação moderada foi definida para 2, e o caso no qual houve inflamação severa foi definido para 3.

(iv) Índice de placa (PII): PII se refere à quantidade de deposição de placa na superfície do dente adjacente à gengiva. O caso no qual não houve placa foi definido como O, o caso no qual nenhuma placa foi visualmente observada, mas placa foi encontrada por esfregamento de sonda foi definido para 1, o caso no qual placa foi visualmente observada foi definida para 2, e o caso no qual uma grande quantidade de placa foi observada foi definida para 3.

<PCR>

[0224] Todos os espécimes que foram congelados e armazenados foram descongelados e usados como um modelo de PCR. De modo a amplificar a sequência da região alvo de detecção de 168 rRNA de uma bactéria oral em cada espécime, PCR foi realizado sob as condições de reação com a composição de solução de reação descrita abaixo. PCR foi realizado com uso de, como um kit de PCR, Premix Ex Taq (nome comercial) Hot Start Version (fabricado por Takara Holdings Inc.) pela

GeneAmp9700 (fabricado por Applied Biosystems). Como iniciadores, iniciadores que têm as seguintes sequências foram usados. O iniciador primário usado teve a terminação 5' rotulada com Cy5.

[0225] Iniciador dianteiro (para amplificação bacteriana):

[0226] 5-Cy5-TCCTACGGGAGGCAGCAGT-3' (SEQ ID NO: 37)

[0227] Iniciador Reverso (para amplificação bacteriana):

[0228] — 5-CAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTACC-3' (SEQ ID NO: 38)

[0229] Iniciador dianteiro (para amplificação de índice de carga absoluta):

[0230] — 5-Cy5-GAGAAGCCTACACAAACGTAACGTOC-3' (SEQ ID NO: 39)

[0231] Iniciador Reverso (para amplificação de índice de carga absoluta):

[0232] — 5-CTCTAAMAGACCGCTCTATCTCGG-3' (SEQ ID NO: 40)

[0233] <Composição de Solução de Relação>

[0234] 2x Premix Ex Taq (nome comercial registrado)

[0235] Hot Start Version 10 ul

[0236] 4 uM de iniciador dianteiro (para amplificação bacteriana): 1 ul

[0237] 4 uM de iniciador reverso (para amplificação bacteriana): 1 ul

[0238] 4 uM de Iniciador dianteiro (para amplificação de índice de carga absoluta) 1ul

[0239] 4 uM de Iniciador Reverso (para amplificação de índice de carga absoluta) 1u

[0240] DNA de modelo: 5 ul

[0241] Índice de carga absoluta:1 ul

[0242] Total: 20 ul <Condições de Reação>

[0243] Após aquecimento a 95 ºC por 1 minuto, um total de 40 ciclos de "dissociação: 98 ºC (10 seg) — de anelamento: 60 ºC (30 seg) — de síntese: 72 ºC (20 seg)" foram realizados, e a mistura foi coletada em 4 ºC, obtendo assim um produto de amplificação. <Chip de DNA: Produção de Chip de DNA para Detectar Bactérias Orais>

[0244] Um chip de DNA do tipo furo atravessante foi produzido por um método similar ao método descrito no Exemplo 2-1 da Publicação de Patente nº JP (Kokai) nº 2007-74950A (method for detecting methylated DNA and/or unmethylated DNA).

[0245] Observe que as sondas de oligonucleotídeo montadas no presente documento, sondas que têm as informações de sequência mostradas na Tabela 4 foram usadas em referência às informações na espécie bacteriana na Literatura Não Patentária1: Socransky, S. S. et al. J Clin Microbiol, 37, 1426-30, 1999. [Tabela 4] SEQ ID NO: 1 Sonda de Porphyromonas gingivalis TTCAATGCAATACTCGTATC 2 Sonda de Tannerella forsythia CACGTATCTCATTTTATTCC 3 Sonda de Treponema de nticola CCTCTTCTTCTTATTCTTCAT Sonda de Campylobacter gracilis 1 GCCTTCGCAATAGGTATT 7 Sonda de Campylobacter rectus 2 GTCATAATTCTTTCCCAAGA 8 Sonda de Campylobacter showae CAATGGGTATTCTTCTTGAT Sonda de Fusobacterium nucleatum subsp. 9 . TAGTTATACAGTTTCCAACG vincentii Sonda de Fusobacterium nucleatum subsp.

CCAGTACTCTAGTTACACA polymorphum Sonda de Fusobacterium nucleatum subsp. 1 Sa TTTCTTTCTTCCCAACTGAA Animalis 5 Sonda de Fusobacterium nucleatum subsp. 12 TACATTCCGAAAAACGTCAT nucleatum 7 18 Sonda de Fusobacterium periodonticum TATGCAGTTTCCAACGCAA 14 Sonda de Prevotella intermedia GGGTAAATGCAAAAAGGCA Sonda de Prevotella nigrescens CTTTATTCCCACATAAAAGC 16 Sonda de Streptococcus constellatus AAGTACCGTCACTGTGTG Sonda de Aggregatibacter 17 GTCAATTTGGCATGCTATTA actinomycetemcomitans 1

SEQ ID NO: <Hibridização com Chip de DNA>

[0246] Uma solução de hibridização foi preparada misturando-se as respectivas soluções conforme descrito abaixo.

[0247] Produto de amplificação de DNA obtido após PCR 20 ul

[0248] 1IMTris-HCl: 484

[0249] IMNaCl:48yul

[0250] Tween20 a 0,5%: 20 ul

[0251] Água:64ul

[0252] Total:200yul

[0253] A solução de hibridização em uma quantidade de 200 ul foi colocada em contato com o chip de DNA, seguido por hibridização a 50 ºC por 2 horas após a hibridização, o chip de DNA foi lacado sob as condições a seguir.

[0254] Lavagem com 1000 ul de solução de 0,24 M Tris:HCI/0,24 M NaCl/0,05%

de Tween-20 por 220 segundos foi repetida 12 vezes. Então, lavar com 1.000 ul de 0,24 M Tris: HCI/0,24 M NaCl por 220 segundos foi repetido 4 vezes. Após a conclusão da lavagem, cada chip foi transferido a uma solução misturada de 0,24 M Tris: HCI/0,24M NaCl em temperatura ambiente. <Detecção>

[0255] Após a lavagem, a intensidade de fluorescência de cada ponto do chip de DNA foi medida sob as condições a seguir com uso de Genopal Reader (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation). <Condições de Detecção>

[0256] Comprimento de onda de excitação central: 633 nm

[0257] Tempo de exposição: 0,1, 1, 4, e 40 segundos <Resultados>

[0258] A intensidade de fluorescência de um ponto com uma sonda montada no mesmo para uma bactéria alvo de detecção foi subtraída pelo valor de base (o mediano das intensidades de fluorescência de pontos sem uma sonda), calculando assim a razão de SN derivada de hibridização. Dados da razão de SN foram obtidos para cada uma das bactérias alvo de detecção para todas as 220 amostras. <Correlação entre Informações Clínicas e Carga Bacteriana (Razão de SN)>

[0259] Um diagrama de dispersão dos dados do valor de profundidade de bolsa periodontal (Pd) e a razão de SN que mostra a carga bacteriana de cada bactéria para 28 tipos de bactérias foi preparado e mostrado na Figura 1 (Figuras 1-1 a 1-7). O eixo geométrico vertical representa a razão de SN de cada bactéria, e o eixo geométrico horizontal representa o valor de profundidade de bolsa (Pd) na Figura 1. O coeficiente de correlação foi calculado para cada um dos 28 tipos (Tabela 5). [Tabela 5] e E com Pd 3 Treponema denticola 0,516 mm Nome de Espécie Bacteriana Coeficiente de Correlação com Pd

Campylobacter gracílis 0,317

Campylobacter rectus 0,355

E fa ig E mem Em e E TEAR Rm Aggregatibacter actinomycetemcomitans 0,211

Campylobacter concisus -0,189

Actinomyces naeslundii || -0,170

[0260] Em seguida, os 28 tipos de bactérias foram aproximadamente classificados na espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta com base no coeficiente de correlação positivo ou negativo. O grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi definido para consistir em 15 espécies bacterianas que foram Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola,y Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, e Eikenella corrodens.

[0261] O grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi definido para consistir em 13 espécies bacterianas que foram Prevotella nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundii |l, e Selenomonas noxia.

[0262] Em seguida, a soma das razões de SN do grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi calculada com uso dos valores de razão de SN do gráfico mostrado na Figura 1, e então, a soma foi dividida pelo número de tipos bacterianos no grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta", calculando assim a razão de SN média do grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta”. De modo similar, a soma das razões de SN do grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi calculada, e então, a soma foi dividida pelo número de tipos bacterianos no grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta", calculando assim a razão de SN média do grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta".

[0263] Por fim, o índice de equilíbrio de grupos bacterianos foi calculado tomando- se a razão da razão de SN média do grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" e a razão de SN média do grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta". A Figura 2 mostra um diagrama de dispersão no qual o eixo geométrico vertical representa o índice de equilíbrio (15 espécies no grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta"/13 espécies no grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta") e o eixo geométrico horizontal representa o valor de profundidade de bolsa periodontal (Pd).

[0264] De acordo com a presente invenção, o estado de não doença é definido como tendo uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm e o estado de doença é definido como tendo uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais. Foi decidido determinar o estado de doença/estado de doença criando-se um modelo discriminante com uso de dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm e dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais a partir dos dados mostrados na Figura 2 e com uso de dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 4 mm como dados de teste. Um histograma foi criado para os dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 nn a3mme os dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais a partir dos dados mostrados na Figura 2 (Figura 3). O eixo geométrico vertical da Figura 3 representa um valor obtido convertendo-se o índice de equilíbrio da Figura 2 com LOG10. O eixo geométrico horizontal representa frequência.

[0265] A análise de ROC foi realizada com base nos dados na Figura 3 (à direita na Figura 4), e o ponto próximo à esquerda superior (índice de equilíbrio (LOG10) = 0,566) foi tomada como o valor de corte. Nesse caso, foi constatado a partir da análise que um teste foi realizado com um sensibilidade de 0.890 e um especificidade de 0,913 (à esquerda na Figura 4).

[0266] Em seguida, com uso desse teste, dados com uma profundidade de bolsa periodontal (Pd) de 4 mm foram determinados. Os dados de 4 mm foram os dados com uma profundidade de bolsa de 4 mm na Figura 2, e houveram dados para 44 indivíduos.

[0267] Quando esses dados foram determinados com um valor de corte de 0,566, 18 indivíduos tiveram um valor de índice de equilíbrio (LOG10) maior do que o valor de corte (Tabela 6: 18 indivíduos a partir do fundo). Foi determinado que esses indivíduos tiveram um estado de doença periodontal conforme avançado como o estado de doença com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais. [Tabela 6] P D(mm) Índice de equilíbrio (LOG10) : : : : : : : 4 -0,46606 : : 4 -0,22526 4 -0,20609 : : ; | 0,064427

P D(mm) Índice de equilíbrio (LOG10) 4 0,099155 Pes 4 0,240679 os ss 0,641479 0,904812 oa 0,950571 os 1,3899629 4 1,44907 |

P D(mm) Índice de equilíbrio (LOG10) : 4 1,764711 :

[0268] Como exemplo de um caso no qual o estado de doença foi determinado como similar a um estado de doença com uma profundidade de bolsa periodontal de mm ou mais, a razão de SN de cada bactéria em uma amostra com um valor de Índice de equilíbrio (LOG10) de 1.516648 é mostrado na Figura 5. Foi confirmado a partir da Figura 5 que há um padrão que a razão de SN do grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" é maior do que a razão de SN do grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta". [Exemplo 1-2] Método para Determinar o Curso de Doença Periodontal

[0269] Um modelo discriminante do curso de doença periodontal foi criado com uso dos mesmos dados que os dados no Exemplo 1.

[0270] O grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" e o grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foram os mesmos que os do Exemplo 1.

[0271] Fusobacterium nucleatum subsp. animalis e Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum no grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foram selecionados como "bactérias indicadoras de progressão".

[0272] Em seguida, a razão de SN média do grupo de "bactérias de índice de progressão" foi calculada calculando-se a soma de razões de SN de "bactérias de Índice de progressão" (Fusobacterium nucleatum subsp. animalis e Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum) com uso dos valores de razão de SN do gráfico mostrado na Figura 1 e dividindo o valor calculado pelo número de tipos bacterianos,

isto é "2". De modo similar, a razão de SN média do grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi calculada.

[0273] Por fim, o índice de equilíbrio de grupos bacterianos foi calculado tomando- se a razão da razão de SN média do grupo de "bactérias de índice de progressão" e a razão de SN média do grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta”. A Figura 6 mostra um diagrama de dispersão no qual o eixo geométrico vertical representa o índice de equilíbrio (2 espécies de "bactérias de índice de progressão"/13 espécies do grupo de "bactérias boas") e o eixo geométrico horizontal representa o valor de profundidade de bolsa periodontal (Pd).

[0274] Foi decidido determinar o estado de doença/estado de doença criando-se um modelo discriminante com uso de dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm e dados com uma profundidade de bolsa periodontal de mm ou mais a partir dos dados mostrados na Figura 6 e com uso de dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 4 mm como dados de teste.

[0275] Um histograma foi criado para os dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm e os dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais a partir dos dados mostrados na Figura 6 (Figura 7). O eixo geométrico vertical da Figura 7 representa um valor obtido convertendo-se o índice de equilíbrio da Figura 6 com LOG10. O eixo geométrico horizontal representa frequência.

[0276] A análise de ROC foi realizada com base nos dados na Figura 7 (à direita na Figura 8), e o ponto próximo à esquerda superior (índice de equilíbrio (LOG10) = 0,826) foi tomada como o valor de corte. Nesse caso, foi constatado a partir da análise que um teste foi realizado com um sensibilidade de 0.932 e um especificidade de 0,777.

[0277] Em seguida, com uso desse teste, dados com uma profundidade de bolsa periodontal (Pd) de 4 mm foi determinado. Os dados de 4 mm foram os dados com uma profundidade de bolsa de 4 mm na Figura 6, e houveram dados para 44 indivíduos.

[0278] Quando esses dados foram determinados com um valor de corte de 0,826, 27 indivíduos tiveram um valor de índice de equilíbrio (LOG10) maior do que o valor de corte (Tabela 7: 27 indivíduos em colunas coloridas (1º ao 27º indivíduos a partir do fundo da Tabela 7). Foi determinado que esses indivíduos tiveram um estado de doença periodontal no curso da doença periodontal comparável ao estado de doença com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais.

[Tabela 7]

EEE Eee Es po es po bes Pos Poe 4 0,88307 o poe Poe Poe Pos pos pose Poe Poe po es Pos pos os pos pos 4 2,059674

—C—

[0279] A razão de SN de cada bactéria em uma amostra com um valor de índice de equilíbrio (LOG10) de 0,883 é mostrado na Figura 9 (a amostra é a mesma que a da Figura 5). Foi confirmado a partir da Figura 9 que há um padrão que a razão de SN do gênero Fusobacterium no grupo de "bactérias de índice de progressão" é maior do que a razão de SN do grupo de "bactérias boas”. [Exemplo 1-3] Subdivisão do Estado de Doença Periodontal

[0280] Um modelo discriminante foi criado da mesma maneira que nos Exemplos 1-1 e 1-2 com uso dos dados nos Exemplos 1-1 e 1-2 exceto que o eixo geométrico vertical representa o índice de equilíbrio (LOG10) no Exemplo 1-1 e o eixo geométrico horizontal representa o índice de equilíbrio (LOG10) no Exemplo 1-2. Como resultado de determinação dos dados de local que foram agrupados entre si como dados de "bolsa de 4 mm" até agora, os dados poderiam ser classificados em quatro grupos.

[0281] Os resultados são resumidos na Figura 10

[0282] A Figura 11 mostra a razão de SN de cada bactéria nas amostras nos estados de (a), (b), e (d): a partir do topo, condição (a) (no nível que exige retratamento: n = 18), condição (b) (atualmente branda, mas cuidado necessário na progressão: n = 19), condição (d) (branda: n = 17). [Exemplo 1-4] Diferença de Capacidade de Determinação Dependendo das Bactérias Selecionadas

[0283] Os 28 tipos de bactérias foram aproximadamente classificados em espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta com base no coeficiente de correlação positivo ou negativo da mesma maneira que no Exemplo 1-1 com uso de dados idênticos aos do Exemplo 1-1.

[0284] Desses, o grupo de espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta foi definido para consistir em 5 tipos de bactérias conhecidas como bactérias relacionadas à doença periodontal e 1 tipo de bactérias da espécie de Fusobacterium nucleatum. Especificamente, 6 tipos bacterianos, a saber, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter rectus, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, e Prevotella intermedia, foram selecionados.

[0285] Adicionalmente, o grupo de espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta foi definido para consistir em 4 tipos bacterianos com uma razão de SN relativamente grande, a saber, Capnocytophaga gingivalis, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, e Veillonella parvula. Em outras palavras, dados de um total de 10 espécies bacterianas foram usadas para criar um modelo discriminante.

[0286] A análise de ROC foi realizada depois de calcular o índice de equilíbrio (LOG10) da mesma maneira que no Exemplo 1-1, e os resultados foram comparados com aqueles no Exemplo 1-1. Os resultados são mostrados na Figura 12

[0287] Como resultado, foi constado que um teste foi realizado para determinação com uma sensibilidade de 0,877 e uma especificidade de 0,932 em um valor de corte obtido com uso de 10 tipos de espécie bacteriana (0,566) (ou com uma sensibilidade de 0,890 e uma especificidade de 0,913 para 28 tipos de espécie bacteriana conforme descrito acima).

[0288] Adicionalmente, o índice de equilíbrio (LOG10) foi calculado e análise de ROC foi realizada da mesma maneira que no Exemplo 1-2, e comparação foi realizada com o caso do Exemplo 1-2. Os resultados são mostrados na Figura 13

[0289] Como resultado, foi constado que um teste foi realizado para determinação com uma sensibilidade de 0,904 e uma especificidade de 0,806 em um valor de corte obtido com uso de 10 tipos de espécie bacteriana (0,826) (ou com uma sensibilidade de 0,932 e uma especificidade de 0,777 para 28 tipos de espécie bacteriana conforme descrito acima).

[0290] A partir desses resultados, foi considerado que os 28 tipos de espécie bacteriana tiveram curvas mais suaves e a precisão de descriminação foi aprimorada. No entanto, mesmo quando os 10 tipos de espécie bacteriana foram selecionados, a sensibilidade e especificidade não foram significativamente reduzidas selecionando- se a espécie bacteriana adequadamente. [Exemplo 2-1] Detecção Bacteriana do Espécime de Placa Antes e Após Tratamento e Determinação de Efeitos Terapêuticos na Doença Periodontal <Preparação do Espécime de Placa>

[0291] Para comparar a carga bacteriana de um espécime de placa antes e após o tratamento, da Universidade de Osaka de Dentística, placa subgengival antes e após o tratamento da doença periodontal foi coletada de 61 casos de homens e mulheres na idade de 20 a 70 anos. O tratamento periodontal básico que inclui a remoção de tártaro (escalonamento/planificação de raiz) foi realizado como tratamento.

[0292] Dois pontos de papel absorvente (ISO Color-Coded) nº 40 (fabricado por DENTSPLY MAILLEFER) foram inseridos em bolsas periodontais e colocados no presente documento por 30 segundos. Então, os pontos de papel foram colocados em um microtubo que contém 0,15 ml de água destilada estéril, e colocados em vórtice por 20 segundos. Os pontos de papel foram removidos com fórceps estéril e congelados e armazenados em —20 ºC até a detecção. <Chip de DNA: Produção de Chip de DNA para Detectar Bactérias Orais>

[0293] Um chip de DNA do tipo furo atravessante foi produzido por um método similar ao método descrito no Exemplo 1-1 da Publicação de Patente nº JP (Kokai) nº 2007-74950A (method for detecting methylated DNA and/or unmethylated DNA). As sondas de oligonucleotídeo montadas no presente documento, sondas que têm as informações de sequência mostradas na Tabela 8 foram usadas. PCR, hibridização com um chip de DNA, e detecção foram realizados da mesma maneira que no Exemplo 1-1.

[Tabela 8]

SEQ ID NO: subsp. nucleatum 7 actinomycetemcomitans 1

GGC <Resultados> <Cálculo de Razão de SN Data>

[0294] A intensidade de fluorescência de um ponto com uma sonda montada no mesmo para uma bactéria alvo de detecção foi subtraída pelo valor de base (a intensidade de fluorescência de um ponto sem uma sonda), calculando assim a razão de SN derivada de hibridização. Subsequentemente, 10 tipos de espécie bacteriana,

os mesmos que os do Exemplo 1-4, que significa que o grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" que consiste em 6 espécies bacterianas, a saber, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter rectus, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, e Prevotella intermedia, e o grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" que consiste em 4 espécies bacterianas, a saber, Capnocytophaga gingivalis, Streptococcus gordorii, Streptococcus intermedius, e Veillonella parvula, foram selecionados para realizar determinação em dois eixos da mesma maneira que no Exemplo 1-3. Os resultados são mostrados nos dois gráficos na metade superior da Figura 14.

[0295] O lado esquerdo mostra os resultados antes do tratamento e o lado direito mostra os resultados após o tratamento. Quando as posições de plotagens foram observadas antes e após o tratamento, as plotagens se moveram inteiramente da direita superior ((a) no nível que exige retratamento) para a esquerda inferior ((d) branda), que permitiu a determinação de efeitos do tratamento. Além disso, os dois gráficos na metade inferior da Figura 14 são gráficos da bolsa periodontal (eixo geométrico vertical) e o índice de equilíbrio (eixo geométrico horizontal). O lado esquerdo é antes do tratamento e o lado direito é após o tratamento. A partir desses resultados, foi possível determinar que o estado de doença foi estável em cada plotagem no qual o índice de equilíbrio não excedeu o valor de determinação mesmo com uma profundidade de bolsa periodontal de cerca de 4 mm após o tratamento. Por outro lado, foi possível determinar que cada plotagem no qual o índice de equilíbrio excedeu o valor de determinação mesmo com uma profundidade de bolsa periodontal de 3 mm deve ser considerada para tratamento. [Exemplo 2-2] <Cálculo de Dados de Número de Cópia>

[0296] A intensidade de fluorescência de um ponto com uma sonda montada no mesmo para uma bactéria alvo de detecção foi subtraída pelo valor de base (3 vezes o mediano e desvio padrão de intensidades de fluorescência de pontos sem uma sonda), calculando assim a intensidade de sinal derivada de hibridização. Em seguida,

a intensidade de sinal de uma sonda de índice de carga absoluta foi comparada em relação a uma pluralidade de chips de DNA, e o coeficiente de correção de cada chip de DNA foi obtido, tornando possível assim corrigir e comparar as intensidades de sinal de bactérias alvo de detecção. Subsequentemente, o coeficiente de cálculo de carga bacteriana determinado antecipadamente foi multiplicado, e a carga bacteriana de cada alvo de detecção foi calculada pelo número de cópia de genoma. O coeficiente de cálculo para cada carga bacteriana foi obtido como um coeficiente para retrocalcular cada carga bacteriana a partir da intensidade de sinal de cada bactéria medindo-se a intensidade de sinal ao detectar o DNA genômico de cada bactéria e criando uma curva de calibração. Por fim, a razão de diluição de 80 espécimes de detecção usados para modelo de PCR foi multiplicado para calcular a contagem bacteriana por ponto de papel. Pelos cálculos acima, dados sobre a contagem bacteriana foram obtidos para cada das bactérias alvo de detecção para todos os 122 espécimes no total. O limite de detecção inferior no qual a intensidade de sinal foi O ou menos no estágio inicial foi definido a um número de cópia de 1.000 de modo uniforme. Os resultados obtidos antes do tratamento (Tabela 9 (Tabela 9-1 e Tabela 9-2)) e aqueles obtidos após o tratamento (Tabela 10 (Tabela 10-1 e Tabela 10-2)) são mostrados.

[0297] Subsequentemente, a mesma análise que no Exemplo 2-1 foi realizada com uso dos dados de número de cópia antes e após o tratamento. Os resultados são mostrados na Figura 15 Observe que o valor de corte usado foi o mesmo que o valor de análise para a razão de SN devido ao fato de que uma relação proporcional foi observada entre a razão de SN e os dados de número de cópia.

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ENCSPERCSENIHSE e [8/8/8888 Tile e do | é | gg 8a 8/8 2/8 522 z Is 8/3 8/3 o | ; |º2 |O o Ss | E 8658 o meo | [) se o o o o|8I|F|8| a 8 | 8/8 |8|T|8| SS 8 8/8 || =| o sl e e [98 |S S 2 8 9|R T e e o | o | 8 18 | o | o 3 | /8[/&| 8 |8|/8 2 le e =| | E e EB e] = S Bs o o o 3 | 8 5 [No |g|8 s 8 |º |S || |S|S ; 4 . o = o o Ss Ss & = e 5/2 /2|/ 8 S & 2 ||| | o há si si x ê ê Ss 1 [e nº [o o Ss 8 85/88 Ss 8

S 4 + = =

Z 8 3 3 ã 2 2

Ê

[0298] Determinação foi realizada em dois eixos da mesma maneira que no Exemplo 2-1. Os resultados são mostrados nos dois gráficos na metade superior da Figura 15. O lado esquerdo mostra os resultados antes do tratamento e o lado direito mostra os resultados após o tratamento. Quando as posições de plotagens foram observadas antes e após o tratamento, as plotagens se moveram inteiramente da direita superior ((a) no nível que exige retratamento) para a esquerda inferior ((d) branda), que permitiu a determinação de efeitos do tratamento. Além disso, os dois gráficos na metade inferior da Figura 15 são gráficos da bolsa periodontal (eixo geométrico vertical) e o índice de equilíbrio (eixo geométrico horizontal). O lado esquerdo é antes do tratamento e o lado direito é após o tratamento. A partir desses resultados, foi possível determinar que o estado de doença foi estável em cada plotagem no qual o índice de equilíbrio não excedeu o valor de determinação mesmo com uma profundidade de bolsa periodontal de cerca de 4 mm após o tratamento. Por outro lado, foi possível determinar que cada plotagem no qual o índice de equilíbrio excedeu o valor de determinação mesmo com uma profundidade de bolsa periodontal de 3 mm deve ser considerada para tratamento. [Exemplo 3] Determinação com base em Dados de Sequenciador de Próxima Geração

[0299] Uma das amostras no Exemplo 1-1 foi enviada ao Centro J-Bio21 (NIPPON STEEL Eco-Tech Corporation: Tsukuba Kouken Building 2F, 2-1-13 Umezono, Cidade de Tsukuba, Prefeitura de Ibaraki) para análise de sequenciador de próxima geração de 16S rRNA. A partir dos dados obtidos, a razão relativa de cada bactéria à contagem bacteriana total foi calculada. Os resultados são mostrados na Figura 16.

[0300] Em seguida, a quantidade relativa entre a "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" e a "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" mostrada no Exemplo 1- 4 foi examinada e constatada conforme mostrado na Tabela 11. Além disso, o índice de equilíbrio foi calculado da mesma maneira que nos Exemplos 1-4 e 2-2. O índice de equilíbrio foi 3.739 (17,2%/4,6%) e o mesmo foi cerca de 0,5728 quando convertido por LOG10. Desse modo, foi possível calcular o valor de determinação.

Determinando-se o valor no eixo geométrico X na Figura 15, foi possível determinar "brando" como o Índice de equilíbrio. [Tabela 11] Resultados de Sequenciador Nome de Espécie Bacteriana de Próxima Geração ementas — br pes — me [Exemplo 4]

[0301] De modo a investigar a espécie bacteriana recém discutida nos últimos anos, um chip de DNA que é recém equipado com as sondas bacterianas mostradas na Tabela 12 foi preparada da mesma maneira que no Exemplo 1-1. [Tabela 12] Nome Sequência de Sonda Sonda de índice de carga absoluta CTATTCGACCAGCGATATCACTACGTAGGC

CGTATTACCGCGGCTECTEGCAC

Nome Sequência de Sonda

GTGCTTAATGAGGTTAAGCC CCCCTACTACAGAGTTTTACGA TACACACGTTCTTCCCCTAC ACACGTGACTCTTGTTATTC

CGTCAAATCCTCGCACTATTC ee Sonda de Haemophilus parainfluenzae | AGTTAACGTCAATCACCTAG Sonda de Alloprevotella spp. (A. rava, TTCGCAAGTAAAAGOAGTTTA OT 308) Sonda de Streptococcus parasanguinis | CTGGTAAGTTACCGTCAC

GCGCTTCATAACCCGGCTAC

CACGTGCATCAAATTATTCTCG Sonda de Prevotella loescheii CCTACTTTCAGCGCACTCAA EN Sonda de Prevotella histicola CACGTGACTGACTTTATCCC Sonda de Solobacterium moorei CCAACAATTTAACCACTTAC lee — Isondade Prevotela melaninogentca — | AATAGGGACACGTCCCTAAC se = Isondade Selenomonas spurigena — | GTACCGTCACCCAAACTCAATA

ACCCACTGCAAAACCAGGGT

TCTCTTCTTCCCTGCTAACA Sonda de Veillonella rogosae ACCGTCAATTCCTCTAACTATT Sonda de Peptostreptococeus stomatis |ACCACCGACTTGAAGGACCA

AGTCAGACGTTGGGCGCCTA

TACATGCATCTCAGCTACACGT Sonda de Streptococcus salivarius CACACTCGTTCTTGACTTAC

AAAMAGCAGTGCCTTGTTCC Sonda de Treponema medium GTCGATTACCGTCATCAGATG

Nome Sequência de Sonda so = Isendade Gemelasanguinis == | CCGTCTCTACTGTATATAGT

GGTACATTCACTATGGTACACG TCTTAACAMAGGTACCGTCACC

CCCTAGGACAGAGGCTTACA [86 = Isondade Neissenaflavescens =| AGCTGTCGATATTAGCAACAG Sonda de Granulicatella adiacens GTCAAGGCGCTAACAGTTAC [se = Isondade Eubacterumeutai =| AAACCCTGCGCTTAAGGTGC Sonda de Megasphaera micronuciformis| TAANCCACAAGATTATTCGTC Sonda de Prevotella shahii ACGTGGGCTCTTTTATCCCC ELA mm —

[0302] Os dados de intensidade de fluorescência foram recém coletados com um chip de DNA mostrado na Tabela 12 para as 321 amostras coletadas da mesma maneira que no Exemplo 1-1. As condições experimentais foram as mesmas que no Exemplo 1-1, mas os dois pontos a seguir foram mudados.

[0303] Os iniciadores usados para PCR foram mudados conforme a seguir.

[0304] R e Y representam bases misturadas, R representa A e G, e Y representa CeT.

[0305] Iniciador dianteiro (para amplificação bacteriana):

[0306] 5-Cy5-TACGGGAGGCAGCAG-3' (SEQ ID NO: 90)

[0307] Iniciador Reverso (para amplificação bacteriana):

[0308] 5-CRGGGTATCTAATCCYGTT-3' (SEQ ID NO: 91)

[0309] Iniciador dianteiro (para amplificação de índice de carga absoluta):

[0310] 5-Cy5-GAGAAGCCTACACAAACGTAACGTOC-3' (SEQ ID NO: 39)

[0311] Iniciador Reverso (para amplificação de índice de carga absoluta):

[0312] —5-CTCTAMAGACCGCTCTATCTCGG-3' (SEQ ID NO: 40)

[0313] Atemperatura e tempo de hibridização foram definidos para 50 ºC por 16 horas.

[0314] Subsequentemente, a intensidade de fluorescência obtida foi processada conforme a seguir.

[0315] A intensidade de fluorescência de um ponto com uma sonda montada no mesmo para uma bactéria alvo de detecção foi subtraída pelo valor de base (o mediano das intensidades de fluorescência de pontos sem uma sonda), calculando assim a intensidade de sinal derivada de hibridização. Nesse tempo, quando a intensidade de sinal foi abaixo de um determinado limiar, a mesma foi determinada como ruído e foi definida para "0”. Aqui, como o valor limítrofe, um valor três vezes o desvio padrão de 20 valores excluindo os 5 valores superior e inferior fora das intensidades de fluorescência de 30 pontos sem uma sonda foi usado.

[0316] Além disso, a razão relativa de cada bactéria às bactérias totais foi calculada dividindo-se a intensidade de sinal da sonda para uma bactéria alvo de detecção pela intensidade de sinal da sonda para o índice de carga microbiana total. Para a análise subsequente, o valor obtido convertendo-se a razão relativa à carga bacteriana total por log10 foi usado. No entanto, visto que o valor "0" não pode ser calculado, o valor após a conversão de logi10 foi substituído por -4. Desse modo, dados foram obtidos para todos os 321 espécimes. A Tabela 13 resume os resultados e profundidade de bolsa periodontal para cada espécime (Tabela 13-1 à Tabela 13- 16). [Tabela 13-1] Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . . co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m ceus ella | parainfl , s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu Jatypica| uen . pasteri 308) nis s zae amostra 1,0338 i Ú : : : 1141 5 56 -1,96355 |-2,01756 |0,7814 [2,000 |1,199 [1,757 [1,087 |-2,003702 |-1,874802 21 3 o88 175 868 amostra 0,0840 i À À À ; 121 7 14 -2,29198 |-2,74587 [0,4061 [2,816 2,003 |2,637 [1,037 |-2,779362 |-2,690217 74 65 507 1575 [685

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae amostra 0,1969 . . . . . 211 5 ” -2,71386 |-2,82359 [2,8032 |2,329 |2,155 |2,802 |2,089 |-2,798329 |-2,740951 64 [E] 602 025 893 amostra À . . . . .

2.91 9 |[0,5424 |-1,46585 |-2,55473 |3,2543 [2480 [3,210 |3,262 3,259 |-3,218672 |-3,286123 8 59 97 685 085 863 amostra À À . . . . 311 4 |0,2240 |-2,56432 [-3,10191 [0,8928 [3,063 2,683 3,097 3,104 |-3,091902 |-3,066285 9 69 19 319 434 168 amostra À : . . . . 321 12 |0,2075 |-2,50182 |-3,10742 |1,6673 2,984 2,812 3,096 [3,094 |-2,616293 |-3,117023 1 16 27 369 [8/5 |565 amostra À À . . . : 411 5 [0,8607 |-2,92457 |-3,04279 |0,6451 [3,147 |3,135 [3,186 |1,904 |-2,975724 |-2,979311 1 9 346 |756 |29 amostra À i À À À : 4:21 7 |0,2688 |-2,25499 |-3,03818 [0,6030 |3,088 |3,015 |3,090 |3,037 |-3,083315 |-2,967546 1 os 35 118 89 057 amostra 1,6076 ' ' ' ' ' 54 4 7o -1,4404 |-1,4/7082 |[1,4640 [1,458 [1,345 |1,452 [1,431 |-1,457331 |-1,436584 23 66 538 jOo5S1 549 amostra 1,5200 ; À À À À 5-2 6 18 -1,4555 |-1,4555 [1,4676 [1,473 [0,813 [1,310 [1,454 |-1,467627 |-1,444859 27 82 731 394 |3 amostra À i . . . . e 4 |0,3550 |-1,9985 /-2,8101 |0,3650 3,235 2,706 [3,214 |3,215 /-3,139819 |-3,155613 6 72 36 5 281 366 | amostra P - -1,56534 |-2,7852 |- F F F F -3,191795 |-3,236762

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae 6-2-1 0,3382 0,2731 [3,190 |2,764 |3,219 [3,222 1 69 78 937 |jo79 | amostra 0,3814 À À À Ú 711 4 31 -2,52431 |-2,61765 |-1,1415 2,467 [2,094 [2,558 [2,582 |-2,605131 |-2,584647 73 007 [387 299 amostra À À Ú Ú Ú ' 721 7 /0,2952 |-2,25878 |-3,11288 [0,6337 |3,042 |2,643 |3,085 |3,076 |-3,070661 |-3,071694 7 69 7 404 348 895 amostra 0,3926 : : : : 811 5 89 -2,55208 |-2,64638 [2,6186 [2,631 |2,125 |2,557 |2,613 |-2,626059 |-2,627301 77 os 195 [343 824 amostra À À À À À 821 6 /0,3815 |-2,49769 |-3,14123 [3,1402 |-3,176 [2,924 |3,180 |3,164 |-2,970234 |-2,877716 8 22 271 405 jog amostra À i À À À : 211 5 /0,0914 |-2,54396 |-2,66714 [0,53851 [3,010 |2,430 |2,936 |3,010 |-3,017688 |-3,010972 48 97 254 |631 972 amostra À i : : : À 921 9 10,38079 |-2,06456 |-2,64743 [0,4527 |3,274 |3,131 |3,262 |2,858 |-3,263363 |-3,138706 6 19 79 986 236 O41 amostra 1,5538 ' ' ' ' ' 1044 5 25 -1,49368 |-1,53123 [1,5188 |1,524 |1,296 |1,448 |1,496 |-1,520166 |-1,516088 os 28 682 |562 254 amostra À À À À À Ú 10-21 9 /0,8855 |-1,77599 |-2,83764 [0,4503 |3,217 |3,040 |3,251 |3,228 |-3,198206 |-3,222462 7 91 ES) 738 |778 169 amostra 0,0989 - - - - - 4 -2,80318 |-4 -2,876124 |-2,144348 11-11 27 1,5545 [2,891 [2,835 /2,147 |0,702

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae amostra À B B Ú ' 1-2 11 |-0,5872/-2,0984 /-3,1544 |0,5500 [3,216 [3,146 2,588 |2,618 |-3,06961 /-3,028217 77 39 503 jan 664 amostra 0,0086 : : : : : 1211 5 o7 -2,55422 |-2,88954 [1,0307 [3,038 |2,908 |3,020 |2,092 |-3,011095 |-2,971176 38 294 29 64 439 amostra À À Ú Ú Ú Ú

12.91 9 /0,2839 |-1,6088 |-3,01466 [0,0871 |3,057 |2,996 |3,015 |2,627 |-3,094818 |-2,817301 26 71 501 636 |59 amostra 0,3267 À ; ; ; ; 1341 4 7º -2,71309 |-2,79109 |2,7426 |2,758 [2,622 |2,731 |[1,1124 |-2,778458 |-2,143448 33 19 175 319 |O5 amostra À i . . . .

13.21 7 /0,2822 |-2,55422 |-3,07614 |0,2770 |3,224 |3,159 |3,259 |3,035 |-3,220051 |-3,006479 7 52 51 16 454 |186 amostra 0,2318 ' ' ' ' ' 1441 4 6 -2,7071 |-2,69401 |[2,1972 |2,748 [2,577 |2,747 [0,641 |4 -2,253892 68 94 753 |719 47 amostra À i : À À : 14-21 7 10,7333 |-2,23621 |-3,18774 [0,3591 |3,044 |2,813 |2,890 |2,085 |-2,841478 |-2,738313 7 34 64 3 429 |184 amostra À À À À À À 1541 5 /0,2367 |-1,60137 |-3,03292 0,3343 |3,052 |2,759 13,101 12,307 |-3,127559 |-2,80624 2 68 59 043 |897 443 amostra À À À À : : 15-21 8 |10,3705 |-1,42411 |-3,16101 [0,0546 |3,1117 [3,030 |3,204 |2,523 |-3,213947 |-3,035183 4 44 1 765 664 642

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae amostra À i . . . . 1611 4 |0,1465 |-2,54535 |-2,99068 |0,7518 [3,065 [3,008 [3,073 [3,051 |-3,056337 |-2,909106 4 67 45 779 [422 213 amostra i . . . . 16-21 8 |-0,3537|-2,42794 |-3,2091 /[0,6596 |3,150 |3,167 |3,240 |3,019 |-3,139775 |-3,054896 31 59 962 [858 309 amostra À À . . . . 1714 5 /0,38917 |-2,79958 |-2,91494 [0,4572 |2,908 |3,247 |3,350 |3,246 |-2,795871 |-3,105855 9 43 67 185 404 142 amostra À À . . . .

17.21 9 /10,3877 |-2,56609 |-2,73688 [0,3607 |2,990 |3,223 |3,351 |3,267 |-3,156589 |-3,093735 6 83 67 4 837 |366 amostra À À . . . . 1841 4 |0,2760 |-2,14754 |-2,92889 [0,8345 [3,252 [3,186 [3,270 [3,270 |-3,274944 |-2,680296 53 8 944 954 954 amostra À i À À À : 18-21 8 |0,4554 |-1,34798 |-2,91172 [0,4055 |3,236 |3,180 |3,205 |3,085 |-3,188447 |-2,891837 2 59 04 818 261 207 amostra À i : : : ; 1911 4 |0,1882 |-2,41938 |-2,86514 |0,3126 [3,120 [3,091 [3,147 [1,286 |-2,980819 |-2,801605 4 os 42 578 |15 441 amostra À i : : : 19-21 8 |10,3306 |-2,65197 |-2,93262 [0,3534 |3,1170/|3,139 |-4 2,393 |4 -2,98358 2 84 5 448 947 amostra À . . : . Ú 20-11 4 |0,0967 [-3,0258 |/-3,07535 |3,0474 |3,1151 1,682 2,834 0,467 |-3,015392 |-2,553783 8 o1 7 475 |753 |915 | amostra VP - -1,85687 |-3,09024 |- F F F F -3,180756 |-2,95234

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae 20-21 0,5660 0,1800 [3,089 |3,093 |3,190 |1,480 7 48 12 606 |516 273 amostra 0,5556 : : : : : 212 4 es -2,88016 |-4 2,4605 [1,425 |2,4011 [2,424 |2,461 |4 -2,457661 47 52 1 451 997 amostra 0,1794 . : . . .

2.9.9 9 51 -2,76633 |-4 2,8365 [1,5811 [2,798 [2,821 [2,823 |-2,835005 |-2,827478 26 7 611 549 024 amostra 0,0408 : : : :

31.2 3 > -2,8939 |-2,94207 |[2,1617 [2,994 |2,892 |2,984 |2,187 |-2,255238 |-2,455706 99 82 759 |864 244 amostra 0,4318 : : : B

3.2.0 4 15 -2,60206 |-2,56139 |2,6528 [2,657 |2,604 |2,648 |1,494 |-2,658912 |-1,761361 8 4 733 | 829 amostra 0,4954 ' ' ' ' ' 712 3 23 -2,44696 |-4 2,4321 [2,401 [2,439 2,467 [0,639 |-4 -2,131772 96 83 516 463 OOS5S amostra 0,3412 ' ' ' ' '

7.2.2 4 75 -2,6369 -2,65232 |2,7021 |2,598 |2,672 |2,706 [2,680 |-2,598272 |-2,54712 68 27 401 5938 |7 amostra 0,4734 ' ' ' ' ' 912 2 38 -2,46903 |-2,53148 |2,4402 |2,542 |2,495 |2,525 [1,552 |-2,518251 |-2,210042 77 os 685 |55 422 amostra 0,7807 . . . :

9.2.9 3 38 -2,26905 |-2,30162 |2,2922 [2,300 |2,275 [2,309 |2,290 |-2,3112 -2,200675 56 27 376 [819 934 amostra 0,8673 - - - - - 2 -1,89241 |-1,91897 -1,925878 |-1,718293 10-1-2 66 1,8194 [1,927 [1,749 |1,914 1,908

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae amostra 0,2072 : À À : :

102.2 3 os -2,35001 |-2,39191 [2,2069 |2,405 |2,142 |2,369 |2,369 |-2,392412 |-2,400072 74 25 914 251 731 amostra 0,2121 À B ' ' ; n4o 3 4 -2,57417 |-2,61993 |[2,6177 |2,6112/2,576 [2,615 [1,375 |-2,604131 |-2,20282 38 4 147 |561 261 amostra 0,0420 : . . . :

112.0 8 86 -2,31666 |-2,52672 |1,8245 |2,647 [2,644 |2,650 |1,178 |-2,127472 |-2,534293 75 62 529 [101 057 amostra À : Ú : : :

124.2 3 /0,0554 |-2,73992 |-2,83049 |2,0073 |2,834 |2,396 |2,834 |1,802 |-2,469501 |-2,655294 9 86 1 167 097 [035 amostra À . : : . .

12.2.9 2 |0,1682 |-2,63028 |-2,94043 [2,9190 |2,951 |2,866 |2,942 |2,848 |-2,839153 |-2,740717 3 os 395 1868 282 amostra 0,7909 ' ' ' ' '

134.2 3 67 -2,12863 |-2,15653 [2,1533 [2,120 [2,106 |2,156 [0,657 |-2,143909 |-2,071518 39 7 207 |528 659 amostra 0,4478 õ . . . 13-2.9 3 268 -2,41697 |-2,461 2,4535 [2,464 [2,415 [2,463 [2,397 |-2,455643 |-2,271816 2 24 026 159 918 amostra 0,5661 . . . .

141.2 3 91 -2,44779 |-2,50331 [2,3032 |2,508 |2,433 |2,498 |2,470 |-2,492342 |-1,253206 27 9 4 066 amostra À . . . . .

14.92.90 3 /0,2565 |-3,05635 |-3,19549 [3,1474 |3,195 |2,351 |3,193 |2,571 |-3,171888 |-2,972719 5 3 49 55 187 747

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae amostra À . . . . :

154.2 3 [0,0381 |-2,89763 |-2,99351 |2,8131 [2,973 2,884 |2,954 |1,041 |-2,989649 |-2,299741 1 31 31 365 jool 398 amostra À : . . . :

152.9 6 [01653 |-3,00854 |-3,16143 |1,6644 [3,163 |3,042 |2,094 1,738 |-2,828347 |-2,792554 7 33 94 492 122 892 amostra 0,8645 . . . . . 161-2 2 58 -2,14766 |-2,19006 /2,1763 [2,168 |2,138 [2,187 [2,151 |-2,177712 |-1,759938 61 34 91 287 462 amostra À À . . . .

162.2 5 |[0,0780 |-2,69337 |-2,84174 |0,5348 [2,841 2,603 [2,841 |2,853 |-2,850157 |-2,807051 3 94 74 359 [742 |95 amostra 0,4621 . . : . .

184.2 3 2º -2,47262 |-2,52914 |2,5048 [2,484 |1,793 |2,246 |2,487 |-2,521336 |-2,490257 98 3 935 192 865 amostra 0,1016 ' ' ' ' ' 18-2.9 3 56 -2,2177 |-2,74405 [0,5824 |2,921 [2,667 |2,922 |2,944 |-2,948948 |-2,929535 66 31 59 473 |jo1l3 amostra 1,2188 ' ' ' ' '

191.2 2 99 -1,91259 |-1,95534 |1,7955 [1,943 [1,735 [1,919 [1,912 |-1,283241 |-1,804953 23 52 592 427 |587 amostra 0,5667 . . . . 19-2.9 3 02 -2,45827 |-2,21707 |[2,3469 [2,483 |2,346 |2,464 |2,485 |-2,514106 |-2,275632 33 44 033 132 912 amostra 0,3316 . . . . Ú 20-1-2 3 59 -2,68997 |-2,75966 [2,6583 |2,732 |2,072 |2,701 [0,955 |-2,736569 |-2,110917 26 37 408 483 |29 | amostra BP - -2,98719 |-3,13883 |- F F F F -2,97457 |-2,581453

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl . s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu atypica | uen pasteri 308) nis s zae 20-2-2 0,0343 1,6378 [3,093 [2,934 [3,012 [1,621 9 77 34 714 601 028 amostra À Ú Ú Ú ' ' 2111 3 0,4528 |-3,11531 |-2,29122 /2,8089 [3,138 |3,256 [1,774 [1,378 |-3,064354 |-1,410162 7 94 os 502 623 474 amostra À 7 Ú Ú ' ' 8 |10,3756 |-24523 |-2,73311 3,093 [3,030 |2,823 [2,547 |-3,168158 |-2,226476 21-21 0,51115 9 86 431 21 509 amostra 0,2644 ; : : : : 2211 3 ” -2,68918 |-2,78581 [1,7843 [2,758 [2,488 |2,694 |2,746 |-2,760903 |-2,193829 84 22 35 918 [359 amostra À À À À À À

22.91 6 /0,2789 |-1,86153 |-3,13514 [0,3091 |2,867 |3,025 |3,200 |3,147 |-3,17889 /-3,081037 7 25 37 407 |67 043 amostra À : À À À ; 23:11 3 /0,3418 |-3,14666 |-2,6666 /3,2335 |2,822 |2,822 |2,981 |1,416 |-3,121742 |-2,540204 8 2 81 386 017 |29 amostra À : À : À À 23-21 8 /0,4032 |-2,73492 |-2,77772 [1,0059 |2,737 [3,038 |2,952 |2,350 |-3,156311 |-2,559335 58 o7 713 /292 232 amostra À : À À : ; 24-11 4 |0,0510 |-2,95969 |-2,64052 |2,9701 [3,082 2,854 3,065 1,660 /-2,947508 |-2,214115 2 o1 57 216 17 305 amostra À 0,0845 || . . . 24-21 9 10,8177 |-2,04994 |-2,78767 038 2,800 [2,990 [3,175 [3,184 |-3,169874 |-2,899274 9 04 53 351 26 amostra 7 7 7 7 7 4 |-0,3842/-2,/72467 |-2,30094 -3,203877 |-2,517902

2. | 3,2114 ”” ” ” ”

Strepto Haemo Porphy Alloprevote | Streptococ Eubacteriu . , co Veillon | phil us Parvimona | Filifactor rom . lla spp. (A. cus amostra | PD | controle m cecus ella | parainfl ' s micra alocis onas rava,OT | parasangui nodatum sobrinu , |atypica | uen À pasteri 308) nis s zae amostra À : À : : : 25-21 7 /0,2527 |-1,87817 |-2,50036 |2,4565 |2,030 |3,025 |2,840 |3,107 |-3,111745 |-2,272444 1 15 83 897 |[307 [862 amostra À i : : : : 2611 4 [04054 |-2,75397 |-2,76292 JO,6588 [2,493 |3,1143/3,258 2,855 |-3,203135 |-2,738465 3 117 os 15 505 |915 [Tabela 13-2] amostra 26- À À : À À À : : À À 21 8 0,408 [2,354 [3,096 |0,1296 2,622 |2,9780 |2,5823 |3,1435 |3,2014 |2,7773 18 94 77 34 5 61 34 71 27 63 amostra 27- À À ' À À À À Ú À À 4 4 0,215 [2,741 [2,422 |0,8498 3,151 |2,5895 [3,1918|3,2170 /[3,1516 3,1184 87 1 583 43 61 54 92 42 un 88 amostra 27- À : ' Ú : : : : : : 21 n 0,456 |1,675 [3,172 |0,3602 [2,935 |3,1408 |3,2683 | 3,2394 |3,2672 |3,2205 98 75 85 34 78 61 77 88 3 57 amostra 28- Ú . . Ú . . . . . . ” 4 0,303 [2,399 [2,627 |0,0909 [2,872 |2,7806 /3,1769|3,0970 |3,1688 2,8103 88 99 74 14 44 67 65 o4 47 28 amostra 28- Ú : . Ú . . . . . . 21 6 0,597 [1,995 [2,832 |0,0446 2,970 |2,9260 [3,1868|3,1261 [3,1889 /2,9445 81 3 17 17 35 21 31 79 7 56 amostra 29- 0,076 | . . . . . : . . 14 3 767 2,895 [3,008 |2,8224 |2,989 |2,9236 |2,9789 | 1,8050 |2,9950 |2,3993 46 69 53 12 47 34 54 48 78 amostra 29- À Ú : À : : : : : À ” 6 0,529 [1,609 [2,822 |0,1270 3,083 |3,1399 /3,2312 /3,0922 [3,2017 2,9892 44 os 77 4 13 61 47 53 92 99 amostra 30- À : : À : À : ; À À "” 4 0,091 [2,338 [2,914 |0,2572 2,871 |2,6858 |[2,9984 |1,2955 |2,9027 [2,5373 os 14 24 69 79 48 91 61 59 53 amostra 30- Ú . . B . . . . . .

21 6 0,172 [2,415 [2,957 |0,1823 3,187 |2,9625 /3,2115 [3,1604 [3,1687 [3,0732 86 29 35 48 14 47 96 43 61 93 amostra 31- Ú . . : . . . . . .

4 4 0,306 [2,899 [3,299 |1,5825 3,276 |2,6121 |3,2857 |3,1410 [3,2569 [3,0236 66 64 53 oa 42 66 87 14 98 54 amostra 31- À : : B . . : : . .

21 6 0,283 [2,462 [3,330 |1,0924 [3,313 |3,1456 |3,3221 [2,9076 3,2952 |3,2049 46 o8 59 86 94 29 83 37 83 43 amostra 32- À À : ; À À Ú Ú À À 4 4 0,072 [2,134 [3,081 [1,9863 2,686 |2,9754 [3,1105 |3,0611 [2,9692 |2,8297 19 69 81 84 52 68 44 24 93 84 amostra 32- À Ú : À À À : : À À 21 9 0,448 |1,758 [3,192 |0,4041 [3,048 |3,1936 |3,2732 |[3,1782 |[3,2446 2,7363 2 12 49 94 44 os 35 1 18 33 amostra À : : ; À À : : À À Hoot-11 3 0,391 [3,064 [2,935 |1,8992 |3,258 |2,8567 |[3,2526 |2,7302 [2,9803 [3,0119 65 56 84 2 56 8 68 29 5 34 amostra À : : : : À À : À À Hoot1-2-1 3 0,256 [3,098 [3,255 |3,1373 3,249 |2,9423 [2,9287 [2,6652 |0,8905 /2,7000 94 15 89 62 94 12 o6 o8 81 02 amostra À : : : : À : : : À HCo1-3-1 2 0,352 [3,146 [3,101 |3,2249 [3,322 |2,2587 [3,0738 [3,1453 [3,1607 [2,7128 02 37 22 45 46 38 2 6 8 75 amostra 3 - - - - - - - - - - HC02-1-1 0,133 [2,985 [2,991 |1,5814 3,134 |2,5991 [3,1200 [0,8826 |2,9669 [2,6976 amostra 0,000 À : B : À : ; : À 2 2,953 [3,094 |1,7460 [3,058 |2,4435 /3,0338 |1,6256 |1,8120 [2,4353 HC02-2-1 234 89 51 37 97 78 15 88 78 8 amostra À : : : : À : : : À HCo2-3-1 3 0,032 [2,858 [3,022 |3,1124 [3,133 |2,4468 /3,0869 [2,4320 [3,1251 2,6619 os 92 17 16 43 42 59 78 39 32 amostra 0,059 . . . . . . : . . 3 2,895 [2,999 |2,9692 [2,989 |2,8374 |2,9617 |1,2831 |2,9923 /2,2219 HCO03-1-1 7H 72 o1 29 73 61 84 91 63 81 amostra 0,161 : ' ' : Ú : Ú Ú Ú 2 2,828 [2,912 |2,8560 [2,860 |2,6395 |2,8387 [0,1918 |2,9004 |2,1646 HC03-2-1 561 71 33 o7 73 91 48 45 62 15 amostra Ú . . . . . . Ú . . HC0s-31 3 0,052 [2,909 [3,027 |2,9950 [3,001 |2,8880 |2,9599 |0,2484 |2,9025 | 2,3095 7 99 49 os 58 4 42 o8 52 46 amostra À . . : . . . : . . HC04-1-1 3 0,185 [3,019 [2,851 |1,2711 [3,134 |2,0235 /2,3797 |[1,0866 |[3,1706 2,5202 98 78 54 93 o8 66 27 73 o1 19 amostra Ú . ' . . : . . . HC04-2-1 2 0,199 [3,053 |-2,879 [3,1303 [3,165 |3,0978 [1,7905 [3,1601 [3,0796 [2,6084 87 69 65 54 23 1 5 3 89 amostra À . . . . . . . . HC04-3-1 3 0,157 [3,066 [2,652 |3,1657 3,196 |3,1118 [3,1576 -1,991 [3,1881 /2,5992 o6 o9 37 24 86 48 o6 44 23 amostra À . . . . . - Ú . . 3 0,322 [3,103 [2,563 |3,2827 [3,306 |3,1567 0,9248 |3,1255 |2,7879 HCO05-1-1 3,2655 12 5 16 41 37 89 6 45 45 amostra 0,131 : ' ' À À : Ú : À 2 2,869 [3,037 |2,9835 [3,032 |2,9934 |2,9602 |0,5324 |1,9720 [2,1888 HC05-2-1 627 27 33 34 58 86 75 oa 23 37 amostra — |3 F - - F - - - F - -

HCO05-3-1 0,023 [2,998 [3,153 |3,0990 [3,131 |2,8484 [3,0700 [0,3383 [3,0129 [2,2378 84 27 17 75 56 64 69 24 93 83 amostra À . . . . . . : . . HGo6-1-1 2 0,242 [3,156 [3,335 |3,2851 [3,331 |2,7994 [3,2961 [1,5578 |[2,6192 [2,8524 96 47 61 34 04 75 64 88 5 n amostra 0,297 | ' ' À À À À Ú À 2 2,796 [2,874 |2,7903 [2,877 |2,5550 |2,8403 |[0,9702 | 1,4756 [2,3598 HCO06-2-1 624 97 os 62 22 77 68 02 42 25 amostra Ú . . . . . . Ú . . HC06-3-1 2 0,246 [3,160 [3,825 |2,7646 3,317 |2,2535 |[3,2616 /0,5617 [2,3945 /2,6616 43 61 85 56 88 55 66 39 39 92 amostra Ú . . . . . . : . . Ho07-4+1 3 0,068 [3,060 [3,178 |3,1434 [3,207 |3,1598 |3,1508 [1,5371 [3,1912|2,4841 38 21 38 99 78 33 48 97 o4 76 amostra 0,430 Ú , , Ú À Ú Ú À À 3 2,668 [2,751 |2,7151 [2,735 |2,1929 |[2,5836 |2,3316 | 2,7455 |2,2909 HC07-2-1 999 84 55 57 16 77 35 99 19 37 amostra 0,203 ' ' ' ' ' ' ' ' ' 3 2,922 [3,049 |2,9959 [3,044 |2,9756 3,0019 |1,1067 |3,0251 |2,5938 HC07-3-1 82 27 72 61 7 23 51 17 81 76 amostra À : : : : À : À À À Hoos-1-1 3 0,214 [3,150 [3,147 |3,2555 3,313 |3,1068 |3,2654 |0,9432 |2,8534 [2,7660 89 59 32 28 72 14 14 5 18 17 amostra 0,284 ' ' ' ' ' ' ' ' ' 2 2,850 [2,942 |2,7760 [2,940 |2,8345 |2,9006 |0,6117 |1,6032 |2,3631 HC08-2-1 622 51 o4 89 37 7 48 44 78 37 amostra À : : : : : : : : - 3 0,017 [3,062 [2,703 |3,1794 |3,232 |3,1401 [3,1934 [2,6413 |3,0443 HCO08-3-1 3,1388 64 4 99 94 9 35 49 95 amostra À : : : : À : ; À À Hcog-1-1 3 0,008 [3,002 [2,995 |3,0576 3,092 |2,6944 [3,0739 [1,0655 |2,1509 [2,2864 89 51 51 53 42 75 92 28 04 62 amostra 0,142 : : : : À : : À À 3 2,874 [2,986 |2,8746 [2,966 |2,8074 |2,9357 |[2,1116 |2,5748 |2,3223 HC09-2-1 051 63 37 25 7 94 77 45 94 02 amostra À : : : : À : ; À À HCog-3-1 3 0,088 [3,057 [3,218 |[3,1519 3,215 |2,8882 [3,1705 |1,3542 |[3,1854 2,6519 63 53 62 o3 35 79 7 39 96 67 amostra 0,189 . . . . . . : . . 2 2,916 [3,025 |2,9353 [3,011 [2,8407 |2,9278 |1,9149 |3,0087 |2,0843 HC10-1-1 471 69 66 82 77 7 o7 81 44 21 amostra 1,293 || . : . : . Ú . : 1 1,971 [2,032 [1,7988 2,026 |1,9946 [2,0057 |0,4487 [2,0219 |1,8253 HC10-2-1 267 93 o4 os 98 75 1 43 78 82 amostra 0,475 || B : À À Ú ; À À 3 2,624 [2,707 |2,6993 [2,707 |2,6652 |2,6827 |[1,3583 |2,6916 2,6376 HC10-3-1 ou 53 os 24 os 73 os 74 E 9 amostra 0,108 À : B À À Ú Ú À Ú 3 3,004 [2,604 |3,1126 |3,159 |3,0924 |3,1044 [3,1071 |3,1485 |1,9554 HC11-1-1 632 6 51 68 19 64 73 88 8 56 amostra 0,334 ' ' ' ' ' ' ' ' ' 3 2,807 [2,557 |2,8749 [2,775 |2,8763 [2,8631 |[2,8749 |2,9090 | 1,8474 HC11-2-1 428 32 76 02 31 97 24 o2 43 33 amostra 0,680 ' ' ' ' ' ' ' ' ' 2 2,465 [2,549 |2,4766 [2,542 |2,5257 |2,5177 |2,4913 |2,5273 |1,2969 HC11-3-1 228 14 15 o3 34 63 os 76 92 44 amostra 0,673 ' ' ' ' ' ' ' ' ' Ho12-1+1 2 61 2,533 [2,630 |2,5977 [2,628 |2,5867 |[2,5745 |1,5201 |2,6188 |1,6762 os 66 39 95 83 92 46 49 24 amostra 0,627 À : : À À : ; À À 2 2,544 [2,615 |2,3626 [2,615 |2,5650 |[2,5903 |1,4169 |2,6189 [2,2168 HC12-2-1 04 o9 45 73 45 63 38 66 1 2 amostra 3 0,052 |- - - - - - - - - HC12-3-1 254 [3,012 [3,165 |3,0633/3,158 |3,0958 /3,0885 |0,6493 /3,1571 |2,3756 amostra 0,243 À ' ' À À À Ú À À Ho13-1+1 2 nn 2,856 [2,979 |2,7434 [2,973 |2,6541 |[2,9063 |2,9359 |2,9783 |2,4375 1 88 97 77 59 87 79 47 8 amostra 0,119 | ' ' À À À À Ú À 1 2,896 [3,055 |2,8966 [2,997 |2,2351 |[2,9363 |0,2288 | 1,9297 [2,5151 HC13-2-1 6387 64 12 41 31 88 4 34 18 84 amostra 0,139 . . . . . . : . . 3 2,821 [2,968 |2,8149 [2,917 |2,3096 [2,8815 |1,3072 |2,9575 | 2,4604 HC13-3-1 825 86 58 4 28 68 6 55 53 76 amostra Ú . . . . . . . . . HC14-1+1 2 0,081 [2,980 [3,145 |3,0912 |3,127 |2,5391 [3,0790 [3,0974 |[2,1841 [2,3706 79 72 o2 35 23 34 69 48 54 os amostra 0,082 | ' ' Ú Ú : : : À 2 2,715 [2,792 |2,7408 [2,749 |2,4030 |[2,7653 |[1,6616 |1,5776 |2,3738 HC14-2-1 o8 69 43 75 6 EX) 18 04 48 25 amostra À . . . . . . : . . HC14-3-1 3 0,009 [2,921 [3,064 |3,0276 3,043 |2,8596 [3,0378 |[1,8501 [2,5965 |2,4658 53 o8 46 98 o7 54 87 83 68 37 amostra 0,339 || ' ' . - . : . . 3 2,609 [2,784 |2,7779 2,775 2,7616 |1,3861 |2,7843 |[2,5225 HC15-1-1 464 2,5141 97 33 2 38 71 36 35 os amostra 0,416 . . . . . . Ú . . 2 2,619 [2,752 |2,5801 [2,736 |2,6112 [2,7152 |[0,4570 [2,3097 |2,1142 HC15-2-1 785 16 11 46 98 96 22 9 oa 24 amostra À . . . . - . : . . 3 0,161 [3,087 [2,329 |3,2976 3,309 3,2938 | 1,4785 | 3,0825 | 3,0583 HC15-3-1 3,0057 o2 24 76 96 35 8 97 4 22 amostra 21- 0,187 | . . . : : . À 12 3 88 2,810 |-2,663 [2,9107 [2,947 |2,6735 |1,2655 |1,9753 |2,8801 |0,6634 92 25 91 72 o6 68 46 98 amostra 21-|4 |o.o7s - - |ort7s2 - - - F - -

2-2 2,710 [2,752 |36 3,068 |2,9777 |2,2395 |3,0674 | 3,0674 |2,9852 51 89 8 15 89 81 81 49 amostra 22- À . . . . . . . . . 12 3 0,142 [3,009 [3,171 |3,1160 [3,142 |3,1203 [2,9782 [2,5431 [3,1497 [2,4964 26 13 66 77 23 28 87 75 83 o1 amostra 22- À Ú : B À À : : : À

2.9 5 0,248 [1,843 [2,958 |0,4559 2,698 |2,8410 |3,1751 |3,1727 |3,1442 /3,1071 81 1 32 58 83 oa 55 88 44 93 amostra 23- Ú . . . . . : : . : 1º 2 0,194 [3,025 [3,171 |3,0718/3,138 |2,3539 [1,9120 [1,3393 [2,8207 [1,7666 29 1 42 19 94 64 44 os 37 8 amostra 23- Ú . . . . . . . .

2.9 4 0,181 |-2,78 [3,131 [3,0804 [3,108 |2,9314 |2,3080 |2,1640 |[3,0564 |2,1288 o2 6 46 4 69 21 27 o7 26 amostra 24- 0,043 ; , , ; ; ; ; ; ; 1º 3 086 2,770 [2,920 |2,8840 [2,875 |2,7579 |2,8646 |[0,5180 | 1,8945 [2,2693 24 31 o1 95 os 96 63 8 52 amostra 24- 0,012 ' ' ' ' ' ' ' ' '

2.9 4 330 2,880 [2,928 |2,9191 [2,827 |2,4735 /2,9097 |1,0668 | 2,0008 | 2,0466 66 8 58 79 16 28 57 47 47 amostra 25- 0,226 ' ' ' ' ' ' ' ' ' 1-2 2 923 2,779 [2,903 |2,7096 [2,895 |2,7379 [2,8575 |1,2829 |2,8778 |2,0704 42 33 73 13 37 7 44 92 14 amostra 28- 0,390 ' ' ' ' ' ' ' ' ' 1-2 2 321 2,585 [2,674 |2,6477 [2,665 |2,5074 |[2,6250 |0,7053 |2,6576 | 2,3804 o1 29 28 25 23 23 14 55 9 amostra 28- 1,089 || B B Ú Ú ; ; Ú Ú

2.9 3 us 1,855 |1,924 /1,9378 1,939 |1,8670 |1,9272 |1,9079 |1,9351 [1,9311 78 59 73 22 9 15 1 84 81 amostra 29- 0,719 | : : : À : : À À 12 3 668 2,286 [2,334 |2,2559 [2,318 |2,2548 |2,3026 |2,2924 |2,3198 /2,0430 13 94 96 5 34 6 1 49 88 amostra 29- 0,054 : : : : À : : À À

2.9 3 24e 2,839 [2,942 |2,9220 [2,920 |2,6121 |2,0542 |2,9173 |2,9137 [2,5883 9 76 45 86 82 63 12 95 64 amostra 30- À : : : : À : ; À 1º 3 0,149 [3,007 [2,838 |3,0676 3,089 |2,9220 [3,0723 [1,5310 |-3,134 [2,3473 72 04 42 34 os o4 04 62 64 amostra 30- Ú . . . . . . . . . 22 3 0,819 [3,099 [3,282 [2,8212 3,279 |3,0795 |3,2402 [2,5146 |3,2441 [2,8931 61 69 4 85 55 32 29 1 35 17 amostra 33- Ú . . B . . . . . . 14 4 0,140 [2,566 [2,767 |0,7818 3,183 |3,0866 |[3,1696 |3,1117 [3,1450 |2,3735 31 49 47 52 89 92 os 89 16 56 amostra 33- À . : : . : : : : : 21 9 0,411 [3,080 [3,181 |3,1515/3,151 |2,5404 |2,2138 |2,8442 |2,9461 |2,9461 66 os 59 35 53 17 77 38 54 54 amostra 33- À : : À : : : : . À 31 7 0,195 [2,762 [2,758 [0,5061 [2,981 |3,1381 |3,2168 |3,1369 |3,2099 |2,9859 69 62 24 9 [5] 57 74 98 7 34 amostra 34- 0,024 ' ' ' ' ' ' ' ' ' ” 4 036 2,821 [2,928 |2,7931 [2,889 |2,8850 |2,8942 |1,9198 | 2,9096 |[2,1383 7 os 82 63 61 52 42 17 37 amostra 34- À : : 0,1732| . : : . õ 21 6 0,455 [1,458 [3,155 187 3,193 [3,0933 |3,2223 |3,2562 | 3,1952 | 3,2562 57 56 o7 41 36 26 55 26 amostra 34- À ' ' : À À À À À À 31 10 0,411 [1,800 [3,198 |0,0376 [3,184 |2,9985 3,2120 [3,0509 |[3,1610 [3,1402 o8 88 43 92 os 96 56 os 44 81 amostra 35- À : : : : : : ; : À 1H 4 0,201 [3,057 [2,956 |2,5284 [3,186 |3,1459 [3,1750 [1,5419 [3,2033 [2,4948 66 os 82 78 2 55 95 78 98 83 [Tabela 13-3]

amostra 35- À : : À : À : À À À ” Nn 0,146 [2,230 [3,086 |0,7755 3,121 |2,9964 |3,0952 |2,6931 [3,1095 | 2,9821 75 57 94 88 36 24 97 61 84 1 amostra 36- À : : : : À : À À À "” 2 0,165 [3,178 [3,345 |3,2755 [3,334 |2,9993 [2,3477 [2,5241 [2,9592 [2,1971 34 34 39 17 47 89 62 71 93 21 amostra 36- À . . Ú . . . . . .

21 7 0,400 [2,663 [2,993 |0,6708 3,275 |3,2683 /3,3391 [3,1445 3,2649 3,1630 27 44 3 89 29 58 41 67 34 5 amostra 36- Ú . . Ú . . . . . .

34 0,324 [2,810 [3,042 |0,5358 3,281 |3,1717 |3,2506 [3,1619 |3,2301 |3,0070 14 04 97 34 96 21 83 85 82 83 amostra 37- À : : . . . : À : "” 4 0,149 [2,996 [2,895 |2,1092 [3,143 |3,1210 [3,1210 |1,5850 [2,8248 |2,4427 57 18 n 41 71 73 73 36 95 14 amostra 37- À : : À À À À Ú À À 21 0,129 [2,517 [3,095 |0,7239 3,094 |3,0267 |3,0831 |1,9656 |3,0956 |2,9799 78 53 67 17 27 18 66 54 74 99 amostra 38- À : : À À À À À À À "” 5 0,338 [1,591 [3,255 |0,0325 3,187 |2,9819 [3,2091 [3,2315 /3,2550 [3,2117 n os os 87 1 63 59 os 59 29 amostra 38- À : : À À À : À À À 21 0,521 [1,754 [3,112 |0,3193 2,822 |3,2053 |[3,2349 |[2,9397 [3,2850 [3,2137 52 47 29 81 97 61 83 39 19 94 amostra 39- À : : À : À : À À À ” 4 0,285 [2,041 [3,197 |0,5972 [3,242 |3,1177 [3,2310 [2,6293 /3,0559 [3,1811 29 2 61 4 36 83 84 72 22 7 amostra 39- À : : : À À : À À À 21 0,013 [3,058 [3,260 |3,2124 [3,232 |3,1929 /3,2081 |[0,8899 [3,2312 /2,7060 o9 64 38 o7 75 78 7 98 61 17 amostra 40- a - - - - - - - - - - 111 0,180 [3,045 [2,276 |1,5453 [3,301 |3,1555 |3,2648 [2,4913 /3,2887 [2,8545 amostra 40- À : : Ú : : : À À À ” 7 0,120 [2,142 [3,114 |1,0938 3,117 |3,1109 [3,1235/3,0651 [3,1032 2,9813 EX) 57 o6 13 21 36 71 78 22 52 amostra 33- 0,465 : : : : À À À À 1º 3 875 2,630 [2,679 |2,6396 [2,690 |2,7085 |-4 2,6833 [2,6833 [2,4566 63 os 39 63 4 78 78 67 amostra 33- 0,595 . . . . . : : . : 22 3 585 2,514 [2,591 |2,5303 [2,576 |2,5585 |1,8531 |1,3907 |2,5778 |1,9442 23 83 17 38 27 92 74 99 53 amostra 33- 0,544 Ú ' ' Ú Ú Ú ; Ú Ú so 3 065 2,841 [2,390 |2,3271 [2,376 |2,3824 |[2,3812 |1,1995 |2,3848 |2,2107 16 95 64 47 41 4 86 54 84 amostra 35- 0571 | ' Ú Ú Ú Ú À Ú ; 1º 2 551 2,473 [2,539 |2,4908 2,521 |2,5168 |2,5152 [0,8701 |2,5296 |1,7447 47 46 98 6 56 86 97 3 79 amostra 35- 0,672 | ' ' ' Ú ' ; Ú ;

2.9 3 832 2,352 [2,413 |2,4013 [2,399 |2,3662 |2,3863 | 1,0679 | 2,4028 | 1,4039 4 71 46 82 32 69 52 73 44 amostra 41- 0,216 |. . . . . Ú . . H 4 928 2,901 |-4 2,8955 [2,997 [2,7337 |2,9412 |1,2788 |2,9939 |2,3981 77 22 Eb) 26 79 51 86 97 amostra 41- À : . À . . . . . . 2 0,076 [1,570 [2,826 |0,6620 [3,006 |2,7862 /3,0619 [2,9655 |3,0595 [2,7842 71 97 36 33 75 02 75 56 28 56 amostra 42- À . . À . . . . . . 1H 4 0,205 [2,881 [3,138 |0,3947 [2,658 |3,0349 [3,1763 /3,1536 /3,1736 3,1223 53 33 27 29 41 46 59 15 n amostra 42- À : ' À : À Ú À : À 21 7 0,356 [2,972 [3,066 |0,6123/2,851 |3,2111 [3,3064 [3,3176 [3,2874 [3,2327 25 74 14 os 99 55 o2 1 58 89 amostra 43-| 4 - - - - F - F - - -

111 0,156 [2,707 [2,997 |0,4097 [3,022 |2,6450 [3,0292 |[3,0357 |3,0464 [3,0292 45 23 86 4 75 os os 56 47 os amostra 43- 0,254 || . À . . . . . . ” 7 731 2,607 [2,791 [0,3620 [2,841 |2,7946 |2,8237 |2,8066 |2,8415 |2,7902 34 69 56 56 47 64 7 59 23 amostra 44- À i ' À À À À À À À H 4 0,096 [2,687 [3,163 |0,6366 [3,128 |3,1085 3,1284 |2,7826 [3,1477 |2,8188 42 68 23 58 46 9 64 22 69 os amostra 44- À À ' À À À : : : : 21 0,221 [1,192 [3,007 |0,1759 [3,189 |3,1689 |3,2205 |3,2278 [3,0251 [3,1003 98 o2 15 92 92 2 Ex) 28 77 29 amostra 45- À . . . . . . : . . 14 4 0,115 [3,054 [3,209 |3,1378 [3,173 |3,1533 |[3,1561 |1,6773/3,0077 [2,4111 73 12 67 68 78 os 72 28 9 28 amostra 45- À : . 0,0182| - . . . . 0,243 [1,782 [2,951 2,409 3,1080 |2,3125 |3,1251 |2,9656 2-1 358 3,0381 71 54 65 1 73 57 os 48 amostra 46- 0,054 ' ' ' ' ' ' ' ' ' ” 4 758 2,948 [3,097 |3,0616 [3,061 |2,9912 /3,0676 |1,8303 |3,0878 |2,2531 83 51 19 62 62 51 78 54 os amostra 46- À : : À : À : À À À 21 7 0,409 [1,617 [3,051 |0,2951 [3,327 |3,2448 [3,3111 [3,3169 /3,3068 [3,1384 42 48 46 65 23 37 69 4 9 35 amostra 47- À : : À À À : À À À ” 5 0,041 [2,337 |[3,1112/0,5886 [3,144 |3,0960 [3,1284 [3,0990 [2,8140 [2,9816 o 7 1 78 82 76 9 61 47 76 amostra 47- À : : À : : : À À À 2 7 0,801 [1,934 [2,879 |0,5012 3,182 |3,1055 /3,1561 /[3,1201 [3,1711 /3,0403 os 75 2 44 36 59 15 18 16 2 amostra 48- À : : Ú : À : : À À H4 4 0,026 [2,897 [3,033 |1,5511 [3,001 |2,8243 [2,8809 |1,3067 [2,8809 [2,3785 24 87 77 81 69 os 56 56 56 6 amostra 48- À : : À : : : À À À ” 0,329 [2,217 [3,196 |0,3912/3,158 |3,0525 [3,2031 [3,1726 [2,7433 [3,0047 2 28 36 22 8 56 77 64 45 63 amostra 49- À : : À : À : - À À "” 4 0,224 [2,905 [2,913 |0,3830 [2,742 |2,7779 /2,38014 31543 3,1137 [3,0271 48 54 | 19 84 26 |3 37 ' 22 28 amostra 49- À . . Ú . . . . . . 21 1 0,354 [2,693 [2,831 |0,4416/ 3,096 |2,8820 [3,1957 [3,1707 [2,9326 [3,1106 79 24 76 96 14 1 25 15 87 15 amostra 50- Ú . . . . . . : . . 14 4 0,163 [3,017 [3,051 |3,1245 [3,144 |2,6679 |3,1258 |1,1277 |3,0353 |2,6580 34 62 53 82 6 33 88 76 02 21 amostra 50- À : : . : : : . : 21 0,112 [2,995 [3,107 |3,0848 [3,097 |2,7393 |[3,0713 |1,5170[3,1017 |2,6704 7 48 52 81 47 37 os 15 49 39 amostra 51- À : : Ú À À À À À À 4 5 0,188 [2,937 [2,754 |1,9347 [3,027 |2,6431 [3,0303 |3,0520 [3,0520 |3,0605 37 72 56 38 73 59 75 94 94 27 amostra 51- À : : À À À À À À À 21 0,408 [1,801 [2,658 |0,4962 3,086 |2,7952 /3,0949 [3,0937 [3,0559 [3,1053 84 79 44 55 18 31 82 os 18 22 amostra 37- 0,462 ' ' ' ' ' ' ' ' ' 1-2 2 809 2,534 [2,584 |2,3932 [2,584 |2,5456 |2,5585 | 1,3807 |2,5718 | 1,4916 43 04 57 04 os 27 88 46 64 amostra 37- 0,162 ' ' ' ' ' ' ' ' '

2.9 3 239 2,772 [2,733 |1,4508 [2,879 |2,7863 [2,1478 |1,8686 |2,6575 |1,7505 42 1 51 44 52 o9 13 95 74 amostra 38- À : : Ú : À : Ú À À 12 3 0,209 [3,036 [3,194 |1,8160 3,184 |2,9847 [3,1488 |1,6830 [3,1557 [2,7927 86 35 88 62 38 27 18 42 o1 os amostra 38- 5 - - - - - - - - - - 2-2 0,263 [2,893 [2,749 |2,6786 2,723 |3,0328 [3,2758 |[2,5254 |[3,0798 [3,2296 amostra 0,250 : : : À À À : À À 3 2,817 [2,941 [2,9028 [2,940 |2,8350 |[2,9180 |[1,3611 [2,1339 [2,7368 HCNO01-1-1 837 43 96 os 32 04 45 4 89 14 amostra 0,023 : ' À À À À À À À 2 2,976 [3,108 |3,0523 [3,101 |2,8257 [3,0811 [2,3533 [2,5574 |2,9467 HCN02-1-1 254 91 98 14 48 1 4 44 1 26 amostra À . . . . . . . . . HCNO3-1-1 3 0,762 [3,109 [3,151 |3,1684 [3,243 |2,7695 |2,7606 |3,1747 |3,1178 [2,0785 23 os 36 86 2 48 75 71 88 2 amostra Ú . . . . . . . . . HCN04-1-1 2 0,016 [2,983 [3,104 |3,0062 [3,076 |2,8247 [2,6140 |[2,0040 |[3,0947 [2,2236 63 os os o1 71 2 57 78 44 91 amostra À . . . . . . . . . HCN05-41-1 4 0,320 |3,091 [3,065 |3,0968 [2,556 |2,8826 |2,0334 |2,1658 [2,9607 |2,9665 34 22 35 Eb) 62 81 8 o7 64 61 amostra 0,158 |. . . . . . : . . 3 2,818 [2,925 |2,8757 [2,907 |2,5980 [2,1887 [1,1514 |2,3165 |2,3534 HCNO6-1-1 295 3 27 89 67 92 41 13 27 45 amostra 0,013 || . . . . . À Ú . 2 2,912 [3,034 /2,9675 2,987 |2,7817 |2,9788 |[0,9207 [1,8190 [2,3067 HCN07-1-1 722 o7 12 87 79 35 35 21 86 64 amostra 0,057 |. . : . . . À . . 3 2,828 [2,950 |1,9368 [2,873 |2,8235 |2,8973 |[0,9326 [2,5038 [2,2568 HCNO08-1-1 948 71 53 28 66 33 95 o1 69 36 amostra 0,314 |. . . . . . . . . 2 2,630 [2,698 |2,6656 [2,686 |2,4602 |[2,6583 |2,6693 |2,6742 [2,4077 HCNO09-1-1 12 28 74 o7 98 62 o8 04 81 53 amostra À . . . . : . : . . HCN10-14 4 0,262 [3,017 [3,061 |3,0494 [3,098 |1,7575 |2,7734 |1,5020 |2,7384 [2,3144 04 42 46 33 37 16 36 89 32 98 amostra — |2 0,195 |- - - F - F - - -

HCN11-1-1 145 2,781 [2,875 [2,8262 [2,851 |2,7249 [2,8516 |1,7777 |[1,2317 [2,5887 83 65 12 68 26 83 56 43 o7 amostra 0,211 |. . . . . . . . . 3 2,725 [2,718 [2,7937 [2,807 |2,3103 |2,7654 |2,7962 |2,8001 |2,3842 HCN12-1-1 391 7 17 37 94 13 71 84 34 69 amostra À : : : À À À : À À HCN13-1-1 3 0,097 [2,898 [3,004 |2,9575 | 2,988 |2,7505 |2,9548 | 1,2565 [2,2698 |2,5664 17 23 68 69 4 83 71 47 37 46 amostra À . . . . . . : : . HCN14-1- 3 0,061 [2,929 [3,084 |3,0354 [3,081 |2,7645 /3,0529 |1,2230 |[1,5354 [2,6687 78 o7 42 u 46 34 75 48 23 61 amostra 0,010 . . . . . . : . . 2 2,992 [3,122 |3,0632 3,064 |2,5238 |3,0431 |1,6529 |[3,0967 |2,4301 HCN15-1-1 786 oa 53 49 54 o8 o4 1 24 1 amostra À . ' . . . . À . Ú HCN16-1-1 3 0,041 [3,029 [3,067 |3,1243 [3,116 |3,0116 [3,1257 |0,8010 |3,1544 |2,6551 99 n 4 53 13 88 38 o2 15 41 amostra À : : : À À : À Ú À HONI7-4 2 0,179 [3,054 [2,778 |3,1213/3,166 |2,8389 [3,1353 [2,0083 |[1,1391 [2,5448 68 os 48 54 28 16 85 77 22 2 amostra À : : À : À À À Ú À HCN18-4 2 0,011 [2,937 [3,019 |2,9451 [3,025 |2,8740 [2,3766 |2,0906 | 1,4736 [2,4220 83 53 51 97 67 36 12 29 os 6 amostra À : : : À À : À : À HCN19-4-1 4 0,148 [2,960 [3,057 |3,0044 [3,044 |2,5605 3,0178 /0,9733 /1,4046 [2,3888 83 45 85 31 25 o8 02 94 62 amostra 0,293 || : : : : : À À : 2 2,727 [2,823 [2,7939 [2,812 |2,4096 |[2,1893 |1,6638 | 1,2096 [2,3974 HCN20-1-1 082 61 6 45 99 o 84 76 96 4 amostra 0,200 || : : : : : À À : 2 2,826 [2,904 |2,8562 [2,907 |2,7089 |2,8689 |1,8319 |1,6277 |2,4149 HCN21-1-1 014 69 83 81 96 62 93 22 2 29 amostra 0,004 | : : . : . õ : : 3 2,907 [3,037 |2,9978 [3,028 |2,8346 |[3,0064 |[3,0035 |[2,0929 [2,6595 HCN22-1-1 514 83 49 62 8 21 44 94 61 amostra 0,050 | : : : : : À : - 3 2,913 [3,001 |[2,9559 [2,979 |2,2030 |2,9502 |0,5072 |2,6463 HCN23-1-1 14 2,4827 38 55 56 68 53 23 65 54 amostra 0,097 |. . . . . . ; . . 3 2,840 [2,915 |2,8970 [2,916 |2,5230 |[2,9060 |1,7314 |2,5607 |2,6057 HCN24-1-1 165 57 12 86 66 53 1 25 28 33 amostra Ú . . . . . . : . . HCN25-14 2 0,029 [2,980 [3,098 |3,0583 3,074 |2,9888 |3,0748 |1,2061 |[3,0795 /3,0283 86 18 54 28 89 56 89 14 17 65 amostra 0,373 || : : : : : À À : 3 2,740 [2,815 |2,7960 [2,810 |2,6096 |2,7851 |[0,9689 |2,5895 |2,6035 HCN26-1-1 515 os 37 69 47 12 1 15 95 oa amostra À : : À À À À Ú - À 2 0,073 [3,056 [3,163 |3,1398 3,144 |2,9449 |3,1544 |1,7685 2,9685 HCN27-1-1 3,1299 89 38 49 52 19 98 76 39 81 amostra À : : : À À À À À À HCN28-1-1 2 0,151 [2,997 [2,745 |3,0496 [3,051 |2,7202 [3,0219 [0,4943 [2,0290 [2,3235 8 23 77 5 os 79 79 os os 45 amostra 0,107 ' ' ' ' ' ' ' ' 2 2,961 |4 2,9990 [3,056 |2,9352 |3,0200 |1,0067 | 1,8669 |2,4375 HCN29-1-1 471 28 69 85 67 39 4 52 98 amostra À : : : : À : À À À HCN30-1-1 3 0,285 [3,123 [2,804 |3,2858 3,333 |3,2933 /3,3103 /2,8746 3,2207 3,1013 63 36 72 o7 os 34 67 39 83 4 amostra À : : : À À : À Ú À HCN31-1-1 2 0,224 [3,155 [3,268 |3,2805 3,330 |2,8637 [3,0102 [0,9196 |1,8274 [2,5836 87 23 84 36 76 42 1 98 89 46 amostra > 0,139 |- - - - - - - - - HCN32-1-1 53 2,966 [3,083 |3,0349 [3,069 |2,9175 /2,9989 |0,2713 |2,4929 |2,2021

CTT FFFFFFFFF amostra À : : : À À À Ú À À HCN33-1-1 3 0,014 [3,057 [3,181 |3,1299 [3,171 |3,0895 /3,1508 |[1,4729 [2,8143 /2,5110 28 91 53 82 os 88 58 88 o7 oa amostra 0,266 || : : : À : À : À 2 2,815 [2,886 |2,8777 2,892 |2,8708 |2,8795 |2,8639 |[2,8884 |2,7207 HCN34-1-1 069 86 62 75 02 26 3 87 12 77 amostra À : ' : : À : : : À HCN35-1-1 3 0,235 [3,083 [3,129 |3,1843 [3,226 |2,9001 [3,1843 |1,9366 [3,0996 [2,5847 65 38 o1 o1 56 32 o1 86 42 65 amostra 0,043 : ' : : Ú : À : À 3 2,923 [3,008 |2,9763 3,002 |2,7758 |2,9599 [2,3157 [2,9819 |2,3746 HCN36-1-1 641 95 os 34 14 83 43 6 38 22 amostra À . ' . . . . : . À HON37-4 2 0,137 [3,030 [3,112 |3,0995 [3,121 |3,0429 [3,0910 |1,1878 [3,1277 |2,5856 81 55 69 5 68 99 o7 28 71 8 [Tabela 13-4] amostra 0,195 || . . . . . . . : 3 2,783 [2,848 |2,8230 [2,848 |2,7754 |2,8259 |2,6074 |2,8395 | 2,4934 HCN38-1-1 556 52 89 24 89 97 88 24 85 1 amostra À : ' . ' : . Ú À : HONS9-11 2 0,147 [2,994 [3,103 |3,0352 3,081 |1,8247 |3,0462 |0,9499 |1,4730 |2,7159 E os 23 99 EX) 79 44 23 6 91 amostra 0,051 | . . . . . : : : 3 2,925 [3,049 |2,9878 3,025 |2,6096 |2,9640 |1,8370 |1,9985 [2,3606 HCN40-1-1 183 os o1 44 53 75 56 83 7 2 amostra À Ú ' Ú ' Ú Ú : ; B HCN41-1- 2 0,146 [2,942 [3,032 |2,9781/3,015 |2,5388 |2,9867 |[1,3163 |1,5507 [2,3209 os 44 54 82 97 49 82 27 78 66 amostra 4 - - - - - - - - - - HCN42-1-1 0,338 [2,256 [2,817 |3,2405 3,275 |2,1966 |3,2651 |[1,7720 [2,9330 |2,7656 amostra 0,020 À : À : À À À À : 3 2,924 [3,022 |2,9919 2,988 |2,3655 |2,9279 |0,6577 |3,0117 |2,4533 HCN43-1-1 841 88 os 98 38 35 99 29 98 21 amostra À : : : : À À : À : HCN44-1-1 2 0,183 [2,978 [2,643 |3,0241 [3,073 |2,2859 |3,0325 |[1,5015 |0,9725 |2,4238 87 24 1 02 os 43 97 28 43 86 amostra À . . . . . . Ú : . HCN45-1-1 2 0,050 [2,974 [3,046 |3,0380 [3,057 |2,6137 |3,0190 [0,8778 |1,9657 [2,2290 42 86 82 87 98 42 64 9 1 13 amostra 0,273 : ' Ú ' Ú Ú À : : 3 2,776 [2,863 |2,8060 [2,866 |2,6914 2,8207 [0,9411 [2,2888 [2,2558 HCN46-1-1 031 9 5 71 51 22 49 7 71 61 amostra À . . . . . . Ú À . HON47-41 3 0,034 |2,930 [3,044 |3,0074 [3,036 |2,4378 2,9860 |0,8637 |0,8883 |2,3276 o1 69 22 3 35 82 67 59 51 1 amostra 0,396 | ' : ' . . . . : 3 2,630 [2,689 |2,6815 2,661 |2,2808 2,6325 |2,6734 |2,6911 |[1,9817 HCN48-1-1 64 o8 8 31 51 68 os 13 98 43 amostra 0,108 || . . . . . : Ú . 3 2,897 [2,977 |2,8661 [2,955 |2,5537 |2,9226 |1,5528 | 1,3817 |2,2994 HCN49-1-1 916 02 39 9 18 38 1 79 82 2 amostra 0,251 || . . . . . B . . 3 2,795 [2,877 |2,8341 [2,864 |2,6179/2,8043 |0,5213 |2,8603 |2,1290 HCN50-1-1 777 65 79 o9 65 26 24 88 54 16 amostra 0,164 . . . . . . À : . 3 2,805 [2,914 |2,8542 [2,895 |2,3923 |2,8495 |0,7766 | 1,6414 |2,3128 HCN51-1-1 187 19 94 4 04 31 45 45 3 78 amostra À . . . . . . . . . HCN52-1-1 2 0,026 [3,001 [3,010 |3,0758/3,101 |2,8665 |3,0566 [3,0758 [3,1113 [2,1908 68 29 22 5 52 13 02 5 78 44 amostra 4 | F - - - - - F - -

HCN53-1-1 0,099 [3,031 [3,163 |3,1162/3,071 |2,9089 |3,0962 |[1,2291 [3,0555 |2,2509 48 74 4 16 35 14 45 12 18 73 amostra 0,375 . . . . . . . . . 2 2,706 [2,778 |2,7227 2,774 |2,4557 [2,7292 |2,7357 |2,1760 |2,3496 HCN54-1-1 283 34 89 29 52 66 o1 72 99 43 amostra 0,021 ' À ' À À À À Ú 2 -2,997 [3,135 |3,0789 [3,119 |2,8741/3,0867 |[0,8254 |3,0947 |2,5821 HCN55-1-1 738 3 61 45 97 63 61 os os amostra À . . . . . . : . . HCN56-1-1 3 0,098 [3,017 [3,165 |3,1094 3,120 |2,8757 |3,1058 [1,0927 [3,1536 |2,5429 84 72 42 38 59 58 9 o3 95 amostra 0,037 : ' . ' Ú . : Ú : 2 2,972 [3,047 |[3,0498 [3,041 |2,8691 |[3,0625 |1,2902 |2,7064 |2,7873 HCN57-1-1 647 28 os 37 56 3 48 17 o3 55 amostra 0,205 Ú , À , À À Ú À Ú 2 2,811 [2,899 |2,8636 2,880 |2,5613 2,8325 [2,8714 |2,8794 [2,0570 HCN58-1-1 125 52 94 76 76 59 97 78 22 53 amostra 55- À Ú : À : À À Ú À Ú ” 5 0,100 [1,924 [2,910 |0,9392 3,183 |3,0095 |3,1527 |[1,4363 |2,5503 |2,7273 62 13 36 63 o4 73 67 7 42 47 amostra 55- À Ú : Ú : À À : À : 21 0,598 [1,887 [3,196 |1,2069 3,333 |3,2283 |3,2965 /3,0876 |[3,2308 [3,3109 96 35 81 13 57 o 53 69 24 82 amostra 56- 0,217 ' ' ' ' ' ' ' ' ' ” 4 18 2,694 [2,910 |0,3470 [2,902 |2,7214 2,8765 |2,8690 |2,9076 |2,8350 97 92 92 86 81 33 84 79 o4 amostra 56- À : : À : : : : À : 2 0,510 [2,813 [3,103 [0,3130 3,260 |3,0830 |3,2581 [3,2623 |[3,1476 |3,0492 19 62 85 26 97 3 98 67 73 64 amostra 57- À : : À : : À B À : H4 4 0,390 [2,773 [3,249 |3,3249 3,343 |3,2482 |3,2112 [1,9067 |[3,2796 |3,0406 81 39 59 13 4 os 23 87 49 53 amostra 57- À : : : : : À : À : ” 0,347 [2,608 [3,226 |3,3422 [3,348 |3,1882 |2,9990 [2,5828 |[3,1903 |2,9842 34 66 83 78 33 78 36 o6 92 9 amostra 58- À : : À : À À À À : "” 4 0,429 [3,140 [3,266 |3,0886 3,232 |2,6243 |3,1943 /0,6798 [3,1853 /2,5145 77 61 31 88 38 25 51 78 43 2 amostra 58- À . . : . . . . . . 21 0,793 [2,853 [2,894 |1,9276/3,099 |3,1767 |3,2935 |2,7743 |[3,2751 [3,2962 o1 74 55 61 1 44 64 2 93 54 amostra 59- 0,512 | ' Ú ' Ú Ú : À : "1 4 759 2,557 [2,701 |2,6788 2,314 |2,6771 [2,6788 |[2,4684 |2,6980 |2,4449 79 61 82 57 83 82 22 33 41 amostra 59- À : : : : . . : õ : 21 0,187 [3,010 [3,123 |1,2675 3,024 |3,0597 /3,1711 [3,1633/3,1920 |2,8494 2 49 68 2 81 55 58 89 34 62 amostra 60- À : : : : . . : À : 4 4 0,540 [2,814 [3,136 |1,4328 3,305 |3,2795/3,2939 [3,2764 [2,8851 |3,2377 7 u 6 93 42 79 24 54 o2 59 amostra 60- À À : À : À À : À : 21 0,528 [2,315 [3,127 |0,8996 3,207 |3,0398 |3,1846 [3,1920 [2,5658 |3,1390 71 31 43 3 18 19 E) 45 41 84 amostra 40- À : : À : - À Ú À : 2 0,154 [3,061 [2,699 |3,1059 3,138 2,3906 |1,0156 | 2,9440 |2,0910 1-2 2,8809 55 86 77 88 53 1 3 6 37 amostra 40- À : : À : À À À À :

2.9 5 0,422 [3,117 [2,538 |3,2713/3,303 |3,1617 |3,2685 [2,3758 |[3,2088 |3,2442 n 29 18 54 32 43 61 61 33 o2 amostra 52- À : : À : À À Ú À : 12 3 0,130 [3,075 [2,667 |3,2107 3,254 |2,9467 |2,6381 |[1,8408 |[2,9164 |2,6775 43 88 46 62 44 9 63 36 86 52 amostra 52- 5 - - - - - - - - - - 2-2 0,434 [2,608 [2,684 |1,5725/ 2,876 |3,2613|3,1742 /3,0208 |2,9164 |[3,1216

COLTFFFFFEFEFFEF amostra 56- 0,118 À ' À ' À À À À Ú 12 3 859 2,907 [2,718 |2,8771 [2,394 |2,7759 /2,9935 |2,3625 |2,7649 |2,8655 49 58 os 16 EX) 23 25 74 26 amostra 56- 0,470 À ' À ' À - À À Ú 4 2,612 [2,691 |2,6772 2,691 |2,5662 2,6446 |2,6772 |2,4142 2-2 819 2,6632 81 69 1 69 9 44 1 93 amostra 59- À . . . . - - : . . 0,176 [3,032 [2,938 |3,1750 2,563 1,7513 [3,1655 |2,9756 1-2 3,1609 [3,1609 82 87 74 89 18 9 79 o1 amostra 59- 0,118 : ' : ' Ú . : : : 22 7 696 2,955 [2,912 |1,5485/2,515 |2,9513/3,0796 |[1,6062 |2,8121 [2,8656 14 71 75 23 36 55 25 16 81 amostra 72- À : ' : ' . . . . . 14 2 0,507 |2,726 [3,373 |1,1587 3,314 |3,2496 3,3381 |[3,0687 [3,3578 |3,1525 45 53 3 67 66 74 38 98 82 02 amostra 72- À : ' À ' . . . . . 21 0,598 [2,605 [3,374 |0,9309 3,040 |3,1049 |3,2860 [2,9325 |3,3234 |3,2069 5 99 46 7 1 66 83 24 96 02 amostra 72- À . ' . ' . . . . . 12 2 0,211 [3,054 [3,142 |2,2157 3,197 |3,1453 |3,1423 [3,1625 |[3,2042 |[2,3099 41 61 32 64 28 63 15 18 29 85 amostra 72- À . . : . . . . . .

2.9 0,549 [2,896 [3,014 |1,5662 2,996 |3,2746 |3,3100 [2,5366 |3,0848 |3,0644 25 65 95 76 64 64 71 96 81 os amostra 73- 0,257 . . . . . . . . . 1H 5 ” 2,646 [2,750 |2,7242 [2,740 |2,7226 /2,7087 |2,6892 |2,7387 |2,2969 4 73 42 91 os 67 78 19 amostra 73- À . . : . . . . . . 21 7 0,212 [2,957 [2,211 |1,2461 2,574 |3,0433 |3,0787 [2,9368 |2,3477 |2,7839 1 31 8 52 3 02 74 47 52 49 amostra 73-)4 |- F - - - - - F - -

1-2 0,133 [3,070 [3,132 |3,1802 3,218 |3,0657 |2,5286 [2,2170 [2,8279 |[2,5833 34 62 48 89 22 38 58 16 31 92 amostra 73- 0,392 || . : . . . . . .

2.9 7 141 2,658 [2,800 |1,0466 2,731 |2,7070 |2,7705 |2,7610 |2,0696 |2,6713 E 15 1 o2 o1 26 84 51 94 amostra 73- À : : : : À À : À : 18 4 0,431 [3,001 [3,187 |1,6787 3,198 |2,94143,1876 |2,1548 |2,6759 |[2,7615 81 95 64 86 69 89 36 19 39 15 amostra 73- 0,377 | ' À ' À À : À : 23 5 782 2,448 [2,491 |2,4798 2,479 |2,3082 |2,4470 |1,5603 |[2,4813|2,1685 4 87 45 84 23 25 92 3 61 amostra 74- À . ' . ' Ú Ú : Ú : "” 4 0,365 [3,054 [3,088 |3,1055/3,095 |2,2170 |2,9163 |1,7697 |2,7937 |2,5423 27 94 52 98 7 53 78 69 82 amostra 74- À . ' . ' . . : À : 21 0,582 [3,151 [3,230 |3,2236 2,974 |3,0023/3,0813 |1,6348 |2,7862 |2,5869 41 48 02 44 32 o2 31 58 73 2 amostra 74- À À : À : À À À À Ú 1-2 2 0,070 [2,856 [2,945 |2,8864 2,913 |2,6770 |2,2025 |[2,4449 |2,9203 [2,3921 67 27 37 81 59 74 36 92 os 82 amostra 74- À : : À : À À À À :

2.9 3 0,268 [3,011 [2,996 |3,0866 3,079 |2,7570 |2,8795 |2,5764 |[3,0682 [2,4105 95 72 21 38 99 77 12 o7 66 o9 amostra 77- À : À : À À Ú À : ” 4 -0,422 [2,874 [3,025 |0,4022 [3,032 |2,7685 |3,1575 |1,7286 |[2,6972 |[2,7413 48 24 92 98 87 94 45 64 23 amostra 77- À : : À : : À Ú À : 2 2 0,384 [2,817 [3,040 |0,0793/3,000 |3,0303 |3,1583 |1,4116 [2,8342 [2,9155 67 34 71 4 62 37 94 83 12 35 amostra 77- À : : À : À À : À : a 6 0,291 [2,866 [3,026 |0,2607 |2,746 |2,9895 |3,1664 [2,4560 [3,2110 |3,1153 o7 18 27 8 36 24 97 29 79 44 amostra 77- À : : À : : À : À : ” 0,671 [2,216 [3,043 |0,0054 3,107 |3,0383 |3,1520 [2,5670 |2,7904 |3,0026 24 67 5 17 49 o7 44 71 33 73 amostra 84- À Ú : - : À À : À : "” 3 0,270 [1,871 [3,045 0,3232 2,970 |2,7927 |3,1149 [3,0736 [3,0062 |2,9504 28 28 63 os 82 41 64 21 66 amostra 84- 0,015 : . . . . . . . 21 148 1,652 [2,739 2,544 |2,8858 |2,9752 [2,9438 [2,9626 [2,8195 18 19 55 14 8 o6 91 27 amostra 84- À : ' À ' . . . . . 34 0,508 [1,826 [3,292 |0,3453 2,962 |3,2419 /3,3094 |3,1404 |3,2359 |3,0148 os 66 92 23 46 13 62 56 39 os amostra 84- À Ú B À : À À À À Ú 4 7 0,468 [1,990 [3,274 |0,3439 3,235 |3,2056 3,2962 /3,2643 /3,1881 |3,1968 62 EX) 69 19 81 9 12 23 41 27 amostra 85- À À : Ú : À À À À Ú "” 4 0,042 [2,456 [2,736 |1,4634 3,051 |2,8627 |3,0328 |3,0195 |3,0434 |2,9120 18 62 32 64 19 79 38 65 5 37 amostra 85- À Ú : À : À À : À : 21 7 0,499 [1,637 [2,806 |0,3658 3,270 |3,1591 |3,1423 /3,3083 |[3,1693 |3,3097 22 61 74 o1 17 43 04 12 62 38 amostra 86- À À : À : À À : À : ” 5 0,050 [2,026 [2,968 |0,7365/2,981 |3,1558 |3,2230 [3,1700 |2,8606 |2,9394 os 78 11 39 5 o 49 89 13 os amostra 86- À Ú : À : À - À À : 21 0,331 [1,526 [3,261 |0,4835/3,114 |3,0425 33115 2,7612 |3,2598 |3,0571 64 4 13 81 82 47 ' 52 79 66 amostra 87- 0171 | : : : : : - : B 4 2,843 [2,575 |2,9176 2,905 |2,0152 /2,9176 2,9148 |1,9005 11 892 2,8883 os 2 19 38 19 19 7 86 amostra 87- 7 - - - 0,1279|- - - - - - 21 0,174 |1,756 [3,106 |372 3,152 |2,9004 |3,1690 [2,6466 [2,8585 |3,1083

LEE FLTEFFFrER, amostra 87- 0,142 À ' À ' À À À À Ú a 2 917 2,715 [2,909 |2,8438 [2,894 |2,6062 2,8906 |2,2292 |2,9050 |2,3826 o7 48 os 96 41 9 26 72 32 amostra 88- À : : : : À À : À : 14 4 [03810 2,784 3,181 |1,4642 3,025 |2,8426 |3,1942 [2,6803 |2,9756 |2,2290 71 18 os 23 39 91 77 se 57 os amostra 88- À : . À . . . . . . 21 0,250 [1,887 [3,133 |0,5468 3,150 |3,0612/3,1464 |3,1464 |3,1529 |2,9847 6 31 783 o2 32 79 33 33 24 54 amostra 89- 0,027 Ú ' Ú ' Ú Ú ; Ú ' ” 4 197 2,903 [3,015 |2,9570 [3,004 |2,2746 /2,9810 |1,2175 |3,0020 |2,4470 42 19 17 94 96 02 27 54 32 amostra 89- 0,234 | ' Ú Ú Ú : À : 21 5 646 2,749 [2,836 |2,8100 | 4 2,7640 [2,8377 |2,7974 |2,8473 |1,6104 33 36 31 18 19 42 55 os amostra 89- 0,433 . 0,2451 | . . - . . -1,886 [2,667 2,642 [2,5560 |2,6315 2,6574 [2,6137 3-1 343 579 1,6071 93 85 94 35 28 5 amostra 89- À : ' À ' . . . . . ” 12 0,632 [1,943 [3,220 [0,2412|3,137 |3,2131/3,3196 /3,3016 |3,2193 |3,1404 17 11 38 87 o4 28 41 5 33 99 amostra 90- À . . À . . . . . . H 5 0,046 [2,810 [3,139 [0,3582 3,135 |3,0334 |3,1324 |3,1126 |2,4930 [3,0719 27 26 69 25 31 87 12 68 44 o2 amostra 90- 0,028 | . 0,0125| . . . . . 1,920 [3,089 3,047 [2,9432 |3,0568 |2,9432 |2,5388 [3,0318 21 282 353 2 14 48 22 53 22 72 79 amostra 91- À : . À . . . . . . 1H 4 0,246 |1,456 [3,081 [0,2582 3,141 |3,0826 /3,1636 /3,0993 |2,8038 |2,9861 o3 95 43 92 6 o1 64 53 47 61 amostra 91-|6 |- F - - - - - F - -

2-1 0,244 [1,511 [3,132 |0,3678 3,089 |3,1060 |3,1768 /2,6492 |[3,1412 |2,9346 24 os 5 37 98 29 85 22 78 33 amostra 88- À . . À . . . : . . 12 3 0,064 |2,264 [3,114 |0,4919/3,089 |3,0104 |3,1212 /1,8668 /3,1015 /2,9867 o7 4 1 54 44 78 12 96 95 os amostra 88- À : : À : : À : À :

2.9 3 0,536 [1,294 [3,231 |0,2067 3,184 |3,1639|3,1333/3,1531 [3,2602 [3,1499 19 25 24 26 os 26 os 22 89 32 [Tabela 13-5] Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon ella omon |Rothia myc jella ella ella acteri . mucila | ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico! |um . Ú gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena amostra 1- B : B Ú : : : : ; H 5 1,5246 |2,0082 [1,990 /[1,7101 /2,0187|-4 1,9947 |1,9804 | 1,905 [1,723 9 73 269 25 39 o1 6 43 038 amostra 1- ' : : : : : : : À : 21 7 2,4012/2,8298 2,805 /2,1056 |2,8629 |2,8487 [1,3106 |2,6194 [2,772 [2,765 94 28 806 69 64 59 6 5 093 832 amostra 2- ' : : : : : : : À : "1 5 2,7744 2,8120 [2,809 |2,8032 |2,8235 |2,8007 |1,9558 |2,6883 [2,812 [2,807 6 38 513 64 86 89 68 7 038 002 amostra 2- ' : : : : : À : : : 21 2,6747 [3,2791 [3,220 |3,2802 |3,3041 | 3,3066 | 2,4080 |3,1989 [3,229 [3,810 48 18 692 78 46 o7 12 7 9 324 amostra 3- . . . . . . . . . . 4 4 2,1065|/3,1179 [3,129 /2,8071 |3,1110 [3,1370|2,1116 [3,0191 [2,619 [2,776 49 56 79 14 o7 49 97 8 571 277 amostra 3- 1º - - - - - - - - - - 2-1 1,8178|3,1170 [3,1121 |3,0854 |3,1458 | 3,1484 [2,5910 [3,0415 [3,010 [3,130

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia . myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena corLFFE FF FF EO, amostra 4- . . . . . . . . . . "” 5 2,5884 [3,1997 [3,203 |3,0667 |3,2155]|3,1855|/2,5967 |3,1064 [3,180 |3,2118 87 21 325 81 6 97 65 2 989 53 amostra 4- ' . . : . . Ú : . : 21 7 2,7439 [3,0921 [3,078 |2,7422 |3,1130 |3,0746 |2,9685 |3,0649 [3,020 |3,1130 75 65 337 59 99 41 os 4 5 99 amostra 5- B B : : B : ; : B "” 4 1,4340 [1,4694 [1,462 |1,4560 |1,4599|-4 1,4640 [1,4653 | 1,468 |1,449 6 51 676 1o5 95 23 7 088 j434 amostra 5- ; ; ; Ú ; ; Ú i Ú ; 21 1,1715/1,4763 [1,471 |1,4005 |1,4864 | 1,4839 | 1,4603 [0,8225 [1,457 [1,396 46 26 334 jo4 85 23 o7 6 894 308 amostra 6- ' À À À À À | À À Ú ” 4 2,2392 [3,2468 [3,246 |3,2153 |3,2708|3,2274 |1,9826 |2,9576 [3,215 [3,273 45 83 883 |66 83 76 87 9 366 358 amostra 6- ' À À À À À À À À Ú 21 2,4807 [3,2267 [3,200 |3,1758 |3,2719]|3,2587 |2,2841 [3,0187 [3,182 |3,269 88 27 009 19 95 42 52 7 7387 555 amostra 7- ' À À À À À ' À À Ú ” 4 2,5092 [2,6051 [2,608 |2,4722 |2,6331|2,6176|1,5712/2,5776 [2,611 2,601 oa 31 848 45 59 47 04 4 344 445 amostra 7- : : : : : : : : À : 21 7 2,7445 [3,1005 [3,077 |2,9706 |3,0939 |3,1186 |3,0137 |2,9665 [2,995 /3,059 78 5 943 67 7 o2 02 9 105 459 amostra 8- 5 - - - - - - - - - - 111 1,8479 |2,6373 [2,629 |2,4409 |2,6463 |2,6412/1,6563 /2,3934 [2,639 |2,560

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia . myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena LoL Fes amostra 8- : . . . . . . . . . 21 1,7279|3,1759 [3,154 /2,5131 /3,2031|3,1619/2,0219 /2,8463 [2,845 [3,161 38 95 597 42 48 67 5 2 807 967 amostra 9- : . . . . . . . . . 14 5 1,9129/3,0222 [3,023 /3,0188 3,0468 |3,0396 |3,0054 |2,8257 [3,032 |3,013 53 24 365 17 46 68 54 2 606 199 amostra 9- : : : : : : : õ : 21 2,1885/3,2747 [3,216 |2,6724 [3,3084 |3,2566 | 2,9920 [3,1823 [3,259 |3,3805 28 93 366 43 94 47 25 1 992 998 amostra - ; ; Ú ; ; Ú : Ú ; 1,5270 [1,524 |1,5133 /1,5326|1,5312]|1,5133/1,5160 [1,512 [1,504 10-11 1,4603 49 283 |o1 35 32 1 9 048 jo79 amostra ' À À À À À À À À Ú 10-21 2,0752 [3,2457 [3,223 |2,5608 |3,2703|3,2653 |/3,0090 |3,1793 [3,249 [3,276 o1 54 597 89 66 31 86 2 358 744 amostra 11- ; À À À À À À i À Ú ” 4 1,5683 |2,8864 [2,886 /2,4738 2,9025|2,8141/2,0971 [2,6238 2,895 |2,886 57 96 496 5 33 47 2 5 779 496 amostra 11- ' À À ' À À ' À À À 21 Eb! 2,8962 [3,2268 [3,223 |1,7129 |3,2900 |3,0449 |1,1415/3,1387 [2,789 |3,266 59 6 343 71 95 23 33 5 565 256 amostra : : : : : : : : À : 12-11 5 2,3648 [3,0346 [3,038 |3,0375 |3,0520 |3,0318|3,0165 /3,0017 [3,030 [3,034 31 51 944 o8 83 12 24 5 4 651 amostra - - - - , - - - - 12-21 2,7439 [3,1152 [3,064 |2,5058 3,0377 | 2,7465 |3,0959 [2,822

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia .

myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena co FrFFrFE FT Fe amostra . . . . . . . . . . 13414 4 2,7477 [2,7648 2,781 [2,7715/2,7729|2,7925 |2,7154 |2,4746 [2,781 [2,727 57 42 233 97 6 14 81 7 233 613 amostra . . . . . . . . . . 1321 7 2,3280 [3,2643 [3,276 |3,2767 [3,2935 |3,1942 |3,2369 [3,1074 [3,257 |3,292 41 33 778 78 os 43 95 7 034 199 amostra : : : : : : : À : 1411 4 2,3016 |2,7650 |2,7911 [2,7858 |2,7979 [2,6761 |2,7831 [2,4099 [2,780 [2,005 92 93 84 39 6 os E 7 559 |48 amostra : Ú À À À À Ú : À Ú 1491 7 2,9896 [3,2442 [3,233 |3,0729 3,2886|3,1814|1,5481 [2,5347 [2,835 |2,980 17 493 178 36 26 o3 6 317 |975 amostra ' À À À À À | À À Ú 1544 5 2,7574/3,1225 3,099 |3,1176 |3,1455]3,1364|1,9118 /2,9133 [2,900 [3,131 3 53 531 o4 5 62 72 3 455 352 amostra ' À À À À À ' À À Ú 15-24 3,1693 [3,2033 [3,158 |3,2261 |3,2401 |3,2046 | 1,4273 |3,1574 [2,942 |3,233 98 54 644 82 92 64 67 7 02 13 amostra ; À À À À À À À À À 16:14 4 1,6286 |3,0801 [3,088 /2,8893 /3,0898 |3,0815 2,9906 [2,8273 [2,991 [3,073 16 76 423 62 12 4 81 3 79 422 amostra : : : Ú : : Ú : À : 1621 2,2691 [3,2438 [3,133 |1,8342 |3,2319]|3,1900 | 1,8464 |3,2408 [3,155 [3,231 66 64 882 59 64 39 67 6 481 964 amostra 5 - - - - , - - - - 17-11 2,5579 [3,38543 [3,350 |3,1119 3,2707 | 2,3650 [2,9621 [3,019

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia .

myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena coOrFF FOFO amostra . . . . . . . . . . 17-21 2,6647 [3,3634 [3,368 |3,1748 |3,3343|3,2769|/2,6265 |3,3092 [3,345 [3,855 81 88 768 95 13 35 98 8 497 686 amostra . . . . . . : . . . 1811 4 2,5364 [3,2669 [3,276 |3,2709 3,3214]|3,1946 |1,4397 [2,0907 [3,287 |3,296 o7 99 282 54 44 51 71 3 14 869 amostra : : : : : : : õ : 1821 2,3202/3,2678 3,185 /2,9436 |3,3093 |2,7675 |1,6395 |2,9761 [3,199 |3,195 57 48 161 |85 73 294 68 6 584 jo95 amostra : Ú À À À À À : À Ú 19:14 4 2,4693 |3,1611 [3,1611 [3,1178 |3,1741[3,0964 | 2,5468 [2,8285 [3,137 |3,175 69 61 61 31 69 57 17 6 605 |j639 amostra ' À À 2,2537 |4 2,8816 4 2,5880 |-4 4 4 19-2-1 E 3 12 amostra ' À À À À À À i Ú Ú 20-11 4 2,7944 [3,0388 [3,099 |3,0968 |3,1283|2,8235 |2,3080 |2,4629 | 1,528 |3,032 58 73 631 65 o8 88 46 2 179 882 amostra ' À À À À À À - À À 7 2,8852 [3,2019|3,120 |2,5357 |3,2227 |3,1712/2,6812 2,338 |3,227 20-2-1 2,8517 77 46 358 4 o1 11 44 821 281 amostra 2- : : : Ú : : 12 4 2,4547 |2,4576 |-4 4 2,4693 |-4 1,6179 |2.4547 |-4 2,467 95 61 21 38 9- 846 amostra 2- - - a - - a - - - - 2-2 2,8442 [2,8488 2,8457 |2,8536 2,3834 [2,8411 [2,853 |2,853

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia . myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena CLIFFS Free FF amostra 3- . . . . . . . . . . 1º 3 2,2474 2,9876 2,923 |2,9933 |3,0064 |2,9948 |2,2433 |[2,6817 [2,984 /3,002 84 372 79 75 15 53 3 864 066 amostra 3- . . . . . . . . . .

2.0 4 2,0496 |2,6681 [2,649 /2,6650 |2,6650 |2,6775 |2,6604 |2,3885 [2,677 [2,657 98 2 895 28 28 27 33 5 527 396 amostra 7- : Ú À À À : Ú 1º 3 2,4346 [2,4687 |-4 2,4714 [2,4358 | -4 2,4687 |2,0050 |4 2,388 23 77 17 41 77 2 5 amostra 7- ; À À Ú À À Ú - À Ú 22 4 1,7224 |2,7155 |[2,7110 |[1,9507 |2,6407 |2,6891 |[1,8531 27007 2,649 |2,682 42 |78 62 4 o6 |6 o6 714. joss amostra 9- ; À À À À À À À À Ú 1 2 1,3766 | 2,5255 [2,5211 |2,5285 | 2,5435 | 2,5435 |2,5182 [2,2903 [2,531 [2,543 96 5 56 o4 85 85 51 6 479 585 amostra 9- ; À À À À À À i À Ú

2.9 3 1,1942 |2,3209 [2,320 |2,3195 |2,3043 |2,3224 [2,3002 [2,2728 [2,326 |2,302 88 92 992 79 39 o8 74 4 687 98 amostra ; ' | ' ' | ' | Ú Ú 10-1-2 2 1,8704 |1,9293 [1,927 /1,9172|1,9334|1,9201/1,9161 [1,5603 [1,935 [1,925 3 71 039 66 82 18 31 1 256 878 amostra ; : : - : À : À : 3 1,4252 [2,3969 [2,391 4 2,3903 |2,3750 [2,1769 [2,391 [2,405 10-2-2 2,3829 os 92 906 92 48 9 906 776 amostra 11- 3 - - - - , - - - - - 1-2 2,0202 |2,6221 [2,610 [2,2095 2,6041 [1,6636 |2,4846 [2,615 [2,618

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia .

myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena cor E FF FF amostra 11- . . . . . . . . .

2.2 2,0372 |-4 2,680 [2,1511 [2,6831 |2,63292,4729 |2,4547 |2,592 |2,695 72 421 oa o1 96 73 1 967 374 amostra . . . . . . . . . . 1242 3 2,3658 2,8368 2,787 |2,8423 2,8404 |2,8423 |2,4978 [2,8224 [2,850 |2,830 3 25 705 34 9 34 17 7 731 485 amostra : : : : : : À :

12.29 2 2,9457 [2,9413 [2,941 /2,9173 |2,9483|-4 1,8556 [2,8547 [2,927 |2,768 24 os 306 63 97 53 2 463 |155 amostra : À À À À : À Ú 1312 3 2,1491 | 4 2,143 |2,1470 /2,1439 2,1597 [2,1336 2,153 [2,144 22 909 29 oa 41 7 339 946 amostra ; À À À À À À À À Ú 13-2.2 3 1,3698 |2,4631 [2,458 |2,4577 |2,4653 |2,4741 /2,0401 [2,4514 [2,466 [2,475 6 59 849 78 31 27 79 1 42 239 amostra ' À À À ' | À Ú 14-12 3 2,4887 [2,5008 [2,502 |2,4959 |-4 1,5191 |[1,8520 [2,494 2,002 48 46 075 67 38 2 755 575 amostra ' À À À À À ' À À À 14-2.2 3 2,2618/3,1632 3,179 |3,1600 |3,1966|3,0546 | 1,2196 [2,9611 [3,161 |[3,188 8 24 614 19 48 76 68 2 085 616 amostra : : : : : : À - À : 1512 3 2,9733 [2,9782 2,988 |2,9870 |2,9961 |2,9745 |2,9720 21321 2,992 2,992 o6 7 37 95 os 42 74 219 219 amostra - - - - - - - - - - 15-2-2 2,3845 [2,6983 [3,121 |3,0793 |3,1626|3,1601 |0,8847 |3,0059 [3,057 [3,139

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia .

myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena LoL Er Es ee amostra : . . . . . . . . 1612 2 1,2284 |2,1886 [2,177 /2,1790 [2,1777|4 2,1709 |[2,1845 [2,173 [2,179 59 72 712 67 12 99 3 672 067 amostra . . . . . À . . .

16.22 5 2,4992 |[2,8529 [2,854 /2,2917 |2,8674|-4 0,9847 |2,7709 [2,793 [2,846 99 904 62 93 7 8 584 397 amostra B : : : : : : À : 1812 3 1,4143[2,5252 2,513 |2,4579 /2,5317|2,5317 |2,5036 |2,0537 [2,372 [2,301 88 19 672 o1 7 7 59 7 272 554 amostra : À À À À : À Ú 1822 3 2,5992 |-4 2,961 |2,9367 [2,9539 2,9415 /2,7076 [2,929 [2,916 54 537 13 4 66 E 535 |675 amostra ; ' ' ' Ú ' | | Ú ; 19-1-2 2 1,8992 |1,9523 [1,946 |1,9464 |1,9583|1,9613/1,9348 /1,8542 [1,929 |1,944 23 54 446 46 45 71 64 6 187 981 amostra ' À À À À À À i À Ú 19-22 3 2,0347 [2,5194 [2,516 |2,4934 |2,4859 |2,5316/2,5010 |2,4036 [2,488 2,346 84 35 762 22 12 69 63 4 401 033 amostra ' À À À À À À À À Ú 20-1-2 3 2,1539 [2,7408 [2,746 |2,7422 |2,7323|2,6912/2,6595 |2,4369 [2,737 |2,729 1 o6 521 28 73 34 o1 5 977 598 amostra : : : : : : À : À : 20-22 3 2,0314 /3,0510 [3,092 |3,1235 |3,1298|3,1573/0,6220 |2,9862 [3,117 /2,972 22 95 17 49 53 74 48 7 336 797 amostra 3 - - - - - - - - - - 21-11 2,4644 3,1361 [3,299 |2,9457 |3,3183|3,1215/3,3085 |2,0528 [0,628 [3,231

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia .

myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra o melani |as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena LoL E FR amostra . . . . . . : - . .

2,6048 [3,1520 [3,168 |3,1823 |3,1889|3,2106/|1,4314 2,411 [3,171 21-21 2,1181 amostra : . . . . . . . . . 2211 3 1,6576 [2,7759 2,780 /2,7542 |2,7801 |2,7944 |2,7515 /2,5952 [2,632 [2,732 4 51 147 32 47 34 92 4 616 287 amostra : : : : : : : . :

20.91 2,4385/3,1872 3,180 /3,1426 |3,2423|3,1836|1,0327 |3,1470 [3,188 |3,220 27 31 072 78 Es 37 45 4 436 992 amostra ; Ú À À Ú À À : À Ú 2311 3 1,9030 |3,1511 [3,303 /2,9889 |3,3312|3,1656/2,2073 |2,8003 [2,286 2,848 45 os 719 41 41 48 18 2 418 296 amostra ' À À À À À | À À Ú 23-21 2,4395 /3,1969 [3,290 |3,1916 |3,2724|3,2874|1,9541 |2,9903 [2,461 |2,7119 93 77 789 8 44 95 16 1 404 35 amostra ' À À À À À À - À Ú 4 2,5503 [3,0950 [3,099 |3,0717 |3,1271|2,8018/3,0964 2,204 [2,443 24-1-1 2,4664 7 4 277 8 16 o9 47 425 235 amostra ' À À À À À ' À À Ú 24-21 2,3888 [3,1910|3,182 |3,1548 |3,2267|3,2121|1,9852 |3,0408 [2,885 3,204 3 63 015 97 79 38 32 7 486 999 amostra : : : : : : À : À : 25:11 4 2,7255/3,1951 [3,184 |3,1270 |3,2835|3,2850 |2,8019 |2,3523 [3,262 [3,277 02 78 244 os 6 71 39 7 946 57 amostra 7 - - - - - - - - - - 25-21 2,4906 [3,1156 [3,096 |3,1262 |3,1540|3,1371|1,8855/3,0091 [2,708 [3,158

Prevot | Selen Actino | Prevot | Prevot | Prevot | Solob Rothia | Veillon . Jella omon |Rothia .

myc ella ella ella acteri . mucila [ella amostra . melani [as dentoc | es pallen |loesch |histico| |um . f gino —|rogos , . . . noge |sputig |ariosa israelii |s ei a moorei| sa ae nica [Jena EA E e amostra . . . . . . . . . . 2611 4 3,1169 [3,2825 [3,294 |3,0795 |3,2773|3,2208|/3,0519 |2,1259 [3,225 [3,269 71 33 396 53 63 19 31 4 355 721 [Tabela 13-6] amostra À À À À À À À À À À 26:21 2,9806 |3,2508 [3,259 |3,1971|/3,2619/3,1610/3,1124 3,104 |2,7458 /3,2411 66 19 419 os o8 23 os 52 21 94 amostra : : : : : À À : : : 2711 1,8140|3,2400 [3,236 |3,2088 /3,2412|3,2326 3,218 |2,697 |3,1820 [3,2326 47 o1 294 81 43 19 221 71 o9 19 amostra . . . . . . : . . .

27.91 11 2,6606 | 3,2448 [3,235 |3,0839 |3,2895/3,2956 1,344 |3,236 |3,1646/3,2823 1 96 209 41 67 41 974 27 28 88 amostra . . . . . . . . . . 28-11 2,2968/3,1973 3,193 |3,1058|3,2238/3,1199 2,529 |2,621 |3,0989 /3,2161 61 36 671 58 95 99 909 51 56 39 amostra . . . . . . . . . . 28-21 2,7399/3,2009 [3,200 |[3,1271 |3,2305|3,1327 2,065 /2,862 |2,9184/3,2109 o1 29 929 os 77 24 562 43 78 64 amostra : . . . . . . . . . 29-11 3 1,6135|2,9920 [2,987 |3,0056 /3,0211 [3,0117 [2,966 2,529 |2,9920/3,0117 95 74 65 23 E 83 181 52 74 83 amostra : . : . : . : . : 29-21 6 2,9490 [3,2312 [3,193 |3,0459 |3,2669 |3,1556 1,467 /3,186 |3,1982/3,2655 32 47 565 42 63 79 382 63 47 86 amostra À : : À : À Ú : À : ao 4 2,9800 [3,0177 [3,028 |2,9591 |3,0264 |2,9711 [1,803 |2,535 |2,9559 /3,0214 57 43 959 36 41 25 514 73 23 49 amostra À : : À : À Ú : : : 20-21 2,3580 |[3,1921 [3,214 |3,0859 |3,2591 |3,1772/1,240 [3,070 |3,0139/3,2517 68 76 252 96 22 41 742 41 79 98 amostra . . . . . . : . . . 3111 2,7698 |3,0615 [3,267 |2,9109|3,3137 |3,2396 1,017 [2,983 |3,2711 [3,2620 64 1 247 os 26 24 768 41 54 93 amostra . . . . . . : . . . ae 2,2847 [3,1723 [3,273 |3,2200 |3,3194|3,3277 |1,587 |3,210 |3,2244 [3,2992 18 os 659 32 17 69 534 27 41 13 amostra : : : . : : À : : 3211 2,1775/3,0573 [3,072 [3,08983,0739/2,7962/ 0,947 |3,005 |2,9581 [3,0099 61 53 637 |26 36 78 54 51 96 71 amostra À À À À À À Ú : À À

32.91 2,7526 |3,2718 3,243 |[3,28133,2745/3,1560 1,625 |3,030 |3,2189/3,2522 48 92 361 78 82 97 495 |39 56 38 amostra À À : À : À À : À : Hcot-11 3 2,0180|3,2570 [3,224 |3,2615|3,2675/3,2585 2,500 |2,930 |2,4596 /3,1299 77 366 32 43 57 892 24 64 29 amostra À : : À : À : À : Hoot1-2-1 3 2,8217 |3,2469 [3,140 |3,2426 |3,2558 | 4 2,954 |2,773 |2,7955/3,2469 6 95 795 15 89 859 31 61 95 amostra À : : À : Ú : À : HCo1-3-1 2 2,4118 [3,3031 [3,146 |3,3149|3,3316|-4 1,965 3,284 |2,7893 /3,1443 45 57 371 35 7 314 67 78 51 amostra À : : À : À À : Ú : Hco2-11 3 2,3755|3,1426 3,138 |3,1413/3,1517/3,1651 [2,292 |2,858 |1,9882 /2,9783 85 42 793 55 58 22 238 o3 17 o7 amostra > - - - - - - - - - - HC02-2-1 2,3922 |3,0708 [3,074 |3,0601 |3,0983/3,1087 3,061 |2,723 |2,2140 /2,9158

TFF FEFFFEFEF amostra : . . õ . . À : : HCo02-3-1 3 2,3661[3,1181 [3,131 |3,1158 /3,1618/3,1787 1,286 |2,816 |2,6758 /2,8372

86 53 048 49 62 93 239 55 9 16 amostra : : : : . : : : : HCoa-1-1 3 2,1318|2,9897 [2,989 |2,9858 |3,0084 |2,7927 [2,988 [2,981 |2,2177 /2,6456

88 31 731 12 99 21 421 93 46 41 amostra . . . . . . . . . HCco3-2-1 2 2,8752 |/2,8876 2,860 |2,8789 |2,9177 /2,9096 [2,913 |2,758 |2,8991 /2,8739 os 5 727 o1 o3 61 663 63 64 8 amostra . . . . . . . . . HCo3-3-1 3 2,9153/2,9924 [2,962 |2,9834 |3,0360 |3,0403 3,008 2,977 |2,6046 |2,7349

89 o4 355 23 o7 28 247 12 96 77 amostra . . . . . . ; . . HC04-1+1 3 2,7310/3,1769 [3,160 |[3,1769|3,1757 |3,0447 | 1,665 /3,065 |3,1459 |2,7547

37 97 559 97 1 1 451 14 18 49 amostra . . . . . . ; . . HC04-2-1 2 2,2193/2,8200 [3,161 |2,6929 |/3,1935/3,1341 [1,133 |3,032 |2,6245 /3,1574

69 49 492 71 74 36 833 21 9 77 amostra . . . . . . ; . . . HC04-3-1 3 2,4541|3,0906 [3,103 |3,1739/3,2209/3,0883 1,679 |2,602 |2,6420 [3,1767

02 59 485 96 93 67 102 2 26 89 amostra . . . . . . . : . . HGo5-1-1 3 3,1743|3,3021 [3,276 |3,2964 |3,3006 |3,3344 [3,293 |1,715 |2,6474 /3,2895

49 o8 029 86 96 02 702 38 83 59 amostra . . . . . . . . . HGo5-2-1 2 2,9992 |[2,9978 [2,979 |3,0036 |3,0357 |3,0373 [3,014 [2,101 |[3,0171/3,0171

77 22 338 71 42 3 1 87 27 27 amostra . . . . . . . . . HCo5-3-1 3 2,5173/3,1150 [3,082 |3,1123 |[3,1372/3,1546/3,123 |2,448 |3,1315/3,1315

73 14 443 16 19 51 208 04 61 61 amostra — |2 - - - - F - - - - F

HCO06-1-1 2,3978 |2,4723 [3,283 |3,2961 |3,3161/3,3074 1,050 |3,190 |3,2878 /3,1347 13 25 775 64 68 82 834 18 65 48 amostra . . . . . . . . . . HCos.21 2 2,1167 |2,8708 [2,867 |2,8677 2,8788 |2,8836 2,863 |2,474 |2,8772|2,8724 87 57 71 1 26 78 032 5 2 39 amostra À : : : : À À : : : HCo6-3-1 2 2,4800 |[3,0759 [3,257 |3,2978 |3,3439 /3,3008 2,390 |2,376 |3,1694 /3,2815 59 69 523 17 1 44 974 82 99 39 amostra . . . . . . . . . . Hco7-1+4 3 3,0978 |3,1799 [3,175 |3,1961 [3,2077 |3,2010[3,184 |2,546 |3,1912/3,1977 87 65 2385. | 82 75 746 |94 o4 59 amostra . . . . . . . . . . Hco7-2-1 3 2,6338 |2,7293 [2,741 |[2,7322 |2,7470 |2,7545 2,717 [2,051 [2,7054 [2,6987 86 5 049 |46 19 99 959 jo7 9 14 amostra Ú . . . . . . : . . HO07-3-1 3 2,6477 [3,0080 [3,020 [3,0397 |3,0480/3,0397 3,023 |2,588 |3,0397 |3,0332 63 26 435. |4 4 4 593 jo2 4 os amostra À À : À : À Ú : À : Hoos-1-1 3 2,1822|2,9939 [3,219 |3,2814|3,3383/2,8831 [1,197 |2,894 |3,2814/3,1673 04 4 371 2 55 84 277 59 2 63 amostra À À À À À À À : À À HCos-2-1 2 2,9192|2,9240 [2,912 |2,9256 |2,9504 |2,9504 [2,924 |2,163 |2,9337 /2,9354 63 45 969 5 74 74 045 89 68 1 amostra À : : À : À À : À : HC0S-3-1 3 2,4579|3,2078 [3,195 |3,2143 |3,2381 |3,2346 [2,539 |3,167 |3,2143/3,2160 64 33 012 88 45 71 175 48 88 43 amostra À : : : : À : À : Hoog-1-1 3 2,4613/3,0048 |3,1131 [3,1011 [3,1026 |-4 2,989 |2,281 |2,1368 /2,6265 1 71 71 89 69 753 96 88 37 amostra À : : À : À À : Ú : Hco9-2-1 3 2,3751 |2,9540 [2,965 |2,9747 [2,9797 |2,9830 [2,952 |2,570 |1,5769/2,9619 85 66 101 89 15 3 512 37 79 2 amostra À : : : : À À : : : Hco9-3-1 3 2,9876 |3,2009 [3,202 |3,2088 |3,2285/3,2404 3,188 |2,569 |3,1900 /3,1839 85 53 529 92 62 61 543 98 75 8 amostra À : : À : À À : : : HC1o-1+1 2 2,9670 [2,9838 [3,013 |3,0132/3,0319/3,0225/3,005 |2,375 |3,0072 /3,0057 77 36 291 91 78 32 738 o6 38 38 amostra : . . . . . . . . . HC10-21 1 1,9977 [2,0121 [2,018 [2,0203/2,0303 |2,0320 2,007 [2,013 |2,0269 /2,0041 99 44 675 23 46 39 31 77 79 17 amostra . . . . . . . . . . HC10-3-1 3 2,4514/2,7008 [2,702 [2,7118 |2,7134|2,7118 2,690 [2,693 |2,7070 |2,6753 73 67 415 23 EE 23 181 21 93 57 amostra : : : . : õ . . : Ho 3 2,1713/3,1411 [3,159 [3,1716/3,1877/3,1893/3,130 |2,183 |3,1732/3,1607 3 56 192 [46 32 74 971 98 28 29 amostra À À À À À À À : - À 3 2,8978 |2,9058 [2,907 [2,9155|2,8704/2,9305/2,902 |2,182 2,8098 HC11-2-1 1,7882 86 26 431 |49 48 55 632 |85 78 amostra À À À À À À : À À HCH1-81 2 2,5290 |2,5257 [2,582 |2,5339 |2,5323 | 4 2,527 |2,500 |2,5406 /2,5113 28 63 318 73 18 392 49 54 65 amostra À À À À À À À : À À Ho12-1+1 2 2,6122/2,6122 2,617 |2,6188 |2,6340 |2,6289 [2,612 |1,917 |2,6188/2,6138 44 44 188 49 89 5 244 23 49 86 amostra À À À À À À À : À À HG12-2-1 2 2,3419|2,6002 [2,615 |2,6120 [2,6154 |2,6276 2,608 |1,952 |2,5838 /2,6069 88 o9 449 16 49 83 61 o2 8 16 amostra À : : À À À : À : HC12-31 3 2,0956 |3,1341 [3,124 |3,1422 |-4 3,1797 [3,137 [2,083 |3,1588 3,1122 92 61 65 48 4 378 83 9 85 amostra > - - - - - - - - - - HC13-1-1 2,9195/2,9277 [2,969 |2,9737 |2,9845 /2,9876 2,960 |1,961 |2,9304 /2,9662

EFE EF e amostra : . : : . . , ; õ . Heisos |! 2,9429 3,0011 [2,991 |2,9998 |3,0409 |3,0286 3,008 |1,849 |3,0286|3,0153 54 os 063 37 76 26 791 93 26 o3 amostra : : : : : : : : : HC13-3-1 3 2,4635|2,9441 [2,950 |2,9285 |2,9630 |2,9467 [2,933 |2,330 |2,8647 2,9324 21 48 799 9 33 96 714 os 47 27 amostra . . . . . . . . . Het4-1+1 2 2,8574|3,1179 [3,138 |3,1258/3,1478 |/3,1464 |/3,1140 [2,209 |2,1728 /3,1272 61 5 091 94 19 16 31 48 41 33 amostra . . . . . . . . . HC14-21 2 2,7887 [2,7973 [2,792 |2,7900 |2,8085 |2,8149 2,796 2,086 |2,7900 |2,7948 99 26 433 o7 43 o1 098 22 o7 73 amostra . . . . . . . . HC14-31 3 2,6506 | 3,0590 [3,044 |3,0549 |3,0713|-4 3,050 [2,236 |[2,7486 /3,0496 45 12 379 72 63 969 12 13 43 amostra ; . . . - . . . . 3 1,3057 [2,7869 [2,794 |2,7804 2,8041 [2,087 |2,479 |2,7791 [2,7766 HC15-1-1 2,7948 os 28 8 75 69 958 44 95 48 amostra ; . . . . . . . ; . HG15-2-1 2 1,9958 [2,7354 [2,722 [2,7266 2,7475 |2,7281 2,734 [2,731 |1,2620 |2,7252 o4 93 353 89 15 44 013 o7 93 39 amostra : . . . . . . . . HG15-3-1 3 1,8452 [3,3159 [3,270 [3,2989 3,3226 |3,3448 2,702 2,944 |3,2913/3,3186 78 57 466 75 69 75 718 95 55 29 amostra . . . . . . . À . 21-12 3 2,9187 [2,9450 [2,943 |2,6404 |2,9566 |2,9323 2,943 |2,251 |0,7121/2,8964 18 47 621 6 29 76 621 83 o1 42 amostra . . . . . . ; . . 21-22 3,0395 |3,0558 [3,098 |3,1130 [3,1030/3,0959 1,299 |2,634 |3,1116 /3,0767 34 3 758 93 oa 47 709 52 38 64 amostra — |3 - - - - F - - - - F

22-1-2 2,2030 |3,1377 [3,148 |3,1637 /3,1716/3,1362 3,142 |2,881 |3,1289|3,1437 55 6 262 19 58 8 23 99 57 3 amostra . . . . . . . . . .

22.29 5 2,7767 [3,1945 |3,1811 |3,2046 |3,2294 |3,2214 [2,720 [2,815 |3,1611 [3,2240 41 68 29 1 34 4 352 91 44 89 amostra : : : À : À À : : : 23-12 2 3,0338 |3,0127 [3,155 |2,8088 |3,1594 |2,8683 [3,127 [1,621 |1,6389 /2,4295 52 56 528 7 46 7 824 95 oa 87 amostra . . . . . . . . . .

232.2 3,1198 [2,9572 [3,130 |2,8593 |3,1464 |3,0368 2,817 [2,307 |2,1801 /2,7155 42 76 276 04 13 12 525 23 6 o6 amostra . . . . . . . . . . 24-12 3 2,3462 |2,8957 [2,888 |2,89452,8969/2,9165/2,906 |2,274 |2,1934 |2,2420 83 72 671 8 66 43 645 74 74 29 amostra Ú : : Ú . Ú Ú : Ú : 24-29 2,4103/2,8355 [2,968 |2,7971 |3,0004 |2,9637 2,979 2,051 [2,9342 |/2,9625 82 86 461 43 63 41 274 79 47 68 amostra À À À À À À À : À À 25-1-2 2 2,3242 |2,6974 [2,885 |2,8752 |2,9033 |2,8322 [2,875 [2,614 |2,8818/2,8791 7 88 764 99 28 64 299 89 1 94 amostra À À À À À À À : À À 28-1-2 2 2,2259 |2,6501 [2,647 |2,6576 |2,6678 |2,6627 [2,647 |2,486 |2,6452 [2,6526 2 89 728 55 15 os 728 61 81 63 amostra Ú Ú Ú Ú ; Ú Ú : Ú ; 28-2.2 3 1,9325[/1,9515 1,936 /1,9392 /1,9433 |1,9657 | 1,947 1,649 |1,9433/1,9219 u 74 526 24 02 22 418 15 02 82 amostra À : : À : À À : À : 29-1-2 3 2,3039 [2,3185 [2,321 |2,3171|2,3335/2,3335/2,3118 [2,228 |2,3198 /2,3065 59 os 2 6 51 51 31 91 49 67 amostra À : : À : À À : À :

29.2.9 3 2,1158 [2,9490 [2,947 |2,9256 |2,9528 |2,9567 [2,929 |2,720 |2,8704 /2,9196 65 44 78 3 59 os 244 16 96 72 amostra À : : : : À : : : 30-12 3 2,9041 |3,1090 |[3,1154 |3,1286 [3,1380 |3,1463|3,1103 2,682 |-3,134 |3,1299 o9 26 6 22 78 51 os 9 6 amostra Ú : : À : À : : À :

20.2.2 3 1,6666 [2,3494 [3,121 [2,9530 [3,2711 [3,2939 | 1,217 [3,245 |3,2480 |3,1753 64 66 821 29 19 82 056 45 78 24 amostra . . . . . . . . . . 33:11 2,1280|3,1766 [3,179 |3,1738/3,1971/3,1612/3,166 |2,755 |3,1571 /3,1781 85 9 557 42 65 53 803 39 36 21 amostra . . . . . . . . . . 33-21 3,0827 [3,0132 3,159 [2,88323,1617/3,1305/3,037 |2,458 |3,0197/3,1060 88 32 176 72 54 86 786 67 o7 3 amostra : . : . : - . . : 7 2,4497 [3,2267 [3,236 |3,2353 |3,2486 3,122 [3,184 [3,2113 /3,2295 33-3-1 3,1707 66 29 813 |58 31 197 |69 42 86 amostra À À À À À À À : À À 2411 2,9193/2,9193 [2,912 [2,9156 |2,9305 |2,9633 2,929 2,881 [2,9072/2,9181 49 49 o3 74 66 33 305 |66 17 21 amostra À À : À : À À : À : 34-21 2,7574|3,2651 [3,228 |3,1605 |3,3271/3,2916/3,138 [3,247 |3,1898 /3,3097 16 28 197 77 78 18 907 5 19 45 amostra À : : À : À À : À : 34-31 10 2,5601 |3,2340 [3,218 |3,1828|3,2815/3,2599 2,664 |2,795 |3,1478 /3,2627 04 02 396 49 28 17 942 63 15 37 amostra À : : À : À À : À : 35-41 4 2,0399 |3,1990 [3,204 |2,8795 |3,2289/3,2092 [3,176 |3,018 |2,6031 |3,0773 68 33 863 8 97 87 468 14 7 64 [Tabela 13-7] amostra 35- B : õ . . . : . : . 21 11 /1,6114/3,1052/3,1038 |3,0424 /3,1288/3,1288 1,831 [3,049 |2,8114 /3,0952 48 13 3 89 89 443 96 69 97 amostra 36- : : À : : : : Ú Ú À 14 2 |3,/1248/3,3119/3,3344 3,2165 |3,3485 /3,1080 3,319 [1,041 |1,7198|2,5436 o3 63 7 18 57 26 336 23 12 71 amostra 36- : : À : : : Ú À : À 21 7 2,3271 [3,3418 |3,3404 |3,1284 |3,3757 |3,2858 [1,666 |2,023 |3,14283,2384 69 47 92 96 os 96 384 39 47 71 amostra 36- . . . . . . : . . .

31 2,2830 [3,2467 | 3,2599 |3,0715|3,2905 |3,1794 | 1,397 [2,741 |3,2289/3,2467 9 65 66 41 04 46 599 94 32 65 amostra 37- : . . . . . . . . .

4 4 1,8374 [3,1480 |3,1495 [3,1569 [3,1660 [3,1645 [2,732 |2,252 |3,1569]|3,1183 13 92 61 85 65 39 893 59 85 24 amostra 37- : : . . . . : . : .

21 2,1361 /3,1013/3,1100 [3,1100 [3,1144 [3,1263 [2,776 |3,057 |2,9854|3,1071 37 s1 oa oa os 43 014 89 34 o4 amostra 38- : : À À À À À À - À 4 5 2,7880 [3,2342 |3,2288 [3,2680 | 3,2922 |3,2651 [2,351 |2,433 3,2494 3,2724 21 os 14 67 o1 42 613 79 91 amostra 38- : : À À À À Ú À À À 21 2,4051 [3,2559 | 3,2248 |2,3160 |3,3116 [3,3040 |1,3828 |2,026 |2,8601 /3,2907 12 17 83 59 17 64 775 02 27 91 amostra 39- : : À À : : À À À ” 4 2,3092 [3,2539 |3,2510 |3,2673 |3,2583 |-4 3,093 |3,218 |3,2014/3,2409 64 47 22 57 71 795 73 92 39 amostra 39- ; : À À : À À À À À 21 1,8475 |3,2312/3,0917 [3,2239 |3,2635 |[3,2619 [2,247 [3,009 |2,4870 |3,2463 43 61 47 12 59 66 11 71 os 42 amostra 40- : : À : : : : À : À 1H 4 2,8373 /3,2901 |3,2662 |3,3139 |3,3248 |3,3201 [3,288 2,768 |3,3049 |3,2731 79 88 5 9 29 51 742 18 1 54 amostra 40- 7 - - - - - - - - - - 21 2,5720 [3,1349 |3,1047 |3,0694 | 3,1235 |3,1093 [2,835 /2,969 |3,1124 /3,1078 amostra 33- À À À À À 12 3 4 4 4 2,6848 |2,6862 |-4 4 2,164 |2,6920 |2,6678 19 64 69 93 41 amostra 33- : : À : : : : À : À

2.0 3 2,4372 /2,5809 |2,5733 |2,3671 |2,5855 |2,5763 [2,571 [2,373 |1,6547 /2,5556 47 57 51 63 86 78 846 78 oa 22 amostra 33- . . . . . . . . . . 3-2 3 2,3776/2,4008/2,3872 |2,3921/2,3921 | 2,4499 2,395 2,384 |2,3764|2,3812 55 72 8 74 74 9 88 85 67 4 amostra 35- : . . . . . . . . 1º 2 1,6993 |2,5345 | 2,5247 [2,5345 | 2,5411 |4 2,509 [2,335 |2,5411 [2,5216 67 19 96 19 25 059 55 25 os amostra 35- . . . . . . . . À .

2.2 3 —l2,4013/2,4090|/2,4090 |2,4059 |2,4121 [2,4200 [2,409 |2,401 |[0,8181 |2,3952 46 33 33 42 46 28 033 35 67 93 amostra 41- ' ' . : : . : . ” 4 2,9303 [2,9832 |2,9971 |2,9878 |-4 4 2,066 |2,488 |2,9801/2,9068 88 24 1 04 31 74 98 36 amostra 41- ' ' . . . . . . . . ” 2,3254 [3,0885 | 3,0439 |2,9577 | 3,0951 [2,9918 2,257 [2,823 |2,7512/3,0656 21 34 52 66 04 85 062 52 4 71 amostra 42- . . . . . . : . . . H 4 3,0261 [3,1790 |3,2046 |3,1874 |3,2120 |[3,1804 [1,750 [3,050 |3,1804]|3,2061 27 95 49 47 22 76 343 04 76 14 amostra 42- . . . . . . . . . . ” 7 2,6473 [3,3190 | 3,3454 |3,3469 | 3,3484 |3,3500 [3,055 /3,242 |3,3469 |3,3349 88 32 5 65 87 13 92 23 65 84 amostra 43- . . . . . . . - . 1H 4 2,6245 | 3,0424 | 3,0546 |3,0464 |3,0715 |-4 2,096 [2,721 28118 3,0546 56 o7 41 47 o9 889 os 41 amostra 43-)7/ |- - - F - F F - - -

21 1,7263 |2,8448 | 2,8583 |2,8532 |2,8601 |2,8515|2,759 |2,794 |2,7902|2,8190 48 75 95 75 15 82 088 65 23 35 amostra 44- . . . . . . . . . .

1H 4 2,7233 [3,1508 |3,1632 [3,1523|3,1711 [3,1760 [2,245 /3,097 |[3,1523|3,1523 22 17 26 49 66 o1 249 63 49 49 amostra 44- ' ' À À - À À À À À 21 2,3176 |3,1926 |3,1740 |3,2077 3.2875 3,2645 0,948 3,216 |3,1638|3,2337 43 14 75 58 ' 5 542 25 25 37 amostra 45- . . . . . . . : : .

"” 4 3,1921 [3,1921 |3,2080 |3,2000 | 3,2296 |3,2330 [3,198 |1,731 |1,7243]|3,2000 34 34 44 16 39 58 428 |j03 82 16 amostra 45- . . . . . . Ú . . .

21 2,8476 [3,0873 |3,0946 [3,0241 |3,1664 [3,1511 [0,968 |2,312 |3,1428/3,1235 o1 18 17 oa 99 39 513 |31 35 3 amostra 46- : ' . . . . : Ú . .

+" 4 1,3577 [3,0862 [3,1040 |3,0991 [3,1090 [3,0831 [2,781 [2,754 |3,10243,0926 os 66 61 35 43 os 292 |64 13 53 amostra 46- : : À À - À À À À À 21 7 2,4263 [3,3362 |3,3126 |3,3564 3,3661 3,3596 [2,294 3,336 |3,3408 3,3439 75 46 os 49 ' 42 439 25 25 os amostra 47- : : À À : À À À À À ” 5 2,5099 [3,1398 |3,1515 |3,1549 |3,1583 [3,1333 [2,935 [3,131 |3,0549 /2,9476 21 55 26 19 39 24 119 71 54 17 amostra 47- : : À À À À : À À À 21 7 2,2866 [3,1521 |3,1711 [3,1852|3,2012 |3,1534 [3,010 |3,148 [3,1725]|3,1781 3 12 16 18 77 43 562 15 os 1 amostra 48- ; : À : : À : À À À H 4 1,5509 | 2,8312 |3,0055 |[3,0068 |[3,0337 [2,8480 [2,401 [2,699 |2,9019/3,0094 o7 16 7 72 72 75 24 37 5 88 amostra 48- : : À À : : À À À À 2 6 2,5777 [3,1288 |3,1856 [2,6706 | 3,2330 |3,2045 [0,957 3,042 |2,5607 |3,1990 o8 32 68 48 42 53 594 95 87 73 amostra 49- : : À À : : Ú À : À 14 4 |2,3031/2,5775|3,2003|2,8367|3,2285|3,0879 1,435 |2,838 |3,1026|3,2065 68 91 os 97 84 EX) 486 96 5 73 amostra 49- : : À À : : : À : À 21 1 3,0159 [3,2105 |3,1717 [2,3394 | 3,2543 |3,1571 [2,049 3,047 |3,0997 |3,2070 19 25 73 2 57 o 997 36 un 65 amostra 50- . . . . . . . . . .

"” 4 2,0696 [2,9928 | 3,1364 |3,1487 |3,1801 [3,1584 [2,395 2,336 |3,1514/2,9957 49 49 81 15 58 75 631 54 81 48 amostra 50- . . . . . . . . . .

21 2,0161/3,1031 [3,1031 [3,1148 |3,1222 /3,1222 3,056 [2,636 |3,1104 |3,0862 66 85 85 45 94 94 853 25 36 62 amostra 51- B : : : . : À : : .

4 5 1,6400 |3,0046 | 2,9540 |2,5829 [3,0705 [2,9851 [0,853 2,659 |2,7462/3,0225 76 7 72 33 78 48 913 76 2 o2 amostra 51- ; : À À À À À À À À 21 1,8478 [3,0988 |3,0501 |2,7343 3,1240 /3,0988 [2,407 2,956 |2,9751|3,1001 75 31 19 66 33 31 138 21 82 21 amostra 37- ; : À À À À À À À À 1 2 1,9969 | 2,5918 |2,5809 |2,5824 | 2,5902 |2,5703 [2,594 2,459 |2,5809 |2,5673 14 35 57 95 64 46 993 |87 57 61 amostra 37- ; : À À À À Ú À À À

2.9 3 1,2890 | 2,8765 |2,8838 [2,1271 |2,9034 |[2,8973 1,350 [2,597 |2,8765|2,8511 92 29 53 49 94 55 163 85 29 41 amostra 38- : : À À : À : À À À 1-2 3 2,5966 [3,1799 |3,1071 |[3,1843 |3,2087 [3,2087 [3,159 |2,050 |2,5110/3,1888 32 53 77 77 65 65 883 27 51 47 amostra 38- : : À À À : Ú À À À

2.9 5 2,2465 [3,2800 |3,2972 |3,2957 | 3,3228 |3,3244 |1,280 [2,477 |3,2703|3,2885 21 48 5 o 49 os 864 31 2 64 amostra - - - - - - - - - 3 -2,856 HCNO01-1-1 2,9134 /2,9338 |2,9419 |2,9322 | 2,9452 |2,9435 [2,927 2,8466 |2,9386

LIFE FEFEFETEFRE amostra : : . õ . . . : : , HCN02-1-1 2 2,3091 [3,0955 | 3,0999 |3,0897 | 3,1120 [3,1150 [3,092 2,666 |2,7945 |3,0941 83 7 94 4 17 75 645 49 4 os amostra : : , . . : : : . , HCN03-1-1 3 2,2256 [3,0435 |3,1863 |3,0909 | 3,2707 |2,9218 2,379 2,391 [3,0426|3,1981 23 47 18 72 32 97 448 58 12 82 amostra . . . . . . . . . . HCN04-1-1 2 3,0537 [3,0468 | 3,0723 [3,0871 | 3,1009 |[3,0752 [3,066 2,885 /2,0295|2,9191 7 43 14 38 26 39 523 66 99 64 amostra : . . . . . . . . . HCNO5-1-1 4 1,7678 |3,1596 | 3,2165 /3,0419 | 3,2300 [3,1837 [3,182 [2,699 |3,1906|3,1481 93 52 31 24 8 u 339 77 38 04 amostra . . . . . . . . . . HCNOS-1-1 3 2,8784 |2,9076 |2,9163 [2,8977 | 2,9222 [2,8921 [2,897 [2,718 |[2,8350 |2,9091 7 66 81 14 9 28 714 36 os os amostra . . . . . . . . . . HCNO7-1-1 2 2,1937 [3,0158 | 3,0062 |3,0130 | 3,0326 [3,0669 [3,010 [2,677 |2,9775/3,0035 75 19 73 7 87 71 339 17 71 84 amostra . . . . . . . . . . HCNOS-1-1 3 2,6112 [2,9290 |2,9225 |2,9396 | 2,9546 |2,9519 [2,931 2,839 |2,9423/2,9110 57 17 os 43 E 16 649 25 4 26 amostra . . . . . . . . . . HCN09-1-1 2 2,6583 [2,6831 |2,6869 |2,6793 |2,6947 |2,6947 [2,676 |2,496 |2,6755 |2,6869 o8 32 81 17 83 83 792 94 35 81 amostra . . . . . . . . . . HCN10-1-1 4 2,8662 [3,0865 |3,1118 [3,1257 | 3,1343 |3,1460 [3,060 2,585 |2,5344 |2,7060 8 75 55 76 48 47 246 56 57 41 amostra . . . . . . . . . . HCNHH-1+4 2 2,8605 [2,8650 |2,8756 |2,8635 | 2,8695 |2,8881 [2,878 2,751 |2,8430 |2,8650 16 o1 5 o1 33 49 741 87 26 o1 amostra 3 | - - F - F F - - -

HCN12-1-1 1,6234 |2,8053 | 2,8145 |2,8092 | 2,8066 |2,8253 [2,807 |2,332 |2,7874|2,7912 41 19 46 49 25 36 935 57 34 os amostra . . . . . . . . . . HCN13-1-1 3 2,9699 [2,9826 | 2,9840 |2,9869 | 3,0001 [3,0153 [2,985 /2,309 |2,9657 /2,9884 19 31 67 52 81 67 507 65 63 02 amostra : : À : : À À À À À HENI4-1+ 3 [2/5893 |2,9449/3,0529/3,0613|3,0814|/2,9459 [2,659 |2,937 |2,0962 |3,0543 9 04 75 27 63 8 191 44 88 56 amostra . . . . . . . . . . HCN15-1- 2 2,5861 [3,0816 |3,0939 [3,0967 |3,1152 |[3,1284 [3,084 /2,010 [2,1588/3,0911 27 76 49 24 o7 81 374 75 72 92 amostra . . . . . - . . . .

3 2,3259 |3,0809 |[3,0859 [3,1544 [3,1835 3,152 [2,940 |3,0859 3,1499 HCN16-1-1 3,1634 53 88 15 32 935 jo4 88 1 amostra ' ' - . . . . Ú . Ú 2 2,3923 |3,1580 3,0014 [3,1876 [3,1995|3,153 [2,244 |3,0969 |2,9402 HON17-1-1 3,1635 2 o3 65 74 32 925 |29 49 71 amostra : : À À À À À À À À HON18-4 2 2,1385 /2,4263 |3,0303 |3,0446 | 3,0561 [2,9141 [2,334 /3,035 |3,0528 |2,6903 74 31 47 92 86 18 84 os 71 54 amostra : : À À : À À À À À HCN19-41 4 3,0471 [3,0428 | 3,0137 |3,0400 | 3,0589 [3,0834 [2,925 |2,917 |3,0205 |2,5447 92 7 68 13 3 04 523 93 22 65 amostra : : À À À À À À À À HCN20-1-1 2 2,6594 [2,8026 |2,8100 [2,8100 |2,8159 |2,8129 [2,805 |2,437 |2,7621 |2,7939 37 31 os os 95 89 565 8 7 45 amostra : : À À : À : À À À HCN21-1-1 2 2,8895 [2,8986 |2,9158 |2,9032 | 2,9190 |2,9223 |2,9111 [2,688 |2,8910/2,9048 38 5 67 78 72 o1 os 62 44 32 amostra : : À : : : : À À À HCN22-1-1 3 2,6331 [3,0151 |[3,0316 |[3,0271 |3,0316 |[3,0378 [3,013 2,784 |2,8648|3,0181 17 65 69 os 69 29 695 28 51 19 amostra : : À À À À À À Ú À HCN23-1-1 3 2,9661 [2,9736 |2,9632 |2,9632 | 2,9951 [3,0063 [2,982 |2,478 |1,8723/2,9827 75 25 31 31 9 88 736 83 49 36 amostra : : À À À À À À À À HCN24-1 3 2,2706 [2,9291 |2,9355 |2,9015 |2,9291 [2,8912 /2,872 [2,403 |2,8869/2,9105 94 58 45 25 58 37 754 12 o1 42 amostra . . . : : : : À Ú : HCN25-1-1 2 3,0718 /3,0889 | 3,0921 [3,0764 |3,0795 |3,0937 [3,085 2,970 |2,9715/3,0718 3 25 os 26 17 os 766 37 81 3 amostra . ' Ú Ú : Ú : Ú Ú Ú HCN26-1-1 3 2,7898 |2,8040 |2,8024 [2,8104 |2,8186 [2,8104 2,800 [2,246 |2,7944 2,8072 2 os oa 67 77 67 815 2 98 26 amostra : B À À À À Ú À À - 2 3,1384 |3,1574 |3,1665 [3,1634 3,1574 /3,1680 [1,805 |2,283 |2,6699 HCN27-1-1 3,1299 16 61 41 93 61 72 278 8 81 amostra : : À À À À À À À À HoNES-1+ 2 2,9282 /3,0641 |3,0597 [3,07763,1109 [3,0776 3,076 |3,021 |3,0995/3,0525 98 76 67 79 2 79 158 |98 55 17 amostra : ' À À À À À À ' À HCN29-1-1 2 2,3095 [3,0420 | 3,0585 |3,0618 | 3,0773 |3,0652 [3,051 [3,037 |1,78052,5234 6 73 26 92 74 85 87 26 67 12 amostra ; ' À À À À | À À À HCN30-1-1 3 1,6311 |3,2858 |[3,3280 [2,1501 |[3,3330 [3,3231 [1,267 [3,146 |3,3025/3,2696 os o7 96 44 59 89 971 56 42 93 amostra ; ' À À À À À À À À HCN31-1-1 2 1,5497 |3,2121 [3,2673 [3,3096 |3,3391 [3,3002 [2,799 [2,904 |2,72373,0007 oa o9 96 53 63 45 48 17 39 69 amostra : : À À À À À À À À HCN32-1 2 3,0493 [3,0365 | 3,0303 |3,0608 | 3,0830 |3,0847 [3,057 2,970 |3,0795 |3,0542 34 59 n 28 17 72 513 96 29 23 amostra 3 - - - - - - - - - - HCN33-1-1 2,9097 |[3,1745|3,1815/3,1745|3,1850 3,1958 3,178 /3,008 |[3,0967 2,5668

CO LTEFFFFFrrrfE amostra : : À À À À : À À À HECN34-1+ 2 —|[2,8830/2,8884|2,8938 |2,8884 |2,8974|2,8938 2,876 |2,883 |2,8204 |2,8830 61 12 29 12 79 29 028 os 41 61 amostra B : À : : : : À : À HCN35-1-1 3 1,7738 |3,1405 |3,1974 [3,2109 |3,2233 |3,1177 [2,686 [2,873 [3,1974/3,1092 87 62 41 9 99 65 585 32 41 14 amostra . . . . . . . . . . HCN36-1-1 3 2,1764 /3,0141 |3,0233 [3,0110 |3,0233 |3,0407 [2,220 [2,437 |2,9480 /2,6996 63 22 3 96 3 36 312 87 44 36 amostra . . . . . . . . . . HCN3741 2 |3/1126/3,1171|3,1277 3,1262|3,1498 3,1514 3,127 |2,133 [3,1141 |3,1370 9 59 71 39 [5] 22 771 95 74 77 [Tabela 13-8] amostra . . . . . . . . . . HCN38-1-1 3 2,8395 |2,8442 [2,853 |2,8395 |2,8600 |2,8200 [2,842 |2,784 |2,8070 /2,8289 85 13 621 85 o7 79 665 87 71 78 amostra . . . . . . . . . . HCN39-1-1 2 2,3543 |3,0852 [3,085 |3,0574/3,1101 /[3,1101 [3,083 |/2,735 |2,9994 /3,0554 86 25 225 72 79 79 026 75 8 os amostra . . . . . . . . . . HON0-11 3 2,6724/3,0117 [3,021 [3,02553,0530 |3,0557 [3,019 [2,804 [3,0154/3,0319 98 78 733 26 47 62 223 44 84 22 amostra . . . . . . . . . . HONHAA 2 2,7449/3,0182 3,021 [2,7297 |3,0447 [3,0373/3,020 |2,547 |2,9635 |3,0229 86 99 815 jo4 74 92 64 os 29 94 amostra : . . : . . . . . . HCN42-1-1 4 2,0142|3,2839 [3,254 |2,1550 |3,3149/3,3111 [3,129 |2,720 |3,1714/3,1789 o7 o1 898 |8 79 3 119 jo7 36 o8 amostra 3 - - - - - - - - - - HCN43-1-1 1,9283 [2,9944 [2,985 /2,9560 [3,0312/2,9707 2,995 [1,866 |2,9605 |2,9696 amostra : . . : . : : : : HCN44-1-1 2 2,9956 |[3,0065 [3,081 |2,9679 |3,0825 |2,3766 2,206 |2,549 |2,9716/2,9182 13 83 343 54 45 53 602 44 66 41 amostra : . . , . , , : : HCN45-1-1 2 2,7164/3,0812 [3,064 |3,0706|3,1146 /3,1159 [3,082 |2,684 |2,9180 /2,6354 86 12 821 04 83 74 407 71 37 19 amostra . . . . . . . . . HCN46-11 3 2,8444 | 2,8516 2,843 |2,8531 |2,8771/2,8635/2,847 [2,834 |2,8590 /2,8473 57 83 026 43 93 o1 333 54 32 33 amostra . . . . . . . . . HCN47-1-1 3 2,8382/3,0197 [3,018 |3,0123|3,0590 |2,9690 [3,019 2,207 |2,9989 |2,8004 87 69 519 23 39 33 769 53 97 3 amostra . . . . . . . . HON48-11 3 2,6398 |2,6898 [2,702 |2,6774 |2,6870 |-4 2,677 [2,514 [2,5873 /2,6576 9 04 516 53 29 453 64 61 19 amostra . . . . . . . . . HCN49-1-1 3 2,5785|2,9675 [2,964 |2,9689 |2,9845 |2,9933 [2,968 |2,815 |2,9379 /2,9731 93 31 756 26 65 39 926 28 4 35 amostra . . . . . . . . . . HCN50-1-1 3 2,8209 |2,8504 [2,842 |2,8449 |2,8882 /2,8822 2,860 |2,560 |2,8561 /2,8660 o7 99 226 66 88 56 354 75 os 87 amostra . . . . . . . . . HCN51-1-1 3 2,8414/2,8911 [2,886 |2,8747 |2,9217 /2,9190/2,883 |2,276 |2,8698 2,9042 49 71 062 81 77 29 529 45 59 14 amostra . . . . . . . . . HCN52-1-1 2 2,6893 |3,1057 [3,1171 |3,1142 [3,1317/3,1317 [3,104 |2,734 |3,0719/3,1043 43 2 12 35 85 85 316 74 32 16 amostra . . . . . . . . . HCN53-1 2,4610|3,1384 [3,148 |3,1452|3,1749/3,1793/3,134 /2,099 [2,3477/3,1411 21 92 008 68 38 48 477 18 52 9 amostra — |2 - - - - F - - - - F

HCN54-1-1 2,7214|2,7716 2,765 |2,7687 |2,7862 |2,7759 2,761 |2,243 |2,7411 |2,7574 46 39 924 72 63 74 687 9 o1 91 amostra . . . . . . . . . . HCN55-1-1 2 3,0920 [3,1166 [3,120 |3,1082/3,1532/3,1041 [2,438 |2,859 |2,9226/3,1055 43 32 87 8 73 64 683 96 44 32 amostra À : : : : À À : : : HENS61+ 3 2,5403 |3,1366 [3,132 |3,1470/3,1698 |3,1549 3,137 |2,009 |3,1315/3,1670 98 72 857 13 4 33 951 95 93 92 amostra . . . . . . . . . . HCN57-1- 2 3,0611 [3,0086 [3,077 |3,0771/3,1110 [3,0968 [3,062 |2,607 |2,9452 [3,0861 18 97 123 23 22 33 548 98 o1 os amostra . . . . . . . . . . HOoNSS-11 2 2,8497 [2,8821 [2,897 |2,8754 2,8999/2,8115 2,876 |2,643 |2,8623 |2,6400 26 os 151 32 44 22 758 12 89 27 amostra : . . . . . . : . : 55 5 1,7476|3,1676 [3,154 |3,1783/3,2055/3,1722/3,081 /2,292 |3,1646 /2,7968 34 41 232 |65 68 os 455 |28 26 63 amostra À : : À : À Ú : À : 55-21 2,1456 |3,2784 [3,297 |3,2187 |3,3366 [3,3109 1,972 |2,792 |3,3168 /3,2744 86 83 974 EX) 7 82 042 38 o 18 amostra Ú À À À À À À : À À 561 4 1,9823 [2,8902 [2,907 [2,9109 2,9258 /2,9141/2,863 2,120 |2,9076 |2,9028 63 73 679 2 12 85 215 21 79 62 amostra À : : À : À Ú : À : 56-21 2,4283|3,1236 [3,186 |2,5054 |3,3173/3,0605/1,008 |2,957 |2,8558 [3,2249 82 84 926 4 77 22 081 17 54 28 amostra À : : : : À : : : 71H 4 2,6372|/3,3071 [3,807 |3,3151 [3,3591 |3,3365/3,130 |-2,675|3,1433 /3,2163 76 84 184 53 27 84 567 72 17 amostra À : : À : À À : À : 57-21 6 2,3930 |[3,3304 [3,334 |3,3848 |3,4000 |3,3622 2,873 |2,156 |2,9875/2,9200 74 19 828 74 55 67 757 18 98 82 amostra À : : : : À À : : : 5-1 4 2,7907 [3,2323 [3,215 |3,2438 |3,2948 3,2819 3,258 |2,220 |3,2197/3,2143 27 76 67 81 51 34 705 89 87 o6 amostra À : : À : À Ú : : : 58-21 2,2508 |3,3727 [3,387 |3,3825|3,4027 |3,3255/1,084 |3,371 |3,0939 /3,2882 33 46 469 os os 43 496 14 92 36 amostra . . . . . . . . . . 591 2,6245 |2,6980 [2,698 |2,6962 |2,7016/2,7034 2,668 |2,088 |2,7070 /2,6927 25 33 033 57 o7 os 782 o4 25 26 amostra . . . . . . . . . . 59-21 2,1921[3,1871 [3,187 [2,9351 [3,2191/3,1986 2,894 |2,975 |3,2003/3,2020 98 27 127 19 86 64 307 15 38 18 amostra : : : : : õ : : : 6011 2,2419/3,2843 [3,259 [2,7678/3,3172|3,3121 1,481 [3,062 |2,69753,2795 os os 661 16 25 25 41 14 73 79 amostra À À À À À À À : À À 60-21 2,9608 [3,1965 3,180 [2,6757 /3,2180 |3,2211 [2,570 [2,872 [3,1456/3,1905 12 14 346 |37 o3 62 422 |87 95 65 amostra À À : Ú : À À : À À 40-12 2 2,3462|3,1225 3,184 |1,9265|3,2363/3,2363 2,469 |2,205 |3,1669 /2,9721 19 57 705 jo4 8 8 613 |96 76 42 amostra À : : À : - À : À - 2,3419|3,2870 [3,272 |3,2870 |3,38155 2,353 |3,185 |3,2870 40-2-2 3,2885 3,2885 45 758 45 58 29 22 45 amostra Ú À : À : À À : À : 52-1-2 3 1,5454 [2,9226 [3,196 |3,2341 |3,2757 /3,0858 2,080 [2,717 |3,2094 /3,0011 76 56 262 68 o3 23 726 42 23 48 amostra Ú À : À : À Ú : À : 522E 5 1,7424 [2,7964 [3,291 [2,7246 3,3526 |3,2355 1,317 [3,316 |2,9016/3,1329 27 75 684 98 82 68 014 33 02 o6 amostra 3 - - - - - - - - - - 56-1-2 2,0824 |/2,9215 3,002 |2,9997 [3,0187 |3,0286 2,925 |2,057 |2,9725/3,0012

TFF FFFFFEFEE amostra : : : : : : À : : e. 4 1,7879[2,6754 [2,678 |2,6862 2,6807 |2,7028|1,806 2,497 |2,6862 /2,2981 o9 34 994 02 85 72 682 57 02 87 amostra : . . , . , : . . 59-1-2 5 2,8080 [3,1831 [3,193 |3,1864/3,1881/3,2136/2,353 |2,459 |3,1947/3,0615 29 77 085 54 o3 o7 752 15 59 16 amostra . . . . . . . ; . 59-29 7 2,6065 |3,0969 [3,064 |2,9720 |3,1224/3,1005/3,098 |2,795 |1,6384/3,0987 1 59 649 21 o7 os 728 os 14 28 amostra . . . . . - ; . .

2 2,8370 |3,3462 [3,369 |3,1674|3,3803 1,608 |3,366 |3,0636 3,2657 72-11 3,2603 28 56 828 42 36 494 38 38 Es amostra . . . - . . . . .

3,2209 |3,3934 [3,389 3,4245 |2,7994 [2,039 |3,281 |3,1989 /3,3072 72-21 2,1819 13 59 942 59 17 085 97 33 73 amostra . . . . . . . . .

721.2 2 2,3825|3,1870 [3,002 |3,2166|3,2503/3,1870/2,166 |3,197 |3,2112 /2,9340 61 084 64 76 61 032 28 o 39 amostra . . . . . . ; . . .

72.2.9 2,4705|3,3236 [3,216 |3,3467 |3,3467 |3,3560 [1,646 |3,306 |2,5710/3,0990 17 97 865 93 93 14 475 73 82 88 amostra . . . . . . . . . 7344 5 2,3359 |2,7290 [2,742 |2,7554/2,7520 2,7520 2,738 |2,559 |2,6623 |2,7404 49 54 068 83 9 9 778 96 36 2 amostra . . . . . . . . . 7321 7 2,4549 [3,1123 [3,124 |3,1380 |3,1506/3,1398 2,342 |2,485 |2,0693 /2,5767 39 83 19 88 25 57 349 27 29 15 amostra . . . . . . . . . 73-12 2,4964|3,1980 [3,193 |3,2130|3,2251|3,2080 [3,186 |2,400 |2,2141 /2,1320 23 17 1 81 7 02 652 82 04 59 amostra — |7 - - - - F - - - - F

73-2-2 2,7801 |2,7867 [2,795 |2,7950 |2,7967 |2,8035 2,772 |2,334 |2,7549 |2,7753 77 33 069 69 55 68 119 53 02 25 amostra . . . . . . . . . . 73-1-5 4 2,3223|3,2126 [3,071 |3,1962|3,2432 /3,2390 [2,615 |2,326 |3,1100 [3,2216 89 02 273 12 o8 92 712 38 75 91 amostra À À : À : À À : À :

73.03 5 2,4681 |2,4768 [2,484 |2,4783/2,4964 |2,4949 [2,471 |2,214 |2,4609 |2,4754 46 91 315 65 63 26 041 32 91 21 amostra : . . . . . . . . - 1,6967 [3,1141 [3,125 |2,9885/3,1820 [3,1706|/2,141 [2,074 |2,6865 74-11 3,1369 64 04 352 |49 8 88 606 |4 95 amostra : . . . . . : . . . 74-94 1,7283/3,2026 [3,264 |2,9786/3,3324 |3,3056 1,502 2,378 |2,6896 3,2920 79 36 784 21 27 2 919 55 4 71 amostra Ú : : Ú : Ú Ú : Ú : 74-12 2 2,0061 [2,9203 [2,918 |2,9082 |2,9298 |2,9109 2,407 2,650 |2,9069 |[2,8991 95 os 955. |97 81 37 694 |84 82 81 amostra Ú : : À : À Ú : À : 74-2-2 3 1,5255 [3,0266 |3,1114 [2,5055 |3,1303 |2,7595 1,806 2,380 |2,1987 |3,0669 95 4 61 16 15 94 686 75 22 83 amostra À : : À : À À : À : 7741 4 2,5704|3,1871 [3,181 |3,1913/3,1844 [3,1707 3,134 |2,739 |2,6622 [3,1262 86 654 82 11 96 798 33 24 46 amostra À : : À : À À : À : 77-21 2 2,3912/3,1698 [3,197 |3,1788|3,2259/3,1881/3,140 |2,833 |2,9894 /3,1922 27 o7 664 95 67 78 015 o3 53 18 amostra À : : - : À À : À : 2,1760|3,1994 [3,214 3,2199 [3,2023|3,096 3,025 |2,6323 3,2052 77-3-1 3,2067 o1 97 023 73 64 E 31 78 49 amostra : : : : : À À : : : 77-41 9 3,0026 [3,1712|3,195 |3,0693 |3,2062 |3,1754 2,975 [2,985 |3,1560 [3,1869 73 27 721 os 23 5 953 9 84 18 amostra À : : : : À À : : : 8411 3 2,5442 |3,1480 [3,109 |3,1411 [3,1676|3,0913|2,739 |2,639 |3,0042 |3,1466 33 o8 876 E) 88 92 21 95 42 36 amostra À : : À : À À : À :

84.21 2,1827 [2,9956 [2,988 |3,0076 |3,0280 |2,9809 2,986 |2,532 |2,9626 /2,9971 os 19 245 83 32 95 785 61 91 os amostra . . . . . . . . . . 84-31 2,7368|3,3165 3,296 |3,2105|3,3445/3,2173/2,462 |3,295 |2,8427 [3,3208 39 47 993 89 76 57 361 63 72 54 amostra . . . - . . . . . .

7 2,4821 [3,3045 [3,314 3,3567 |3,2866 [2,859 |3,257 |3,3232 /3,3473 84-4-1 3,3247 33 64 515 72 66 519 96 3 64 amostra : : : : : õ : : : 851 1,5228[2,6265 3,048 |1,9047 /3,0687 |3,0687 [1,268 2,888 |1,9446 /2,7997 94 92 078 |29 25 25 868 |85 41 55 amostra À À À À À À À : À À 8521 7 2,6908 |3,3083 [3,298 |3,3485 |3,3454 |3,3485/3,2611 [3,229 |3,2915/3,3287 65 12 457 |67 54 67 33 13 52 19 amostra À À : : À Ú : À : 86-11 5 3,2127 |3,2099 [3,221 |4 3,1847 [3,1372| 1,617 3,209 |[3,2142 3,1558 96 1 569 67 49 52 91 46 91 amostra À : : Ú - À Ú : À : 2,8740 |[3,3073 [3,212 |1,9742 3,2561 [1,874 3,284 |3,2855 /3,3100 86-2-1 3,3115 88 04 627 83 51 808 26 85 97 amostra À À À À À À À : À À 87-11 4 2,2427 [2,9402 [2,931 |2,9135 |2,9446 |2,5221 [2,944 |2,305 |2,9330 /2,4318 43 58 63 02 38 68 638 34 56 52 amostra À : : À : À À : À : s721 7 2,5331|3,1819 3,200 |3,2411 [3,2441|3,1899 3,032 |2,965 |3,2381 /3,2063 86 89 816 1 37 58 1117 7 os 48 amostra > - - - - - - - - an - 87-3-1 1,7361 [2,9021 [2,915 |2,9245 |2,9245 [2,8795 2,879 /2,265 2,9260

LoL FF E EE E amostra : . . õ . : À õ : s8-11 4 —J2,6791/3,1863/3,206 |3,1377|3,2454 2,5244 1,504 |2,955 |3,1876 /2,9535 o7 o8 511 96 3 o9 245 os 26 43 amostra . . . , . , , . . se-2-1 3,1503|3,1608 [3,152 |3,1799/3,1730/3,1841 [3,104 |2,595 |3,1299/3,1757 16 45 924 os o3 04 689 24 94 52 amostra . . . . . . . ; . 89-11 2,9879 /2,9963 [3,007 |3,0107 /3,0166/2,9991 [2,997 |2,784 |1,8972/2,6006 o7 4 845 7 79 88 762 83 78 77 amostra . . . . ; .

89.21 5 2,8404 |2,8473 [2,857 |4 4 4 2,843 2,489 [1,3174/1,8709 55 21 199 64 76 52 amostra . . . . . . . . 8931 2,6124 |2,6442 [2,661 |2,6740 |2,6740 |2,6574 2,612 [2,644 |2,6725 4 12 89 898 46 46 28 412 29 o9 amostra - . . . . . . . 12 3,3235 [3,295 |3,2439 [3,2978 |-4 2,783 |3,279 |3,0998 /3,2880 89-4-1 2,6793 95 401 72 89 326 56 96 19 amostra . . . . . . . . . . 20-11 5 3,1210|3,1324 3,138 |2,9635|3,1591/3,0706 2,218 [3,108 |3,1126 [3,1576 2 12 222 95 92 49 457 55 68 6 amostra . . . . . . . . . 20-21 2,5842 |3,0609 [3,043 |2,4581|3,0950 |3,0790 [2,827 |3,038 |2,8830 /3,0920 65 31 53 88 1 58 759 31 22 66 amostra . . . . . . ; . . ma 4 2,9152/3,1594 [3,128 |3,1899/3,1944 /3,1129 [1,913 |3,152 |2,9899 /3,1884 04 41 359 os 37 84 531 49 37 os amostra . . . . . . ; . . 1a 2,9057 [3,1687 [3,137 |3,1824/3,1936/3,1002/1,796 |3,174 |3,0606 /3,1965 2 16 496 17 98 31 445 14 22 65 amostra — |3 - - - - | - - - - - | -

88-1-2 2,2827 [3,0711 [3,107 |3,1402|3,1071 |3,1284 0,994 |2,927 |3,1343 /3,0841 16 76 11 57 1 38 353 79 o7 41 amostra . . . . . . : . . .

88.2.2 3 2,5021 [3,2630 [3,196 |3,3018|3,3093 /3,2988 1,865 /2,193 |3,2899 |3,3033 68 29 868 18 98 23 639 23 6 24 [Tabela 13-9] Pepto Porph Strept | Actino Porph | Coryn strep |Prevo |yrom Trepo |Trepo | Geme oco |myc yrom |ebac tococc |tella jonas nema |nem allla amostra PD ceus jes onas |terium us dentic | endod ! mediu |socra |sangu , salivar |graev catoni | matruc stomat | ola ontali m nskii |inis . ius enitzii ae hotii is s amostra 1- : : À : ; ; : À Ú : 11 5 2,030 [2,010 [0,374 |1,951 [1,930 [1,937 2,022 [2,018 [1,929 |2,0025 671 58 mm 29 627 405 28 74 667 66 amostra 1- : : À À : : : À À : Ha 7 2,830 [2,829 [2,207 |2,828 [2,7811 2,022 |2,282 [2,866 [2,859 |2,4225 858 83 904 8 98 813 54 31 644 22 amostra 2- : : À À : : À À : + 5 2,792 [2,809 [0,440 |2,748 [2,820 2,822 2,791 |4 2,815 /2,7551 238 51 448 54 993 287 os 853 55 amostra 2- À Ú Ú À À ' À À À i 21 9 2,616 [3,273 [1,078 [3,294 |3,299 |3,298 [3,106 [3,282 |3,296 |2,6849 108 |37 625 j44 266 |055 |52 61 847 |46 amostra 3- . . : . . : . . . 14 4 3,125 [3,123 [1,246 |3,144 [3,093 [1,008 |3,103 3,153 |2,5552 018 |83 772 |43 003 |399 |O4 205 |8 amostra 3- . . À . . : . . . : 21 12 3,148 [3,117 [0,894 [3,115 |3,126 [1,920 [3,068 [3,152 [3,126 |2,1748 462 |o2 721 81 838 938 |85 39 838 |jo7 ee pr E rr rr rr EF |

114 3,1511 [3,216 [1,1117 2,635 |3,1171 [0,923 [2,450 |3,239 [2,992 |2,7800 02 8 o7 12 63 177 64 8 472 79 amostra 4- . . À . . : . . . .

21 7 3,030 |3,097 [0,921 [3,064 [3,004 |1,270 [2,668 [3,115 [3,090 |2,6978 358 3 369 94 551 806 44 79 89 17 amostra 5- : : B B B : ” 4 1,472 |-a4 1,470 [1,468 [1,469 [1,465 |-4 4 1,4735 192 819 os 451 374 68 amostra 5- : : : : : : : : : : 21 6 1,456 |1,460 [1,453 [1,463 |1,423 |1,478 |1,477 [1,491 [1,495 |1,4929 693 |31 109 |95 225 |843 |58 66 574 |57 amostra 6- . . : . . . . . . .

” 4 3,194 |3,239 [1,612 13,190 [3,160 |3,282 |2,422 [3,262 [3,259 |2,6398 177 | 303 |jo6 37 132 |97 33 919 |89 amostra 6- . . : ' . ' Ú . . : 21 9 3,2311 [3,220 [1,648 [3,242 |3,212 |2,900 [2,526 [3,259 |3,271 |2,6730 58 16 221 | 629 |537 |66 EX) 995 jo4 amostra 7- À À À : À : À À À : ” 4 2,600 2,612 [0,584 |2,605 [2,616 |2,176 2,601 [2,630 |2,465 |2,1142 223 6 27 13 379 241 44 54 037 47 amostra 7- : : Ú : : À : À À : 24 7 3,102 [3,095 [1,086 [3,118 [3,051 0,840 [3,108 [3,124 [3,120 |2,9814 766 os 642 6 49 133 36 4 912 52 amostra 8- À : À : À : À À À : + 5 2,637 |2,628 [2,629 [2,642 [2,628 [2,642 |2,629 [2,656 [2,659 |2,5178 372 55 797 5 547 497 8 o 582 8 amostra 8- : : À : : : : : : - 6 3,178 [2,943 [3,175 |3,145 [3,161 [3,127 [3,125 [3,201 [3,199 2-1 2,0762 194 74 995 3 967 287 33 98 659 amostra 9- : : À : : : À À À : 11 5 3,038 |3,025 [0,773 |3,039 [3,040 [3,046 2,291 |3,055 [3,037 |2,9441 483 66 974 67 856 846 61 37 301 84 amostra 9- : : À : : : Ú - À : 21 9 3,207 13,000 [0,935 [3,278 [3,166 |2,967 |1,455 3,306 3,303 |2,4846 o2 848 28 679 439 04 517 48 amostra Ú ; : B B B Ú Ú : 1011 5 1,525 [1,527 [1,524 [1,525 [1,513 |1,536 [1,528 1,588 |1,5368 664 os 283 66 391 872 44 293 72 amostra . . : . . . . . . . 1021 9 3,242 |3,081 [1,401 [3,265 [3,238 2,541 2,835 |3,271 [3,250 |2,6564 179 38 803 33 634 315 78 63 566 41 amostra . . . : . : . . . . na 4 2,886 |2,886 [2,890 |1,562 [2,894 |1,9113/2,886 [2,885 [2,916 |2,1230 496 5 45 84 44 35 5 19 365 23 amostra : : : : : B : . .

1.21 Nu 2,495 [2,834 [1,674 13,190 [3,109 [1,494 |2,818 [3,161 [3,270 |2,3799 251 37 399 74 041 422 45 43 14 16 amostra À À Ú : À : À À À : 1241 5 3,012 [3,040 [1,423 13,016 [3,004 |2,988 |3,034 [3,044 [3,052 |2,7379 446 |38 049 |52 403 |751 |65 73 o83 14 amostra À : À : À ; À À : 12-21 9 2,964 |3,127 [2,604 |3,030 [2,904 [1,636 |3,071 |3,128 2,3937 2919 |73 593 |56 865 |j69 95 99 4 amostra À À À : À : À À À : 1344 4 2,788 [2,788 [2,781 [2,390 [2,764 2,007 |2,786 |2,721 |[2,8011 |1,2514 249 25 233 os 842 512 84 5 71 36 amostra : : Ú : : ; : À À : 13-21 7 3,137 |3,289 [1,904 |3,246 [3,084 [1,754 |3,249 |3,305 |3,292 |2,6174 558 59 102 31 172 076 86 48 199 37 amostra : À : : : : À : 1411 4 2,762 |-4 2,009 [2,235 [2,755 |2,0110|2,789 [2,767 2,0070 568 462 93 o8 21 84 63 24 amostra 7 - - - - - - - - - - 14-21 2,727 [2,820 [0,924 [3,046 [3,093 |1,163 [3,258 [3,140 |2,868 |2,4577 amostra : : À : : : À : À : 1511 5 3,098 [3,136 [2,935 [2,938 |3,105 |2,625 [2,164 [3,141 [3,154 |2,5636 352 46 404 65 472 568 32 63 833 31 amostra : : : : : B : : À : 15-21 8 2,454 |3,193 [2,582 |3,112 [3,187 [1,584 /2,507 [3,226 [3,198 |2,4062 046 o1 103 77 934 33 8 18 153 2 amostra . . : . . . . . . 16-11 4 3,052 [3,099 [1,241 [2,431 |3,013 |2,372 [3,081 |4 3,101 [2,8058 488 67 505 68 424 046 54 093 16 amostra . . : . . : . . . . 1621 8 3,137 |3,260 [1,720 [3,249 [3,102 [1,813 /3,018 [3,273 [3,259 |2,5608 408 78 804 94 283 674 41 5 211 67 amostra . . : . . . . . . 1744 5 3,186 [3,373 [1,072 |3,355 [3,1173/2,322 [2,100 3,370 /2,8389 85 52 229 73 15 582 16 734 28 amostra . . À . . : : . .

17.21 9 3,203 |3,372 [0,935 |3,372 [3,126 [1,576 1,838 3,380 /2,7536 888 77 486 77 68 484 27 889 26 amostra . . : ' . : . . . À 1811 4 3,305 |3,272 [1,901 |2,919 [3,821 [1,982 3,086 |3,322 [3,303 |1,8841 385 28 014 95 444 075 12 EX) 954 18 amostra : : Ú : : B : : À : 1821 8 2,896 |3,052 [1,685 |2,224 [3,815 [1,410 3,193 |3,292 [2,862 |2,2262 303 65 951 18 222 901 98 28 319 16 amostra . . : . . : . . . 19-1-1 4 3,027 |3,181 [1,823 |2,976 [3,000 [1,958 2,686 |-4 3,189 [2,7165 412 57 423 14 038 824 9 095 53 amostra . : . . . .

19.21 8 3,137 |-4 1,597 |-4 3,061 |2,061 [2,777 |-4 4 2,8097 036 008 074 984 56 48 esse | em Dr 1 rr | mem |

20-1-1 3,101 [3,146 [2,655 [3,128 [2,775 [3,148 [2,800 1,9006 o2 469 66 308 631 02 69 58 amostra . . À . . : . . . . 20:27 7 3,015 [3,210 [0,854 |3,131 [3,093 [1,156 /3,213 [3,139 [3,204 |2,6653 366 72 317 29 606 832 68 99 851 87 amostra 2- : À : : À : +2 4 2,460 2,466 2,425 [2,456 |2,466 2,4352 547 377 785 226 38 41 amostra 2- À . . . .

2.0 0,837 [2,856 [2,839 2,848 2,8395 9 8 585 891 85 amostra 3- . . À . . : . . . 1-2 3 3,007 [2,997 [0,727 [2,129 [2,990 |1,379 |-3,005/2,551 [3,003 |2,2631 954 7 776 |64 522 304 58 53 68 amostra 3- . . : : . . . . .

2.9 4 2,668 [2,671 [1,404 [1,668 [2,668 |2,590 2,668 2,677 |2,6650 12 23 483 74 12 233 12 527 28 amostra 7- : : 1-2 3 2,239 2,434 88 623 amostra 7- À À : À ; :

2.2 4 4 2,259 [2,225 [2,630 [2,668 |1,808 2,5481 12 587 |68 31 909 48 amostra 9- À : À : À : À À : 12 2 2,534 |2,539 [2,528 |2,223 [2,539 2,539 2,534 2,543 |1,4861 474 o1 504 os 006 006 47 585 69 amostra 9- : : À : : : À À À i

2.9 3 2,304 |2,318 [2,316 |2,3805 [2,331 2,307 2,290 [2,333 [2,332 |0,9592 339 17 768 7 009 071 EX) o 459 o2 amostra Ú ; : B B B Ú : i 10-12 2 1,920 [1,923 [1,928 [0,868 [1,933 |1,904 |1,920 [1,935 0,9555 69 56 203 |95 482 385 69 26 72 amostra : : : : : : : : : 10:2:2 3 2,887 [2,394 [2,386 [2,385 |2,395 2,403 [2,388 |2,396 [2,404 |0,8824 38 44 88 88 46 174 38 EF) 733 33 amostra : : B : : ; 11-12 3 4 2,598 [2,628 [1,451 [2,617 [2,627 1,3462 53 043 |36 ou 299 42 amostra . . . . . . ; 11-22 8 2,280 [2,661 [2,444 4 1,472 [2,513 [2,687 1,7770 614 j46 504 931 79 83 8 amostra . . . . . : . . : 12-12 3 2,847 [2,827 [2,155 [2,669 [2,847 |1,273 [2,829 2,345 |1,5452 914 8 736 |33 914 633 |59 64 os amostra . À . . À . . õ ;

12.22 2 2,939 [1,840 |2,790 [2,940 |1,234 2,929 [2,696 [2,326 |1,4617 55 824 |56 428 |115 17 o1 682 |59 amostra . . . 1312 3 2,088 [2,154 [2,138 0,7828 52 399 |757 12 amostra . . õ . . . . õ ; 13-2-2 3 2,467 [2,471 [2,464 [2,326 [2,467 |2,473 [2,470 2,470 [1,0430 513 E 244 |73 513 017 81 807 51 amostra õ . . , õ 14-12 3 2,507 [2,201 [2,503 2,487 2,508 0,9780 024 |O4 307 557 27 41 amostra . : õ : . : . õ ; 14-29 3 3,203 [2,155 [3,198 [2,993 |3,192 |2,907 3,202 3,077 |1,6669 653 36 97 25 o4 356 48 832 78 amostra . : : : : : . : õ 15-1-2 3 3,001 [3,002 [2,996 [2,440 [2,996 |3,000 [3,003 [2,983 |3,003 |2,8986 335 65 103 31 103 021 E) 29 975 78 amostra 6 - - - - - - - - - 15-2-2 2,919 2,390 |1,446 3,152 [1,157 [1,972 [3,174 [3,105 |2,1425 amostra : : À B : : À : 18-12 2 2,188 [2,187 [2,185 [1,121 [2,187 [2,181 [2,191 2,1817 672 29 906 45 287 79 46 9 amostra : : À : : B À : 16:22 5 2,896 [2,887 [0,588 [2,596 |2,843 [1,283 |-4 4 2,893 /2,3993 965 6 031 46 598 515 822 o6 amostra . . . . . . . . . . 18-1-2 3 2,525 [2,512 [2,497 [2,525 [2,422 |2,531 [2,538 [2,542 [2,539 /2,5187 219 41 516 22 626 77 42 46 763 66 amostra : . : . .

18.29 3 4 4 1,212 |4 2,939 1,414 [2,941 |4 4 2,8246 984 133 305 |57 3 amostra : : : : : : : :

191.2 2 1,950 [1,956 [1,949 [1,804 [1,940 |4 1,946 1,955 |1,9538 87 84 39 95 616 45 339 44 amostra . . . . . . . . :

19.02.29 3 2,527 [2,512 [2,512 [2,444 [2,488 2,519 |2,527 2,531 [1,3399 553 78 784 52 401 435 55 669 61 amostra . . . : . ' : À 20-1-2 3 2,736 |2,749 [2,742 |1,705 [2,750 [2,070 [2,163 1,1769 569 41 228 13 857 585 57 22 amostra : : Ú ; : B : : : : 20-29 3 3,154 [2,970 [1,813 |1,959 [3,144 [1,414 2,995 [3,165 [3,015 |1,6934 676 15 662 783 051 485 49 57 519 39 amostra . . . : : . . : . : 1-1 3 3,307 |3,079 [2,774 |1,585 [1,745 [3,081 /3,3803 |1,940 [3,335 |1,6663 195 59 097 5 942 283 o8 7 684 82 amostra . . . . . : . . . . 121 8 3,205 [3,190 [2,898 [2,578 [2,957 [1,003 [3,163 [3,196 |3,209 |2,7038 142 23 631 62 597 147 12 95 298 87 ess Br Er rr rr ee |

22-11 2,782 |2,774 [2,142 [2,193 [2,747 |2,444 |2,780 2,743 |1,2388 967 56 os 83 661 679 15 766 59 amostra . . : . . : . . . .

22.91 6 3,130 |3,209 [1,653 [3,224 [3,091 |1,369 |2,721 [3,240 [3,234 |2,3707 896 44 177 91 525 202 o7 95 193 23 amostra : : À À : : : : : : 23-11 3 3,835 [3,137 [2,826 [2,764 |3,285 |3,3808 [3,137 [3,198 [3,221 |1,6103 318 o4 175 os 077 829 91 26 796 47 amostra : . . . . : 2321 8 4 ” 1,604 2,909 3,269 [3,144 |-4 4 3,136 |1,1781 752 |o2 285 [346 549 |54 amostra . . . . . . . . . . 24-11 4 3,109 [3,017 [3,109 [2,111 [3,1181/3,075 [3,112 [3,038 [2,879 |2,2859 327 97 327 37 3 795 24 46 134 27 amostra . . : . . : . . . : 24-21 9 3,0119 [3,196 [1,972 [3,087 [3,143 [1,963 |3,214 |3,224 [3,066 |2,6035 82 611 |8 481 177 |54 3 696 |3 amostra : : Ú À : : : À À : 25-11 4 3,276 |3,288 [1,783 [2,626 [3,280 [2,431 |3,271 [3,085 [3,294 |2,1030 085 11 196 o1 555 411 66 9 247 68 amostra À : Ú Ú : : : À À : 25-21 7 2,034 |3,139 [1,187 |1,854 [3,149 [2,677 |3,038 |2,815 |3,1511 |2,5673 519 95 141 81 77 885 89 29 92 os amostra À : À À : : : : 26-11 4 2,674 |3,295 [0,849 |3,022 [3,026 |2,950 |-4 3,295 /2,7613 34 73 607 38 683 761 735 48 [Tabela 13-10] amostra 26- À : Ú : À À À À À Ú 21 8 2,2292 [3,245 |[1,2414 [3,028 |2,9846 |3,0304 [3,282 [3,222 |3,2606 |2,4763 24 98 8 24 o2 32 35 56 62 33 amostra 27-|4 F - - - - - - 4 - -

11H 3,2265 3,230 |1,3757 3,195 |3,1567 |2,7140 [3,221 3,2564 |3,1406 61 19 78 24 os 31 78 39 16 amostra 27- . . : . . : . . . .

21 n 3,2672 3,268 |1,2024 [3,288 |3,2288|1,3387 3,275 |3,308 |3,3067 |2,5974 3 38 26 36 69 69 33 os 93 os amostra 28- : : : : À : À À À : 14 4 3,0526 [3,174 |1,5994 [3,090 |2,9602|1,9342 2,959 |2,691 |3,1900 |2,5092 12 63 67 24 98 95 59 34 37 98 amostra 28- . . : . . . . . . .

21 6 2,4273/3,163 [1,0674 3,174 |3,0033 |2,0408 [2,813 [3,128 |[3,1071 |[2,4945 ES) 97 71 21 34 55 7 04 16 27 amostra 29- . . . . . . . . . : 14 3 3,0117 [3,007 |3,0025 [2,480 |3,0133/2,2605 3,013 |3,029 |3,0148|1,2360 83 15 75 76 37 59 34 19 97 95 amostra 29- : . À : . Ú . . . : 21 6 2,9570 [3,219 [1,0669 [3,237 |3,0194 |2,3638 3,061 [3,258 |3,2547 |2,4892 63 97 47 64 18 73 12 77 29 72 amostra 30- À : Ú : À Ú À À À Ú ” 4 2,9250 [3,021 |1,5292 [2,794 |2,8579 |1,5247 [3,030 [2,311 |3,0549 |2,3348 36 45 os 67 47 57 22 94 72 13 amostra 30- À : À : : Ú À À À ; 21 6 2,8195/3,106 |[0,8120 [3,187 |3,1083 |1,5480 [2,798 [3,260 |3,2250 |1,9823 21 29 8 14 76 9 56 6 43 95 amostra 31- À : Ú : À Ú À À : ” 4 2,8613/3,159 |1,7449 3,196 |3,2804 |1,7337 [3,271 3,2159 [2,4389 43 83 o1 8 o9 52 15 51 53 amostra 31- : : Ú : Ú À À : 2 6 3,2711 [3,254 |1,5669 3,131 |-4 1,7323 [2,886 3,2518 [2,2404 85 25 66 oa 3 78 79 65 amostra 32- Ú : : : : À À À : H4 4 1,7605 [2,890 |1,4198 2,952 |3,0573[2,0382 3,059 |-4 2,6891 [2,1971 36 n 28 26 53 54 86 97 44 amostra 32- : : À : : Ú À À : ” 9 2,7885 3,288 |0,8402 3,213 |3,0235 |1,1941 |3,215 3,1936 [2,4356 61 28 26 o6 26 1 41 os 93 amostra : : À : : Ú À À À ; HCot-11 3 3,2425 [3,269 |2,6165 3,164 |3,2570 |1,2760 [2,980 |[3,263 |3,0760 |1,4823 51 os 22 32 77 85 35 os 9 62 amostra . . . . . . . . : HCo1-21 3 3,2588 [3,263 |3,2573 2,762 |3,2382 |3,2104 |4 3,170 |[2,8312 |1,7230 94 44 89 12 8 31 51 32 46 amostra . . . . . : . . . : HomM-34 2 3,3270 [3,311 |2,4555 |2,766 |3,3194/1,6079/3,161 |3,320 |2,8207 |1,1286 42 96 76 41 36 51 83 95 42 86 amostra : : . : À õ À B Hoge-4+1 3 3,1452 3,159 |2,1252 2,835 |3,1452/2,0648 [3,134 |3,123 /2,9419|1,6296 27 73 12 22 27 59 98 73 18 69 amostra À : À : À À À À À À Hopes 2 3,1022 3,091 |3,0672 [1,794 |3,0831 [3,0577 [3,106 |2,564 |3,1022/0,9316 46 97 84 51 67 9 16 54 46 5 amostra Ú : À : À À À À À ; HC02-3-1 3 1,8428 [3,129 |2,4217 [2,100 |3,1298[2,1744 [3,174 [3,149 |2,6488 |1,2528 17 86 32 39 6 32 83 27 o1 57 amostra : : À : À À À À À : HooS-1-1 3 3,0084 [3,015 |2,9950 [1,418 |2,1291|2,9297 [3,015 [2,397 |2,6815 /2,8256 99 4 un 98 67 75 4 29 44 12 amostra À : À : - À À À À : 2 2,9314 2,925 |2,9030 [1,898 2,9217 [2,932 [2,939 |2,9258 |2,6533 HC03-2-1 2,8655 48 9 7 13 81 85 91 98 56 amostra : : À : : À À À À : HCo3-3-1 3 3,0331 [3,033 |2,9950 [1,857 |3,0109|3,0055 3,027 [3,028 |2,9771 [2,7778 49 15 os 15 44 66 49 9 2 77 amostra 3 - - - - - - - - - - HCO04-1-1 3,1556 [3,151 |[1,4761 [2,675 |3,1994 |1,8550 [2,731 [2,876 |2,9762 /1,7410

TE FFEFrFEFEE amostra . . . . , . , Ú HC04-2-1 2 3,2235 3,056 |3,1863 2,014 |3,1534|3,2053 [3,039 [3,212 [3,2053/0,8610 37 85 95 31 99 12 25 81 12 27 amostra : : . : . , , Ú HCo4-3-1 3 2,8835 [3,127 |2,6694 [2,097 |3,1939|2,8743 [2,386 [3,219 |3,2012/0,9175 34 82 56 26 35 61 66 44 83 78 amostra . . . . . . . . HCo5-11 3 3,3313 [3,319 |[3,3121 [2,825 |3,3179|3,2552 [3,328 [3,300 |3,1948 /2,5012 65 42 25 93 55 2 35 7 54 21 amostra . - . . . . . . 2 3,0341 [3,042 2,087 [3,0278 |2,9821 [3,038 |2,232 |3,0373/2,1801 HC05-2-1 3,0141 6 13 53 89 31 92 44 3 3 amostra . . . . . . . : HC05-3-1 3 3,1415/3,169 [3,1386 [2,175 |3,1546 |3,0580 [3,124 [2,545 |3,1591 |1,3512 12 73 45 6 51 38 59 97 21 83 amostra . . . ; . . . : HGI6-1-1 2 2,2709 [3,290 |2,4780 [3,060 |3,3205 |1,3482 [3,337 [3,340 |3,0485 1,3779 37 61 19 57 77 52 14 22 62 96 amostra . . . . . . . . . . HCo6-2-1 2 2,8708 [2,893 |2,8804 2,346 |2,8772|/2,8853 2,882 |2,697 |2,8935 2,7514 57 55 37 87 2 o8 os 41 49 81 amostra . . . . . . . : HCo6-3-1 2 2,3842 [3,325 |3,3116 [2,732 |3,3323 |2,4298 [3,317 [2,780 |[3,1412/1,8405 98 85 os 72 28 51 88 4 6 98 amostra . . . . . . . . Hoo7-1+1 3 3,2027 [3,207 |[3,1961 [2,515 |3,1928|3,1018 3,196 |[2,696 |3,2060 |3,1348 42 78 n 62 34 41 n 55 95 42 amostra . . . . . . . . Hco7-21 3 2,7515/2,730 [2,7041 [2,270 [2,7236 |2,7395 [2,745 [2,024 |2,7515/2,7500 51 8 26 4 17 7 52 36 51 35 amostra — |3 | - - - - - - - - - -

HC07-3-1 3,0348 [3,046 |3,0348 [2,564 |3,0413|3,0348 3,034 [3,003 |2,5566 |2,1796 33 37 33 27 88 33 83 46 28 29 amostra . . . . . . . . . : HGos-1-1 3 3,3217 [3,097 |[3,3121 [2,730 |3,2980 |3,3333 [3,278 [3,331 |2,7669 1,5729 77 o1 25 42 39 15 47 65 23 21 amostra : : À : À À À À À : HCos-2-1 2 2,9470 [2,955 |2,9354 [2,350 |2,9437 |2,9354 [2,938 |2,686 |2,9504 2,7935 81 61 1 12 14 1 71 77 74 33 amostra . . . . . . . . . : HCoB-3-1 3 3,2329 [3,209 |2,7090 [3,054 |3,2078|2,6365 2,940 [3,219 [2,9019 /1,8490 44 46 32 56 33 21 62 37 5 14 amostra : . . . . . . . . . HO08-41-1 3 1,8937 [3,127 |3,1302 2,527 |3,1254 |2,9740 [3,130 [2,965 |3,0671 |3,0549 58 os o4 75 92 4 2 31 oa 89 amostra : : Ú : Ú Ú Ú Ú À : Hcog-2-1 3 2,9731 [2,978 |[2,9667 [2,428 |2,9830 |2,9153 2,973 [2,940 |2,9731 |2,8904 59 o7 o1 39 3 7 16 28 59 68 amostra : : À : : À À À À ; HC09-3-1 3 3,1993 [3,231 |3,2088 2,647 |3,1993|3,1380 [3,221 [3,151 |3,0643 1,2098 82 93 92 54 82 71 91 9 7 39 amostra : : À : À À À À À : Ho10-11 2 3,0087 [3,024 |2,9983 1,944 |2,9725/3,0319/ 3,010 [2,468 [3,0163/3,0178 44 o9 14 39 92 73 25 14 5 87 amostra À : À : À À À À : HC10-2-1 1 2,0236 [2,026 |2,0186 1,899 |2,0137 |2,0286 2,018 2,0269 |2,0371 39 98 75 95 68 6 68 79 59 amostra À : : À À ; 3 4 4 2,7070 [2,538 [2,7039 [2,7118 2,713 4 1,7768 HC10-3-1 93 91 69 23 41 45 amostra : : À : : : À À À ; Ho 3 3,1796 [3,181 |[3,1684 [2,262 |3,1828|3,1976 3,179 [3,045 |3,1844 1,6125 23 99 67 44 79 61 13 67 45 amostra : : À : : À À À : Ho11-21 3 2,9271 [2,927 |2,9122 [1,399 |2,9305 |2,8502 [2,923 2,9322 [2,9238 75 18 84 43 55 44 82 55 22 amostra : : À i : À À À : HC11-31 2 2,5457 [2,550 |2,5145 0,755 |2,5373 |2,5440 [2,549 2,5440 [2,5113 34 87 24 35 o1 34 15 34 65 amostra . . . : . . . . . : HC12-1+1 2 2,6171 [2,639 |[2,6188 1,314 |2,6238 | 2,6255 2,623 [2,639 /2,6392 /1,8004 88 29 49 os 7 57 87 29 9 67 amostra . . . . . . . . HC12-21 2 2,6189|-4 2,6154 [2,287 [2,6154 |2,6189 [2,617 2,6294 [2,2772 1 49 68 49 1 18 6 77 amostra : . . . . . . : Ho1a-34 3 3,1726 [3,172 |3,1605 | 2,429 |3,1605/3,1726/3,167 [3,150 [3,1571 |2,5564 78 68 9 46 9 78 46 49 97 os amostra À : À : À À À À À Ú Hot 2 2,9829 2,973 |2,9332 [2,493 |2,9401 [2,9647 [2,986 |2,915 /2,9617 |2,9603 75 77 o3 62 75 5 oa 59 86 n amostra : : À : À À À À À : HC13-2-1 1 3,0368 [3,031 |3,0272 2,591 |3,0100 |3,0409 [3,036 |/2,919 |2,8887 |3,0049 2 34 75 64 86 76 82 18 27 31 amostra À : À : À À À À À À HC13-3-1 3 2,9454 [2,958 |2,9507 2,425 |2,7378|2,9375 2,940 [2,938 |2,9589 |0,8247 7 92 99 91 88 97 21 9 17 os amostra : : À : : À À À À : HO14-1+1 2 3,1436 [3,117 [3,1339 [2,372 |3,0637 |3,1219|3,140 [2,217 |[3,1520 |[2,3772 23 95 87 72 47 04 85 99 56 29 amostra : À i À À À À : HC14-21 2 4 2,816 |2,7948 [2,247 |2,7804 /2,8110 |-4 2,598 |2,8136 |2,7733 18 73 84 35 75 47 22 92 amostra 3 - - - - - - - an - - HC14-3-1 3,0812 [3,076 |3,0713 2,551 |3,0483 |3,0264 [3,079 2,8299 |1,2443

COLE FEFFEIEE rs amostra : À : : : : : B Heisas |? 2,8001 [2,776 |1,8044 [2,537 |2,7690 |1,6517 [2,804 [2,779 |2,8041 |1,6856 29 65 4 62 95 o9 17 2 69 71 amostra : : : : . : : : HC15-2-1 2 2,7459 [2,755 |2,7444 2,060 [2,7384 |2,3186 2,726 [2,758 |2,7567 [2,7180 94 2 78 28 67 99 69 32 56 6 amostra . . . ; . . . . HC15-31 3 2,5274 [3,329 |3,1552 2,882 |3,3054 |1,3743 3,339 |3,352 |3,3506 |1,2671 938 49 32 23 28 75 22 os os 67 amostra 21- . . . : : . . : . . 1º 3 2,9551 [2,885 /2,9282 [1,217 |1,7473|2,9625 2,958 [1,454 |2,9746 |2,8447 64 1 34 31 18 38 1 98 o2 22 amostra 21- . . . . . : . . . .

2.9 4 3,0903 [3,107 [3,0202 [3,100 |3,0931 [1,1055/3,113 [3,127 |3,1294 |2,7042 79 3 83 17 54 8 os 92 27 16 amostra 22- . . . . . . . . . N 1-2 3 3,1684 [3,173 |[3,1528 2,809 |3,1637|3,0580 [3,166 [3,183 |2,9126/0,5792 65 26 41 44 19 85 88 02 63 93 amostra 22- . . . . . ; . . . :

2.9 5 3,2033 [3,193 |2,2305 3,203 |3,1365 |1,7655 3,025 |3,230 |3,2321 |[1,4072 42 33 n 34 76 55 15 78 31 49 amostra 23- . . : . . . : - : 12 2 3,1542 3,135 |3,1439 [1,504 |3,0458 |3,1687 3,162 |1,964 3,1634 1,7456 3 21 8 34 o6 29 os n 35 amostra 23- . . . . . . . :

2.9 4 3,1660 [3,131 |[3,1477 2,103 |3,1046|3,1477 [3,167 [2,511 [3,1575/1,7931 29 6 85 16 47 85 47 o7 13 66 amostra 24- . . . . . . . . . . 12 3 2,9253 [2,911 |2,9140 2,256 |2,8714[/2,8981 [2,926 |2,780 [2,9215/2,8759 94 57 47 3 12 64 67 18 79 48 amostra 24-|4 F - - - - - - - - -

2-2 3,0043 [2,987 |2,9625 1,903 |2,3993 |3,0030 [3,003 |2,828 |3,0134 /1,0916 12 87 68 86 62 26 os 65 28 amostra 25- . . . . . . . . . : 12 2 2,9005 [2,897 |2,8910 2,564 |2,8951 |2,9060 [2,896 |2,910 /2,9033 1,4624 79 85 93 68 33 94 49 28 28 69 amostra 28- : : : : À À À À À ; 1º 2 2,6652 |2,669 |1,7094 [2,465 |2,6614 /2,6808 2,666 |2,655 |2,6755/1,9159 53 1 52 14 37 58 53 15 93 26 amostra 28- : : : : : : : : : :

2.2 3 1,9657 [1,957 |1,9446 1,943 |1,9446 |/1,9529 1,962 [1,968 |1,9501 |1,9571 22 18 69 3 69 68 86 61 84 78 amostra 29- . . . . . . . . . : 1-2 3 2,3252 2,330 |2,3252 [2,306 |2,3252/2,3198 2,328 |2,344 |2,3476 |1,5363 78 78 78 57 78 49 o2 83 98 36 amostra 29- : : Ú : Ú Ú Ú Ú À :

2.2 3 2,9477 [2,945 |[2,9528 [2,815 |2,8888 |2,9711 [2,959 [2,964 |2,9711 |1,2368 8 26 59 95 42 21 29 51 21 o7 amostra 30- : : : : À À À À ; 1-2 3 3,1449 [3,129 |-3,134 [2,925 |3,1206 |3,1394 [3,149 [3,156 |[3,1547 1,7167 61 96 34 77 46 14 21 84 43 amostra 30- : : À : : Ú À À À À

2.9 3 3,2881 [3,260 |3,0645 3,019 |3,2739 |1,7282 3,138 [3,307 |3,1297 0,9259 52 12 7 42 12 86 93 39 9 46 amostra 33- : : À : À À À À À ; ” 4 3,1179 [3,185 [2,8916 3,074 |2,7891|3,1941 [3,166 [3,083 |3,0820 |1,8448 84 35 66 1 6 81 8 22 72 5 amostra 33- : : À : : À À À À : 2 9 2,7904 [3,1117 /2,6937 [2,810 |3,0446 |2,8992 [3,144 [2,971 |[3,1748 /2,7648 66 5 76 72 4 18 os 26 75 49 amostra 33- : : À : : Ú À À : a 7 3,0940 [3,244 |0,9569 3,225 |3,0243 |1,4409 [3,242 |-4 3,2339 [2,7572 29 16 48 31 93 33 68 os 69 amostra 34- : : Ú : : À À À À : 4 4 2,9646 [2,947 |1,7881 [2,871 |2,9230 |2,9242 [2,966 |2,963 |2,9446 |2,9084 97 3 51 63 56 99 os 33 8 15 amostra 34- : : : : - Ú À À À : 21 6 3,0560 [3,283 |1,3720 3,278 3,2835 1,9536 [3,287 [3,286 |3,3054 |2,6299 58 5 63 17 ' 88 54 19 94 9 amostra 34- . . : . . : . . . .

a4 10 3,2433 [3,228 |1,4877 [3,240 |3,1947 |1,7065 3,224 [3,274 |3,2641 [2,5717 7 74 oa 67 81 52 83 2 54 62 amostra 35- . . . . . . . . . : "” 4 3,2092 [3,207 |3,1524 [2,499 |3,2182|2,4518|/3,213 [2,633 |3,1485 1,2427 87 81 o8 77 73 81 76 58 25 69 [Tabela 13-11] amostra 35- À À : : À À : : À À 21 1 2,5211 [3,113 [3,0576 |3,096 |3,0693 |0,9625 3,053 [3,032 |3,1304 [2,4409 72 96 25 7 82 54 78 59 n 93 amostra 36- . . . . . . . . . .

4 2 2,9050 [3,342 [2,7095 |2,203 |2,8876 |3,3631 [3,353 [2,635 |3,3469 [2,4761 24 37 57 42 15 36 81 69 55 amostra 36- . . : . . : . . . .

21 7 3,1360 [3,253 |1,4281 [3,364 |3,1541 |1,3247 [3,366 |3,386 |3,3626 |[2,8119 34 71 99 12 5 62 99 1 97 68 amostra 36- . . : . . : . . . .

ao 3,0993 [3,276 |1,8924 [3,266 |3,0123|1,1646 3,289 [3,299 |3,2862 |[2,6334 38 36 49 72 56 57 o7 22 1 74 amostra 37- . . Ú : . Ú . . .

"” 4 3,1722 [3,167 [2,6272 |1,979 |3,1675|2,3447 [3,176 |4 3,1706 |[3,0879 6 72 9 97 64 9 77 os amostra 37- À À À À À Ú À À Ú 21 6 3,1173 [3,123 [3,0643 [3,036 |3,1071 |1,6238 2,223 |-4 3,1278 |[1,6283 57 33 97 45 04 97 25 59 45 amostra 38- À À Ú : À : Ú : À À H 5 3,2479 [3,245 [1,1773|3,190 |3,2724 |3,1099 [1,865 [3,272 |3,2784 |[2,7494 97 2 51 36 E 49 46 49 61 64 amostra 38- À À À : À À : : À À 21 3,2864 [3,222 [0,8657 |3,238 |3,3085 |2,1896 2,400 [3,286 |3,2951 [2,7432 55 39 56 83 8 6 97 45 7 os amostra 39- . . Ú . : . . .

"” 4 3,2583 [3,279 |0,8295 3,202 |-4 1,4798 [2,484 |-4 3,2765 [3,0729 71 63 34 79 24 69 32 92 amostra 39- . . . . . . . . . : 21 2,7944 [3,255 [2,2148 [2,423 |3,2432 |2,4411 [3,229 [3,269 |3,1442 [1,3590 96 65 26 51 84 7 78 99 45 55 amostra 40- . . : : . . : : õ À 14 4 3,3170 [3,320 |2,8540 [2,547 |3,3232/3,0897 [3,315 [2,850 |[3,3186 /0,9111 6 15 25 2 64 o2 52 33 o2 18 amostra 40- À À Ú À À Ú À - Ú 21 7 3,0722 [3,146 [1,0997 [3,100 |3,0340 |1,0411 [2,955 |-4 31399 1,7545 4 61 os 17 |jo8 |56 |57 : 88 amostra 33- Ú À À 1-2 3 4 1,488 |2,6920 |2,6935 4 34 EX) 63 amostra 33- À À À Ú À À À À À À

2.9 3 2,5902 [2,593 |2,5809 [1,356 |2,5824 |2,5824 [2,587 |2,601 |2,6029 |2,1748 64 41 57 14 95 95 14 38 91 os amostra 33- À À À À À À À À À Ú 3-0 3 2,4457 [2,420 |2,3983 [2,343 |2,3946 |2,3996 2,444 |2,440 |2,4084 |1,3361 94 12 69 35 41 19 4 26 69 55 amostra 35- À À À Ú À À À À À Ú 12 2 2,5580 [2,551 |2,5361 [1,351 [2,5427 [2,5461 [2,556 |2,556 |2,5546 |1,1218 92 23 61 38 92 46 36 36 45 85 amostra 35- 3 - - - - - - - , - - 2-2 2,4152 [2,423 [2,4137 [1,167 |2,4137 |2,4044 2,416 2,4216 2,4152

CTF FFFrFFFEF r amostra 41- À À À : À À À À À H 4 2,9971 [2,992 [2,9847 [2,011 |2,9756/2,9610 2,993 |-4 3,0018 | 0,8858 1 43 45 78 97 24 99 39 04 amostra 41- À À Ú À À À À À À À 21 2,1205 |3,082 |1,5703 [3,042 |2,8235 |2,1875 3,104 [3,100 |3,0872 |2,2893 98 os 76 78 18 69 47 43 32 8 amostra 42- À : : : : : : : : À +14 4 2,3735 [3,194 [2,2852 [3,203 |3,1211 |3,2061 [2,144 [3,225 |3,2150 [2,7721 61 53 36 19 os 14 52 62 o7 49 amostra 42- . . . . . . : . .

21 7 3,3454 [3,342 |3,0466 [3,244 |3,3469 |3,3276 2,897 |-4 3,3469 |3,2518 43 95 62 65 6 54 65 81 amostra 43- . . . . . : . .

14 4 3,0816 [3,050 [3,0587 [3,008 |2,9508 |1,7763 2,563 |-4 4 2,5987 6 52 97 88 92 23 95 o9 amostra 43- . . . . . : . . . .

21 7 2,8448 [2,849 |2,0084 [2,831 |2,8269 |1,2316 2,347 |2,851 |2,8482 |2,4439 75 9 19 76 46 85 17 58 15 5 amostra 44- . . : . . . . . : H 4 3,1711 [3,185 [1,5296 [3,067 |3,1585 |2,4648 [3,164 |-4 3,1711 [1,5625 66 83 1 58 31 86 8 66 os amostra 44- : . : . . : . . . .

2 1,8357 [3,251 |1,4106 [3,203 |3,2367 [1,5172 2,879 [3,251 |3,2726 |2,0124 37 96 69 58 21 47 58 96 os 83 amostra 45- . . . . . . . . . .

1H 4 3,2296 [3,198 [3,2048 [2,597 |3,2145[/3,2212| 3,219 [2,548 |3,2195 /3,0810 39 43 15 96 75 os 54 75 38 84 amostra 45- . . . . . : . . . .

21 2,1421 [3,070 [2,2503 [3,048 |3,1545 |1,5977 [3,102 [3,156 |3,1630 /2,1469 77 28 61 56 os 34 04 2 38 67 amostra 46- | 4 - - - - - - - FP - -

1H 3,1278 3,107 |3,1007 [2,930 |3,1090 |2,8660 [3,102 3,1090 | 0,8896 17 38 71 73 43 os 41 43 71 amostra 46- . . . . . . . . .

” 7 3,3644 [3,362 |2,1512 |3,354 2,0230 [2,285 |3,337 |3,3726 |2,2387 77 86 37 86 13 3 77 56 29 amostra 47- À À Ú À À Ú À À À À H 5 3,0975 |3,165 |1,8457 [3,061 [3,0887 |1,5063 [3,153 |3,165 |[3,1549 |2,2873 66 26 9 77 os 49 22 26 19 o1 amostra 47- : À À : : : : : : À 21 7 3,1103 [3,192 |0,9160 [3,164 |3,0834 |1,1757 3,166 |3,204 [3,1313/2,6120 58 44 82 23 61 os 97 26 66 47 amostra 48- . . . . . : . . . : 14 4 3,0310 [2,970 |3,0016 [2,800 |2,9914 /1,9908 | 3,028 [3,053 |3,0351 |1,2871 os 61 86 15 97 68 26 64 62 97 amostra 48- Ú . Ú . . : . . . Ú 21 2,5554 [3,085 [2,2194 [3,133 |3,1288|1,5230 [3,233 |3,231 |3,2404 |2,3045 97 86 19 49 32 54 o4 57 66 76 amostra 49- À À Ú : À À À : À À ” 4 3,1421 [2,960 [1,7759 [3,172 |3,0051 |[2,1036 [2,750 [3,242 |3,1714 /2,5850 59 66 58 59 44 45 58 o7 23 71 amostra 49- À À Ú : À À À À À 21 Eb! 3,1133 [3,021 [1,6090 [3,225 |3,0521 |[0,8389 | 2,945 |-4 3,2442 |2,7995 84 13 45 85 63 65 o8 27 8 amostra 50- À À À À À - : À À À ” 4 3,1846 [3,168 |3,1684 [2,876 |3,1627 31042 3,175 |2,804 |[3,1846 |2,4770 28 46 59 17 26 ' 73 42 28 58 amostra 50- À À À : À : - : À À 2 3,1192 [3,119 [2,9377 [2,928 |3,1237 |3,0974 ams 3,101 [3,1178 |[2,3828 99 3 7 os 99 71 ' 75 o9 89 amostra 51- : À À : À Ú : À À H4 5 1,9899 [2,957 |2,6781 [2,975 |3,0357 |1,6220 [3,043 |-4 3,0793 |2,1998 46 42 93 7i o4 21 82 81 96 amostra 51- À À Ú : À À : : À Ú ” 2,8036 [3,044 |1,2028 |3,125 |3,0949 |0,9381 [3,072 [3,115 |3,1267 [1,9383 39 4 38 4 82 65 58 92 73 97 amostra 37- À À À À À À : À À 1º 2 2,5902 [2,582 |2,5949 [0,759 |2,5824 |2,6046 [2,598 |-4 2,6046 |2,5643 64 49 93 21 95 o9 17 os 96 amostra 37- . . : . . . . . : 22 3 2,6558 |-2,835 [2,8809 [1,411 |2,8898|2,9081 [2,898 [2,518 |2,9034 |1,9463 44 os 58 02 55 88 42 94 41 amostra 38- . . . . . . . . . :

1.9 3 3,2182 [3,199 |3,1888 [2,558 |3,1888|3,0772 3,208 |3,179 |[3,1626 |1,5744 76 46 47 88 47 14 77 95 94 23 amostra 38- . : : : . : : : õ :

2.9 5 3,3213 2,841 |1,7218 3,281 |3,2462 /1,8328 2,879 [3,325 |3,3166 |2,7463 o1 61 37 46 6 9 59 96 89 43 amostra À À À À À À À À À À HoNo14+ 3 2,9386 [2,946 |2,9435 2,739 |2,9274/2,9519 2,938 [2,851 |2,9535 |2,8752 92 9 99 89 53 o4 69 99 84 45 amostra À À À À À À À : À À HCN02-1-1 2 3,0911 [3,107 [3,0882 |2,947 |3,0328 |3,1135 [3,101 [3,053 |3,1150 /2,38060 9 47 95 77 35 43 48 64 75 75 amostra À À : À À À : : À Ú HCN03-1-1 3 2,8643 [3,046 |3,2629 [2,397 |[3,2314 |/2,6876 3,250 |3,082 |[3,2770 |[1,9393 47 36 o7 46 98 37 67 7 96 6 amostra À À À Ú À À : À À À HCN04-1-1 2 3,0947 [3,075 [3,0947 [1,635 |3,0037 |3,0916 [3,079 [2,871 |[3,1087 [2,4349 44 24 44 27 os 85 66 67 8 32 amostra À À : : À À À Ú HCNO5-1-1 4 3,0890 [2,612 |3,2240 [3,105 |3,1990 |2,0442 |-2,314 |-4 3,2424 |1,4078 os 62 os 91 98 1 89 34 amostra 3 - - - - - - - - - - HCNO06-1-1 2,9163/2,916 [2,9076 [1,531 |2,8744 |2,9358 [2,925 [2,919 |2,9343 [2,8852

TF EFEFEFEEFE amostra . , . : : . . : , À Heno7as |? 3,0517 3,028 |3,0241 [1,604 |2,9482 |3,0384 3,062 2,943 |3,0443 |1,4812 31 41 71 15 81 58 34 59 o7 69 amostra : : : : : : : : : : HCNO8-1-1 3 2,9631 [2,931 [2,5360 [2,111 |2,9329|2,5743 [2,971 [2,886 |2,9519 2,1840 24 65 92 79 72 64 72 55 16 28 amostra . . . . . . . . . . HCN09-1-1 2 2,6895 [2,683 [2,6767 [2,343 |2,6371 |2,6987 2,684 [2,712 |[2,6987 [2,6974 66 13 92 62 19 37 41 18 37 15 amostra . . . . . . . . . ; HCN10-1-1 4 3,1445 3,131 |3,1329 [2,337 |[3,1257 |2,9896 [3,124 [2,993 [3,0891 [1,0563 67 47 o7 6 76 65 36 82 68 7 amostra . . . . . . . . . . HONH-1H 2 2,8865 [2,892 [2,8741 [2,687 |2,8695 |2,8834 [2,884 |2,737 |2,8881 |2,8756 67 EX) 13 41 33 2 99 o7 49 5 amostra . . . . . . . . . . HON12-4 3 2,8172 2,807 |2,7874 [1,172 [2,7874 |2,8118 [2,829 |2,844 |2,8294 |2,8118 18 94 34 85 34 9 45 89 53 9 amostra . . . . . . . . . ; HCN13-1-1 3 3,0092 [2,997 [2,9884 |2,580 |2,9855/3,0016 3,016 [2,828 |3,0031 [1,9898 29 21 02 98 o7 76 92 59 76 57 amostra . . . . . : . . . . HCN14-1-1 3 3,0698 [3,078 [2,7187 [2,854 |3,0712|1,3583 3,059 [3,096 |3,0262 |1,0964 43 53 76 os 78 28 92 44 4 86 amostra . . . . . . . . . . HCN15-4-1 2 3,1225/3,103 [3,0939 [2,053 |3,0658 |3,1225|3,126 [3,096 |3,1181 [1,9892 31 74 49 69 34 31 99 72 22 53 amostra . . . . . . . . . ; HCN16-1-1 3 3,1883 [3,164 |3,1725 2,988 [3,1441[3,1803/3,191 13,185 |[3,1788 |1,6647 13 92 76 82 61 73 53 12 02 78 amostra — |2 - - - - - - 4 | - - -

HCN17-1-1 3,2071 [3,183 |3,1704 [2,605 |3,0898 |3,0875 3,050 |3,1747 [1,0169 12 31 72 os 87 58 84 oa 87 amostra . . . . . . . . . . HCN18-1-1 2 3,0662 [3,035 [3,0545 [2,491 |3,0595 |2,2378 [3,061 [2,468 |2,8611 /2,0140 86 os 25 46 27 os 21 94 os 38 amostra À À À : À À : : À À HENI91+ 4 3,0865 2,827 |2,6206 2,343 |3,0544 |2,4564 [3,096 |2,917 |3,0802 |2,2453 62 os 81 61 9 99 18 93 68 31 amostra . . . . . . . . . . HCN20-11 2 2,8282 [2,805 [2,8040 |2,265 |2,8040 |2,8282 [2,823 [2,795 |2,8282 [2,7840 29 57 96 os 296 29 6 38 29 26 amostra . . . . . . . . . . HCN21-1-1 2 2,9126 [2,920 [2,9032 [2,310 |2,8253 |2,9206 [2,917 [2,873 |2,9158 |2,9142 85 68 78 23 1 84 47 31 67 73 amostra . . . : . . . . . Ú HCN22-1-1 3 3,0362 [3,028 [3,0136 1,953 |3,0210|3,0332 3,033 [3,003 |3,0316 /2,9950 81 62 95 76 294 o1 2 54 69 29 amostra À À À À À À : À À HoN23-4-1 3 2,9999 [3,006 |2,9936 [2,443 |2,9588 |2,8604 3,001 [2,627 |-4 2,9094 54 39 14 3 51 o 55 66 78 amostra À À À À À À À À À HCN24-1-1 3 2,9323 [2,933 |2,9403 [2,734 |2,8354 |2,9403 2,932 [2,933 |-4 2,8392 39 94 97 45 29 97 34 94 78 amostra À À À : À À : À À HCN25-4-1 2 3,0841 [3,093 [3,1017 3,053 |3,0841 |3,0937 [3,082 |-4 3,1050 |2,9977 95 71 94 92 95 os 63 71 59 amostra À À À : À : À À 3 2,8072 [2,808 |2,8024 [2,771 |2,7745 2,807 |-2,822 /2,7913 |2,8088 HCN26-1-1 26 84 o9 6 8 23 74 43 amostra À À : : À À : : À À HCN27-1-1 2 3,1574 [3,160 [3,1665 |3,122 |3,1485/2,6011 [3,165 [3,177 [2,6011 [2,8716 61 47 41 938 67 58 o1 38 58 71 amostra À À À : À : : : À Ú HCN28-1-1 2 3,0947 [3,093 [2,0930 [2,376 |3,1076|3,0087 [3,096 [3,106 |3,0916 1,1729 78 19 33 58 42 77 36 o1 15 54 amostra À À : : À À : : À À HCN29-1-1 2 3,0635 [3,050 [3,0602 |2,399 |3,0721 |2,9519/3,058 2,756 |3,0231 [3,0094 85 22 os 94 52 97 53 66 19 27 amostra . . . . . : . . . . HCN30-1-1 3 3,3414 [3,073 |3,3347 [3,201 [3,3414 |1,0244 2,855 |3,336 |3,3500 |2,7844 6 92 27 938 6 58 38 4 26 98 amostra . . . . . . . . . : HOoNSAA 2 3,3391 [3,822 |3,3274 [2,871 |2,3430 |3,3324 [3,339 |3,325 |3,3425 |1,3145 63 52 48 76 83 3 16 8 7 62 amostra . . . : . . . : . . HoNS2411 2 3,0743 [3,076 |3,0692 [2,049 |3,0900 [3,0900 [3,074 [3,070 |3,0812 /3,0608 48 o7 29 66 79 79 35 EX) 69 28 amostra À À À À À À À À À À HoNa314 3 3,1958 [3,201 |3,1815 2,823 [3,1832/3,0997 [3,195 [2,161 |3,1886 |2,4303 85 39 26 5 95 os 88 o1 46 85 amostra À À À À À À À À À HCN34-1-1 2 2,8884 [2,890 |2,8938 [2,760 |2,8993 |2,8938 2,883 |-4 2,8974 [2,8830 12 21 29 34 15 29 os 79 61 amostra À À : À À Ú : À Ú HCN35-4-1 3 3,2427 [3,164 |3,2233 [2,396 |3,2125|1,2533 [3,239 |4 3,2313 [1,5743 o4 62 99 67 22 45 43 39 68 amostra À À À À À À : : À À HCN36-1-1 3 3,0311 [3,023 [3,0233 [2,407 |2,9991 |[3,0280 [3,029 [3,018 |3,0375 /2,2912 56 33 3 53 97 o9 58 7 19 24 amostra À À : : À : : À À 2 3,1449 [3,146 |3,1370 [2,866 |3,1141 |[3,1370 [3,146 |-4 3,1546 |3,1053 HCN37-1-1 88 59 77 91 74 77 59 76 41 [Tabela 13-12]

amostra À À À : : À À : À : HCN381+ 3 2,8473 2,743 [2,847 2,491 |2,8350 |2,8632 [2,850 |2,786 |2,8568 |2,7889 26 6 326 34 os 36 46 22 02 44 amostra À À À : : : À : À : HCN39-1-1 2 3,0997 [3,094 |3,087 [2,827 |3,0585/3,0941 3,096 [3,080 |[3,1101 /3,0711 97 13 436 63 os 34 39 84 79 27 amostra . . . . . . . . . : HCN40-1-1 3 3,0490 [3,031 [3,020 [2,258 |3,0081[3,0571 3,057 [3,061 |2,7506 |1,0030 o7 92 476 74 02 25 18 24 66 oa amostra . . . . . . . . . : HOoNHAA 2 3,0337 [3,025 [3,021 |2,281 |2,9760|3,0011 [3,036 [2,679 |3,0410 1,8136 47 36 815 99 58 31 17 29 67 68 amostra : : : : - : . . : 4 3,0959 [2,940 [2,185 |2,974 1,4523 [3,286 [3,209 |3,3111 |1,9481 HCN42-1-1 3,2132 75 61 267 |55 81 31 14 3 82 amostra À À À : À À À À À HONG 3 3,0194 [2,990 [2,991 |2,959 |2,8987 |3,0233 3,024 |-4 3,0233 |2,9871 63 79 998 |38 33 46 65 ES) 86 amostra À À À : À À À : À À HCN44-1-1 2 3,1085 2,896 |3,093 |2,389 |3,0230|3,0922 3,112 [3,043 |3,1215/2,6600 73 54 509 14 52 77 42 45 38 49 amostra À À À : À À À : À Ú HCN45-41-1 2 3,1070 [3,090 [3,076 [2,325 |3,0380 |3,1185 3,113 [3,094 |3,1082 |1,7869 19 86 465 92 87 67 4 54 87 76 amostra À À À : À À À : À Ú HCN46-1-1 3 2,8590 [2,866 |2,859 2,200 |2,8502 |2,8741 2,854 [2,851 |2,8695 |1,2204 32 51 032 oa 28 13 61 68 33 23 amostra À : À : À : À : À : HCN47-1-1 3 3,0442 [3,019 |3,029 |2,460 |2,9826 |3,0576 3,045 [2,961 |3,0495 |3,0222 24 77 898 76 os 71 55 31 53 79 amostra 3 - - - - - - - - - - HCN48-1-1 2,7082 2,691 [2,689 [2,688 |2,5917/2,6925/2,711 [2,712 |[2,7053 |1,4758

LoL E EFE EFEEEE amostra Ú Ú Ú ' Ú Ú Ú À Ú ' HCN49-1-1 3 2,9874 2,983 [2,971 |2,250 |2,9498 |2,9948 2,986 [2,415 |2,9845 |1,6999 7 12 728 83 os 18 o1 97 65 o9 amostra Ú Ú Ú ; Ú Ú Ú Ú Ú Ú HCN50-1-1 3 2,8763 2,867 [2,849 |1,972 |2,8170|2,8928 2,879 |2,826 |2,8777 |2,6179 o6 53 109 66 24 67 27 14 86 26 amostra À Ú Ú ' Ú Ú Ú À À ; HCN51-1-1 3 2,9095 [2,893 |2,889 2,414 |2,8312/2,9135 2,917 [2,917 |2,9135 |1,7205 43 75 888 48 56 83 66 66 83 97 amostra Ú Ú Ú ; Ú Ú Ú À À Ú HCN52-1-1 2 3,1288 [3,097 |3,1156 [1,736 |3,0798|3,1288 3,128 [3,112 |3,1317 /3,03810 1 37 71 18 o4 1 81 8 85 12 amostra Ú Ú Ú ; Ú Ú Ú À Ú Ú HCN53-4 4 3,1605 [3,157 [3,1111 [1,621 [3,1086|3,1778 3,176 [3,170 |3,1705 |3,1331 57 74 36 73 19 73 4 57 74 47 amostra Ú Ú Ú ' ' Ú Ú À À ' HCN54-1-1 2 2,7730 [2,777 [2,761 [2,308 |2,7278|2,7832 2,771 [2,635 |2,7877 |2,6003 79 43 687 15 99 98 64 7 53 68 amostra Ú Ú Ú , Ú Ú Ú À Ú ; HCN55-1-1 2 3,1382 [3,135 |3,128 [2,622 |3,0539|3,1397 3,126 [3,151 |3,1456 |1,7387 44 3 024 51 23 23 58 75 93 Eb) amostra Ú Ú Ú ' Ú Ú Ú À Ú Ú HCN56-1-1 3 3,1536 [3,152 |3,152 |3,081 |[3,1328|/3,1781 [3,157 [3,178 |3,1698 |3,1278 os 28 277 56 57 93 61 19 4 22 amostra Ú Ú Ú ' Ú Ú Ú À Ú Ú HCN57-1-1 2 3,0937 [3,090 [2,412 [2,817 |3,0596 /2,1450 [3,083 [3,106 |3,0983 |2,0223 42 67 693 26 E 1 oa 24 87 3 amostra Ú Ú Ú ' Ú Ú Ú À À Ú HCN58-1 2 2,9027 [2,883 [2,884 |2,247 |2,8447 |/2,8888 2,897 |2,492 |2,9041 [2,8971 55 45 801 67 63 79 15 o3 67 51 amostra 55-| 5 - - - - - - - - - -

11H 2,5046 3,145 [2,793 11,697 |3,1783|1,4875 3,194 [2,329 |3,1973 |2,7229 21 52 014 283 65 os 16 96 89 77 amostra 55- . . : . . : . . . .

21 2,9884 [3,241 [1,852 13,303 |3,3154|1,0212 3,308 [3,265 |3,3351 |2,9316 84 94 447 71 os 71 os o8 16 28 amostra 56- À À À : À : À : À Ú H 4 2,9028 [2,904 [0,691 |2,844 |2,9028 |1,6733 2,907 [2,907 |2,8996 1,7133 62 46 744 67 62 54 68 68 81 56 amostra 56- : . : . . : . . . .

21 1,9992 [2,458 [1,125 |3,084 |3,2568|1,4679 3,223 [3,803 |3,2459 /2,1604 53 46 402 |88 17 os 65 34 25 04 amostra 57- . . . . . . . . . .

14 4 3,3365 [3,329 [2,362 |3,207 |3,3451|3,0856 2,717 [3,352 |3,3520 [2,4066 84 88 701 44 16 51 13 os 65 68 amostra 57- . . À ' . . . . . Ú 21 3,3606 [3,287 [1,894 |3,232 |3,3915|3,2098 3,075 |3,400 |3,3865 |2,9121 96 3 316 |63 56 9 63 os 35 96 amostra 58- À À À : : À À : À Ú ” 4 3,2756 [3,270 |3,207 |2,700 |3,1956/3,1802 3,280 [2,805 |3,2756 |1,4634 17 94 552 65 53 78 35 34 17 28 amostra 58- À À Ú : : Ú À : À Ú 21 2,6558 [2,524 |1,147 |3,3113/3,3908 |1,3743 2,678 [3,367 |3,3958 |1,3158 44 369 5 1 41 3 95 69 97 amostra 59- À À Ú : À Ú À : À Ú ” 4 2,7070 [2,707 [1,989 [2,479 |2,7106|1,8131 [2,685 [2,723 |2,7125 |1,7184 02 905 o4 74 17 75 69 11 4 amostra 59- À À Ú : : Ú À : À Ú 2 3,1953 [3,172 |1,508 [2,818 |3,2020 |1,9488 2,340 [3,224 |3,1711 |1,3860 37 73 571 45 18 o8 17 47 58 34 amostra 60- À À : : : À : : À : H4 4 3,2377 [3,249 |1,844 |3,3808 |3,2672[0,8770 1,855 [3,338 |3,3241 |2,7083 59 3 63 76 14 35 36 24 19 79 amostra 60- À : À : : Ú : : À Ú ” 3,1430 [3,205 [0,989 3,178 |3,19651,0065 1,842 [3,237 |3,1817 |1,7883 39 59 28 91 14 6 o1 31 91 33 amostra 40- À À À B : : À : À : 1º 2 3,2224 [2,609 |3,195 |1,647 |2,3696 |3,2286 3,239 [2,584 |3,2255 |2,2473 94 93 986 69 55 1 53 39 41 35 amostra 40- . . : . . : . . . .

22 5 3,2958 [3,181 [1,819 |3,090 |3,2727|/1,5931 [2,764 [3,324 |3,3093 |3,1343 48 79 123 62 58 89 02 97 98 27 amostra 52- . . . . . . . . . À

1.9 3 2,8812 [3,216 [3,046 |2,165 |3,2229|3,2695 3,278 [2,925 |3,2485 0,6723 o 16 446 25 96 2 83 43 5 41 amostra 52- : : : : . : . . :

2.9 5 3,2395 [2,855 [1,608 |3,218 |3,3179]|1,7597 [3,276 [3,366 |3,2916 /1,7628 34 36 42 79 2 21 96 69 84 12 amostra 56- À À À : À Ú À À À 1º 3 2,7816 [3,013 [3,015 2,849 |2,9725|1,4399 3,023 |-4 3,0270 |2,9981 os 95 558 81 53 15 71 os 52 amostra 56- À À À ; À À À : À Ú

2.9 4 2,6862 [2,689 |2,673 |1,252 |2,6916/2,6935 2,686 [2,686 |2,6972 |1,2449 o2 85 665 02 88 32 2 2 44 25 amostra 59- À À Ú : À Ú À : À À 1-2 5 3,1930 [3,199 [1,673 |2,808 |2,9529 |1,5060 [2,237 [3,213 |3,1964 |3,0553 85 82 509 o3 2 02 36 61 39 9 amostra 59- À À Ú : : Ú À : À :

2.9 7 3,1058 [3,104 |1,704 [2,152 |3,1280|1,5949 3,071 [2,791 |3,1205 |3,0469 78 os 491 o4 59 66 25 54 39 85 amostra 72- À : Ú : : Ú À : À À H 2 3,2418 [3,347 |1,858 |3,313 |3,3270|1,1636 2,810 [3,392 |3,0757 |2,8375 72 9 824 14 22 48 46 93 75 36 amostra 72- 6 - - - - - - - - - - 21 2,7554 [2,833 [1,613 [3,343 |3,3175|1,7846 3,030 [3,424 |2,9512 |2,5542

COLE FFFFFFFFF amostra 72- À À À : : : À : À Ú 12 2 3,2276 [3,233 |3,204 |2,3803 |3,1721|/1,7906 3,225 [3,235 |3,2257 |1,5709 13 19 229 55 7 73 77 o7 69 65 amostra 72- À À Ú ' À Ú À À À Ú

2.0 2,8219 2,382 [1,610 |2,3211[3,3578|/1,0799 [3,149 [3,341 |3,3578 |1,6902 12 53 363 1 82 27 34 35 82 28 amostra 73- . . . . . . . . . Ú +14 5 2,7606 [2,747 [2,733 [2,400 |2,7554 |2,7537 [2,757 12,771 [2,7355 /0,2539 23 os 889 1 83 83 19 os 12 14 amostra 73- : . . ' . . : : : 21 7 3,1452 [3,156 [3,132 [2,191 |3,1561/3,0225 3,145 |4 3,1345 |1,8259 os u 824 96 u 18 21 72 04 amostra 73- . . . ' Ú . . : : À 1-2 4 3,2182 3,218 [3,206 |2,648 |2,3170|3,1898 3,225 [2,250 |3,2199 /0,7963 21 22 321 81 74 69 17 22 48 56 amostra 73- . . . ' : : . . . :

2.9 7 2,7900 [2,803 |2,785 [2,655 |2,7769/2,8018 2,768 [2,796 |2,8001 |2,7657 48 57 084 24 36 55 94 76 48 79 amostra 73- . . . ' . . . . . : 18 4 3,2230 [3,210 [3,137 [2,854 |3,1549/3,2432 2,933 [3,252 |3,2283 |1,4145 os o4 293 46 31 o8 31 97 o1 69 amostra 73- . . . . . . . . . .

23 5 2,4813/2,493 [2,482 [2,313 |2,4754 |2,4949 2,476 [2,484 |2,4949 |2,4667 3 39 82 24 21 26 89 31 26 o6 amostra 74- . . . . . . . . . À 1H 4 3,1678 [2,602 |3,159 |2,360 |3,1104 [3,1291 [3,174 [3,179 |3,1421 |0,8463 86 22 587 92 18 67 92 2 32 99 amostra 74- : À À ' À À : : : : 21 3,1825 /2,590 |3,3807 [2,673 |3,2818/3,2789 3,311 [3,139 |3,3056 1,4016 97 44 152 65 17 31 78 85 2 52 amostra 74-|2 - - - - - - - - - -

1-2 2,9382 2,910 [2,918 11,978 |2,8915|2,9382 [2,945 |2,948 |2,9203 |0,4284 6 94 955 26 16 6 37 24 os 46 amostra 74- . . . : . . . . . À

2.9 3 3,1114 [2,893 13,101 [1,882 |3,0420 [3,1303/3,112 [2,972 |3,0139 |0,9721 61 89 638 52 88 15 88 9 84 28 amostra 77- À À Ú ' À Ú À À À À 14 4 2,3137 3,187 [1,073 [2,978 |3,1107 |1,4068 [3,204 [3,144 |3,1857 |2,5090 98 19 039 91 98 37 22 78 96 3 amostra 77- À À À ' À : : : : : 21 2 2,9567 [3,185 [0,904 2,998 |3,1436 |1,4385 3,200 [3,137 |3,2004 |2,5072 84 51 675 89 29 o9 41 62 13 72 amostra 77- . . À ' . : . . . Ú as 3,1966 [3,198 [1,091 [3,177 |3,1407 |1,1341 [3,214 [3,221 |3,2199 /2,5707 49 o7 495 22 91 53 o2 47 73 72 amostra 77- Ú . À ' . : . . . Ú "” 2,8119 3,164 [1,298 [3,156 |3,1038|1,1433 3,209 [3,210 |3,2001 |2,7951 43 28 451 os 8 39 27 8 91 21 amostra 84- À À Ú : À À À : À À ” 3 3,0213 3,133 [1,436 |3,137 |2,9185/3,1239 2,290 [3,170 |3,1691 |2,6429 55 15 387 15 3 48 52 57 28 44 amostra 84- À À Ú : À À À : À À 21 2,2811 [3,007 |1,720 [2,135 |2,8812/3,0216 3,016 [3,023 |3,0280 |2,6234 63 68 876 o8 18 69 96 25 32 13 amostra 84- : À Ú : À À À : À À 31 1,8358 [3,148 [1,256 |3,201 |3,1834|3,2491 |2,532 [3,341 |3,3355 /2,7600 22 14 844 73 7 92 25 54 28 os amostra 84- À À Ú : : : À : À : ” 7 2,4739 3,116 |1,821 [3,338 |3,2204 |3,3366 2,696 [3,333 |3,3321 |2,8645 61 92 672 16 E 4 22 62 24 EX) amostra 85- À À À : : Ú À : À : H4 4 3,0574 [2,928 [2,424 |2,929 |3,0511 [1,6620 [3,035 [3,073 |3,0654 |2,6184 86 21 829 39 91 25 84 63 84 41 amostra 85- À À Ú : : À À : À : ” 7 3,3287 3,279 [1,029 [3,321 |3,3408|2,3348 [3,167 [3,331 |3,3347 |2,4388 19 39 896 32 25 81 3 71 3 88 amostra 86- : À : : : Ú À : "” 5 1,7150 [3,223 [1,487 [3,187 |3,1740 |1,4949 3,236 |-4 4 2,5602 83 os 452 49 43 os 6 27 amostra 86- . . À . . : . . . . 21 2,1728/ 3,159 |0,768 [3,247 |3,2059 |1,3371 3,093 [3,321 |3,3257 |2,4582 65 98 715 58 62 63 04 45 87 47 amostra 87- . . . . . . 4 4 2,898 2,553 [2,9359 |2,9316 | 4 2,857 2,3313 73 2 22 3 22 53 amostra 87- : . : : . : À : : 21 7 3,0006 [3,188 |[1,6110|3,155 |3,2441 [2,1591 3,187 13,166 |3,1601 /2,7088 65 62 92 2 37 73 29 48 73 34 amostra 87- À À À : À À À : À Ú as 2 2,8672 2,900 [2,913 [2,604 |2,9154|2,9214 2,875 [2,598 |2,9184 |1,4357 84 71 936 77 31 63 4 23 36 21 amostra 88- À À Ú : À Ú À : À À "” 4 2,7883 [3,014 |1,932 [2,942 |3,2454 |1,4045 3,122 [3,123 |2,5413 |2,4246 68 63 354 |89 3 53 76 9 62 99 amostra 88- À À À : À Ú À : À À 21 3,1771 13,171 [3,163 [3,042 |3,1757|1,8535 3,084 [3,150 |3,1855 |2,8345 33 64 518 62 52 98 n 32 12 84 amostra 89- À À À : : À À : À À ” 4 2,9977 [3,015 [3,007 [2,524 |3,0196/3,0063 2,987 [2,047 |2,7727 /2,38910 62 19 845 45 63 9 91 97 91 98 amostra 89- À À À ; À À À : À À 21 5 2,8473 [2,857 [2,835 |1,548 |2,8418|/2,8164 [2,844 [1,489 |2,8572 |2,7986 55 21 005 21 23 65 58 82 1 84 amostra 89- 9 - - - - a - - - - - 31 2,6486 [2,661 |1,3885 2,623 1,38576 [2,651 [2,667 /2,6709 2,6137

CTF FFFE rrFrFr amostra 89- À À : : À : À : À ns 12 3,0238 [3,243 [1,419 |2,772 |3,26191,3577 2,480 [3,277 |4 2,8631 91 97 265 os 77 39 77 18 19 amostra 90- À À À : : : À : : À "” 5 3,1396 [3,130 [0,849 [3,083 |3,1353/1,5675/2,950 [3,166 |3,1485 |2,4389 87 97 976 35 o7 37 n 93 8 6 amostra 90- . . : . . : . . . . 21 3,0168 [3,076 |1,298 [3,026 |3,0847 |1,6465 2,473 [3,090 |3,0692 |2,7006 22 611 8 91 35 45 6 o3 3 amostra 91- À . : . . : : : . Ú ” 4 2,3396 3,188 [1,221 |3,167 |3,0275|1,8012 3,173 [3,176 |3,1824 [2,2368 85 4 406 93 53 6 68 59 55 33 amostra 91- : . À . Ú Ú . : . Ú 21 3,0252 [3,193 [1,106 |3,156 |2,9715/2,1074 3,091 [3,196 |3,1866 /2,2554 94 7 496 74 64 32 n 57 14 62 amostra 88- . . : . . : . : 1-2 3 2,4719/3,126 |1,586 3,042 |3,1387 1,1443 2,533 2,3926 99 98 583 75 62 95 36 04 amostra 88- . . À . . : . . . :

2.9 3 3,1738 [3,285 |1,978 |3,147 |3,3078 1,6245 2,052 [3,272 |3,2481 |2,2628 84 59 384 82 71 71 94 76 68 92 [Tabela 13-13] Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [SR1 sp. amostra |PD ; ; , ; m saphenum |flavescens | lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis amostra : 1141 5 -2,019917 /-0,638331 |-1,887665 /-1,944291 [-1,929667 |-2,017563 |1,31508 6

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD . . . . m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis amostra : 191 7 -1,168931 -2,85308 |/-2,7/08506 |-2,791439 |-2,783043 |-2,847685 |2,49705 amostra : 211 5 4 -2,8275 -2,803264 |-2,760745 |-2,740951 |-2,819702 |1,95410 8 amostra .

2.91 9 -2,933026 -2,44086 |-3,094995 |-3,248923 |-3,220692 /|-3,295642 |3,30537 5 amostra : 341 4 -1,722404 |-3,1334 -3,120297 |-3,095213 |-2,511829 /-3,15068 |1,64560 9 amostra :

3.21 12 -3,140706 /-3,13943 |-3,129327 |-3,07541 /-3,040478 |-3,129327 |1,89500 4 amostra Ú 411 5 -0,885871 -2,35909 |-3,009891 /-3,169678 |-3,143678 |-3,220552 |2,33967 2 amostra Ú 121 7 -0,823285 -3,1131 -3,10777 -3,053101 |-3,01405 -3,099898 |3,12121 7 amostra Ú 1 4 4 -1,46809 |-4 -1,407213 |-1,880814 /-1,469451 |1,39669 1 amostra B 521 6 -1,487772 -1,4A7507 |-1,897354 |-1,423225 |-1,399452 |-1,483923 |1,04738 6 [amostra 4 | 101394 -3,2672 -3,054747 |/-3,199378 | 8/191086 -3,272119 |-

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD . . . . m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis ep O 1 amostra . sea 9 -1,953814 -3,28064 |/-3,209439 |-3,2105 -3,192813 |-3,274448 |3,20208 7 amostra . 711 4 -2,630535 -2,58938 — |-2,547447 |-2,535723 |/-2,607605 |2,48609 2 amostra : 721 7 -3,120912 /-3,08642 |-3,114018 |/-3,07585 /-3,048539 |-3,117451 |2,92042 6 amostra : 811 5 -2,658243 [-2,65425 |-2,594939 |-2,57853 |/-2,559467 |-2,648989 |2,33127 8 amostra À 821 6 -3,164096 -3,10905 |-2,067144 |-2,66784 |/-3,118552 /|/-3,195051 |[3,15147 7 amostra À 211 5 -3,049266 -3,0517 -3,014317 /-2,990365 |-2,930128 |/-3,04444 /2,87642 1 amostra À 92-21 9 -0,841605 -2,36282 |/-3,135333 |-3,250033 |-3,221458 /-3,291317 [3,3831606 E) amostra ' 10-11 5 -1,582635 -1,54115 |-1,524283 |-1,412999 |-1,433762 |-1,525664 |1,34957 2 amostra - 9 -1,621537 -3,29244 |-3,265331 |-3,119919 |-3,193937 /|-3,276744 10-21 3,26658

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD ; ; ; ; m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis

A amostra : 14H 4 -2,901174 -1,77094 |-0,820559 |-2,77084 /-2,823125 /-2,901174 |2,86850 amostra . 121 1 -0,70361 -1,96613 |/-3,175838 |-2,85337 /-3,208425 |-3,266256 /2,06181 4 amostra . 1211 5 -1,280002 -3,05506 |-3,043279 /|-2,969947 |-2,943763 |-3,041829 |2,91256 9 amostra Ú 12-21 9 -0,358684 -3,06096 |/-3,086678 |-3,065324 |-3,060959 /-3,135389 |3,13410 3 amostra - 4 -2,799716 -2,64598 |-1,570465 |-2,721504 |-2,689927 |-2,785429 13-1-1 2,60329 amostra ' 13:21 7 -0,519948 -3,26679 |/-2,714693 |-3,239305 |-3,202677 /-3,290893 |3,30279 2 amostra . 14-11 4 -1,627643 -1,02838 |-1,727747 |-2,747719 |-2,713799 |-2,772757 [2,11173 9 amostra : 1421 7 -0,606947 -1,20964 |-1,671184 |-3,241811 |-3,099815 /-2,805762 |1,06242 9 amostra . 1541 5 -1,446869 -3,138775 |[-3,017018 |-3,101897 |-3,067683 |-3,149504 |3,07431 4 amostra |8 [1,8334404 -3,21934 |-2,775102 |-2,982553 | 8/114898 -3,223433 |-

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD ; ; ; ; m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis amostra - 4 -1,199936 -3,09967 |/-3,099667 |-3,039899 |-3,003042 /-3,096829 16-11 2,99179 amostra - 8 -0,669595 -3,22325 |[-3,260776 |-3,155481 |-3,157949 /|-3,260776 16-21 3,24689 amostra . 1711 5 -0,425969 |-3,33736 /-3,366591 /-3,318503 |-3,287639 |-3,359773 |3,32845 9 amostra - 9 -0,44734 -B3,34424 |-3,379525 |-3,335541 |-3,302391 /|-3,379525 17-21 3,34929 amostra Ú 1811 4 -3,305385 -3,06833 |-1,730838 |-3,244002 |-3,148338 /-3,266999 |2,11834 8 amostra |

18.21 8 -3,313753 -2,25574 |-2,508582 |-3,221563 |-3,207552 /-3,047852 |1,42303 3 amostra À 19-11 4 -0,550385 -3,07843 |-2,009474 |-3,124323 |-3,089158 /-3,174169 |3,17859 3 amostra : 8 -0,760317 -3,08602 |-4 4 4 4 3,10683 19-2-1 2 amostra : 20-11 4 -3,137293 -1,96019 |/-0,927666 |-3,083292 |-2,623436 /-3,025801 |[3,13277 7 amostra : 29-21 7 0,731236 -2,07301 |-2,5386052 |-3,189109 |-3,137488 /-3,216669 |3,23190 9

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis amostra : 212 4 -2,18716 -2,42312 -2,396089 |-2,375375 2,3833128 7 amostra .

2.9.9 -2,84266 -2,786221 |-2,751042 2,80141 3 amostra : 3142 3 -2,990522 -2,773825 |-2,026425 /|-2,919728 [-2,900791 |-2,994815 |1,23089 2 amostra .

3.2.9 4 -2,682308 /-2,40179 |-1,509219 |-2,59545 /-2,562609 |-2,65438 /2,65891 2 amostra . 712 3 -2,20267 |-1,675325 |/-2,42381 /-2,348802 2,42026 4 amostra .

7.0.9 4 -2,67515 -2,71407 -2,657586 |-2,625685 |-2,714068 |2,70363 8 amostra . elo 2 -2,546666 /-1,69002 |-1,230972 |-2,469033 |-2,439069 |-2,528504 |2,53297 4 amostra :

9.2.9 3 -2,3825256 -1,61836 |/-2,305703 |-2,251827 |-2,243464 |-2,32383 /2,28699 2 amostra B 1012 2 -0,72394 |-1,921264 |-1,896185 |-1,900539 1,89999 2 amostra |3 | -2,412085 —[-1,3749 -1,754423 |-2,362111 | -2,864953 /-2,398529 |-

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD . . . . m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis 10-2-2 2,30429 7 amostra .

142 3 -2,615561 -2,5292 -1,583614 /-2,606961 |-2,587532 /-2,624335 |2,62065 7 amostra : 11-22 8 -1,983728 -2,68243 |-2,371118 |-2,66986 /-2,655746 |-2,6/79086 |1,71772 4 amostra :

121.2 3 -2,846979 /-1,81167 |-2,500332 |-2,808568 |-2,780433 |-2,842334 |2,11131 2 amostra - 2 -2,936933 -1,05705 |-2,375917 /-2,921543 |-2,89467 -2,931742 12-2-2 1,76916 amostra À 13:1-2 3 -2,156528 -2,14703 |-4 -2,11291 /-2,091262 /-2,149122 |2,12564 1 amostra À 13-22 3 -2,470807 4 -2,415026 |-2,392362 /-2,457778 |2,46315 9 amostra À 14-1-2 3 -2,507024 -1,273815 |4 -2,44779 |-2,422484 /-2,497181 |2,49596 7 amostra B 1422 3 -3,201305 -0,90494 |-2,166993 |-3,143313 |-3,122319 /-2,869766 |1,14328 2 amostra : 1512 3 -3,003975 -2,90919 |/-1,913253 |-2,951647 |-2,911323 /-2,990932 |2,98455

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD . . . . m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis amostra : 15-22 6 -2,004846 -3,07211 -2,242772 |-2,679727 |-2,5002 -2,960931 |[3,16520 9 amostra . 1612 2 -2,194258 -2,15659 |-1,665516 |-2,11719 /-2,103292 |-2,165703 |2,15658 7 amostra .

162.2 5 -1,572797 -2,85395 |-4 -2,869462 |-2,840817 /-2,861637 |2,70809 4 amostra :

181.2 3 -2,527828 /-2,50739 |-2,082355 |-2,402562 |-2,443661 |-2,508636 |1,74275 amostra .

182.2 3 4 -2,92717 |-2,951437 |-2,904184 |-2,885561 |-2,929535 |2,74250 7 amostra ; 19-12 2 -1,958345 -1,95986 |-1,94939 -1,873669 |-1,850711 |-1,924977 |1,84486 6 amostra Ú

19.22 3 -2,528921 -2,51543 |-2,530293 |-2,449055 |-2,42792 -2,514106 |2,01252 9 amostra À 20-1-2 3 -2,761145 -2,67752 |-1,82599 -2,683702 |-2,663047 /-2,650186 |2,64560 3 amostra : 20-2.2 3 -3,140132 -3,15333 |-3,165568 |-2,882842 |-2,765154 |-2,944548 |3,07841 8 [amostra 3 [9243213 -2,58158 |/-0,843397 |-3,086174 | 2460328 -3,811351 |-

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD . . . . m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis 21-11 3,32120 6 amostra .

21-91 8 -3,094926 -3,138525 |-2,229673 |-3,155677 |[-3,119121 /-3,184938 |3,18100 8 amostra .

2211 3 -2,781555 -2,388474 |-0,918561 |-2,707813 |-2,692614 /-2,769046 |2,42438 8 amostra :

22.91 6 -0,768806 /-3,22886 |-3,222294 |-3,138357 |-3,145947 |-3,190855 |3,21710 8 amostra - 3 -2,89277 -2,62769 |-1,352763 |-3,247796 |-3,221796 /|-3,268372 23-11 0,74029 amostra À 23-21 8 -1,456759 -2,96046 |-1,660124 |-3,021181 |-3,250802 /-3,279904 |0,57852 4 amostra À 24-11 4 -3,128632 -1,65902 |/-0,964664 |-3,045922 |-3,017972 |/-3,082571 |3,10212 4 amostra ' 24-21 9 -3,221844 -3,17425 |-2,373428 |-3,175351 |-3,147598 /|-3,229268 |1,48461 amostra : 25-11 4 -3,288108 -2,7255 -1,134651 /-3,223125 |-3,198885 /-3,097531 |3,25581 4 amostra - 7 -3,100198 -3,10401 |-2,284082 |-2,207681 |-3,058 -3,131701 25-21 3,14977 4 0446662 |-2,50699 3,2299038 |-3,227641 [/-3,281235 FA

Megasphae Eubacteriu | Neisseria |Granulicate | Eubacteriu |ra Prevotella [ISR1 sp. amostra |PD ; ; ; ; m saphenum | flavescens |lla adiacens | m sulci micronucif |shahii OT 345 ormis 26-11 3,13233 8 [Tabela 13-14] amostra 26-2-1 |8 -0,315271 |-3,26819] À : -3,25818 | 3,147389 |2,329271 [3,193893 2,1077438 amostra 27-1-1 |4 -1,720397 |-3,25773] : À : : 3,244992 |3,171285 |[3,164975 |3,244992 |3,056527 amostra 27-2-1 111 — |-1,48108 |1-3,29077|-3,30554 | : : : 3,257037 |[3,229919 |3,298094 |3,290775 amostra 28-1-1 |4 -0,37059 |-3,10487 |-3,20476 |. . -3,20601 |. 3,148644 |[3,135679 3,172308 amostra 28-2-1 |6 -0,411193 |-3,22588]| : : : -2,64322 2,963278 |3,167016 |[3,167016 |[3,218933 amostra 29-1-1 |3 -3,016462 |-2,8451 | . . . -1,55455 1,642899 |2,935195 |2,905058 |2,977499 amostra 29-2-1 |6 -0,36758 |-3,25339] . . . . 3,241527 |3,224944 |3,178686 |[3,232519 |2,419312 amostra 30-1-1 |4 -0,572152 |-2,35977] : Ú Ú ' 1,643103 |2,988025 |2,970021 |3,022692 | 2,096727 amostra 30-2-1 |6 -0,847142 |-2,8559 | -3,17602 | . . 3,237511 3,140882 |3,113628 | 3,156927 amostra 31-1-1 |4 4 -3,17951| : À : Ú 2,072961 |3,238409 |[3,211367 |[3,100327 |1,697472 amostra 31-2-1 |6 4 -3,25782]| : -3,02046 | Ú 2,762731 |3,269953 3,150274 | 1,659184 amostra 32-1-1 |4 [1,1498890 [291644 - -2,82677 F F F |

[o [7 3,0381834 |3,077854 | 3,057353 amostra 32-21 |9 -0,343928 |-2,99569 || : . . -3,26261 2,806088 |3,052463 |3,213064 |3,257393 amostra HCO01- - - - - -

3 -2,385031 |-2,89612 11 1,686368 |3,193946 [3,176422 |3,047818 [0,969603 amostra HCO01- - - - - -

3 -3,24553 |-2,69421 21 1,942021 |3,168058 [3,159578 |3,145415 |0,556263 amostra HCO01- - - - - -

2 -3,31793 |/-2,58515 3-1 0,963065 |3,231054 |3,218922 [3,107655 |0,661279 amostra HC02- - - - - -

3 -3,163767 |-1,77468 111 1,677409 [3,1108365 [3,084811 |[3,127446 |1,521484 amostra HC02- - - - - -

2 -3,108796 |-3,01004 21 1,939982 |3,042793 |[3,074542 |3,090698 |[3,023932 amostra HC02- - - - - -

3 -3,145566 |-3,02495 3-1 1,812185 |2,634156 |[3,127493 [3,149273 1,911298 amostra HC03- - - - - -

3 -3,0196 -2,3757 11H11 1,592947 |[2,961784 |2,780394 [3,009872 |3,000356 amostra HC03- - - - - -

2 -2,928664 |-1,91635 2-1 1,935094 |2,877666 |2,900462 |2,895292 |2,835377 amostra HC03- - - - -

3 -3,021905 |-2,51658 -2,97712 31 2,054303 |2,951601 |[2,989819 3,033149 amostra HC04- - - - - -

3 -3,186113 |-2,51095 114 0,805167 |[2,814206 |3,196771 |3,119166 |1,777051 amostra HC04- - - - - -

2 -3,149557 |-2,9335 21 1,558861 |3,148251 |2,824977 |3,189252 [3,190688 amostra HC04- - - -

3 -3,205753 |-3,19686 -2,96572 |-3,18243 31 2,689514 |3,168464 3,224106 amostra HC05- - - - - -

3 -3,331365 |-2,37111 111 2,961877 [3,256492 |3,296486 | 3,306373 | 3,309239 [amostra HCo5-|2 | 8035742 |[1,52755 - -2,96429 F | 3,006 F amostra HCO05- - - - -

3 -3,159121 |-1,44641 -3,09004 3-1 1,503651 3,131561 |3,112316 [3,1151697 amostra HCO06- - - - - -

2 -3,313253 |-0,76266 114 1,761657 [3,107683 |3,298966 |3,103183 | 0,742621 amostra HCO06- - - - -

2 -2,883678 |-2,13265 |-2,86771 21 2,810503 |2,847792 |2,875621 [1,971932 amostra HCO06- - - - - -

2 -3,330699 |-1,55699 3-1 0,917883 [3,261666 |3,305424 |3,277203 2,219517 amostra HC07- - - - - -

3 -3,206095 |-2,97229 111 2,874205 |[3,126353 |3,167466 |[3,184746 3,206095 amostra HC07- - - - - -

3 -2,760759 |-2,74253 21 2,736625 |[2,649208 |2,717959 [2,756131 [2,210968 amostra HC07- - - - - -

3 -3,049724 |-3,05141 3-1 3,048044 |2,948126 |3,008026 |3,028375 | 3,018864 amostra HCO08- - - - - -

3 -3,320153 |-2,60684 11H11 1,260076 |2,926775 |2,298501 [3,271167 |1,996932 amostra HCO08- - - - - -

2 4 -1,75387 2-1 1,457576 |2,867055 |2,909856 |2,930503 |2,940373 amostra HCO08- - - -

3 -3,20298 |-4 -2,71789 -3,20298 31 3,231224 3,133285 2,092391 amostra HC09- - - - - -

3 -3,134968 |-1,06244 14 1,059367 |3,063032 |3,111655 |3,127057 |3,061681 amostra HC09- - - - - -

3 -2,989737 |-1,22448 2-1 1,071699 [2,905516 |2,946352 |2,979715 |2,042307 amostra HC09- - - - - -

3 -3,220258 |-1,38649 31 1,016807 [3,135357 [3,185496 [3,199382 | 1,342856 amostra HC10- - - - - -

2 -3,031973 |-2,91913 111 1,803118 [2,958934 [2,988129 [3,024091 |[2,908229 [amostra HC1o-|1 | 2033739 | 202698 - - | [199003 F F

EN 2,025306 | 1,941969 2,026979 | 1,9738412 amostra HC10- - - -

3 4 -2,70397 |-4 -2,71024 3-1 2,640371 |2,675357 2,552976 amostra HC11- - - - -

3 - 3.189374 |-2,77339 |-1,29156 14 3,107188 |3,145595 |3,171646 |3,174816 amostra HC11- - - : 7

3 4 -2,79722 -2,89475 21 1,945395 |2,860229 2,912284 |2,807316 amostra HC11- - - - - -

2 -2,54744 |-2,53897 3-1 2,556075 |2,467974 |2,511365 |[2,538974 [2,525763 amostra HC12- - - - - -

2 -2,635816 |-2,56862 111 1,729279 |2,546939 |2,591445 |2,632369 |[2,613886 amostra HC12- - - -

2 -2,631243 |-2,51992 -2,58388 -2,48922 21 1,473775 |2,545558 2,6223998 amostra HC12- - - - -

3 -3,16919 -2,66731 -3,15551 3-1 1,163924 |[3,087123 [3,129379 |3,145526 amostra HC13- - - - - -

2 -2,979884 |-1,71765 11H11 2,984529 |2,891057 |2,926342 |2,978347 |2,756191 amostra HC13- - - - - -

1 -3,060914 |-1,91178 2-1 1,376135 |2,981248 [3,024586 [3,020583 |[2,814145 amostra HC13- - - - -

3 4 -1,81016 -2,94547 3-1 1,546102 |2,900243 2,961657 |2,522824 amostra HC14- - - - - -

2 -3,138091 |-2,27379 111 1,568702 |[3,081475 |[3,120582 [3,142233 |1,880382 amostra HC14- - - - - -

2 -2,814901 |-2,70165 2-1 1,720922 |2,754037 [2,785194 [2,806025 |2,422895 amostra HC14- - - - - -

3 4 -1,91288 31 1,618672 |[3,014067 |[3,049643 [3,067207 | 1,140946 amostra HC15- - - - -

3 -2,808247 |-2,77665 |-2,7413 114 2,725213 |2,776648 |2,756791 [0,958357 | amostra HC15-|2 |[a7anas2 | 212608 - - F F F

EN 0,506021 |2,678614 |2,726689 |2,739962 | 1,686751 amostra HC15- - - - - -

3 3,3836414 |-3,29388 3H 2,578511 [3,191685 |3,311979 |[2,846451 |3,229291 amostra 21-1-2 |3 2,8527338 |-2,6675 | ' -2,93516 | : 1,251627 |2,897721 2,956629 [2,604447 amostra 21-2-2 |4 -1,390497 |-3,09876 || -3,04949 | . . 3,110188 3,093154 |3,124911 |3,107302 amostra 22-1-2 |3 -3,179746 |-2,93905 |-1,60324 | . . . 3,103568 |[3,134806 |3,139245 |3,166877 amostra 22-2-2 |5 -1,454364 |-3,20334 |-2,55168 || . . . 3,169262 [3,213591 |[3,225419 |3,183542 amostra 23-1-2 |2 -3,137695 |-2,95582 |-1,65631 || . . : 2,815951 |2,973411 |[3,176847 |1,933731 amostra 23-2-2 |4 -3,142322 |-2,97853 | ' . . . 1,743352 |3,080446 |2,884044 |3,153317 |3,085179 amostra 24-1-2 |3 -2,922847 |-2,05307 || : À : À 1,870961 |2,875948 |2,889847 |2,909098 | 2,764908 amostra 24-2-2 |4 -3,000463 |-2,2904 | : : : ; 1,204522 |2,563927 |2,986635 |3,000463 | 1,514659 amostra 25-1-2 |2 -2,907484 |-2,78464 | : : : : 1,615384 |2,838157 |2,871439 |2,895133 |2,841732 amostra 28-1-2 |2 -2,676903 |-2,60567 | : : : : 1,569366 |2,606782 |2,646503 |2,656402 | 2,583948 amostra 28-2-2 |3 -1,957178 |-1,94742]| : : : : 1,974437 |1,906653 | 1,927215 | 1,951574 | 1,869387 amostra 29-1-2 |3 -2,337747 |-2,30396 | ' À À À 2,347698 [2,278702 |2,305261 |2,322555 |2,231108 amostra 29-2-2 |3 -2,942759 |-2,92683 |-2,11885 | : : -2,04469 2,9068486 |2,945262 | 2,9865824 [amostra 30-1-2 |3 | 81154784 | 801416 - - F F F

[o pes 3,089055 | 3,132649 |3,138078 |3,092731 amostra 30-2-2 |3 -3,278135 |-1,01823 |-2,04752 || : : ; 3,237644 |[3,254729 |[3,028081 |1,449072 amostra 33-1-1 |4 -0,813127 |-3,13974| ' : : : 2,316549 |3,123005 |[3,161253 |3,192696 | 1,459479 amostra 33-21 |9 -2,522552 |-2,98999 || . . . . 2,839288 |3,086033 |[3,161754 |[3,177548 |2,029128 amostra 33-3-1 |7 0,8344121 |-3,24416 | ' . . . [omosrass sn 7 ostras [asno 3,247136 |3,195155 |[3,226729 [3,239737 |[3,247136 amostra 34-1-1 |4 -2,930566 |-2,35755 | . . -2,93183 |. 2,187001 |2,903643 |2,920581 2,930566 amostra 34-2-1 |6 -1,552548 |-3,32718 | . . . . 3,302683 |3,205213 [3,2095735 |3,322753 |3,325698 amostra 34-3-1 10 — |-1,566663 /-3,28748 |. ' . . . 3,214581 |2,980498 |[3,254331 |[3,264154 |3,265576 amostra 35-1-1 |4 -2,314805 |-3,10561 || : : : À 1,976404 |3,157641 [3,191855 |3,179225 |2,460517 [Tabela 13-15] amostra 35-2-1 [11 /1,65793 |-3,12787] . . . Ú 6 3,124358 3,072038 | 3,0095297 | 3,122857 |3,112499 amostra 36-1-1 |2 — /2,15837 |-3,19477|-1,9179 | À -3,35175 |-3,35175 9 3,285032 | 3,313428 amostra 36-2-1 |7 —o,58602 |-3,3627 |-3,36699 | : À À 3,316798 | 3,255933 | 3,368431 [3,311703 amostra 36-3-1 |6 — /0,18474 |-3,26401 |-3,28196 | : À À ; 3,240311 | 3,270824 | 3,276356 | 3,276356 amostra 37-1-1 |4 /3,16759 |-3,11423 | : : À À 7 2,324917 |3,112878 |3,142262 |3,158486 |3,172225 amostra 37-2-1 |6 — /1,83899 |-3,12634] . . . .

a 3,126343 |3,072342 | 3,104218 |3,120332 |3,081798 amostra 38-1-1 |5º /3,25791 |-3,29688|. Ú -3,2494 |-3,28604 | 3,262237 |3,191584 3,273976 amostra 38-2-1 |g — /3,30406 |-3,29371 | : . . Ú 1 3,078933 |2,954217 | 3,285019 | 3,261312 | 3,319304 amostra 39-1-1 |4 /3,24523 |-1,92055] . . -3,26284 7 3,276532 |2,714091 | 3,252482 amostra 39-2-1 |s — /3,25408 |-1,38903| : . õ : 1 1,814808 [3,184911 |3,226837 |3,226837 |2,074362 amostra 40-1-1 [4 /3,30791 |-2,69653] Ú À À -8,31706 5 1,726786 |3,268998 |3,290188 | 3,288742 amostra 40-21 |7 —/o,70898 |-2,66057|-315 | À À À 6 3,091157 | 3,125176 | 3,126788 3,131658 amostra 33-1-2 3 — /2,70701 |-2,56459 | -2,66923 | À 6 1,425318 2,696517 2,650167 amostra 33-2-2 3 — /2,59026 |-2,38831 | : À À À : 1,987812 |2,526239 |2,570346 | 2,590264 |2,494925 amostra 33-3-2 3 || -2,40213| : : -2,39588 |-2,30346 2,40592 2,457075 |2,382441 |2,394641

RR amostra 35-1-2 2 — /-2,53781 |-2,53616 |-4 : À -2,52963 || 2,474892 | 2,515286 2,524796 amostra 35-2-2 |8 — /2,42002 |-2,1238 | : : À À 8 2,424827 |2,351041 [2,381975 |2,413711 |2,319633 amostra 41-1-1 4 | 1,77885| : : À -2,83753 1,159376 |2,927707 |2,972722 [2,9093986 amostra 41-2-1 9 — /o,o6642 |-3,07316] . . . .

- 2,797397 |2,612283 |3,063204 | 3,079499 |2,097228 amostra 42-1-1 4 | 315107]. : . . -2,19668 1,118121 2,251219|3,144651 | 3,195963 | 3,212022 amostra 42-21 |7 —/2,66629 |-3,35308] : À À À 1 3,248237 | 3,2096826 | 3,320458 | 3,356173 |3,340933 amostra 43-1-1 4 /2,97776 |-3,06865] À : -3,07583 || 1 3,084604 |2,211319 | 3,058797 2,855722 amostra 43-2-1 |7 —/1,19829 |-2,84487] À À À À a 2,860115 | 2,400578 | 2,820606 | 2,854975 | 2,828546 amostra 44-1-1 4 /1,25002 |-3,13284] : À À À 7 2,3436825 |3,119835 | 3,143237 |3,176001 |3,161656 amostra 44-2-1 |s — o,94854 |-3,2293 |" : : À Ú 2 2,344819 |2,640693 |3,101424 |3,277515 |1,875254 amostra 45-1-1 4 — [3,22624 |-2,93634] : : -3,13512 || 1,474452 |3,160508 |3,200016 3,222879 amostra 45-2-1 |6 — 3,14046 |-3,16999 | : : À 3,099056 |2,739013 | 3,133075 | 3,154506 amostra 46-1-1 4 — /3,10241 |-2,79082|-1,34326 |. . . .

3 2,867919 | 2,651861 |3,075311 |3,122616 amostra 46-2-1 |7 — |3,86447 |-3,33625]. Ú À À ; 2,715244 |3,309738 | 3,166271 3,362859 amostra 47-1-1 |5º /1,03331 |-2,91999 | . . . .

a 2,149671 |3,094592 | 3,125297 |3,149839 |3,163519 amostra 47-2-1 |7 — |-0,84788 |-3,18236 | : . õ õ 3,188094 |3,148146 | 3,164233 |3,176702 |3,183787 amostra 48-1-1 |4 | -2,25984 | . . . .

2,020114 3,047873 |2,982773 |3,014768 |2,999116 |2,338704 amostra 48-2-1 6 —/1,07546 |-2,53673] -2,88596 | À Ú 7 2,793843 3,211502 |3,235996 | 1,177663 amostra 49-1-1 |4 o,78755 |-2,81218] : À À -3,13675 5 3,180839 |2,976719 |3,207838 | 3,178466 amostra 49-2-1 [11 /0,77249 |-3,20363 | -3,19238 | À : 6 3,233107 3,233107 |3,246738 | 1,377455 amostra 50-1-1 4 — [3,17867 |-1,58048] 3113 | -3,08236 || 3 1,756325 3,157067 1,968325 amostra 50-2-1 |6 — /3,12229 |-1,92328| À À s1119 | 1 2,413224 |3,059446 | 3,086262 1,715018 amostra 51-1-1 5 - -3,07643 |- F - - -

3,05488 3,076427 |2,415594 [2,515245 [3,029053 | 1,843474 7 amostra 51-2-1 |ao = /2,22316 |-3,12403]|” : : -3,12815 || 3 3,106632 |3,082392 |3,111913 3,115915 amostra 37-1-2 2 — [2,60786 |-2,40846| : : À À 7 1,197815 [2,537199 |2,571846 |2,594993 |2,547022 amostra 37-2-2 |8 —/2,89583 |-2,72381|. : Ú Ú Ú 1 1,465202 |2,840317 | 2,876529 | 2,873633 |2,836326 amostra 38-1-2 3 — /3,21349 |-3,0998 | . . . . 1 2,045725 |3,123615 | 3,172679 |3,188847 |3,165524 amostra 38-2-2 |5 /3,31364 /-3,3291 |. . . . . ; 3,327527 |2,844179 |3,205341 [3,3813641 |2,551734 amostra ' - - - - - 3 295696 |-2,92429 HCNO1-1-1 3 2,953584 | 2,871049 | 2,916497 | 2,946902 |2,908837 amostra - - - - - 2 |-2,38846/-3,1105 HCN02-1-1 3,116612 |3,050988 |3,072707 |3,107469 |2,939496 amostra , - - - - - 3 |3,27709 |-2,50867 HCN03-1-1 5 0,820702 |3,210378 |2,193133 |3,250672 |3,234394 amostra , 7 7 7 7 7 2 l3,09937 |-2,92019 HCNO4-1-1 7 1,625468 [3,028016 |2,925354 |3,065088 | 3,025392 amostra - - - - 4 -3,11755 |-3,19064 -2,23624 amostra - - - - - 3 |-2,92229 /-2,91933 HCNO6-1-1 2,722092 |2,836223 | 2,900534 | 2,919325 | 2,680955 amostra : - - - - -

2 3,04430 |-2,80486 HCNO07-1-1 7 1,427307 |2,992991 [3,024171 [3,026991 |2,860917 amostra : - - - - -

3 2,96170 |-2,14522 HCNO8-1-1 7 2,213822 |2,904777 |2,932972 |2,946418 |2,742982 amostra . - - - - -

2 2,68698 /-2,67932 HCN09-1-1 1 2,701393 |2,648763 |[2,680585 [2,698737 |2,487884 amostra . - - - -

4 [314162 |-0,85883 -3,11876 HCN10-1-1 > 0,600853 |3,095718 | 3,125776 2,030283 amostra : - - - - -

2 2,88814 |-2,87874 HCN11-1-1 8 2,889737 [2,830355 | 2,865001 |2,878741 [2,722755 amostra : - - - -

3 |2,82945 |-2,76666 -2,42849 HCN12-1-1 3 2,036617 [2,776313 /2,807935 /2,832219 amostra : - - - - -

3 3,01075 |-2,59133 HCN13-1-1 5 2,071904 [2,958924 |2,986952 |2,991317 /2,965763 amostra : - - - - -

3 3,08293 |-1,38518 HCN14-1-1 8 1,648032 |3,027539 | 3,066985 | 2,940625 | 1,496404 amostra - - - - - -

2 -3,06974 HCN15-1-1 3,124011 2,257028 |3,045571 |[3,096724 [3,112312 |1,572719 amostra : - - - - -

3 3,18353 |-3,09237 HCN16-1-1 > 2,216449 [3,110737 |3,148526 | 3,144161 [2,897006 amostra : - - - -

2 3,18042 |-1,65294 -3,15528 HCN17-1-1 3 1,738588 |3,136684 | 3,170472 |[3,159371 amostra : - - - -

2 3,04958 |-2,67211 -2,99861 HCN18-1-1 1 1,8311758 2,991384 |3,056186 [3,064587 amostra : - - - - -

4 3,06643 |-3,04144 HCN19-1-1 q 2,475483 [3,017808 | 3,053021 | 3,026002 |[2,252704 amostra . - - - -

2 2,82360 |-2,82823 -2,76217 HCN20-1-1 2,840818 |2,764842 |[2,796821 [2,815995 amostra ' - - - -

2 2,91268 |-2,91427 |-2,93048 HCN21-1-1 5 2,860478 |2,888038 |2,923925 | 2,794134 amostra B - - - -

3 |3,02559 |-3,0332 -3,00498 HCN22-1-1 5 2,820345 |2,971769 3,037829 [2,981196 amostra ' - - - -

3 /3,00638 |-0,79788 -2,88798 HCN23-1-1 8 1,939534 | 2,945972 | 2,967655 | 2,964701 amostra : - - - - -

3 2,92915 |-2,85636 HCN24-1-1 8 2,049472 |2,856363 |2,900041 [2,942027 |2,718548 amostra : - - - - -

2 3,10671 |-3,09371 HCN25-1-1 9 3,084195 |3,028365 | 3,074889 [3,085766 | 3,032521 amostra - - - - -

3 -2,73455 HCN26-1-1 1,747864 |2,725095 | 2,767156 |[2,794498 | 2,759857 amostra - - - - -

2 -3,17895 |-3,17115 HCN27-1-1 3,172701 [3,100031 |3,152991 |3,182108 3,063556 amostra - - - - -

2 4 -2,25606 HCN28-1-1 1,137495 |3,038369 |[3,079205 |3,061232 /3,094773 amostra - - - - -

2 4 -2,35655 HCN29-1-1 1,798528 | 2,999069 | 3,034075 |3,050222 | 3,065285 amostra - - - - - 3 -3,384316 |-3,27548 HCN30-1-1 2,372758 [3,077602 |2,387595 | 3,355248 [3,350026 amostra . - - - - 2 3,3834086 |-3,07346 -3,26453 HCN31-1-1 3 1,736214 3,308071 [3,253249 |2,191101 amostra ' - - - - - 2 3,09365 |-2,9248 HCN32-1-1 pe 1,705294 |2,993169 |[3,039718 /3,039718 /3,076068 amostra ' - - - - - 3 3,18685 |-1,48182 HCN33-1-1 e 1,994166 |3,120675 |3,155821 [3,181526 |3,199549 amostra ' - - - - - 2 288841 |-2,89383 HCN34-1-1 > 2,893829 |2,805359 | 2,855586 | 2,888412 /2,899315 amostra ' - - - - - 3 3,23617 |-2,70431 HCN35-1-1 3 2,016632 [3,004392 |2,953345 |3,137969 |3,198925 amostra : - - - - - 3 3,04073 |-2,58175 HCN36-1-1 6 1,080986 | 2,969429 | 3,014122 [3,029579 | 2,963983 amostra : - - - - 2 3,13707 |-3,16126 -3,07987 HCN37-1-1 7 3,153046 3,121675 |3,137077 [3,123191 [Tabela 13-16] amostra - - - - - - 3 -2,78622 HCN38-1-1 2,853621 1,856802 |2,784866 |2,689311 |2,853621 |2,759892 amostra - - - - - 2 -2,80915 -2,16644 HCN39-1-1 3,116056 1,458395 | 3,054381 | 3,095261 [3,095261 amostra - - - - - - 3 -2,91413 HCNA40-1-1 3,035806 1,724433 |2,970721 | 3,015484 [3,035806 |2,216735 amostra - - - - -

2 -2,02489 -2,82877 HCN41-1-1 3,044774 1,690336 | 2,967666 | 3,022994 [3,004511 amostra - - - - -

4 -2,59858 -2,389236 HCN42-1-1 2,623811 1,071426 |3,239465 | 3,293606 |3,303533 amostra - - - - - -

3 -3,00302 HCN43-1-1 3,023346 3,022048 |2,961632 |[2,994424 |2,999318 |2,532992 amostra - - - - - -

2 -2,42653 HCN44-1-1 3,120224 2,119437 [3,063711 [3,095984 |3,116305 |2,934188 amostra - - - - - -

2 -2,9205 HCNA45-1-1 3,115974 1,706806 |3,021137 |3,087219 [3,044618 |[2,837492 amostra - - - - - -

3 -2,3824 HCNA46-1-1 2,869533 0,850751 |2,790605 |2,837349 |2,854608 |2,831745 amostra - - - - - -

3 -3,01603 HCN47-1-1 3,044224 3,044224 |2,972387 |3,021022 |3,032468 |2,838287 amostra - - - - -

3 -2,6761 HCN48-1-1 2,685648 2,630075 |2,673413 |2,705392 [2,295218 amostra - - - -

3 -2,99039 |-2,98747 -2,95383 HCN49-1-1 2,991864 2,920107 2,984565 |2,893484 amostra - - - - - -

3 -2,88677 HCN50-1-1 2,873362 2,880761 |2,793204 |2,846343 |2,860354 |2,675337 amostra - - - - - -

3 -2,24429 HCN51-1-1 2,909543 2,923158 |2,849545 |[2,879758 |2,897644 |2,590141 amostra - - - - -

2 -3,13179 -3,12881 HCN52-1-1 3,120007 3,139312 | 3,056602 |[3,060384 3,003501 amostra - - - - - -

4 -3,13315 HCN53-1-1 3,176403 2,325476 |3,113669 |3,143904 |3,172024 | 3,054409 amostra - - - - - -

2 -2,74785 HCN54-1-1 2,778889 2,148526 [2,6896551 |[2,747855 |2,780354 |2,628396 amostra - - - - - -

2 -2,79101 HCN55-1-1 asse] 1,3841466 [3,075112 | 3,112436 Eracecas [seo amostra - - - - - 3 -3,18243 |-3,16984 HCN56-1-1 3,165724 3,103485 | 3,145707 |3,153603 |3,101125 amostra 7 7 7 7 7 2 -2,23012 -3,06832 HCN57-1-1 3,103082 2,527376 |3,026795 3,020245 | 3,018946 amostra - - - - - - 2 -2,8848 HCN58-1-1 2,898545 2,907006 2,879422 |2,907006 | 2,535787 amostra 55-1-1 | 5 : -2,68153) : : : : 2,3729138 3,199012 | 2,950662 | 3,163125 |[3,172205 |3,178365 amostra 55-2-1 |6 . -3,23945 | . . . : 2,489354 3,339794 | 3,185677 | 3,219981 [3,327429 |1,881743 amostra 56-1-1 |4 : -2,90446| Ú Ú Ú -2,86614 1,996789 2,901269 | 2,828229 | 2,870564 |2,904462 amostra 56-2-1 |6 : -3,30334 | . . . . 1,489696 3,265169 | 3,009272 | 3,285306 |3,309523 |2,779696 amostra 57-1-1 |4 . -3,19507 | Ú . . : 3,3138547 2,6025686 | 2,621035 |3,321635 |3,230643 | 1,796006 amostra 57-2-1 |6 : -2,98826 | À -3,23851 || À 3,351389 2,834226 | 2,332471 3,367013 |2,837034 amostra 58-1-1 |4 : -2,93778| -3,23809 | À : 3,104255 1,7830118 3,255699 |3,248275 | 3,281934 amostra 58-2-1 |6 . -3,26629 | . . . 4 3,305799 3,071716 |2,181067 | 3,387469 |[3,395869 amostra 59-1-1 |4 : -2,71067) À Ú Ú Ú 2,718067 2,7088486 | 2,6155601 | 2,670449 |2,699816 |2,701607 amostra 59-2-1 |9 : -3,2227 || À : : B 3,229822 3,215698 | 3,133631 | 3,182274 [3,142346 |1,937036 amostra 60-1-1 |4 : -3,29718 || : À Ú : 1,8368219 3,036317 | 3,2655693 | 3,310439 |[3,124363 |2,541359 amostra 60-2-1 |8 : -2,93628| : : : : 1,7741117 2,707089 | 3,178906 | 3,2025486 [3,213308 |2,656746 amostra 40-1-2 |2 -3,23638 |-2,35955 | À -2,27249 || : 1,899913 |3,153815 3,219467 |3,113012 amostra 40-2-2 |5 -3,25486 |-3,31401 | . . . . 2,986742 | 3,242888 | 3,287045 |3,304834 |3,317112 amostra 52-1-2 |3 À -3,25444 | À -3,15428 | ; 3,247091 2,723484 | 2,986507 2,724795 | 1,890782 amostra 52-2-2 | 5 : -3,31633 |-2,55515 |-3,29469 || . : 1,665592 3,291684 |3,124673 |1,707119 amostra 56-1-2 |3 . -3,00756 | . . . Ú 3,004401 3,020428 | 2,936107 | 2,985917 |2,938805 | 0,856982 amostra 56-2-2 |4 Ú -2,69169| Ú 26513 | : 2,700988 2,700988 | 2,612814 2,680785 | 2,691688 amostra 59-1-2 |5 . -2,33901 | . . Ú Ú 3,210118 2,837206 | 3,136767 | 3,167149 |[3,196439 [3,201518 amostra 59-2-2 |7 -3,12996 |-1,736 |. . . Ú . 3,128059 | 3,025497 | 3,071254 |2,989584 |3,133786 amostra 72-1-1 |2 -1,4204 |-3,36296 | À À : À 3,091895 | 3,174006 | 3,351201 [3,351201 [2,3773833 amostra 72-2-1 |6 Ú -2,50724|| À À À ; 1,096099 2,414436 |2,876983 | 3,395228 [3,319011 |1,296182 amostra 72-1-2 |2 . -3,0065 | . . . . 2,582066 1,833385 |3,149975 |3,197281 |3,130334 | 3,238846 amostra 72-2-2 |6 -2,46979 |-3,32543 | À À À : 2,798574 | 2,553109 | 3,323697 |3,260972 |2,292328 amostra 73-1-1 |5 : -2,70263| : : -2,73066 | 2,753783 1,912336 |2,699625 |2,724273 2,750404 amostra 73-2-1 |7 Ú 217338) : À Ú : 3,152446 1,879007 |3,084979 |3,122483 |3,161667 | 3,169188 amostra 73-1-2 |4 : 217402) -3,14833 | : : 3,221681 2,116375 3,186652 |3,158723 | 3,230455 amostra 73-2-2 |7 : -2,80357 | À À : : 2,124981 2,805288 | 2,718138 | 2,764209 |2,800148 |2,778553 amostra 73-1-3 |4 -1,60164 |-3,09807 | . -3,21004 |. . 2,774908 |3,187636 2,996444 |3,206225 amostra 73-2-3 |5 : -2,32037 |-2,48732 | À À À 2,485815 2,425574 |2,459574 |2,498006 |2,391618 amostra 74-1-1 |4 : -2,75163) : À : : 3,174925 1,628592 |3,119067 |2,276831 |3,111643 |3,097165 amostra 74-21 |6 . -2,89681 || . . . 4 3,322776 1,586131 |3,267577 [2,3229035 |3,263394 amostra 74-1-2 | 2 Ú -2,56052) Ú Ú -2,92166 || 2,9109387 1,1380716 |2,871716 |2,835746 2,805634 amostra 74-2-2 |3 . -2,9498 | . . . . 3,117176 1,728068 |3,072138 |2,255155 |3,117176 | 3,056853 amostra 77-1-1 |4 À -0,38195) . . . : 0,977104 1,929446 |3,146047 |3,181654 |3,165467 | 1,270952 amostra 77-21 |2 Ú -2,18671 || À À : À 1,3811369 2,242509 |3,171093 |3,192218 [3,213002 |2,272375 amostra 77-3-1 |6 Ú -2,38768 | À À À À 1,454767 3,110662 |3,165175 | 3,196649 |[3,215503 |2,714355 amostra 77-4-1 |9 : -1,5635 || . . . . 1,016901 3,051929 | 3,168434 | 3,191297 |3,210802 |2,399189 amostra 84-1-1 | 3 À 316197) : 313715 | : 0,472908 3,150765 |3,111136 3,149384 | 2,849044 amostra 84-21 |9 À -3,01075| : : : : 0,646754 3,004635 | 2,958574 | 2,994134 [3,013843 |2,712813 amostra 84-3-1 | 8 À -3,83107] : À À Ú 0,717264 2,967551 | 3,186637 | 3,129175 [3,3438054 |3,329598 amostra 84-4-1 |7 À -3,36155 | . . . . 0,853438 3,332124 |3,161054 | 2,562543 |[3,338156 |3,321766 amostra 85-1-1 |4 -3,04345 |-3,06872 | À À : : 3,068725 | 2,5693832 | 3,029853 |[3,063872 |2,877188 amostra 85-2-1 |7 . -3,33625 | -3,17877 |-3,31694 || . 3,340825 3,030684 3,330214 | 3,8347007 amostra 86-1-1 | 5 : -3,19023 |-4 : : : B 1,1119831 2,911042 |3,139688 |3,229019 | 1,471329 amostra 86-2-1 |9 -0,90828 |-2,53924 | : : : : 3,324337 |3,188675 | 3,235611 [3,337566 |2,153782 amostra 87-1-1 |4 Ú 214177) Ú Ú Ú Ú 2,944638 1,387155 |2,892183 |2,857221 |2,913502 | 2,935922 amostra 87-21 |7 Ú -2,89027 | . . . -3,24111 2,315075 2,872488 |3,058038 | 3,135837 |[3,183307 amostra 87-3-1 | 2 4 4 . À 281912 | : 2,868626 | 2,837499 2,915431 |2,883674 amostra 88-1-1 |4 3,235 —|-1,04808| . Ú . : 1,886728 |3,047766 |2,941394 |3,170796 | 1,5688081 amostra 88-2-1 |6 : -3,17852]| À À : : 3,1070386 3,175752 |3,115354 | 3,090864 |[3,179908 |[3,159515 amostra 89-1-1 |4 ” -2,26748 || À -2,90919 |-3,01077 |-3,01077 0,681702 |2,935519 amostra 89-2-1 |5 4 -1,79349 || . . . -2,80118 0,550655 | 2,776844 | 2,758311 |2,855788 amostra 89-3-1 |9 : 4 ' À À 4 : 2,674046 2,651539 | 2,578988 | 2,562003 2,641422 amostra 89-4-1 |12 : -3,32359 |-4 À : 4 : 1,797326 3,272442 | 3,257405 3,3815722 amostra 90-1-1 |5 -1,82006 |-1,27882| | : À Ú Ú 2,192014 |3,061975 |3,053471 [3,142631 |2,737658 amostra 90-2-1 |8 : -2,7759 | 299751 | : : 3,016815 3,069203 2,983574 | 3,080484 | 3,087686 amostra 91-1-1 |4 -0,62828 |-3,1899 | À õ -3,18542 || 3,183935 | 3,132289 | 3,099353 3,188405 amostra 91-2-1 |6 -0,44305 |-3,15283| . . . .

2,454116 |3,142546 |3,104863 [3,182417 [3,186614 amostra 88-1-2 |3 4 -3,13136|| -3,0699 |-3,04756 |-4 : 3,109894 3,131363 amostra 88-2-2 |3 . -3,30635 | . . . -3,31093 3,8315558 3,114356 |3,258925 | 3,218648 |[3,281273

[0317] O coeficiente de correlação de profundidade de bolsa periodontal (Pd) e o valor de log10 (razão relativa à carga bacteriana total) de cada bactéria foi calculado para todos os 36 tipos de bactérias, e além disso, o valor p e o valor q foram calculados em relação à significância dessas correlações (Tabela 14). [Tabela 14] 6 espécies de bactérias ruins, 23 espécies de bactérias boas | Coeficiente de correlação [valor dep valordeq Filifactor alocis 0,640 2,12E-38 7,63E-37 Porphyromonas endodontalis 0,556 1,94E-27 3,49E-26 Eubacterium nodatum 0,532 8,13E-25 —9,76Et-24 Eubacterium saphenum 0,468 7,74E-19 3,98E-18 Selenomonas sputigena 0,000254 /0,000366 Prevotella denticola 0,0083427 —0,004254 Prevotella melaninogenica 0,00334 0,004254 Gemella sanguinis oia = | 0,003243 |0,004254 Corynebacterium matruchotii -0,208 0,000177 0,000265 Rothia mucilaginosa -0,209 0,000166 /0,00026 Porphyromonas catoniae -0,227 3,96E-05 /6,48E-05

6 espécies de bactérias ruins, 23 espécies de bactérias boas o Je

[0318] Esses valores foram calculados com uso do software estatístico "R" (R Development Core Team) com a função de cor para o coeficiente de correlação, a função de teste de cor para o valor p, e a função de ajuste de p para o valor q "BH" foi especificado na opção "métodos").

[0319] Em relação à significância dos coeficientes de correlação mostrados na Tabela 14, foi especificado que uma bactéria mostra uma correlação significativa quando o nível de significância é "valor q < 0,05”. Em seguida, as bactérias que têm uma correlação significativa foram aproximadamente divididas na "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" e a "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" com base no coeficiente de correlação positivo ou negativo. O grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi definido para consistir em 6 espécies bacterianas, a saber, Filifactor alocis, Porphyromonas endodontalis, Eubacterium nodatum, Eubacterium saphenum, Treponema medium, e Selenomonas sputigena.

[0320] O grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi definido para consistir em 23 espécies bacterianas, a saber, Prevotella denticola, Prevotella melaninogenica, Gemella sanguinis, Eubacterium sulci, Corynebacterium matruchotii, Rothia mucilaginosa, Porphyromonas catoniae, Solobacterium moorei, Neisseria flavescens, Prevotella loescheii, Megasphaera micronuciformis, Actinomyces graevenitzii, Veillonella atypica, Prevotella pallens, Prevotella shahii, Porphyromonas pasteri, Veillonella rogosae, Alloprevotella spp. (A. rava, OT 308), Rothia dentocariosa, Granulicatella adiacens, Streptococcus salivarius, Haemophilus parainfluenzae e Streptococcus parasanguinis.

[0321] Subsequentemente, a média do grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" e o grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" foi calculada com uso do valor de log10 (razão relativa à carga total). Por fim, em relação à média, o índice de equilíbrio de grupos bacterianos foi calculado subtraindo-se o valor do grupo de "espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta" a partir do valor do grupo de "espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta". Os valores são mostrados na Figura 15 (Tabela 15-1 à Tabela 15-7) [Tabela 15-1]

EE E ruins boas equilíbrio [24052 ars o ore === =

Média de bactérias PD Índice | de ruins boas equilíbrio -2,11942 12 0,9141 -1,51453 |-301605 ———s 1,5015 -1,47366 7 1,5789 -1,88411 —|-200151 ——a 0,1174 -1,46719 6 -0,072 -1,70827 4 1,4486 -1,77087 9 1,4079 -1,77134 260886 = a 0,8375 -1,82566 7 1,2306 -2,45961 5 0,1258 -2,85454 6 0,126 -2,15911 5 0,8228 -1,70904 9 1,4327 -1,51994 5 0,0889 -1,80002 9 1,3984 -2,35963 4 0,1167 -1,27707 " 1,7163 -2,04888 5 0,9154 -1,50674 9 1,6099 -2,62661 4 -0,122 -1,70773 7 1,4625 -2,22261 4 0,3514 -1,13973 7 1,6482 -1,80924 5 1,1986 -1,40118 EXE 1,6765 -1,85023 4 1,1986 -1,52302 8 1,6429 -1,57378 5 1,7492 -1,4188 EXFCNE 1,894 -1,93506 |-503919 — hà 1,1041 -1,63395 ase55 1,3516 -1,60191 sis — a 1,3799 |-1,6688 -3,71625 8 2,0475

Média de bactérias PD Índice de ruins boas equilíbrio -2,90677 4 0,347 [Tabela 15-2]

[Tabela 15-3]

[Tabela 15-4]

[Tabela 15-5] -2,31049 0,4305 -1,89734 -se02262 ——e ——i1,6258 -1,56521 1,4396 -1,40091 1,7683 -2,18025 0,7607 -1,42823 -s0238 ja —it65956 -2,28695 0,8514 -2,62822 0,0243

-2,82469 0,1562 -2,56325 0,5822 -2,77786 0,1335 [Tabela 15-6] -3,06834 -2,7368 2 -0,832 -3,0015 -2,60423 2 -0,3897

-2,67618 -2,68039 3 0,0042 -2,85091 -2,64894 3 -0,202 -3,09099 -2,97411 2 -0,1 17 -2,79091 -2,81374 2 0,0228 -2,99846 -3,08676 4 0,0883 -2,88005 -3,07857 6 0,1985 -1,63638 -3,19198 4 1,5556 -2,33864 -2,80545 7 0,4668

-2,50223 -2,95617 2 0,4539 -2,7251 1 -2,54465 5 -0,18 [Tabela 15-7]

-1,64476 -a79419 | 1140 -1,65071 1,4033 -1,44279 1,5765 -1,66116 304008 —— 8 18879 -1,67138 1,2309 -1,64294 1,5529 -1,86769 1,3629 -2,05321 0,8558 -1,99502 1,2432 -1,40419 1,8261 -1,79096 1,2818 -2,05409 0,7532

[0322] A Figura 17 mostra um diagrama de dispersão no qual o eixo geométrico vertical representa o índice de equilíbrio e o eixo geométrico horizontal representa a profundidade de bolsa periodontal (Pd). Foi decidido determinar o estado de doença/estado de doença criando-se um modelo discriminante com uso de dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm e dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais a partir dos dados mostrados na Figura 17 e com uso de dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 4 mm como dados de teste.

[0323] Um histograma foi criado para os dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 1 mm a 3 mm e os dados com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais a partir dos dados mostrados na Figura 17 (Figura 18). O eixo geométrico vertical da Figura 18 representa um valor obtido convertendo-se o índice de equilíbrio da Figura 17 com LOG10. O eixo geométrico horizontal representa frequência.

[0324] A análisede ROC foi realizada com base nos dados na Figura 18 (Figura 19), e no ponto próximo à esquerda superior (índice de equilíbrio (LOG10) = 0,3182) foi tomado como o valor de corte. Nesse caso, foi constatado a partir da análise que um teste foi realizado com uma sensibilidade de 0,877 e um especificidade de 0,884.

[0325] Em seguida, com uso desse teste, dados com uma profundidade de bolsa periodontal (Pd) de 4 mm foram determinados. Os dados de 4 mm foram os dados com uma profundidade de bolsa de 4 mm na Figura 17, e houveram dados para 60 indivíduos. Quando esses dados foram determinados com um valor de corte de 0,3182, 31 indivíduos tiveram um valor de índice de equilíbrio maior do que o valor de corte. Foi determinado que esses indivíduos tiveram um estado de doença periodontal conforme avançado como o estado de doença com uma profundidade de bolsa periodontal de 5 mm ou mais.

[0326] TextoLivrede Listagem de Sequências

[0327] SEQ ID NOs: 1 a 91: DNAs sintéticos Listagem de Sequências

Claims (9)

REIVINDICAÇÕES

1. Método de exame intraoral caracterizado pelo fato de que consiste em medir uma intensidade de sinal de um ácido nucleico a partir de um grupo bacteriano oral presente em uma amostra oral, calcular uma abundância do grupo bacteriano a partir de um valor medido da intensidade de sinal e determinar o estado da doença periodontal com o uso do valor calculado obtido como um índice, em que a abundância do grupo bacteriano mostra uma correlação entre uma carga bacteriana de uma espécie bacteriana que aumenta à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta e uma carga bacteriana de uma espécie bacteriana que diminui à medida que um valor de bolsa periodontal aumenta.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o estado de doença periodontal é determinado mediante a comparação do valor calculado obtido com um valor de corte da abundância do grupo bacteriano.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a abundância do grupo bacteriano é uma razão entre a carga bacteriana da espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

4. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o valor de corte é determinado com base em uma curva ROC criada a partir de um valor calculado obtido mediante o cálculo da abundância do grupo bacteriano a partir do valor medido da intensidade de sinal do ácido nucleico a partir do grupo bacteriano oral presente na amostra oral para padronização.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a abundância do grupo bacteriano mostra uma correlação entre a carga bacteriana da espécie Fusobacterium nucleatum e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os seguintes (a) e (b) são usados como a abundância do grupo bacteriano: (a) uma correlação entre a carga bacteriana da espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta (incluindo pelo menos uma espécie bacteriana além da espécie Fusobacterium nucleatum) e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta; e (b) uma correlação entre a carga bacteriana da espécie Fusobacterium nucleatum e a carga bacteriana da espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a espécie bacteriana que aumenta à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Campylobacter gracilis, Campylobacter rectus, Campylobacter showae, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Fusobacterium periodonticum, Prevotella intermedia, Streptococcus constellatus, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Filifactor alocis, Porphyromonas endodontalis, Eubacterium nodatum, Eubacterium saphenum, Treponema medium e Selenomonas sputigena.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a espécie bacteriana que diminui à medida que o valor de bolsa periodontal aumenta é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Prevotella nigrescens, Campylobacter concisus, Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena, Streptococcus gordonii, Streptococcus intermedius, Streptococcus mitis, Streptococcus mitis bv 2, Actinomyces odontolyticus, Veillonella parvula, Actinomyces naeslundii Il, Selenomonas noxia, Prevotella denticola, Prevotella melaninogenica, Gemella sanguinis, Eubacterium sulci, Corynebacterium matruchotii, Rothia mucilaginosa, Porphyromonas catoniae, Solobacterium moorei, Neisseria flavescens, Prevotella loescheii, Megasphaera micronuciformis, Actinomyces graevenitzii, Veillonella atypica, Prevotella pallens, Prevotella shahii, Porphyromonas pasteri, Veillonella rogosae, Alloprevotella spp. (A. rava, OT 308),

Rothia dentocariosa, Granulicatella adiacens, Streptococcus salivarius, Haemophilus parainfluenzae e Streptococcus parasanguinis.

9. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a espécie Fusobacterium nucleatum é pelo menos uma selecionada do grupo que consiste em Fusobacterium nucleatum subsp vincentii, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp Animalis e Fusobacterium nucleatum subsp nucleatum.