BR112019019928A2

BR112019019928A2 - derivados de indolina substituídos como inibidores da replicação viral da dengue

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Publication number: BR112019019928A2
Application number: BR112019019928A
Authority: BR
Inventors: Didier M Marchand Arnaud; Rudolf Romanie Kesteleyn Bart; Alice Marie-Eve Bardiot Dorothée; Bonfanti Jean-François; Jean-Marie Bernard Raboisson Pierre
Original assignee: Janssen Pharmaceuticals Inc; Univ Leuven Kath
Priority date: 2017-03-31
Filing date: 2018-03-29
Publication date: 2020-04-22
Also published as: PE20191652A1; KR102556222B1; CO2019010292A2; CN110612284A; NI201900098A; WO2018178238A1; JOP20180026A1; AU2018246299A1; EA201992334A1; CN110612284B; CL2019002744A1; ECSP19070413A; US11179368B2; IL269657A; HRP20211102T1; MX2019011608A; SG11201908465QA; JP7038733B2; CA3055260A1; UY37646A

Abstract

a presente invenção refere-se a derivados de indolina substituídos, a métodos para prevenir ou tratar infecções virais da dengue ao usar os referidos compostos e se refere também aos referidos compostos para uso como um medicamento, mais preferencialmente para uso como um medicamento para tratar ou prevenir infecções virais da dengue. a presente invenção se refere ainda a composições farmacêuticas ou a preparações de combinações dos compostos, às composições ou preparações para uso como um medicamento, mais preferencialmente para a prevenção ou tratamento de infecções virais da dengue. a invenção se refere também a processos para a preparação dos compostos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para DERIVADOS DE INDOLINÂ SUBSTITUÍDOS COIVIO INIBIDORES DA REPLICAÇÃO VIRAL DA DENGUE.

[0001] A presente invenção refere-se a derivados de indolina substituídos, a métodos para prevenir ou tratar infecções virais da dengue ao usar os referidos compostos e se refere também aos referidos compostos para uso como um medicamento, mais preferencialmente para uso como um medicamento para tratar ou prevenir infecções virais da dengue. A presente invenção se refere ainda a composições farmacêuticas ou a preparações de combinações dos compostos, às composições ou preparações para uso como um medicamento, mais preferencialmente para a prevenção ou tratamento de infecções virais da dengue. A invenção se refere também a processos para a preparação dos compostos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0002] Os flavivírus, que são transmitidos por mosquitos ou carrapatos, causam infecções fatais no homem, tais como a encefalite e febre hemorrágica. São conhecidos quatro serotipos distintos, mas intimamente relacionados, do flavivírus dengue, os assim designados de DENV-1, -2, -3 e -4. A dengue é endêmica na maioria das regiões tropicais e subtropicais em todo o mundo, predominantemente em áreas urbanas e semiurbanas. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS), 2,5 bilhões de pessoas, dos quais 1 bilhão de crianças, estão em risco de infecção pelo DENV (OMS, 2002). Estima-se que ocorram em todo o mundo por ano 50 a 100 milhões de casos de febre da dengue [DF], meio milhão de casos de doença da dengue grave (isto é, febre hemorrágica da dengue [DHF] e síndrome do choque da dengue [DSS]), e mais de 20.000 mortes. A DHF se tem tornado uma causa principal de hospitalização e morte entre crianças em regiões endêmicas. Ao todo, a dengue representa a causa mais comum de

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2/77 doença arboviral. Devido a grandes surtos recentes em países situados na América Latina, Sudeste Asiático e no Pacífico Ocidental (incluindo Brasil, Porto Rico, Venezuela, Camboja, Indonésia, Vietnã, Tailândia), os números de casos de dengue têm aumentado dramaticamente ao longo dos últimos anos. Não só está o número de casos de dengue a aumentar à medida que a doença está se disseminando para novas áreas, como também os surtos tendem a ser mais graves.

[0003] Embora esteja a ser feito progresso no desenvolvimento de vacinas contra a dengue com a disponibilidade da vacina Dengvaxia®, muitas dificuldades são encontradas. Estas incluem a existência de um fenômeno referido como intensificação dependente de anticorpos (ADE). A recuperação de uma infecção por um serotipo proporciona imunidade ao iongo da vida contra esse serotipo mas confere somente proteção parcial e transiente contra uma posterior infecção por um dos outros três serotipos.

[0004] Após infecção com outro serotipo, os anticorpos heterólogos pré-existentes formam complexos com o serotipo do vírus da dengue recém-infectado mas não neutralizam o patógeno. Ao invés, se acredita que a entrada do vírus nas células é facilitada, resultando em replicação viral não controlada e picos de títulos virais mais elevados. Em infecções tanto primárias como secundárias, os títulos virais mais eievados estão associados à doença da dengue mais grave. Uma vez que os anticorpos maternos podem passar facilmente para as crianças por amamentação, isto poderá ser uma das razões pelas quais as crianças são mais afetadas por doença da dengue grave do que os adultos.

[0005] Em localizações com dois ou mais serotipos circulando simultaneamente, também referidas como regiões hiperendêmicas, o risco de doença da dengue grave é significativamente mais elevado devido a um risco aumentado de se experienciar uma infecção secun

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3/77 dária, mais grave. Além do mais, em uma situação de hiperendemicidade, a probabilidade da emergência de cepas mais virulentas é aumentada, o que por seu turno aumenta a probabilidade de febre hemorrágica da dengue (DHF) ou de síndrome do choque da dengue. [0006] Os mosquitos que transportam a dengue, incluindo o Aedes aegypti e o Aedes albopictus (mosquito-tigre), estão se movendo para norte no globo. De acordo com os Centers for Disease Control and Prevention (CDC) dos Estados Unidos (EUA), ambos os mosquitos são atualmente onipresentes no sul do Texas. A disseminação para norte de mosquitos veículos da dengue não está confinada aos EUA, mas foi também observada na Europa.

[0007] Dengvaxia®, a vacina contra a dengue produzida pela Sanofi Pasteur, foi em primeiro lugar aprovada no México e tem recebido entretanto aprovação em mais países. Não obstante, a vacina deixa bastante espaço para melhoria devido à sua eficácia limitada, especialmente contra DENV-1 e -2, baixa eficácia em pacientes naive para flavivírus e o prolongado calendário de doseamento.

[0008] Apesar destas deficiências, a vacina é decisiva nas zonas endêmicas pois oferecerá proteção a uma grande parte da população, mas provavelmente não a crianças muito jovens, sobre as quais recai a maior incidência da dengue. Além disso, o calendário de dosagem e a eficácia muito limitada em sujeitos naíves a flavivírus fazem com que seja inadequada e provavelmente pouco compensatória/rentável para viajantes de áreas não endêmicas que se deslocam a áreas endêmicas da dengue. As deficiências acima mencionadas das vacinas da dengue são a razão pela qual há necessidade de um antiviral profilático contra a dengue pré-exposição.

[0009] Além do mais, hoje em dia não estão disponíveis fármacos antivirals específicos para o tratamento ou prevenção da infecção pelo vírus da febre da dengue. Além do mais, não estão disponíveis atual

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4/77 mente fármacos antivirals específicos para o tratamento ou prevenção da infecção pelo vírus da febre da dengue. Claramente existe ainda uma grande necessidade médica não atendida de terapêuticos para a prevenção ou tratamento de infecções virais em animais, mais em particular em humanos e especialmente para infecções virais causadas por fiavivírus, mais em particular vírus de Dengue. Compostos com boa potência antiviral, nenhuns ou baixos níveis de efeitos secundários, uma atividade de amplo espectro contra múltiplos serotipos do vírus de Dengue, uma baixa toxicidade e/ou boas propriedades farmacocinétioas ou -dinâmicas são altamente necessários.

[0010] A patente WO-2010/021878 divulga derivados de 2fenilpirrolidina e indoiina como antagonistas dos receptores de mentol do frio para o tratamento de doenças infiamatórias e centrais. WO2013/045516 divulga derivados de indol e indoiina para uso no tratamento de infecções virais da dengue.

[0011] A presente invenção fornece agora compostos, derivados de indoiina substituídos, que apresentam elevada atividade potente contra os quatro (4) serotipos do vírus da Dengue.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0012] A presente invenção é baseada na descoberta inesperada de que, pelo menos, um dos problemas acima mencionados pode ser resolvido pelos atuais compostos da invenção.

[0013] A presente invenção fornece compostos que mostraram possuir atividade antiviral potente contra os quatro (4) serotipos atualmente conhecidos. A presente invenção demonstra ainda que estes compostos inibem eficazmente a proliferação do vírus da Dengue (DENV). Portanto, estes compostos constituem uma classe útil de compostos potentes que podem ser usados no tratamento e/ou prevenção de infecções virais em animais, mamíferos e humanos, mais especificamente no tratamento e/ou prevenção de infecções com vírus

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5/77 da Dengue.

[0014] A presente invenção se refere ainda ao uso de tais compostos como medicamentos e ao seu uso para a fabricação de medicamentos para o tratamento e/ou prevenção de infecções virais, em particular com vírus pertencentes à família dos vírus da Dengue em animais ou mamíferos, mais em particular em humanos. A invenção se refere também a métodos para a preparação de todos esses compostos e a composições farmacêuticas compreendendo os mesmos em uma quantidade eficaz.

[0015] A presente invenção se relaciona também com um método de tratamento ou prevenção de infecções virais de dengue em humanos pela administração de uma quantidade eficaz de um ou mais tais compostos, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um ou mais outros medicamentos, como outro agente antiviral, a um paciente em sua necessidade.

[0016] Um aspecto da invenção é o fornecimento de compostos de fórmula (I), incluindo qualquer forma estereoquimicamente isomérica dos mesmos:

em que [0017] R¹ é flúor, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometila e R⁴ é hidrogênio ou [0018] R¹ é flúor, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometila e R⁴ é metóxi ou [0019] R¹ é flúor, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometóxi e R⁴é hiPetição 870190095446, de 24/09/2019, pág. 25/103

6/77 drogênio ου [0020] R¹ é cloro, R² é -CH₂CH₂OH, R³ é trifluorometila e R⁴ é hidrogênio ou [0021] R¹ é cloro, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometila e R⁴ é metóxi ou [0022] R¹ é cloro, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometóxi e R⁴ é hidrogênio ou [0023] R¹ é cloro, R² é -(CH₂)₃COOH, R³ é trifluorometila e R⁴ é hidrogênio ou [0024] R¹ é cloro, R² é -(CH₂)3COOH, R³ é trifluorometila e R⁴ é metóxi ou [0025] R¹ é cloro, R² é -(CH₂)₃COOH, R³ é trifluorometóxi e R⁴ é hidrogênio;

[0026] ou de um seu sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável.

[0027] Os compostos especificamente mencionados acima são

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7/77 [0028] Parte da presente invenção é também uma composição farmacêutica compreendendo um composto mencionado acima ou uma sua forma estereoisomérica, sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável em conjunto com um ou mais excipientes, diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[0029] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos incluem os seus sais de adição de ácido e de base. Os sais de adição de ácido adequados são formados a partir de ácidos que formam sais não tóxicos. Os sais de base adequados são formados a partir de bases que formam sais não tóxicos.

[0030] Os sais de ácidos farmaceuticamente aceitáveis tais como mencionados anteriormente se destinam a compreender as formas de sal de adição de ácidos não tóxicas terapeuticamente ativas que os compostos da fórmula (I) são capazes de formar. Estes sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser convenientemente obtidos por tratamento da forma de base com tal ácido apropriado. Ácidos apropriados compreendem, por exemplo, ácidos inorgânicos tais como ácidos hidro-hálicos, por exemplo, ácido clorídrico ou bromídrico, ácido sulfúrico, nítrlco, fosfórico e semelhantes; ou ácidos orgânicos tais como, por exemplo, ácido acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (isto é, etanodioico), malônico, succínico (isto é, ácido butanodioico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfônico, etanossulfônico, benzenossulfônico, p~toluenossulfô~ nico, ciclâmico, salicílico, p-aminossalicílico, ácido pamoico e ácidos semelhantes.

[0031] Os compostos da invenção podem também existir em formas não solvatadas e solvatadas. O termo solvato é usado aqui para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol.

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8/77 [0032] O termo polimorfo se refere à capacidade do composto da invenção de existir em mais do que uma forma ou estrutura de cristal. [0033] Os compostos da presente invenção podem ser administrados como produtos cristalinos ou amorfos. Podem ser obtidos, por exemplo, como tampões sólidos, pós, ou filmes, por métodos tais como precipitação, cristalização, liofilização, secagem por pulverização, ou secagem por evaporação. Podem ser administrados sozinhos ou em combinação com um ou mais outros compostos da invenção ou em combinação com um ou mais de outros fármacos. Geralmente serão administrados como uma formulação em associação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. O termo excipiente é aqui usado para descrever qualquer ingrediente sem ser(em) o(s) composto^) da invenção. A escolha do excipiente depende largamente de fatores tais como o modo de administração particular, o efeito do excipiente na solubilidade e a estabilidade e natureza da forma de dosagem. [0034] Os compostos da presente invenção ou qualquer seu subgrupo podem ser formulados em várias formas farmacêuticas para fins de administração. Como composições apropriadas podem ser citadas todas as composições usualmente empregues para administração sistêmica de fármacos. Para preparar as composições farmacêuticas desta invenção, uma quantidade eficaz do composto particular, opcionalmente na forma de sal de adição, como o ingrediente ativo é combinada em mistura com adição intima com um veículo farmaceuticamente aceitável, veículo esse que pode tomar uma ampla variedade de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração. Estas composições farmacêuticas estão desejavelmente na forma de dosagem unitária adequada, por exemplo, para administração oral ou retal. Por exemplo, na preparação das composições na forma de dosagem oral, pode se empregar quaisquer dos meios farmacêuticos usuais tais como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois

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9/77 e similares no caso de preparações líquidas orais tais como suspensões, xaropes, elixires, emulsões, e soluções; ou veículos sólidos tais como amidos, açúcares, caulim, diluentes, lubrificantes, ligantes, agentes de desintegração e similares no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Devido à sua facilidade de administração, os comprimidos e as cápsulas representam as formas unitárias de dosagem oral mais vantajosas, caso em que obviamente são empregados veículos farmacêuticos sólidos. São também incluídas preparações na forma sólida que podem ser convertidas, pouco tempo antes do uso, em formas líquidas.

[0035] É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuticas acima mencionadas na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. Forma de dosagem unitária, como usada no presente documento, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias, contendo cada unidade uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico requerido. Exemplos de tais formas de dosagem unitária são comprimidos (incluindo comprimidos sulcados ou revestidos), cápsulas, pílulas, pacotes de pó, hóstias, supositórios, soluções ou suspensões injetáveis e similares e seus múltiplos segregados.

[0036] Os peritos no tratamento de doenças infecciosas serão capazes de determinar a quantidade eficaz a partir dos resultados de teste apresentados doravante. Em geral, é contemplado que uma quantidade diária eficaz seria de 0,01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, mais preferencialmente de 0,1 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Pode ser apropriado administrar a dose requerida como duas, três, quatro ou mais subdoses em intervalos apropriados ao longo do dia. As referidas subdoses podem ser formuladas como formas de dosa

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10/77 gem unitária, por exemplo, contendo 1 a 1000 mg, e em particular 5 a 200 mg de princípio ativo por forma de dosagem unitária.

[0037] A dosagem e frequência de administração exatas dependem do composto particular da invenção usado, da condição patológica particular sendo tratada, da gravidade da condição patológica sendo tratada, da idade, peso e condição física geral do paciente particular, bem como de outra medicação que o indivíduo possa estar tomando, tal como é bem conhecido dos peritos na técnica. Além do mais, é evidente que a quantidade eficaz pode ser diminuída ou aumentada dependendo da resposta do sujeito tratado e/ou dependendo da avaliação do médico que prescreve os compostos da presente invenção. As gamas de quantidades eficazes mencionadas acima são, portanto, apenas diretrizes, e não se destinam a limitar o escopo ou uso da invenção em qualquer medida.

[0038] A presente divulgação se destina também a incluir quaisquer isótopos de átomos presentes nos compostos da invenção. Por exemplo, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério, e os isótopos do carbono incluem C-13 e C-14.

[0039] Os presentes compostos usados na presente invenção podem também existir na sua forma estereoquimicamente isomérica, definindo todos os compostos possíveis constituídos pelos mesmos átomos ligados pela mesma sequência de ligações mas tendo estruturas tridimensionais diferentes, que não são interpermutáveis. A não ser que de outro modo mencionado ou indicado, a designação química de compostos engloba a mistura de todas as possíveis formas estereoquimicamente isoméricas, que os referidos compostos possam possuir. [0040] A referida mistura pode conter todos os diastereoisômeros e/ou enantiômeros da estrutura molecular básica do referido composto. Todas as formas estereoquimicamente isoméricas dos compostos usados na presente invenção, tanto na forma pura como à mistura

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11/77 umas com as outras, se destinam a estar abrangidas dentro do escopo da presente invenção, incluindo quaisquer misturas racêmicas ou racematos.

[0041] As formas estereoisoméricas puras dos compostos e intermediários como aqui mencionadas são definidas como isômeros substancialmente isentos de outras formas enantioméricas ou diastereoisoméricas da mesma estrutura molecular básica dos referidos compostos ou intermediários. Em particular, o termo “estereoisomericamente puro” diz respeito a compostos ou intermediários com um excesso estereoisomérico de pelo menos 80% (isto é, mínimo de 90% de um isômero e máximo de 10% dos outros isômeros possíveis) até um excesso estereoisomérico de 100% (isto é, 100% de um isômero e nenhum dos outros), mais em particular, a compostos ou intermediários com um excesso estereoisomérico de 90% até 100%, ainda mais em particular com um excesso estereoisomérico de 94% até 100%, e mais em particular com um excesso estereoisomérico de 97% até 100%. Os termos “enantiomericamente puro” e “diastereoisomericamente puro” devem ser entendidos de modo semelhante, mas então tendo em conta o excesso enantiomérico, respectivamente o excesso diastereoisomérico, da mistura em questão.

[0042] As formas estereoisoméricas puras dos compostos e intermediários usados nesta invenção podem ser obtidas pela aplicação de procedimentos conhecidos na técnica. Por exemplo, os enantiômeros podem ser separados uns dos outros por cristalização seletiva dos seus sais diastereoisoméncos com ácidos ou bases opticamente ativos. Exemplos dos mesmos são o ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico e ácido canforsulfônico. Alternativamente, os enantiômeros podem ser separados por técnicas cromatográficas usando fases estacionárias quirais. As referidas formas estereoquimicamente isoméricas puras podem ser também derivadas das corres

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12/77 pondentes formas estereoquimicamente Isoméricas puras dos materiais de partida apropriados, desde que a reação ocorra estereoespecificamente. Preferencialmente, se se desejar um estereoisômero específico, o referido composto será sintetizado por métodos de preparação estereoespecíficos. Estes métodos empregarão vantajosamente materiais de partida enantiomericamente puros.

[0043] Os compostos de fórmula (I) da presente invenção têm todos pelo menos um átomo de carbono quiral como indicado na figura abaixo pelo átomo de carbono marcado com *:

[0044] Devido à presença do referido átomo de carbono quiral, um “composto de fórmula (I)” pode ser o enantiômero (R), o enantiômero (S), a forma racêmica ou qualquer combinação possível dos dois enantiômeros individuais em qualquer razão. Quando a configuração (R) ou (S) absoluta de um enantiômero não é conhecida, este enantiômero pode ser também identificado por indicação de se o enantiômero é dextrorrotatório (+)- ou levorrotatório (-)- após medição da rotação óptica específica do referido enantiômero particular.

[0045] Em um aspecto, a presente invenção se refere a um primeiro grupo de compostos de fórmula (I) em que os compostos de fórmula (I) têm a rotação específica (+).

[0046] Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a um segundo grupo de compostos de fórmula (I) em que os compostos de fórmula (I) têm a rotação específica (-).

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Exemplos

MÉTODOS DE LC/EM [0047] A medição por Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC) foi realizada usando uma bomba de LC, um arranjo de díodos (DAD) ou um detector de UV e uma coluna como especificada nos respectivos métodos. Se necessário foram incluídos detectores adicionais (ver tabela de métodos em baixo).

[0048] O fluxo a partir da coluna foi conduzido para o Espectrômetro de Massa (EM) que estava configurado com uma fonte de íons à pressão atmosférica. Está dentro do conhecimento do perito definir os parâmetros de ajuste (por exemplo, gama de varredura, tempo de retenção...) de modo a se obterem íons que permitam a identificação do peso molecular (PM) monoisotópico nominal do composto. A aquisição de dados foi realizada com software apropriado.

[0049] Compostos são descritos por seus tempos de retenção (Rt) experimentais e íons. Se não especificado de forma diferente na tabela de dados, o íon molecular relatado corresponde a [M*H]⁺ (molécula protonada) e/ou [M-H]“ (molécula desprotonada). No caso de o composto não ser diretamente ionizável, o tipo de aduto é especificado (isto é, [Μ+ΝΗ4Γ, [M+HCOO]·, etc.). No caso de moléculas com múltiplos padrões isotópicos (Br, Cl), 0 valor relatado é 0 obtido para a massa isotópica mais baixa. Todos os resultados foram obtidos com incertezas experimentais que estão comumente associadas ao método usado. [0050] Doravante, “SQD” significa Detector de Quadropolo Único, “MSD” Detector Seletivo de Massa, “TA” temperatura ambiente, “BEH” híbrido em ponte de etilsiloxano/sílica, “DAD” Detector de Arranjo de Díodos, “HSS” silica de Elevada Resistência.

[0051] Códigos de métodos de LC/EM (Fluxo expresso em mL/min; temperatura da coluna (T) em°C; Tempo de operação em minutos).

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Código do método	instrumento	Coluna	Fase móvel	Gradiente	Fluxo Col T	Tempo de execução (MIN)
LC-A	Waters: Acquity® UPLC® - DADQuattro Micro™	Waters: BEH® C18 (1,7 pm, 2,1 x 100 mm)	A: 95% CH3COONH4 7mM /5% CH₃CN, B: CH3CN	A a 84,2% durante 0,49 min, até A a 10,5% em 2,18 min, manter durante 1,94 min, de voita para A a 84,2% em 0,73 min, manter durante 0,73 min.	0,343 mL/min 40°C	6,2
LC-B	Waters: Acquity® Classe H - DAD e SQD2TM	Waters: BEH® C18 (1,7 pm, 2,1 x 100 mm)	A: 95% CH3COONH4 7mM / 5% CH₃CN, B: CH3CN	A a 84,2%/B a 15,8% até A a 10,5% em 2,18 min, manter durante 1,96 min, de volta para A a 84,2%/B a 15,8% em 0,73 min, manter durante 0,49 min.	0,343 mL/min 40°C	6,1
LC-C	Waters: detector Acquity® UPLC® DAD- Acquity® TQ	Waters: UPLC HSS C18 (1,8 pm, 2,1 x 50 mm)	A: 0,1% HCOOH B: CH3CN	50% A para 10% A em 3.5 min, manter durante 1.5 min.	0,5 mL/min 40°C	5
LC-D	Waters: Acquity® UPLC® - DAD- SQD	Waters: BEH C18 (1,7 pm, 2,1 x 50 mm)	A: 10mM CH3COONH4 em 95% H2O + 5% CH3CN B: CH3CN	De A a 95% até A a 5% em 1,3 min, manter durante 0,7 min.	0,8 mL/min 55°C	2

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Métodos de SFC/EM [0052] A medição de SFC foi realizada usando um sistema de Cromatografia Analítica com fluido supercrítico (SFC) composto por uma bomba binária para administração de dióxido de carbono (CO2) e modificador, um autoamostrador, um forno de coluna, um detector de arranjo de díodos equipado com uma célula de fluxo a elevada pressão resistindo até 400 bars. Se configurado com um Espectrômetro de Massa (EM), 0 fluxo a partir da coluna foi conduzido para 0 (EM). Está dentro do conhecimento do perito definir os parâmetros de ajuste (por exemplo, gama de varredura, tempo de retenção...) de modo a se obterem íons que permitam a identificação do peso molecular (PM) monoisotópico nominal do composto. A aquisição de dados foi realizada com software apropriado.

[0053] Métodos Analíticos de SFC/EM (Fluxo expresso em mL/min; temperatura da coluna (T) em°C; Tempo de operação em minutos, Contrapressâo (BPR) em bars).

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Código do método	coluna	fase móvel	gradiente	Fluxo	Tempo de execução
ColT
BPR
SFC-A	Coluna Daicel Chíralpak® AD-H (5 pm, 150 x 4,6 mm)	A:CO₂ B: EtOH (+0,3% iPrNH₂)	20% B manter 7 min,	3 35	7 100
SFC-B	Coluna Regis Whelk O1®(S,S) (3 pm, 100 X 4,6 mm)	A:CO₂ B: EtOH (+0,3% iPrNH₂)	50% B manter 3 min,	3,5 35	3 103
SFC-C	Coluna Daicel Chíralpak® AD-H (5 pm, 150 X 4,6 mm)	A:CO₂ B: EtOH (+0,3% iPrNH₂)	30% B manter 7 min,	3 35	7 100
SFC-D	Daicel Chíralpak® IC-3 coluna (3 pm, 100 x 4,6 mm)	A:CO₂ B: EtOH (+0,3% iPrNH₂)	B a 40% manter 3 min,	3,5 35	3 103
SFC-E	Coluna Daicel Chíralpak® IA (5 pm, 150x4,6 mm)	A:CO₂ B: iPrOH (+0,3% iPrNH₂)	30% B manter 7 mín,	3,5 35	7 103

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Código do método	coluna	fase móvel	gradiente	Fluxo	Tempo de execução
ColT
BPR
SFC-F	coluna Daicel Chiraipak® IC (5 pm, 150 x 4,6 mm)	A:CO₂ B: MeOH	30% B manter 7 min,	3 35	7 100
SFC-G	Coluna Daicel Chiraipak® IC-3 (3 pm, 100 X 4,6 mm)	A:CO₂ B: IPrOH (+0,3% IPrNH₂)	retenção de B a 40% durante 5min,	3,5 35	⁵ 103
SFC-H	Coluna Daicel Chiraipak® iC (5 pm, 150 X 4,6 mm)	A:CO₂ B: EtOH / IPrOH 50/50 (+0,3% IPrNH₂)	25% B manter 7 min,	3 35	7 100
SFC-I	Daicel Chiraipak® AS3 coluna (3,0 pm, 150 X 4,6 mm)	A:CO₂ B: EtOH (+0,2% IPrNH₂ +3% H₂O)	B a 10%-50% em 6 min, manter 3,5 min	2,5 40	9,5 110

LLIL1

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PONTOS DE FUSÃO [0054] Os valores sâo valores de pico ou gamas de fusão, e são obtidos com incertezas experimentais que estão comumente associadas a este método analítico.

DSC823e (indicado como DSC) [0055] Para alguns compostos, os pontos de fusão foram determinados com um DSC823e (Mettler-Toledo). Os pontos de fusão foram medidos com um gradiente de temperatura de 10°C/minuto. A temperatura máxima foi de 300°C.

Rotações Ópticas:

[0056] As rotações ópticas foram medidas em um polarímetro 341 da PerkinElmer com uma lâmpada de sódio e relatadas como se segue: [α]° (λ, c g/100 mL, solvente, T°C).

[0057] [α]χ^τ = (100α) / (/ x c): onde / é o comprimento do percurso em dm e c é a concentração em g/100 mL para uma amostra a uma temperatura T (°C) e um comprimento de onda λ (em nm). Se o comprimento de onda da luz usado for de 589 nm (linha D do sódio), então o símbolo D poderá ser usado no lugar. O sinal da rotação (+ ou -) deve ser sempre fornecido. Quando se usa esta equação, a concentração e o solvente são sempre fornecidos entre parênteses após a rotação. A rotação é relatada usando graus e não são dadas quaisquer unidades de concentração (se assume como sendo g/100 mL). Abreviaturas usadas na parte experimental

(M+H)⁺	íon molecular protonado	hci	ácido clorídrico
aq.	aquoso/aquosa	HPLC	cromatografia líquida de alto desempenho
: Boc	ferc-butiloxicarbonila	iPrNH₂	isopropilamina
: BOC2O	dlcarbonato de di-terc-butila	IPrOH	2-propanol
br	alargado	K₂CO₃	carbonato de potássio
CH3CN	acetonitrila	LÍAIH4	hidreto de alumínio e lítio
ί CHCb	clorofórmio	m/z	razão massa-para-carga
CH2CH2	diclorometano	Me	metila
CH3OH	metanol	MeOH	metanol

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co₂	; dióxido de carbono MgSCU i sulfato de magnésio
d	i dubleto 1 min i minuto(s)
DCM	i diclorometano \| N₂ i nitrogênio
Dl EA	; di-isopropiletilamina Na₂COs i carbonato de sódio
DIPE	i éter di-isopropílico i; Na₂SO4 ; sulfato de sódio
DMA	i dimetilacetamida i; NaBHk i boro-hidreto de sódio
DMAP	; 4-dimetilaminopiridina NaHCOs i bicarbonato de sódio
DME	; 1,2-dimetoxietano ii NaOH ; hidróxido de sódio
DMF	i dimetilformamida i; NH4CI i cloreto de amônio
DMSO	i dimetilsulfóxido \| q i quarteto
eq. EW	; equivalente ii ta ou TA ; temperatura ambiente í éter dietílico i; s i singleto
Et₃N	i trietilamina 11 i tripleto
EtOAc	; acetato de etila tBuOK ; ferc-butanolato de potássio
EtOH	í etanol i; TEA i trietilamina
h₂o	i água \| TFA i ácido trifluoroacético
H2SO4	; ácido sulfúrico THF ; tetra-hidrofurano í hexafluorofosfato de O-(7- \| i
HATU	i aza-1H-benzotriazol-1-il)- ii i , , , ; , _k„ ... _Λ . ii TMSCI ; cloreto de trimetilsihla i Ν,Ν,Ν ,N -tetrametil-uromo - [ i í CAS [148893-10-1] í

Exemplo 1: síntese de 2-(4flúor-2-(2-hidroxifenil)2((3metóxi”5”(metil· sulfonil)fenH)amino)“1“(6-(trifluorometil)indol!n-1-il)etan“1“Ona (Composto 1) e separação quiral nos Enantiômeros 1A e 1B.

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Síntese do intermediário 1a:

[0058] Uma solução de ácido 4-flúor-2-metoxifenilacético [CAS 886498-61-9] (10 g, 54,30 mmol) em EtOH (200 mL) e H2SO4 (2 mL) foi aquecida sob refluxo durante 12 h. Adicionou-se água e a mistura foi concentrada sob pressão reduzida até metade do volume original. Foi adicionado gelo, a solução foi basificada com K2CO3 e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre MgSCX filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(4-flúor-2-metoxifenil) acetato de etila 1a (11,6 g). O composto foi usado no passo seguinte sem purificação adicionai.

Síntese do intermediário 1b:

[0059] Adicionou-se tribrometo de boro (109,3 mL, 109,3 mmol) gota a gota a uma solução resfriada (-30°C) de 2-(4-flúor-2metoxifeniljacetato de etila 1a (11,6 g, 54,7 mmol) em CH2CI2 (300 mL). A reação foi agitada a -20°C durante 1 h e extinta com CH3OH. O pH foi ajustado para 8 por adição de uma solução saturada de NaHCOs. A solução foi extraída com CH2CI2 e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO*, filtradas e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(4-flúor-2-hidroxifenil)acetato de etila 1b (10,8 g). O composto foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.

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Síntese do intermediário 1c:

[0060] A uma mistura de 2-(4-flúor-2-hidroxifenil)acetato de etila 1b (1,24 g, 6,26 mmol) e carbonato de césio (4,08 g, 12,5 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado éter de benzila e 2-bromoetila [CAS 146237-9] (1,61 g, 7,51 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Água foi adicionada e a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de CH2CI2 (15% a 100%) em heptano para dar 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-fluorofenil) acetato de etila 1c (1,55 g).

Síntese do intermediário 1d:

[0061] A uma solução de 1 M de bis(trimetilsilil)amida de lítio em THF (4,51 mL, 4,51 mmol) resfriada (-78°C), foi adicionada uma solução de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-fluorofenil)acetato de etila 1c (0,750 g, 2,26 mmol) em THF (4 mL). Após 1 h a -78°C, adicionou-se clorotrimetilsilano (0,458 mL, 3,61 mmol). A mistura reacional foi agitada a 78°C durante 15 min. A/-Bromosuccinimida (0,482 g, 2,71 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada a -40°C durante 2 h. A mistura reacional foi vertida em H2O e extraída duas vezes com EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)4-fluorofenil)-2-bromoacetato 1d (0,920 g), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 1e:

[0062] Uma mistura de 2-(2-(2-(benziióxi)etóxi)-4-fluorofenii)-2-bromoacetato 1d (0,920 g, 2,24 mmol) e 3-metóxi-5-(metilsulfonll)anilina [CAS 62606-02-4] (1,35 g, 6,71 mmol) em CH3CN (5 mL) e THF (5 mL) foi agitada a 60°C durante a noite. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com HCI a 1 N. A fase orgânica foi lavada com HCI a 1

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N, uma solução aquosa saturada de NaHCCh, H2O e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (5% a 50%) em heptano para dar 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-fluorofenil)-2-((3-metóxi-5(metilsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 1e (0,870 g).

Síntese do intermediário 1f:

[0063] Uma mistura de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-fluorofenil)-2-((3metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 1e (0,868 g, 1,63 mmol) e paládio em carbono a 10% (0,180 g) em EtOAc (30 mL) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de H2. A mistura readonal foi filtrada através de celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (30% a 100%) em heptano para dar 2-(4-flúor-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil) fenil)amino)acetato de etila if, quantitativamente.

Síntese do intermediário 1q:

[0064] A uma solução de 2-(4-flúor-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3metóxl·5-(metilsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 1f (0,910 g, 2,06 mmol) em THF (6 mL), MeOH (6 mL) e HzO (6 mL) foram adicionados mono-hidrato de hidróxido de lítio (0,432 g, 10,3 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi parcialmente concentrada sob pressão reduzida para remover THF e MeOH. A solução aquosa residual foi acidificada com HCI 1N e extraída com CH2CI2. A fase orgânica foi seca sobre Na₂SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer ácido 2-(4-flúor-2-(2hidroxietóxi)fenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 1g (0,736 g), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. Síntese do Composto 1 e separação quiral nos Enantiômeros 1A e 1B: [0065] Método 1: A uma solução de ácido 2-(4-flúor-2-(2-hidroxiePetição 870190095446, de 24/09/2019, pág. 42/103

23/77 tóxi)fenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 1g (0,200 g, 0,484 mmol) em DMF (4 mL) se adicionou HATU (0,184 g, 0,484 mmol), trietilamina (0,267 mL, 1,94 mmol) e 6-(trifluorornetil)indolina [CAS 181513-29-1] (0,091 g, 0,484 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com HCI 1N. A fase orgânica foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, Η₂Ο e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre NasSCU filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (2% a 40%) em CH2CI2. As frações contendo 0 produto desejado foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por TLC preparativa utilizando uma mistura de EtOAc (50%) em CH2CI2 como eluente. Purificação subsequente por HPLC preparativa (coluna: XBridge® C18 - 5 pm 100 x 19 mm, fase móvel: solução de NH4OAc a 10 em H2O, CH3CN) forneceu 2-(4-flúor-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3metóxi~5~(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6~(trifluorometil)indolin~1~ il)etanona (Composto 1, 0,043 g) como uma mistura racêmica.

[0066] Método 2: A uma solução de ácido 2-(4-flúor-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3-metóxl-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acétlco 1g (0,300 g, 0,726 mmol) em Me-THF (5,4 mL) sob fluxo de N₂, foi adicionado 6(trifluorometil)indolina [CAS 181513-29-1] (0,136 g, 0,726 mmol), /V-diisopropiletilamina (264 pL, 1,596 mmol) e anidrido propilfosfônico (653 pL, 1,09 mmol). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi vertida em água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução a 10% de K2CO3 em água e depois com água. A solução orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. Esta fração (0,47 g) foi combinada com um segundo lote (quantidade total: 0,585 g) e purificada por cromatografia flash em gel de silica (15

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24/77 pm, 24 g, CHzCh/MeOH 99,5/0,5). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 2-(4-flúor-2(2-hidroxietóxi)fenil)~2~((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6(trifluorometil)indolin-1-il)etanona (Composto 1, 0,160 g) como uma mistura racêmica.

[0067] Os Enantiômeros do Composto 1 (160 mg) foram separados por meio de SFC Preparativa Quiral (fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvel: 75% CO₂, 25% EtOH (+0,3% iPrNHs)). O primeiro produto eluído (72 mg) foi solidificado de heptano/éter di-isopropílico para dar o Enantiômero 1Â (50 mg). O segundo produto eluído (80 mg) foi solidificado de heptano/éter di-isopropílico para dar o Enantiômero 1B (43 mg).

Composto 1:

[0068] ¹H RMN (300 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,22 (m, 2 H) 3,62 - 3,92 (m, 5 H) 3,97 - 4,22 (m, 3 H) 4,46 (m, 1 H) 4,98 (s I, 1 H) 5,82 (d, J-7,9 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,62 (s, 1 H) 6,80 (t, J-7,7 Hz, 1 H) 6,92 (s, 1 H) 6,95 - 7,11 (m, 2 H) 7,29 - 7,53 (m, 3 H) 8,39 (s, 1 H) [0069] LC-EM (método LC-C): Rt 1,37 min, MH⁺ 583

Enantiômero 1A:

[0070] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-de) õ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,14 3,29 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,75 - 3,78 (m, 1 H) 3,78 - 3,89 (m, 1 H) 3,98 - 4,23 (m, 3 H) 4,37 - 4,55 (m, 1 H) 4,97 (t, J = 5,4 Hz, 1 H) 5,82 (d, J = 8,2 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,62 (s, 1 H) 6,79 (dt, J = 2,2, 8,5 Hz, 1 H) 6,91 (s, 1 H) 6,98 - 7,04 (m, 2 H) 7,32 - 7,43 (m, 2 H) 7,46 (d, J = 7,9 Hz, 1 H) 8,39 (s, 1 H).

[0071] LC/EM (método LC-A): Rt 3,04 min, MH* 583 [0072] [a]_D ²⁰: -49,6° (c 0,25, DMF) [0073] SFC quiral (método SFC-A): Rt 2,76 min, MH⁺ 583, pureza quiral 100%.

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Enantiômero 1B:

[0074] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-c/e) õ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,14 3,29 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,75 - 3,78 (m, 1 H) 3,78 - 3,89 (m, 1 H) 3,98 - 4,23 (m, 3 H) 4,37 - 4,55 (m, 1 H) 4,97 (t, J = 5,4 Hz, 1 H) 5,82 (d, J = 8,2 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,62 (s, 1 H) 6,79 (dt, J = 2,2, 8,5 Hz, 1 H) 6,91 (s, 1H) 6,98 - 7,04 (m, 2 H) 7,32 - 7,43 (m, 2 H) 7,46 (d, J = 7,9 Hz, 1 H) 8,39 (s, 1 H).

[0075] LC/EM (método LC-A): Rt 3,04 min, MH* 583 [0076] [a]_D ²⁰: +51,7^o (c 0,23, DMF) [0077] SFC quiral (método SFC-A): Rt 4,16 min, MH⁺ 583, pureza quiral 100%.

Exemplo 2: síntese de 2(4“flúor-2-(2hidroxietóxi)fenil)~2~((3metóxi“5(metilsulfonil)fenil)amino)1(5”metóxi6(trifluorometil)indolin-1-il)etanona (Composto 2) e separação quiral nos Enantiômeros 2A e 2B.

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Síntese do intermediário 2a:

[0078] A uma mistura de 2-(4-flúor-2-hidroxifenil)acetato de etila 1b (10,6 g, 53,5 mmol) e carbonato de césio (34,8 g, 106,9 mmoí) em DMF (200 mL) a 10°C foi adicionado (2-bromoetóxi)(fen>butil)dimetil·silano [CAS 86864-60-0] (13,8 mL, 64,2 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. H2O foi adicionada e a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca com MgSÜ4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 μΜ, 40 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações puras foram combinadas e 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para dar 2-(2-(2~((ferc~ butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-fluorofenil)acetato de etila 2a (17,7 g).

Síntese do intermediário 2b:

[0079] A uma solução de 1 M de bis(trimetilsilil)amida de lítio em THF (28,05 mL, 28,05 mmol), resfriada a -78°C, foi adicionada uma solução de 2-(2-(2-((ferc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-fluorofenil)acetato de etila 2a (5 g, 14,03 mmol) em THF (30 mL). Após agitação durante 1 h a -78°C, adicionou-se clorotrimetilsilano (2,85 mL, 22,44 mmol). A mistura reacional foi agitada a -78°C durante 15 min. /V-Bromosuccinimida (3 g, 16,83 mmol) em THF (30 mL) foi adicionada e a agitação foi continuada a -55°C durante 2 h. A mistura reacional foi vertida em H2O e extraída duas vezes com EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas, secou-se sobre MgSO4, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para dar 2-bromo-2-(2-(2-((ferc-butildimetílsilil)óxi) etóxi)-4-fluorofenil)acetato de etila 2b (6,57 g) que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 2c:

[0080] Uma mistura de 2-bromo-2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi) etóxi)-4-fluorofenil)acetato de etila 2b (3 g, 6,89 mmol), 3-metóxi~5~ (metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (2,08 g, 10,3 mmol) e di-isopro

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27/77 piletilamina (2,37 mL, 13,8 mmol) em CH3CN (60 mL) foi agitada a 50°C durante a noite. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi absorvido com EtOAc e lavado com HCI a 0,5 N e água. A fase orgânica foi seca com MgSCU, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 μΜ, 120 g, heptano/EtOAc 90/10 a 80/20) para dar 2-(2-(2-((ferc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-fluorofenil)-2-((3-metóxi-5(metilsulfonil)fenll)amino)acetato de etila 2c (2,6 g).

Síntese do intermediário 2d:

[0081] Mono-hidrato de hidróxido de lítio (205 mg, 4,8 mmol) foi adicionado em porções a uma solução de 2-(2~(2-((terc-butildimetilsilil) óxi)etóxi)-4-fluorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 2c (2,227 g, 4,09 mmol) em THF/CH3OH/H2O (1/1/1) (100 mL) a 10°C. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h e diluída com água. Após resfriamento para 0°C, a solução aquosa foi lentamente acidificada para pH 6 com HCI a 0,5 N e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar ácido 2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-fluorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino) acético 2d (2 g). O composto foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 2e:

[0082] Uma mistura de 1~metóxi~4~nitro-2-(trifluorometH)benzeno [CAS 654-76-2] (24,5 g, 110,8 mmol) e 4-clorofenoxiacetonitrila [CAS 3598-13-8] (20,4 g, 121,9 mmol) em DMF (100 mL) foi adicionada gota-agota durante 30 min a uma solução agitada de tBuOK (27,35 g, 243,7 mmol) em DMF (100 mL) a -10°C. Após adição, a solução roxa foi mantida a -10°C durante 1 h. Adicionou-se 500 mL de água gelada e 500 mL de HCI 6N e 0 precipitado foi separado por filtração, lavado com água e seco sob pressão reduzida para dar origem a 40,4 g de 2-(5-metóxi-2

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28/77 nitro-4-(trifluorometil)fenil)acetonitrila 2e (usada como tal na etapa seguinte).

Síntese do intermediário 2f:

[0083] Uma solução de 2-(5-metóxi-2-nitro-4-(trifluorometil)fenil) acetonitrila 2e (26 g, 99,9 mmol) em etanol/água (9/1) (500 mL) e AcOH (5,2 mL) foi hidrogenada durante 1 h a uma pressão de 3,5 Bar com 10% de Pd/C (15,3 g) como catalisador. A mistura reacional foi filtrada através uma camada de celite® e o bolo de filtração foi lavado com uma mistura de solventes de CHzCbe CH3OH. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi filtrado através de um filtro de vidro carregado com silica de 60-200 pm e usando heptano/EtOAc 80/20 como eluente. As frações contendo 0 composto esperado foram combinadas e 0 solvente concentrado sob pressão reduzida para dar 5-metóxi-6-(trifluorometil)-1H-indol 2f (15,6 g).

Síntese do intermediário 2g:

[0084] A 0°C, se adicionou gota-a-gota BFh-Piridina (23,5 mL, 232,4 mmol) a uma solução de 5-metóxi-6-(trifluorometll)-1H-indol 2f (10 g, 46,5 mmol) em EtOH (60 mL). Adicionou-se lentamente HCI 6N (140 mL) mantendo simultaneamente a temperatura abaixo de 10°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h. Adicionou-se água (200 mL) e se basificou a mistura até pH 8-9 com uma solução aquosa concentrada de NaOH (a temperatura reacional foi mantida abaixo de 20°C). O precipitado foi separado por filtração, lavado com água (duas vezes) e coevaporado sob pressão reduzida com tolueno para dar 5-metóxi-6(trifluorometil)indolina 2g (9 g).

Síntese do intermediário 2h:

[0085] A uma solução de ácido 2-(2-(2-((ferc-butildimetilsilil)óxi) etóxl)-4-fluorofenil)-2-((3-metóxl-5”(metilsulfonil)fenll)amino)acético 2d (1 g, 1,90 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados HATU (1,08 g, 2,84 mmol), di-isopropiletilamina (940 pL, 5,69 mmol) e 5-metóxi-6

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29/77 (trifluorometil)indolina 2g (412 mg, 1,90 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 4 h. A mistura reacional foi diluída com água. O precipitado foi removido por filtração, lavado com água e retomado com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCL 1N, água, seca sobre MgSCA, filtrada e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(2-(2~((terc~butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4fluorofenil)“2“((3~metóxl·5~(metilsulfonil)fenil)amino)“1“(5~metóxl·6-(trl· fluorometil)indolin1il)etanona 2h (1,36 g, pureza por LC:. 70%). O composto impuro foi usado diretamente na etapa reacional seguinte. Síntese do Composto 2 e separação quiral nos Enantiômeros 2A e 2B: [0086] Uma solução de 2-(2~(2~((terc~butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-flu~ orofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 2h (1,29 g, 1,77 mmol) em HCI 4M em dioxano (30 mL) e dioxano (100 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida. EtOAc e solução aquosa a 10% de K2CO3 foram adicionados. A fase orgânica foi separada, seca com MgSO4, filtrada, e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 80 g, CHsCb/MeOH/NhUOH 99/1/0,1) para dar origem, após cristalização de CH3CN, 2-(4-flúor~2~(2-hidroxietó~ xi)fenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona (Composto 2, 595 mg) como um racemato. [0087] Os Enantiômeros do Composto 2 (560 mg) foram separados por meio de SFC Preparativa Quiral (fase estacionária: Whelk 01 (S,S)® 5 pm 250 x 21,1 mm, Fase móvel: 50% CO₂₎ 50% EtOH (+0,3% iPrNHb)). O primeiro enantiômero eluído (288 mg) foi cristalizado de CHsCN/éter di-isopropílico para dar 0 Enantiômero 2A (240 mg). O segundo enantiômero eluído (293 mg) foi cristalizado de CHsCN/éter diisopropílico para dar 0 Enantiômero 2B (232 mg).

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30/77

Composto 2:

[0088] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,09 (s, 3 H) 3,12 -

3,29 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,74 - 3,80 (m, 1 H) 3,80 - 3,90 (m, 4 H) 4,02 (td, >10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,05 - 4,17 (m, 2 H) 4,42 (td, >10,4, 6,2 Hz, 1 H) 4,97 (t, > 5,7 Hz, 1 H) 5,79 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 6,78 (td, >8,51, 2,52 Hz, 1 H) 6,90 (s, 1 H) 6,95 - 7,04 (m, 2 H) 7,24 (s, 1 H) 7,37 (dd, >8,67, 6,78 Hz, 1 H) 8,35 (s, 1 H) [0089] LC-EM (método LC-A): Rt 3,02 min, MH⁺ 613 [0090] Ponto de fusão: 215°C

Enantiõmero 2A:

[0091] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-de) õ ppm 3,09 (s, 3 H) 3,12 -

3,29 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,74 - 3,80 (m, 1 H) 3,80 - 3,90 (m, 4 H) 4,02 (td, >10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,05 - 4,17 (m, 2 H) 4,42 (td, >10,4, 6,2 Hz, 1 H) 4,97 (t, > 5,7 Hz, 1 H) 5,79 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 6,78 (td, >8,51, 2,52 Hz, 1 H) 6,90 (s, 1 H) 6,95 - 7,04 (m, 2 H) 7,24 (s, 1 H) 7,37 (dd, >8,67, 6,78 Hz, 1 H) 8,35 (s, 1 H) [0092] LC/EM (método LC-A): Rt 3,00 min, MH⁺ 613 [0093] [a]_D ²⁰: +53,5° (c 0,2392, DMF) [0094] SFC quirai (método SFC-B): Rt 1,43 min, ΜΗ^1- 613, pureza quirai 100%.

[0095] Ponto de fusão: 204°C

Enantiõmero 2B:

[0096] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-dg) õ ppm 3,09 (s, 3 H) 3,12 -

3,29 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,74 - 3,80 (m, 1 H) 3,80 - 3,90 (m, 4 H) 4,02 (td, >10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,05 - 4,17 (m, 2 H) 4,42 (td, >10,4, 6,2 Hz, 1 H) 4,97 (t, > 5,7 Hz, 1 H) 5,79 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,61 (t, >1,73 Hz, 1 H) 6,78 (td, >8,51, 2,52 Hz, 1 H) 6,90 (s, 1 H) 6,95 - 7,04 (m, 2 H) 7,24 (s, 1 H) 7,37 (dd, >8,67, 6,78 Hz, 1 H) 8,35 (s, 1 H) [0097] LC/EM (método LC-A): Rt 3,00 min, MH⁺ 613 [0098] [a]_D ²⁰: -56,5° (c 0,255, DMF)

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31/77 [0099] SFC quiral (método SFC-B): Rs 1,72 min, MH⁺ 613, pureza quiral 99,8%.

[00100] Ponto de fusão: 206°C

Exemplo 3: síntese de 2-(4-flúor-2-(2-hidroxietóxi)fen!l)-2-((3-metóxi-5(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona (Composto 3) e separação quiral nos Enantiômeros 3A e 3B.

Síntese do intermediário 3a:

[00101] A uma solução de ácido 2-(2~(2-((terc-butildimetilsilil)óxi) etóxi)-4-fluorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 2d (1 g, 1,90 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados HATU (1,08 g, 2,84 mmol), di-isopropiletilamina (940 pL, 5,69 mmol) e 6~(trifluoro~ metóxi)indolina [CAS 959235-95-1] (385 mg, 1,90 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 4 h. A mistura reacional foi diluída com água. O precipitado foi removido por filtração, lavado com água e retomado com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com uma solução a 10% de K2CO3 em água, solução saturada de NaCI em água, água, seca sobre MgSO4, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(2-(2-((ferc-butildimetilsiHI) óxi) etóxi)-4-fluorofen i l)-2-((3-metóxi-5-(metilsu Ifon H)fen H)am ino)-1-(6-(trif luorometóxi)indolin~1~il)etanona 3a (1,32 g). O composto em bruto foi usado sem purificação no passo reacional seguinte.

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Síntese do Composto 3 e separação quiral nos Enantiômeros 3A e 3B: [00102] Uma solução de 2-(2-(2-((ferc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4fluorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6-(trif!uorometóxi)indolin-1-il)etanona 3a (1,17 g, 1,64 mmol) em HCI 4M em dioxano (3,3 mL) e dioxano (50 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida. EtOAc e solução a 10% de K2CO3 em água foram adicionados. A fase orgânica foi separada, seca com MgSCU, filtrada, e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 40 g, CHhCb/MeOH 99,5/0,5) para dar origem, 2~(4-flúor-2-(2~hidroxietóxi)fenil)-2-((3~metóxi~5~(metil~ sulfonil)fenil)amino)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona (Composto 3, 508 mg) como um racemato. Uma amostra analítica do Composto 3 foi solidificada a partir de CHaCN/éter di-isopropílico (35 mg). A quantidade restante foi utilizado para separar os enantiômeros do Composto 3 via Quiral Preparativa SFC (fase estacionária: Chiraipak® AD-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvel: 70% CO₂, 30% EtOH (+0,3% iPrNHs)). O primeiro enantiômero eluído (166 mg) foi solidificado de heptano/éter diiisopropílico para dar 0 Enantiômero 3Â (130 mg). O segundo enantiômero eluído (165 mg) foi solidificado de heptano/éter di-isopropílico para dar 0 Enantiômero 3B (110 mg).

Composto 3:

[00103] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,11 -

3,25 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,74 - 3,79 (m, 1 H) 3,79 - 3,88 (m, 1 H)

3,96 - 4,19 (m, 3 H) 4,45 (dt, J=6,3, 10,4 Hz, 1 H) 4,95 (t, J-5,52 Hz, 1 H) 5,81 (d, J~8.51 Hz, 1 H) 6,57 (s, 1 H) 6,62 (t, J=1,89 Hz, 1 H) 6,80 (td, J-8,43, 2,36 Hz, 1 H) 6,91 (s, 1 H) 6,96 - 7,05 (m, 3 H) 7,28 - 7,46 (m, 2 H) 8,05 (s, 1 H) [00104] LC-EM (método LC-A): Rt 3,15 min, MH⁺ 599

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Enantiômero 3A:

[00105] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-c/e) õ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,11 -

3,25 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,74 - 3,79 (m, 1 H) 3,79 - 3,88 (m, 1 H)

3,96 - 4,19 (m, 3 H) 4,45 (dt, >6,3, 10,4 Hz, 1 H) 4,97 (t, >5,52 Hz, 1 H) 5,81 (d, >8,51 Hz, 1 H) 6,57 (s, 1 H) 6,62 (t, >1,89 Hz, 1 H) 6,80 (td, >8,43, 2,36 Hz, 1 H) 6,91 (s, 1 H) 6,96 - 7,11 (m, 3 H) 7,28 - 7,46 (m, 2 H) 8,05 (s, 1 H) [00106] LC/EM (método LC-A): Rt 3,13 min, MH* 599 [00107] [a]_D ²⁰: -59,0° (c 0,2542, DMF) [00108] SFC quiral (método SFC-C): Rt 1,87 min, MH⁺ 599, pureza quiral 100%.

Enantiômero 3B:

[00109] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,11 -

3,25 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,74 - 3,79 (m, 1 H) 3,79 - 3,88 (m, 1 H)

3,96 - 4,19 (m, 3 H) 4,45 (dt, >6,3, 10,4 Hz, 1 H) 4,97 (t, >5,52 Hz, 1 H) 5,81 (d, >8,51 Hz, 1 H) 6,57 (s, 1 H) 6,62 (t, >1,89 Hz, 1 H) 6,80 (td, >8,43, 2,36 Hz, 1 H) 6,91 (s, 1 H) 6,96 - 7,11 (m, 3 H) 7,28 - 7,46 (m, 2 H) 8,05 (s, 1 H) [00110] LC/EM (método LC-A): Rt 3,13 min, MH⁺ 599 [00111 ] [a]_D ²⁰: +56,8° (c 0,2467, DMF) [00112] SFC quiral (método SFC-C): Rt 2,34 min, MH⁺ 599, pureza quiral 100%.

Exemplo 4 (método 1): síntese de 2-(4-cloro-2-(2~hidroxietóxi)fenil)-2((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6-(trifluorometil)indolin-1-il) etanona (Composto 4).

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Síntese do intermediário 4a:

[00113] A uma mistura de 2-(4-cloro-2-hidroxifenil)acetato de etila [CAS 1261826-30-5] (2,82 g, 3,28 mmol) e carbonato de césio (8,56 g, 26,3 mmol) em DMF (50 mL) foi adicionado éter de benzila e 2bromoetila [CAS 1462-37-9] (2,29 g, 14,5 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 24 h. Adicionou-se H2O e a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (2% a 20%) em heptano para dar 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)4-clorofenil)acetato de etila 4a (4,17 g).

Síntese do intermediário 4b:

[00114] A uma solução de 1 M de bis(trimetilsilil)amida de lítio em THF (11,0 mL, 11,0 mmol) resfriada (-78°C), foi adicionada uma solução de 2-(2~(2-(benzilóxi)etóxi)~4~clorofenil)acetato de etila 4a (1,82 g, 5,22 mmol) em THF (9 mL). Após agitação durante 1 h a -78°C, adicionou~se clorotrimetilsilano (1,1 mL, 8,67 mmol). A mistura reacional foi agitada a -78°C durante 15 min. A/-Bromosuccinimida (1,11 g, 8,67 mmol) foi adicionada e a agitação foi continuada a -78°C durante 2 h. A mistura reacional foi vertida em H2O e extraída com EtOAc. Asfase orgânica foi seca sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-bromoacetato 4b (2,23 g), que foi usado no passo seguinte sem purificação

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35/77 adicional.

Síntese do intermediário 4c:

[00115] A uma solução de 2-(2~(2~(benzilóxi)etóxi)~4~clorofenil)-2bromoacetato de etila 4b (2,23 g, 5,22 mmol) em CH3CN (22,5 mL) e THF (22,5 mL) foi adicionado 3-metóxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (3,12 mL, 15,5 mmol). A mistura reacional foi agitada a 60°C durante a noite. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi particionado entre EtOAc e HCI a 1 N. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia fiash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (0% a 40%) em heptano para dar 2-(2-(2(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino) acetato de etila 4c (1,57 g).

Síntese do intermediário 4d:

[00116] Uma mistura de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3metóxi-5-(metílsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 4c (1,57 g, 2,86 mmol) e paládio em carbono a 10% (0,320 g) em EtOAc (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de H2. A mistura reacional foi filtrada através de celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (30% a 100%) em heptano para dar 2-(4-cloro-2-(2~hidroxietóxi)fenil)-2-((3~metóxi~5~(metilsulfonil) fenil)amino)acetato de etila 4d (1,13 g ).

Síntese do intermediário 4e:

[00117] A uma solução de 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)arnino)acetato de etila 4d (1,14 g, 2,49 mmol) em THF (8 mL), MeOH (8 mL) e H2O (8 mL) foram adicionados monohidrato de hidróxido de lítio (0,522 g, 12,5 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. Foram adicionados HCI 1N e

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EtOAc e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar ácido 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi) fenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 4e_s quantitativamente, que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional. Síntese do Composto 4:

[00118] A uma solução de 6-triflurorometilindolina [CAS 181513-291] (0,200 g, 1,07 mmol), ácido 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 4e (0,478 g, 1,11 mmol) e trietilamina (0,593 mL, 4,28 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionado HATU (0,406 g, 1,07 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite. A mistura reacional foi diluída com H2O e foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com HCI 1N, uma solução aquosa saturada de NaHCCh e solução saturada de cloreto de sódio, seca com MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (60% a 70%) em heptano. As frações contendo 0 produto desejado foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica usando um gradiente de EtOAc (0% a 25%) em CH2CI2 para dar 2-(4cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etan~1~ona (Composto 4, 0,162 g) como uma mistura racêmica.

Composto 4:

[00119] ¹H RMN (300 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,11 (s, 3 H) 3,22 (m, 2 H) 3,67 - 3,88 (m, 5 H) 4,00 - 4,22 (m, 3 H) 4,44 (m, 1 H) 4,98 (t, >5,5 Hz, 1 H) 5,83 (d, >8,3 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,63 (s, 1 H) 6,92 (s, 1 H) 7,04 (m, 2 H) 7,17 (m, 1 H) 7,31-7,50 (m, 3 H) 8,38 (s, 1 H) [00120] LC-EM (método LC-C): Rt 1,89 min, MH⁺ 599

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Exemplo 4 (método 2): síntese de 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2((3-ηβΐόχί-5-(ηΊβίίΐ5υΙΤοηϋ)ίβπΗ)3ηΊΐηο)-1-(6-(ίη^υοΓθΠ6ίΗ)ίηάοΙίη-1-ΙΙ) etanona (Composto 4) e separação quiral nos Enantiômeros 4A e 4B.

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Síntese do intermediário 4f:

[00121] A uma solução de 2-(2-(2“(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil) acetato de etila 4a (4,17 g, 12,0 mmol) em uma mistura de EtOH (80 mL) e THF (40 mL) foi adicionado NaOH a 0,5 N (72 mL, 36,0 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. A mistura reacional foi parcialmente concentrada sob pressão reduzida para remover os solventes orgânicos. O resíduo foi acidificado para pH 2-3 com HCI a 1N e a mistura foi extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca sobre MgSCX, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para dar ácido 2”(2(2-(benzilóxi)etóxi)4Clorofenil)acético 4f (3,83 g).

Síntese do intermediário 4q:

[00122] Uma solução de ácido 2-(2~(2-(benzilóxi)etóxi)~4~clorofenil) acético 4f (7,12 g, 22,2 mmol) em cloreto de tionila (50 mL, 689 mmol)

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38/77 foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura reacionai foi concentrada sob pressão reduzida e coevaporada com toluene para prover cloreto de 2-(2~(2-(benzilóxi)etóxi)~4~clorofenil)acet!la 4g (7,53 g) que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 4h:

[00123] Uma solução de cloreto de 2-(2-(2~(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)acetiia 4g (5,29 g, 15,6 mmol) em ChhCN (50 mL) foi adicionada gota a gota sob atmosfera de N2 a uma mistura agitada de 6(trifluorometil)indolina [CAS 181513-29-1] (2,92 g, 15,6 mmol) e bicarbonate de sódio (1,44 g, 17,1 mmol) em CH3CN (50 mL). A mistura reacionai foi agitada à temperatura ambiente durante 65 h e vertida em água (500 mL). O produto foi extraído (2x) com EtzO. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgSCX, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo solidificou após repouso. O produto foi agitado em éter di-isopropílico (25 mL), filtrou-se, lavou-se (3x) com éter diisopropílico, e secou-se sob vácuo a 45°C para se obter 2-(2-(2(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-1 -(6-(trifluorometil)indoHn-1 -il)etanona 4h (6,97 g).

Síntese do intermediário 4i:

[00124] Uma solução de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-cloro-fenil)-1-(6(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 4h (1,0 g, 2,04 mmol) em 2-Me-THF (100 mL) foi agitada sob fluxo de N₂ e resfriado a -78°C. Foi adicionada, gota a gota, uma solução de bis(trimetilsilil)amida de lítio 1 M em THF (4,08 mL, 4,08 mmol) e a mistura resultante foi agitada a -78°C durante 15 minutos. Clorotrimetiisilano (417 pL; 3,27 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura foi agitada a -78°C durante 15 minutos. Adícionou-se gota a gota uma solução de AZ-bromossuccínimida (400 mg, 2,25 mmol) em 2-Me-THF (25 mL) e a mistura reacionai foi agitada a -78°C durante 50 min. Foi adicionada uma solução aquosa saturada

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39/77 de NH4CI (40 mL) de uma só vez, e a mistura resultante foi agitada sem resfriamento até a temperatura atingir 0°C. Foi adicionada água (10 mL) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi seca sobre MgSCh, filtrada, evaporada sob pressão reduzida e coevaporada com CH3CN para proporcionar 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2bromo-1~(6~(trifluorometil)indoiin-1-il) etanona 4i (1,16 g). O produto foi usado sem purificação adicional no próximo passo.

Síntese do intermediário 4j:

[00125] A uma solução agitada de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenii)-2-bromo-1-(6-(trifluorometil)indoiin-1-il)etanona 4i (1,16 g, 2,04 mmol) em CH3CN (50 mL) sob atmosfera de N2 foram adicionados 3metóxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (0,82 g, 4,08 mmol) e dHSopropiletiiamina (703 pL, 4,08 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 60°C durante 65 h. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e vertida em H2O com agitação (250 mL). O produto foi extraído (2x) com Et₂O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCu, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica (40 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 até 40/45/15. As frações desejadas foram combinadas e 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida em um rotavapor® até um volume residual de 35 mL. O produto cristalizou ao repousar. O precipitado foi removido por fiitração, lavado (3x) com EtOAc/heptano 1/1 e seco sob vácuo a 45°C para fornecer 2(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenii) amino)-1-(6-(trifluorometii)indolin-1-il)etanona 4j (870 mg).

Síntese do Composto 4 e separação quiral nos Enantiômeros 4A e 4B: [00126] Uma solução de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-ciorofenil)-2-((3metóxi-5-(metilsuifonil)fenil)amino)-1-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 4j (210 mg, 0,28 mmol) em THF (30 mL) foi adicionada a uma mistura agitada de Pd/C (0,5 g) em EtOAc (10 mL). A mistura foi hidroge

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40/77 nada durante 10 min à temperatura ambiente sob pressão atmosférica. O catalisador foi removido por filtração sobre dicalite® e os solventes foram evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi combinado com outro iote (quantidade total: 1,0 g) e purificado por HPLC em fase reversa (Fase estacionária: Kromasil C18 100A 5 um (Eka Nobel), Fase móvel: Gradiente de 50% de amônia-bicarbonato (0,25% em água), 50% de acetonitrila para 20% de amônia-bicarbonato (0,25% em água), 80% de acetonitrila) produzindo o Composto 4 (700 mg). Os enantiômeros do Composto 4 (700 g) foram separados através de separação Quirai em Fase Normal (fase estacionária: Whelk-01 (SS) 5 pm com técnica de corte de picos de reciclagem, Fase móvel: 100% de etanol). As frações contendo o primeiro enantiõmero eluído foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi ainda purificado por cromatografia flash em gel de silica (4 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 até 40/45/15. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas, e coevaporadas com MeOH. O resíduo foi triturado a 45°C em HzO (4 mL) e MeOH (1 mL), 0 precipitado foi filtrado, lavado (3x) com HbO/MeOH 4/1 e seco sob vácuo a 45°C para fornecer 0 Enantiõmero 4A (197 mg). As frações contendo 0 segundo enantiõmero eluído foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi ainda purificado por cromatografia flash em gel de silica (4 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 até 40/45/15. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas, e coevaporadas com MeOH/água. O resíduo foi agitado em H2O (4 mL) e MeOH (1 mL), 0 precipitado foi filtrado, lavado (3x) com H2O/MeOH 4/1 e seco sob vácuo a 45°C para fornecer 0 Enantiõmero 4B (209 mg).

Enantiõmero 4A:

[00127] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,16 3,27 (m, 2 H) 3,68 - 3,85 (m, 5 H) 4,04 - 4,20 (m, 3 H) 4,44 (td, >10,2,

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6,6 Hz, 1 Η) 4,94 (t, J^5,Q Hz, 1 H) 5,83 (d, >8,4 Hz, 1 H) 6,56 (t, >2,1 Hz, 1 H) 6,63 (t, >1,8 Hz, 1 H) 6,91 (t, >1,4 Hz, 1 H) 6,97 7,08 (m, 2 H) 7,17 (d, >2,0 Hz, 1 H) 7,36 (d, >8,1 Hz, 1 H) 7,39 (dd, >7,9, 0,9 Hz, 1 H) 7,43 - 7,49 (m, 1 H) 8,38 (s I, 1 H) [00128] LC/EM (método LC-D): Rt 1,17 min, MH⁺ 599 [00129] [a]_D ²⁰: +59,8° (c 0,435, DMF) [00130] SFC quiral (método SFC-I): Rt 2,84 min, MH⁺ 599, pureza quiral 100%.

Enantiômero 4B:

[00131] Ή RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,16 -

3,26 (m, 2 H) 3,70 - 3,85 (m, 5 H) 4,02 - 4,19 (m, 3 H) 4,44 (td, >10,2, 6,4 Hz, 1 H) 4,94 (t, >5,6 Hz, 1 H) 5,83 (d, >8,4 Hz, 1 H) 6,56 (t, >2,0 Hz, 1 H) 6,63 (t, >1,8 Hz, 1 H) 6,91 (t, >1,7 Hz, 1 H) 6,99 7,07 (m, 2 H) 7,16 (d, >2,0 Hz, 1 H) 7,36 (d, >8,1 Hz, 1 H) 7,37 7,41 (m, 1 H) 7,44 - 7,48 (m, 1 H) 8,38 (s, 1 H) [00132] LC/EM (método LC-D): Rt 1,17 min, MH⁺ 599 [00133] [a]_D ²⁰: -56,4° (c 0,47, DMF) [00134] SFC quiral (método SFC-I): Rt 3,14 min, MH⁺ 599, pureza quiral 97,0%.

Exemplo 5: síntese de 2-(4~cloro~2~(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3-metóxi-5(metilsulfonil)fenil)amlno)-1-(5-metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona (Composto 5) e separação quiral nos Enantiômeros 5A e SB.

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Síntese do intermediário 5a:

[00135] A uma mistura de 2-(4-cloro-2-hidroxifenil)acetato de etila [CAS 1261826-30-5] (5,2 g, 24,2 mmol) e carbonato de césio (15,8 g, 48,5 mmol) em DMF (90 mL) a 10°C foi adicionado (2-bromoetóxi) (ferc-butil)dirnetilsilano [CAS 86864-60-0] (6,26 mL, 29,1 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Água foi adicionada e a mistura reacional foi extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca com MgSCU filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 80 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações puras foram combinadas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar 2-(2-(2-((fercbutildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 5a (7,8 g).

Síntese do intermediário 5b:

[00136] A uma solução de 1 M de bis(trimetilsilil)amida de lítio em THF (41,8 mL, 41,8 mmol) resfriada (-78°C), foi adicionada uma solução de 2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 5a (7,8 g, 20,9 mmol) em THF (45 mL). Após 1 h a -70°C, adicionou-se clorotrimetilsilano (4,24 mL, 33,5 mmol). A mistura reacional foi agitada a -70°C durante 15 min. /V-Bromosuccinimida (4,46 g, 25,1 mmol) em THF (45 mL) foi adicionada e a agitação foi continuada a ~55°C durante 2 h. A mistura reacional foi vertida em HzO e extraída duas vezes com EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas, secou-se sobre MgSO4, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para dar 2-bromo-2-(2-(2-((ferc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 5b (10,1 g) que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional.

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Síntese do intermediário 5c:

[00137] Uma mistura de 2-bromo-2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi) etóxi)~4~clorofenil)acetato de etila 5b (4,75 g, 10,5 mmoi), 3-metóxi-5(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (3,17 g, 15,8 mmoi) e di-isopropiletilamina (3,62 mL, 21,0 mmoi) em CHsCN (90 mL) foi agitada a 50°C durante a noite. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi absorvido com EtOAc e lavado com HCI a 0,5 N e água. A fase orgânica foi seca com MgSCU, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 120 g, heptano/EtOAc 90/10 a 80/20) para dar 2-(2~(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4clorofenil)~2~((3-metóxi -5(metilsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 5c (3,5 g).

Síntese do intermediário 5d:

[00138] Mono-hidrato de hidróxido de lítio (513 mg, 12,2 mmoi) foi adicionado em porções a uma solução de 2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil) óxi)etóxi)-4clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 5c (3,5 g, 6,12 mmol) em THF/CH3OH/H2O (1/1/1) (75 mL) a 10°C. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, diluída com água e resfriada para 0°C. A solução foi lentamente acidificada para pH 6 com HCI 0,5 N e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar ácido 2-(2-(2-((ferc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4οΙθΓθΤοηίΙ)-2-((3^β1όχί~5-^θ1ίΐ3υΙΤοηίΙ)Τ8ηίΙ)3ΠΊ!ηο)3θέ1ίοο 5d (2,85 g). O composto foi usado sem purificação adicional no próximo passo. Síntese do intermediário 5e:

[00139] A uma solução de ácido 2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi) etóxi)-4-clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 5d (1 g, 1,84 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados HATU (1,05 g, 2,76 mmoi), di-isopropiletilamina (913 pL, 5,53 mmoi) e 5-metóxi-6(trifluorometil)indolina 2g (412 mg, 1,90 mmol). A mistura reacional foi

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44/77 agitada à temperatura ambiente por 2 h. A mistura reacionai foi diluída com água. O precipitado foi removido por filtração, lavado com água e retomado com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com uma solução a 10% de K2CO3 e água, seca sobre MgSCu, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3-metóxi~5~(metilsulfonil)fenil)amino)-1(S-metóxi-e-Orifluorometiljindolin-l-iljetanona 5e (1,4 g). O composto foi usado sem purificação adicional no próximo passo reacionai.

Síntese do Composto 5 e separação quiral nos Enantiômeros 5A e 5B: [00140] Sob fluxo de N₂, a 5°C, HCI 4 M em dioxano (4,71 mL, 18,8 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-(2-(2~((ferc~ butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil) amino)-1-(5-metóxi-6-(tr!fluorometil)indolin-1-il)etanona 5e (1,4 g, 1,88 mmol) em MeOH (25 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi resfriada a 0°C, alcalinizou-se com uma solução aquosa a 10% de K2CO3 e extraiu-se com EtOAc. A fase orgânica foi separada, seca com MgSOd, filtrada, e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 40 g, CHzCL/MeOH 98,5/1,5). As frações puras foram combinadas e 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-((3metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-metóxi-6-(trifluorometil)indolin1~il)etanona (Composto 5, 1,0 g) como um racemato. Uma amostra analítica do Composto 5 foi cristalizada a partir de MeOH (60 mg). A quantidade restante foi utilizado para separar os Enantiômeros via Quiral Preparativa SFC (Fase estacionária: Chiralpak® IC 5 pm 250 x 30 mm, Fase móvel: 70% CO2, 30% EtOH (+0,3% IPrNH₂)). O primeiro enantiômero eluído (400 mg) foi solidificado de éter diiisopropílico para dar 0 Enantiômero 5A (351 mg). O segundo enantiômero eluído (430 mg) foi solidificado de éter diiisopropílico para dar 0 Enantiômero 5B (336 mg).

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Composto 5:

[00141] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,13 -

3,27 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,73 - 3,78 (m, 1 H) 3,78 - 3,84 (m, 1 H)

3,84 (s, 3 H) 3,98 - 4,22 (m, 3 H) 4,41 (dt, >6,1, 10,1 Hz, 1 H) 4,95 (t, >5,6 Hz, 1 H) 5,80 (d, >8,08 Hz, 1 H) 6,55 (s, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 6,90 (s, 1 H) 6,96 - 7,05 (m, 2 H) 7,16 (d, >1,52 Hz, 1 H) 7,24 (s, 1 H) 7,35 (d, >8,08 Hz, 1 H) 8,34 (s, 1 H) [00142] LC-EM (método LC-A): Rt 3,15 min, MH⁺ 629 [00143] Ponto de fusão: 220°C

Enantiõmero 5A:

[00144] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 3,10 (s, 3 Η) 3,13 -

3,27 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,73 - 3,78 (m, 1 H) 3,78 - 3,84 (m, 1 H)

3,84 (s, 3 H) 3,98 - 4,22 (m, 3 H) 4,41 (dt, >6,1, 10,1 Hz, 1 H) 4,95 (t, >5,6 Hz, 1 H) 5,80 (d, >8,08 Hz, 1 H) 6,55 (s, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 6,90 (s, 1 H) 6,96 - 7,05 (m, 2 H) 7,16 (d, >1,52 Hz, 1 H) 7,24 (s, 1 H) 7,35 (d, >8,08 Hz, 1 H) 8,34 (s, 1 H) [00145] LC/EM (método LC-A): Rt 3,13 min, MH⁺ 629 [00146] [a]_D ²⁰: -60,4° (c 0,28, DMF) [00147] SFC quiral (método SFC-D): Rt 1,02 min, ΜΗ^1- 629, pureza quiral 100%.

Enantiõmero 5B:

[00148] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 3,10 (s, 3 H) 3,13 -

3,27 (m, 2 H) 3,73 (s, 3 H) 3,73 - 3,78 (m, 1 H) 3,78 - 3,84 (m, 1 H)

3,84 (s, 3 H) 3,98 - 4,22 (m, 3 H) 4,41 (dt, >6,1, 10,1 Hz, 1 H) 4,95 (t I, >5,6 Hz, 1 H) 5,80 (d, >8,08 Hz, 1 H) 6,55 (s, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 6,90 (s, 1 H) 6,96 - 7,05 (m, 2 H) 7,16 (d, >1,52 Hz, 1 H) 7,24 (s, 1 H) 7,35 (d, >8,08 Hz, 1 H) 8,34 (s, 1 H) [00149] LC/EM (método LC-A): Rt 3,15 min, MH⁺ 629 [00150] [a]_D ²⁰: +56,7° (c 0,3, DMF) [00151] SFC quiral (método SFC-D): Rt 1,22 min, MH⁺ 629, pureza

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46/77 quiral 99,7%.

Exemplo 6 (método 1): síntese de 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2((3~meióxi~5~(metilsuÍfonH)fenir)amino)-1-(6~(trifluorQmetóxi)indQHn-1il)etanona (Composto 6).

F

Síntese do intermediário 6a:

[00152] A uma solução de ácido 2~(2~(2~((ferc~butildimetHsilil) óxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético Sd (1,07 g, 1,97 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados HATU (1,12 g, 2,95 mmol), di-isopropiletilamina (976 pL, 5,91 mmol) e 6(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-95-1] (400 mg, 1,97 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. A mistura reacional foi diluída com água. O precipitado foi removido por filtração, lavado com água e retomado com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com uma solução a 10% de K2CO3, água, seca sobre MgSÜ4, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(2-(2((fe/r-butildimetilsiliOoxOetoxiH-clorofenil^-^S-metoxi-S^metilsulfoniO fenil)amino)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 6a (1,36 g). O composto em bruto foi usado sem purificação no passo reacional seguinte.

Síntese do Composto 6:

[00153] Sob fluxo de N₂, a 5°C, HCI 4 M em dioxano (4,66 mL, 18,6 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-(2-(2-((fercbutildimet!lsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)~2~((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)

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47/77 amino)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 6a (1,36 g, 1,87 mmol) em MeOH (25 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi resfriada a 0°C, alcalinizou~se com uma solução aquosa a 10% de K2CO3 e extraiu-se com EtOAc. A fase orgânica foi separada, seca com MgSO4, filtrada, e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 40 g, CHaCb/MeOH 99,5/0,5). As frações puras foram combinadas e 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi) fenil)-2-((3-metóxi-5(metilsulfonil)fenil)amino)-1 -(6-(tnfluorometóxi) indolin-1 -il)etanona (Composto 6, 540 mg) como um racemato. Uma amostra analítica do Composto 6 foi obtida por cristalização a partir de MeOH (34 mg). Composto 6:

[00154] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,07 - 3,23 (m, 5 H)

3,70 - 3,83 (m, 5 H) 4,06 - 4,19 (m, 3 H) 4,42 (td, >10,23, 6,32 Hz, 1 H) 4,92 (t, >5,31 Hz, 1 H) 5,81 (d, >8,59 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 6,90 (s. 1 H) 6,99 - 7,05 (m, 3 H) 7,16 (d, >2,02 Hz, 1 H) 7,30 7,40 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) [00155] LC-EM (método LC-A): Rt 3,28 min, MH⁺ 615 [00156] Ponto de fusão: 191 °C

Exemplo 6 (método 2): síntese de 2-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il) etanona (Composto 6) e separação quiral nos Enantiômeros 6A e 6B.

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Η·>. Ρ'Λ'ί·.·

Síntese do intermediário 6b:

[00157] A uma solução de 1,5 M de bis(trimetilsilil)amida de lítio em THF (23 mL, 34,4 mmol) resfriada (-70°C) sob fluxo de N₂ foi adicionada uma solução de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 4a (6 g, 17,2 mmol) em THF (35 mL). Após 1 h a -70°C, adicionou-se clorotrimetilsilano (3,5 mL, 27,5 mmol). A mistura reacional foi agitada a -70°C durante 15 min. /V-Bromosuccinimida (3,7 g, 20,6 mmol) em THF (35 mL) foi adicionada e a agitação foi continuada a -70°C durante 2 h. A mistura reacional foi vertida em H₂O e extraída com EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre MgSCu, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 2-(2-(2-(benzilóxi) etóxi)-4-clorofenil)-2-bromoacetato 6b (8,2 g), que foi usado no passo seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 6c:

[00158] Uma mistura de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-bromoacetato 6b (7,36 g, 17,2 mmol), 3-metóxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (5,2 g, 25,8 mmol) e di-isopropiletilamina (5,9 mL, 25,8 mmol) em CH3CN (150 mL) foi agitada a 50°C durante a noite. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com EtOAc e lavado com HCI 0,5N e água. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 220 g, CH₂CI₂/IVIeOH 99/1). As frações puras foram combinadas e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(2-(2(όβηζΠόχΙ)βίόχί)-4-οΙθΓθΤβηίΙ)-2-((3^θίόχί-5-(ΓηβίΙΐ3υΙΤοηίΙ)ίβηΠ)8Γηίηο) acetato de etila 6c (5,52 g).

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Síntese do intermediário 6d:

[00159] A 10°C, mono-hidrato de hidróxido de lítio (845 mg, 20,1 mmol) foi adicionado a uma solução de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acetato de etila 6c (5,52 g, 10,1 mmol) em MeOH/THF/água (1/1/1) (90 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi diluída com água gelada e resfriada a 0°C. A mistura resultante foi acidificada para pH 6-7 com HCI a 0,5N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar ácido 2-(2-(2-(benzilóxi) etóxi)--4--clorofenil)-2-((3“rnetóxi-5-(metilsulfonil)fenil)arnino)acético 6d (5,26 g). O composto foi usado na etapa reacional seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 6e:

[00160] Uma mistura de 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-951] (1,85 g, 9,12 mmol), ácido 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 6d (5,69 g, 10,9 mmol), HATU (5,2 g, 13,7 mmol) e dl-isopropiletilamlna (4,52 mL, 27,4 mmol) em DMF (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. A mistura foi diluída com água. O precipitado foi separado por filtração e iavado com água. O precipitado foi retirado com EtOAc, lavado com uma solução de K2CO3 a 10% em água, água, seco sobre MgSO4, filtrado e 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 220 g, heptano/EtOAc 70/30). As frações puras foram combinadas e concentradas até à secura para fornecer 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1il)etanona 6e (5,6 g).

Síntese do Composto 6 e separação quiral nos Enantiômeros 6A e 6B: [00161] Uma mistura de 2-(2-(2-(benzilóxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-((3

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50/77 metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 6e (5,6 g, 7,94 mmol) em EtOAc (100 mL) foi hidrogenada à pressão atmosférica de H₂ na presença de Pd/C (10%) (1,7%, 1,59 mmol) como catalisador por 6 min ( até o final do consumo de H₂). A reação foi diluída com EtOAc e filtrada através de uma almofada de celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer 2“(4ClorO2(2hidroxietóxi)fenil)“2“((3metóxi5(metilsulfonil)fenil) arnino)~1~(6(trifluorometóxi)indolin~1-il)etanona (Composto 6) como um racemato (4,6 g), composto em bruto). Os Enantiômeros do Composto 6 foram separados via SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OJ-H 5 pm 250 x 20 mm, fase móvel: 80% CO₂, 20% MeOH (+0,3% iPrNH₂)). O primeiro enantiômero eluído (1,96 g) foi adicionalmente purificado através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® IA 5 pm 250 x 20 mm, fase móvel: 74% CO₂, 26% IPrOH (+0,3% iPrNH₂)), para se obter após precipitação a partir de heptano/éter di-isopropílico, Enantiômero 6A (1,527 g). O segundo enantiômero eluído (2,10 g) foi solidificado a partir de heptano/éter di-isopropílico para originar o Enantiômero 6B (1,708 g).

Enantiômero 6A:

[00162] Ή RMN (500 MHz, DIVISO» δ ppm 3,08 - 3,18 (m, 5 H)

3,70 - 3,83 (m, 5 H) 4,05 - 4,19 (m, 3 H) 4,43 (td, >10,32, 6,46 Hz, 1 H) 4,97 (t, >5,52 Hz, 1 H) 5,82 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,62 (s, 1 H) 6,91 (s, 1 H) 7,00 - 7,08 (m, 3 H) 7,16 (d, >1,58 Hz, 1 H) 7,34 (d, >8,20 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) [00163] LC/EM (método LC-A): Rt 3,32 min, MH⁺ 615 [00164] [a]_D ²⁰: +64,3° (c 0,305, DMF) [00165] SFC quiral (método SFC-E): Rt 2,82 min, MH⁺ 615, pureza quiral 100%.

Enantiômero 6B:

[00166] ¹H RMN (500 MHz, DIVISO» δ ppm 3,08 - 3,18 (m, 5 H)

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3,70 - 3,83 (m, 5 Η) 4,05 - 4,19 (m, 3 Η) 4,43 (td, >10,32, 6,46 Hz, 1 H) 4,97 (t, >5,52 Hz, 1 H) 5,82 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,56 (s, 1 H) 6,62 (s, 1 H) 6,91 (s, 1 H) 7,00 - 7,08 (m, 3 H) 7,16 (d, >1,58 Hz, 1 H) 7,34 (d, >8,20 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) [00167] LC/EM (método LC-A): Rt 3,31 min, MH* 615 [00168] [a]_D ²⁰: -53,7° (c 0,3, DMF) [00169] SFC quiral (método SFC-E): Rt 3,34 min, MH⁺ 615, pureza quiral 95,7%.

Exemplo 7: síntese de ácido 4-(5-cloro-2-(1-((3-metóxi-5-(metilsulfonil) fenil)-amino)-2-oxo~2~(6-(tnfluorometil)indolin-1-il)etil)fenóxi) butanoico (Composto 7) e separação quiral nos Enantiômeros 7A e 7B.

..........

3) Wç W

Síntese do intermediário 7a:

[00170] A uma suspensão de 2-(4-cioro-2-hidroxifenil)acetato [CAS 1261826-30-5] (8,5 g, 39,6 mmol), Cs₂CO₃ (25,8 g, 79,2 mmol) em DMF (130 mL) a 10°C, foi adicionado gota a gota 4~bromobutanoato de terc-butila [CAS 110611-91-1] (7 mL, 39,6 mmol). A mistura foi agi

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52/77 tada à temperatura ambiente durante a noite. Diluiu-se a mistura com EtOAc e água. As camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSCh, filtrada, e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 120 g, heptano/EtOAc 90/10). As frações puras foram combinadas e concentradas até à secura para dar 4-(5cloro-2-(2-etóxi-2-oxoetil)fenóxi)butanoato de ferc-butila 7a (12,7 g). Síntese do intermediário 7b:

[00171] Um balão foi carregado com LiHMDS 1,5 M em THF (23,5 mL, 35,3 mmol) sob fluxo de N2 e foi resfriada a -78°C. Uma solução de 4-(5-cloro-2-(2-etóxi-2-oxoetil)fenóxi)butanoato de ferc-butila 7a (6,3 g, 17,6 mmol) em THF (60 mL) foi adicionada gota a gota e a mistura foi agitada a -78°C por 15 min. Foi adicionado clorotrimetilsilano (3,6 mL, 28,3 mmol). Após 15 min a ~78°C, foi adicionada A/-bromos~ succinimida (3,77 g, 21,2 mmol) em THF (40 mL) e a mistura foi agitada a -70°C por 1 h. A reação foi extinta com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 4(2-(1-bromo-2-etóxi-2-oxoetil)-5-clorofenóx!)butanoato de ferc-butila 7b (7,6 g). O composto foi usado na etapa reacional seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 7c:

[00172] A uma solução de 4-(2-(1 ~bromo-2-etóxi~2~oxoetil)~5~cloro~ fenóxi)butanoato de ferc-butila 7b (7,6 g, 17,4 mmol) em CH3CN (140 mL) à temperatura ambiente, foi adicionada di-isopropiletilamina (4,8 mL, 27,9 mmol) e de seguida 3-metóxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (4,2 g, 20,9 mmol). A mistura foi agitada a 65°C por 24 h. A mistura foi diluída com EtOAc, de seguida lavada com HCI 0,5 N (duas vezes) e água. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. Foi realizada

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53/77 purificação por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 120 g, heptano/EtOAc 85/15 a 70/30). As frações puras foram combinadas e concentradas até à secura para dar 4-(5~cloro~2~(2-etóxi-1-((3-metóxi5-(metilsulfonil)fenil)amino)-2-oxoetil)fenóxi)butanoato de terc-butila 7c (7,3 g).

Síntese do intermediário 7d:

[00173] 4-(5-Cloro-2-(2-etóxi-1-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil) amino)-2”oxoetil)fenóxi)butanoato de terc-butila 7c (7,3 g, 13,1 mmol) e mono-hidrato de hidróxido de lítio (1,65 g, 39,4 mmol) em THF/água (1/1) (180 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. A mistura foi diluída com água. A camada aquosa foi lentamente acidificada com HCI a 3N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram secas sobre MgSCA, filtradas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar ácido 2-(2-(4~(terc-butóxi)-4-oxobutóxi)-4-clorofenil)-2-((3~ metóxi-5-(metilsulfonil)fenll)amino)acético 7d (6,9 g). O produto foi usado na etapa reacional seguinte sem purificação adicional.

Síntese do intermediário 7e:

[00174] Uma mistura de 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 181513-291] (390 g, 2,08 mmol), ácido 2-(2-(4-(terc-butóxi)-4-oxobutóxi)-4-clorofenil)-2-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 7d (1,1 g, 2,08 mmol), HATU (1,2 g, 3,12 mmol) e di-isopropiletilamina (1 mL, 6,25 mmol) em DMF (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. A mistura foi diluída com água. O precipitado foi separado por filtração e lavado com água. O precipitado foi retirado com EtOAc, lavado com uma solução aquosa de K2CO3 a 10%, água, seco sobre MgSO4, filtrado e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 80 g, ChhCb/MeOH 99,5 / 0,5) para dar, após cristaiização de CH3CN, 4-(5cloro-2-(1-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)fenóxi)butanoato de terc-butila 7e (700 mg).

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Síntese do Composto 7 e separação quirai nos Enantiômeros 7A e 7B: [00175] Uma solução de 4-(5~οΙθΓθ-2~(1-((3-ηΊ61όχΙ~5~(ΠΊβ*Η3υίίοηΙΙ) fenil)amino)~2~oxo~2~(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)fenóxi)butanoato de terc-butila 7e (0,6 mg, 0,143 mmol) em HCI 4M em dioxano (6 mL) foi agitada a 5°C por 3 h e à temperatura ambiente durante 8 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi cristalizado a partir de éter di-isopropílico para produzir ácido 4-(5-cloro-2-(1-((3metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1il)et!l)fenóxi)butanoico (Composto 7, 530 mg) como um racemato. Os Enantiômeros foram separados através de SFC Quirai Preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® IC 5 pm 250 x 30 mm, fase móvel: 65% COz, 35% MeOH). O primeiro enantiõmero eluído (264 mg) foi cristalizado de CHsCN/éter di-isopropílico para dar o Enantiõmero 7Â (207 mg). O segundo enantiõmero eluído (269 mg) foi cristalizado de CHaCN/éter di-isopropílico para dar o Enantiõmero 7B (212 mg). Composto 7:

[00176] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,90 - 2,09 (m, 2 H)

2,31 - 2,43 (m, 2 H) 3,12 (s, 3 H) 3,17 - 3,28 (m, 2 H) 3,74 (s, 3 H) 3,88

- 4,07 (m, 1 H) 4,07 - 4,15 (m, 2 H) 4,35 - 4,45 (m, 1 H) 5,73 (d i, >7,88 Hz, 1 H) 6,55 (s I, 1 H) 6,64 (s I, 1 H) 6,90 (s I, 1 H) 7,04 (s I, 2 H) 7,16 (s I, 1 H) 7,31 (d I, >7,88 Hz, 1 H) 7,39 (d I, >7,25 Hz, 1 H) 7,46 (d I, >7,25 Hz, 1 H) 8,39 (s I, 1 H) 12,12 (s I, 1 H) [00177] LC-EM (método LC-A): Rt 2,73 min, MH⁺ 641 [00178] Ponto de fusão: 210°C

Enantiõmero 7A:

[00179] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,99 (dq, >13,26, 6,86 Hz, 2 H) 2,30 - 2,46 (m, 2 H) 3,10 (s, 3 H) 3,15 - 3,37 (m, 2 H) 3,74 (s, 3 H) 3,95 - 4,06 (m, 1 H) 4,07 - 4,17 (m, 2 H) 4,34 - 4,43 (m, 1 H) 5,72 (d, >8,08 Hz, 1 H) 6,54 (s, 1 H) 6,63 (s, 1 H) 6,89 (s, 1 H) 6,99

- 7,05 (m, 2 H) 7,14 (d, >1,52 Hz, 1 H) 7,31 (d, >8,08 Hz, 1 H) 7,38 (d,

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55/77 >7,58 Hz, 1 Η) 7,45 (d, >8,08 Hz, 1 Η) 8,38 (s, 1 Η) 12,09 (s I, 1 Η) [00180] LC/EM (método LC-A): Rt 2,73 min, MH* 641 [00181] [a]_D ²⁰: -49,8° (c 0,225, DMF) [00182] SFC quiral (método SFC-F): Rt 3,13 min, sem resposta EM, pureza quiral 100%.

[00183] Ponto de fusão: 182°C

Enantiõmero 7B:

[00184] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,99 (dq, >13,26, 6,86 Hz, 2 H) 2,30 - 2,46 (m, 2 H) 3,10 (s, 3 H) 3,15 - 3,37 (m, 2 H) 3,74 (s, 3 H) 3,95 - 4,06 (m, 1 H) 4,07 - 4,17 (m, 2 H) 4,34 - 4,43 (m, 1 H) 5,72 (d, >8,08 Hz, 1 H) 6,54 (s, 1 H) 6,63 (s, 1 H) 6,89 (s, 1 H) 6,99 -- 7,05 (m, 2 H) 7,14 (d, >1,52 Hz, 1 H) 7,31 (d, >8,08 Hz, 1 H) 7,38 (d, >7,58 Hz, 1 H) 7,45 (d, >8,08 Hz, 1 H) 8,38 (s, 1 H) 12,09 (s I, 1 H) [00185] LC/EM (método LC-A): Rt 2,73 min, MH⁺ 641 [00186] [a]_D ²⁰: +49,3° (c 0,2333, DMF) [00187] SFC quiral (método SFC-F): Rt 4,34 min, sem resposta EM, pureza quiral 100%.

[00188] Ponto de fusão: 180°C

Exemplo 8: síntese de ácido 4-(5-cloro-2-(1~((3-metóxi-5-(metilsulfonil) feniO-amino^-^-metoxi-e^trifluorometiQindolin-l-iQ^-oxoetiQfenoxi) butanoico (Composto 8) e separação quiral nos Enantiômeros §A e 8B.

$

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Síntese do intermediário 8a:

[00189] Uma mistura de 5-metóxi-6-(trifluorometóxi)indoHna 2g (617 g, 2,84 mmol), ácido 2-(2-(4~(ferc-butóxi)-4-oxobutóxi)~4~clorofenil)-2((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)acético 7d (1,5 g, 2,84 mmol), HATU (1,62 g, 4,26 mmol) e di-isopropiletilamina (1,4 mL, 8,5 mmol) em DMF (60 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 12 h. A mistura foi diluída com água. O precipitado foi separado por filtraçâo e lavado com água. O precipitado foi retirado com EtOAc, lavado com uma solução aquosa de K2CO3 a 10%, água, seco sobre MgSCX filtrado e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 120 g, heptano/EtOAc 60/40) para dar, após cristalização a partir de éter de petróleo/éter di-isopropílico, 4-(5-cloro-2-(1-((3-metóxi-5-(metilsulfonil) fenil)am!no)~2~(5~metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)~2~oxoetil)fenóxi) bu~ tanoato de ferc-butila 8a (1,36 g).

Síntese do Composto 8 e separação quiral nos Enantiômeros 8A e 8B: [00190] Uma solução de 4-(5~cloro~2~(1-((3~metóx!~5~(metilsulfonil) fenil)amino)-2-(5-metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)fenóxi) butanoato de ferc-butila 8a (1,36 mg, 1,87 mmol) em HCI 4M em dioxano (12 mL) foi agitada a 5°C por 3 h e à temperatura ambiente durante 14 h. O precipitado foi removido por filtraçâo e lavado com dioxano/éter di-isopropílico para produzir ácido 4-(5-cloro-2-(1-((3metóx!~5~(metilsulfonil)fenn)amino)-2-(5~metóx!~6~(trifluorometil)indolin1-ii)-2-oxoetil)fenóxi)butanoico (Composto 8, 1,2 g) como um racemato (contaminado com 2,2% do intermediário 8a). A fração menor (40 mg) foi adicionalmente purificada através de SFC aquiral (Fase estacionária: 2-etilpiridina 6 pm 150 x 21,2 mm, fase móvel: 60% CO2, 40% iPrOH) para produzir, após cristalização a partir de ChhCN/éter diisopropílico, 28 mg do composto 8. A quantidade restante do Composto 8 foi utilizado para separar os enantiômeros via Quiral Preparativa

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SFC (Fase estacionária: Chiralpak® IC 5 pm 250 x 30 mm, fase móvel: 60% CO₂, 40% MeOH). O enantiõmero eluído em primeiro lugar (340 mg) foi solidificado em éter de petróleo/éter di-isopropílico para originar 0 Enantiõmero 8A (285 mg). O segundo enantiõmero eluído (334 mg) foi solidificado em éter de petróleo/éter di-isopropílico para dar 0 Enantiômero 8B (210 mg).

Composto 8:

[00191] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,95 - 2,08 (m, 2 H)

2,32 - 2,44 (m, 2 H) 3,08 - 3,27 (m, 5 H) 3,73 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 3,92 - 4,00 (m, 1 H) 4,12 (d I, >3,54 Hz, 2 H) 4,32 - 4,40 (m, 1 H) 5,69 (d I, >8,08 Hz, 1 H) 6,54 (s I, 1 H) 6,62 (s, 1 H) 6,87 (s, 1 H) 6,98 - 7,04 (m, 2 H) 7,14 (s, 1 H) 7,22 (s, 1 H) 7,31 (d, >8,08 Hz, 1 H) 8,34 (s, 1 H) 12,07 (s I, 1 H) [00192] LC-EM (método LC-A): Rt 2,74 min, MH⁺ 671 [00193] Ponto de fusão: 232°C

Enantiõmero 8A:

[00194] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-de) õ ppm 1,95 - 2,07 (m, 2 H) 2,35 - 2,47 (m, 2 H) 3,11 (s, 3 H) 3,15 - 3,31 (m, 2 H) 3,74 (s, 3H) 3,85 (s, 3 H) 3,91 - 4,02 (m, 1 H) 4,06 - 4,19 (m, 2 H) 4,37 (td, >10,25, 6,31 Hz, 1 H) 5,70 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,54 (s, 1 H) 6,63 (s, 1 H) 6,88 (s, 1 H) 7,02 (d, >8,20 Hz, 2 H) 7,12 - 7,17 (m, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,31 (d, >8,20 Hz, 1 H) 8,34 (s, 1 H) 12,13 (s I, 1 H) [00195] LC/EM (método LC-A): Rt 2,75 min, MH⁺ 671 [00196] [a]_D ²⁰: -52,9° (c 0,28, DMF) [00197] SFC quiral (método SFC-G): Rt 2,50 min, MH* 671, pureza quiral 100%.

Enantiõmero 8B:

[00198] Ή RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,95 - 2,07 (m, 2 H) 2,35 - 2,47 (m, 2 H) 3,11 (s, 3 H) 3,15 - 3,31 (m, 2 H) 3,74 (s, 3H) 3,85 (s, 3 H) 3,91 - 4,02 (m, 1 H) 4,06 - 4,19 (m, 2 H) 4,37 (td, >10,25, 6,31

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Hz, 1 Η) 5,70 (d, >8,20 Hz, 1 Η) 6,54 (s, 1 Η) 6,63 (s, 1 Η) 6,88 (s, 1 Η) 7,02 (d, >8,20 Hz, 2 Η) 7,12 - 7,17 (m, 1 Η) 7,23 (s, 1 Η) 7,31 (d, >8,20 Hz, 1 Η) 8,34 (s, 1 Η) 11,44 (s I, 1 Η) [00199] LC/EM (método LC-A): Rt 2,73 min, MH⁺ 671 [00200] [a]_D ²⁰: +46,4° (c 0,28, DMF) [00201] SFC quiral (método SFC-G): Rt 3,31 min, MH⁺ 671, pureza quiral 100%.

Exemplo 9: síntese de ácido 4(5”Cloro-2”(1((3metóxi-5-(metilsulfonil) fenil)-amino)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)fenóxi) butanol· co (Composto 9) e separação quiral nos Enantiômeros 9A e 9B.

Õ .	fô·	O	C:
v			6 '
	®^Λ··4 ....< 45
	Q. 7.· ' '
	> ϊ4· ··'< ·.. >>			R.· '····-.-.
	!<C- H	EWF.fctzn	^4

HO:

Q

C,

Síntese do intermediário 9a:

[00202] Uma mistura de 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-951] (577 g, 2,84 mmol), ácido 2-(2-(4-(terc-butóxi)-4-oxobutóxi)-4clorofenil)-2-((3-metóxl·5-(metilsulfonil)fenil)amíno)acético 7d (1,5 g, 2,84 mmol), HATU (1,62 g, 4,26 mmol) e di-isopropiletilamina (1,4 mL, 8,5 mmol) em DMF (60 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 12 h. A mistura foi diluída com água. O precipitado foi separado por filtração e lavado com água. O precipitado foi retirado com EtOAc, lavado

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59/77 com uma solução aquosa de K2CO3 a 10%, água, seco sobre MgSO4, filtrado e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. A purificação foi realizada por cromatografia flash em gel de silica (15-40 pm, 120 g, heptano/EtOAc 60/40) para dar, após cristalização a partir de éter de petróleo/éter di-isopropílico, 4-(5-cloro-2-(1-((3-metóxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-2-oxo-2-(6-(trifluorornetóxi)indolin-1-il)etil)fenóxi) butanoato de ferc-butila 9a (1,02 g).

Síntese do Composto 9 e separação quiral nos Enantiômeros 9A e 9B: [00203] Uma solução de 4-(5-cioro-2-(1-((3-metóxi-5-(metilsulfonil) fenil)amino)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)fenóxi)butanoato de ferc-butila 9a (1,02 g, 1,43 mmol) em HCI 4M em dioxano (10 mL) foi agitada a 5°C por 3 h e à temperatura ambiente durante 12 h. O precipitado foi removido por filtração e lavado com dioxano/éter diisopropílico para originar ácido 4-(5-cloro-2-(1-((3-metóxi-5-(metilsul~ fonil)fenii)-amino)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)fenóxi) butanoico (Composto 9, 930 mg, 0,78 equiv. HCI, 0,08 equiv. H2O, 0,162 equiv. dioxano (determinado por titulação)) como um racemato. Os Enantiômeros foram separados através de SFC Quiral Preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® IC 5 pm 250 x 30 mm, Fase móvel: 70% COz, 30% EtOH/iPrOH (50/50)). O primeiro enantiômero eluído foi agitado numa mistura de HCI 1 N e EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O composto foi cristalizado a partir de CHsCN/éter di-isopropíiico para dar 0 Enantiômero 9A (145 mg). O segundo enantiômero eluído foi agitado numa mistura de HCI 1 N e EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO^, filtrada e 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O composto foi cristalizado a partir de CHaCN/éter di-isopropílico para dar 0 Enantiômero 9B (156 mg). Composto 9:

[00204] ¹H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,99 (dq, J=13,71,

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7,05 Hz, 2 Η) 2,32 - 2,46 (m, 2 Η) 3,08 - 3,20 (m, 5 Η) 3,74 (s, 3 Η) 4,00 (td, >10,23, 7,33 Hz, 1 H) 4,07 - 4,15 (m, 2 H) 4,38 (td, >10,23, 6,82 Hz, 1 H) 5,70 (s, 1 H) 6,54 (s, 1 H) 6,63 (s, 1 H) 6,88 (s, 1 H) 6,95 - 7,09 (m, 2 H) 7,14 (d, >1,52 Hz, 1 H) 7,30 (d I, >8,08 Hz, 1 H) 7,33 (d I, >8,59 Hz, 1 H) 8,03 (s, 1 H) [00205] LC-EM (método LC-A): Rt 2,87 min, MH⁺ 657 [00206] Ponto de fusão: 173°C

Enantiômero 9A:

[00207] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-d₆) õ ppm 1,91 - 2,06 (m, 2 H)

2,32 - 2,44 (m, 2 H) 3,09 - 3,23 (m, 5 H) 3,74 (s, 3 H) 3,98 - 4,16 (m, 3 H) 4,39 (td, >10,17, 6,78 Hz, 1 H) 5,71 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,55 (s, 1 H) 6,63 (s, 1 H) 6,89 (s, 1 H) 7,00 - 7,08 (m, 2 H) 7,15 (s, 1 H) 7,30 (d, >8,20 Hz, 1 H) 7,34 (d, >8,20 Hz, 1 H) 8,04 (s, 1 H) 12,11 (s I, 1 H) [00208] LC/EM (método LC-A): Rt 2,86 min, MH⁺ 657 [00209] [a]_D ²⁰: -56,5° (c 0,255, DMF) [00210] SFC quiral (método SFC-H): Rt 4,85 min, MH⁺ 657, pureza quiral 100%.

[00211] Ponto de fusão: 154°C

Enantiômero 9B:

[00212] ¹H RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,91 - 2,06 (m, 2 H)

2,32 - 2,44 (m, 2 H) 3,09 - 3,23 (m, 5 H) 3,74 (s, 3 H) 3,98 - 4,16 (m, 3 H) 4,39 (td, >10,17, 6,78 Hz, 1 H) 5,71 (d, >8,20 Hz, 1 H) 6,55 (s, 1 H) 6,63 (s, 1 H) 6,89 (s, 1 H) 7,00 - 7,08 (m, 2 H) 7,15 (s, 1 H) 7,30 (d, >8,20 Hz, 1 H) 7,34 (d, >8,20 Hz, 1 H) 8,04 (s, 1 H) 12,11 (s I, 1 H) [00213] LC/EM (método LC-A): Rt 2,86 min, MH⁺ 657 [00214] [a]_D ²⁰: +55,3° (c 0,302, DMF) [00215] SFC quiral (método SFC-H): Rt 6,34 min, MH⁺ 657, pureza quiral 100%.

[00216] Ponto de fusão: 155°C

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Tabela: compostos preparados como descrito acima

Composto	Estrutura	Rotação óptica
1	F och₃ Q, Á- /“\ H V_/ ίΑΥ \ «A II» cA u _CH3	racêmico
1A	F p_CH., ... . Ύ ί \ ΥΆ Ά^ζ ch₃	[cc]_D ²⁰ - -49,6°
1B	F OCH-. UV λ_Ηι	[a]_D ²⁰ - +51,7°
2	F ç>ch₃FC YY h “O rlv/X^·Ν \ _n 11) oA CH»·'-^ ⁷ CH₃	racêmico
2A	F 11 _OCH^ \|(+) ^_z FC ../Ylíj ^·Ν \ _n Tí s X Y-ss·'*'' 11) oA CH^ '^ '⁷ CH₃	[cx]d²⁰ +53,5°
2B	F _nJLl pCH₃1(-) o lí \ JL	[cx]d²⁰ = -56,5°

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Composto	Estrutura	Rotação óptica
3	F OCH₃.ΟΟγ/υΚ) ₀ ^v CH₃	racêmico
3A	F OCH₃ ^<^Y^XnA / ^,#Υγ\ ^{H v}V W oA_cHi	[a]o²⁰ - -59,0°
3B	och₃ _F,O0<t (JO X;	[a]_D ²⁰ = +56,8°
4	Ç! ^Hox/x._ojC^ OCH_{3 rc} ΎΟ··0 Όν\ JA	racêmico
4A	Çl ^HXx^_rYjC^ och₃'vir 7kJ-ζ ^!~!₃	[a]o²⁰ ··· *59,8^o
4B	Çl J p_CH;s c. !(-) /==( _F ~ Ί KO ^υ CHj	[a]_D ²⁰ -56,4°
5	Ci ^HCV^_O0C \|-\|₃ η m „ jí 0^ CH₃O'^^XíS#^^{/ ch}3	racêmico

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Composto	Estrutura	Rotação óptica
5A	Cl och₃ T(-) /==/ _o JLAy A. CH₃O ^ch3	[a]o²⁰ -60,4°
5B	Cl OCH₃ \|(+) /==( ^Γ’ΎΥ\ CH.O '·^'' CH₃	[a]o²⁰ *56,7°
6	Cl HO_x_x\_q.JI_s^_íJ och₃ CK Jx, Zx o Y ti \ \#^^z - CH₃	racêmico
6A	Cl och₃ \| (+) ch₃	[a]o²⁰ “ +64,3°
6B	Cl och₃^χο’Υ	[α]ο²⁰ -53,7°
7	__och₃ ό cv Â. Λχ t rw ' ³'^V^%r^^r\ CH₃	racêmico
7A	IA/ <n_H3	[_a]_D2Q -49,8°

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Composto	Estrutura	Rotação óptica
7B	_Ύ	[_a]_D2o 4-49,3°
8	__OCHj vw χχ> Ία	racêmico
8A	OCH₃ ο ./x -vÇv a Ji J / ' CH₃	[a]_D ²⁰ - -52,9°
8B	och₃ Lw AJV	[α]ϋ^ζ0 ~ +46,4°
9	P^CH=	racêmico
9A	pCH₃ Uv	[α]ο²⁰ -56,5°
9B	Ci ^Vx^/U OCH₃ & Olh _Fca I Τλ / I L) ^J CH₃	[a]_D ²⁰ - +55,3°

ATIVIDADE ANTIVIRAL DOS COMPOSTOS DA INVENÇÃO

Ensaio antiviral de DENV-2 [00217] A atividade antiviral de todos os compostos da invenção foi

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65/77 testada em relação à cepa de DENV-2 16681 que foi marcada com proteína fluorescente verde intensificada (eGFP). O meio de cultura consiste em meio essencial mínimo suplementado com 2% de soro fetal de bezerro inativado pelo calor, gentamicina a 0,04% (50 mg/mL) e 2 mM de L-glutamina. Células Vero, obtidas da ECACC, foram suspensas em meio de cultura e 25 pL foram adicionados a placas de 384 poços (2500 células/poço), que já contêm os compostos antivirals. Tipicamente, estas placas contêm uma diluição em série de 5 vezes de 9 passos de diluição do composto de teste a 200 vezes a concentração final em DMSO a 100% (200 nL). Adicionalmente, a concentração de cada composto é testada em quadruplicado (gama de concentrações finais: 25pM - 0,000064 μΜ ou 2,5 pM - 0,0000064 pM para os compostos mais ativos). Finalmente, cada placa contém poços que são atribuídos como controles de vírus (contendo células e vírus na ausência de composto), controles de células (contendo células na ausência de vírus e composto) e controles de meio (contendo meio na ausência de células, vírus e compostos). Aos poços atribuídos como controle de meio, foram adicionados 25 pL de meio de cultura em vez de células Vero. Assim que as células são adicionadas às placas, as placas foram incubadas durante 30 minutos à temperatura ambiente para permitir que as células se distribuíssem uniformemente dentro dos poços. De seguida, as placas foram incubadas em um incubador totalmente umidificado (37°C, 5% de CO₂) até ao dia seguinte. Depois, a cepa de DENV-2 16681, marcada com eGFP, foi adicionada a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,5. Portanto, 15 pL de suspensão de vírus foram adicionados a todos os poços contendo composto de teste e aos poços atribuídos como controle de vírus. Em paralelo, 15 pL de meio de cultura foram adicionados aos controles de meio e células. De seguida, as placas foram incubadas durante 3 dias em um incubador totalmente umidificado (37°C, CO2 a 5%). No dia da leitura, a

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66/77 fluorescência de eGFP foi medida usando um microscópio de fluorescência automatizado a 488 nm (laser azul). Usando um sistema LIMS interno, foram calculadas curvas de resposta à dose de inibição para cada composto e se determinou metade da concentração eficaz máxima (EC50). Portanto, a porcentagem de inibição (I) para cada concentração de teste é calculada usando a seguinte fórmula: I - 100*(StScc)/(Svc-Scc); St, Scc e Svc são a quantidade de sinal de eGFP nos poços com compostos de teste, controle de células e controle de vírus, respectivamente. A EC50 representa a concentração de um composto à qual a replicação do vírus é inibida em 50%, tal como medida por uma redução de 50% da intensidade fluorescente de eGFP em comparação com 0 controle de vírus. A EC50 é calculada usando interpelação linear (Tabela 1).

[00218] Em paralelo, a toxicidade dos compostos foi avaliada nas mesmas placas. Uma vez efetuada a leitura do sinal de eGFP, se adicionou 40 pL de ATPlite, um corante da viabilidade celular a todos os poços das placas de 384 poços. Está presente ATP em todas as células metabolicamente ativas e a concentração diminui muito rapidamente quando as células sofrem necrose ou apoptose. O sistema de ensaio ATPLite se baseia na produção de luz provocada pela reação de ATP com luciferase e D-luciferina adicionadas. As placas foram incubadas durante 10 minutos à temperatura ambiente. De seguida, as placas foram medidas em um ViewLux. Também se determinou metade da concentração citotóxica máxima (CCso), definida como a concentração requerida para reduzir 0 sinal luminescente em 50% em comparação com a dos poços com controle de células. Finaimente, 0 índice de seletividade (SI) foi determinado para os compostos, tendo sido calculado como se segue: SI = CC50/EC50.

Tabela 1: EC50, CC50 e SI para os compostos da invenção no ensaio antiviral de DENV-2

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# do composto	EC50 (μΜ) N	CC50 (μΜ) N	SI N
1	0,0032	14	4397
1A	2,4	12	4,8
1B	0,0014	3,4	>1980
2	0,0010	12	13700
2A	0,00093	9,6	16400
2B	0,17	18	105
3	0,00074	7,9	10700
3A	0,57	11	19
3B	0,00061	8,7	16300
4	0,00066	7 7	11600
4A	0,00041	6,0	15000
4B	0,016	11	693
5	0,00070	11	15700
5A	0,076	16	210
5B	0,00023	8,5	>16800
6	0,00043	3,6	7070
6A	0,00023	7,3	>12000
6B	0,020	10	492
7	0,00058	13	21800
7A	0,069	11	165
7B	0,00025	11	90600
8	0,0019	14	7460
8A	0,095	12	126
8B	0,0012	14	6780
9	0,00031	12	40200
9A	0,12	12	93
9B	0,00015	13	83000
	4	4	4
	3	3	3
	3	3	3
	4	4	4
	3	4	3
	3	3	3
	3	3	3
	3	3	3

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# do composto	ECso(mM) N	CC50 (μΜ) N	SI N
	3	3	3
	3	3	3
	7	7	7
	6	7	6
	3	3	3
	3	3	3
	4	4	4
	4	4	4
	7	8	7
	5	6	5
	3	3	3
	3	4	3
	5	7	5
	3	3	3
	4	5	4
	3	3	3
	3	3	3
	3	3	3
	4	4	4

N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

Ensaio de PCR quantitativa com transcriptase reversa (RT-qPCR) tetravalente [00219] A atividade antiviral dos compostos da invenção foi testada contra a cepa de DENV-1 TC974#666 (NCPV), cepa de DENV-2 16681, cepa de DENV-3 H87 (NCPV) e cepa de DENV-4 H241 (NCPV) em um ensaio de RT~qPCR. Portanto, células Vero foram infectadas com DENV-1 ou -2 ou -3 ou -4 na presença ou ausência de compostos de teste. Ao dia 3 pós-infecção, as células foram Usadas e os Usados celulares foram usados para preparar cDNA tanto de um alvo viral (a 3'UTR de DENV; Tabela 2) como de um gene de referência celular (βactina, Tabela 2). Posteriormente, uma PCR em tempo real em duplex

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69/77 foi realizada em um instrumento Lightcycler480. O valor de Cp gerado é inversamente proporcional à quantidade de expressão de RNA destes alvos. A inibição da replicação de DENV por um composto de teste resulta em um desvio de Cps para o gene de 3'LJTR. Por outro lado, se um composto de teste for tóxico para as células, será observado um efeito similar na expressão de β-actina. O método comparativo de ÁÁCp é usado para se calcular a EC50, que é baseada na expressão genética relativa do gene-alvo (3^!UTR) normalizada com 0 gene de manutenção celular (β-actina). Adicionalmente, os valores de CC50 são determinados com base nos valores de C_P adquiridos para 0 gene de manutenção de β-actina.

Tabela 2: Iniciadores e sondas usados para a RT-PCR quantitativa, em tempo real.

Iniciador/sonda	Alvo	Sequência³·^b
F3utr258	DENV 3’-UTR	5'-CGGTTAGAGGAGACCCCTC-3'
R3utr425	DENV 3’-UTR	5'-GAGACAGCAGGATCTCTGGTC-3'
P3utr343	DENV 3'-UTR	FAM-5'-AAGGACTAG-ZEN- AGGTTAGAGGAGACCCCCC-3'-/Afí/íFQ
Factin743	β-actina	5‘-GGCCAGGTCATCACCATT-3‘
Ractin876	β-actina	5'-ATGTCCACGTCACACTTCATG-3'
Pactin773	β-actina	HEX-5'-TTCCGCTGC-ZEW- CCTGAGGCTCTC-3'-/ABkFQ

^a Os corantes repórter (FAM, HEX) e inativadores (ZEN e lABkFQ) estão indicados a negrito e itálico.

^b A sequência de nucleotídeos dos iniciadores e sondas foi selecionada da região conservada na região 3TJTR do genoma do vírus da dengue, com base no alinhamento de 300 sequências de nucleotídeos dos quatro serotipos da dengue depositados no Genbank (Gong et aí, 2013, Methods Mol Biol, Capítulo 16).

[00220] O meio de cultura consistiu em meio essencial mínimo suplementado com 2% de soro fetal de bezerro inativado pelo calor,

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70/77 gentamicins a 0,04% (50 mg/mL) e L-glutamina 2 mM. Células Vero, obtidas da ECACC, foram suspensas em meio de cultura e se adicionou 75pL/poço a placas de 96 poços (10000 células/poço) já contendo os compostos antivirals. Tipicamente, estas placas contêm uma diluição em série de 5 vezes de 9 passos de diluição do composto de teste a 200 vezes a concentração final em DIVISO a 100% (500 nL; gama de concentrações finais: 25μΜ - 0,000064 μΜ ou 2,5 μΜ - 0,0000064 μΜ para os compostos mais ativos). Adicionalmente, cada placa contém poços que são atribuídos como controles de vírus (contendo células e vírus na ausência de composto) e controles de células (contendo células na ausência de vírus e composto). Uma vez as células adicionadas às placas, as placas foram incubadas em um incubador totalmente umidificado (37°C, 5% de CO2) até ao dia seguinte. Diluiu-se vírus da dengue de serotipo-1, 2, 3 e 4 de modo a se obter um Cp de -22-24 no ensaio. Portanto, 25 pL de suspensão de vírus foram adicionados a todos os poços contendo composto de teste e aos poços atribuídos como controle de vírus. Em paralelo, 25 pL de meio de cultura foram adicionados aos controles de células. De seguida, as placas foram incubadas durante 3 dias em uma incubadora totalmente umidificada (37°C, CO2 a 5%). Após 3 dias, 0 sobrenadante foi removido dos poços e as células lavadas duas vezes com PBS gelado (~100 pL). Os péletes de células dentro das placas de 96 poços foram armazenados a ~80°C durante pelo menos 1 dia. De seguida, 0 RNA foi extraído usando 0 estojo de lise Cells-to-CT™, de acordo com a orientação do fabricante (Life Technologies). Os lisados celulares podem ser armazenados a -80°C ou imediatamente usados no passo de transcrição reversa.

[00221] Na preparação do passo de transcrição reversa, a mistura A (tabela 3A) foi preparada e 7,57 pL/poço foram distribuídos em uma placa de 96 poços. Após adição de 5 pL dos lisatos de células foi reali

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71/77 zado um passo de desnaturação de cinco minutos a 75°C (tabela 3B). De seguida, 7,43 pL de mistura B foram adicionados (tabela 3C) e o passo de transcrição reversa foi iniciado (tabela 3D) para gerar cDNA. [00222] Finalmente, uma mistura de RT-qPCR foi preparada, mistura C (tabela 4A), e 22,02 pL/poço foram distribuídos em placas de qPCR LightCycler de 96 poços às quais 3 pL de cDNA foram adicionados e a qPCR foi realizada de acordo com as condições na tabela 4B em um LightCycler 480.

[00223] Usando o software LightCycler e um sistema LIMS interno, se calculou curvas de resposta à dose para cada composto e determinou metade da concentração eficaz máxima (ECso) e metade da concentração citotóxica máxima (CCso) (Tabelas 5-8).

Tabela 3: Síntese de cDNA usando Mistura A, desnaturação, Mistura B e transcrição reversa.

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Mistura A

Placas	8
Amostras	828		Vol. de Reação (pL)	20
Item de Mistura	Concentração	Volume para (pL)
Unidade	Estoque	Final	1 amostra	x amostras
H₂O Milli-Q				7,27	6019,56
R3utr425	μΜ	20	0,27	0,15	124,20
Ractin876	μΜ	20	0,27	0,15	124,20
	Volume de mistura/poço (pL)	7,57
Lisatos de células	5,00

zz/zz

B Passo de desnaturação:

Passo	Temp	Tempo
Desnaturação	75°C	5'
Manutenção	4°C	manutenção

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C Mistura Β

Amostras	864
Item de Mistura	Concentração	Volume para (pL)
Unidade	Estoque	Final	1 amostra	x amostras
tampão Expand HIFI 2	X	10,00	1,00	2,00	1728,0
MgCb	mM	25,00	3,50	2,80	2419,2
dNTPs	mM	10,00	1,00	2,00	1728,0
Inibidor de Rnase	U/pL	40,00	1,00	0,50	432,0
Expand RT	U/pL	50,00	0,33	0,13	112,3
	Volume Total Mistura (pL)	7,43

73/77

D Protocolo de síntese cDNA

Passo	Temp	Tempo
Transc rev	42°C	30'
Desnato ração	99°C	5’
Manutenção	4°C	manutenção

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Tabela 4: Mistura e protocolo de qPCR.

A Mistura C

Amostras	833		Vol. de Reação (pL)	25
Item de Mistura	Concentração	Volume para (pL)
Unidade	Estoque	Final	1 amostra	x amostras
H2Õ grau PCR Roche				7,74	6447,42
Mistura 2xMM Roche	X	2	1	12,50	10412,50
F3utr258	pM	20	0,3	0,38	316,54
R3utr425	pM	20	0,3	0,38	316,54
P3utr343	pM	20	0,1	0,13	108,29
Factin743	pM	20	0,3	0,38	316,54
Ractin876	pM	20	0,3	0,38	316,54
Pactina773	pM	20	0,1	0,13	108,29
	Volume	Mistura/Tubo (pL)	22,02
cDNA	3,00

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Protocolo qPCR3

Passo	Temp	Tempo	Taxa da rampa
pré-incub/desnat	95°C	10 mL/min	4,4
Desnaturação	95°C	10 seg	4,4	40 ciclos
emparelhamento	58°C	1 min	2,2
Alongamento	72°C	1 seg	4,4
Resfriamento	40°C	10 seg	1,5

Tabela 5: EC50, CC50 e SI para os compostos contra 0 serotipo 1 nos ensaios de RT-qPCR

	RT-qPCR serotipo 1 TC974#666
# do composto	EC50 (μΜ)	N	CC50 (μΜ)	N	Si	N
1B	0,0015	3	>2,5	3	>2860	3
2A	0,0046	5	>2,5	4	>981	4
3B	0,0011	3	>2,5	3	>3640	3
4A	0,00075	3	>2,5	3	>5470	3
5B	0,00094	4	5,1	4	8640	4
6A	0,00016	3	>2,5	3	>41300	3
7B	0,00013	3	>2,5	3	>19200	3
8B	0,0012	3	14	3	10500	3
9B	0,00010	3	>2,5	3	>45500	3

N = 0 número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

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Tabela 6: ECso, CC50 e SI para os compostos contra 0 serotipo 2 nos ensaios de RT-qPCR

	RT-qPCR serotipo 2 16681
# do composto	EC50 (μΜ)	N	CC50 (μΜ)	N	SI	N
1B	0,0011	3	4,1	3	4670	3
2A	0,0013	4	12	4	4910	4
3B	0,00090	3	3,6	3	4760	3
4A	0,00045	3	2,7	3	11700	3
5B	0,00024	5	4,2	5	>17100	5
6A	0,00016	3	4,2	3	>12600	3
7B	0,00019	3	>2,5	2	>13500	2
8B	0,00030	3	16	2	54300	2
9B	0,000068	3	>2,5	3	>56500	3

N 0 número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

Tabela 7: EC50, CC50 e SI para os compostos contra 0 serotipo 3 nos ensaios de RT-qPCR

	RT-qPCR serotipo 3 H87
# do composto	EC50 (μΜ)	N	CC50 (μΜ)	N	SI	N
1B	0,020	3	>2,5	3	>127	3
2A	0,020	3	>2,5	3	>157	3
3B	0,013	3	>2,5	3	>444	3
4A	0,013	3	>2,5	3	>234	3
5B	0,0067	4	>2,5	4	>752	4
6A	0,0026	3	>2,5	3	>1480	3
7B	0,0052	3	>2,5	3	>473	3
8B	0,019	3	12	3	796	3
9B	0,0017	3	>2,5	3	>1840	3

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Tabela 8: ECso, CC50 e SI para os compostos contra 0 serotipo 4 nos ensaios de RT-qPCR

	RT-qPCR serotipo 4 H241
# do composto	EC50 (μΜ)	N	CC50 (μΜ)	N	SI	N
1B	0,13	3	>2,4	3	23	3
2A	0,10	3	2,8	3	35	3
3B	0,072	3	>2,3	3	>32	3
4A	0,044	4	2,2	4	69	4
5B	0,026	4	2,5	2	86	2
6A	0,026	4	2,3	4	119	4
7B	0,024	3	>2,5	3	>186	3
8B	0,084	3	7,4	3	88	3
9B	0,0072	3	5,0	2	1390	2

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que possui a fórmula (I), incluindo qualquer forma estereoquimicamente isomérica do mesmo,

em que

R¹ é flúor, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometila e R⁴ é hidrogênio ou

R¹ é flúor, R² é “CH2CH2OH, R³ é trifluorometila e R⁴ é metóxi ou

R¹ é flúor, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometóxi e R⁴ é hidrogênio ou

R¹ é cloro, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometila e R⁴é hidrogênio ou

R¹ é cloro, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometila e R⁴ é metóxi ou

R¹ é cloro, R² é -CH2CH2OH, R³ é trifluorometóxi e R⁴ é hidrogênio ou

R¹ é cloro, R² é -(CHkHCOOH, R³ é trifluorometila e R⁴ é hidrogênio ou

R¹ é cloro, R² é -(ChbjaCOOH, R³ é trifluorometila e R⁴ é metóxi ou

R¹ é cloro, R² é -(ChkhCOOH, R³ é trifluorometóxi e R⁴ é hidrogênio;

ou um seu sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceiPetição 870190095446, de 24/09/2019, pág. 98/103
2/4 tável.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto é selecionado de
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto tem a rotação especifica (+).
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto é selecionado de:

F

F

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3/4

OU
5. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em conjunto com um ou mais excipientes, diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.
6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende um segundo ou mais ingredientes ativos.
7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o segundo ou mais ingredientes ativos são um agente antiviral.
8 Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para uso como um medicamento.
9. Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de infecção de Dengue e para a prevenção ou tratamento de doenças associadas com a infecção de Dengue.

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4/4
10. Composto de fórmula (I) para utilização, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a infecção de Dengue é uma infecção por vírus das cepas DENV-1, DENV-2, DENV-3 ou DENV-4.